Популяционная генетика гигантской устрицы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Никифоров, Сергей Михайлович

• Никифоров, Сергей Михайлович
• кандидат биологических наук
• 1983

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Никифоров, Сергей Михайлович

обзор литературы)

ГЛАВА П. Материал и методы.

1. Районы сбора материала и объем выборок

2. Приготовление белковых проб для электрофореза; приборы для электрофореза.

3. Электрофорез белков и получение зимограмы; исследованные белки

4. Показатели аллозимной изменчивости; использованные биометрические методы.

ГЛАВА Ш. Уточнение таксономического статуса тихоокеанской устрицы

1. Таксономическое положение тихоокеанской устрицы. (обзор литературы)

2. Генетическая дифференциация в процессе видообразования (обзор литературы)

3. Генетическое единство морфометрически различающихся групп тихоокеанской устрицы.

ГЛАВА ЗУ. Генетическая изменчивость белков тихоокеанской устрицы.

1. Генетический полиморфизм белков в природных популяциях (обзор литературы)

2. Уровень генетической изменчивости белков в поселениях устриц в заливе Петра Великого Японского моря и в заливе Буссе Охотского моря.

ГЛАВА У. Популяционно-генетическая структура тихоокеанской устрицы в заливе Петра Великого

1. Внутривидовая генетическая дифференциация популяций (обзор литературы)

2. Различия аллельных частот в устричных поселениях залива Петра Великого.

3. Возможные причины генетической дифференциации устричных поселений в заливе Петра Великого

4. Некоторые свидетельства дифференцирующего действия естественного отбора на устричные поселения в заливе Петра Великого

5. Генетическое сходство устричных поселений в заливе Петра Великого и популяционно-генети-ческая структура тихоокеанской устрицы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Популяционная генетика гигантской устрицы»

Гигантская, японская или тихоокеанская устрица Crassost-rea gigas является одним из древнейших объектов промысла. Раковины устриц были обнаружены в "кухонных" отбросах на местах стоянок человека раннежелезного века в Приморье, датируемых 3-3,5 тысячами лет давности (Окладников, 1963). Промысел и культивирование тихоокеанской устрицы является традиционным в Японии ( Cahn, 1950; Tujiya, 1970).

Кроме Японских островов, исторически сложившийся ареал тихоокеанской устрицы охватывает побережья Кореи, Приморья, Южного Сахалина и Юкных Курильских островов (Скарлато, I960) (рис.1). В 20-30 годах этого столетия тихоокеанская устрица была акклиматизировала на тихоокеанском побережье Северной Америки ( Galtsoff, 1932; Elsey, 1934; Kincaid, 1953; Quayl, 1969). Позднее, она была интродуцирована в Австралию ( Thomson, 1952), во Францию, Англию ( Mathers et al«, 1974) и в Германию ( Meixner, 1976). Отдельные экземпляры этого вида отмечены на устричных фермах Новой Зеландии ( Dinamani, 1971).

В Советском Союзе тихоокеанская устрица объектом промысла не является, хотя подготовительная работа в этом направлении (оценка запасов, выяснение возможностей культивирования) ведется силами Тихоокеанского института рыбного хозяйства и океанографии во Владивостоке.

В настоящее время общепризнанным является мнение ряда исследователей (Алтухов, 1974; Utter et al., 1974; Calaprice, 1976; Hedgecock et al., 1976; Кирпичников, 1979) о том, что научно обоснованная рациональная эксплуатация промысловых видов невозможна без знания их популяционной структуры, а при ведении селекционной работы при культивировании необходимо использовать данные об уровне изменчивости культивируемых популяций. Например, выявлены более высокие темпы роста молоди американской устрицы Crassastrea virginica, имеющей более высокую среднюю гетерозиготность по сравнению с особями, имеющими меньшую среднюю гетерозиготность ( Singh, Zouros, 1978, 1981; Zouros et al., 1980).

Исследования, направленные на выяснение популяционной структуры устриц в Советских дальневосточных водах, до последнего времени не проводилось. Более того, существуют различные точки зрения о числе видов (Разин, 1934) и даже родов устриц (Вялов, 1945) в этом районе. Спорность вопроса о числе видов устриц, а также очень большая вариабельность форм их раковин, делали невозможным исследование популяционной структуры традиционными конхиологическими методами. Непригодными оказались и кариологические методы, ввиду очень высокой консервативности кариотипов в пределах семейства Ostreidae (Ahmed, 1973; 1975). Последние 15 лет для решения вопросов таксономического характера приклекаются методы биохимической генетики, в частности гель-электрофорез белков с последующим выявлением белковых зон - маркеров генов. Сопоставления элек-трофоретических спектров гомологичных белков у представителей сравниваемых таксонов, например видов, позволяет получить характеристику их суммарного генетического сходства, и на основании этого оценить их филогенетические отношения ( Avise, 1974, 1976; iyala, 1975, 1976; Nei, 1972, 1975). Удобство электрофоретических белковых спектров как таксономических признаков, помимо их достаточно ясной генетической интерпретации состоит в том, что они редко подвержены онтогенетической и модификационной изменчивости. Оценка генетического сходства таксонов проводится на основании количественного соотношения сходных и несходных по электрофоретической подвижности фракции в белковых спектрах сравниваемых таксонов.

Методы биохимической генетики широко используются и в популяционно-генетических исследованиях. Гель-электрофорез позволяет различать алло зимы (для неферментных белков используется термин аллоформы) - белки, кодируемые разными аллельными генами (аллелями) одного лонуса - и, на основании этого, оценивать уровень белковой (аллозимной) изменчивости в популяциях. Путем сравнения генотипических или аллельных частот в выборках из нескольких популяций можно оценить степень генетической дифференциации между ними.

Большинство исследований популщионно-генетического характера выполнено на наземных видах. Своеобразная биология устрицы, характерная для многих морских донных беспозвоночных -чередование в жизненном цикле свободноплавающей личинки и прикрепленной взрослой стадии - делает интересным популяционно-генетическое исследование этого вида и в теоретическом аспекте.

Перед настоящей работой были поставлены следующие задачи.

1. Выяснить, имеются ли генетически детерминированные белковые различия между симпатрически обитающими, но морфологически различающимися группами устриц, определяемыми некоторыми систематиками как разные виды, и на основании полученных результатов уточнить таксономический статус тихоокеанской устрицы.

2. Оценить уровень генетической изменчивости в нескольких поселениях тихоокеанской устрицы в прибрежных водах Дальнего Востока СССР.

3. На основании данных об аллельных частотах в гомологичных полиморфных локусах устриц, составляющих выборки из нескольких поселений, выяснить степень генетической дифференциации этих поселений, т.е. описать популяционно-генетическую структуру тихоокеанской устрицы.

Все три задачи решаются с использованием метода гель-электрофореза белков и глава I посвящена описанию принципа и возможностей метода. В начале Ш-У глав даются обзоры литературы по каждой из решаемых настоящим исследованием задач.

ГЛШ I

Электрофорез белков в генетических исследованиях обзор литературы)

Принципы электрофореза белков подробно изложены в работах Уилкинсона CI968), Маурера (1971), Левонтина (1978), Серова И др. (1977), Харриса, Хопкинсона ( Harris, Hopkinson, 1976). Метод гель-электрофореза заключается в том, что образцы белков, полученные от нескольких особей, помещают в гель, приготовленный из крахмала, синтетического полимера полиакри-ламида, агара или какого-либо другого вещества, дающего однородный пористый матрикс, и затем пропускают через гель постоянный электрический ток.

Любой полипептид представлен набором из 20 аминокислот. Из них 16 несут электростатически нейтральные боковые цепи, аргинин и лизин имеют в боковых цепях аминогруппы, а глутами-новая и аспарагиновая кислоты - карбоксильные группы. Молекула белка, составленная из аминокислот всех трех типов имеет суммарный заряд, который зависит от соотношения в молекуле положительно и отрицательно заряженных аминокислот, от концентрации водородных ионов в окружающей среде (рШ и от упаковки молекулы. При уменьшении рН аминогруппы аргинина и лизина приобретают положительные заряды, а карбоксильные группы аепарагиновой и глутаминовой кислот, насыщаясь, становятся нейтральными, и вся молекула белка заряжается положительно. Обратное явление происходит при увеличении рН, и тогда молекула белка приобретает отрицательный заряд.

Если в гене, кодирующем структуру белка, произойдет мутация, вызывающая замену аминокислоты одного типа аминокислотой другого типа, то изменится суммарный заряд белковой молекулы при любом данном значении рН. Такие изменения суммарного заряда белковой молекулы, отражающие аллельные замещения в ловусе, кодирующем этот белок, можно регистрировать по изменению скорости движения белка в электрическом поле. Именно эти изменения в скорости движения белков выявляются методом гель-электрофореза.

Если рН геля и раствора белка будут слабощелочными по отношению к изоэлектрическим точкам содержащихся в растворе белков, то белки, приобретя отрицательный заряд, начнут движение в геле по направлению к аноду. Через некоторое время, белки, стартовавшие с одной линии, но имеющие разный суммарный заряд, окажутся в зонах, находящихся на разных расстояниях от старта. В дальнейшем пластины геля, содержащие разделенные по заряду белки, окрашиваются. В том случае, когда концентрации исследуемых белков высоки, их фракции можно обнаружить, окрашивая гель любым неспецифическим белковым красителем, например, кушей голубым или амидовым черным (Маурер, 1971). Однако, ферменты, как правило, присутствуют в исследуемых пробах в очень низких концентрациях, поэтому их фракции выявляют специальными реакциями, заимствованными из гистохимии. Для этого пластину геля обрабатывают инкубационной смесью, содержащей субстрат для фермента и какую-либо соль, которая окрашивается или меняет цвет в зоне расщепления субстрата. Гелевая пластина с окрашенными фракциями белка называется зимограммой. На одной зимограмме можно выявить несколько белков, кодируемых разными локусами при условии, что реакции, ведущие к окрашиванию белков, не исключают друг друга и подвижности белков не совпадают.

Если особь имеет в исследуемом локусе одинаковые аллели, т.е. является гомозиготой, то ее белковый электрофоретический фенотип, представленный продуктами этих идентичных аллелей, имеющими одинаковую электрофоретическую подвижность, на геле будет выглядеть, как одна фракция. В том случае, когда особь в данном локусе будет иметь разные аллели, т.е. будет гетерозиготной, то в ее электрофоретическом белковом спектре присутствуют продукты разных аллелей, которые были названы Пра-кашем ( РгаказЬ et а1., 1969) аллозимами. При условии, что аллозимы различаются по электрофоретической подвижности, белковый спектр гетерозиготы на зимограмме будет представлен более чем одной фракцией. Количество фракций в спектре гетерозиготы зависит от числа субъединиц, участвующих в формировании четвертичной структуры молекулы белка. При гибридизации полипептидных субъединиц в нативную молекулу белка число фракций (п ) гетерозиготного фенотипа определяется по формуле: и = (Б + р-'ОУР! (¿-1)! где р - число субъединиц, составляющих молекулу, Б - число субъединиц, отличающихся по электрофоретической подвижности { Кеппеу, 1974).

Таким образом, спектр мономерного белка у гетерозиготы имеет на зшограмме две фракции, по подвижности соответствующие "быстрой" и "медленной" гомозиготам. Белок с димерной молекулой будет давать три фракции, помимо "быстрой" и "медленной", гибридную зону, состоящую из субъединиц, кодируемых разными аллелями, и имеющей промежуточную подвижность. "Гетерозиготный" спектр белка-тетрамера будет давать пятиполосый фенотип, три промежуточные фракции которого состоят из молекул гибридной природы и содержат "быстрый" и "медленный" полипептиды в соотношениях "б.б.б.м.", "б.б.м.м.", "б.м.м.м.".

Таким образом, метод гель-электрофореза позволяет не только обнаруживать генетически детерминированные белковые различия особей, но и генотипировать каждую особь по любому доступному исследователю числу генов, кодирующих белки.

По мнению многих исследователей метод гель-электрофореза характеризуется большой объективностью, высокой разрешающей способностью, возможностью сравнения выборок по большому числу дискретных признаков. Хотя Эйвис С Avise, 1974) относил к недостаткам метода незначительность доли выявляемых аминокислотных замещений (около 30$ по данным Shaw, 1970 и около 33$ по данным Marshall, Brown, 1975), Рэшоу И др. ( Eamshaw et al., 1979) показали, что чувствительность метода при использовании разных вариантов электрофореза достигает 85$.

Кроме перечисленных, метод имеет еще одно важное достоинство - универсальность использования. Белковые экстракты для электрофоретического фракционирования могут быть получены из любых органов и тканей животных и растений. Белковые пробы, при соответствующей консервации, можно хранить в течение долгого времени. Этим самым была получена возможность вести сравнительно-генетические и популяционно-генетические исследования практически любых современных видов.

ГЛШ. П Материал и методы

I. Районы сбора материала и объем выборок.

Сбор устриц и обработка материала происходили в 19751979 годах. Из 6 природных устричников в зал. Петра Великого Японского моря и I устричника в зал. Буссе на о.Сахалин (Охотское море) были собраны 2140 особей устриц с глубин 0,5-3 метра. Япономорские устричники удалены друг от друга на расстояние 20-200 км. Охотоморское устричное поселение в зал. Буссе удалено от группы япономорских поселений более чем на 1000 км Срис.2).

Численность выборок из каждой локальности приведена в таблице I. Для оценки уровня генетических различий между разновозрастными группами устриц были исследованы 4 такие группы в зал. Восток и по 2 группы в зал. Амурский и Уссурийский. Поскольку методика определения возраста устриц до настоящего времени не была разработана, для отнесения устриц к той или иной возрастной группе, использовались размерные характеристики. Младшая возрастная группа, в дальнейшем называемая сеголетками, была представлена устрицами, личинки которых осели из планктона на субстрат в течение сезона, во время которого была взята выборка. Высота раковин сеголеток составляла не более 20 мм. Следощая размерно-возрастная группа, называемая мелкими, имела высоту раковин 30-50 мм. Третья группа - средние - характеризовалась высотой раковин 100-150 мм и четвертая - крупные - свыше 200 мм.

МОРЕ

Рис. 2. Районы сбора материала: I - зал. Щ - зал. Уссурийский, 5 - зал. Восток, б ■

Посьета, 2-6. Витязь, 3 - зет. Амурский, - зал. Находка, 7 - зал. Буссе, о. Сахалин.

Таблица I

Объем выборок устриц, взятых из природных устричников для электрофоретического исследования

Район Объем выборки

Японское море

1. зал. Посьета, б.Экспедиции 202

2. б. Витязь 126

3. зал. Амурский, м. Красный 353 из них: средние 94 сеголетки сублиторальные 139 сеголетки литоральные 120

4. зал. Уссурийский, б. Суходол 240 из них: средние 120 сеголетки 120

5. зал. Восток, б. Тихая заводь 1058 из них: крупные 94 средние 750 мелкие 118 сеголетки 96

6. зал. Находка, б. Козьмино 96 Охотское море

7. о. Сахалин, зал. Буссе 65 Всего 2140

Заключение диссертации по теме «Генетика», Никифоров, Сергей Михайлович

Результаты исследования о^2-тестом на гетерогенность указывают вероятность случайности различий частот аллелей сравниваемых выборок. Когда эта вероятность мала, мы можем считать с большой степенью достоверности, что частоты аллелей различаются, однако степень различия этим методом оценить нельзя, поэтому для оценки степени сходства и различия генетического состава устричных поселений был рассчитан показатель, предложенный Не ем ( Ке1, 1972).

Индексы генетического сходства между попарно сравниваемыми устричными поселениями по 9 полиморфным локусам приведены в табл. 4 Приложения. Индексы суммарного сходства по 30 аллозимным локусам приведены в табл. 14.

Заключение

Полученные данные, изложенные и обсужденные в главах Щ-У, позволили дать ответы на поставленные перед настоящим исследованием вопросы. На основании электрофоретического анализа белков трех морфологических групп устриц, кторые Разин (1934) считал самостоятельными видами, подтверждено мнение Скарлато (1960) о существовании в Ю?кном Приморье только одного морфологически весьма изменчивого вида устриц - Сгаззоа-Ь-геа ё±еав. Уровень генетической (аллозимной) изменчивости в приморских устричных поселениях оказался примерно тем же, что и в устричных поселениях из других районов ареала вида. Пространственно разобщенные поселения устриц в Ккном Приморье являются составными частями одной популяции.

Данные о единстве вида и принадлежности южноприморских поселений к одной популяции, после дополнительных исследований по оценке запасов моллюсков, могут быть использованы соответствующими организациями для рационального планирования устричного промысла. Сведения о достаточно высоком уровне аллозимной изменчивости в природных поселениях тихоокеанской устрицы говорят о возможности ведения селекционных работ с целью создания быстрорастущих, устойчивых к заболеваниям и неблагоприятным факторам среды культивируемых популяций устриц.

Вместе с тем, в процессе исследования возник ряд вопросов, представляющих, в основном, теоретический интерес и требующих дальнейшей разработки. В частности, гипотеза Пудовкина и др. (1981) предполагает, что личинки, продуцируемые разными поселениями устриц, в планктоне перемешиваются и генетическая дифференциация поселений, возникающая как следствие адаптации к конкретным условиям существования, происходит уже после оседания молоди. Представляется интересным выяснить, каким комплексом воздействий вызывается подобный генетический ответ. Ответ на этот вопрос, по-видимому, можно получить, наблюдая многолетнюю динамику частот аллелей ежегодно оседающей молоди устриц в одних и тех же поселениях и сопоставляя эти данные с многолетней динамикой условий среды. Другой возможный путь, э:то наблюдение за сдвигом частот аллелей у молоди устриц собранных в природных условиях, но затем помещенных в контролируемые условия и подвергаемых воздействиям меняющихся факторов среды - температуры, солености, кислородного режима, условий питания, обсыхания и т.д.

Другая интересная проблема связана с обнаружением в южноприморских устричных поселениях дефицита гетерозигот. Дяя проверки гипотезы Цудовкина и др. (1981) о преимущественной роли микропространственной гетерогенности в возникновении дефицита гетерозигот в поселениях устриц представляется полезным провести детальное исследование пространственной изменчивости частот аллелей в поселениях, в которых дефицит гетерозигот выражен в наибольшей степени.

Третья проблема, имеющая и практическое значение, заключается в поиске корреляций, подобных обнаруженным Сингом и Зоуросом у американской устрицы Crassostrea virginica (Singh, Zouros, 1978, 1981; Zouros et al., 1980) между степенью ге-теро:зиготносгпо аллозимным л оку сам и темпами роста.

Думается, что в результате дальнейших исследований по названным направлениям будут получены новые интересные данные о генетических процессах, протекающих в поселениях тихоокеанской устрицы. швода

1. У устриц с различной формой раковины, рассматривавшихся некоторыми авторами в качестве различных видов, обнаружена идентичность электрофоретических белковых спектров, предположительно кодируемых 50 генными локусами. Этот факт подтверждает мнение Скарлато (1960) о существовании в прибрежных водах Ккного Приморья лишь одного вида устриц - Сгаззое-Ьгеа

2. При учете электрофоретической изменчивости ферментов, кодируемых 33 генными локусами, доля полиморфных локусов составила 42,4% (+9,0%), средняя гетерогенность - 0,095 (+0,030). Изменчивость нёферментных белков оказалась значительно^ ниже: средняя гетерогенность по локусам, кодирующим эти белки (всего их выявлено 17), составляет 0,017 (+0,017), доля полиморфных локусов - 5,8% (+6,0%).

3. Полокусное сопоставление изменчивости в исследованной популяции с аналогичными литературными данными о других популяциях этого же вида показало, что популяция устриц из залива Петра Великого, находящаяся на северном краю видового ареала, обладает примерно таким же уровнем аллозимного разнообразия, как и популяции из других районов.

4. Между шестью поселениями устриц из различных участков залива Петра Великого имеются статистически существенные различия в частотах аллелей 10 полиморфных локусов. В среднем, во всех поселениях и по всем локусам обнаружен дефицит гетерозигот.

5. Показатели генетического сходства (по Нею: Не!, 1972) рассчитанные при попарном сравнении 6 поселений из залива Петра Великого варьируют от 0,965 до 0,997, усредненное значение сходства составляет 0,988. Разложение по методу Нея ( N61, 1975) суммарной аллельной изменчивости на два компонента -внутри и между поселениями показало, что внутри поселений сосредоточено 96,7% изменчивости.

6. Высокие показатели генетического сходства между поселениями из разных участков залива Петра Великого позволяют считать, что в пределах залива обитает генетически единая популяция устриц. Наличие статистически значимых различий в частотах аллелей между поселениями свидетельствует, по-видимому, о дифференцирующем действии естественного отбора, благоприятствующего различным генотипам в разных поселениях. Различие аллельных частот по некоторым локусам у устриц разного возраста, а также у одновозрастных животных из пространственно близких, но экологически различных местообитаний, подтверждает предположение о действии естественного отбора.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Никифоров, Сергей Михайлович, 1983 год

1. Мала Ф.М. Механизмы эволюции. В кн.: Эволюция. М: Мир, 1981, с.32-65.

2. Алтухов Ю.П. О соотношении моно- и полиморфизма гемоглобина в микроэволюции рыб. ДАН СССР, 1969, 189, 5, с.1115-III7.

3. Алтухов Ю.П. Локальные стада рыб как генетически стабильные популяционные системы. В кн.: Биохимическая генетика рыб. Л: Изд.инс-та Цитологии, 1973, с.43-53.

4. Алтухов Ю.П. Популяционная генетика рыб. М: Изд. Пищевая промышленность, 1974, 247 с.

5. Алтухов Ю.П., Дуброва Ю.Е. Биохимический полиморфизм популяций и его биологическое значение. Успехи современной биологии, 1981, 91, 3, с.467-480.

6. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. Популяционные системы и их структурные компоненты. Генетическая стабильность и изменчивость. Ж. общ. биол., 1970, 31, 5, с.507-526.

7. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. Генетическая изменчивость на уровне популяционных систем и их структурных компонентов. В кн.: Научные сообщения Института биологии моря, Владивосток, 1971, 2, с.16-20.

8. Алтухов Ю.П., Рычков Ю.Г. Генетический мономорфизм видов и его возможное биологическое значение. К. общ. биол., 1972, 33, 3, с.287-300.

9. Аронштам A.A., Боркин Л.Я., Пудовкин А.И. Изоферменты в эволюционной и популяционной генетике. В кн.: Генетика изоферментов, М: Наука, 1977, с.199-249.

10. Бирюлин Г.М., Бирюлина М.Г., Микулич Л.В. Летние модификации вод залива Петра Великого. Тр. ДВНШЖ, 1970, т. 30,с.286-299.

11. Брегман Ю.Э. Популяционно-генетическая структура двустворчатого моллюска Patinopecten yessoensis.^ Изв. ТИНРО, 1979, 103, с.43-46.

12. Валов О.С. О некоторых устрицах залива Петра Великого. ДАН СССР, 1945, 50. Сер. нов., с.210-215.

13. Закс И.Г. Морские беспозвоночные Дальнего Востока. Даль-гиз, 1933, 116 с.

14. Картавцев Ю.Ф. Аллозимная изменчивость в популяциях восьми видов мидий ( Mollusca, Mytiixdae ). В кн.: I Всесоюзная конференция по морской биологии. Тез. докл. Владивосток: 1977, с.67.

15. Картавцев 10.Ф. Популяционная и экологическая генетика ми-тилид. В кн.: Х1У Тихоокеанский научный конгресс. Тез. докл. М: подсекция р;-П а. 1979, с. 165-166.

16. Картавцев Ю.Ф., Заславская Н.И. Внутри и межвидовая генетическая изменчивость и сходство белков мидий ( Mollusca, MytilicLae ). В кн.: 4 Всесоюзн. симп. Молекулярные механизмы генетический процессов: Тез. докл. М: 1979, с.86.

17. Кирпичников B.C. Биохимический полиморфизм и процессы микроэволюции у рыб. В кн.: Биохимическая генетика рыб. Л: Изд. инс-та цитологии, 1979, с.7-23.

18. Кирпичников B.C. Генетические основы селекции рыб. Л: Наука, 1979, 392 с.

19. Левинтон Д.С. Генетическая структура популяций мидий. В кн.: Закономерности распределения и экологии прибрежных биоценозов. Л: 1978, с.118-119.

20. Левинтин Р. Генетические основы эволюции. М: Мир, 1978, 351 с.

21. Ли Ч. Введение в популяционную генетику. М: Мир, 1978, 555 с.

22. Майр Э. Популяции, виды и эволюция. М: Мир, 1974 , 488 с.

23. Майр Э. Зоологический вид и эволюция. М: Мир, 1968, 597 с.

24. Манченко Г.П. Неоднородность белков морских звезд в отношении степени внутривидовой изменчивости. В кн.: ХДУ Тихоокеанский научный конгресс: Тез. докл. М: подсекция1. П а. 1979, с.169-170.

25. Манченко Г.П. Электрофоретическое исследование генетической изменчивости белков морских звезд. Автореф. канд. дисс. Л: 1981, с.1-16.

26. Маурер Г. Диск-электрофорез. М: Мир, 1971,

27. Никифоров С.М. Генетическая и морфометрическая изменчивость дальневосточной устрицы ( Сгаззозъгеа б^-бав ). В кн.: Биохимическая и популяционная генетика рыб. Л: Изд. инс-та цитологии, 1979 а, с.134г-138.

28. Никифоров С.М. Электрофоретическое исследование генетической изменчивости тихоокеанской устрицы сгаззозтгеа е1баз» В кн.: Х1У Тихоокеанский научный конгресс: Тез. докл. М: подсекция бч П.а. 1979 б, с. 171-172.

29. Никифоров С.М., Долганов С.М. Популяционно-генетическое исследование скоплений гребешка Приморского в заливе Петра Великого Японского моря. В кн.: 4 съезд Всесоюзн. Общ. Генетиков и Селекционеров: Тез. докл. Кишинев: ШТИИНДА., 1982, I, с.175.

30. Окладников А.П. Древние поселения на полуострове Песчанном у Владивостока. Материалы к древней истории Дальнего Востока. М.-Л: Изд. АН СССР, 1963, 335 с.

31. Пудовкин А.И., Картавцев Ю.Ф., Манченко Г.П., Никифоров

32. С.М. Генетическая изменчивость устриц, мидий и морских звезд симпатрично обитающих в заливе Петра Великого. В кн.: 14 Тихоокеанский научный конгресс: Тез. докл. М: подсекция щ . П. а. 1979, с. 173-174.

33. Пудовкин А.И., Картавцев Ю.Ф., Никифоров С.М. Аллозимная изменчивость у восьми видов двустворчатых моллюсков. В кн.: ХЗУ Международный генетический конгресс: Тез. докл. М: Секционные заседания, часть I. 1978, с.476.

34. Разин А.И. Морские промысловые моллюски Южного Приморья. Изв. ТИНРО, 1934, 8, с.28-40.

35. Рекомендации по использованию электрофоретических данных при межпопуляционных и межвидовых сравнениях. Владивосток: Изд. ТИНРО, 1980, с.7-10.

36. Серов О.Л., Корочкин Л.И., Манченко Г.П. Зпектрофоретиче-ские методы исследования изоферментов. В кн.: Генетика изоферментов. М: Наука, 1977, с.18-64.

37. Серов О.Л., Пудовкин А.И. Аллозимная изменчивость четырех видов морских ежей из Японского моря. В кн.: XJ7 Тихоокеанских научный конгресс: Тез. докл. М: подсекция f.- П.а. 1979, с.177-178.

38. Скарлато O.A. Двустворчатые моллюски дальневосточных морей СССР (отряд Dysodonta ). М.-Л: Изд. АН СССР, i960, 150 с.

39. Уилкинсон Дж. Изоферменты. М: Мир, 1968 , 224 с.

40. Яковлев Ю.М., Раков В.А., Долгов Л.В. Размножение и развитие тихоокеанской устрицы crassostrea gigas. В кн.: Организш обрастатели дальневосточных морей. Владивосток: 1981, с.79-93.

41. Ahmed. М. Cytogenetics of osters. Cycologxa, 1У73, За, p. 337-34Ь.

42. Ahmed М. Specxation in living oysters. Adv. Mar. Biol., 1973, 13, P. 337-397.

43. Avise U.C. Systematic value or electrophoretic data. Syst. Zool., 1У74, 23, p. 463-481.

44. Avise J.G. Genetic differentiation during speciation» In: . . * * * Molecular evolution. Ed. by Ayala F.J. Sunderland: Mass.

45. Sinauer Associates, 1976, p. 1u6-122;4>. Ayala P.J. Genetic differentiation during the speciationprocess. In: "Evolutionary Biology", 197i?, 8, p. 1-7S.

46. Ayala P.J. /ed./ Molecular evolution. Sinauer, Sunderland: 1976, p. 1-277.

47. Ayala P.J., Powell J.H. Allozymes as aiagnostxc characters of sxbling or species Urosophila. Px*oc. Wat. Acad. Sex.', 1У72, 6y, p. 10^4-1096.

48. Ayala F.J., Valentine J.W,, De Laca T., Zumwalt G-.S. Genetic variability in Antarctic brachiopod Liothyrella noto-cardensis and its bearing on mass extinction hypotheses. J. Paleontology, 1975, 49, p. 1-19,♦

49. Ayala F.J., Valentine J.W., Hedgecock 0., Barr L.G. Deep-sea asteroides: high genetic variability in a stable environment. Evolution, 1975» 29, p. 203-212.

50. Barlow J., Ridgeway G.ÍT. Polymorphisms of esterase isozymes in American lobster (Homarus americanus). J.Fish." Res. Bd. Canada, 1971» 28, p. 15-21.

51. Beckmanl. Scandalios J.G., Brewbaker J.L. Genetics of leucine amino peptidase isozymes in maize. Genetics, 1964, 50, P. 899-904*

52. Bonnel M.L., Selander R.K. Elephant seals: genetic variation and near extinction. Science, 1974, 184, p. 908-909.

53. Boyer J.F. Clinal and size-dependent variation at the Lap locus in Mytilus edulis. Biol. Bull., 1974, 147, p.535-549.

54. Breger E.M. Gene enzyme variation in three simpatric species of Littorina. Biol. Bull., 1973, 145, P. Ü3-90.

55. Brown AV, Lengley C. Re evaluation of level of genie heterozygosity in natural population of Drosophila melnogaster by two-dimensional electrophoresis. Proc. Nat. Acad, Sci. USA, Wy, 76, pi 2581-2596.

56. Buroker N.E. Overdominance of muscle protein /Mp-I/ locus in the Japanese oyster Crassostrea gigas /Ostreidae/. J. Fish. Res.; Bd. Canada, iy7y» 3b, p. 15'I5-1518.

57. Cahn A.R. Oyster cilture in Japan. U.S". Fish. Wildlife Servise. Bur. Commen Fish. Fishery Leaflet, 1950, 585, 80p«

58. Calaprice J.R. Mariculture ecological and genetic aspects of production. J. Fish. Res; Bd. Canada, 1976, 55, p. 1068-1087.

59. Campbell C.A., Valentine J.W., Ayala F.J. High genetic variability in a population of Tridacna maxima from the Great Barier Reef. Mar. Biol., 1975, 55, P. 541-545.

60. Cavalli Storza L.L., Edwards A.W.F. Phylogenetic analysis models and estimation procedures. Evolution, 1967» 21, P. 550-570.

61. Fujino K., Nagaya N. Biochemical polymorphism in the Pacific Oyster-I. Variants in myogen and esterases. Bull. Jap. Soc.Sci. Fish., 1977a, 45, 8, p. 9tt3-9S8.

62. Fujino K., Nagaya N. Biochemical polymorphism in the Pacific Oyster-II. Variants in tetrazolrum oxibase and leucine aminopeptidase. Bull, Jap. Soc. Sci. Pish., 19'/7b, 45, 12, p. 1455-145y.

63. Fujino Zv, Nakamura Y., Sugita M. Selective advantage of heterozygotes at catalase locus in the Pacific Oyster. Jap. J. Genetics, 1979, 54, 5, p. 559-366.

64. Gooch J.L., Schopf T.J.M. Genetic variation in the marine ectoproct, Schizophorella errata» Biol. Bull., 1971» 141, p. 255-246.

65. Harris H. Enzyme polymorphisms in man. Proc. Roy. Soc. Ser. 8, 1966, 164, p. 298-310.

66. Harris H., Hopkinson D.A. Handbook of enzyme electrophoresis in human genetics. Amsterdam Oxford, North - Holland publ., Co. N.Y.: 1^76

67. Hedgecock D., Shleser R.A»,. Nelson K. Applications of biochemical genetics to aquaculture. J. Fish. Res. Canada, 1976, 53, p. 1108-1119.

68. Hedrich P.W. A new approach to measuring genetic similarity. Evolution, 1971, 25, p. 276-280.yo. Hirase S. On the classification of ¿Japanese oysters. Jap. J.Zool., 1950, 5, p. 1-65.

69. Hubby J.L., Lewontin R.S. A molecular approach to the study of genie heterozygosity in natural populations. I. The number of alleles at different loci in Drosophila pseudoob-scura. Genetics, 1966, 5, 2, p. 577-595«

70. Johnson G.B. Enzyme polymorphism and metabolism. Science, 1974, 184, p. 28-57.

71. Johnson A.G., Utter P.M., Niggol K. Electrophoretic variants of aspartate aminotransferase and adductor muscle proteins in the native oyster (Ostrea lurida). Anim. Blood Grps Biochem. Genet., 1972, 5, 2, p. 109-115.

72. Johnson P.M., Schaffer H,E., Gillaspy J.E. Rockwood E. Isozyme genotype environment relationment in natural population of the harvester aut, Pogonomyrmex barbatu, from Texas. Biochem. Genet., 1969, 5» p. 429-500.

73. Johnson W.E., Selander R.K. Protein variation and systema-tics in kangaroo rats (genus Dipodomus). Syst. Zool., 1971• 20, p. 577-405.

74. Kenney V/.C. Molecular nature of isozymes. Horizonts Biochem. Biophys., 1974, 1, p. 58-61.

75. Kincaid T., The acclimatization of the pacific oysters (Ostrea laperousi Screnck = Ostrea gigas Thunberg) upon the west coast of North America. In: Proc. seventh Pacific Sci. Congress, Aukland: 1953, 4, p. 50B-51B.

76. Koehn R.K. Esterase heterogeneity: dinamic of polymorphism. Science, 1969, 163, p. 943-944.

77. Koehn R.K., Milkman E., Mitton J.B. Population genetics of marine pelecypods. IV. Selection, migration and genetic differentiation in the blue mussel Hytilus edulis. Evolution, 1976, 30, p. 2-32.

78. Koehn R.K., Mitton J.B. Population genetics of marine pelecypods. I. Ecological heterogeneity and adaptive strategy at enzyne locus. Amer. Nat., 1972, 106, p. 47-56.

79. Levinton J.S. Levels of genetic polymophism at two enzyme encoding loci in eight species of the genus Macoma (Mol-lusca; Bivalvia). Mar. Biol., 1975, 33, P. 41-4?.

80. Levinton J.S., Koehn R.K. Population genetics of mussels. In: Marine Mussels ed. Bayne B.L. Cambridg Univ. Press, 1976, 10, p. 357-384.

81. Mathers N.51*, Wilkins U.P., Walne P.R. Phosphoglucose iso-merase and esterase phenotypes in Crassostrea gigas and C. angulata. Biochem. Syst. Ecol., 1974, 3, P» 93-96.

82. Mitton J.B., Koehn R»K., Prout T. Population genetics of marine pelecypods« III. E^istatic between functionally related isoenzymes of Mytilus edulis. Genetics, 1973, 73,p. 487-4-96.

83. Morgan R.Bf, Block S.B., Ulanowicz N.I., Buys C. Genetic variation in the soft-shelled clam Mya arenaria. Estuaries, 1978, 1, 4-, p. 255-258.

84. Mukai T. Spontaneous mutation rates or isozyme genes in Drosophila melanogaster. Drosophila Inf. Serv., 1970, 4-5, P. 99.'

85. Muller H.J. Our load of mutations. Amer.1 J. Hum. Genet., 1950, 2, p. 111-176.

86. Nagaya N., Sasaki K., Fugino K. Biochemical polymorphism in the pacific oyster ill. Local populations in Hokkaido and the Northeast districts of Japan. Bull. Jap. Soc. Sci Mish., 19/8, 44-, p. 104-1-1045.

87. Nicol P.I., 01 Gower A.K. Haemoglobin variation in Anadara trapezia (Deshayes). Nature, 1967, 216, 684 p.129. 0"Gower A.K., Nicol P.I. A latitudinal cline of chaemoglo-bins in bivalve mollusc. Heredity, 1968, 23, p. 485-492.

88. Quayle D.B. Pacific oyster culture in British Columbia. Bull. Fish. Res.- Bd. Canada, 1969, 169, 192 p.

89. Ramshaw J.A.M., Coyne J.Y., Levontin R.C. The sensitivity of gel electrophoresis as a detector of genetic variation

90. Genetics, 1979, y3, p. 1Ü19-1Ü37. 135» Rodino E. Variabilita di Mytilus galloprovincialis della laguna di Venezia. Analisi biometrica e polimorfismi en-zimatisi. Arch, oceanogr. limnol., 1976, 18, 3, suppl., p. 541-542.

91. Suomolainen S., Saura A. Genetic polymorphism and evolution in parthenogenetic animals. I. Polyploid Curculioni-dae. Genetics, 1973, 74, p. 489-508.

92. Thomson J.M. The acclimatization and growth of the Pacific oyster (Gryphaea gigas) in Australia. Australian J. Mar. Fershwater Res., 1952, 3, p. 64-73.

93. Tracey M.L», Bellet N.F., Gravem C.D. Excess allozyme homozygosity and breeding population structure in the mussel Mytilus californianus. Mar. Biol., W5» 32, p. 303311.

94. Tsuyuki H., Roberts E., Vanstone W.E. Comparative zone electrophoregrams of muscle myogens and blood haemoglobins of marine vertebrates and their applocation to biochemical systematics. J. Fish. Res. Bd. Canada, iy65a, 22, p. 203-212*

95. Tsuyuki H., Roberts E., Vanstone W.E., Markert J.R. The species specificity and constancy of muscle myogen and blood haemoglobins electrophoregrames of Oncorbynchus. J. Fish.; Res. Bd. Canada, 1965b, 22, p. 215-217.

96. Utter F.M., Hodgins H.O., Allendorf F.W. Biochemical genetic studies of fishes: potentialities and limitations. In: "Biochemical and biophysical perspectives in marine biology". Acad. Press, London, N'.T.;: 1974, 1, p. 213-237.'-V ~ s

97. Valentine J.V. Genetic strategies of adaptations. In: Aya-la F.J. /ed./, Molecular evolution, Sinauer, Sunderland: 1976, p. 78-94.

98. Valentine J.V., Ayala F.J. Genetic variability in krill. Proc. Nat. Acad. Sci., USA, 1976, 73» P* 658-660.

99. Wilrins N.P., Mathers IT.P. Phenotypes of phosphoglucose isomerase in some bivalvia molluscs. Comp. Biochem. Physiol., 1974, 48, 4B, p. 599-611.

100. Wium-Andersen G. Haemoglobin and protein variation in three species of Littorina. Ophelia, 1970, 8,p. 267-273*

101. Workman P.L., Hiswander J.D. Population studies on southwestern indian tribes. II. Local genetic differentiation in the Papayo. Amer. J. Hum. Genet., 1970, 22, p. 24-49.