Получение препарата грамин, его свойства и применение тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.04, кандидат биологических наук Лагунова, Ольга Николаевна

• Лагунова, Ольга Николаевна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Лагунова, Ольга Николаевна

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Значение показателей неспецифической резистентности организма животных

1.2. Препараты для коррекции неспецифической резистентности организма животных

1.3. Научные и методические подходы к изучению фармакологических и токсикологических свойств препаратов, повышающих неспецифическую резистентность организма

2 Собственные исследования

2.1. Материалы и методы исследований

2.2. Характеристика физико-химических свойств грамина

2.3. Фармакотоксикологические свойства препарата грамин

2.3.1. Острая токсичность

2.3.2. Хроническая токсичность

2.3.3. Эмбриотропное и тератогенное действие

2.3.4. Мутагенная активность

2.3.5. Влияние грамина на бактерицидную активность

2.3.6. Влияние грамина на фагоцитарную активность лейкоцитов

2.3.7. Влияние грамина на лизоцимную активность

2.3.8. Влияние грамина на систему комплемента

2.3.9. Влияние грамина на выработку антителообразую-щих клеток

2.3.10 Влияние грамина на кооперацию Т- и В- лимфоцитов

2.3.11. Влияние грамина на реакцию гиперчувствитель- 100 ности замедленного типа

2.3.12. Влияние грамина на динамику массы тела белых мышей и содержание общего белка и его фракций в их крови

2.3.13. Влияние грамина на гематологические показатели

2.4. Протективные свойства грамина

2.5. Лечебно-профилактическая эффективность грамина

2.5.1. Профилактическая активность грамина при респираторных и желудочно-кишечных заболеваниях телят

2.5.2. Эффективность грамина в сочетании с антибиотиками при респираторных, желудочно-кишечных заболеваниях и смешанных инфекциях телят

Обсуждение

Выводы

Практические предложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение препарата грамин, его свойства и применение»

Актуальность темы. В перечне заболеваний сельскохозяйственных животных особое место занимают патологии, причиной которых является снижение естественной резистентности организма животных.

В связи с этим большое значение приобретает разработка и применение профилактических и лечебных мероприятий с применением средств, повышающих неспецифическую резистентность организма. Для решения этой проблемы в настоящее время применяется ряд препаратов различной природы:

- эндогенные регуляторные пептиды тимуса (тимостимулин, Т - и В-активин, тимозин, тималин и др. (Печникова Г.Н., Воронин Е.С., 1989; Еро-шенко Т.М. и др., 1991; Земсков В.М., 1991; Девримов Д.А., Дадыбаев Ж.М., 1991)) и костного мозга (миелопид (Кирпиченок В.А., 1989)), тканевые препараты (Калашник И. А., 1979);

- синтетические препараты (тимоген, тимопептид, левамизол, инозин, диуцифол, ликопид, леакадин, кемантан (Смирнов B.C. и др., 1992; Дейгин В., 1992; Лазарева Д.Н, Алёхин Е.К., 1985));

- препараты группы биокоординационных соединений (метионат меди, метионат кобальта, цикол и др. (Дорожкин В.И., 1994, 1996, 1997));

- препараты растительного происхождения (экдистен, экстракты алоэ, женьшеня, элеутерококка, левзеи, и др. (Кириллов О.И., 1966; Устинов Д.А., 1976; Анохин Б.М., 1980; Булатов А.А., 1981));

- препараты микробного происхождения (пирогенал, продигиозан, ри-бомунил, биостин и др. (Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995)).

Несмотря на довольно широкий имеющийся арсенал препаратов, повышающих общую неспецифическую резистентность организма, всё ещё остаётся актуальным вопрос поиска экологичных источников биологически активных веществ и получения новых нетоксичных препаратов. Для успешного проведения профилактических и лечебных мероприятий необходимо проводить исследования по разработке таких средств, которые бы повышали естественную устойчивость через создание у различных видов сельскохозяйственных животных полноценного иммунобиологического статуса (Коромы-слов Г.Ф. и др., 1983). Практически любое вещество, оказывающее какое-то воздействие на организм, влияет и на иммунную систему, вызывая комплекс неспецифических воздействий, направленных на изменение общего состояния организма (Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995).

В качестве неспецифических стимуляторов резистентности в настоящее время испытываются вещества различной природы. Новым подходом к решению проблемы повышения неспецифической резистентности организма является создание лекарственных средств на основе микроорганизмов. Использование их перорально и инъекционно совместно с основным лечебным препаратом приводит к оптимальным результатам. Внимание ученых сосредоточено на глубоком и всестороннем исследовании свойств новых препаратов этой группы, их эффективности и безвредности как для самого животного, так и для его потомства (Ракова Т.Н., 1989).

Исходя из вышеизложенного, следует, что перспективным решением проблемы повышения неспецифической устойчивости организма является применение фармакологических средств, полученных из естественных сырьевых источников.

Цели и задачи исследования. Основная цель наших исследований состояла в разработке способа получения препарата грамин, оптимизации технологии его изготовления, разработке методов стандартизации и контроля, а также в выявлении его общетоксических свойств, возможных отдалённых последствий его применения, изучении фармакологических свойств и профилактической эффективности.

В связи с этим необходимо было решить следующие задачи: • определить условия и сроки культивирования гриба Drechslera graminea для оптимизации технологии получения препарата грамин;

• изучить физико-химический состав препарата;

• разработать методы стандартизации и контроля препарата грамин;

• исследовать фармакотоксикологические свойства и профилактическую эффективность грамина;

• разработать нормативную документацию на грамин.

Научная новизна работы состоит в том, что для повышения неспецифической резистентности рекомендован новый препарат грамин. Научно обоснована и экспериментально подтверждена оптимальная технология его получения, разработаны методы стандартизации и контроля препарата. Исследовано фармако-токсикологическое действие грамина Установлено, что грамин является малотоксичным препаратом, не вызывает отдалённых последствий, определена его фармакодинамика, проявляющаяся в способности препарата оптимизировать показатели неспецифической резистентности организма животных, а именно, бактерицидной, комплементарной и лизоцим-ной активности сыворотки крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, увеличивать количество антителообразующих клеток,усиливать кооперациюТ-и В- лимфоцитов, а также не влиять на величину гиперчувствительности замедленного типа. Механизм действия обусловлен стимулирующим влиянием грамина на факторы неспецифической резистентности организма животных. Научная новизна защищена патентом № 2100028 на изобретение РФ "Способ поолучения препарата иммуномодулятора".

Практическая значимость работы. Для профилактики респираторных и желудочно-кишечных заболеваний молодняка крупного рогатого скота в качестве средства, повышающего неспецифическую резистентность, разработан препарат грамин. Препарат производится на основании технических условий, утверждённых в установленном порядке, используется в соответствии с наставлением по его применению.

Апробация результатов исследований: Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на заседаниях учёного совета и методической комиссии ГУ ВГНКИ (1995 - 1999 гг.), на заседаниях Ветфармбиосовета ДВ МСХ РФ (1995, 2000 гг.), на методической комиссии отдела животноводства ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока (1996 - 2000 гг.), Всероссицской научно-практической конференции учёных и специалистов АПК "80 лет сельскохозяйственному образованию и науке на Урале: итоги и перспективы", Пермь (1998), конференции "Концепция научного обеспечения ветеринарной медицины Северо-Восточного региона Нечерноземной зоны РФ" Нижний Новгород (1999 г), на межлабораторном совещании ГУ ВГНКИ (2001 г), научной конференции, посвященной 70-летию Вятской ГСХА "Аграрная наука Северо-Востока Европейской части России на рубеже тысячелетий - состояние и перспективы", (Киров, 2000), расширенном заседании методической комиссии по животноводству ГУ ЗНИИСХ Северо-Востока, (2000 г), научно-практической конференции "Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины животных", г. Киров, (2001 г).

Основные положения, выносимые на защиту:

• результаты исследования оптимальных сроков и условий культивирования гриба Drechslera graminea для получения препарата грамин и методов его стандартизации и контроля;

• результаты исследования фармако-токсикологических свойств грамина;

• профилактическая эффективность грамина при респираторных, желудочно-кишечных заболеваниях молодняка крупного рогатого скота.

Публикация результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Обзор литературы

1.1. Значение факторов неспецифической резистентности организма животных

Резистентность относится к числу важнейших характеристик организма и является показателем его устойчивости к различным воздействиям. Естественную защиту организма обеспечивают: наружные кожные покровы (кожа, слизистые оболочки), клеточные (фагоцитирующие клетки, клетки естественной цитотоксичности) и гуморальные факторы. В организме животного существуют две системы защиты от инфекций: принято разделять неспецифические и специфические формы защиты организма при дестабилизирующем воздействии окружающей среды. Неспецифическая представлена постоянно существующими в готовом виде клетками или молекулами с широким противомикробным и противовирусным спектром действия. Это бактерицидные субстанции тканей, гидролитические ферменты, лизоцим, бета-лизины, пропер дин, интерфероны, лимфокины, которые называют факторами естественной резистентности (Кузник Б.И. и др., 1989). Неспецифические реакции - реакции защитных функций по отношению как к биологическим, так и другим факторам.

К специфическим реакциям относят процессы, вызываемые антигенными воздействиями, которые приводят к образованию специфических антител или сенсибилизированных лимфоцитов к данному антигену. Вторая система, характеризующаяся высокой специфичностью и связанная с предварительным антигенным воздействием на организм, получила название иммунной системы. Клетки, входящие в её структуру, постоянно циркулируют в различных органах и тканях (Утешев Б.С., Коростылёв С.А.,1990 г.).

В условиях целостного организма неспецифические и специфические формы защитных реакций протекают взаимосвязано (Яковлев Г.М., Новиков B.C., Хавинсон В.Х., 1990). Факторы естественной резистентности и иммунологической реактивности самостоятельно или в сочетании участвуют в противомикробной и противовирусной защите организма (Емельяненко П.А., 1987; Кузник Б.И., Васильев Н.В., 1989; Najjar V.A. et al., 1981; Schroder R., et al., 1988).

Естественная (неспецифическая) резистентность организма обусловлена состоянием защитных механизмов неспецифического характера: анатомо-морфологических, физиологических и специальных (клеточно-гуморальных).

Анатомо-морфологические представлены комплексом кожно-слизистых покровов и предназначены для предупреждения свободного доступа микроорганизмов и других патогенов. Неповреждённый кожный покров здорового животного является хорошим защитным барьером. Кожа животных постоянно находится в контакте с окружающей средой и многочисленными микроорганизмами. У телят на каждом квадратном сантиметре загрязнённой кожи содержатся миллионы микроорганизмов, среди которых встречаются как сапрофитные, так и патогенные (Никольский В.В., 1968). Наряду с механической функцией неповреждённые покровы обладают выраженными бактерицидными свойствами, на которые оказывают существенное влияние общее состояние устойчивости организма.

Кроме вышеназванной системы факторами неспецифической защиты организма являются системы микро- и макрофагов, комплемента, интерферона, лизоцима, а специфической защиты - Т- и В- системы иммунитета. Центральным звеном неспецифической защиты организма считают фагоцитарную активность микро- (гранулоциты: нейтрофилы и эозинофилы) и макрофагов (мононуклеары, в основном моноциты и их производные). Это связано с полипотентностью функций полиморфно-ядерных лейкоцитов (ПМЯЛ) и мононуклеарной фагоцитирующей системой (МФС). Эти системы не только осуществляют фагоцитоз, но и являются основными производителями лейкинов, некоторых фракций комплемента, лизоцима и интерферона, участвуют в выработке антител.

Функции нейтрофилов по охране организма от чужеродных воздействий включают хемотаксис, фагоцитоз, уничтожение микробов и переваривание поглощённых веществ.

Основной механизм фагоцитоза нейтрофильных гранулоцитов крови сводится к активации мембранных оксидаз, которые катализируют перенос электронов с восстановленной формы НАДФ-Н 2 на молекулярный кислород, что сопровождается увеличением потребления кислорода, усилением активности гликолиза и гликогенолиза (Nakamura М. et. al., 1977). Кроме того, метаболические процессы включают усиление синтеза перекиси водорода, понижением рН. Хемотаксис, опсонизация, переваривающая функция микрофагов опосредуется хемотаксическими факторами и опсонинами - иммуноглобулинами, комплементом и их фрагментами. Макрофаги, кроме того, определяют неспецифическую фазу клеточного иммунитета, не опосредованную гуморальными факторами. Утилизируя антиген, они не только очищают организм от чужеродного материала, но и переводят его в формы, необходимые для индукции специфического иммунного ответа. Кооперируясь с Т-лимфоцитами, макрофаги участвуют в осуществлении ими функции клеточного иммунитета и активируют вспомогательную функцию при запуске В- лимфоцитов на выработку специфических антител. Т- лимфоциты, и особенно иммуноглобулины, становятся, в свою очередь, активаторами фагоцитоза.

К числу гуморальных систем в первую очередь относят лизоцим, комплемент и пропердин. Общее свойство гуморальных механизмов защиты -неспецифический характер действия против широкого спектра повреждающих агентов инфекционной природы.

По данным В.Г. Петровской и О.П. Марко (1976), изменение микрофлоры в большинстве случаев вторично, т.е. это следствие снижения общей резистентности организма. Наблюдаемое в последние годы нарастание удельного веса заболеваний, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, являющимися представителями нормальной микрофлоры, связано с нарушениями сложившегося в эволюции баланса между организмом и его микрофлорой, с одной стороны и нарушениями равновесия внутри микробных ассоциаций - с другой стороны.

Из физиологических механизмов, обладающих неспецифической защитной направленностью, выделяется температурная реакция организма. Тепловое инактивирование адаптированных к нормальной температуре тела животного патогенных микроорганизмов и продуктов их жизнедеятельности, одновременно активизирует клеточные и гуморальные факторы резистентности макроорганизма.

Клеточные факторы включают фагоциты и клетки естественной цито-токсичности. Фагоцитирующие клетки (моноциты, макрофаги, полиморф-ноядерные лейкоциты) проявляют активность во всех тканях, органах, полостях, могут выходить на поверхность кожи, слизистых оболочек и там выполнять защитную функцию.

Клеточная естественная цитотоксичность обеспечивает элиминацию из организма генетически чужеродных клеток и осуществляется естественными киллерами (ЕК) и некоторыми субпопуляциями моноцитов, макрофагов, ней-трофилов.

Гуморальные факторы естественной резистентности оказывают защитное действие как во внутренней среде организма (система комплемента, неспецифические глобулины, интерфероны, трансферрин, лактоферрин, лим-фокины, гормоны тимуса, соляная, молочная и желчные кислоты), так и на поверхности кожи и слизистых оболочек (лизоцим, жирные кислоты, различные секреты) (Пастер Е.У. и др., 1989).

Одним из основных факторов резистентности является неспецифический клеточный механизм защиты организма - это система лейкоцитов. Впервые антимикробному действию лейкоцитов дал правильное истолкование И.И. Мечников. Его заслуга ещё и в том, что он свёл явление фагоцитоза к общим биологическим законам, которые едины для всех форм организмов.

Лейкоциты, главным образом гранулоциты и клетки мононуклеарной фагоцитирующей системы (МФС) поглощают и обезвреживают любую чужеродную субстанцию, попавшую в организм. Система фагоцитоза объединяет широкую популяцию клеток: свободно циркулирующие мононуклеар-ные макрофаги, тканевые макрофаги лимфоидных органов и гистоциты соединительной ткани. Все способные к фагоцитозу клетки можно разделить на две категории: «профессиональные», обладающие рецепторами к фрагментам иммуноглобулинов и компоненту комплемента (мононуклеарные фагоциты и полиморфно-нуклеарные лейкоциты) и «непрофессиональные», лишённые специфических рецепторов к антителам и комплементу (эпителиальные клетки, фибробласты, звёздчатые ретикулоэндотелиоциты и др.). Первые, благодаря рецепторам, могут взаимодействовать с иммунными комплексами антиген-антитело-комплемент, т.е. они не только удаляют чужеродные для организма субстанции, но и предоставляют лимфоцитам молекулы антигенов, стимулируя у последних специфический иммунный ответ. В этом заключается кооперация макрофагов с Т- и В-лимфоцитами. Процесс борьбы с чужеродными телами у циркулирующих полиморфнонуклеарных лейкоцитов и тканевых макрофагов проходит в несколько этапов: хемотаксис, опсониза-ция, захват и образование фагосом и, наконец, утилизация захваченных частиц (Печникова Г.Н., 1989; Колабская Л.С. и др., 1980).

Бактерицидная активность фагоцитов зависит от степени опсонизации микробного агента. Опсонины превращают бактерии в доступный материал для фагоцитоза. Наиболее важными сывороточными опсонинами считают систему комплемента и иммуноглобулины. Опсонины на бактериальной поверхности создают как бы молекулярные мостики между бактерией и фагоцитом. Микробная клетка с фиксированными на ней антителами и комплементом прилипает к лейкоциту и удерживается им с помощью рецепторов. Однако связывание с объектом фагоцитоза ещё не гарантирует опсоническо-го эффекта. Например, опсоническую функцию в системе комплемента выполняет один компонент - С ЗЬ, хотя на объекте фагоцитоза фиксируются и другие факторы комплемента (Menzel J. et al., 1978). Поглощение бактерий коррелирует с количеством связанного С 3, подавляется при его истощении и может быть заблокировано при помощи анти-С 3-антител (Stossel T.D. , 1975). Врождённый дефицит по С 3 сопровождается резким снижением антимикробной резистентности и ослаблением опсонических свойств сыворотки (Ehlenberger A.G., Nussenzweig V., 1977).

Из всех типов иммуноглобулинов хорошо опсонизируют только IgG (Christie К.Е. et al, 1976). Специфическая рецепция фагоцитоза не исключает иных форм контакта полинуклеаров крови с объектом поглощения. В опсонических реакциях способны участвовать различные компоненты плазмы, не связанные с иммуноглобулинами и комплементом. В их числе псевдо-, а- и (3-эуглобулины (Адо А.Д., 1961), С-реактивный белок (Ganrot P.O., Kindmark С.-О., 1969), фракции а-1- и а-2-глобулинов (Palisa V., Kxigar V., 1977). Возможно, что а-2-глобулины и С-реактивный белок, сорбируясь на поверхности объектов фагоцитоза, повышают их гидрофобность, улучшают физический контакт с плазматической мембраной фагоцита (Van Oss C.J. et al, 1974; Ma-янский A.H., 1983),

Бактерицидное действие фагоцитирующих клеток определяется системами ферментной и не ферментной природы, активность которых может быть обусловлена зависимыми и независимыми от кислорода механизмами (KlebanoffS.J., 1972; 1975).

К кислородзависимым факторам принадлежит миелопероксидаза, кислородные радикалы - синглетный кислород ("О2), супероксидный анион (О2" ), гидроксильный радикал (ОН "), пероксид водорода (Н2 02), галогены (Jonston R.B. et al, 1978). Кислороднезависимые системы бактериоцидности -лизоцим, трансферрин, лактоферрин, катионные белки, молочная кислота.

Главный кислородзависимый фактор бактерицидности ПМЯЛ - миелопероксидаза (у макрофагов отсутствует). В основе механизма бактерицидного действия миелопероксидазы лежит процесс галогенизации белков бактерий, который осуществляется только в присутствии перекиси водорода (Klebanoff S.J., Hamon С.В., 1972). Биологические оксиданты ("02> 02~, ОН", Н2О2) обеспечивают бактерицидное действие всех фагоцитирующих клеток (ПМЯЛ, моноцитов, макрофагов) (Алмазов В.А. и др., 1979). Усиленная продукция биооксидантов - следствие индуцированного контактом фагоцита с объектом фагоцитоза метаболического взрыва, в процессе которого активируются мембранные оксидазы, катализирующие перенос с НАДФН или НАДН на кислород, и стимулируется окисление глюкозы в гексозомонофос-фатном шунте (Леонтович В.А., 1975).

Кислороднезависимыми факторами, ответственными за бактерицидную активность фагоцитирующих клеток в анаэробных условиях, являются лизоцим, синтезирующийся ПМЯЛ, моноцитами и макрофагами, и неферментные катионные белки, обнаруженные только у ПМЯЛ. Принцип действия лизоцима заключается в гидролизе клеточной стенки бактерий. Катионные белки, адсорбируясь на поверхности бактерий, вступают в электростатическое взаимодействие с их анионными компонентами, что приводит к нарушению структуры и функции мембран и гибели бактериальной клетки. В ряде случаев ПМЯЛ выделяют катионные белки и лизосомные ферменты в окружающую среду и оказывают бактерицидное действие на микроорганизмы, осуществляя так называемый внеклеточный фагоцитоз (Zeya H.I., Spitznagel J.K., 1966).

Фагоцитированные микробы под влиянием бактерицидных систем в большинстве случаев погибают внутри фагоцита. Такой процесс, сопровождающийся гибелью бактерий, называется завершённым фагоцитозом. По степени завершённости фагоцитоза оценивают полноценность резистентности организма (Bretz U., Baggiolini М., 1974).

Известно, что фагоцитоз нейтрофильных гранулоцитов крови сопровождается повышенным потреблением 02 (Nakamura М. et al, 1977). Увеличивается интенсивность гликогенолиза, поскольку гликоген является основным субстратом для осуществления фагоцитоза (Stoernholm R.L., Manak R.C., 1970). Одновременно с усилением активности гликолиза и гликогенолиза, повышается интенсивность гексозомонофосфатного пути (Tsan M.F., Mcintyre Р.А., 1974).

Естественная цитотоксичность клеток (ЕЦК) - самая древняя в филогенетическом отношении система защиты организма от носителей чужеродной генетической информации. Основными эффекторными клетками ЕКЦ являются естественные киллеры (ЕК), а также макрофаги и моноциты. ЕК -это клетки, обладающие спонтанной цитотоксичностью против различных клеток-мишеней без предварительной сенсибилизации. Многие авторы считают их автономной клеточной системой, обеспечивающей поддержание го-меостаза в неиммунном организме. Образуются ЕК в костном мозге, локализуются в крови, лимфоузлах, селезёнке, эпителии тонкого кишечника, изредка в тимусе. Это - тимуснезависимая популяция клеток.

Для осуществления своей функциональной активности ЕК должны реагировать с различными антигенными детерминантами, локализованными на клетках-мишенях и возникающими в результате внедрения вирусов в клетку, взаимодействия клеток с бактериями или продуктами их жизнедеятельности, воздействия физических или химических факторов; ЕК с маркёрами Thy", Ja", Jg", асиалло GM-1+ активны в отношении микробов и выполняют определённую регуляторную функцию, лизируя некоторые популяции лимфоцитов.

При взаимодействии ЕК с клетками-мишенями различают три стадии -распознавание, контакт и лизис клетки-мишени. Эффекторная клетка после лизиса клетки-мишени остаётся жизнеспособной и активной.

Дифференцировка, созревание и функциональная активность ЕК регулируется макрофагами, моноцитами, иммунокомпетентными клетками, продуцируемыми или медиаторами или другими биологически активными веществами - интерферонами, интерлейкинами, гормонами тимуса; ЕК способны синтезировать интерфероны а, (3 и у и таким образом осуществлять саморегуляцию.

Количество и функциональная активность ЕК изменяется в зависимости от состояния организма, что имеет важное значение для эффективности естественных факторов резистентности.

Совместно с клеточными реакциями в процессе эволюции у животных и человека определился ряд коллоидально-растворимых веществ, осуществляющих гуморальную функцию первичной защиты организма. Перечень гуморальных факторов ещё до конца не определён, но наиболее изученными среди них являются лизоцим, комплемент, лейкины, (3-лизины, пропердин, интерферон и естественные антитела.

Наряду с классическими, подробно изученными самим И.И. Мечниковым функциями миграции, хемотаксиса, эндоцитоза и внутриклеточного переваривания, в последние годы исследуется секреторная функция мононук-леарных фагоцитов (Фрейдлин И.С., 1995).

К секреторным (гуморальным) агентам относятся: лейкины (Зильбер JI.A., 1958), некоторые фракции комплемента (Olitzki A.L., Gershon Z., 1967), лизоцим (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974) и интерферон (Соловьёв В.Д., Бектемиров Т.А., 1979; 1981; Смородинцев А.А., 1978). Кроме того, они участвуют в выработке антител (Истаманова Т.С., 1963).

Система комплемента включает более 20 гетерогенных белков, составляющих около 10% глобулиновой фракции сыворотки крови и находится в неактивной форме в виде отдельных компонентов С1-С9, а также регулирующих белков.

Функциональная система комплемента участвует в раде ключевых го-меостатических реакций, в том числе в цитолизе микробных и опухолевых клеток, медиации воспаления, стимуляции фагоцитоза, вируснейтрализую-щем действии, индукции иммунного ответа (Резникова JI.C., 1967; Ченчикова Э.П., 1978).

При воздействии различных факторов комплемент активируется классическим либо альтернативным путём. Классический механизм активации комплемента ведёт к образованию комплекса «антиген-антитело». При этом изменяется структура Fc-фрагмента, который приобретает способность реагировать с компонентом С1, обладающим энзиматическим свойством. Далее развивается каскадная ферментативная реакция, в результате чего цитолити-ческое действие реализуется через формирование мембраноактивного комплекса (С5; С6; С7; С8; С9), расширяющего клеточные поры и ведущего тем самым клетку к осмотическому шоку (Hadding U. et al., 1974; Васильев Н.В., Коляда Т.Н., 1985).

При альтернативном пути активация компонента СЗ происходит через систему пропердина. Индукция этого механизма производится эндотоксинами, естественными полисахаридами, липополисахаридами клеточной стенки бактерий. Биологические функции комплемента довольно широкие; он, помимо участия в создании прочного специфического иммунитета, играет роль в усилении неспецифических форм защиты.

Продукты активации комплемента индуцируют лизис чужеродных клеток, хемотаксис фагоцитов, усиливают поглотительную и бактерицидную активность фагоцитов, повышают проницаемость сосудов, способствуют освобождению из клеток серотонина и гистамина.

Активация комплемента в индуктивную фазу иммуногенеза имеет существенное значение для экстренного повышения резистентности через оп-соническое, противовоспалительное и лизирующее действие. О роли системы комплемента в клеточной кооперации свидетельствует наличие рецепторов СЗ на микро- и макрофагах, Т- и В-лимфоцитах (Галактионов В.Г., 1975).

Основным фактором неспецифических форм защиты организма являются лимфоциты, осуществляющие связь и взаимодействие всех органов иммунной системы (тимуса, костного мозга, лимфатических узлов, миндалин, селезёнки, крови). Часть лимфоцитов, имеющих костномозговое происхождение, под влиянием тимуса приобретает способность участвовать в реакциях клеточного иммунитета (Davies E.G. et al., 1983). Другая часть костномозговых лимфоцитов (тимуснезависимые) участвует в реакциях гуморального иммунитета. Выработка тимусзависимых (Т-лимфоцитов) и бурсзависимых (В-лимфоцитов) клеток, выполняющих различные функции в процессах реализации клеточного и гуморального иммунного ответа, установлена рядом авторов (Parrott D.M.V. et al., 1966; Roitt J.M. et al., 1969; Raff M.C. et al., 1971).

Среди Т-лимфоцитов различают три основные субпопуляции: Т-эффекторы, Т-хелперы, Т-супрессоры (Miller J.F.A.P., 1968; Segal S. et al., 1972; Marrack P. et al., 1974). В последние годы появились сведения, что жёстких границ между субпопуляциями нет (Константинова И. В., 1988).

Т-хелперы кооперируются с В-лимфоцитами в продукции антител к тимусзависимым антигенам. Т-супрессоры блокируют антителообразование В-лимфоцитами. Т-эффекторы являются основными клетками, осуществляющими опосредованный Т-лимфоцитами иммунитет.

Т- и В-лимфоциты несут на своей поверхности маркёры-антигены, молекулы иммуноглобулинов, Fc и СЗ рецепторы, которые позволяют их идентифицировать (Манько В.М., 1976).

Главный антиген, характерный для всех Т-лимфоцитов, получил название Thy-1-антигена (Reif А.Е., Allen J.M.V., 1964). Установлено, что в тимусе мыши содержится почти 100% Т-лимфоцитов, в грудном протоке 85%, в крови - 70%, в лимфатических узлах - 65%, в селезёнке -35%, в пейеровых бляшках - 30%, а в костном мозге их практически нет (Raff М.С., 1971). В-лимфоциты, включаясь в реакции иммунной системы после контакта с антигеном, пролиферируют и дифференцируются в плазматические клетки, которые производят иммуноглобулины пяти классов: М, G, A, D и Е. Иммуноглобулины являются эффекторами гуморального иммунитета. Содержание в сыворотке крови иммуноглобулинов: IgG -70-80%, IgA - 10-15%, IgM - 5-10%,

IgD и IgE -около 0,2%. Биологической функцией иммуноглобулинов является специфическая реакция с антигеном, направленная на его элиминацию.

На наличие антибактериальных веществ в различных средах организма указывал ещё в 1887 г Н.Ф. Гамалея В 1909 г. П. Лещенков обнаружил, что белок куриного яйца способен не только задерживать рост бактерий, но и убивать их. Флеминг и Алисон выделили это вещество в 1922 г. и назвали его лизоцимом.

Лизоцим - основной белок, содержащийся во всех биологических жидкостях (сыворотке крови, слюне, слезах, слизях, молоке), в тканях, но основным местом его локализации являются лизоцимы фагоцитирующих клеток -ПМЯЛ и макрофаги (Герберт У.Д., 1974; Kokoshis P.L. et al., 1979; Кашкин К.П., 1984). Активность лизоцима изменяется под действием эндогенных и экзогенных факторов, что позволяет отнести его к системе неспецифической резистентности организма (Моноенков А.М ,1961; Митюшников В.М., 1970). Лизоцим в неспецифических иммунологических реакциях выступает как фактор невосприимчивости организма к инфекции, и поэтому показатель его активности может быть использован доя оценки неспецифической резистентности организма животных (Аствацатуров К.Р., 1953; Носков Н.М., 1963; Супоницкий В.М., 1965; Никольский В.В., 1968; Мутовин В.И. и др., 1973; Бухарин О.В. и др., 1974; Fizard I.R., 1977; Пракс Я.О. и др.,1982).

Помимо рассмотренных показателей к факторам неспецифической резистентности относят пропердин, бета-лизины, лейкины, нормальные антитела.

В интегральной системе бактерицидной активности сыворотки крови бета-лизины и лейкины проявляют избирательное действие. Первые нейтрализуют грамположительные спорообразующие бактерии, вторые - грамотри-цательные микробы. Бета - лизины являются гормоноподобными мембрано-активными термостабильными полипептидами (Шляхов Н.Г., 1977).

В неспецифической защите организма большое значение имеет про-пердиновая система. По данным L. Pillimer (1956), пропердин представляет собой белок, бактерицидные свойства которого проявляются в присутствии комплемента и ионов Mg.

Приведённые литературные данные свидетельствуют, что как фагоцитоз, так и бактерицидная активность сыворотки крови являются показателями общего состояния организма, а поэтому, как отмечают JI.A. Зильбер (1958), А.Д. Адо (1961), L. Pillimer et al.(1956), могут быть использованы для оценки неспецифической резистентности организма животных и человека. Практически во всех клетках, тканях и жидкостях организма имеются вещества, способные убивать или задерживать развитие микроорганизмов. При различных патологиях и на разных стадиях развития болезни подключаются наиболее рациональные системы защиты организма. Создаваемая при этом устойчивость (резистентность) является неспецифической, так как проявляется к различным ксеногенным агентам независимо от их природы и свойств.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная фармакология с токсикологией», Лагунова, Ольга Николаевна

выводы

1. Разработан способ получения препарата грамин из Drechslera graminea, предусматривающий инокуляцию нетонущего материала мицелием гриба и выращивание инокулята на жидкой питательной среде при температуре 26,6 °С в течение 35 суток, последующую фильтрацию и стерилизацию культуральной жидкости.

2. Установлено, что грамин содержит фосфор -ОД %, калий - 0,41 %, кальций - 0,34%, жирные кислоты - 12,4 %, сахара - 46,0 %, общий азот 26,0 %, в том числе аминокислот- 2,37 %, из них аминокислот незаменимых - 43,5%.

3. Грамин является малотоксичным препаратом. ЛД50 для белых мышей составляет 11733,4 мг/кг, для эмбрионов кур ЛД50 - 1120,0 мг на эмбрион. Грамин обладает слабовыраженными кумулятивными свойствами. Коэффициент кумуляции равен 7,4. Внутримышечное введение грамина белым мышам в течение 30 дней не влияет на общее состояние животных, картину крови, не вызывает патологоанатомических изменений в органах и тканях.

4. Определено, что грамин при введении самкам белых мышей не увеличивает эмбриональной смертности, не вызывает врождённых пороков развития и не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие мышат. Грамин при введении мышам однократно и трёхкратно не оказывает повреждающего действия на хромосомы, следовательно, не обладает мутагенным эффектом.

5. Выявлено, что внутримышечное введение грамина белым мышам повышает показатели неспецифической резистентности - фагоцитарную активность лейкоцитов, лизоцимную, бактериальную, комплементарную активность сыворотки крови.

6. Показано, что внутримышечное введение грамина белым мышам в дозе от 10,0 до 30,0 мг/кг вызывает двукратное увеличение числа АОК в селезёнке, усиливает кооперацию Т - и В - лимфоцитов, не влияет на реакцию гиперчувствительности замедленного типа.

7. Установлено, что грамин положительно влияет на показатели неспецифической резистентности телят: после пятикратного с интервалом 24 часа введения препарата в дозе 1,0 мг/кг фагоцитарная активность лейкоцитов повышается в 1,33 раза, лизоцимная активность сыворотки крови увеличивается в 1,28 раза, бактерицидная, комплементарная активность возрастают в 1,25 и 1,33 раза соответственно.

8. Применение грамина в качестве профилактического средства молодняку крупного рогатого скота пятикратно с интервалом 24 часа в дозе 1,0 мг/кг массы тела способствует снижению заболеваемости респираторными и желудочно-кишечными болезнями в 2,4 раза, повышает сохранность на 12 %.

9. Выявлено, что введение грамина в дозе 1,0 мг/кг массы тела совместно с антибиотическими препаратами телятам при респираторных заболеваниях повышает количество выздоровевших на 15 %, сокращает период заболевания на 3 - 4 дня; при желудочно-кишечных заболеваниях - повышает количество выздоровевших на 2 %, сокращает на 2-3 суток период выздоровления, нормализует показатели неспецифической резистентности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

При производстве и применении препарата грамин следует пользоваться: " Техническими условиями на производство грамина" - ТУ 9337-00122940614-00, согласованными с ДВ МСХ РФ, ВГНКИ и утверждёнными НИИСХ Севро-Востока 19.12.2000 г. и "Наставлением по применению грамина", одобренным Ветфармбиосоветом 12.04.2000 г., протокол № 2 и утверждённым ДВ МСХ РФ 3.01.2001г.

133

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Лагунова, Ольга Николаевна, 2001 год

1. Абрамов С.С., Линник В.В. Влияние витамина В12 на резистентность организма телят //Ветеринария.-1977.-№ 10.-С. 93-94.

2. Адо А.Д. Патофизиология фагоцитов: Краткий очерк истории и современного состояния учения о фагоцитозе М.: Медгиз, 1961.-295 с.

3. Акимова И.М. Аномалии развития скелета эмбрионов крыс после действия хлорида (пипрмитамина) //Арх. анат.-1972.-№ 8.- С.77-87.

4. Акимова И.М. Показатели окостенения скелета на разных стадиях нормального эмбриогенеза крыс //Арх. анат.- 1968.-№ 2.- С.65-72.

5. Акимова И.М., Удалова Л.Д. Сравнение тератогенной активности некоторых антимолярных препаратов // Синтез и анализ лекарственных веществ. Львов, 1966.- С.327-330.

6. Алексеенок А.Я., Павленко Г.И., Бочаров Н.М., Попов Е.Т. О мутагенной активности лечебных препаратов // Пчеловодство.-1985.-№ 7.- С. 19-20.

7. Алмазов В.А., Афанасьеф Б.В., Зарицкий А.Ю. и др. Физиология лейкоцитов человека.- Л.: Наука, 1979- 232 с.

8. Андронова Т.М. и др. Синтетические иммуномодуляторы. М.: Наука, 1991.- 199 с.

9. Анохин Б.М. Профилактика болезней телят- Воронеж: ЦентральноЧерноземное книжное издательство, 1980.- С.27 29.

10. Ю.Асковит П. Клиническое применение левамизола: Критический обзор. Последние достижения в клинической иммунологии. Под ред. Р.А. Томпсона: пер. с англ.- М.: Медицина, 1983. С.465-491.

11. П.Аствацатуров К.Р., Брауде Р.С. К вопросу о содержании и методике определения лизоцима в слюне. Актуальные вопросы дерматовенерологии.-М.,1953, С.53 58.

12. Бабаян Э. А., Ульянова Г.А., Тихонова Ю.В., Лепахин В.К., Смирнов Н.А. Методические указания по тестированиию тератогенной и эмбриотоксической активности новых лекарственных веществ. М.- 1972. -С. 41 -42.

13. В.Баранов B.C. Особенности тератогенного действия амноптерина по сравнению с другими повреждающими агентами// Бюлл. экспер. биол. и мед.- 1966.-№ 1.- С.77-82.

14. Бариляк И.Р. Анализ механизмов патогенного действия антилеабетических сульфаниламидов на эмбриональное развитие крыс. Автореф. дисс., JL, 1967. 27 с.

15. Бариляк И.Р., Паутовская В.В., Торбин В.Ф. Особенности влияния ингибиторов атмосферной коррозии металлов (амонов полиметиленового ряда) на эмбриогенез //Арх. анат., гистол. и эмбриол.-1978.- № 3.- С.80-87.

16. Беленький M.JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта.-Ленинград, 1963.- 149 с.

17. Белокрылов Г. А. Иммуностимулирующее свойство аспарагиновой кислоты //Бюл. экспер. биологии и медицины.- 1986.- № 8 .-С.213-216.

18. Белокрылов Г.А., Молчанова И.В., Сорочинская Е.И. Аминокислоты как стимуляторы иммуногенеза //Доклады АН СССР.- 1986.- Т.286.- № 2.-С.13-15.

19. Белокрылов Г.А., Попова О.Я., Молчанова И.В. и др. Различие действия пептидов и составляющих их аминокислот на иммунный ответ и фагоцитоз у мышей //Иммунология.- 1991.- № 5.- С.46-48.

20. Белокрылов Г.А., Сорочинская Е.И. Пептиды и аминокислоты в регуляции иммунного ответа. 1 Всесоюзный иммунологический съезд. Сочи, 15-17 ноября 1989 г.: Тез. секц. и стенд, сообщений.- М., 1989.- Т 1.-С.274.

21. Бернет Ф.Н. Клеточная иммунология: Пер. с англ. М.: Мир, 1971,-542 с.

22. Билай В.И. Методы экспериментальной микологии.-Киев, 1973.-С.273.

23. Бочков Н.П. Генетический мониторинг популяций человека в связи с загрязнением среды // Цитология и генетика, 1977,-т. 11.-№ 3, С. 195 206.

24. Бочков Н.П., Кулешов Н.П., Журков B.C. Анализ спонтанных хромосомных аберраций в культуре лейкоцитов человека // Цитология, 1972, т. 14, № ю.-С. 1267 1272.

25. Бочков Н.П., Шрам Р.Я., Кулешов Н.П., Журков B.C. Система оценки химических веществ на мутагенность для человека: Общие принципы, практические рекомендации и дальнейшие разработки // Генетика.-1975.-т.11.- № 10.-С. 156- 169.

26. Булатов А.А. Действие экстрактов чаги, элеутерококка и левзеи на телят. Профилактика болезней и повышение резистентности организма животных в хозяйствах промышленного типа. Воронеж, 1981,- С. 120-124.

27. Булатов А.А. К вопросу характеристики адаптогенов //Научные труды Воронежского СХИ, 1979.-t.105.-C. 29-32.

28. Бухарин О.В., Васильев Н.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине.-Томск: Изд-во Томского университета, 1974.-209 с.

29. Бухарин О.В., Сухих Г.Т., Сулейманов К.Г., Фролов Б.А. Методологические аспекты изучения естественной резистентности организма. В сб. Факторы естественного иммунитета.- Оренбург, 1979.-С. 5-9.

30. Варшавская С.П., Динерман А.А., Шиган С.А. Отдалённые последствия биологического действия некоторых химических веществ, загрязняющих окружающую среду.-М., 1975.- С. 17-32.

31. Васильев Н.В. Иммунобиологическая реактивность организма при иммунизации антигенами различной природы: Автореф. на соиск.ученой степ. докт. мед наук. Томск, 1968.- 30 с.

32. Васильев Н.В., Коляда Т.И. Общие предпосылки к тестированию системы иммунитета на фоне адаптационного процесса. Иммуный гомеостаз в экстремальных природных условиях.- Фрунзе: Имм., 1985.- С. 40-53.

33. Веселова Т.П., Лаптева Л.А., Хрусталёва Л.И. Эмбриотоксическое и тератогенное действие оксидина// Ветеринария.-1980.- № 8.- С.56.

34. Воронин Е.С., Дервишов В.А., Денисенко В.Н. и др. Влияние иммуномодуляторов на иммунологический статус телят при экспериментальном инфекционном ринотрахеите //Ветеринария.-1991.-№ 8.-С.25-27.

35. Галактионов В.Г. Клеточные рецепторы иммунной системы// Успехи современной биологии.- 1975.- Т.80.- № 1.- С.84-101.

36. Герберт У.Д. Ветеринарная иммунология. М.: Колос, 1974.- 302 с.

37. Голышенков П.П. К фармакологии экстракта берёзового гриба чаги. Проблемы фармакологии в современном животноводстве. Т. 94. М., 1977.-С. 88-89.

38. Горский Б.В., Нуриев Г.Г., Гумеров Н.К. Основы общей ветеринарной вирусологии. М.: "Колос", 1978.- 191 с.

39. Гостинский В.Д., Замедянская В.Д. Некоторые методические вопросы изучения эмбриотропного действия химическиих соединений. Основные вопросы проблемы отдалённых последствий воздействия профессиональных ядов. М., 1976.-С. 101-103.

40. Гофмеклер В. А. Методика изучения эмбриотропного действия химических веществ при гигиенических исследованиях. Гигиена и санитария.- 1969, № 8.- С.47-50.

41. Гофмеклер В.А., Красовицкая M.JL, Шепарев А.А., Кривелевич Е.Е. Методическая разработка. Методы изучения отдалённых последствий действия химических загрязнителей атмосферного воздуха.- Владивосток, 1976.- 32 с.

42. Гриневич Ю.А., Чеботарёв В.Ф., Никольский И.Е. и др. Иммунобиология гормонов тимуса. Под ред. Ю.А. Гриневича, В.Ф. Чеботарёва. Киев, Здоров' я, 1989.- 150 с.

43. Девримов Д.А., Дадыбаев Ж.М. Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней молодняка с.-х. животных.- МВА.-М.-1991.-С.41-43.

44. Дейгин В. -Ветинформ: Ветеринарный информационый коммерческий журнал.-1992.-№ 1.-С.8.

45. Дервишов Д.А., Воронин Е.С., Шишков В.П. Применение биотехнологий в животноводстве, растениеводстве и вет. медицине// Тез. докл. Всесоюзн. научн.-техн. конф.: -1988.-С.102-103.

46. Диденко А.И. Исследование токсичности фталафоса для кур и динамика его остатков в организме птицы. Автореф. дисс.кандид. ветер, наук.- М., 1978, 25 с.

47. Динерман А.А., Лаврентьева Н.А., Ильинская Н.А. К вопросу об эмбриотоксическом действии некоторых пестицидов// Гигиена и санитария.- 1970,- № 7.-С.39-41.

48. Дорожкин В.И. Влияние комплексного соединения цикола на рост и развитие поросят. //Всесоюзная научная конференция "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" Москва, 1991.- С.230-231.

49. Дорожкин В.И. Влияние хелатных соединений метионата и лизина на эмбриогенез птиц и крыс.// Сборник научных трудов. "Проблемы профилактики и лечения заболеваний с/х животных "Нижний Новгород, 1993.-С.220-227.

50. Дорожкин В.И. Действие биокоординационных соединений на показатели естественной резистентности организма животных. // Международное координационное совещание. "Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных" Воронеж, 1997.-С.206.

51. Дорожкин В.И. Исследование биологического действия некоторых хелатных соединений.// Сборник научных трудов ВГНКИ. Москва, 1994.-С.90-93.

52. Дорожкин В.И. Оценка тератогеных свойств некоторых хелатных соединений.// Сборник научных трудов ВГНКИ. Москва, 1994.-С.93-96.

53. Дорофейчук В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом// Лабораторное дело.- 1968.- №1,- С. 28-30.

54. Дорошина М.В. К вопросу о токсичности дронцита// Ветеринария.- 1983.-№ 5.-С.64-65.

55. Дыбан А.П. Механизм тератогенного действия фармакологических веществ и охрана здоровья в антенальном периоде жизни.- Вестник АМН СССР.- 1966.-№ 6.- С. 10-28.

56. Емельяненко П.А. Иммунология животных в период внутриутробного развития.-М.: Агропромиздат.-1987.-215 С.

57. Ермольева З.В., Грищенко Е.Д. Антимикробные вещества животного происхождения// Антибиотики.- 1952.- вып. 2 (28).- С.21 34.

58. Ермольева З.В., ВайсбергГ.Е. Стимуляция неспецифической резистентности организма и бактериальные полисахариды. М.: "Медицина", 1976.- 182 с.

59. Ерошенко Т.М., Титов С.А., Лукьянова Л.Л. Каскадные эффекты регуляторных пептидов// Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных.- М.: ВИНИТИ, 1991.- Т. 48.- 204 С.

60. Жаворонков Н.И. Оценка действия пестицидов на воспроизводительную функцию животных// Ветеринария.- 1979.- № 9.- С.67-69.

61. Земсков В.М. Успехи современной биологии.- 1991.- Т.З, №3.- С.444.

62. Зильбер Л.А. Основы иммунологии.-З изд.- М.: Медгиз, 1958. -599 с.

63. Зозуля А.А., Пацакова Э. Значение регуляторных пептидов в функционировании иммунной системы// Иммунология.- 1986.- № 2.- С. 1014.

64. Золотарёва Г.Н. Теоретические и методические аспекты исследования цитогенетического действия лекарственных препаратов на млекопитающих в условиях нормального и патогенетического состояния организма.- Автореф. дисс.- Минск, 1983.- 23 с.

65. Ивановский А. А. Грибы и экстракты из тканей органов основа препаратов-иммуномодуляторов// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук.- 1995.- № 3.- С. 16-18.

66. Истаманова Т.С. Очерки функциональной гематологии.-Л.: Медгиз, 1963.-232 С.

67. Исхаков 0.3., Селиванова А.С., Авсюкевич B.C., Синявин А.Н., Бирюкова Н.П., Болдырев А.Т. Антикокцидийные препараты.- Рациональное использование лекарственных препаратов в ветеринарии.- М.- 1984.- С. 150-160.

68. Кабанов В.Д. Рост и мясные качества свиней,- М.: Колос, 1972.-191 С.

69. Каган Ю.С., Станкевич В.В. В сб.: Актуальные вопросы гигиены труда, промышленной токсикологии и профессиональной патологии в нефтяной и нефтехимической промышленности. Уфа, 1968.- С.48.

70. Калашник И.А. Применение тканевых препаратов по В.П. Филатову .Материалы научной конференции, посвящённой 100 летию со дня рождения В.П. Филатова.- Одесса, 1977.- С.5-8.

71. Калашник И.А. Стимулирующая терапия в ветеринарии.- М, 1979. -С. 84-85.

72. Кармолиев Р.Х.- Современные биохимические методы исследования в ветеринарии и зоотехнии. -М.- Колос, 1971.- С.217-244.

73. Карнаухов В.В. Исследование токсичности полихлоркамфена для кур: Автореф. дисс.,М., 1972.

74. Кассич А.Ю., Конаржевский К.Е., Корчан Н.И. Применение иммуномодулирующих препаратов при лечении бронхопневмонии телят // Вет. пробл. пром. животноводства Белая Церковь, 1985.-С.45-46.

75. Качур О.В. Влияние облучённой крови и фитостимулятора на иммунный статус телят// Ветеринария 1999.- № 8.- С.46-48.

76. Кашкин К.П., Караваев 3.0. Иммунная реактивность организма и антибиотическая терапия. JL: Мед., 1984.- 199 с.

77. Кириллов О.И. Опыт использования фармакологической регуляции стресса. Владивосток Дальневосточное книжное издательство, 1966.214 с.

78. Кирпиченок В.А. Современные аспекты профилактики инфекционных болезней молодняка.- 1989.-С.16-18.

79. Кожемякин А.Л., Фомичёв С.Н. Физиологическое и клиническое значение регуляторных пептидов.- Горький, 1990.- С.88.

80. Кожемякин Л.А., Попов И.Н., Антонов В.Г. и др. Биохимические механизмы действия цитомединов.- Роль полипептиных биорегуляторов (цитомединов) в регуляции гомеостаза// Тез. докл. научн. конф.-Ленинград.-24-25 ноября 1987 г.,- Л.- 1987.- С.50-51.

81. Колабская Л.С. Способы получения, физико-химическая характеристика препаратов крови птиц и их применение в промышленном птицеводстве : Автореф. дисс. . доктора биол. наук.- М., 1987.- 33 с.

82. Колабская Л.С., Попова В.Д., Маккавейская Е.А. и др. Рекомендации по определению показателей естественной резистентности птиц.- Л.: ВНИВИП.-1980.- 34 с.

83. Колабская JI.C., Трусова Л.И., Простяков А.П. и др. Усовершенствование технологии изготовления белковых препаратов сыворотки крови птиц.-Контроль качества химиотерапевтических препаратов: Сб. научн. тр. ВГНКИ ветпрепаратов.- М.- 1987.- С.56-58.

84. Комаров А.А. Способ получения, физико-химическая характеристика и иммунобиологическое действие аминокислотно-пептидного препарата для птиц: Автореф. дисс. .канд. биол. наук.- М.-1991.- 24 с.

85. Комаров А.А., Простяков А.П. Изучение иммуностимулирующего действия белковых гидролизатов// Доклады ВАСХНИЛ.- 1991.- № 1,-С. 47-50.

86. Комаров А.А., Простяков А.П., Цыганкова С.И. и др. Получение, свойства и применение препарата авиамин сухой// Ветеринария.-1991. -№ 4.-С. 52-54.

87. Константинова И.В. Система иммунитета в экстремальных условиях: Космическая иммунология// Пробл. космич. биологии.- М.: Наука, 1988 Т.59.- 288 с.

88. Коромыслов Г.Ф., Игнатов П.Е. Иммуностимуляция: средства, методы, перспективы (обзор)// Сельскохозяйственная биология.- 1983.- № 7.- С. 99 107.

89. Кузнецова Г.И. Клетки млекопитающих, констатирующие по репаративной активности, как система для оценки действия мутагенов. Генетические последствия загрязнения окружающей среды. М., 1977.- С. 123 125.

90. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков Н.Н. Иммуногенез, гомеостаз и неспецифическая разистентность организма.-М.: Медицина, 1989.-320 с.

91. Кузник Б.И., Степанов А.В., Цыбиков Н.И. и др. Влияние полипептидов из вилочковой железы, костного мозга и сумки Фабрициуса на иммуногенез и гомеостаз у неонатально тимэктомированных цыплят // Бюл. эксп. биол. и мед.- 1987.- Т.54.-№ 4.- С.449-451.

92. Лабораторные исследования в ветеринарии. Справ, под ред. Антонова Б.И. М. ВО "Агропромиздат" 1991, С.6-21.

93. Лазарева Д.Н., Алёхин Е.К. Стимуляторы иммунитета.- М.: Медицина.1985.-256 С.

94. Лебедев П.Т., Усович А.Т. Методы исследования кормов, органов и тканей животных. М., 1976.- С. 271-275.

95. Леонтович В.А. Биохимия лейкоцитов. Нормальное кроветворение и его реакция М.: Медицина, 1975.- С. 260-274.

96. Ю1.Лопарев П.И., Неймарк Т.Ю. Теория и практика использования биологичесикх веществ в животноводстве// Тез. докл. научн. конф. 6-7 окт.- Киров, 1998.- С.52-55.

97. Манько В.М. Маркёры Т- и В -лимфоцитов. Т- и В- системы иммунитета// ВИНИТИ.- Итоги науки и техники. Сер. Общ. вопр. патологии.- 1976.- Т.4.- С.46-89.

98. Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.-Новосибирск: Наука, 1983.- 256 с.

99. Медведь Л.И. Справочник по пестицадам.- Киев, 1974.- 88 с.

100. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н., Золотницкая Р.П. и др. Лабораторные методы исследования в клинике.- Справочник.- М.: Медицина.-1987, -368 с.

101. Методические указания по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве: Справочник Ветеринарные препараты. М. ВО Агропромиздат.-1988.-С.245-246.

102. Митюшников В.М. Наличие лизоцима в крови крупного рогатого скота разного возраста// Труды ВНИИВС. М.,1970.- Т. 37.- С. 241 - 245.

103. Михайлова А.А., Захарова Л.А., Кетлинский А.В. Регуляторные пептиды костного мозга, обладающие иммуностимулирующей и опиатоподобной активностями.- V Всесоюзный биохимический съезд// Тезисы симпозиальных докладов.- М.: Наука.- 1985.- Т. 1.- С. 176-177.

104. Моноенков A.M., Островский Ю.Б. Влияние иммунизации на содержание лизоцима в слюне животных// Доклады АН СССР.- 1961.- Т. 138.- №5.- С.1238 1240.

105. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины// Успехи современной биологии.-1983.- Т.96.-№ 3.- С.339-352.

106. Мутовин В.И., Митюшников В.М. Определение естественной резистент ности организма животных//Ветеринария.- 1973.- № 12.- С. 103 104.

107. Николаевский И.Н. Лизоцим в ветеринарной практике// Советская ветеринария.- 1939.- № 5.- С. 77 79.

108. Никольс У. Цитогенетические методы анализа мутагенности. В кн.: Генетические последствия загрязнения окружающей среды. М., 1977.-С. 101 - 106.

109. Никольский В.В. Основы иммунитета животных. "Колос", М.: 1968,223 с.

110. Носков Н.М. Реактивность телят в онтогенезе. Горький, 1963.- 128 с.

111. Осидзе, Ветеринарные препараты. М.: Колос, 1981.- С.21-24.

112. Павлов Г.В., Печникова Г.Н., Смоленская-Суворова О.О. Показатели естественной резистентности телят при применении иммуностимулятора. Проблемы лейкоза и инфекционные заболевания сельскохозяйственных животных.- М., 1988.- С. 111-113.

113. Пастер Е.У., Овод В.В. Иммунология. Практикум. Киев: "Выща школа", 1989.- С.265-298.

114. Першин Г.Н. Определение средней смертельной дозы// Фармакология и токсикология.- 1950.- 3.- С.53 -56.

115. Петров Р.В. Иммунология. -М., 1987.- 287 с.

116. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии.- М.: Медицина.- 1976.-232 С.

117. Печникова Г.Н., Воронин Е.С. Современные аспекты профилактики инфекционных болезней молодняка.-1989.- С.13-16.

118. Плященко И.П., Сидоров В.Т. Естественная резистентность организма животных.- Ленинград: Колос, 1979.- 182 с.

119. Правдин Н.С. Методика малой токсикологии промышленых ядов. М.,1957.- С. 34-42.

120. Принципы испытания лекарственных средств на тератогенность. Доклад научной группы ВОЗ. Женева, 1968.- 51 с.

121. Приходько Г.Т., Сироткина В.П., Павов Г.В. Изучение токсических свойств капролактама// Ветеринария.- 1994.- №11.- С.44-47.

122. Простяков А.П. Трусова Л.И. Изготовление и применение белковых препаратов иммуноглобулинов// Ветеринария.- 1987.- № 7.- С.46-47.

123. Пустовар Н.С., Дудин Е. М. Тератогенное и эмбриотоксичное действие дисалана// Ветеринария.- 1981.- № 4,- С.64-65.

124. Ракова Т.Н. Экспериментальное обоснование и практические аспекты нового направления использования культур стрептомицетов в ветеринарии.- Автореф. дисс. . доктора ветеринарных наук.- Воронеж.-1989.-34 с.

125. Резникова Л.С. Комплемент и его значение в иммунологических реакциях.- М.: Медицина, 1967.- 271 с.

126. Рябова В.А., Веселова Т.П. Эмбриотоксическое и тератогенное действие бенацила//Ветеринария.- 1984.-№ 1.- С.68-69.

127. Рябова В.А., Лаптева Л.А. Эмбриотоксическое и тератогенное действие БМК на зародыши крыс// Бюлл.ВИГИС. 1981.- № 28.- С. 56-60.

128. Рязанова Р.А. Использование метода куриных эмбрионов при изучении возможного тератогенного действия ядохимикатов.- В кн.: Гигиена применения, токсикология пестицидов и клиника отравлений. Киев, 1968.-В.6.- С.756-760.

129. Саноцкий И.В., Гродецкая Н.С., Фоменко В.Н. Санитарная стандартизация содержания химических соединений в воздухе рабочей зоны в связи с проблемой отдалённых последствий их воздействия// Гигиена труда, 1978,- № 8.-С.6.

130. Саноцкий И.В., Фоменков В.Н. Отдалённые последствия влияния химических содинений на организм.-М.: Медицина, 1979.- 178 с.

131. Смирнов B.C., Хавинсон В.Х., Яковлев Г.М., Новиков B.C. Коррекция радиационных иммунодефицитов., С-Петербург: Наука, 1992.- С. 11-29.

132. Смирнова О.В., Кузьмина Т.Н. Определение бактерицидной и лизоцимной активности// ЖМЭИ.- 1966.- № 4.- С.8-11.

133. Смородинцев А.А. Система интерферона и её роль в обеспечении неспецифической противовирусной защиты. Тезисы доклада "Защитные механизмы естественного, приобретённого и поствакционного противовирусного иммунитета" JL, 1978.- С. 19-21.

134. Соловьёв В.Д., Бектемиров Т.А. Интерфероны в теории и практике медицины.- 2-е изд.-М.: Медицина, 1981.-400 с.

135. Соловьёв В.Д., Бектемиров Т.А. Лейкоцитарный интерферон -показатель реактивности организма в норме и при патологии.- Вестн. АМН СССР.-1979.-№ 2.- С. 19-26.

136. Сохин А.А. Неспецифическая резистентность// Прикладная иммунология.- Киев: Здоровье, 1984.- С. 5 15.

137. Супоницкий В.М. К вопросу о бактериоцидных факторах сыворотки крови//ЖМЭИ.- 1965.- № I.- С. 31 -36.

138. Тиунов Л.А. Общие вопросы промышленной токсикологии. М., 1967.-С. 55-59.

139. Трахтенберг И.М., Тимофиевская А.А., Квятковская И.Я. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей. Рига: Зинатне, 1987а, С.74-79.

140. Трахтенберг И.М., Тимофиевская А.А., Квятковская И.Я. Методы изучения хронического действия химических и биологических загрязнителей. Рига: Зинатне, 1987.- С. 44-53.

141. Трифонова Т.К. Гонадо- и эмбриотоксичность абата.- Ветеринария, 1983.-№4.- С. 60-62.

142. Трифонова Т.К., Гладенко . И.Н. Определение гонадо- и эмбриотоксичности пестицидов ( кельтана и гептахлора)// Ветеринария.-1980.-№6.- С.58-59.

143. Трусова Л.И., Комаров А.А., Простяков А.П. Белковые препараты для профилактики заболеваний молодняка птицы.- Проф. и меры борьбы с бол. мол. с.-х. животных.- Минск.- 1990.- С. 155.

144. Уланова И.П., Сидорова К.К., Халепо А.И. Определение кумулятивных свойств профессиональных ядов. В кн.: Принципы и методы установления ПДК вредных веществ в воздухе производственных помещений. М., 1970.- С. 101-108.

145. Устинов Д.А. Стресс-факторы в промышленном животноводстве. М.: Россельхозиздат, 1976.

146. Утешев Б.С., Коростылёв С.А. Взаимодействие нейроэндокринной и иммунной систем и роль орагноидных пептидов в регуляции иммунного гомеостаза// Фармакология и токсикология.-1990.-т.5.-№1.-С.10-16.

147. Филиппова Т.В. Цитогенетическое действие химиотерапевтических препаратов в организме человека: Автореф. дисс. ., 1981.- 20 с.

148. Фрейдлин И.С. Ключевая позиция макрофагов в цитокиновой регуляторной сети// Иммунология.- 1995.- № 3.- С.44-48.

149. Фрязинова И.Б., Учитель И.Я. Связь между неспецифической реактивностью и продукцией антител при иммунизации различными антигениами// ЖМЭИ.- 1969.- № 3.- С.43-48.

150. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные представления об иммунотропных лекарственных средствах// Иммунология.- 1995. № 3.- С.6-10.

151. Хрусталёв Л.И., Лаптева Л.А., Веселова Т.П. Результаты изучения эмбриотоксического и тератогенного действия гесихола// Химия в сельском хозяйстве.- 1982.- т.20.- № 5.- С.49-51.

152. Чаплыгина З.А., Горская Н.А., Немкюль JI.H. О методах получения лечебных препаратов расщепленного белка // Актуальные вопросы парентерального питания. Рига: Зинатне, 1972. - С. 145-150.

153. Чеботарь Н.А. Анализ механизмов повреждающего действия салициловокислого натрия на эмбриональное развитие крыс: Автореф. дисс.,Л., 1969, 23 с.

154. Ченчикова Э.П. Механизм комплементарной активности// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологиии.- 1978.- № 7.- С. 21-31.

155. Чернух A.M., Александров ГШ. О тератогенном действии химических веществ. М.: Медицина.- 1969.- С. 31 35.

156. Чернушенко Е.Ф., Когосова Л.С. Иммунологические исследования в клинике.- Киев.-1978.-С.20-21.

157. Шайкин В.М. Постнатальное развитие крысят после воздействия пиперазином адипинатом в перинатальном периоде// Научно-технич. бюлл. ВАСХНИЛ, 1982.- в.11.- С.26-28.

158. Шайкин В.М., Веселова Т.П. Пери- постнатальное развитие крыс после воздействия нематоцидом//Научно-техн. бюлл. ВАСХНИЛ, 1982.- С. 10.

159. Шляхов Иммунология, иммунодиагностика, иммунопрофилактика инфекционных болезней.- Кишинёв: Картя Молдовеняскэ, 1977.- С. 7 -139.

160. Щицкова А.П., Елизарова О.Н. Жидкова Л.В., Кочеткова Т.А., Левин А.И., Рязанова Р.А., Шевырева Н.А. Методы гигиенической и токсикологической оценки биологического действия пестицидов.- М.: Медицина 1977.- 199 с.

161. Юдина И.Г. Изучение эмбриотоксического и тератогенного действия госипола//Ветеринария.- 1983.-№ 7.- С. 70-71.

162. Яковлев Г.М., Новиков B.C., Хавинсон В.Х. Резистентность, стресс, регуляция.- Ленинград: Наука, 1990. -235 с.

163. Asnis R. Е The reduction of furacin by cell-free extracts of furacinresistant and Parent sus ceptible strains of Escherichia coli. Arch Biochem. Biophys., 1957.- 66.- p.200-216.

164. Arneborn P., Biberfeld G. T-lymphocyte subpopulation in relationn to in unosupression in measles. Infect. Immun.- 1983.- V.39.- P. 29.

165. Avrameas S. Immunol. Today.- 1991.- Vol. 12.- 5.- P. 154 158.

166. Avrameas S., Dighiero G., Lymberi P., et al.-Ann.Inst. Pasterur. Immunol., 1983.-Vol. 134D.- P.103-113.

167. Barnes J.M. Toxicity testing.- In Schilling, R.S.F., ed Modern drendsin occupational health.- London, Butterworths, Co., 1960, pp 20-32

168. Bignami M., Morpurgo G., Pagliani R., Carere A., Conti G., Di Lieseppe G. Non disj - Parmacutical drugs in Aspergillus nidulans.- Mutat. Res., 1974.-v. 26.- 159-170.

169. Bretz U., Baggiolini M. Biochemical and morphological characterization of azurophil and specific granules of human neutrophilic polymorphonuclear leukocytes. J. Cell. Biol., 1974.-Vol.63.- № 1.- p.251-269.

170. Christie K.E., Solberg O., Larsen В., Crov A. Influense of IgG, F(ab')2 and IgM on the phagocytic and bactericidal activities of human neutrophill granulocytes.- Acta patol. microbiol. scand.- Sect, c.- 1976.- Vol. 84,- № 2.-p.119-123.

171. Conney A.H.,Schneiderman K. , Jacobson M. , Kuntzman R. Druginduced changes in steroid metabolism. Ann N.Y. Acad. Sci., 1965.- 123:98-109.

172. Cunningham A. J., A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. J.Nature, 1965, v.207, P. 1106-1107.

173. Davies E.G., Levinsky R.J., Butler M. et al. Thymic hormone therapy for gistiocytose. New Engl. Med.- 1983.- Vol. 309.- № 8.- p.493-494.

174. Dawson A.B. A note on the straining of the skeleton of cleared snecimens with Alisarin. 1926, 1 pp.-123-128.

175. Ehlenberger A.G., Nussenzweig V. The role of membrane receptor for C3b and C3d in phagocytosis.- J. Exp. Med., 1977.- Vol.145.- 2.- p.357-371.

176. Fernoff P.M., Lammer E.J. Craniofacial Features of Isotrenoin Embriopathy.-J. Pediat., 1984, 105, 4, P.593-597.

177. Fizard I. R., An Introduction to Veterinary Immunology.- Philadelphia -London Toronto, 1977.- 311 p.

178. Ford С. E., Hamerton J.- L A colchicine hypotonic citrate. Squach seguence for mammalian chromosomes.- Stain Technol.- 1956.- v. 31.- № 6.-pp 247257.

179. Frohbery H. Critique of in vivo cytogenetic test systems.- Agents Actions.-1973.-3.-pp. 119-123.

180. Ganrot P.O., Kindmark C.-O. C-reactive protein a phagocytosis-promoting factor.- Scand. J. Clin. Lab. Invest.- 1969.- Vol. 24.- № 3.- p.215-219.

181. Gehring P.J., Rowe V. K., Mc Collister S. B. Toxicology costtime. -Food Cosmet toxicol., 1973, 11, pp. 1097- 1110.

182. Hadding U., Ubrich J., Rother R. et al. Komplement: biochemie und Patologi.- Darmstad: Steinkopf.- 1974.- s.289.

183. Hagan J.M. Acite toxicity. In.: Appresal of the safety of chemicals in food & Drag officials of US A. 1959. pp. 17-25.

184. Hyrst E.W. Sexsual differences in the toxicity and therapeutic action of chemical substances. In Walpol A.L., Spinks A., ed. The evaluation of drug toxicity, London, Churchill, 1958.- pp. 12-25.

185. Johnston R.B., Godzik C.F., Cohn Z. A. Increased superoxide anion production by immunologically activated and chemically elicited macrophages. J. Exp. Med.- 1978.- Vol. 148, № 1.- p. 115-127.

186. Karber G. Arch, exper. Path. Pharmak., 1931, 162, p. 480.

187. Kaufman D.L., Tobin A. J. Trends pharmacol. Sci.- 1993.- Vol.- 14- 4.- P. 107 109.

188. Klebanoff S. J, Hamon C.B. Role of myeloperoxidase-mediated antimicrobial systems in intact leukocytes. J Reticuloendothel. Soc.- 1972.- Vol. 12.- № 2.-p.170-196.

189. Klebanoff S. J. Antimicrobial mechanisms in neutrophillic polymorphonuclear leukocytes. Semin. Haematol.- 1975.- Vol. 12.- № 2.-p.l 17-142.

190. Kochnar D.M. The use of in vitro procedure in teratology.- Teratology, 1975, v 11, pp. 273-288.

191. Kokoshis P. L., Di Luzio M.R. Serum Lysozyme: an index of macrophagefunction Rec.-1. Reticuloendothel. Soc., 1979, v.25, n 1, H. 85-99.

192. Korhonen A., Hemminki K., Vainio H.- Acta pharmacol. et toxicol.- 1982.51.- №l.-p.p.38-44.

193. Kruger F. Zur mathematischen Beschreibung des menschlichen Embrionalwachstusms.- Acta anat., 1972.-Bd.82, S.198-217.

194. Leclair J. M., Willard J.W. Guide for the preparation of submissions on tolerances for incidental contaminants and agricultural chemicals in food. Ottawa, Canada, Food, Drug Directorate, Dept of National Health, Weltare, 1970, 217 P.

195. Lim. R. K., Rink K.G., Glass H.G., Soage-Echague e. Arch. int.

196. Pharmacodun, 1961.- 130.- 3-4,- h.336.

197. Litchfild J.T.Wilcoxon F.A. Asimplified method of evaluating dose effect experiments. -J. Pharm. exp. Ther. 1947. 95. pp.99 -113.

198. Markiewicz K., Smigielska Y., Kurska E. Badania nad zachowaniem sie poziomu glukozy w krwi prosiat. Medwet., 1974, 30, № 11, c.671 - 673.

199. Marrack P., Kappler J. W., Kettman J.R. The frequecy and activity singlehelper T-cell. J. Immunol.- 1974.- Vol. 113.- № 3.-p 830-834.

200. Mc Cann J., Ames B. N. Detection of carcinogens as mutagens in Salmonella microsome test: assay of 300 chemicals: discussion.- Proc. Nat. Acal. Sci. USA.-1976.- 73,- pp 950-954.

201. Menzel J., Jungber M., Genisa D. Contribution of immunoglobulins M and G, complement and properdin to the intracellular killing of Escherichia coli by polymorphonuclear leukocytes.-Infect. Immun.- 1978.- Vol.19.- № 2.- h.659-666.

202. Miller J.F.A.P., Mitchell G.F. Lymphocyte interaction in antibody response.-I. J. exp. Med. 1968, Vol 128.- P.801.

203. Miller L.C., Cytol.- 1972.-Vol.9.- № 42.- P.3171-3175.

204. Miller L.C., Tainer M.L., Estimation of the ED50 and its error by means of logprobit graf paper. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., N.Y., 1944, 57.- pp.261 -264.

205. Najjar V.A., Chanachuri M.-K., Konopinska D. Tuftsin, a physiological activator of phagocytis cell: a pousible role in cancer suppression therapy.-Augmenting agents in cancer therapy. N.Y.: Reven Press.-198l.-p.459-479.

206. Nakamura M., Makamura M. A., Okamura J., Kolayashi Y. A rapid quantitative assay of phagocytosis connected oxigen consumthion by leukocytes in whole blood || J. Lab. Clin. Med. - 1977. -Vol.238, № 4.-P.568-575.

207. Olitzki A.L.,Gershon Z, The production of complement by mononuclear cellsfrom guinea-pig lungs.- Boll. Inst, sieroter. milan.- 1967. Vol. 46.- № 1-2, p.46-56.

208. Palisa V., Krigar V. Endogenni latky stimulujici aktivitu fagocytarniho sistemu.- Cas. lek. cesk, 1977.- Sv.116.- 6.41.- s.1257-1263.

209. Papermaster B.W., Condie R. M., Finstard J. Evolution of the Immune Response. J. Exp. Med., 1964.- V.l 19.- N 1.- P. 105 130.

210. Parrot D.M.V., de Sourse M., East J. Thymus-dependent areas in the lymphoid organs of neonatally thymectomized mice. J. Exp. Med, 1966.-Vol.123.- № l.-p. 191-204.

211. Pillimer L., Blum D., Lepow Y. et al. The properdin Sistem and Immunity. J.

212. Exp. Med. 1956.- V. 103. N 1.

213. Precechtel Ctch. M., Zizlavsky V., Noll N., Sonie, defence mechanisms in children suffering from Rachitis. 11. Bacteria-static activity of blood serum.-Scripta Med, 1968. vol.41. № 7/8.- p. 465-469.

214. Raff M.C. T-and B-lymphocytes in mice studied by using antisera against surface antigenic markers. Amer. J. Pathol, 1971,- Vol. 65.- p. 467-478.

215. Reif A.E, Allen J.M.V. The AKR thymic antigen and its distribution in leukemias and nervous tissues.- J. Exp. Med.- 1964.- Vol. 120 .- № 3.- p. 413433.

216. Roitt J.M, Greaves M.F, Torrigiani G. et al. The cellular basis of immunological responses: A synthesis of some current views. Lancet.- 1969.-Vol. 2.- 7590.- p. 367-369.

217. Schroder R., Pohl W.-D.,Schaffier H. Lipopolysaccharid-spezifische Antikorper in Darmspiilsaft,Galle und Serum Maus nach oralen Application von inaktivierten Escherichia coli.-Biomed. Biochim.-Acta.-1988.-B.47.- № 9.-s. 915-920.

218. Segal S., Cohen J.R., Feldman M. Thymus-derived lymphocytes: Humoral and cellular reactions distinguished by hydrocortisone. Science.-1972.-Vol.175.- № 4026.- p. 1126-1128.

219. Shepard Т.Н. A catalog of teratogenic agents. 2-nd Baltimor. Iohns Hopkins University Press. 1976.

220. Staples R.E. Potential of direct application techniques for detection of teratogens. "New Approach. Evaluat. Abnormal Embrionic Develop.", Stuttgart, 1975.-pp. 71-81.

221. Stenden W., Slopek S., Mamczar A. and Kaczmarek M. Biological aspects of tuftsin activity.- Arch. Immunol. Ther. Exp.- 1983.-V.31.- p.574-578.

222. Stoernholm R.L., Manak R.C. Carbohydrate metabolism in leukocytes XIV. Regulation of pentose cycle activity and glycjgen metabolism during phagocitosis.- J. Reticuloendothel. Soc.,- 1970 -Vol.8.- № 6.-p.550-560.

223. Stossel T.D. Phagocytosis recognition and ingestion.- Neutrophil physiology and pathology.- London, 1975.- p.93-125.

224. Tsan M.F., Mcintyre P.A. Surface control of the hexose monophosphfate shunt activity in human polymorhonuclear leucocytes.- Blood.-1974.- Vol. 44.- № 6.-p.927.

225. Van Oss C.J., Gillman C.F., Bronson P.M., Border J.R. Opsonic properties of human serum alpha-2 as glycoprotein. Immunol.Communs.- 1974 a.- Vol. 3, 4.- p.329-335.

226. Wilson J.J. Embryological considerations in teratology. In : Teratology princi pies and technigens. London-N.-Y., 1965.- pp. 251-277.

227. Wilson James J. Current status of teratology. General principles and mechanismus derived from animal studies.- Handb. Teratol. Vol. J.- New York-London, 1977.- pp. 47-74.

228. Патентообладатель (ли): научно-исследовательский институт сельского хозяйства Северо-Востока им.Н.В.Рудницко го

229. Автор (авторы): Ивановский Александр Александрович и Лагунова Ольга Николаевнаб Февраля 1995г

230. Приоритет изобретения Дата поступления заявки в Роспатент б Февраля 1995г Заявка № 9 5101471

231. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений27 декабря 1997ггенеральный директор1. Утверждаю

232. Начальник госветинспекции ветеринарного отделамитета сельского хозяйства одовольствия Кировской области 1 Мыленков Е.В.7/1. У. С&'.ЛС(С01. АКТо проведении производственного испытания препарата грамин

233. Для проведения испытаний использовали грамин опытных серий, изготовленный в лаб. ветбиотехнологии НИИСХ Северо-Востока в течение 1995 -1998 гг.

234. Физико-химические испытания

235. Оценку свойств грамина опытных серий проводили в соответствии с требованиями ТУ. Результаты анализов приведены в таблице 1.

236. Результаты испытаний опытных серий грамина

237. Показатели Номера серий Предполагае007 011 012 мые нормативы по ТУ

238. Внешний вид Прозрачная Прозрачная Прозрачная Прозрачнаяжидкость жидкость жидкость жидкость

239. Цвет Бесцветный Бесцветный Бесцветный Бесцветный

240. Запах Отсутствует Отсутствует Отсутствует Отсутствует

241. Концентрация водородных ио- 6,05±0,13 6,43±0,11 6,27±0,30 6,00-6,70нов

242. Содержание сухих веществ, 30,2±0,1 30,5±0,3 35,1±0,1 20-40мг/мл

243. Содержание общего азота, % 0,47±0,03 0,51±0,09 0,49±0,04 0,45-0,60

244. Содержание аминного азота, % 33,9±0,6 35,3±0,55 34,6±0,9 не более 40

245. Безвредность в Безвреден Безвреден Безвреден Безвреден длятест-дозе 0,5 мл для мышеи для мышеи для мышеи мышей1. Препарат недолжен содер

246. Стерильность Стерилен Стерилен Стерилен жать живых микроорганизмов1571. Биологические испытания

247. Испытания эффективности грамина на телятах