Получение препаратов О-антигенов Vibrio cholerae для производства холерных химических вакцин тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Алешина, Юлия Александровна

• Алешина, Юлия Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Алешина, Юлия Александровна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Протективные антигены холерных вибрионов

1.2. Методы и технологии культивирования холерного вибриона

1.3. Применение ультрафильтрации для концентрирования

и очистки антигенов

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Оборудование и приборы

2.2. Материалы

2.2.1. Бактериальные штаммы

2.2.2. Лабораторные животные

2.2.3. Сыворотки, питательные среды, реактивы и растворы

2.3. Методы исследования

2.3.1. Биологические методы

2.3.2. Физико-химические и биохимические методы

2.3.3. Статистическая обработка результатов 49 ГЛАВА 3. ВЫЯВЛЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ АТОКСИГЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА - ПРОДУЦЕНТОВ О-АНТИГЕНОВ

3.1. Изучение микробиологических свойств атоксигенных штаммов Vibrio cholerae - продуцентов О-антигенов

3.2. Исследование процесса культивирования атоксигенных штаммов Vibrio cholerae - продуцентов О-антигенов

3.3. Определение биокинетических особенностей процесса глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов 67 ГЛАВА 4. СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ О-АНТИГЕНОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

4.1. Определение эффективности мембран 20 к Да для концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава

4.2. Интенсификация процесса ультрафильтрации

4.2.1. Определение эффективности различного типа мембран для концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава

4.2.2. Установление оптимальных барометрических характеристик процесса ультрафильтрации

4.2.3. Изучение влияния температуры на эффективность концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава

4.2.4. Использование усовершенствованной технологии концентрирования О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава в производственном процессе получения коммерческой холерной химической вакцины

4.3. Применение метода тангенциальной ультрафильтрации для концентрирования О-антигенов атоксигенных штаммов холерных вибрионов 88 ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТОВ О-АНТИГЕНОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА И ХОЛЕРНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ

5.1. Характеристики препаратов О-антигенов атоксигенных штаммов холерного вибриона, полученных по разработанной технологии культивирования

5.2. Контроль прототипа новой холерной химической вакцины

5.3. Изучение свойств препаратов О-антигена штамма Vibrio cholerae М41 серовара Огава, полученных по усовершенствованной технологии концентрирования

5.4. Свойства коммерческой холерной вакцины, приготовленной по усовершенствованной технологии концентрирования 100 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 102 ВЫВОДЫ 110 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АЕ - антитоксическая единица

АСМ - атомно-силовая микроскопия

А-ХТ - А-субъединица холерного токсина

АХС - антихолерогенная сыворотка

БВМ - белки внешней мембраны

БМЦ - безмикробный детоксицированный центрифугат

В-ХТ - В-субъединица холерного токсина

ДИА - дот-иммуноанализ

ЕС - единицы связывания холерогена с сывороткой

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛПС - липополисахарид

МИБП - медицинские иммунобиологические препараты

м.к. - микробные клетки

НОММ - номинальная отсечка по молекулярной массе

О-АГ - О-антиген

ОСО - отраслевой стандартный образец

ПА - протективные антигены

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РИД - реакция иммунодиффузии

РИГА - реакция непрямой гемагглютинации

ТКПА - токсин-корегулируемые пили адгезии

ХА - холероген-анатоксин

XT - холерный токсин

ЕД50 - доза вакцины, защищающая 50% животных от гибели при

заражении вирулентным штаммом

LD50 - летальная доза, вызывающая гибель 50% животных

цмах - максимальная удельная скорость роста клеток

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение препаратов О-антигенов Vibrio cholerae для производства холерных химических вакцин»

ВВЕДЕНИЕ

На современном этапе холера продолжает оставаться одной из особо опасных инфекционных болезней, единичные случаи и вспышки которой рассматриваются как чрезвычайная ситуация [104]. Заслуживает внимания, что возбудитель холеры отнесен к категории В - высокоприоритетных патогенов, которые могут быть использованы в качестве биологического оружия [87, 103].

На основе строения О-антигенов V. ско1егае разделяют более чем 200 се-рогрупп, однако эпидемическое значение имеют 01 серогруппы классического и Эль Тор биоваров и 0139 серогруппы. В России эпидемиологическая ситуация оценивается как неустойчивая и нестабильная, что связано с заносными случаями и выявлениями холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп из объектов окружающей среды [86].

О-антиген холерного вибриона является одним из основных протектив-ных антигенов, отвечающих за формирование антибактериального иммунитета [163, 174, 187, 207, 219, 222] и входит в состав практически всех вакцин, предназначенных для специфической профилактики холеры [102, 104, 153].

Вакцины являются наиболее эффективными средствами профилактики холеры [80]. Российский календарь профилактических прививок по эпидемическим показаниям предусматривает вакцинацию против холеры [102].

За рубежом, согласно рекомендаций ВОЗ, используются три холерные вакцины: Бикога1 (\VC-rBS), тОЯСУАХ и 8ЬапсЬо1 [153]. Вакцина Эикога1 состоит из В-субъединицы холерного токсина и инактивированных клеток V. ско1егае 01 серогруппы обоих биоваров и сероваров. В состав 8ЬапсЬо1 и тОЯСУАХ входят только убитые клетки V. ско1егае 01 и V. ско1егае 0139 [104].

Российская холерная бивалентная химическая вакцина, сконструированная и производимая в институте «Микроб» [9, 44-48], основными компонентами которой являются холероген-анатоксин и О-антигены сероваров Инаба и

Огава, не менее эффективна, чем вакцина Оикога1 [104, 139]. При этом в состав вакцины возможно включение 0139 антигена [41].

В технологии приготовления российской коммерческой холерной вакцины используются токсигенные штаммы V. ско1егае 569В Инаба и М-41 Огава. Работа с вирулентными штаммами в условиях производства повышает риск заражения персонала при возникновении аварийных ситуаций.

В РосНИПЧИ «Микроб» сконструированы авирулентные атоксигенные штаммы V. ско1егае КМ 263 биовара Эль Тор серовара Инаба [85], V. ско1егае КМ 262 биовара Эль Тор серовара Огава [118], являющиеся продуцентами 01 антигенов. Для продукции 0139 антигена возможно использование авирулент-ного атоксигенного штамма V. ско1егае М 377 0139 серогруппы. Эти штаммы холерного вибриона перспективны для создания отечественной современной химической вакцины против холеры.

Однако на данный момент отсутствует масштабируемая технология глубинного культивирования атоксигенных штаммов V. ско1егае - продуцентов О-антигенов.

Имеющийся опыт работы [27, 30, 71, 76, 81, 92] по глубинному выращиванию различных штаммов холерного вибриона показывает, что при подборе определенных условий культивирования можно получать необходимые протективные антигены для конструирования новых вакцинных препаратов для профилактики холеры.

В 80-ых годах прошлого столетия в РосНИПЧИ «Микроб» были проведены исследования [120] по внедрению метода ультрафильтрации для очистки холерного токсина от О-антигена, в 90-ых годах - по концентрированию и очистки О-антигена с использованием ультрафильтрации на полых волокнах [40], что позволило создать промышленную технологию концентрирования О-антигена, продуцируемого клетками холерного вибриона штамма М41 серовара Огава [50, 97]. Однако используемый метод имеет ряд недостатков, связанных с

тем, что фильтрация протекает в тупиковом режиме: значительные потери полуфабриката, низкая удельная скорость фильтрации.

В производстве химических вакцин все более широкое применение находит концентрирование антигенов методом тангенциальной ультрафильтрацией. Широкий спектр мембран позволяет концентрировать антигены с различной молекулярной массой, при этом минимизируются технологические потери продукта. Таким образом, актуальность научных исследований по совершенствованию технологии концентрирования О-антигенов холерного вибриона является очевидной.

В этой связи важность и перспективность приобретают научные исследования по разработке экспериментальной масштабируемой технологии глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов и совершенствованию процесса концентрирования нативных О-антигенов.

Цель работы - Исследовать процесс глубинного культивирования атоксигенных штаммов V. ско1егае - продуцентов О-антигенов и оптимизировать процесс концентрирования нативных О-антигенов. Основные задачи исследования:

1. Изучить основные микробиологические свойства атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов после длительного хранения.

2. Исследовать физиологические и морфологические особенности атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов в ходе их глубинного культивирования.

3. Выявить биокинетические особенности процесса глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов.

4. Определить оптимальные технологические параметры процесса культивирования атоксигенных штаммов V. ско1егае - продуцентов О-антигенов.

5. Усовершенствовать технологию концентрирования О-антигенов холерного вибриона методом ультрафильтрации.

6. Изучить антигенные, биохимические, физико-химические и иммунобиологические особенности О-антигенов, полученных с использованием экспериментальной технологии.

7. Изучить нормируемые свойства коммерческого препарата таблетиро-ванной холерной вакцины, полученного по усовершенствованной технологии. Научная новизна работы заключается в том, что изучены основные морфологические и фенотипические свойства атоксигенных штаммов V. ско1егае - продуцентов О-антигенов после длительного (36 месяцев) хранения. Показано, что штаммы сохраняют свои основные культурально-морфологические свойства и высокий уровень биосинтеза О-антигенов.

Впервые исследованы физиологические и морфологические особенности атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов в ходе их глубинного культивирования. Показано, что при введении основного источника углеводного питания (глюкозы) происходит закисление культуральной жидкости, что требует добавления корригирующего раствора.

Впервые с помощью атомно-световой микроскопии проведен сравнительный анализ морфологических особенностей бактериальных клеток атоксигенных штаммов V. ско1егае КМ 263 биовара Эль Тор серовара Инаба, V. ско1егае КМ 262 биовара Эль Тор серовара Огава и V. ско1егае М 377 0139 се-рогруппы, выращенных в условиях глубинного культивирования. Выявлено, что клетки всех трех штаммов холерного вибриона, выращенных при температурах 30 °С и 37 °С, имеют сходный размер и морфологию.

Экспериментально обоснованы оптимальные технологические параметры (температура, продолжительность, профиль введения глюкозы, время добавления аммиака и пеногасителей) процесса культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов, позволяющие получать нативные О-антигены в препаративных количествах.

Впервые показано, что рост атоксигенных штаммов возбудителя холеры -продуцентов О-антигенов зависит не только от концентрации субстрата, но и от концентрации продукта биосинтеза, причем его накопление снижает скорость роста микроорганизмов.

Усовершенствована технология концентрирования О-антигенов холерного вибриона тангенциальной ультрафильтрацией, защищенная патентом на изобретение № 2445116 «Способ концентрирования нативного холерного О-антигена Vibrio cholerae». Определено, что наиболее эффективно концентрирование О-антигенов V. cholerae с использованием мембран с НОММ, равной 500 кДа.

Установлены оптимальные параметры процесса концентрирования: напор на входе ультрафильтрационного аппарата - 2,5 бар, давление на выходе - 0,5 бар; температура продукта - 37 °С.

Впервые изучен химический состав сублимационно высушенных О-антигенов, полученных из атоксигенных штаммов холерного вибриона. Показано, что препараты О-антигены, полученные из атоксигенных и токсигенных штаммов имеют сходный белковый и полисахаридный состав.

В результате сравнительного анализа иммунохимических и физико-химических свойств О-антигенов V. cholerae М-41 серовара Огава, полученных по регламентной и усовершенствованной технологиям концентрирования, выявлено подобие их характеристик.

Практическая значимость работы заключается в том, что разработана масштабируемая технология глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов, позволяющая получать полуфабрикаты протективных антигенов соответствующих показателям качества на коммерческую холерную вакцину.

На основании проведенных исследований по разработке технологии получения О-антигенов из атоксигенных штаммов холерных вибрионов выработаны рекомендации по её использованию в технологии приготовления холер-

ной вакцины. Усовершенствованная технология концентрирования О-антигена V. ско1егае М-41 серовара Огава внедрена в технологию производства коммерческой холерной вакцины.

Разработаны методические рекомендации:

«Концентрирование протективных антигенов холерного вибриона методом тангенциальной фильтрации», одобренные Учёным советом РосНИПЧИ «Микроб» (протокол № 2 от 18 марта 2011 г.) и утверждённые директором института 11 июня 2011 г.;

«Аппаратное культивирование атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов», одобренные Учёным советом РосНИПЧИ «Микроб» (протокол № 8 от 26 декабря 2012 г.) и утверждённые директором института 27 декабря 2012 г.

Результаты исследований использовались при разработке регламента производства № ПР 01898109-39-12 «Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой», утвержденного директором РосНИПЧИ «Микроб» 11 июля 2012 г. Положения, выносимые на защиту:

1. Атоксигенные штаммы V. ско1егае - продуценты О-антигенов сохраняют высокий уровень биосинтеза О-антигенов и свои основные микробиологические свойства в процессе длительного (36 месяцев) хранения.

2. Разработана масштабируемая технология глубинного культивирования атоксигенных штаммов холерного вибриона - продуцентов О-антигенов.

3. Технология концентрирования нативных холерных О-антигенов тангенциальной ультрафильтрацией обладает преимуществом перед процессом, протекающим в тупиковом режиме.

4. Коммерческая серия вакцины холерной бивалентной химической таб-летированной, полученная по усовершенствованной технологии концентрирования О-антигена V. ско1егае серовара Огава, соответствует требованиям нормативной документации.

Работа выполнена в ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» в рамках научно-исследовательских тем № 40-2-09 «Оптимизация технологических этапов производства МИБП и разработка новых препаратов для диагностики ООИ» (номер госрегистрации: 0120.0853923) и «Разработка современных безопасных химических вакцин против холеры и создание универсальной технологии их производства» выполняемой согласно распоряжению Правительства Российской Федерации № 1426-р от 02.10.2009 г. о выделении финансовых средств на проведение научно-исследовательских работ, направленных на разработку новых средств диагностики и профилактики тропических болезней. Апробация работы

Основные результаты работы представлены на: 14 и 15 международных школах-конференциях молодых ученых «Биология - наука XXI века», (Пущи-но, 2010, 2011); Международной научно-практической конференции «Вавилов-ские чтения-2010», (Саратов, 2010); Совещаниях специалистов Роспотребна-дзора по вопросам совершенствования эпидемиологического надзора за холерой (Ростов-на-Дону, 2013); VI Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (М., 2011); научно-практической конференции молодых ученых «Инновационные технологии в противоэпидемической защите населения» (Нижний Новгород, 2011); III научно-практической школе-конференции молодых ученых и специалистов научно-исследовательских организаций Роспотребнадзора «Современные технологии обеспечения биологической безопасности» (Оболенск, Московская область, 2011); XI Межгосударственной научно-практической конференции «Современные технологии в совершенствовании мер предупреждения и ответных действий на чрезвычайные ситуации в области санитарно-эпидемиологического благополучия населения» (Саратов, 2012); Международной научно-практической конференции «Биотехнология: реальность и перспективы», (Саратов, 2013), научно-практических конференциях РосНИПЧИ «Микроб» «Ито-

ги и перспективы фундаментальных и прикладных исследований в институте

«Микроб» (Саратов 2011-2013 гг.).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 16 работ, из них 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ и 1 патент. Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих в себя материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, а также заключения, выводов, списка используемых литературных источников, включающего 223 наименования. Работа изложена на 140 страницах и иллюстрирована 15 рисунками, 28 таблицами.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Протективные антигены холерных вибрионов

В формировании иммунитета против холеры участвует ряд основных ПА: 01 антиген сероваров Огава и Инаба, 0139 антиген и полисахаридная капсула, В-ХТ, различные адгезины, ряд белков внешней мембраны, а также некоторые ферменты.

01-антиген, являющийся частью ЛПС внешней мембраны клеточной стенки холерного вибриона, вносит определяющий вклад в вырабатывание ан-табактериального иммунитета при холере, вызываемой V. cholerae Ol серо-группы [4, 6, 152, 177, 184, 196]. Результатами испытаний вакцин и исследованиями на лабораторных животных показана основная роль 01-антигена в формировании иммунитета [155, 188, 222].

В состав ЛПС V. cholerae входят липид А и полисахарид. Липид А отвечает за эндотоксические свойства ЛПС. Полисахарид состоит из основной (коровой) части и боковых цепей, собственно 01-антигена, который определяет серологическую специфичность вибрионов [64, 140, 148, 217]. Доказано, что 01-антиген формирует антитела предупреждающие адгезию и соответственно колонизацию клетками V. cholerae тонкого кишечника [163, 187, 207, 219, 222]. Термостабильный 01-антиген состоит из 60 одинаковых по составу и строению мономерных звеньев, распределенных на поверхности микробной клетки [170, 178, 182, 200].

За образование антитоксического иммунитета отвечает входящая в состав холерного токсина В-субъединица. ХТ - это белок с молекулярной массой 84 кДа, состоящий из пяти одинаковых В-ХТ с молекулярной массой 11,6 кДа каждая и одной А-ХТ с молекулярной массой 27,2 кДа [172, 177, 192].

А-ХТ обеспечивает токсическую активность ХТ [4]. В-ХТ стимулирует локальный иммунный ответ за счет специфической адсорбции на поверхности

тонкого кишечника связанного с ганглиозидом GMt [208] и образования антител к В-ХТ нейтрализующих действие ХТ [147].

В-ХТ классического биовара и биовара Эль Тор отличаются по антигенным свойствам [185]. На основании различий в пяти аминокислотных остатках [159], ХТ V. cholerae классического биовара был отнесен I типу, а ХТ V. cholerae биовара Эль Тор - ко II типу.

Показано, что БВМ V. cholerae вызывают образование агглютинирующих антител в организме человека и экспериментальных животных, создавая антибактериальный иммунитет. БВМ являются основными и минорными нетоксичными гидрофобными белками и общими антигенами для V. cholerae, независимо от био- и сероваров [1, 175].

БВМ представлены следующими белками: основной белок OmpV с молекулярной массой 25 кДа, минорный OmpW (22 кДа), белок OmpS (43 кДа), От-pU (38 кДа) [151, 172, 181, 198, 205, 209, 210]. Имеются сведения о БВМ с молекулярной массой 15 кДа, принимающим участие в формировании постинфекционного иммунитета [189].

Определенную роль в защитных свойствах вакцин играют внеклеточные ферменты, синтезируемые V. cholerae: лецитиназа, коллагеназа, фибринолизин, амилаза, эластаза, нейраминидаза, протеазы [6, 22, 159]. Наиболее важные из них - термолабильные белки нейраминидаза с молекулярной массой 83 кДа [31, 165, 176] и три типа протеаз [126, 223].

В предотвращении заселения клетками V. cholerae кишечника, за счет выработки секреторных антител класса IgA, участвуют некоторые структуры клеточной стенки V. cholerae: пили адгезии [53, 216], вещества, агглютинирующие эритроциты [168], Ol-антиген [164] и ряд БВМ [183].

Основным фактором колонизации являются ТКПА, состоящие из белковых субъединиц молекулярной массой 20,5 кДа, имеющих диаметр 5-7 нм [179, 216]. Все штаммы холерного вибриона вырабатывают эти пили [213].

Отличием антигенного комплекса холерных вибрионов 0139 серогруппы от V. ско1егае 01 является наличие двух новых поверхностных структур -0139-антигена и полисахаридной капсулы, а также отсутствие продукции ней-раминидазы.

0139-антиген, также как и 01-антиген, входящий в состав ЛПС внешней мембраны клеточной стенки холерного вибриона, играет основную роль в формировании антибактериального иммунитета при холере, вызываемой V. ско1-егае 0139 серогруппы [174]. ЛПС V. ско1егае 0139, в сравнении с ЛПС V. ско1-егае 01, имеет ряд различий: вследствие наличия добавочных Сахаров коровая область О-139 антигена более тяжелая; О-боковые цепи V. ско1егае содержат новый сахар 3,6-дидеоксигексозу (колитозу), однако отсутствует перозамин [170]. Кроме того, О-боковые цепи более короткие и с меньшей молекулярной массой [221].

Полисахаридная капсула формирует антитела, подавляющие колонизацию [174] и представляет собой полимеризованные О-боковые цепи с молекулярной массой более 90 кДа, свободно лежащие на поверхности клеток холерного вибриона [206].

Несмотря на значительное количество антигенов, формирующих иммунитет против холеры, в отечественной и зарубежных оральных холерных химических вакцинах, как показывают данные литературы [104, 153], обязательным компонентом является О-АГ различных биоваров и серогрупп. Исследователями показано, что присутствие в холерных вакцинах 01-антигена серовара Ина-ба не защищает при заражении холерой клетками V. ско1егае серовара Огава и наоборот [167]. Также выявлено, что антитела к 01-антигену не обладают защитными свойствами в отношении V. ско1егае 0139 [146].

1.2. Методы и технологии культивирования холерного вибриона

Перед анализом методов и технологий культивирования холерного вибриона было целесообразно рассмотреть их основные культуральные свойства.

Холерный вибрион является факультативным анаэробом, хорошо размножающимся при температуре 16-40 °С. При температуре 10-15 °С он размножаются очень медленно; при 5 °С клетки вибрионов в питательных средах сохраняют жизнеспособность, но постепенно отмирают. Оптимальными для роста холерных вибрионов является температура 30-37 °С. рН среды холерные вибрионы могут регулировать в интервале 6,0-9,4. В средах с большим содержанием углеводов происходит закисление среды, обуславливающее быстрое отмирание вибрионов. Оптимумом рН для роста является 7,6-8,0 [5].

Выращивание холерных вибрионов осуществляется на плотных и жидких питательных средах, при этом, в настоящее время, плотные питательные среды используются, как правило, в диагностических целях. Культивирование холерных вибрионов на плотных питательных средах с целью получения профилактических препаратов, осуществлялось до начала 60-ых годов XX века в стеклянной посуде небольшой емкости (матрацы, бутыли), что было сопряжено с большой затратой времени и материалов. На рубеже 60-70-ых годов прошлого столетия была разработана технология выращивания холерных вибрионов в производственных целях на плотных питательных средах в аппаратах АКМ-Ш в условиях контролируемой аэрации [77-79, 129]. Было установлено, что благоприятным сроком выращивания холерного вибриона является 18 ч при 37 °С с периодическим аэрированием стерильным воздухом через каждые 1,5 ч в течение 15 мин в количестве 50 л в мин. Применение данной технологии позволило увеличить выход биомассы в 4 раза в сравнении с выращиванием на матрацах. Вакцины, приготовленные с применением данной технологии, соответствовали нормируемым требованиям.

Практически в это же время разрабатывалась технология глубинного метода выращивания холерных вибрионов периодическим методом [8, 82-84], которая используется и в настоящее время при производстве МИБП.

При периодическом культивировании с подпиткой в питательную среду порционно добавляются вещества, благоприятно влияющие на жизнедеятель-

ность и накопление микроорганизмов. По этому способу осуществляется культивирование клеток холерных вибрионов с целью получения специфически активных компонентов российской коммерческой холерной вакцины.

Отъемно-доливной метод культивирования микроорганизмов, при котором часть культуральной жидкости из биореактора удаляется и аналогичное количество питательной среды добавляется, делает возможным увеличение количества биомассы за один производственный цикл. Исследователями было показана возможность использования этого способа при культивировании клеток V. ско1егае [27, 28, 94]. В работе П.Х. Ненкова с соавт. [94] имеются сведения о разработке двухциклического культивирования холерных штаммов вибрионов Инаба 35АЗ и Огава М41 в ферментере. Процесс осуществляли путем отбора на втором часу культивирования 2 л суспензии из первого ферментера, которую вводили в качестве инокулята во второй ферментер. Использовали ферментеры объемом 40 л. Культивирование в обоих ферментерах доводили до начала фазы стационарного роста. Авторами показано, что в первом и втором циклах не наблюдалось разницы в выходе биомассы, не установлено различий в ультраструктуре вибрионов. Во втором цикле отмечено сокращение минимального времени генерации. Отсутствовала разница в антигенной и иммуногенной активности, полученных из первого и второго циклов культивирования. Было отмечено, что удельная скорость роста биомассы в первом ферментере была ниже и устанавливалась позже, чем во втором ферментере. В работе Ю.Г. Васина [27] было показано, что количество ХТ и О-АГ, а также биологическая активность ХТ остаются одинаковыми как для периодических культур, так и для каждого цикла отъемно-доливной культуры.

П.Х. Ненковым с соавт. при исследовании процесса культивирования V. ско!егае Инаба и Огава в ферментере с автоматическим контролем параметров было показано, что концентрация кислорода в среде определяет скорость роста микроорганизмов, уровни утилизации глюкозы и выход биомассы холерных вибрионов. Проведенные исследования по выращиванию холерных вибрионов

в ферментере объемом 40 л в условиях лимита по кислороду и при рОг равным 50 % от исходного уровня насыщения среды дали следующие результаты. При лимитации кислородом концентрация биомассы увеличивалась в течение 9 ч; удельная скорость достигала максимума на втором часу, когда устанавливалась короткая экспоненциальная фаза роста со временем генерации 33 мин; абсолютная скорость роста увеличивалась до третьего часа, а затем снижалась; концентрация микробных клеток в стационарной фазе роста составляла 33 млрд. м.к./мл. Насыщение среды кислородом до 50 % дало следующие результаты: время генерации в экспоненциальной фазе уменьшалось до 20 мин; абсолютная скорость роста микроорганизмов увеличивалась до шестого часа; концентрация микробов в стационарной фазе роста составляла 95 млрд. м.к./мл [95].

При культивировании с диализом, являющимся вариантом непрерывного способа, осуществляется постоянное поступление питательных веществ в куль-туральную жидкость через мембрану. При этом уменьшается количество продуктов метаболизма микроорганизмов, что благоприятно влияет на рост биомассы. Ферментация с диализом использовалась при выращивании холерного вибриона [72, 99, 211]. Было показано, что продукция XT при данном способе выше в сравнении с XT, полученным глубинным способом.

Использование метода непрерывного культивирования клеток V. cholerae при получении ПА позволяло получать стандартные препараты, биологическая активность которых не уступает препаратам, полученным при периодическом культивировании [27, 29, 212].

Оптимальные условия (температура, рН среды, аэрация и другие) синтеза антигенов холерными вибрионами индивидуальны для каждого штамма-продуцента [5, 158].

Одним из первых исследователей, изучавшим влияние температуры культивирования штаммов V. cholerae на синтез антигенов был G.P. Craig. Им было показано, что максимальная продукция XT при выращивании на пептонной воде штамма V. cholerae VC-12 происходит при температуре 29 °С [156]. D.J. Ev-

ans и S.H. Richardson подтвердили эти данные при выращивании холерных вибрионов с казаминовыми аминокислотами. При этом они констатировали, что для лучшего синтеза антигенов необходима высокая степень аэрации среды выращивания [158]. R.A. Finkelstein с соавт. определили ряд оптимальных параметров для культивирования штамма V. cholerae 569В Инаба на питательной среде из казаминовых аминокислот. Ими было показано, что посевная доза должна составлять не менее 105-106 живых клеток на 1 мл среды; процесс выращивания целесообразно вести до начала стационарной фазы роста микроорганизма; массообменные характеристики ферментера должны быть на уровне 1,5-3,0 г кислорода на 1 л среды в час [160-162]. Исследовано влияние на рост холерных вибрионов и синтез антигенов аэрации и перемешивания [160, 201, 211, 212]. Исследователями сделан вывод, что продукция антигенов во многом определяется степенью насыщения среды выращивания кислородом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Алешина, Юлия Александровна, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аболина Т.А. Мембранные белки холерного вибриона // Материалы I научной конференции молодых специалистов противочумных учреждений Кавказа - Ставрополь, 1986. - С. 90-94.

2. Агафонов А.П., Стрельцова М.А., Игнатьев Г.М., Твердохлебов A.B., Чепурнов A.A., Калиберов С.А., Кузьмин В.А., Черный Н.Б. Способ получения концентратов вирусов, вызывающих геморрагические лихорадки и обладающих иммуногенной и протективной активностью. Патент РФ № 2029561 от 27.02.1995г.

3. Агафонов А.П. Получение антигенов и использование их для разработки средств диагностики и профилактики вирусных инфекций // Ав-тореф. дис.....докт. биол. наук. - Новосибирск, 2010. - 44 с.

4. Адамов А.К. Иммунология холеры. - Саратов: Изд-во Саратовск. ун-та, 1981.-318 с.

5. Адамов А.К., Наумшина М.С. Холерные вибрионы. - Саратов: Изд-во Саратовск. ун-та, 1984. - 328 с.

6. Адамов А.К., Павлова Ю.П. Влияние иммунных антител и ферментного звена ксантин на Vibrio cholerae II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1990. - № 2. - С. 6-10.

7. Алешина Ю.А., Ульянов А.Ю., Никифоров А.К., Комиссаров A.B., Еремин С.А., Громова О.В., Белякова Н.И., Клокова О.Д. Сравнительное изучение качества препаратов холерной бивалентной химической вакцины, полученных по традиционной и экспериментальной технологиям // Материалы совещания специалистов Роспотребнадзора по вопросам совершенствования эпидемиологического надзора за холерой и материалы проблемной комиссии (48.04) «Холера и патогенные для человека вибрионы». - Ростов-на-Дону, 2011. -Вып. 24. - С. 143-144.

8. Алтухов М.В., Никитин Г.А., Филлипов Н.Ф. Реакторная установка для культивирования микроорганизмов глубинным методом // Проблемы особо опасных инф. - 1969. - Вып. 2. - С. 192.

9. Анисимов П.И., Адамов А.К., Джапаридзе М.Н., Наумов A.B., Никитина Г.П. Способ производства вакцины для профилактики холеры. Патент РФ № 2080121 от 27.05.1997г.

10. Антонычева М.В., Нижегородцев С.А., Еремин С.А., Аленкина Т.В., Шульгина И.В., Бахрушина Н.И., Белоусов А.Д., Жулидов И.М., Никифоров А.К. Питательная среда для глубинного культивирования холерного вибриона. Патент РФ № 2425866 РФ от 10.08.2011г.

11. Ашмарин И.П., Воробьёв A.A. Статистические методы в микробиологических исследованиях. - М.: Медицина, 1962. - 180 с.

12. Безгин В.М., Шевырев Н.С., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д. Применение процесса ультрафильтрации для получения туберкулина очищенного (ППД) для млекопитающих // Тезисы докладов V Всероссийской конференции «Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных препаратов», Щелково - 1996. - С. 205.

13. Безгин В.М., Шевырев Н.С., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д. Сравнительная оценка селективности и производительности ультрафильтрационных мембран при различных параметрах ультрафильтрации // Тезисы докладов научно-производственной конференции, посвященной 100-летию Курской биофабрики, Курск. - 1996. - С. 44^15.

14. Безопасность работы с микроорганизмами 1-Й групп патогенности (опасности): Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.1285-03 - Введены Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 15 апреля 2003 г. № 42, М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 2004.

15. Безопасность работы с микроорганизмами III-IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней: Санитарно-

эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08 - Введены Постановлением Главного государственного санитарного врача РФ от 28 января 2008 г. № 4 - Бюллетень нормативных и методических документов Госсанэпиднадзора. - 2009. -Вып. 1(35).

16. Джаяппа X., СПСоннелл К. Вакцина АЛЬФА ТОКСОИДА С. Perfringens. Патент РФ № 2434638 от 27.11.2011 г.

17. Билалова Г.П., Быстрицкий Л.Д., Ставицкая Н.Х., Соляник Р.Г., Ильченко Т.Э., Шарова О.И., Щурихина В.В., Прохорова О.Г. Производство вакцины ЭнцеВир - итоги первых пяти лет // International Scientific Conference «Chemistry, Chemical Engineering and Biotechnology», Tomsk - 2006. - C. 343345.

18. Бирюков B.B. Основы промышленной биотехнологии. -M.: КолосС - 2004. - 296 с.

19. Борковски А. Множественная вакцинация, включающая менингококки серогруппы С. Патент РФ № 2457858 от 10.08.2012г.

20. Брахт К., Каталевский Е.Е., Савельева С.П. Фильтрация кросс-флоу // Фармацевтические технологии и упаковка. - 2009. - № 6. - С. 47-51.

21. Брок Т. Мембранная фильтрация. - М.: Мир - 1987. - 462 с.

22. Бугоркова Т.В., Елисеев Ю.Ю. Амилазная активность холерных вибрионов различной вирулентности // Тезисы Всесоюзной научной конференции «Актуальные вопросы микробиологии, лабораторной диагностики и профилактики холеры», Ростов-на-Дону - 1983. - С. 98-100.

23. Бугоркова Т.В. Исследование условий, влияющих на образование фактора сосудистой проницаемости в культурах холерных вибрионов // Ав-тореф. дис.....канд. биол. наук. - Саратов, 1984. - 24 с.

24. Бывалов А.А., Евстигнеев В.И., Дармов И.В., Пименов Е.В. Патент РФ № 2190424. Антигенный состав чумной химической вакцины от 10.10.2002г.

25. Бывалов A.A., Евстигнеев В.И., Дармов И.В., Пименов Е.В. Идентификация и выделение антигена, защищающего морских свинок от экспериментальной чумы // Проблемы особо опасных инф. - 2005. - Вып. 1(89). - С. 54-58.

26. Вакцина холерная бивалентная химическая, таблетки, кишечно-растворимой оболочкой // Стандарт качества лекарственного средства. Фармакопейная статья предприятия ФСП 42-0020-0020-08.

27. Васин Ю.Г. Аппаратурное обеспечение и оптимизация процессов получения биомассы и протективных антигенов холерного вибриона // Ав-тореф. дис.....канд. биол. наук. - Саратов, 1993. - 21 с.

28. Васин Ю.Г., Космаенко О.М., Тихонов Н.Г., Никитина Г.П., Котки-на Т.А., Строганов В.В. Параметры роста глубинной аэрированной культуры холерного вибриона на различных фазах ее развития // Проблемы биотехнологии, микробиологии и иммунологии особо опасных инф. - Саратов. - 1984. - С. 40-43.

29. Васин Ю.Г., Космаенко О.М., Коткина Т.А., Строганов В.В. Синтез холерного токсина и его В-субъединицы в условиях проточного хемостатного культивирования на химически определенных средах // Тезисы докладов 2-й Всесоюзной конференции «Бактериальные токсины», Юрмала - 1989. - С. 59.

30. Волох O.A., Шепелёв И.А., Заднова С.П., Крепостнова И.М., Еремин С.А. Изучение биокинетических особенностей и оптимизация условий культивирования штаммов холерного вибриона - продуцентов протективных антигенов, перспективных для внедрения в производство // Проблемы особо опасных инф. - 2008. - Вып. 95. - С. 52-55.

31. Гайлонская И.Н., Жукова Э.В., Шагинян И.А., Святой В.И. Роль эн-теротоксина и нейраминидазы в биологической активности вибрионов El tor II Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1982. - № 9. - С. 90-93.

32. Генералов C.B., Абрамова Е.Г., Матвеева Ж.В., Жулидов И.М., Никифоров А.К., Лобовикова O.A., Савицкая Л.В., Минаева Л.Н., Галкина М.В.,

Михеева Т.А., Комиссаров А.В., Киреев М.Н. Опыт получения кроличьего ан-тирабического иммуноглобулина с применением культурального антигена // Проблемы особо опасных инф. - 2012. - Вып. 2( 112). - С. 78-81.

33. Генералов С.В., Жулидов И.М., Матвеева Ж.В., Абрамова Е.Г., Никифоров А. К., Комиссаров А.В., Савицкая JT.B., Минаева J1.H., Михеева Т.А., Галкина М.В., Лобовикова О.А., Свинцов Р.А. Культуральный Virus Fixe как потенциальный рабический антиген в производстве иммуноглобулина для профилактики бешенства // Фундаментальные и прикладные аспекты анализа риска здоровью населения: материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов Роспотребнадзора: в 2 т. / под общ. ред. акад. РАМН Г.Г. Онищенко, акад. РАМН Н.В. Зайцевой. - Пермь: Книжный формат, 2012.-Т. 1- С. 137-139.

34. Гергель М.В. Очистка полисахаридов Haemophilus influenzae типа b с использованием гидролитических ферментов и тангенциальной ультрафильтрации // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии / Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) научной конференции, 25 - 26 апреля 2012 г. / Под ред. Д.А. Васильева. - Ульяновск: УГСХА, 2012.-С. 101-105.

35. Горяев А.А., Щелканова Е.Ю., Лозовский Ю.В., Тучков И.В., Смирнова Н.И. Конструирование штамма Vibrio cholerae биовара эльтор гиперпродуцента холерного токсина II типа и определение оптимальных условий для продукции этого белка // Проблемы особо опасных инф. - 2008. - Вып. 95. - С. 56-59.

36. Горяев А.А. Штаммы Vibrio cholerae биовара эльтор и изменой продукцией холерного токсина: получение и молекулярно-генетический анализ // Автореф. дис.....канд. биол. наук. - Саратов, 2009. - 24 с.

37. Горяев А.А., Щелканова Е.Ю., Лозовский Ю.В., Смирнова Н.И. Конструирование штамма Vibrio cholerae биовара эльтор - продуцента холерного токсина II типа, выделение и изучение антигенных свойств секретируемо-

го токсина // Материалы совещания специалистов Роспотребнадзора по вопросам совершенствования эпидемиологического надзора за холерой и материалы проблемной комиссии (48.04) «Холера и патогенные для человека вибрионы». - Ростов-на-Дону, 2008. - Вып. 21. - С. 89-91.

38. ГОСТ 177-88 «Водорода перекись. Технические условия». Утвержден и введен в ¡действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 29.06.88г., № 2417.

39. ГОСТ 11078-78 «Натр едкий. Технические условия». Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 08.02.78г., № 395. ?

40. Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А. Елисеев Ю.Ю., Кире-ев М.Н., Космаенко О.М. Способ получения О-антигена холерного очищенного. Патент РФ № 214,3280 от 26.05.1999г.

41. Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Елисеев Ю.Ю., Ки-реев М.Н., Наумов A.B., Кузьмиченко И.А., Тараненко Т.М. Оральная химическая вакцина против холеры. Патент РФ № 2159128 от 20.11.2000г.

42. Громова О.В., Джапаридзе М.Н., Дятлов И.А., Кирееев М.Н., Федорова В.А., Аленкина Т.В., Абрамова Е.Г.Новый способ получения О-антигена холерного очищенного с целью создания холерных диагностических препаратов // Биотехнология - 2002. - № 2. - С. 42-46.

43. Громова О.В., Нижегородцев С.А., Дятлов И.А., Кутырев В.В. Оптимизация процесса производства холерной химической таблетированной вакцины с помощью технологии ультрафильтрации // Проблемы особо опасных инф. - 2011. - Вып. 109. - С. 71 -74.

44. Джапаридзе М.Н., Никитина Г.П., Попов A.A. К вопросу получения О-антигена холерного вибриона при производстве холерной химической вакцины холероген-анатоксин // Проблемы специфической профилактики чумы и холеры. - Саратов. - 1985. - С. 66-71.

45. Джапаридзе М.Н., Наумов A.B., Елисеев Ю.Ю. Холерные химические вакцины института «Микроб» (принципы конструирования, подбора штаммов, биотехнологии) // Материалы Российской научной конференции «Иммунохимия и специфическая профилактика особо опасных инфекций», Саратов - 1993. - С. 181-182.

46. Джапаридзе М.Н., Наумов A.B., Никитина Г.П. Оральная химическая вакцина из гипертоксигенных штаммов КМ-76 Инаба и КМ-68 Огава возбудителя холеры // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1991. - № 4.-с. 31-36. ;ь

47. Джапаридзе М.Н., Караева Л.Т., Сумароков A.A. О-антиген Vibrio cholerae серовара Огава, рекомендуемый для создания оральной холерной бивалентной химической вакцины // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1981.-№ 11. - С. 75-80.

48. Джапаридзе М.Н., Наумов A.B., Мелещенко М.В., Никитина Г.П. Способ получения пероральной химической вакцины. Патент РФ № 2076734 от 10.04.1997г.

49. Дятлов И.А., Нижегородцев С.А., Громова О.В., Бутов A.C., Васин Ю.Г., Клокова О.Д. Применение ультрафильтрации на полых волокнах при производстве холерных вакцин // Материалы научно-практической конференции «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы», Киров -2001.-С. 19.

50. Дятлов И.А., Нижегородцев С.А., Громова О.В., Васин Ю.Г., Бутов A.C., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка ультрафильтрационной технологии получения О-антигена холерного вибриона для производства вакцин // Проблемы особо опасных инф. - 2001. - Вып. 2(82). - С. 133-139.

51. Егорова Н.Б., Семенов Б.Ф., Курбатова Е.А., Ефремова В.Н., Каверина К.Г., Михайлова H.A. Поликомпонентная вакцина для иммунопрофилактики и иммунотерапии заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами. Патент РФ № 2209081. от 27.07.2003г.

52. Еремин С.А., Волох O.A., Шепелев И.А., Дальвадянц С.М., Дятлов И.А. Разработка новых технологических схем и масштабирование процессов получения антигенов чумного и туляремийного микробов // Проблемы особо опасных инф. -2006. - Вып. 92. - С. 58-61.

53. Заднова С.П. Функциональная роль ToxR-регулируемых белков Vibrio cholerae И Проблемы особо опасных инф. - 2004. - Вып. 1(87). - С. 9-13.

54. Заднова С.П., Волох O.A., Крепостнова И.М., Щелканова Е.Ю., Ливанова Л.Ф., Захарова Т.Л., Шепелев И.А., Еремин С.А., Смирнова Н.И. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях // Проблемы особо опасных инф. - 2007. - Вып. 93. - С. 51-55.

55. Заднова С.П., Еремин С.А., Авдеева Н.Г., Волох O.A. Изучение роста штаммов холерного вибриона - продуцентов протективных антигенов в условиях глубинного культивирования и выделение белка токсин-корегулируемых пилей адгезии // Материалы Российской научно-практической конференции «Холера», Ростов-на-Дону - 2003. - С. 236-238.

56. Заднова С.П., Еремин С.А., Авдеева Н.Г., Волох O.A. Изучение динамики роста штаммов Vibrio с/ю/егае-продуцентов протективных антигенов в условиях глубинного культивирования и выделение токсин-корегулируемых пилей адгезии // Биотехнология - 2004. - № 3. - С. 43—48.

57. Заднова С.П. Штаммы Vibrio cholerae с измененной экспрессией генов вирулентности // Автореф. дис.....докт. биол. наук. - Саратов, 2009. - 47 с.

58. Заднова С.П., Волох O.A., Крепостнова И.М., Щелканова Е.Ю., Ливанова Л.Ф., Захарова Т.Л., Шепелев И.А., Еремин С.А., Смирнова Н.И. Изучение продукции основных факторов патогенности и иммуногенности различными штаммами Vibrio cholerae при их культивировании в производственных условиях // Проблемы особо опасных инф. - 2007. - Вып. 93. - С. 51-55.

59. Игнатов П.Е., Федоров А.И. Способ получения протективного внеклеточного антигена бруцелл, обладающего способностью провоцировать хронические формы бруцеллеза. Патент РФ № 2199340 от 27.02.2003г.

60. Ильченко Т.Э./Билалова Г.П., Ставицкая Н.Х., Соляник Р.Г., Быст-рицкий Л.Д., Красильников И.В. вакцина «Энцевир» - современный препарат для профилактики клещевого энцефалита // Сибирский медицинский журнал -2009. - № 2 (выпуск 2). - С. 50-55.

61. Караваев Ю.Д., Семенова И.Н., Мельник Н.В., Плохова A.A. Способ изготовления вакцины для профилактики и лечения некробактериоза животных, вакцина для профилактики и лечения некробактериоза животных и способ профилактики и лечения некробактериоза животных. Патент РФ № 2329828 от 27.07.2008г.

62. Карпов И.Н., Конарев A.A., Безгин В.М., Шевырев Н.С., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д. Ультрафильтрация в производстве туберкулина // Тезисы докладов научно-производственной конференции, посвященной 100-летию Курской биофабрики, Курск - 1996. - С. 138.

63. Киселевский М.В., Доненко Ф.В., Воюшин К.Е., Тришин A.B., Курбатова Е.А., Егорова Н.Б., Грубер И.М., Ахматова Н.К., Семенова И.Б., Семенов Б.Ф. Способ получения протективной белоксодержащей фракции бактерий. Патент РФ № 2311197 от 27.11,2007г.

64. Книрель Ю.Л., Кочетков Н.К. Строение липосахаридов грамотри-цательных бактерий. III. Структура О-специфических полисахаридов // Биохимия- 1994.-Т. 59, № 12.-С. 1784-1851.

65. Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д., Гречкина Н.Т., Шевырев Н.С., Азарова H.A., Шаров А.Н., Безгин В.М., Солодов E.H., Букова Н.К. Способ получения туберкулина. Патент РФ № 2113233 от 20.06.1998г.

66. Комиссаров A.B., Еремин С.А., Ульянов А.Ю., Алешина Ю.А., Никифоров А.К., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И. Разработка экспериментальной технологии концентрирования протективных антигенов штамма

Vibrio cholerae 569B Инаба методом тангенциальной ультрафильтрации // Проблемы особо опасных инф. - 2011. - Вып. 3(109). - С. 75-77.

67. Комиссаров A.B., Никифоров А.К., Алешина Ю.А., Еремин С.А., Васин Ю.Г., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Крайнова А.Г. Способ концентрирования нативных холерогена-анатоксина и О-антигена. Патент РФ № 2451522 от 27.05.2012г.

68. Комиссаров A.B., Алешина Ю.А., Никифоров А.К., Еремин С.А., Клокова О.Д., Белякова Н.И., Крайнова А.Г. Разработка экспериментальной технологии концентрирования О-антигена и холерогена-анатоксина штамма холерного вибриона 569В Инаба // Материалы международной научно-практической конференции "Вавиловские чтения-2010", Саратов - 2010. - Т.2. -С. 117-118.

69. Комиссаров А.В, Никифоров А.К., Задохин С.Н., Еремин С.А., Волох O.A., Алешина Ю.А. Математическая модель кинетики накопления О-антигена в ходе периодического глубинного культивирования Vibrio cholerae М-41 Огава с лимитацией по углеродному субстрату // Проблемы особо опасных инф. -2013.- Вып. 1.-С. 91-93.

70. Комиссаров А.В, Никифоров А.К., Задохин С.Н., Еремин С.А., Волох O.A., Алешина Ю.А. Математическая модель кинетики накопления О-антигена в ходе периодического глубинного культивирования Vibrio cholerae М-41 Огава с лимитацией по углеродному субстрату // «Математическое и компьютерное моделирование в биологии и химии. Перспективы развития.» Сборник трудов международной Интернет-конференции. Казань, (28-30 мая 2012 г. / Отв. редактор Изотова Е.Д. - ФГАОУ ВПО "Казанский (Приволжский) федеральный университет, Сервис виртуальных конференций Pax Grid. - Казань: Изд-во "Казанский университет", 2012. - 193 с. - С.97-98.

71. Космаенко О.М., Тихонов Н.Г., Никитина Г.П. Массообменные характеристики ферментаторов для выращивания культур холерного вибриона //

Иммунохимия и лабораторная диагностика особо опасных инфекций - 1985. -№ 1,- С.65-69.

72. Космаенко О.М. Разработка аппаратного метода культивирования чумного микроба и холерного вибриона на полупроницаемых мембранах // Ав-тореф. дис. ... канд. биол. наук. - Саратов, 1981.-23 с.

73. Красильников И.В., Мищенко И.А., Шарова О.И. Разработка и внедрение технологии очищенной вакцины клещевого энцефалита // Актуальные вопросы разработки, производства и применения иммунобиологических и фармацевтических препаратов. - 2001. - С. 9-12.

74. Красильников И.В., Мищенко И.А., Шарова О.И. Совершенствование вакцины клещевого Энцефалита производства ФГУП «НПО ВИРИОН» // Материалы круглого стола в рамках Всероссийской научной конференции «Клинические перспективы в инфектологии», посвященной 125-летию со дня рождения профессора Н.К. Розенберга и 105-летию кафедры инфекционных болезней Российской Военно-медицинской академии 17-18 октября 2001 г., СПб.-2001.-С. 5-9.

75. Краткий обзор методов концентрирования и очистки вакцин [электронный ресурс] // http://e-vaccine.ru/articles/45.html (дата обращения 10.08.2012г.).

76. Куликова B.JL, Коваленко Н.М., Доброва Г.В., Копырзов В.Н., Кос-мачева H.JI. Изучение оптимальных условий роста, формирования специфических антигенов и токсинообразования у культуры холерного вибриона при глубинном выращивании // Проблемы особо опасных инф. - 1979. - Вып. 1. - С. 65-66.

77. Куликова B.JI. Выращивание холерного вибриона аппаратным методом при производстве вакцины // В сборнике «Производство бакпрепаратов для профилактики и диагностики особо опасных инфекций», Саратов - 1966. -С. 306-309.

78. Куликова B.JI., Караева Л.Т. Сравнительное изучение свойств холерных вакцин, полученных с АКМ-Ш и матрацев // Проблемы особо опасных инф. - 1969. - Вып. 2. - С. 116-122.

79. Куликова В.Л. Изучение свойств холерной вакцины, приготовленной из культур, выращенных в АКМ-Ш // Автореф. дис. ... канд. биол. наук. -Саратов, 1970.- 15 с.

80. Кутырев В.В., Девдариани З.Л., Саяпина Л.В. Современное состояние научных исследований в области профилактики особо опасных инфекционных бактериальных инфекций // Проблемы особо опасных инф. - 2006. -Вып. 2 (92).-С. 18-24.

81. Лавровская В.М., Чибрикова Е.В., Караева Л.Т., Пертова Л.С., Анохина C.B., Анисимова Т.И., Воронкина И.М., Джапаридзе М.Н., Дроздовская Ф.К., Кондрашкова Т.В., Павлова Л.П., Гуртовик А.И. Культивирование холерных вибрионов в условиях аэрации среды и изучение биологических свойств глубинных культур // Проблемы особо опасных инф. - 1969. - Вып. 3. - С. 179183.

82. Лавровская В.М. Изучение биологических свойств бактерий кишечной группы при глубинном культивировании // В сборнике «Научные основы производства вакцин и сывороток», М. - 1955. - С. 24-31.

83. Лавровская В.М., Ковалева Н.И., Хатунцева Н.В. Иммунохимиче-ская характеристика холерного вибриона, полученного водно-фенольным способом из аэрированных культур // В сборнике «Биохимия микробов», Горький - 1964.-С. 362-370.

84. Лавровская В.М., Петрова Л.С. Воронкина И.М. Некоторые биохимические показатели при культивировании холерных вибрионов глубинным методом // В сборнике «Биохимия микробов», Горький - 1964. - С. 34-37.

85. Ливанова Л.Ф., Стрельникова-Ааб E.H., Заднова С.П., Смирнова Н.И. Авирулентный штамм бактерий Vibrio cholerae КМ 263 биовара эльтор се-

ровара Инаба - продуцент протективного 01 антигена. Патент РФ № 2425867 от 10.08.2011г.

86. Ломов Ю.М., Москвитина Э.А. Эпидемиологическая обстановка по холере в мире, странах СНГ и России. Прогноз // Проблемы особо опасных инф. - 2006. - Вып. 2 (104). - С. 11-13.

87. Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С., Федоров Ю.М. Холера и проблема биотерроризма // Материалы IX съезда Всероссийского научно-практического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов, М. - 2007. - Том 3. - С. 122-123.

88. Мазрухо А.Б., Михась Н.К., Монахова В.Е., Рожков К.К. Определение оптимальных условий продукции ряда факторов патогенности холерных вибрионов // Журн. микробиол. эпидем. и иммунобиол. - 2000. - № 1. - С.21-24.

89. Матвеева Ж.В., Комиссаров А.В., Абрамова Е.Г., Никифоров А. К., Генералов C.B., Жулидов И.М. Концентрирование инактивированной суспензии культурального фиксированного вируса бешенства «Москва 3253» методом тангенциальной ультрафильтрации // Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы болезней, общих для человека и животных», Ставрополь - 2012. - С. 176.

90. Матвеева Ж.В., Комиссаров А.В., Абрамова Е.Г., Никифоров А. К., Генералов C.B., Жулидов И.М. Концентрирование инактивированной суспензии культурального фиксированного вируса бешенства «Москва 3253» методом тангенциальной ультрафильтрации // Методические документы и отчеты по санитарно-эпидемиологической охране территории Российской Федерации: Реферат, сб. / Под ред. акад. РАМН, докт. мед. наук, проф. В.В. Кутырева. - Саратов: ООО «Приволжское издательство», 2012. - С. 17.

91. Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов, вводимых людям: Методические указания МУК 4.1/4.2.588-96 - Утв. первым заместителем Председателя Государственного комитета санитарно-

эпидемиологического надзора Российской Федерации 31.10.96 г. - М.: Информационно-издательский центр Минздрава России, 1998.

92. Миронова A.B., Меньшикова Е.А., Соколенко A.B. Зависимость экспрессии биологических свойств холерных вибрионов от условий их культивирования // Журн. микробиол. - 2003. - № 3. - С. 77-79.

93. Михайлова H.A., Шаймухаметов Ф.А., Кузнецова Т.Н. Способ получения экзотоксина А Pseudomonas aeruginosa. Патент РФ № 1596770 от 09.06.1995г.

94. Ненков П.Х., Страшимиров И.И., Поликар А.Ч. Двухциклическое культивирование холерных вибрионов в ферментере // Журн. микробиол., эпи-демиол., иммунобиол. - 1986. - № 7. - С. 21-24.

95. Ненков А.Х., Поликар А.Ч., Цакова А. Культивирование холерных вибрионов в ферментере с автоматическим контролем ряда параметров // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунобиол. - 1982. - №5. - С. 47-50.

96. Несчисляев В.А., Молохова Е.И., Чистохина Л.П., Сорокина Ю.В., Белова И.В. Комплексное использование биологически активных метаболитов лакто- и бифидобактерий в производстве пробиотиков // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова - 2006. - Т. 2, № 4.-С. 29-30.

97. Нижегородцев С.А. Разработка новой технологии получения О-антигена холерного вибриона для производства профилактических препаратов // Автореф. дис.....канд. биол. наук. - Саратов, 2003. - 22 с.

98. Нижегородцев С.А., Дятлов И.А., Громова О.В., Елисеев Ю.Ю., Бутов A.C., Васин Ю.Г. Совершенствование стадии очистки О-антигена холерного вибриона в процессе производства вакцин // Материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 90-летию основания кафедры общей гигиены и экологии «Окружающая среда и здоровье», Саратов: Изд. СГМУ. - 2002. - С. 89.

99. Никитина Г.П., Краева Л.Т., Коткина Т.А., Попов A.A., Строганов В.В., Космаенко О.М., Опыт получения преципитирующей антихолерогенной сыворотки и ее применение // В сборнике «Профилактика особо опасных инфекций», Саратов - 1980. - С. 57-64.

100. Никифоров А.К., Киреев М.Н., Громова О.В., Комиссаров A.B., Еремин С.А., Волох O.A., Алешина Ю.А., Гаева A.B., Захарова Т.Л., Павлова

B.И. Исследование свойств протективных антигенов Vibrio cholerae 569В Ина-ба, полученных на производственных и разработанном биореакторах и по усовершенствованной технологии // Бюллетень Восточно-Сибирского научного центра СО РАМН - 2012. - № 5, Часть 1. - С. 284-287.

101. Нынь И.В. Биотехнология как основной подход в производстве иммунобиологических профилактических препаратов // Вестник биотехнологии и физико-химической биологии имени Ю.А. Овчинникова. - 2006. - Т. 2, № 4. -

C. 62-63.

102. Об утверждении национального календаря профилактических прививок и календаря профилактических прививок по эпидемическим показаниям: Приказ Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации от 31 января 2011 г. № 51н. [электронный ресурс] // http://www.garant.ru/products/ipo/prime/doc/4092137/ (дата обращения 10.08.2012г.).

103. Онищенко Г.Г., Сандахчиев Л.С., Нетёсов C.B. Боитерроризм как национальная глобальная угроза // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммуно-биол. 2000. - №6. - С. 83-85.

104. Онищенко Г.Г., Кутырев В.В., Щуковская Т.Н., Смирнова Н.И., Никифоров А.К., Еремин С.А., Топорков В.П. Специфическая профилактика холеры в современных условиях // Проблемы особо опасных инф. - 2011. - Вып. 1(107).-С. 5-12.

105. Роль и место концентрирования и очистки в технологической схеме производства биопрепаратов [электронный ресурс] // http://e-vaccine.ru/articles/46.html (дата обращения 10.08.2012 г.).

106. Санитарные правила по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев). - Утв. Приказом Главного государственного санитарного врача СССР от 06.04.1973 г. № 1045-73. / Сборник важнейших официальных материалов по санитарным и противоэпидемическим вопросам: В семи томах. Том 2. В двух частях. Часть 2. - М.: Информационно-издательский центр Госкомсанэпиднадзора Российской Федерации, 1992.

107. Ситник Н.П., Загидуллин Н.В., Исрафилов А.Г., Еникеева Л.Ф., Мухачева A.B., Шафеева P.C., Кунцевич Ю.Г., Петрова И.И. Способ получения высокоспецифичной гетерологичной антирабической сыворотки. Патент РФ № 2322503 от 20.04.2008г.

108. Ситьков В.И., Сурмило А.П. Лемешко В.Н., Соболева Г.Л. Панин А.Н. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза животных. Патент РФ № 2096042 от. 20.11.1997г.

109. Скотникова Т.А. Совершенствование технологии производства и способов применения вакцин против ньюкаслской болезни // Автореф. дис. .... докт. биол. наук. - Щелково, 2010. - 44 с.

110. Скоупс Р. Методы очистки белков. - М.: Мир, 1985. - 237 с.

111. Смирнова Н.И., Чеховская Г.В. Штамм бактерий Vibrio cholerae KM 138 серогруппы 0139 - продуцент холерного 0139 антигена. Патент РФ № 2192463 от 10.11.2002г.

112. Смирнова Н.И., Заднова С.П., Топорков A.B., Челдышева Н.Б. Штамм бактерий Vibrio cholerae KM 200 - продуцент холерного токсина и ток-син-корегулируемых пилей адгезии. Патент РФ 2193598 от 27.11.2002г.

113. Смирнова Н.И., Заднова С.П., Топорков A.B. Штамм бактерий Vibrio cholerae 2414 классического биовара серовара Огава - продуцент холерного

токсина и токсинкорегулируемых пилей адгезии. // Патент РФ № 2169187 от 20.06.2001г.

114. Соловьев С.А., Трохименко Е.П., Дзюблик И.В. Разработка технологии получения противоротавирусной вакцины // Материалы 3-й Всероссийской научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием «Технологии и оборудование в химической, биотехнологической и пищевой промышленности», Бийск - 2010. - 4.1. - С. 176-181.

115. Спирин A.C. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот // Биохимия - 1958. - Т.23, Вып. 5. - С. 656662.

116. Справочник технического директора, главного технолога и службы управления качеством фармацевтического предприятия 2008-2009. - М.: Издательский дом «Медицинский бизнес». - 2009. - 316 с.

117. Справочник Видаль «Лекарственные препараты в России» [электронный ресурс] // http://www.vidal.ru/poisk__preparatov/lact_534.htm (дата обращения 11.06.2011г.).

118. Стрельникова-Ааб E.H., Ливанова Л.Ф., Горяев A.A., Заднова С.П., Смирнова Н.И. Авирулентный штамм бактерий Vibrio cholerae KM 262 биовара эльтор серовара Огава - продуцент протективного Ol антигена. Патент РФ № 2425868 от 10.08.2011г.

119. Стрельникова-Ааб E.H., Ливанова Л.Ф., Горяев A.A., Челдышова Н.Б., Смирнова Н.И. Авирулентные штаммы Vibrio cholerae Ol - продуценты протективного Ol-антигена: получение и свойства // Проблемы особо опасных инф. -2010.- Вып. 106.-С. 39-42.

120. Строганов В.В. Применение мембранной технологии в изготовлении холерного токсина // Автореф. дис.....канд. биол. наук. - Саратов, 1981. -

19с.

121. Строганов В.В., Куликова В.Л., Коровкина Г.И., Космаенко О.М., Маторина H.A., Каталевский Е.Е. Применение полупроницаемых мембран производства ВНИИСС для фракционирования препарата холрогена-анатоксина // Тезисы докладов II Всесоюзной конференции по мембранным методам разделения, Владимир - 1977. - С. 453-455.

122. Строганов В.В., Космаенко О.М., Попов A.A., Никитина Г.П., Джапаридзе М.Н., Коткина Т.А. Применение метода ультрафильтрации на отечественных полупроницаемых мембранах УАМ для отделения соматического О-антигена от экзотоксина холерного вибриона // Проблемы особо опасных инф. -1978. - Вып.4. - С. 50-67.

123. Строганов В.В., Космаенко О.М., Тихонов Н.Г., Адамов А.К., Васин Ю.Г., Никитина Г.П., Маторина H.A. Экспериментальное изучение ультрафильтрационной установки для получения очищенного холерного экзотоксина // В сборнике «Профилактика особо опасных инфекций», Саратов - 1980. - С. 50-57.

124. Ткаченко Е.А, Дзагурова Т.К., Набатников П.А., Михайлов М.И. Способ получения комбинированной бивалентной, культуральной, инактивиро-ванной, концентрированной, очищенной вакцины для профилактики геморрагической лихорадки с почечным синдромом. Патент РФ № 2445117 от 20.03.2012г.

125. Ульянов А.Ю. Совершенствование производства вакцины холерной

бивалентной химической таблетированной // Автореф. дис.....канд. биол. наук.

- Саратов, 2011. - 22 с.

126. Уралева B.C., Гулида М.М. Характеристика протеазной активности штаммов и мутантов Vibrio cholerae с различными биологическими свойствами //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 1988. -№ 9. - С. 7-10.

127. Установка с модулем кассетным мембранным модулем // Паспорт УСТ.9452.004.ПС. - 2006. - ЗАО «Владисарт».

128. Фармакологический справочник [электронный ресурс] // http://phannabook.net/immunotropnye-sredstva/vakciny-syvorotki-fagi/xavriks (дата обращения 10.03.2012г.).

129. Филлиппов A.C., Николаев Н.И., Шестеренко А.Ф., Караева JI.T. Культивирование чумного микроба и холерного вибриона на агаре в аппаратах АКМ-Ш // Проблемы особо опасных инф. - 1970. - Вып. 1. - С. 158-163.

130. Черкасов А.Н., Пасечник В.А. Мембраны и сорбенты в биотехнологии.-Л.: Химия, 1991.-239 с.

131. Чеховская Г.В., Щелканова Е.Ю., Смирнова Н.И. Бескапсульные мутанты Vibrio cholerae 0139 серогруппы: получение, идентификация и использование для приготовления диагностической 0139 антисыворотки // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. - 2000. -№1. - С. 34-37.

132. Шаров А.Н., Букова Н.К., Безгин В.М., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д., Гречкина Н.Т., Шевырев Н.С., Азарова H.A. Свойства туберкулина, полученного методом ультрафильтрации // Труды ВГНКИ. - М.: Изд. ВГНКИ. - 1995. -Т.57.-С. 88-99.

133. Шевцов А.Н., Лобастов B.C., Боровской Д.В., Меновщиков В.А., Хапаев Н.Г. Патент РФ № 2340356 от 10.12.2008г.

134. Шевырев Н.С., Безгин В.М., Козлов В.Е., Ничвеева Л.Д., Солодов E.H., Шаров А.Н., Букова Н.К., Тырина B.C. Аллерген для диагностики туберкулеза и способ его получения. Патент РФ № 2045959 от 20.10.1995г.

135. Шевырев Н.С., Безгин В.М., Ничвеева Л.Д., Козлов В.Е., Солодов E.H., Козлов В.Е., Гринев A.A., Сорокина A.A., Алехин В.А., Шаров А.Н., Тырина B.C., Букова Н.К. Способ получения туберкулина. Патент РФ № 2035914 от 27.05.1995г.

136. Шепелев И.А., Волох O.A., Ерёмин С.А., Дятлов И.А. Оптимизация способа получения протективного «С»-комплекса туляремийного микроба // Проблемы особо опасных инф. - 2006. - Вып. 92. - С. 61-64.

137. Шепелев И.А., Еремин С.А., Васин Ю.Г., Волох О.А., Алёнкина Т.В., Белякова Н.И., Кузнецова Е.М., Никифоров А.К. Перспективы применения процессов ультрафильтрации для масштабированного получения основных антигенов чумного микроба и холерного вибриона // Проблемы особо опасных инф.-2011.-Вып. 109.-С. 84-87.

138. Эльберт Л.Б., Красильников И.В., Дроздов С.Г., Терлецкая Е.Н., Тимофеев А.В. Концентрированная очищенная вакцина клещевого энцефалита, изготовленная методом ультрафильтрации и хроматографии // Вопросы вирусологии - 1985. - № 1. - С. 90-93.

139. Щуковская Т.Н., Саяпина Л.В., Кутырев В.В. Вакцинопрофилакти-ка холеры: современное состояние вопроса // Эпидемиология и Вакцинопрофи-лактика - 2009. - Вып. 2(45). - С. 62-67.

140. Яговкин Э.А. Иммунохимические и биологические свойства липо-сахаридов холерного вибриона эльтор // Автореф. дис... канд. мед. наук. - Саратов, 1982.-20 с.

141. Akesson М., Hagander P. A gain-scheduling approach for control of dissolved oxygen in stirred bioreactors // Proceedings of the 14th World Congress of International Federation of Automatic Control, Beijing (China) - 1999. - P. 505-510.

142. Akesson M., Hagander P., Axelsson J.P. Probing control of fed-batch cultures: Analysis and tuning // Control Engineering Practice -2001. - №9(7). - P. 709-723.

143. Arockiasamy A., Krishnaswamy S. Purification of integral outermembrane protein OmpC, a surface antigen from Salmonella typhi for structure-function studies: a method applicable to enterobacterial major outer-membrane protein // Anal. Biochem. - 2000. - Vol. 283(1). - P. 64-70.

144. Baker E.E., Sommer H., Foster L.E., Meyer E., Meyer K.F. Studies on immunization against plague. 1. The isolation and characterization of the soluble antigen of Pasteurellapestis // J. Immunol. - 1952. - Vol. 68. - P. 131-145.

145. Barrett P., Mundt W., Kistner O., Howard M. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines // Expert. Rev. Vaccines - 2009. - Vol. 8. - P. 607-618.

146. Bik E.M., Bunschoten A.E., Gouw R.D., Mool F.R. Genesis of the now-el epidemic Vibrio cholerae 0139 strain: evidence for horizontal transfer of genes involved in polisaccaharide synthesis // The EMBO Jornal. - 1995. - Vol. 14, № 2. - P. 209-216.

147. Black R.E., Levine M.M., Clements M.L., Young C.R., Svennerholm A.M., Holmgren J. Protective efficacy in humans of killed whole-vibrio oral cholera vaccine with and without the B subunit of cholera toxin // Infect. Immun. - 1987. -Vol. 55.-P. 1116-1120.

148. Broady K.W., Rietschek E., Luderitz O. The chemical structure of the lipid A component of lipoholisacchades from Vibrio cholera // J. Biochem. - 1981. -Vol. 115.-P. 463-468.

149. Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence II // Jnfect. and Immunol. - 1971. - Vol. 7., № 5. - P. 611-618.

150. Callahan L.T., Richardson S.H. Biochemistry of Vibrio cholerae virulence III 11 Jnfect. and Immunol. - 1983. - Vol. 7., № 4. - P. 567-572.

151. Chakrabarti S.R.,Chaudhuri K., Seen K., Das J. Porin of Vibrio cholera: purification and characterization of OmpU // J. Bacteriol. - 1996. Vol. 178, № 2. - P. 524-530.

152. Chatterjee S.N., Chaudhuri K. Lipopolysaccharides of Vibrio cholera. II. Genetics of biosynthesis // Biochim. Biophys. Acta. - 2004. - Vol. 1690., № 2. - P. 93-109.

153. Cholera vaccines: WHO position paper // Weekly Epidemiological Record (WER) - 2010. - Vol. 85, № 13.-P. 117-128.

154. Cholera vaccines, a WHO position paper // Weekly Epidemiological Record (WER) - 2001.-Vol. 76, № 16.-P. 117-124.

155. Chongsa-nguen M., Chaicumpa W, Ruangkunaporn Y, Looarecsuwan S. Immunogeniticy of two formulation of oral cholera vaccines in Thai volonteers // Vaccine - 1991.-Vol. 63, № l.-P. 317-323.

156. Craig G.P. Preparation of the vascular permeability factor of Vibrio cholerae II J. Bacteriol. - 1966. - Vol. 92, № 3. - P. 793-795.

157. Dibois M., Gilíes K.A., Hamilton Y.K., Reber P.A., Smith F. Colometric method for determination of sugars and related substances // Analit. Chem. - 1956. -Vol. 28.-P. 350-356.

158. Evans D.J., Richardson S.H. In vitro production of choleragen and the vascular permeability factor by Vibrio cholerae II J. Bacteriol. - 1968. - Vol. 96, № l.-P. 126-130.

159. Finkelstein R.A. Why do we yet a suitable vaccine against cholera? // Cholera and gastrointesinale erkrankugen // Int. Symp. And 100 jahrigen Bestehens Hyg. Inst, 1992. - S. 34-35.

160. Finkelstein R.A, LosPalluto J.J. Patogénesis of experimental cholera-prepation and isolation of choleragen and choleragenoid // J. Exp. Med. - 1969. -Vol. 130, № l.-P. 185-203.

161. Finkelstein R.A, LosPalluto J.J. Production of highly purified choleragen and choleragenoid // J. Infect. Dis. -1970. - Vol. 121, Suppl. - May. - P. 63-72.

162. Finkelstein R.A. Patogénesis of experimental cholera. Biologic activities of purified choleragen A // J. Immunol. - 1966. - Vol. 96, № 3. - P. 440-449.

163. Freter R, Jones G.M. Adhesiverproperties of Vibrio cholera: nature of the in teraction with intact mucosal surfaces 11 Infect. Immun. - 1976. - Vol. 14. - P. 246-256.

164. Fuerst J.A, Perry J.W. Demonstration of lipopolisachade of sheathed flagella of Vibrio cholerae Ol by protein A-gold immunoelectron microscopy 11 J. Bacteriol. - 1988. - Vol. 170. - P. 1488-1494.

165. Galen J.E., Ketley J.M., Fasano A. Role of Vibrio cholerae neuraminidase on the function of cholera toxin // Infect. Immun. - 1992. - Vol. 60. - P. 406415.

166. Germanier R., Forer E., Varallyay S., Inderbitzin T. M. Preparation of a Purified Antigenic Cholera Toxoid // Infect. Immun. 1976. - Vol. 13. - P. 1692-1698.

167. Ghosh S., Campbel A.M. Unusal cross-reactions among antibodies to bacterial antigens: idiotipic and competitive binding analysis // FEMS Microbiol. Immunol. - 1988. - Vol. 1, № 1. - P. 3-8.

168. Guidoling A., Manning P.A. Geneties of Vibrio cholerae and its bscteri-ophages I I Microbiol. Rev. - 1987. - Vol. 51, № 2. - P. 285-298.

169. Hisatsune K., Hayashi M., Haishima Y., Kondo S. Relationship between structure and antigenicity of 01 Vibrio cholerae lipopoholisaccharide // J. Gen. Microbiol. - 1989. - Vol. 135. - P. 1901-1907.

170. Hisatsune K., Kondo S. O-antigenic lipopolisaccaride of Vibrio cholerae 0139 Bengal a new epidemic strains for recent cholera in Indian subcontinent // Biochem. And Biophys. Res. Communications. - 1993. - Vol. 196, № 3. - P. 13091316.

171. Jang H. Improved Purification Process for Cholera Toxin and its Application to the Quantification of Residual Toxin in Cholera Vaccines / H. Jang, S.K. Hyo, A.K. Jeong // J. Microbiol. Biotechnol. - 2009. - Vol. 19(1). - P. 108-112.

172. Jalajakumari M.B., Manning P.A. Nucleotide sequence of the gene, ompW, encoding a 22 kDa immunogenic outer membrane protein of Vibrio cholerae // Nucleic Acids Res. - 1990. - Vol. 18. - P. 2180.

173. Jobling M.G., Holmes R.K. Biological and biochemical characterization of variant A subunits of cholera toxin constructed by site-directed mutagenesis // J. Bacterid.- 2001. -Vol. 183, № 13.-P. 4024-4032.

174. Johnson G., Osek J., Svenerholm A.V., Holmgren F. Immune mechanism and protective antigens of Vibrio cholerae serogroup 0139 as a basis for vaccine development // Infect. Immun. - 1996. - Vol. 6. - P. 3778-3785.

175. Kabir Sh. Immunochecimal properties of the major outer membrane proteins of Vibrio cholerae II Infect. Immun. - 1983. - Vol. 39, № 1. - P. 452-455.

176. Kabir Sh, Ahmad N, Ali S.H. Neuraminidase production by Vibrio cholerae 01 and other diarheagenic bacteria // Infect. Immun. - 1984. Vol. 44, № 3 -p. 747-749.

177. Kaper J.B, Morris J.G, Levine M. Cholera // Clin. Microbiol. Rev. -1995.-Vol. 8, № l.-P. 48-86.

178. Kenne L, Lindberg E., Unger P. Structural studies of the Vibrio cholerae O-antigen // Carbohydr. Res. - 1982. - Vol. 100. - P. 341-349.

179. Kirn T.J, Laffety M.G, Sandoe C.V.P, Taylor R.K. Delineation of pilin domains required for bacterial association into microcolonies and intestinal colonization by Vibrio cholerae II Mol. Microbiol. - 2000. - Vol. 35, № 4. - P. 67-84.

180. Laemmli U.K. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4 // Nature. - 1970. - Vol. 227. - P.680-685.

181. Lang H.A, Palva E.T. The ompS gene of Vibrio cholerae a growth-phasedependent maltoporin 11 Mol. Microbiol. - 1993. - Vol. 10. - P. 891-901.

182. Manning P.A, Stroeher U.H, Morona R. Molecular basis for O-antigen biosynthesis in Vibrio cholera Ol: Ogawa-Inaba switching // Vibrio cholera and cholera: molecular to global perspectives. ASM Press. - Washington, D.C. - 1994. -P. 77-94.

183. Manning P.A, Haynes D.R. A common immunogenic Vibrio cholerae outer membrane proteins IIFEMS Microbiol. Lett. - 1984. - Vol. 24. - P. 297-302.

184. Manning P.A, Bartowsky E.J, Leavesly D.I, Hackett J.A, Heuzen-roeder M.W. Molecular cloning immune sera of a 22-kDa minor outer membrane ptotein of Vibrio cholera II Gene. - 1985. - Vol. 34, № 1. - P. 95-103.

185. Marchlewiez B.A, Mekalanos J.J. Immunologic differences among the cholera/coli family of enterotoxins // Diag. Microbiol. Infect. Dis. - 1983. - Vol. 1 -P. 129-138.

186. Mary L.de, Andersson L., Hagander P. Probing control of glucose feeding in Vibrio cholerae cultivation // Bioprocess Biosyst Eng. - 2004. - Vol. 25(4). -P. 221-228.

187. Meeks M.D., Saksena R., Ma X., Wade T.K., Taylor R.K., Kovac P., Wade W.F. Synthetic fragments of Vibrio cholera Ol Inaba O-specific polysaccaha-ride bound to a protein carrier are immunogenic in mice but not induce protective antibodies // Infect. Immun. - 2004. - Vol. 72, № 7. - P. 4090-101.

188. Mosley W.H., Woodward W.E., Aziz K.M., Rahman, A.S., Chowdhury A.K., Ahmed A., Feeley J.C. The 1968-1969 cholera vaccine field trial East. Pakistan. Effectiveness of monovalent Ogawa and Inaba vaccines and purified Inabaanti-gen, with comparative results of serological and animal protection tests // J. Infect. Dis.-1970.-Vol. 121.-P. 1-9.

189. Nakasone N., Iwanaga M. Characterization of the outermembrane proteins of Vibrio cholera expressed in vivo culture // Microbiol. Immun. - 2002. - Vol. 46, № 1,-P. 47-50.

190. Navratil M., Norberg A., Lembren L., Mandenius C.F. On-line multi-analyzer monitoring of biomass, glucose and acetate for growth rate control of a Vibrio cholerae fed-batch cultivation // J. Biotechnol. - 2005. - Vol. 115, № 1. - P. 6779.

191. Nguyen Q.T. Ultrafiltration des soluticus macromoleculares procede de fractionnement associant ultrafiltration et la. // Com complexation etat en seien-sislorraine. - 1980. - P. 195.

192. Nusrin S., Khan Y.K., Bhuiyan N.A., Ansaruzzaman M., Hossain M.A., Safa A., Khan R., Faruque S.M., Sack D.A., Hamabata T., Takeda Y., Nair G.B. Diverse CTX phages among toxigenic Vibrio cholerae Ol and 0139 strains isolated between 1994 and 2002 in area where cholera is endemic in Bangladesh // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42, № 12. - P. 5854-5856.

193. Osborn M.G. Studies on the gram-negative cell wall. I. Evidence for the role of 2-keto-3-deoxyoctonate in the lipopolysaccharide of Salmonella typhimurium // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1963. - Vol.50. - P.499-506.

194. Osek J, Lebens M, Holmgren J. Improved medium for largescale production of recombinant cholera toxin B subunit for vaccine purposes // J. Microbiol. Methods - 1995.-Vol. 24.-P. 117-123.

195. Panda A.K, Ghorpade A, Mukhopadhyay A, Talwar G.P, Garg L.C High cell density fermentation of recombinant Vibrio cholerae for production of B subunit of the Escherichia coli enterotoxin // Biotechnol. Bioeng. - 1995. - Vol. 45. -P. 245-250.

196. Pierce N.F, Kaper J.B, Mekalanos J.J, Cray V.C.I. Role of cholera toxin in enteric colonization by Vibrio cholera Ol in rabbits // Infect. Immun. - 1988. -Vol. 50.-P. 813-816.

197. Pike P, Chandler C. Patial purification and properties of somatic antigen spontaneously released from Vibrio cholerae // Infect. Immun. - 1975. - Vol. 12, № l.-P. 187-192.

198. Provesano D, Shumacher D.A, Barker D.A, Klose K.E. The virulence regulatory protein ToxR mediates enchanced bile resistance in Vibrio cholera and other pathogenic Vibrio species II Infect. Immun. - 2000. - Vol. 68, № 3. - P. 14911497.

199. Ravichandran M, Ali S.A, Rashid N.H. Vibrio cholerae strains VCUSM1 and VCUSM4, method of producing same, and vaccine derivates thereof. Patent US № 7838016 B2.-Nov. 23, 2010.

200. Redmond J.W. The 4-amino sugars presents in lipopoholisacchades of Vibrio cholerae and related vibrions // Biochem. Biophys. Acta. - 1978. - Vol. 542. -P. 346-352.

201. Richardson S.H. Factors influencing in vitroskin permeability factor production Vibrio cholera II J.Bacneriol. - 1969. - Vol. 100, № 1. - P. 27-34.

202. Riesenberg D., Guthke R. High-cell-density cultivation of microorganisms // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 1999. - Vol. 51. - P. 422-430.

203. Sanchez J., Holmgren J. Recombinant system for overexpression of cholera toxin B subunit in Vibrio cholerae as a basis for vaccine development // Proc. Natl. Acad. Sci. USA - 1989. - Vol. 86. - P. 481-485.

204. Sears C.L., Kaper J.B. Enteric bacterial toxins: mechanism of actionand linkage to intestinal secretion // Microbiol. Rev. - 1996. - Vol. 60, № 1 - P. 167-215.

205. Sengupta D.K., Sengupta T.K., Chose A.K. Major outer membrane proteins of Vibrio cholerae and their role in induction of protective immunity through inhibition of intestinal colonization // Infect. Immun. - 2000. - Vol. 60. - P. 48484855.

206. Sengupta D., Bocsman-Finkelstcin M., Finkelstein R.D. Antibody against the capsule of Vibrio cholerae 0139 protects against experimental challenge // Infect. Immun. - 1996. - Vol. 6, № 1. - P. 343-345.

207. Shimada T., Nair G.B., Deb B.C., Albert M.J., Sack R.B., Takeda Y. Outbreak of Vibrio cholerae non-Ol in India and Bangladesh // Lancet. - 1993. -Vol. 341.-P. 1347.

208. Spangler B.D. Structure and function of cholera toxin and related Escherichia coli heat-labile enterotoxin // Microbiol. Rev. - 1992. - Vol. 56. - P. 622-647.

209. Sperandio V., Giron J.A., Silveria W.D., Kaper J.B. The OmpU membrane protein a potential adherence factor of Vibrio cholerae II Infect. Immun. -1995.-Vol. 63, № 11.-P. 114-118.

210. Sperandio V., Bailey C., Giron J.A., DiRita V.I., Silveria W.D., Vettore A.L., Kaper J.B. Cloning and characterization of the gene enconding the OmpU outer membrane protein of Vibrio cholerae II Infect. Immun. - 1996. - Vol. 64, № 12. - P. 5406-5409.

211. Spira W.M., Fedorka-Gray P.J. Production of cholerae toxin-like toxin by vibriomimicus and non-Ol Vibrio cholera: Batch culture conditions for optimum

yields and isolation of hypertoxigenic lincomycin resistant mutans // Infect. Immun. -1983. - Vol. 42, №> 2. - P. 501-509.

212. Spira W.M, Fedorka-Gray P.J. Enterotoin production by Vibrio cholerae and Vibrio mimicus grown in continuous culture wich microbial cell recycle // Appl. and Environ Microbiol. - 1983. - Vol. 46, Sept. - P. 704-709.

213. Sun D, Mekalanos J.J, Taylor R.K. Antibodies directed against the tox-in-coregulated pilus isolated from Vibrio cholerae provide protrection in the infant mouse experemintal cholera model // J. Infect. Dis. - 1990. - Vol. 161. - P. 12311236.

214. Suzuki H, Kishimoto M, Kamoshita T, Omasa T, Katakura Y, Suga K. On-line control of feeding of medium components to attain high cell density // Bi-oprocess. Eng. - 2000. - Vol. 22. - P. 433-440.

215. Takagi M, Barbosa R. Purification of capsular polysaccharide produced by Haemophilus influenzae type b through a simple, efficient and suitable method for scale-up // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2008. - Vol. 35. - P. 1217-1222.

216. Taylor R.K, Miller V.I, Furlong D.B, Mekalanos J.J. Use of phoA gene fusion to identify a pilus colonization factor coordinately regulated with cholera toxin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1987. - Vol. 84, № 9. - P. 2833-2837.

217. Vise A, Branderburg K, Ulmer A, Seudel U, Muller-Loennies S. The dual role of lipopoholisacchade as effector and farget molecules // J. Biol. Chem. -1999.-Vol. 380.-P. 767-784.

218. Vital M, Hammes F, Egli T. Growth of Vibrio cholerae Ol Ogawa El-tor in freshwater//Microbiology - 2007.-Vol.153.-P. 1993-2001.

219. Vijayashree S, Nayak N, Panigrahi D, Sehgal S. Role of cell surface antigens of Vibrio cholera Ol and non Ol serovars in intestinal adhesion // Indian. J. Pathol. Microbiol. - 2003. - Vol. 46, № 2. - P. 259-260.

220. Waldor M.K, Mekalanos J.J. Emergence of a new cholera pandemic: molecular analysis of virulence determinants in Vibrio cholerae 0139 and development of a live vaccine prototype // J. Infect. Dis. - 1994. - Vol. 170. - P. 278-283.

221. Walle M van de, Fass R, Shiloach J Production of cholera toxin subunit B by a mutant strain of Vibrio cholera II Appl. Microbiol. Biotechnol. -1990. Vol. -33.-P. 389-394.

222. Winner L., Mark J., Weltzin R. New model for analysis of mucosal immunity: intestinal secretion of specific monoclonal immunoglobulin A from hibrido-ma protects against Vibrio cholera infection // Infect. Immun. - 1991. - Vol. 5, № 3. -P. 9777-982.

223. Young D.V., Broatbent D.A. Effect of extracellular protease production sensitivity of Vibrio cholerae II Trans. R. Sos. Trop. Med. Hyg. - 1985. - Vol. 79, № 5.-P. 687-689.