Получение модифицированных форм интерферона, обладающих пролонгированным действием тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Губайдуллина, Альфия Азаматовна

• Губайдуллина, Альфия Азаматовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Губайдуллина, Альфия Азаматовна

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1 Интерферон и его типы. Биологическая значимость интерферона. Лекарственные формы интерферона.

1.2 Технологические методы пролонгирования действия лекарственных препаратов.

1.2.1 Липосомы как перспективные носители лекарственных средств.

1.2.2 Химическая модификация.

1.2.3 Создание микрокапсулированных лекарственных форм. Возможности микрокапсулирования. Методы микрокапсулирования.

1.3 Хитозан, используемый в качестве оболочки микрокапсул.

2. Экспериментальная часть.

2.1 Исходные материалы и химические реагенты.

2.2 Методы исследований.

3. Результаты и их обсуждение.

3.1 Получение микрочастиц.

3.1.1 Определение оптимальных параметров для получения микрочастиц.

3.1.2 Получение микрочастиц хитозана методами солевого высаживания (коацервация) и ионотропного гелеобразования.

3.2 Определение размера микрочастиц.

3.2.1 Определение размера микрочастиц световым микроскопом.

3.2.2 Определение гидродинамического диаметра.

3.3 Определение зета-потенциала.

3.4 Определение токсичности.

3.5 Сорбция белка на микрочастицы.

3.5.1 Исследование сорбции белка на микрочастицы в зависимости от концентрации загружаемого белка.

3.5.2 Исследование сорбции белка на микрочастицы в зависимости от времени взаимодействии.

3.6 Десорбция интерферона с микрочастиц in vitro.

3.7 Оценка динамики высвобождения интерферона с микрочастиц.

3.7.1 Определение оптимальной концентрации для иммунизации кроликов.

3.7.2 Изучение изменения содержания альфа-интерферона в крови кроликов после воздействия микрокапсулированной формы.

3.7.3 Математическое моделирование биологической доступности.

4. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение модифицированных форм интерферона, обладающих пролонгированным действием»

Актуальность проблемы.

Известно, что интерфероны (ИФН) принадлежат к наиболее сильнодействующим биологическим агентам и обладают широким спектром фармакологической активности [Под ред. P.E. Спиера, 1989].

Наибольшее применение в практической медицине из всего семейства ИФН получил лейкоцитарный альфа-интерферон (а-ИФН). Действие его* неспецифично, так как он обладает различными функциями - стимулирует деятельность Т-клеток и макрофагов, влияет непосредственно на ДНК - и РНК-содержащие вирусы, подавляя их рост и активность, задерживает рост и разрушает злокачественные клетки. [Под ред. В. М. Покровского, 1997]. Кроме того препараты а-ИФН используют в качестве иммуностимулятора совместно с основной терапией при заболеваниях, сопровождающихся значительным снижением иммунитета.

Однако фармакологическое действие в организме ИФН вообще и а-ИФН в частности весьма ограничено и составляет порядка 8 часов [Ф.И. Ершов, 1996]. Вследствие чего для продолжения лечения необходимо получать новую дозу препарата, что весьма проблематично из-за высокой стоимости лекарственного средства, особенно это касается инъекционных препаратов [В.Ф. Попов, 2002].

Увеличение сроков фармакологического действия а-ИФН в организме является актуальной задачей.

Медицинская биотехнология для создания современных лекарственных форм широко использует природные полимерные материалы, сочетающие высокую технологичность производства с безвредностью, а зачастую и лечебным действием [Park H.J., 2005]. Поиск таких биополимеров и изучение возможности их применения для приготовления лекарственных препаратов пролонгированного действия также является актуальной задачей.

Так в последнее время большое внимание уделяется разработке новых материалов из природного полисахарида хитозана, что обусловлено его низкой токсичностью, биосовместимостью и биоразрушаемостью [К.Д. Жоголев, 2001].

Одним из методов получения лекарственных форм на основе этих полимеров является микрокапсулирование — заключение лекарственного средства в полимерную оболочку. Микрокапсулирование представляет собой сложный5 физико-химический процесс, в результате которого должно^ быть обеспечено сохранение активности лекарственного средства, заданная скорость его выделения и определенный размер частиц [НПёеЬгапё О.Е. et а1., 2000]:

Решение этих- задач возможно- на основе комплексного- изучения взаимосвязи состава и свойств композиций, используемых для микрокапсулирования, а также физико-химических и биологических свойств микрокапсулированных форм лекарственных средств.

Наибольшие* сложности вызывает микрокапсулирование белков — водорастворимых полиэлектролитов, структура и биологические свойства которых чувствительны к незначительным изменениям внешних условий (рН, температуры, присутствия растворителей и др.) [В.Д. Солодовник, 1980]. Изучение закономерностей процесса* микрокапсулирования белков, ферментов и других полиэлектролитов в оболочки из биосовместимых и биодеградируемых полимеров» позволит решить актуальную проблему получения, эффективных лекарственных форм* с регулируемыми' медико-биологическимисвойствами.

Цель исследования. Получение микрочастиц ■ хитозана обратимо связываемых с а-ИФН с высокой сорбционной емкостью, и оценка динамики высвобождения интерферона из микрокапсул в модельном опыте на животных.

Задачи исследования:

1. Получить экспериментальные микрочастицы на основе хитозана определенной молекулярной массы, и оценить их физические параметры.

2. Определить оптимальные условия-получения стабильных микрочастиц для создания пролонгированной формы рекомбинантного а-ИФН.

3. Определить сорбционную способность в отношении а-ИФН экспериментальных образцов микрочастиц.

4. Исследовать способность микрочастиц хитозана, нагруженных белком, дозировано высвобождать интерферон in vitro.

5. Исследовать динамику высвобождения микрокапсулированного а-ИФН в модельном опыте на животных.

Научная новизна.

Показана возможность получения микрочастиц, из водорастворимого хитозана различной молекулярной массы (М.м.), пригодных для инкапсулирования. а-ИФН.

Установлена обратимость сорбции рекомбинантного а-ИФН на водорастворимый хитозан и изучена динамика высвобождения а-ИФН из микрочастиц в модельном опыте на животных.

Подобраны условия» получения микрочастиц хитозана, обладающих высокой сорбционной емкостью и дозированной* десорбцией в крови лабораторных животных. Показано, что микрочастицы хитозана с М.м 100 кДа, полученные методом осадительной коацервации могут сорбировать до 484,80 мг белка на 1 мл суспензии микрочастиц.

Обоснована возможность практического использования хитозана с М.м.

100 кДа для разработки* новой лекарственной формы рекомбинантного, а-ИФН пролонгированного действия для внутримышечного введения. t

Практическая значимость.

Установлено, что для получения пролонгированного лекарственного препарата а-ИФН можно использовать водорастворимый хитозан с М.м. 100 кДа. Обоснована* возможность использования полученных микрочастиц хитозана для разработки микрокапсулированных форм других белковых препаратов пролонгированного действия. Разработаны биотехнологические основы получения лекарственной формы рекомбинантного а-ИФН пролонгированного действия для внутримышечного введения;

Апробация работы.

Основные результаты исследований были представлены на ежегодной научно-практической конференции «Инновации РАН» (Казань, 2010), Х-ой международной конференции «Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана» (Нижний-Новгород, 2010), международной научной конференции «Биотехнология начала III тысячелетия (Саранск, 2010), XVII-ой международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2010» (Москва, 2010).

Диссертация апробирована на расширенном межлабораторном семинаре отдела биотехнологии Учреждения Российской академии наук Уфимского Научного Центра РАН (протокол № 3 от 13 ноября 2010 года).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, в том числе 2 статьи из списка ВАК.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 96 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (часть 1), описания объектов, материалов и методов исследования (часть 2), обсуждения результатов (часть 3), выводов и списка цитируемой литературы. Литература включает 127 источников, в том числе 75 иностранных. Диссертация содержит 7 таблиц, 13 рисунков.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Губайдуллина, Альфия Азаматовна

Выводы.

1. Оценены методы осадительной коацервации и ионотропного гелеобразования для получения микрокапсулированного альфа-интерферона. Установлено, что метод осадительной коацервации является перспективным для создания систем пролонгированного действия. Способ отличается простотой методики аппаратурного оформления, проведением процесса в мягких условиях при комнатной температуре.

2. Показана принципиальная возможность использования в качестве исходного материала биосовместимого, биоадгезивного, биодеградируемого хитозана для микрокапс^лирования альфа-интерферона, а также других белковых препаратов.

3. Установлено, что полученные нами образцы хитозана позволяют обратимо сорбировать до 484,80 мкг белка на 1 мл суспензии микрочастиц.

4. Исследована динамика высвобождения альфа-интерферона из микрокапсул в. модельном опыте на кроликах. Выявлено, что микрокапсулированная форма альфа-интерферона, полученная из хитозана с М.м. 100 кДа методом коацервации, обладает пролонгированным действием. Наблюдается увеличение времени циркуляции в крови препарата в два раза.

5. На основании исследований физико-химических свойств и биологической активности можно сказать, что микрочастицы хитозана с М.м. 100 кДа, полученные методом солевого высаживания являются оптимальными для создания пролонгированной формы альфа-интерферона и, вероятнее всего, для многих других белковых препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Губайдуллина, Альфия Азаматовна, 2010 год

1. Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Феклисова Л.В., Рубальский О.В., Давыдкин В.Ю. Интерфероновые иммунобиологические препараты, перспективы их применения в лечении инфекционных больных // Вестник РАМН - 2003. -№1. — С.44-48.

2. Бабаянц A.A., Малиновская В.В., Мешкова E.H. Фармакокинетика интерферона при ректальном введении //Вопросы.вирусологии 1986. - №1.1. С.83-84.

3. Бажутин Н.Б., Золин В.В., Колокольцов A.A., Таргонский С.Н. Перспективы применения липосомальных препаратов в медицинской практике // Terra Medica 2003. - №3. - С.32-34.

4. Балышева В.И., Власова H.H., Селина O.E., Белов С.Ю., Марквичева Е.А., Сухоруков Г.Б. Микрокапсулирование ДНК как способ доставки ДНК-вакцин // Росс, ветеринарный журнал. Мелкие домашние и дикие животные- 2007. №1. - С.25-26.

5. Бахов Н.И., Барсуков A.A., Земсков В.М. Клеточные системы защиты организма от вирусной инфекции: внутриклеточные механизмы защиты // Успехи современной биологии 2003. - Т. 123 - №2. - С.161-174.

6. Бикташева А.Р., Эткина Э.И., Бобкова Е.В., Школьная О.И., Исмагилова З.И., Фазылова A.A., Нагаева Г.М., Гурьева JI.JI. ИНФЕРОН в комплексной терапии детской астмы // Мат. конф. посвящ. 20-летию ЦПИЛ БГМУ — Уфа, 1999. С. 50-51.

7. Биотехнология клеток животных. Под ред. P.E. Спиера и Дж. Б. Гриффитса.// Перевод с англ. В.М. Тарасенко. Под ред. Г.А. Сафонова. М.: ВО Агропромиздат, 1989, Т.2 367 с.

8. Бондаренко JI.А. Эффективность реаферона при хроническом вирусном, гепатите В // Эпидемиология и инфекционные болезни — 1999. №6. — С.23-29.

9. Волкова Л.В., Кузнецов В.И. Современные лекарственные формы интерферона и их клинические свойства // Антибиотики и химиотерапия <2002. Т.47 - №11.-С.30-37.

10. Гамзазаде А.И. Структурная неоднородность как фактор изменчивости свойств хитина и хитозана // Хитин и хитозан: получение, свойства и применение / Под ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова. М.: Наука,2002.-С. 112-118.

11. Гендин Ю.З., Маркушин С.Г., Кривцов Г.Г., Акопова И.И. Хитозан как адъювант для инактивированных гриппозных вакцин, вводимых парентерально // Иммунология 2009. - №11. - С.14-19.

12. Государственная Фармакопея-СССР. 11-е изд. М.:Медицина, 1990. -Вып.2. - 400 с.

13. Грегориадис Г.Н. Липосомы в биологических системах / под.ред. Г.Н. Грегориадиса, A.A. Аллисона. — М.: Медицина, 1983. С. 4-45.

14. Давыдова В.Н., Горбач В.И., Ермак И.М. Цитокин-индуцирующая активность хитозанов // Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана: Мат. 9'междунар. конф. — Ставрополь, 2008 С. 159-161.

15. Денисов И.А. Применение рекомбинантного альфа-интерферона // Методические основы применения реаферона — человеческого интерферона а-2Ь- белка: Сб. мат. научн. конф. для врачей практиков — Кольцово, 1993.-С.31-32.

16. Ершов Ф.И. Интерфероны // Вопросы вирусологии -1998. №6. - С.247-252

17. Ершов Ф.И.* Медицинская значимость интерферонов и их индукторов // Вестник РАМН'- 2004. №2. - С.9-13.

18. Ершов, Ф.И. Система» интерферона-в норме и патологии /Ф.И.Ершов. Мп Медицина, 1996. С. 12- 68.

19. Жоголев К.Д., Никитин В.Ю. Экспериментально-лабораторное изучение иммуномодулирующих свойств препаратов хитина и хитозана // Иммунология. 1998. -№ 6. - С. 53-54.

20. Жоголев»К.Д.,. Никитин В.Ю, Цыган В.Н., Егоров В.Н. Разработка и изучение некоторых лекарственных форм препаратов на основе хитозана // Новые достижения в исследовании4 хитина и хитозана. — М:: Издательство ВНИРО; 2001. С. 163-167

21. Золин В.В., Колокольцев. A.A., Агафонова O.A., Бочкова Т.Г. Создание липосомального препарата, содержащего человеческий рекомбинантный альфа-интерферон // Вестник РАМН 1999. - №12. - С. 18-22.

22. Ильина A.B., Губайдуллина A.A., Мелентьев А.И., Варламов В.П. Получение микрочастиц на основе хитозана и исследование их взаимодействия с интерфероном // Приют, биохим. и микробиол.- 2008. -Т.44 №2. - С. 250-254.

23. Ильина A.B., Ткачёва Ю.В., Варламов В.П. Деполимеризация высокомолекулярного хитозана ферментным препаратом целловиридин Г20х // Прикл. Биохим. Микробиол. 2002. - Т.38. - №1. - С.5-13.

24. Кондратьева, Т.С. Технология лекарственных форм / Кондратьева Т.С., Иванова Л.А., Зеликсон Ю.И. М: Медицина, 1991, Т. 1. С.38-44; 159; 232251.

25. Кузнецов В.П. Интерферон в каскаде цитокинов: исторический и современный аспекты // Антибиотики 1998. - №5. - С.28-40.

26. Кузнецов, В.Ф. Конъюнктура рынка интерферонов. Микробиологическое производство // Кузнецов В.А., Коломейцева В.В., Щербач Т.А. — М: НИИСЭНТИ, 1993. вып. 1. - 38 с.

27. Мельников В.Р., Кобринский Г.Д., Львов Н.Д., Болотин И.М., Баринский И.Ф. Лечение липосомальным интерфероном экспериментальногогенитального герпеса // Вестник Академии медицинских наук СССР 1990. -№8. — С.35-37.

28. Никитин И.Г. Лечение хронического гепатита С: вчера, сегодня, завтра«// Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии -2002. -№6. -С. 11-24.

29. Никитин И.Г. Пегилированные интерфероны-альфа: новые возможности в лечении хронического гепатита С // Медицинская кафедра 2004. - №1. — С.41-50.

30. Парфенов В.В., Гребешок В.Н., Абрамова Е.И. Генно-инженерный интерферон альфа-2 (реаферон) в виде мази при лечении некоторых заболеваний кожи и слизистых // Антибиотики и химиотерапия — 1990. №9. -С.38-40.

31. Пат. 2232595 С2 РФ, 7 А61К38/08. Композиция альфа-интерферона в форме водного раствора / Н.Г.Лебедева, Ф.И.Фролов и др. Заявл 17.11.2000; Опубл. 20.07.2004.

32. Пат. 2255729 С1 РФ, 7 А61К9/08. Преперат интерферона-альфа в форме стабильного водного раствора для инъекций / П.А. Черепанов — Заявл-26.07.2004; Опубл. 10.07.2005.

33. Пат. 2255760 С2 РФ, 7 А61К38/21. Средство, обладающее иммуномодулирующим, противомикробным, антиоксидантным и регенерирующим действием (варианты) / В.Ф.Попов, Л.А.Денисов и др. -Заявл 11.03.2003; Опубл. 10.07.2005.

34. Пат. 2270692 С2 РФ, 7 А61К38/38. Пролонгированный раствор интерферона / В.В.Малиновская, Е.Ю.Малиновский и др. Заявл 04.11.2004; Опубл. 27.02.2006.

35. Попов, В.Ф. Лекарственные формы интерферонов / В.Ф.Попов. М.: Триада-Х, 2002. С. 21-27.

36. Садыков, А.С. Индукторы интерферона / A.G. Садыков, Ф.И. Ершов, А .С. Новохатский -М.: Медицина, 1978. С .47-67.

37. Соловьев, В.Д. Интерфероны в теории и практике, медицины / ВЩССоловьев; Т.А.Бёктемиров. М:; Медицина, Л 98-1. С. 85-901,

38. Солодовник В:Д: Микрокапсулирование У В;Д.Солодовник.-1980:- Ml: Химия.-216 с.

39. Сторожаков Р.И., Ушкалова Е.А. Современные принципы лечения гепатита

40. С // Фарматека 2001. - №11. - С. 49-55. 49L Физиология человека / под ред. В:. Mi Покровского, F. Фг Коротько; М:: Медицина, 1997.-ТЛ/, С. 298 -307

41. ФСИ 42-0504694605 Интерферон; человеческий; лейкоцитарный. Лиофилизат для приготовления раствора для интраназального введения 1000 ME -Введ. 30:12:05: до 30 • 12.10?

42. Хитин и хитозан: Получение, свойства и применение / Под: ред. К.Р.Скрябина; Р.А.Вихоревой; В ¡П.Варламова. М::Наука, 2002, 368 с.

43. Хитин и хитозан: природа,, получение и применение: Пер. с исп./ Под ред. M.Sc. Ana Pastor de AbramiЩелково: ООО «Мещера», 2004. 292 с.

44. Alshady R. Microspheres, Microcapsules and? Liposomes, MML-series / Ed. R.Alshady-19991-London: Citi Books-V. 1-2: :

45. Anal A.K.,. Stevens W.F., Remunan-Lopez C. Ionotropic cross-linked; chitosan microsperes for controlled release of ampicillin // Int. J. Pharni. 2006. - No.7. — P. 312-326.

46. Benita S. Microencapsulation: methods and industrial applications. In: Drugs and pharmaceutical sciences, vol.158 / Ed: S. Benita // Londom- New-York: Taylor and Francis group, 2005. 2-nd: edition - p. 783.

47. Berthold A., Cremer K., Kreuter J: Preparations and characterization of chitozan microspheres as drug carrier for prednisolone sodiumphosphate as model for antiinflammatory drugs // J'. Control; Release. 1996.- No.39.- Pi 17-25.

48. Besancon F., Bourgeade M.-F. Affinity of murine and human* interferon for concanavalin A. // J. Immunol. 1974. - V.l 13 - P. 1061-1063.

49. Billiau A. Interferon-y: bilogy and role in pathogenesis // Adv. Immunol. 1996. - No.62. - P.61-72.

50. Borecky L., Fuchsberger N., Hajnicka V. Electroforetic profiles and activities-of human interferon in heterologous cells // Intervirology 1974. - V.3- P.369-377.

51. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-due binding // Anal.Biochem. 1976. -No.72.-P.248.

52. Chapman A.P. PEGylated antibody fragments for improved therapy: a review // Adv. Drug Del. Rev. 2002. - No.54. - P.531-545.

53. Chen X.-G., Liu C.-S., Liu C.-G., Meng X.-H., Lee C.M., Park H:J. Preparation and biocompatibility of chitosan microcarriers as biomaterial // Biochemical Engineering Journal 2006: - No.27. - P.269-274.

54. Daubener W., Waganat N., Pilz K., Seghrouchni S., Fisher H.G., Hadding U. A new, simple, bioassay for human IFN-y // J.Immunol.Methods 1994. - No. 168. -P.39-43.

55. De Sena J., Rio G.J. Partial purification.and characterization of RTG-2 fish cell interferon // Infected Immunol. 1975. - V. 11 - P.815-822.

56. Desai K.G., Park H.J. Encapsulation of vitamin C in tripolyphosphate cross-linked chitosan microspheres by spray drying // J. Microencapsuh 2005. — V.22 — No.2. -P.179-189.

57. Diwan M., Park T.G. Stabilization of recombinant interferon-a by pegylated for encapsulation in PLGA microspheres // Int. J. Pharm. 2003. - V.252 — No. 1-2. -P.l 11-122.

58. Dorner F., Scriba M., Weil R. Interferon: evidence for its glycoprotein nature // Proc. Nat. Acad. Sei. USA 1973. - V.70. - P. 1981-1985.

59. Falkoff E., Havel E.A., Lewis J.A. Intracellular location of newly synthesized interferon in human FS-4 cells // Virology 1976. - V.75 - P.384-393.

60. Fantes K.H. Purifikation of inteferons. In: Symp. Series immunobiol. Standard. - Basel-New-York: Karger, 1970. - V.14 - P.47-54.

61. Francis S., Demetrios P. Procedure for preparation, of liposomes with large internal aqueous space and high capture by reverse-phase evaporation // Biochemistry 1978.-V.75 -No.9. -P.4194-4198.

62. Galabov A.S., Galabov S.M. Interferon induction by detoxicated bacterial endotoxins // Acta virol. 1973. - V. 17 - P.493-500.

63. Gorbach V.l. New glycolipids (chitooligosaccharide derivatives), possessing immunostimulating'and antitumor activities. // Carbohydr. Res. 1994. - V.260 -P. 73-82.

64. Gresser I., Tovey M.G., Bourali-Maury C. Efficacy of exogenous interferon treatment initiated after onset multiplication» of vesicular stomatitis virus in thebrains of mice // J:Gen.Virol. 1975. - V.27 - P.395-398:

65. Gupta K.C., Jabrail F.H. Preparation* and characterization of sodium* hexameta phosphate cross-linked chitozan microspheres for controlled and sustained delivery of centchroman // Int. J. Biol. Macromol. 2006. - V.30. -No.38. - P.3-5. ,

66. Hayatsu. H., Kubo T., Tanaka Y., Negeshi K. Water-insoluble nucleic acid-chitosan complexes and their preparation // Chem. Pharm. Bull. — 1999. — V.45 — P.1332-1339.

67. Hildebrand» G.E., Tack J.W. Microencapsulation of peptides and proteins. // Int. J. Pharm. 2000. - V.19-No.6. -P.173-176.

68. Hori M., Onishi H., Machida, Y. Evaluation* of eudragit-coated chitosan microparticles as an oral immune delivery system // Int. J. Pharm. 2005; - V.297 — No.l. - P.223-234.

69. Ilum L., Jabbal-GilM., Hinchcliffe M., Fisher A.N., Davis S.S. Chitosan as a novel nasal delivery system for vaccines // Adv. Drug Deli v. Rev. 2001. -No.51. -P.81-96.

70. Jyothi N. V., Prasanna M., Prabha S., Seetha Ramaiah P., Srawan G. and Sakarkar S. N. Microencapsulation Techniques, Factors Influencing Encapsulation Efficiency: A Review.// The Internet Journal of Nanotechnology.- 2009. V.3. -No.l.-P. 1-18.

71. Kas H.S. Chitosan: properties, preparations and application to microparticulate systems // J. Microencapsul. 1997. - V.14 -No.6. -P.689-711.

72. Klaus W., Gsell B., Labhardt A.M., Wipf B., Senn H. The three-dimensional high resolution structure of human interferon' a-2a determined by heteronuclear NMR spectroscopy in solution // J. Mol. Boil. 1997 - No.274. - P.661-675.

73. Knigt E. Antiviral and cell growth inhibitory activities reside in the same glycoprotein of human- fibroblast interferon // Nature 1976. - V.262 - P.302-303.

74. Ko J.A., Park H.J., Park Y.S., Hwang S.J., Park J.B. Chitosan microparticle preparation for controlled drug release by response surface methodology // J. Microencapsulation 2003. - V.20 - No.6. - P. 791-797.

75. Lameiro M.H., Lopes A., Martins L.O., Alves P.M., Melo E. Incorporation of a model protein into chitosan-bile salt microparticles // Int. J. Pharrn. 2006. -V.312 - No. 1-2. - P.l 19-149.

76. Meager A. Biological assays for interferons // J. of Immunol. Methods 2002. -No.261. -P.21-36.

77. Merigan T.C. Interferon: its inducers.and some aspects of host resistance in malignancy // Cancer Chemother. Repts. 1974. - Part 1 - V.58 - P.571-580.

78. Mogensen K.E., Cantell K. Human-leukocyte interferon: a-role for disulphide bonds // J. Gen. Virol'. 1974. - V.22 - P.95-103:

79. Molineux G.D: Pegylation: engeneering improved biopharmaceuticals f6r oncology // Pharmacotherapy 2003. - V.23 - No.8. - P.3-8.

80. Nagano Y., Maehara, N. Virus-inhibiting' factor or interferon activity on heterologous animal cells //Jap. J. Microbiol. 1975. - V.19 -P.447-448*.

81. Nandini-V., Katre A. The conjugation of proteins with polyethylene glycol? and other polymers //Adv. Drug Del. Rev. 1993. - V.10 -No.l. -P.91-114.

82. Park H.J., Ye M., Park K. Biodegradable polymers for. microencapsulation of drugs // Molecules 2005. - No. 10. - P. 146-161.

83. Patent 9742975 WO Chitosan-related. compositions and methods for delivery of nucleic acids into a cell / Murper R.J., Rolland A. 1997.

84. Paul W., Sarma S.P. Chitosan, a drug carrier for the 21-st century: a review // Pharma Sci. 2000. - No. 10. - P.5-22.

85. Pekarek K.J., Jacob J.S., Mathiowitz E. Double-walled polymer microspheres for controlled drug release // Nature 1994. - No.367. - P.258-260.

86. Roberts M.J., Bentley M.D., Harris J.M. Chemistry for peptide: and? protein; PEGylation // Adv. DrugDel. Rev. — 2002. — No:54; -P1459-476.

87. Shu X.Z. Shu K.J. Controlled drug release properties of ionically cross-linked chitosan beades: the influence of anion structure // Int.J.Pharm. — 2002. — V.233 -N0.2.-P.217-242.

88. Stewart W.E., De Somer, Edy V.G. Distinct molecular species of human interferons: requirements for stabilization and reactivation of human leukocyte and fibroblast interefrons // J: Gen. Virol. 1975. - V.26 - P;327-331.

89. Thassu D. Nanoparticulate drug delivery systems. In: Drugs and pharmaceutical sciences, vol.166 / Thassu D., Delcers M., Pathak Y. // London -New-York: Informa healthcare 2007. -P.33-61.

90. Uhlendorf C.P., Zimmerman E.M., Baron S. Heterologous activity of monkey interferons // Proc.Soc.exp.Biol (N.Y.) 1973. - V.144 - P.628.

91. Veronese F.M. Peptide and protein PEGylation: a review of problems and solutions // Biomaterials 2001. - No.22. - P.405-417.

92. Vila A., Sanchez A., Tobio M., Calvo P., Alonso M.J. Design of biodegradable particles for protein delivery // J. Control. Release 2002 - No.78. - P. 15-24.

93. Walsh S., Shah A., Mond J. Improved pharmacokinetics and reduced antibody reactivity of lysostaphin conjugated to polyethylene glycol // Antimicrobial agent and chemotherapy 2003. - V.47 - No.2. - P.554-558.

94. Wang W., Liu X., Zhang H., Yu W., Xiong Y., Xie W., Ma X. Microencapsulation using natural polysaccharides for drug delivery and cell implantation // J. Mater. Chem. 2006. -No.46. - P.3252-3267.

95. Xing Y.L., Xiang Y.K., Shuai Shi, Zheng X.L., Gang Guo Preparation of alginate coated chitosan microparticles for vaccine delivery // Biotechnology.-2008.-No.8.-P. 80-89.

96. Yamada K., Odomi M., Okada N., Fujita T., Yamamoto A. Chitosan oligomers as potential and- safe absorption enhancers improving the pulmonary absorption of interferon-alpha in rats // J. Pharm. Sci. 2005. - No. 94. - V.l 1. - P. 2432-2440.

97. Young T.J., Johnston K.P., Mishima K., Tanaka H. Encapsulation of lysozyme in a biodegradable polymer by precipitation with a vapor-over-liquid antisolvent. // J. Pharm. Sci. 1999. - V.88 - No.6. - P.640-650.

98. Yu-Sen Wang., Youngster S., Grace M., Bausch J., Bordens R., Wyss B Structural and biological characterization of pegylated recombinant interferon alpha-2b and its therapeutic implications // Adv. Drug Del. Reviews 2002. -No.54. - P.547-570.