Поляризационные характеристики синхротронного излучения и развитие методов измерения затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции молекул тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 01.04.05, кандидат физико-математических наук Демьянов, Георгий Витальевич

• Демьянов, Георгий Витальевич
• кандидат физико-математических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Демьянов, Георгий Витальевич

Введение

Цель и задачи работы

Научная новизна работы

Практическая значимость работы

Глава 1. Свойства синхротронного излучения

§1. Классическая теория синхротронного излучения

§2. Влияние динамики электронов в ускорителях на характеристики СИ

§3. Параметры Стокса в исследовании поляризации СИ

§4. Параметры Стокса в неоднородном магнитном поле

Глава 2. Экспериментальное исследование параметров Стокса синхротронного излучения

§1. Экспериментальная установка

§2. Исследование зависимости поляризационных характеристик

СИ от амплитуд бетатронных колебаний

§3. Сущность метода магнитной коррекции поляризации СИ

§4. Сравнение экспериментальных и теоретических данных

§5. Выводы

Глава 3. Теория затухания анизотропии флуоресценции

§1. Фотоотбор

§2. Кинетика затухания анизотропии флуоресценции

Глава 4. Исследования флуоресценции биологических объектов

§1. Метод разрешенной во времени анизотропии флуоресценции обзор литературы) п. 1.1 Исследование биологических мембран и протеинов п. 1.2 Исследование белков п. 1.3 Исследования в биохимии п. 1.4 Сегментальная подвижность молекул антител

§2. Экспериментальная установка п. 2.1 Расчет отдельных элементов установки п. 2.1.1 Двухзеркальная фокусирующая система п. 2.1.2 Призма Глана п. 2.2 Схема экспериментальной установки п. 2.3 Система детектирования п. 2.3.1 Кювета п. 2.3.2 Регистрация флуоресценции п. 2.3.3 Система счета фотонов п. 2.4 Юстировка системы

§3. Измерение анизотропии флуоресценции

§4. Анализ кривых затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции

§5. Оценка ошибок измерения анизотропии

Глава 5. Экспериментальные данные

§1. Измерения затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции зонда DPH в глицерине

§2. Измерение затухания анизотропии флуоресценции липидного зонда в искусственных мембранах

§3. Кинетика деполяризации флуоресценции нейтрального и заряженного 2-(3'-пиридил) оксазола

§4. Измерения затухания собственной флуоресценции липопротеинов очень низкой плотности

§5. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Поляризационные характеристики синхротронного излучения и развитие методов измерения затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции молекул»

Метод флуоресцентной спектроскопии является одним из наиболее высокочувствительных и информативных методов исследования в биологии, химии и медицине. За время жизни возбужденного состояния в образце происходит множество молекулярных процессов, влияющих на его флуоресцентные характеристики, что дает возможность изучения возбужденных состояний молекул, фотохимических реакций, динамики быстрых молекулярных процессов, структуры и свойств сложных химических и биологических систем. Основными преимуществами метода при исследовании биологических систем являются его высокая чувствительность и возможность работы с живыми объектами при минимальных возмущениях последних. Именно благодаря этому роль метода флуоресцентной спектроскопии в создании современного представлении о структуре и функциях таких биологических структур как липопротеины, альбумины, клетки крови, биологические мембраны и т.д., связанных с жизнедеятельностью человека, является общепризнанной. Ранние применения флуоресцентной спектроскопии касались, главным образом, исследования влияния микроокружения флуоресцирующего соединения на его спектры испускания и интенсивность флуоресценции. Бурное развитие лазерной техники и особенно применение ускорителей как специализированных источников синхротронного излучения (СИ), обусловило быстрый прогресс в разработке методов флуоресцентной спектроскопии с временным разрешением. Безусловно, лабораторные источники света являются более доступными, однако применение ускорителей в качестве специализированных источников синхротронного излучения обладает рядом несомненных преимуществ - это широкий и непрерывный спектральный диапазон, высокая стабильность временной структуры импульсов, обеспечение низкой мгновенной мощности облучения исследуемого биологического объекта, высокая степень поляризации излучения. Несмотря на то, что стационарная флуоресцентная спектроскопия все еще остается важным методом исследования, основное внимание в последнее время уделяется методу флуоресцентной спектроскопии с временным разрешением, который позволяет получать дополнительную и более детальную информацию об объекте исследования, изучать тонкие механизмы динамики и конформационных перестроек в этих объектах, сохраняя при этом все возможности стационарной спектроскопии. Хотя детальную и точную информацию о структуре макромолекул могут дать данные по рентгеноструктурному анализу кристаллов, получаемая информация является статической. Кроме того, не все биологические объекты могут подвергаться кристаллизации. Для изучения соотношения между структурой и функцией в любой биологической макромолекуле необходимо оценить динамику как отдельных молекул, так и всей системы в целом. Спектроскопическая техника, которая обеспечивает получение как структурной, так и динамической информации, становится чрезвычайно полезной при анализе таких объектов. Флуоресцентная спектроскопия с временным разрешением является одним из таких методов, который находит широкое применение в исследованиях большинства биологических систем.

Метод флуоресцентной спектроскопии предполагает использование как природных флуорофоров, таких как хлорофилл, ароматические соединения и т.д., так и специально синтезированных флуоресцирующих молекул, обладающих необходимыми свойствами, ковалентно или нековалентно связывающимися с исследуемым объектом (соответственно "флуоресцентных меток" и "флуоресцентных зондов"). Временные параметры флуоресценции этих молекул сильно зависят от свойств окружения флуорофора. Поэтому, точное знание закона затухания флуоресценции может дать детальную информацию об окружении флуорофора и его взаимодействии с этим окружением. Такие разрешенные во времени измерения позволяют исследовать сложные гетерогенные системы и следить за популяциями молекул флуорофора, находящимися в различном окружении или исследовать процессы, протекающие в возбужденном состоянии. Основной целью подобных исследований является установление определенной связи между кинетическими параметрами флуоресценции и структурой и функцией исследуемых объектов.

При возбуждении флуорофора поляризованным светом испускание флуоресцирующей молекулы также поляризовано. Однако со временем поляризация флуоресценции падает по ряду причин. Одной из основных причин деполяризации является вращательная диффузия флуорофора, которая зависит от вязкости растворителя, размеров и формы вращающихся частиц. Зависимость поляризации и анизотропии флуоресценции от вращательной диффузии излучающей молекулы привела к применению метода измерения затухания анизотропии в биохимических и биомедицинских исследованиях.

С учетом выше изложенного является актуальным создание рабочей станции в пучке СИ ускорителя С-60 ФИ РАН, разработка и внедрение различных методик исследований биологических систем флуоресцентными методами с временным разрешением. Основные усилия автора были направлены на исследование поляризационных свойств синхротронного излучения ускорителя С-60 и их использование для разработки методики измерения затухания анизотропии флуоресценции. Необходимость работы с малыми количествами исследуемых веществ (например, с сыворотками крови человека) потребовала разработки оригинального метода детектирования флуоресценции, отличающегося от общепринятого. На первой стадии работы была поставлена задача исследовать поляризационные свойства пучка синхротронного излучения, в котором предполагалось разместить рабочую станцию. Эта задача представляет самостоятельный научный интерес. Изученные особенности поляризации СИ использовались на втором этапе работы при конструировании новой станции.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ

Основная цель работы состояла в создании действующей экспериментальной станции на базе синхротрона С-60 ФИ РАН для исследования вращательной динамики биологических систем и молекул (и их фрагментов), находящихся в растворе, а также в развитии методики флуоресцентной спектроскопии с временным разрешением. Наряду с этим, были проведены исследования поляризационных характеристик синхротронного излучения ускорителя С-60 в неоднородном магнитном поле с использованием метода параметров Стокса, исследования зависимости поляризационных характеристик СИ от бетатронных колебаний ускоряемых электронов и возможности их подавления путем вариации магнитного поля ускорителя, корректируя при этом поляризационные характеристики излучения. Поляризационные свойства СИ учитывались при создании экспериментальной станции.

Для достижения этой цели были поставлены и решены следующие задачи:

Проведено экспериментальное исследование поляризационных характеристик синхротронного излучения ускорителя С-60 с использованием параметров Стокса. Изучено влияние бетатронных колебаний электронов на указанные характеристики СИ и исследованы возможности коррекции этих характеристик путем вариации магнитного поля ускорителя. Получены формулы, описывающие угловые распределения параметров Стокса и поляризационных характеристик СИ с учетом амплитуды бетатронных колебаний ускоряемых электронов.

- Разработана и отлажена система детектирования флуоресценции с временным разрешением. Для регистрации излучения используется метод счета одиночных фотонов, который является наиболее чувствительным методом, доступным в настоящее время для измерения времен затухания флуоресценции.

- Отработан метод флуоресцентных зондов для исследования биологических объектов. Этот метод имеет высокую чувствительность, дает возможность проводить измерения с живыми биологическими объектами и, в частности, исследовать структуру живой клетки. В отличие от рентгеноструктурного анализа метод позволяет исследовать объекты, не имеющие строго упорядоченной структуры.

- Разработан и внедрен ряд методик исследований биологических объектов флуоресцентными методами с временным разрешением: а) методика измерения времен затухания интенсивности флуоресценции, б) методика измерения параметров затухания анизотропии флуоресценции.

- Разработан и отлажен метод анализа измеренных кривых затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции для извлечения физических данных об исследуемых объектах, для чего был создан ряд специальных программ, основанных на нелинейном методе наименьших квадратов.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Теоретически и экспериментально изучены все основные поляризационные характеристики синхротронного излучения в неоднородном магнитном поле, причем впервые в экспериментальных исследованиях поляризации СИ применен метод параметров Стокса, адекватно отражающий важнейшие характеристики эллиптической поляризации. Впервые получены экспериментальные данные измерения линейной, циркулярной и полной степеней поляризации СИ с использованием метода параметров Стокса.

Экспериментально подтверждено предсказанное ранее теоретически наличие двух минимумов в угловом распределении полной степени поляризации СИ, расположенных симметрично относительно плоскости равновесной орбиты электронов. Таким образом, показано, что максимальная деполяризация излучения, обусловленная бетатронными колебаниями электронов, имеет место не в плоскости орбиты ускоряемых электронов, как считалось ранее, а в направлении некоторого угла вс.

Результатом проведенной работы явилось создание на базе синхротрона С-60 ФИ РАН экспериментальной станции, разработка методик для исследования временного затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции биологических систем и демонстрация их возможностей.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Развит применительно к СИ метод параметров Стокса, полученные формулы позволяют учесть деполяризацию излучения за счет бетатронных колебаний электронов. Показано, что путем вариации магнитного поля ускорителя возможно скорректировать поляризационные характеристики излучения и получить источник практически полностью поляризованного света в широком спектральном диапазоне, при этом степень линейной поляризации излучения в плоскости орбиты ускоряемых электронов приближается к 100%.

Создание экспериментальной станции, разработка и внедрение новых методик временных измерений позволяет получить ранее недоступную информацию о свойствах биологических объектов. Исследование на данной станции белково-липидных комплексов крови позволяет изучать тонкие механизмы динамики и конформационных перестроек этих объектов и открывает совершенно новые возможности для контроля и ранней диагностики ряда серьезных заболеваний человека.

Использование метода анизотропии флуоресценции с временным разрешением делает более эффективными исследования молекулярной динамики биологических объектов.

Заключение диссертации по теме «Оптика», Демьянов, Георгий Витальевич

Основные результаты исследований опубликованы в следующих работах:

1. Г.В.Демьянов, А.В.Титов, К.Н.Шорин, А.СЛров, Коррекция степени поляризации синхротронного излучения, Краткие сообщения по физике, ФИАН, 1986,11,50.

2. Г.В.Демьянов, В.А.Орлов, А.В.Титов, К.Н.Шорин, А.С.Яров, Поляризация синхротронного излучения в неоднородном магнитном поля, Краткие сообщения по физике, ФИАН, 1988, 1,21.

3. G.V.Demyanov, N.K. Kurek, E.N.Lapshin, T.I.Syrejshchikova,M.N. Yakimenko, Protein fluorescence decay of human serum VLDL exposed to synchrotron radiation, Nucl.Instrum. And Meth., Phys. Res., Sect.A 308 (1991) 215-218.

4. A.V.Akimov,G.V.Demjanov,N.K.Kurek, S. S .Molchanov,G.S .Pashhenko, T.I.Syrejshchikova, R.V.Fedorchuk,M.N.Yakimenko, Station for the investigation of the decay kinetics of the fluorescence anisopropy of biological objects, Nucl. Ins. And Meth., Phys. Res., Sect.A 359 (1995) 345347.

5. А.В.Акимов, Г.В.Демьянов, Н.К.Курек, С.С.Молчанов, Г.С.Пащенко, Т.И.Сырейщикова, Р.В.Федорчук, М.Н.Якименко, Установка для исследования кинетики затухания анизотропии флуоресценции биологических объектов, Оптика и спектроскопия, 1995,78,2,254-256.

6. G.V.Demyanov, M.Yu. Zabazarnych, S.I.Isakova, N.K.Kurek, E.N.Lapshin, T.I.Syrejshchikova, M.N. Yakimenko, Characteristic of molecular fluorescence of a lipid probe in human blood lipoproteins exposed to synchrotron radiation, Nucl. Ins. And Meth., Phys. Res., Sect.A 359 (1995) 342-344.

7. G.V.Demyanov, S.I.Isakova,N.K. Kurek, T.I.Syrejshchikova, M.N.Yakimenko, The measurements of the fluorescence anisotropy decay of the lipid probe in the liposomes, Bulletin of the Lebelev Physical Institute (Russian Academy of Science) N11-12(1995) 15-19.

8. В.В.Волочков, Г.В.Демьянов, М.В.Русаков, Т.И.Сырейщикова, Кинетика деполяризации флуоресценции нейтрального и заряженного 2-(3'-пиридил) оксазола, Журнал общей химии, 2005,75,6, 836, и представлены на следующих конференциях:

1. Г.В.Демьянов, С.И.Исакова, Н.К.Курек, Е.Н.Лапшин, А.Н.Рухтин, Т.И.Сырейщикова, М.Н.Якименко, Исследование кинетики затухания флуоресценции липидного зонда в липопротеинах крови человека при возбуждении синхротронным излучением, Тезисы Международной конференции по люминесценции, Москва, 1994.

2. А.В.Акимов, Г.В.Демьянов, Н.К.Курек, С.С.Молчанов, Г.С.Пащенко, Т.И.Сырейщикова, Р.В.Федорчук, М.НЛкименко, Установка для исследования кинетики затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции биологических объектов, Тезисы Международной конференции по люминесценции, Москва, 1994.

3. Т.И. Сырейщикова, С.К. Гуларян, В.Ю. Светличный, Г.Е. Добрецов, С.И Исакова, Г.В. Демьянов, Лейкоциты крови человека: исследование методом разрешенной во времени флуоресцентной спектроскопии, Материалы XIV Российской конференции по использованию синхротронного излучения, Новосибирск, 2002.

4. В.В. Волчков, Г.В.Демьянов, М.В. Русалов, Т.И. Сырейщикова, Затухание анизотропии флуоресценции нейтрального и заряженного 2-(З'-пиридил)оксазола, Материалы XIV Российской конференции по использованию синхротронного излучения, Новосибирск, 2002.

5. С.С. Алексеев, В.В.Волчков, Г.В. Демьянов, Т.И. Сырейщикова, Измерения затухания анизотропии флуоресценции в пучке синхротронного излучения, Труды третьей международной конференции молодых ученых и специалистов "0птика-2003", под редакцией проф. С.А. Козлова, 250-251.

6. А.Н. Литвинов, Г.В Демьянов, Т.И.,Сырейщикова, Г.Е. Добрецов, Использование метода разрешенного во времени резонансного переноса энергии между липофильными флуоресцентными зондами для исследования пространственной структуры биологических объектов, Труды третьей международной конференции молодых ученых и специалистов "0птика-2003", под редакцией проф. С.А. Козлова, 290291.

БЛАГОДАРНОСТИ

В заключении считаю своим долгом выразить глубокую благодарность научному руководителю к.ф.-м. н. Т.И.Сырейщиковой, а также д.ф.-м.н.

М.Н.Якименко|, за внимание, помощь и личное участие на всех этапах работы.

Хочу также поблагодарить весь коллектив лаборатории электронов высоких энергий Физического института им. П.Н.Лебедева РАН за поддержку и помощь в работе.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Приведенная работа состоит из двух частей. Первая часть посвящена исследованию поляризационных характеристик СИ одного из каналов синхротрона С-60 ФИ РАН. Основные данные, полученные в результате этих исследований, были затем использованы для создания в этом канале установки для измерения интенсивности и анизотропии флуоресценции. Вторая часть работы посвящена созданию станции для исследований биологических систем методом флуоресцентной спектроскопии.

1. При исследовании поляризационных характеристик использован метод параметров Стокса, адекватно отражающий все важнейшие характеристики эллиптической поляризации излучения. Показаны преимущества этого метода, состоящие в том, что величина измеренной степени поляризации не зависит от начального положения поляроида, а определяется только точностью установки последовательных ориентаций поляроида.

Получены формулы для параметров Стокса СИ в неоднородном магнитном поле и выражения для линейной, циркулярной и полной степеней поляризации.

Приведены впервые полученные экспериментальные результаты измерений параметров Стокса, степеней линейной и циркулярной поляризации СИ, а также полной степени поляризации. Экспериментальные данные находятся в хорошем согласии с теоретическими расчетами, полученными с учетом влияния бетатронных колебаний на поляризационные характеристики СИ.

Показано, что методом вариации магнитного поля возможно значительно увеличить степень поляризации СИ, что дает возможность получить источник практически полностью поляризованного излучения в широком спектральном диапазоне.

2. На базе синхротрона С-60 ФИ РАН создан экспериментальный канал для измерения времен затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции биологических объектов и молекул, находящихся в растворе, во временном интервале 0,5 - 50 не при возбуждении в диапазоне длин волн 200- 1000 нм.

Разработана и отлажена система детектирования флуоресцентного сигнала с временным разрешением. Для регистрации был использован метод счета одиночных фотонов как наиболее чувствительный.

Отлажена система измерения и анализа кривых затухания интенсивности и анизотропии флуоресценции. На основе нелинейного метода наименьших квадратов создан ряд программ для анализа экспериментальных данных.

Проведены тестовые эксперименты, демонстрирующие возможности новой установки при измерении времен затухания флуоресценции и вращательной корреляции макромолекул и их фрагментов.

Внедрение методик флуоресцентной спектроскопии с временным разрешением оказалось возможным благодаря работе синхротрона в "однобанчевом" режиме (ускоряется один сгусток электронов). Однако длительность импульса СИ составляет 7 не и это накладывает ограничения на минимальные времена затухания флуоресценции, измеряемые на данной установке. Тем не менее, временные измерения, выполненные в данной работе, подтвердили надежность разработанных методик.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Демьянов, Георгий Витальевич, 2007 год

1. G.A.Schott, Electromagnetic radiation, Cambridge University Press, Cambridge, 1912.

2. D.D.Ivanenko, I.Pomeranchuk, On the Maximal Energy Attainable in a Betatron, Phys. Rev, 1944, 65, 343.

3. J.Schwinger, Quantum Electrodynamics. Vacuum Polarization and Self-Energy, Phys. Rev, 1946, 70, 798.

4. А.А.Соколов, И.М.Тернов, Релятивистский электрон, М., «Наука», 1974.

5. Синхротронное излучение в исследовании твердых тел, Сборник статей. Под ред. А.А.Соколова, М., «Мир», 1970.

6. Синхротронное излучение. Свойства и применения. Сборник статей. Под ред. К.Кунца, М., «Мир», 1981.

7. И.М.Тернов, В.В.Михайлин, В.Р.Халилов, Синхротронное излучение и его применение, М., Изд. МГУ, 1985.

8. И.М.Тернов, В.В.Михайлин, Синхротронное излучение: теория и эксперимент, М., «Энергоатомиздат», 1986.

9. В.Н.Байер, В.М.Катков, В.С.Фадин, Излучение релятивистских электронов, М., «Атомиздат», 1973.

10. М.Борн, Е.Вольф, Основы оптики, М., «Мир», 1975.

11. Р.Аззам, Н.Башара, Эллипсометрия и поляризованный свет, М., «Мир», 1981.

12. Ф.А.Королев, О.Ф.Куликов, А.СЛров, Эллиптическая поляризация излучения релятивистских электронов в магнитном поле, Оптика и спектроскопия, 1968, 24, 316.

13. А.А.Коломенский, А.Н.Лебедев, Теория циклических ускорителей, М., Физматгиз, 1962.

14. Дж. Ливингуд, Принципы работы циклических ускорителей, М., ИЛ, 1963.

15. Л.Д.Ландау, Е.М.Лифшиц, Теория поля, М., Наука, 1973.

16. А.С.Яров, Автореферат диссертации, М., МГУ, 1966.

17. К.Н.Шорин, А.С.Яров, В.А.Орлов, Магнитная коррекция поляризации синхротронного излучения, Оптика и спектроскопия, 1981,51, 855.

18. В.Ч.Жуковский, О.Е.Шишанин, Свойства синхротронного излучения электронов, движущихся в слабофокусирующем магнитном поле, Оптика и спектроскопия, 1971, 31, 857.

19. В.Ч.Жуковский, О.Е.Шишанин, Влияние бетатронных колебаний электронов на свойства синхротронного излучения, ЖЭТФ, 1971, 61, 1371.

20. О.Е.Шишанин, Зависимость синхротронного излучения от линейной связи бетатронных колебаний, Изв. вузов, Физика, 1979, 8, 82.

21. Г.В.Демьянов, А.В.Титов, К.Н.Шорин, А.СЛров, Коррекция степени поляризации синхротронного излучения, Краткие сообщения по физике, ФИАН, 1986, 11, 50.

22. Г.В.Демьянов, В.А.Орлов, А.В.Титов, К.Н.Шорин, А.С.Яров, Поляризация синхротронного излучения в неоднородном магнитном поле, Краткие сообщения по физике, ФИАН, 1988, 1, 21.

23. G.V.Demyanov, V.A.Orlov, A.V.Titov, K.N.Shorin, A.S.Yarov, Dynamics of the Stokes parameters of synchrotron radiation, Nucl. Ins. And Meth., Phys. Res., Sect.A, 1991, 308, 149.

24. К.Н.Шорин, А.С.Яров, В.А.Орлов, Метод регулирования сечения сгустка электронов в синхротроне, Краткие сообщения по физике, ФИАН, 1984, 5,49.

25. И.С.Гук, П.И.Гладких, Вопросы атомной науки и техники, сер ТФЭ, 1981, 3(9), 64-66.26. .Weber, Biochem. J., Polarization of the fluorescence of macromolecules. Theory and experimental method. 1952, 51,145.

26. G.Weber, Polarization of the fluorescence in solution, in: Fluorescence and phosphorescence analysis, John Wiley & Sons, N.Y., 1966,217.

27. S.Kawato, K.Kinosita, A.Ikegami, Dynamic structure of lipid bilayers studied by nanosecond fluorescence techniques, Biochemistry, 1977, 16, 2319.

28. F.Jaehning, Altered Promoter Selection by a Novel form of Bacillus subtilis RNA Polymerase, Proc. Natl. Acad. Sci., 1979,76,6361.

29. Дж.Лакович, Основы флуоресцентной спектроскопии, Пер. с англ., Мир, 1986.

30. U.A. van der Hide, М.A.M.J. Zandvoort, E. van Faassen, G. van Ginkel, Y.K. Levin, On the interpretation of fluorescence anisotropy decays from probe molecules in lipid vesicle systems, Journal of Fluorescence, 1993, 3, 4, 271.

31. G. van Gincel et al, Time-resolved fluorescence depolarization experiments on lipid-lipid and lipid-protein interactions in membranes, Appendix to the Daresbury Annual Report 1990/1991, SERC Daresbury Laboratory, Warrington, UK, p.204,1991.

32. M.Behan, A.R.Cossins, A.G. McDonald, Appendix to the Daresbury Annual Report 1986/1987, SERC Daresbury Laboratory, Warrington, UK, p.122,1987.

33. С.А.Сторожок, Л.Ф.Панченко, Ю.Д.Филиппович, В,С,Глушков, Изменения физико-химических свойств биологических мембран при развитии толерантности к этанолу, Вопросы медицинской химии, 2001,2,7-13.

34. M.R. Kaplan, E.Trubniykov, G.Berke, Fluorescence depolarization as an early measure of T lymphocyte stimulation, J. of Immunological Methods, 1997, 201,15-24.

35. C.S.Lopez, H.A.Garda, E.A.Rivas, The effect of osmotic stress on the biophysical behavior of the Bacillus subtilis membrane studied by dynamic and steady-state fluorescence anisotropy, Archives of Biochemistry and Biophysics, 2002,408, 220-228.

36. J.Szubiakowskj, A.Balter, W.Nowak, K.Wisniewski, K.Aleksandrzak, Substituent-sensitive anisotropic rotations of 9-acetoxy-10-phenylanthracenes: fluorescence anisotropy decay and quantum-mechanical study, Chemical Physics Letter, 1999,313,473-483.

37. D.C.Mitchell, B.J.Litman, Molecular order and dynamics in bilayers consisting of highly polyunsaturated phospholipids, Biophys. J., 1998, 74, 879-891.

38. C.Niebylski, N.J.Salem, A calorimetric investigation of a series of mixed-chain polyunsaturated phosphatidylcholines: effect of sn-2 chain length and degree of unsaturation, Biophys J., 1994,67, 2387-2393.

39. R.L.Thurmound et al., Membrane thickness and molecular ordering in acholeplasma laidlawii strain a studied by 2H NMR spectroscopy, Biochemistry, 1994,33,13178.

40. D.C.Mitchell, B.J.Litman, Effect of cholesterol on molecular order and dynamics in highly polyunsaturated phospholipid bilayers, Biophys J., 1998, 75, 896-908.

41. M.C.Moncrieffe, S.Eaton, Z.Bajzer et al., Rotational and translational motion of Troponin C*, J. Biological Chem, 1999,274, 17464-17470.

42. K.Doring, T.Surrey, P.Nollert, F.Jahnig, Effects of ligand binding on the internal dynamics of maltose-binding protein, Eur. J. Boichem, 1999,266, 477-483.

43. I.Munro, I.Pecht, L.Stryer, Subnanosecond motions of tryptophan residues in proteins, Proc. Natl. Acad. Sci., 1979,76, 56-60.

44. E.John, F.Jahing, A synthetic analogue of melittin aggregates in large oligomers, Biophys. J., 1992, 63, 1536-1543.

45. D.T.F.Dryden, R.H.Pain, P.Varley, Appendix to the Daresbury Annual Report 1988/1989, SERC Daresbury Laboratory, Warrington, UK, p. 127, 1989.

46. G.S.Lakshmikanth, G.Krischnamoorthy, Solvent-exposed tryptophans probe the dynamics at protein surfaces, Biophys. J., 1999, 77, 11001106.

47. J.M.Janot, A.Beeby, P.M.Bayley, D.Phillips, The time resolved fluorescence and anisotropy of subtilisins BPN' and Carlsberg, Biophys. Chem., 1991,41,277-287.

48. A.P. Blokhin, M.F. Gelin, I.I. Kalosha, V.V. Matylitsky, N.P.Erohin, M.V. Barashkov, V.A. Tolkachev, Depolarization of fluorescence of pokyatomic volecules in noble gas solvents, Chem. Phys., 2001, 272, 69-76.

49. N.Ito, O.Kajimoto, K.Hara, Picosecond time-resolved fluorescence depolarization of /?-terphenyl at high pressures, Chem. Phys. Letter, 2000,318, 118-124.

50. Mark Maroncelli and Graham R. Fleming, Picosecond solvation dynamics of coumarin 153: The importance of molecular aspects of solvation, J. Chem. Phys. 1987, 86 (11).

51. I.G. Scheblykin, M.A. Drobizhev, O.P. Varnavsky, M. Van der Auweraer, A. G. Vitukhnovsky, Reorientation of transition dipoles during exciton relaxation in J-aggregates probed by flourescence anisotropy, Chem. Phys. Letter, 1996,261,181-190.

52. S.Tsuneda, T.Endo, K.Saito, K.Sugita, K.Horie, T.Yamashita, T.Sugo, Local mobility of polymer chain grafted onto polyethylene monitored by fluorescence depolarization, Chem. Phys. Letter, 1997,275,203-210

53. S.Jeon, S.C.Bae, J.Turner, S.Granick, Microviscosity of an ion-conducting polymer probed by fluorescence depolarization and dielectric spectroscopy, Polymer, 2003,43, 4651-4655.

54. J. Yguerabide, H. F. Epstein and L Stryer, Segmental flexibility in an antibody molecule, J. Mol. Biol., 1970, 51, 573-590.

55. А.В.Акимов, Г.В.Демьянов, Н.К.Курек и др., Установка для исследования кинетики затухания анизотропии флуоресценции биологических объектов, Препринт ФИАН, № 24, 1994.

56. А.Н.Зайдель, Е.Я.Шрейдер, Спектроскопия вакуумного ультрафиолета, М., Наука, 1967.

57. Ю.М.Александров, М.И.Благов, А.А.Комар и др, Ускоритель электронов С-60- специализированный источник синхротронного излучения, Препринт ФИАН, № 11, 1988.

58. Ю.М.Александров, В.Н.Махов, Т.И.Сырейщикова, М.Н.Якименко, Использование ФЭУ-71 в режиме счета фотонов для исследования временных процессов в наносекундном диапазлне, ПТЭ, №18, 1982.

59. Ю.М.Александров, В.Н.Колобанов, В.Н.Махов, Т.И.Сырейщикова, М.Н.Якименко, Установка для измерения временных характеристик люминесценции в наносекундном диапазоне, ЖПС, №36, 1982.

60. G.V.Demyanov, M.Yu.Zabazarnyh, S.I.Isakova, N.K.Kurek et al., Characteristic of molecular fluorescence of a lipid probe in human blood lipoproteins exposed to synchrotron radiation, Nucl. Ins. And Meth. Phys. Res., Sect.A, 1995,359,342.

61. E.Nishimoto, S.Yamashita, A.G.Szabo, T.Imoto, Internal Motion of Lysozyme Studied by Time-Resolved Fluorescence Depolarization of Tryptophan Residues, Biochemistry, 1998,37, 5599.

62. Ю.А.Владимиров, Г.Е.Добрецов, флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран, М., Наука, 1980.

63. Н.К.Курек, Определение локализации флуоресцентных зондов в липидных объектах, Диссертация на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук, Мин. Здрав. РСФСР, НИИФХМ, 1991.

64. G.V.Demyanov, M.Yu.Zabazarnyh, S.I.Isakova et al., Characteristics of molecular fluorescence of a lipid probe in human blood lipoproteins exposed to synchrotron radiation, Nucl. Ins. And Meth. Phys. Res., Sect. A, 1995,359,342.

65. G.E.Dobretsov, E.N.Lapshin, N.K.Kurek, V.V.Kosnikov, R.K.Aidyraliev, Sov. Med. Rev. B. Physicochemical, 1991, 3,37.

66. G.V.Demyanov, N.K.Kurek, E.N.Lapshin, T.I.Syrejshikova, M.N.Yakimenko, Protein fluorescence decay of human serum with a very low density of lipoproteins exposed to synchrotron radiation, Nucl. Ins. And Meth. Phys. Res., Sect.A, 1991,308,215.

67. В.В.Волочков, Г.В.Демьянов, М.В.Русаков, Т.И.Сырейщикова, Кинетика деполяризации флуоресценции нейтрального и заряженного 2-(3'-пиридил) оксазола, Журнал общей химии, 2005, 75, 6, 836.

68. А.В.Акимов, Г.В.Демьянов, Н.К.Курек и др., Установка для исследования кинетики затухания анизотропии флуоресценции биологических объектов, Оптика и спектроскопия, 1995, 78,2,254.