Получение, характеристика и возможности дифференцировки эмбриональных стволовых клеток человека тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Прыжкова, Марина Вячеславовна

• Прыжкова, Марина Вячеславовна
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Прыжкова, Марина Вячеславовна

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Понятие стволовой клетки.

1.2. Региональные стволовые клетки человека и их дифференцировочлый потенциал.

1.2.1. Стволовые клетки костного мозга.

1.2.2. Стволовые клетки внутренних органов.

1.2.3. Стволовые клетки кожи, глаз, зубной ткани, молочной железы и головного мозга

1.3. Фетальные стволовые клетки.

1.3.1. Фетальные НСК.

1.3.2. Клетки эмбриональной карциномы.

1.3.3. Примордиальпые зародышевые стволовые клетки.

1.4. Эмбриональные стволовые клетки.

1.4.1. Эмбриональные стволовые клетки мыши.

1.4.2. Получение и характеристика ЭСК человека.

1.4.2.1. Получение линий ЭСК человека.

1.4.2.2. Характеристика линий ЭСК человека.

1.4.3. Использование различных фидеров для культивирования ЭСК человека.

1.4.4. Бесфидериое культивирование ЭСК человека.

1.4.5. Дифференцировка ЭСК человека.

1.4.5.1. Нейральная дифференцировка.

1.4.5.2. Дифференцировка ЭСК человека в кардиомиоциты.

1.4.5.3. Дифференцировка в клетки-предшественники сосудов и гемопоэтические клетки.

1.4.5.4. Дифференцировка в ипсулин-продуцирующие клетки и гепатоциты.

1.4.5.5. Дифференцировка в мелаиоциты и остеобласты.

1.4.5.6. Дифференцировка в клетки трофэктодермы.

1.4.6. Генетическое модифицирование.

1.4.7. Механизмы поддержания плюрипотентного состояния ЭСК.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы.

2.1.1. Ферменты и реактивы.

2.1.2. Антитела.

2.1.3. Праймера.45'

2.1.4. Эмбрионы человека.

2.1.5. Линии мышей.

2.1.6. Линии ЭСК мыши.

2.2. Методы.

2.2.1. Приготовление фидерного слоя мышиных эмбриональных фибробластов.

2.2.1.1. Состав среды для культивирования МЭФ.

2.2.1.2. Получение мышиных эмбриональных фибробластов.

2.2.1.3. Заморозка и оттаивание мышиных эмбриональных фибробластов.

2.2.1.4. Желатинизирование культуральных чашек и планшетов.

2.2.1.5. Обработка МЭФ митомицином С.

2.2.1.6. Облучение мышиных эмбриональных фибробластов.

2.2.2. Культивирование ЭСК мыши.

2.2.3. Получение химерных мышей.

2.2.4. Получение ЭСК мыши.

2.2.5. Получение ЭСК человека.

2.2.5.1. Состав среды для культивирования ЭСК человека.

2.2.5.2. Обработка бластоцист проназой.

2.2.5.3. Иммунохирургия.

2.2.5.4. Культивирование внутренней клеточной массы бластоцисты.

2.2.5.5. Приготовление раствора коллагеназы IV.

2.2.5.6. Культивирование клеточных линий.

2.2.6. Иммуноцитохимия.

2.2.6.1. Методика окраски антителами клеточных культур.

2.2.6.2. Методика окраски антителами срезов эмбриоидных телец.

2.2.7. Кариотипирование.

2.2.8. Получение эмбриоидных телец.

2.2.9. Дифференцировка ЭСК по нейральному пути.

2.2.10. Подготовка образцов клеток и выделение РНК.

2.2.11. Полуколичественный ОТ-ПЦР анализ.

2.2.12. Фракционирование фрагментов ДНК.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Освоение методик работы с ЭСК мыши.

3.2. Получение ЭСК мыши и человека.

3.3. Получение ЭСК человека с использованием метода иммунохирургии.

3.4. Заморозка ЭСК человека.

3.5. Морфологическая характеристика.

3.6. Кариотипирование.

3.7. Характеристика по специфическим маркёрам.

3.8. Дифференцировка ЭСК человека в эмбриоидных тельцах.

3.9. Нейральная дифференцировка.

3.10. Экспрессия генов NANOG, ОСТ4, DPPA5, DPPA5' и DPPA3 в недифференцированных ЭСК человека и на ранних этапах их дифференцировки.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение, характеристика и возможности дифференцировки эмбриональных стволовых клеток человека»

Возможность использования клеточных ресурсов человеческого организма для лечения ряда заболеваний всегда интересовала учёных и медиков. В 60-х годах изучение стволовых клеток взрослого человека началось с гемопоэтических и нейральных стволовых клеток (Till, J.E. и др., 1961; Altman, J. и др., 1965; Altman, J., 1969; Чертков И. J1. и Фридепштейн А. Я., 1966). В последствии стволовые клетки были обнаружены во многих органах и тканях, разработаны условия для их культивирования, но споры и дебаты о потенциальных возможностях их применения продолжаются до настоящего времени. Стволовые клетки взрослого организма не могут проходить большое количество пассажей и быстро дифференцируются, что ограничивает как возможности проведения научных исследований, так и их практическое применение. Поэтому получение в 1981 году линий ЭСК мыши открыло новые перспективы (Martin, G.R., 1981; Evans, M.J., Kaufman, М., 1981). Считается, что ЭСК способны к неограниченному числу клеточных делений, способны к самоподцержанию своей популяции и, вместе с тем, могут дифференцироваться в любой тип клеток. Сочетание пролиферативного потенциала эмбриональных стволовых клеток со способностью к дифференцировке делает их уникальными. Вместе с ЭСК появилась возможность изучения процессов дифференцировки клеток на ранних этапах развития эмбрионов, внесения генетических изменений в развивающийся организм, создания модельных животных для разработки методов лечения различных заболеваний.

Впервые эмбриональные стволовые клетки человека были получены Thomson, J.А. и др. в 1998 году. Дифференцированные производные ЭСК человека могут быть использованы для восстановления функциональности тканей при широком спектре заболеваний, связанных с утратой клетками возможности нормально функционировать. Сюда относятся нейродегенеративпые заболевания, повреждения ЦНС, заболевания сердца, диабет и другие. Более 16 млн. людей во всём мире страдает от болезней нервной системы, свыше 120 млн. от диабета и более 63 тыс. пациентов только в США нуждаются в донорских органах.

Трансплантация производных ЭСК человека могла бы существенно помочь в решении данных проблем. Линии ЭСК человека получены в ряде научно-исследовательских организаций Европы, США, Азии и стран Востока. Однако, весьма небольшой опыт работы с ними во всем мире (всего 5-7 лет), их ограниченная доступность (коммерчески можно приобрести всего 6 линий), их индивидуальная уникальность заставляет исследователей получать новые линии ЭСК человека.

В связи с вышесказанным в настоящей работе были поставлены следующие задачи:

1. Освоить методики работы с ЭСК мыши.

2. Получить и дать характеристику линиям ЭСК человека.

3. Оптимизировать существующую методику получения ЭСК человека.

4. Изучить экспрессию генов, связанных с поддержанием плюрипотентности, в ЭСК человека по мере их дифференцировки.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Прыжкова, Марина Вячеславовна

5. ВЫВОДЫ

1. Получены и полностью охарактеризованы три новых линии ЭСК человека: ESM01, ESM02, ESM03.

2. Разработана и улучшена методика выполнения иммунохирургии для выделения ВКМ бластоцист, сокращающая продолжительность манипуляций в 6 раз.

3. Показана дифференцировка новых линий ЭСК человека в производные всех трёх зародышевых листков. Показана возможность направленной дифференцировки по нейральному пути. Получены терминально дифференцированные производные всех трёх линий ЭСК человека - нейроны и клетки глии.

4. Впервые показано, что на начальных этапах дифференцировки ЭСК человека происходит снижение уровня экспрессии генов NANOG, ОСТ4, кодирующих транскрипционные факторы, которые поддерживают плюрипотентное состояние ЭСК человека. Обнаружено, что клеточные линии обладают индивидуальными характеристиками, а также впервые показано, что экспрессия генов DPPA3 и DPPA5 не может являться критерием в оценке недифференцированного статуса линий ЭСК человека.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С момента первого сообщения о получении клеточных линий ЭСК человека Thomson, J.А. и др. в 1998 году и до настоящего времени получение новых клеточных линий остаётся важной задачей. Сравнивая уже полученные и полностью охарактеризованные линии ЭСК человека, исследователи находят всё новые различия между ними, как при сравнении экспрессии поверхностных маркёров (SSEA-3, SSEA-4, TRA-1-60, TRA-1-81, GTCM2, TGT343), так и внутренних (Nanog, Oct4, Rexl), кроме того обнаружены различия в экспрессии ряда генов между клеточными линиями (Abeyta, M.J. и др., 2004; Bhattacharya, В. и др., 2004; Richards, М. и др., 2004). Не все клеточные линии сохраняют плюрипотептность и стабильность кариотипа при одинаковых условиях культивирования, способность дифференцировки в различные клеточные типы также варьирует среди клеточных линий (Rosier, E.S. и др., 2004). Таким образом, каждая отдельная клеточная линия ЭСК человека уникальна и, если планировать дальнейшее её использование в заместительной терапии, требует подробного изучения и характеристики. В связи с вышесказанным, получение новых клеточных линий, совершенствование методик как получения, так и культивирования, а также подробная характеристика особенностей линий ЭСК человека представляет большой научный и практический интерес.

В данной работе клеточные линии ЭСК человека были получены с использованием для выделения ВКМ бластоцист метода иммунохирургии. Для сокращения времени пребывания клеточной массы в неблагоприятных условиях стандартная методика (Solter, D., Knowles, В.В., 1975) была видоизменена. Эмбрион, предназначенный для выделения ВКМ инкубировали со смесью антител к клеткам трофэктодермы и комплемента, а не проводили последовательную инкубацию с серией отмывок от песвязавшихся реагентов. Это позволило сократить время проведения иммунохирургии более чем в 6 раз, что не может не иметь благоприятного влияния на процесс получения клеточных линий. Полученные три новые клеточные линии (ESM01, ESM02, ESM03) прошли более 100 клеточных удвоений, имеют нормальные карнотнпы, успешно переносят заморозку. Диффереицировка ЭСК в эмбриоидных тельцах позволила показать способность формирования производных всех трёх зародышевых листков для всех полученных клеточных линий. Всё это свидетельствует о том, что полученные клеточные линии плюрипотентны, в течение продолжительного культивирования сохраняют свои свойства и кариотип. Кроме того, способны дифференцироваться в клетки нервной ткани - нейроны и клетки глии, то есть способны производить терминально дифференцированные клеточные типы. Полученные клеточные линии экспрессируют специфические маркёры ЭСК человека. Все линии ЭСК человека имеют сходные образцы экспрессии поверхностных маркёров, а также транскрипционных факторов Nanog и Oct4, но, как оказалось при дальнейшем их изучении, отличаются по экспрессии генов DPPA3 и DPPA5. Следовательно, каждая клеточная линия, помимо общих характерных качеств, имеет и свои индивидуальные особенности. Экспрессия генов ОСТ4 и NANOG в недифференцированных ЭСК человека, а также снижение экспрессии этих генов по мере их дифференцировки свидетельствует о важности экспрессии ОСТ4 и NANOG в поддержании плюрипотентности ЭСК человека.

Таким образом, подводя итог проделанной работе, можно утверждать, что полученные три клеточные линии ЭСК человека обладают характеристиками недифференцированных, плюрипотентных ЭСК человека: способны к неограниченному количеству клеточных делений, имеют высокую пролиферативную активность, нормальный кариотип, экспрессируют специфические маркёры недифференцированных ЭСК человека, способны к дифференцировке в клетки-предшественники всех трёх зародышевых листков и в терминально дифференцированные клетки нервной ткани. Показана важность экспрессии транскрипционных факторов Nanog и Oct4 для сохранения недифференцированного состояния ЭСК человека, кроме того, клеточные линии обладают индивидуальными характеристиками, обнаруживая различия в экспрессии ОСТ4-коррелирующих генов. Поскольку недифференцированные ЭСК человека одной из клеточных линий не экспрессируют гены DPP A3 и DPPA5, ставится под вопрос возможность использования этих генов в качестве маркёров.

Полученные клеточные линии можно в дальнейшем использовать в научных целях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Прыжкова, Марина Вячеславовна, 2004 год

1. Полтавцева, Р.А., Ревищии, А.В., Александрова, М.А., Корочкин, Л.И., Викторов, И.В., Сухих, Г.Т. Нейральные стволовые и прогениторные клетки эмбрионов и плодов человека -основа новых биомедицинских технологий. Онтогенез. 2003, 34: 211-215.

2. Прыжкова, М.В., Закеева, И.Р., Кибардин, А.В., Георгиев, Г.П., Киселев, СЛ. Использование генетически модифицированных эмбриональных стволовых клеток для получения трансгенных животных. Генетика. 2004, том 40, №3: 1-5.

3. Прыжкова, М.В., Лагарькова, М.А. Стволовые клетки: современные тенденции исследований. Онтогенез. 2004, том 35, № 6: 473-475.

4. Хэм А., Кормак Д. Гистология. 1983. Москва, "Мир", том 2: 14-24.

5. Чертков, И.Л., Фриденштейн, А.Я. Гемопоэтическая клетка и ее диффереицировка. Успехи Современной Биологии. 1966, 62: 97-114.

6. Чертков, И.Л., Фриденштейн, А.Я. Клеточные основы кроветворения. "Медицина", 1977, 274 с.

7. Abeyta, M.J., Clark, А.Т., Rodriguez, R.T., Bodnar, M.S., Pera, R.A.R., Firpo, M.T. Unique gene expression signatures of independently-derived human embryonic stem cell lines. Hum. Mol. Gen. 2004,13: 601-608.

8. Adamson, E.D., Minchiotti, G., Salomon, D.S. Cripto: a tumor growth factor and more. J. Cell Physiol. 2002, 190:267-78.

9. Alison, M.R., Vig, P., Russo, F., Bigger, B.W., Amofah, E., Themis, M., Forbes, S. Hepatic stem cells: from inside and outside the liver? Cell Prolif. 2004, 37: 1-21.

10. Altman, J., Das, G.D. Autoradiographic and histological evidence of postnatal hippocampal neurogenesis in rats. J. Сотр. Neurol. 1965, 124: 319-35.

11. Amit, M., Itskovitz-Eldor, J. Derivation and spontaneous differentiation of human embryonic stem cells. J Anat. 2002,200: 225-232.

12. Amit, M., Margulets, V., Segev, H., Shariki, K., Laevsky, I., Coleman, R., Itskovitz-Eldor, J. Human feeder layers for human embryonic stem cells. Biol Reprod. 2003, 68: 2150-2156.

13. Amit, M., Shariki, C., Margulets, V., Itskovitz-Eldor, J. Feeder layer- and serum-free culture of human embryonic stem cells. Biol. Reprod. 2004, 70: 837-845.

14. Anderson, D.G., Gage, F.H., Weissman, I.L. Can stem cells cross lineage boundaries? Nat. Med. 2001,7:393-395.

15. Andrews, P.W., Goodfellow, P.N., Shevinsky, L., Bronson, D.L., Knowles, B.B. Cell surface antigens of a clonal human embryonal carcinoma cell line: morphological and antigenic differentiation in culture. Int. J. Cancer. 1982, 29: 523-531.

16. Andrews, P.W. Pluripotent embryonal carcinoma clones derived from the human teratocarcinoma cell line Tera-2, Differentiation in vivo and in vitro. Lab. Invest. 1984, 50: 147-162.

17. Andrews, P.W. Teratocarcinomas and human embryology: pluripotent human EC cell lines. APMIS. 1998. 106, 158-167.

18. Anneren, C., Cowan, C.A., Melton, D.A. The Src family of tyrosine kinases is important for embryonic stem cell selfrenewal. J. Biol. Chem. 2004, 279: 31590-31598.

19. Anversa, P., Nadal-Ginard, B. Myocyte renewal and ventricular remodeling. Nature. 2002, 415: 240-243.

20. Assady, S., Maor, G., Amit, M., Itskovitz-Eldor, J., Skorecki, K. L., & Tzukerman, M. Insulin production by human embryonic stem cells. Diabetes. 2001, 50: 1691-1697.

21. Baum, C.M., Weissman, I.L., Tsukamoto, A.S., Buckle, A.M., Peault, B. Isolation of a candidate human hematopoietic stem-cell population. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992, 89: 28042808.

22. Bhardwaj, G., Murdoch, В., Wu, D., Baker, D.P., Williams, K.P., Chadwick, K., Ling, L.E., Karanu, F.N., Bhatia, M. Sonic hedgehog induces the proliferation of primitive human hematopoietic cells via BMP regulation. Nat. Immunol. 2001, 2: 172.

23. Bongso, A., Fong, C.Y., Ng, S.C., Ratnam, S. Isolation and culture of inner cell mass cells from human blastocysts. Hum Reprod. 1994, 9: 2110-2117.

24. Bonner-Weir, S., Taneja, M., Weir, G.C., Tatarkiewicz, K., Song, K., Sharma, A., O'Neil, J.J. In vitro cultivation of human islets from expanded ductal tissue. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000, 97: 7999-8004.

25. Bonner-Weir, S., Sharma, A. Pancreatic stem cells. J. Pathol. 2002; 197: 519-526.

26. Borlongan, С.V., Tajima, Y., Trojanowski, J.Q., Lee, V.M., Sanberg, P.R. Transplantation of cryopreserved human embryonal carcinoma-derived neurons (NT2N cells) promotes functional recovery in ischemic rats. Exp. Neurol. 1998, 149: 310-321.

27. Bortvin, A., Eggan, K., Skaletsky, H., Akutsu, H., Berry, D.L., Yanagimachi, R., Page, D.C., Jaenisch, R. Incomplete reactivation of Oct4-related genes in mouse embryos cloned from somatic nuclei. Development. 2003, 130: 1673-1680.

28. Bortvin, A., Goodheart, M., Liao, M., Page, D.C. Dppa3 / Pgc7 / Stella is a maternal factor and is not required for germ cell specification in mice. BMC Dev. Biol. 2004, 4: 2-6.

29. Bowles, J., Teasdale, R.P., James, K., Koopman, P. Dppa3 is a marker of pluripotency and has a human homologue that is expressed in germ cell tumours. Cytogenet. Genome Res. 2003, 101: 261265.

30. Bradley, A., Evans, M., Kaufman, M. H., Robertson, E. Formation of germ-line chimaeras from embryo-derived teratocarcinoma cell lines. Nature. 1984, 309: 255-256.

31. Brandenberger, R., Khrebtukova, I., Thies, R.S., Miura, Т., Jingli, C., Puri, R., Vasicek, Т., Lebkowski, J., Rao, M. MPSS profiling of human embryonic stem cells. BMC Dev. Biol. 2004, 4: 10-25.

32. Brandy, D.A. The art of mixing follicular units and follicular groupings in hair restoration surgery. Dermatol. Surg. 2004, 30: 846-855.

33. Brazelton, T.R., Rossi, F.M., Keshet, G.I., Blau, H.M. From marrow to brain: expression of neuronal phenotypes in adult mice. Science. 2000, 290: 1775-1779.

34. Brittan, M., Wright, N.A. The gastrointestinal stem cell. Cell Prolif. 2004, 37: 35-53.

35. Bronson, D.L., Andrews, P.W., Solter, D., Cervenka, J., Lange, P.H., Fraley, E.E. A cell line derived from a metastasis of a human testicular germ-cell tumor. Cancer Res. 1980, 40: 2500-2506.

36. Carpenter, M.K., Inokuma, M.S., Denham, J., Muj'taba, Т., Chui, C.P., Rao, M.S. Enrichment of neurons and neural precursors from human embryonic stem cells. Exp. Neurol. 2001, 172: 383-397.

37. Carpenter, M.K., Rosier, E., Rao, M.S. Characterization and differentiation of human embryonic stem cells. Cloning Stem Cells. 2003, 5: 79-88.

38. Chambers, I., Colby, D., Robertson, M., Nichols, J., Lee, S., Tweedie, S., Smith, A. Functional expression cloning of Nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells. Cell. 2003, 113: 643-655.

39. Chen, L.R., Shiue, Y.L., Bertolini, L., Medrano, J.F., BonDurant, R.H., Anderson, G.B. Establishment of pluripotent cell lines from porcine preimplantation embryos. Theriogenology. 1999, 52: 195-212.

40. Cheng, L., Hammond, H., Ye, Z., Zhan, X., Dravid, G. Human adult marrow cells support prolonged expansion of human embryonic stem cells in culture. Stem Cells. 2003, 21: 131-142.

41. Chiu, A., Rao, M.S. Human embryonic stem cells. Humana Press Inc. 2003.

42. Chomcznski, P., Sacchi, N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction. Analytical Biochemistry. 1987, 162: 156-159.

43. Clark, A.T., Bodnar, M.S., Fox, M., Rodriquez, R.T., Abeyta, M.J., Firpo, M.T., Pera, R.A. Spontaneous differentiation of germ cells from human embryonic stem cells in vitro. Hum. Mol. Gen. 2004, 13: 727-739.

44. Cowan, C.A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Witmyer, J., Zucker, J.P., Wang, S., Morton, C.C., McMahon, A.P., Powers, D., Melton, D.A. Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts. N, Engl. J. Med. 2004, 350: 1353-1356.

45. Daherori, L., Opitz, S.L., Zaehres, H., Lensch, W.M., Andrews, P.W., Itskovitz-Eldor, J., Daley, G.Q. LIF/STAT3 signaling fails to maintain self-renewal of human embryonic stem cells. Stem Cells. 2004, 22: 770-778.

46. Doetschman, Т., Williams, P., Maeda, N. Establishment of hamster blastocyst-derived embryonic stem (ES) cells. Dev. Biol. 1988, 127: 224-227.

47. Du, F., Giles, J.R., Foote, R.H., Graves, K.H., Yang, X., Moreadith, R.W. Nuclear transfer of putative rabbit embryonic stem cells leads to normal blastocyst development. J. Reprod. Fertil. 1995,104:219-223.

48. Durcova-Hills, G., Wianny, F., Merriman, J., Zernicka-Goetz, M., McLaren, A. Developmental fate of embryonic germ cells (EGCs), in vivo and in vitro. Differentiation. 2003, 71: 135-141.

49. Eiges, R., Schuldiner, M., Drukker, M., Yanuka, O., Itskovitz-Eldor, J., Benvenisty, N. Establishment of human embryonic stem cell-transfected clones carrying a marker for undifferentiated cells. Curr. Biol. 2001, 11: 514-518.

50. Eriksson, P.S., Perfilieva, E., Bjork-Eriksson, Т., Alborn, A.M., Nordborg, C., Peterson, D.A., Gage, F.H. Neurogenesis in the adult human hippocampus. Nat. Med. 1998, 4: 1313-1317.

51. Esteva, F.J., Hortobagyil, G.N. Prognostic molecular markers in early breast cancer. Breast Cancer Res. 2004, 6: 109-118.

52. Evans, M.J., Kaufman M. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. Nature. 1981,292: 154-156.

53. Fernandes, M., Sangwan, V.S., Rao, S.K., Basti, S., Sridhar, M.S., Bansal, A.K., Dua, H.S. Limbal stem cell transplantation. Indian J. Ophthalmol. 2004, 52: 5-22.

54. First, N.L., Sims, M.M., Park, S.P., Kent-First, M.J. Systems for production of calves from cultured bovine embryonic cells. Reprod. Fertil. Dev. 1994, 6: 553-62.

55. Fogh, J., Trempe, G. New human tumor cell lines. Human Tumor Cells In Vitro. Plenum, New York. 1975, pp. 115-159.

56. Friedenshtein, A., Owen, M. Stromal stem cells: marrow derived osteogenic progenitors. CIBA Found. Symp. 1976, 136: 42-60.

57. Fridenshtein, A.Ia. Stromal bone marrow cells and the hematopoietic microenvironment. Arkh. Patol. 1982, 44: 3-11.

58. Gandarillas, A. Watt, F.M. c-Myc promotes differentiation of human epidermal stem cells. Genes Dev. 1997, 11: 2869-2882.

59. Gandelman, M., Epstein, J.S. Hair transplantation to the eyebrow, eyelashes, and other parts of the body. Facial Plast. Surg. Clin. North. Am. 2004, 12: 253-261.

60. Gerecht-Nir, S., Fishman, В., Itskovitz-Eldor, J. Cardiovascular potential of embryonic stem cells. Anat. Rec. 2004, 276A: 58-65.

61. Ghazizadeh, S., Taichman, L.B. Multiple classes of stem cells in cutaneous epithelium: a lineage analysis of adult mouse skin. EMBO J. 2001, 20: 1215-1222.

62. Gordon, M.Y., Riley, G.P., Watt, S.M., Greaves, M.F. Compartmentalization of a haematopoietic growth factor (GM-CSF) by glycosaminoglycans in the bone marrow microenvironment. Nature. 1987, 326: 403-405.

63. Graves, K.H., Moreadith, R.W. Derivation and characterization of putative pluripotential embryonic stem cells from preimplantation rabbit embryos. Mol. Reprod. Dev. 1993, 36: 424-433.

64. Gropp, M., Itsykson, P., Singer, O., Ben-Hur, Т., Reinhartz, E., Galun, E., Reubinoff, B.E. Stable genetic modification of human embryonic stem cells by lentiviral vectors. Mol. Ther. 2003, 7:281-287.

65. Guenechea, G., Gan, O.I., Dorrell, C., Dick, J.E. Distinct classes of human stem cells that differ in proliferative and self-renewal potential. Nat. Immunol. 2001, 2: 75-82.

66. Hart, A.H., Hartley, L., Ibrahim, M., Robb, L. Identification, Cloning and Expression Analysis of the Pluripotency Promoting Nanog Genes in Mouse and Human. Dev. Dyn. 2004, 230: 187-198.

67. Herford, A.S. Early repair of avulsive facial wounds secondary to trauma using interpolation flaps. J. Oral Maxillofac. Surg. 2004, 62: 959-965.

68. Hirschi, K.K., Goodell, M.A. Common origins of blood and blood vessels in adults? Differentiation. 2001, 68: 186-192.

69. Holt, S.E., Wright, W.E., Shay, J.W. Pathways for the regulation of telomerase activity. European J. Cancer. 1997, 33: 761-766.

70. Humphrey, R.K., Beattie, G.M., Lopez, A.D., Bucay, N., King, C.C., Firpo, M.T., Rose-John, S., Hayek, A. Maintenance of pluripotency in human embryonic stem cells is STAT3 independent. Stem Cells. 2004, 22: 522-530.

71. Hurlebert, M.S., Gianani, R.I., Hutt, C., Freed, C.R., Kaddis, F.G. Neural transplantation of hNT neurons for Huntington's disease. Cell Transplant. 1999, 8: 143-151.

72. Iannaccone, P.M., Taborn, G.U., Garton, R.L., Caplice, M.D., Brenin, D.R. Pluripotent embryonic stem cells from the rat are capable of producing chimeras. Dev. Biol. 1994, 163: 288292.

73. Itskovitz-Eldor, J., Schuldiner, M., Karsenti, D., Eden, A., Yanuka, O., Amit, M., Soreq, H., & Benvenisty,N. Differentiation of human embryonic stem cells into embryoid bodies comprising the three embryonic germ layers. Mol. Med. 2000, 6: 88-95.

74. Iwasaki, S., Campbell, K.H., Galli, C., Akiyama, K. Production of live calves derived from embryonic stem-like cells aggregated with tetraploid embryos. Biol. Reprod. 2000, 62: 470-475.

75. Javaid, M., Feldberg, L., Gipson, M. Primary repair of dog bites to the face: 40 cases. J. R. Soc. Med. 1998,91:414-416.

76. Johe, K.K., Hazel, T.G., Muller, Т., Dugich-Djordjevic, M.M., McKay, R.D. Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system. Genes Dev. 1996, 10: 3129-3140.

77. Jones, E. A., Tosh, D., Wilson, D. I., Lindsay, S., & Forrester, L. M. Hepatic differentiation of murine embryonic stem cells. Exp. Cell Res. 2002, 272: 15-22.

78. Kagi, D., Ledermann, В., Burki, K., Seiler P, Odermatt B, Olsen KJ, Podack ER, Zinkernagel RM, Hengartner H. Cytotoxicity mediated by T cells and natural killer cells is greatly impaired in perforin-deficient mice. Nature. 1994, 369: 31-37.

79. Kaufman, D. S., Hanson, E. Т., Lewis, R. L., Auerbach, R., & Thomson, J. A. (2001). Hematopoietic colony-forming cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 98: 10716-10721.

80. Klassen, H., Sakaguchi, D.S., Young, M.J. Stem cells and retinal repair. Prog. Retin. Eye Res. 2004, 23: 149-181.

81. Kleppner, S.R., Robinson, K.A., Trojanowski, J.Q., Lee, V.M. Transplanted human neurons derived from a teratocarcinoma cell line (NTERA2) mature, integrate and survive for over 1 year in the nude mouse brain. J. Сотр. Neural. 1995, 357: 618-632.

82. Kocher, A.A., Schuster, M.D., Szabolcs, M.J., et al. Neovascularization of ischemic myocardium by human bone-marrow-derived angioblasts prevents cardiomyocyte apoptosis, reduces remodeling and improves cardiac function. Nat. Med. 2001, 7: 430-436.

83. Kondziolka, D., Wechsler, L., Goldstein, S., et al. Transplantation of cultured human neuronal cells for patients with stroke. Neurology. 2000, 55: 565-569.

84. Kontgen, F., Suss, G., Stewart, C., Steinmetz, M., Bluethmann, H. Targeted disruption of the MHC class II Aa gene in C57BL/6 mice. Int. Immunol. 1993, 5: 957-964.

85. Krause, D.S., Theise, N.D., Collector, M.I., et al. Multi-organ, multi-lineage engraftment by a single bone marrow-derived stem cell. Cell. 2001, 105: 369-377.

86. Lacaud, G., Robertson, s., Palis, J., Kennedy, M., Keller, G. Regulation of hemangioblast development. Ann. NY Acad. Sci. 2001, 938: 96-107; discussion, 8.

87. Ledermann, В., Burki, K. Establishment of a germ-line competent C57BL/6 embryonic stem cell line. Exp. Cell Res. 1991, 197: 254-258.

88. Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itskovitz-Eldor, J., Langer, R. (2002). Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002, 99: 4391-4396.

89. Lin, H., Lei, J., Wininger, D., Nguyen, M.T., Khanna, R., Hartmann, C., Yan, W.L., Huang, S.C. Multilineage potential of homozygous stem cells derived from metaphase II oocytes. Stem Cells. 2003,21: 152-161.

90. Ma, Y., Ramezani, A., Lewis, R., Hawley, R. G., & Thomson, J. A. High-level sustained transgene expression in human embryonic stem cells using lentiviral vectors. Stem Cells. 2003, 21: 111-117.

91. Marshall, V.S., Waknitz, M.A., Thomson, J.A. Isolation and maintenance of primate embryonic stem cells. Methods Mol.Biol. 2001, 158: 11-8.

92. Martin, G.R. Isolation of a pluripotent cell line from early mouse embryos cultured in medium conditioned by teratocarcinoma stem cells. Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1981, 78: 7634-7638.

93. Martinez-Liarte, J.H., Solano, F., Lozano, J.A. Effect of penicillin-streptomycin and other antibiotics on melanogenic parameters in cultured B16/F10 melanoma cells. Pigment Cell Res. 1995,8: 83-88.

94. Martinick, J.H. The latest developments in surgical hair restoration. Facial Plast. Surg. Clin. North. Am. 2004, 12: 249-252.

95. McBurney, M.W. Reuhl, K.R., Ally, A.I., Nasipuri, S., Bell, J.C., Craig, J. Differentiation and maturation of embryonal carcinoma-derived neurons in cell culture. J. Neurosci. 1988, 8: 10631073.

96. Misra, R.P., Bronson, S.K., Xiao, Q., Garrison, W., Li, J., Zhao, R., Duncan, S.A. Generation of single-copy transgenic mouse embryos directly from ES cells by tetraploid embryo complementation. BMC Biotechnol. 2001, 1: 12.

97. Mitalipova, M., Beyhan, Z., First, N.L. Pluripotency of bovine embryonic cell line derived from precompacting embryos. Cloning. 2001, 3: 59-67.

98. Mitsui, K., Tokuzawa, Y., Itoh, H., Segawa, K., Murakami, M., Takahashi, K., Marayama, M., Maeda, M., Yamanaka, S. The homeoprotein Nanog is required for maintenance of pluripotency in mouse epiblast and ES cells. Cell. 2003, 113: 631-642.

99. Moore, M.A.S. Putting the neo into neoangiogenesis. J. Clin. Invest. 2002, 109: 313-315.

100. Muraglia, A., Cancedda, R., Quarto, R. Clonal mesenchymal progenitors from human bone marrow differentiate in vitro according to a hierarchical model. J. Cell Science. 2000, 113: 11611166.

101. Nagy, A., Rossant, J., Nagy, R., Abramow-Newerly, W., Roder, J.C. Derivation of completely cell culture-derived mice from early-passage embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993, 90: 8424-8428.

102. Nagy, A. Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 2003. 3rd edition, pp. 764.

103. Neuringer, I.P., Randell, S.H. Stem cells and repair of lung injuries. Respiratory Research. 2004,5: 6.

104. Nichols, J., Evans, E.P., Smith, A.G. Establishment of germ-line-competent embryonic stem (ES) cells using differentiation inhibiting activity. Development. 1990, 110: 1341-1348.

105. Nichols, J., Zevnik, В., Anastassiadis, K., Niwa, H., Klewe-Nebenius, D., Chambers, I., Scholer, H., Smith, A. Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct4. Cell. 1998, 95: 379-391.

106. NIH. Stem cells: scientific progress and future research directions. 2001, p.23, ES-1.

107. Niwa, H., Chambers, I., Smith, A. Self-renewal of pluripotent embryonic stem cells is mediated via activation of STAT3. Genes Development. 1998, 12: 2048-2060.

108. Niwa, H., Miyazaki, J., Smith, A.G. Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells. Nat. Genet. 2000, 24: 372-376.

109. Noben-Trauth, N., Kohler, G., Burki, K., Ledermann, B. Efficient targeting of the IL-4 gene in a BALB/c embryonic stem cell line. Transgenic Res. 1996, 5: 487-491.

110. Notarianni, E., Galli, C., Laurie, S., Moor, R.M., Evans, M.J. Derivation of pluripotent, embryonic cell lines from the pig and sheep. J. Reprod. Fertil. Suppl. 1991,43: 255-60.

111. Oliver, J.A. Adult renal stem cells and renal repair. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 2004, 13: 17-22.

112. Otto, W.R. Lung epithelial stem cells. J. Pathol. 2002, 197: 527-535.

113. Park, J.H., Kim, S.J., Oh, E.J., Moon, S.Y., Roh, S.I., Kim, C.G., Yoon, H.S. Establishment and maintenance of human embryonic stem cells on STO, a permanently growing cell line. Biol. Reprod. 2003, 69: 2007-2014.

114. Park, S.P., Lee, Y.J., Lee, K.S., Ah Shin, H., Cho, H.Y., Chung, K.S., Kim, E.Y., Lim, J.H. Establishment of human embryonic stem cell lines from frozen-thawed blastocysts using STO cell feeder layers. Hum. Reprod. 2004, 19: 676-684.

115. Payer, В., Saitou, M., Barton, S.C., Thresher, R., Dixon, J.P., Zahn, D., Colledge, W.H., Carlton, M.B., Nakano, Т., Surani, M.A. Stella is a maternal effect gene required for normal early development in mice. Curr. Biol. 2003, 13: 2110-2117.

116. Pease, S., Braghetta, P., Gearing, D., Grail, D., Williams, R.L. Isolation of embryonic stem (ES) cells in media supplemented with recombinant leukemia inhibitory factor (LIF). Dev. Biol. 1990, 141: 344-352.

117. Peichev, M., Naiyer, A.J., Pereira, D. et al. Expression of VEGFR-2 and AC 133 by circulating human CD34+ cells identifies a population of functional endothelial precursors. Blood. 2000, 95: 952-958.

118. Pera, M.F., Cooper, S., Mills, J., Parrington, J.M. Isolation and characterization of a multipotent clone of human embryonal carcinoma cells. Differentiation. 1989, 42: 10-23.

119. Pera, M.F., Reubinoff, В., Trounson, A. Human embryonic stem cells. J. Cell Sci. 2000, 113: 5-10.

120. Pickering, S.J., Braude, P.R., Patel, M., Burns, C.J., Trussler, J., Bolton, V., Minger, S. Preimplantation genetic diagnosis as a novel source of embryos for stem cell research. Reprod. BioMed. Online. 2003, 7: 353-364.

121. Pittenger, M.F., Mackay, A.M., Beck, S.C., Jaiswal, R.K., Douglas, R., Mosca, J.D., Moorman, M.A., Simonetti, D.W., Craig, S., Marshak, D.R. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells. Science. 1999, 284: 143-147.

122. Pittenger, M.F., Martin, B.J. Mesenchymal stem cells and their potential as cardiac therapeutics. Circulation Research. 2004, 95: 9-20.

123. Poole, T.J., Finkelstein, E.B., Cox, C.M. The role of FGF and VEGF in angioblast induction and migration during vascular development. Dev. Dyn. 2001, 220: 1-17.

124. Potten, C.S., Booth, C., Pritchard, D.M. The intestinal epithelial stem cell: the mucosal governor. Int. J. Exp. Pathol. 1997, 78: 219-243.

125. Poulsom, R., Alison, M.R., Forbes, S.J., Wright, N.A. Adult stem cell plasticity. J. Pathol. 2002, 197:441-456.

126. Rajagopal, J., Anderson, W. J., Kume, S., Martinez, О. I., Melton, D. A. Insulin staining of ES cell progeny from insulin uptake. Science. 2003, 299: 363.

127. Reubinoff, B.E., Pera, M.F., Fong, C.Y., Trounson, A., Bongso, A. Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro. Nat. Biotechnol. 2000, 18: 399-404.

128. Reubinoff, B.E., Itsykson, P., Turetsky, Т., Pera, M.F., Reinhartz, E., Itzik, A., Ben-Hur, T. Neural progenitors from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2001, 19: 1134-1140.

129. Reya, Т., Morrison, S.J., Clarke, M.F., Weissman, I.L. Stem cells, cancer, and cancer stem cells. Nature. 2001, 414: 105-111.

130. Reynolds, J.N. Ryan, P.J., Prasad, A., Paterno, G.D. Neurons derived from embryonal carcinoma (P19) cells express multiple GABA(A) receptor subunits and fully functional GABA(A) receptors. Neurosci. Lett. 1994, 165: 129-132.

131. Richards, M., Fong, C.Y., Chan, W.K., Wong, P.C., Bongso, A. Human feeders support prolonged undifferentiated growth of human inner cell masses and embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2002, 20: 933-936.

132. Richards, M., Tan, S.P., Tan, J.H., Chan, W.K., Bongso, A. The transcriptome profile of human embryonic stem cells as defined by SAGE. Stem Cells. 2004, 22: 51-64.

133. Roberts, R., Gallagher, J., Spooncer, E., Allen, T.D., Bloomfield, F., Dexter, T.M. Heparan sulphate bound growth factors: a mechanism for stromal cell mediated haemopoiesis. Nature. 1988, 332: 376-378.

134. Robinson, G.W. Identification of signaling pathways in early mammary gland development by mouse genetics. Breast Cancer Res. 2004, 6: 105-108.

135. Rosier, E.S., Fisk, G.J., Ares, X., Irving, J., Miura, Т., Rao, M.S., Carpenter, M.K. Long-term culture of human embryonic stem cells in feeder-free conditions. Dev. Dyn. 2004, 229: 259-274.

136. Sato, N., Sanjuan, I.M., Heke, M., Uchida, M., Naef, F., Brivanlou, A.H. Molecular signature of human embryonic stem cells and its comparison with the mouse. Dev. Biol. 2003, 260: 404-413.

137. Sato, N., Meijer, L., Skaltsounis, L., Greengard, P., Brivanlou, A. Maintenance of pluripotency in human and mouse embryonic stem cells through activation of Wnt signaling by a pharmacological GSK-3-specific inhibitor. Nat. Med. 2004, 10: 55-63.

138. Schuldiner, M., Yanuka, O., Itskovitz-Eldor, J., Melton, D. A., Benvenisty, N. Effects of eight growth factors on the differentiation of cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000, 97: 11307-11312.

139. Schuldiner, M., Eiges, R., Eden, A., Yanuka, O., Itskovitz-Eldor, J., Goldstein, R.S., Benvenisty, N. Induced neuronal differentiation of human embryonic stem cells. Brain Res. 2001, 913: 201-205.

140. Schulz, T.C. Palmarini, G.M., Noggle, S.A., Weiler, D.A., Mitalipova, M.M., Condie, B.G. Directed neuronal differentiation of human embryonic stem cells. BMC Neurosci. 2003, 4: 27.

141. Second Annual Meeting ISSCR. Final Program. June 10-13, 2004, Boston, MA, USA.

142. Seo, B.M., Miura, M., Gronthos, S., Bartold, P.M., Batouli, S., Brahim, J., Young, M., Robey, P.G., Wang, C.Y., Shi, S. Investigation of multipotent postnatal stem cells from human periodontal ligament. Lancet. 2004, 364: 149-155.

143. Shalaby, F., Rossant, J., Yamaguchi, T.P. et al. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice. Nature. 1995, 376: 62-66.

144. Shamblott, M.J., Axelman J, Wang S, Bugg EM, Littlefield JW, Donovan PJ, Blumenthal PD, Huggins GR, Gearhart, J.D. Derivation of pluripotent stem cells from cultured human primordial germ cells. Proc. Nat. Acad. Sci. U. S. A. 1998, 95: 13726-13731.

145. Shi, Q., Rafii, S., Wu, M.H., Wijelath, E.S., Yu, C., Ishida, A., Fujita, Y., Kothari, S., Mohle, R., Sauvage, L.R., Moore, M.A., Storb, R.F., Hammond, W.P. Evidence for circulating bone marrow-derived endothelial cells. Blood. 1998, 92: 362-367.

146. Siomi, H., Choi, M., Siomi, M.C., Nussbaum, R.L., Dreyfuss, G. Essential role for KH domains in RNA binding: impaired RNA binding by a mutation in the KH domain of FMR1 that causes fragile X syndrome. Cell. 1994, 77: 33-39.

147. Shirahashi, H., Wu, J., Yamamoto, N., Catana, A., Wege, H., Wager, В., Okita, K., Zern, M.A. Differentiation of human and mouse embryonic stem cells along a hepatocyte lineage. Cell Transplant. 2004, 13: 197-211.

148. Smith, A.G., Heath, J.K., Donaldson, D.D., Wong, G.G., Moreau, J., Stahl, M., Rogers, D. Inhibition of pluripotential embryonic stem cell differentation by purified polypeptides. Nature. 1988, 336: 688-690.

149. Solter, D., Knowles, B.B. Immunosurgery of mouse blastocyst. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1975, 72: 5099-5102.

150. Solter, D., Knowles, B.B. Monoclonal antibody defining a stage-specific mouse embryonic antigen (SSEA-1). Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978, 75: 5565-5569.

151. Sottile, V., Halleux, C., Bassilana, F., Keller, H., Seuwen, K. Stem cell characteristics of human trabecular bone-derived cells. Bone. 2002, 30: 699-704.

152. Sottile, V., Thomson, A., McWhir, J. In vitro osteogenic differentiation of human ES cells. Cloning Stem Cells. 2003, 5: 149-155.

153. Stewart, K., Walsh, S., Screen, J., Jefferiss, C.M., Chainey, J., Jordan, G.R., Beresford, J.N. Further characterization of cells expressing STRO-1 in cultures of adult human bone marrow stromal cells. J. Bone Miner. Res. 1999, 14: 1345-1356.

154. Stice, S.L., Strelchenko, N.S., Keefer, C.L., Matthews, L. Pluripotent bovine embryonic cell lines direct embryonic development following nuclear transfer. Biol. Reprod. 1996, 54: 100-110.

155. Stojkovic, M., Lako, M., Strachan, Т., Murdoch, A. Derivation, growth and applications of human embryonic stem cells. Reproduction. 2004, 128: 259-267.

156. Stranzinger, G.F. Embryonic stem-cell-like cell lines of the species rat and Bovinae. Int. J. Exp. Pathol. 1996, 77: 263-267.

157. Suslov, O.N., Kukekov, V.G., Ignatova, T.N., Steindler, D.A. Neural stem cell heterogeneity demonstrated by molecular phenotyping of clonal neurospheres. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002, 99: 14506-14511.

158. Suss-Toby, E., Gerecht-Nir, S., Amit, M., Manor, D., Itskovitz-Eldor, J. Derivation of a diploid human embryonic stem cell line from a mononuclear zygote. Hum. Reprod. 2004, 19: 670675.

159. Thompson, S., Stern, P.L., Webb, M., Walsh, F.S., Engstrom, W., Evans, E.P., Shi, W.K., Hopkins, В., Graham, C.F. Cloned human teratoma cells differentiate into neuron-like cells and other cell types in retinoic acid. J. Cell Sci. 1984, 72: 37-64.

160. Thomson, J.A., Kalishman, J., Golos, T.G., Durning, M., Harris, C.P., Becker, R.A., Hearn, J.P. Isolation of a primate embryonic stem cell line. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995, 92: 78447848.

161. Thomson, J.A., Kalishman, J., Golos, T.G., Durning, M., Harris, C.P., Hearn, J.P. Pluripotent cell lines derived from common marmoset (Callithrix jacchus) blastocysts. Biol. Reprod. 1996, 55: 254-259.

162. Thomson, J.A., Itskovitz-Eldor, J., Shapiro, S.S., Waknitz, M.A., Swiergiel, J.J., Marshall, V.S., Jones, J.M. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science. 1998, 282: 1145-1147.

163. Till, J.E., McCulloch, E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse < bone marrow cells. Radiat. Res. 1961, 14: 213-222.

164. Turnpenny, L., Brickwood, S., Spalluto, C.M., Piper, K., Cameron, I.T., Wilson, D.I., Hanley, N. Derivation of human embryonic germ cells: an alternative source of pluripotent stem cells. Stem Cells. 2003,21:598-609.

165. Uchida, N., Buck, D.W., He, D., Michael J. Reitsma, M.J., Masek, M„ Phan, T.V., Tsukamoto, A.S., Gage, F.H., Weissman, I.L. Direct isolation of human central nervous system stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2000, 97: 14720-14725.

166. Verfaillie, C.M. Adhesion receptors as regulators of the hematopoietic process. Blood. 1998, 92:2609-2612.

167. Vescovi, A.L., Gritti, A., Galli, R., Parati, E.A. Isolation and intracerebral grafting of nontransformed multipotential embryonic human CNS stem cells. J. Neurotrauma. 1999, 16: 689693.

168. Vogel, G. Can old cells learn new tricks? Science. 2000, 287: 1418-1419.

169. Wagers, A.J., Sherwood, R.I., Christensen, J.L., Weissman, I.L. Little evidence for developmental plasticity of adult hematopoietic stem cells. Science. 2002, 297: 2256-2259.

170. Wang, S.H., Tsai, M.S., Chiang, M.F., Li, H. A novel NK-type homeobox gene, ENK (early embryo specific NK), preferentially expressed in embryonic stem cells. Gene Expr. Patterns. 2003, 3: 99-103.

171. Weissman, I.L. Stem cells: units of development, units of regeneration, and units in evolution. Cell. 2000, 100: 157-168.

172. Westerlund, U., Мое, M.C., Varghese, M., Berg-Johnsen, J., Ohlsson, M., Langmoen, I.A., Svensson, M. Stem cells from the adult human brain develop into functional neurons in culture. Exp. Cell Res. 2003, 289: 378-383.

173. Wheeler, M.B. Development and validation of swine embryonic stem cells: a review. Reprod. Fertil. Dev. 1994,6: 563-568.

174. Xu, C., Liguori, G., Persico, M.G., Adamson, E.D. Abrogation of the Cripto gene in mouse leads to failure of postgastrulation morphogenesis and lack of differentiation of cardiomyocytes. Development. 1999, 126: 483-494.

175. Xu, C., Inokuma, M.S., Denham, J., Golds, K., Kundu, P., Gold, J.D., Carpenter, M.K. Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2001, 19: 971-974.

176. Xu, C., Police, S., Rao, N., Carpenter, M.K. Characterization and enrichment of cardiomyocytes derived from human embryonic stem cells. Circ Res. 2002, 91: 501-508.

177. Xu, R. H., Chen, X., Li, D. S., Li, R., Addicks, G. C., Glennon, C., Zwaka, T. P., Thomson, J. A. BMP4 initiates human embryonic stem cell differentiation to trophoblast. Nat. Biotechnol. 2002, 20: 1261-1264.

178. Yamada, Т., Yoshikawa, М., Kanda, S., Kato, Y., Nakajima, Y., Ishizaka, S., & Tsunoda, Y. In vitro differentiation of embryonic stem cells into hepatocyte-like cells identified by cellular uptake of indocyanine green. Stem Cells. 2002, 20: 146-154.

179. Yamashita, J., Itoh, H., Hirashima, M., Ogawa, M., Nishikawa, S., Yurugi, Т., Naito, M., Nakao, K., Nishikawa, S. Flkl-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors. Nature. 2000, 408: 92-96.

180. Yan, Y.P., Lyons, E., Moreno, P., Zhang, S.C. Survival and differentiation of human embryonic stem cell-derived neural precursors in a rat model of Parkinson's disease. Soc. Neurosci. Abstr. 2002, 429: 8.

181. Zandstra, P.W., Lauffenburger, D.A., Eaves, C.J. A ligand-receptor signaling threshold model of stem cell differentiation control: a biologically conserved mechanism applicable to hematopoiesis. Blood. 2000, 96: 1215-1222.

182. Zeng, X., Miura, Т., Luo, Y., Bhattacharya, В., Condie, B. Chen, J., Ginis, I., Lyons, I., Mejido, J., Puri, R.K., Rao, M.S., Freed, W.J. Properties of pluripotent human embryonic stem cells BG01 and BG02. Stem Cells. 2004, 22: 292-312.

183. Zhang, S.C., Wernig, M., Duncan, I.D., Brustle, O., Thomson, J.A. In vitro differentiation of transplantable neural precursors from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2001, 19: 1129-1133.

184. Zhang, Y., Kalderon, D. Hedgehog acts as a somatic stem cell factor in the Drosophila ovary. Nature. 2001,410: 599-604.

185. Zou, Y.R., Takeda, S., Rajewsky, K. Gene targeting in the Ig kappa locus: efficient generation of lambda chain-expressing В cells, independent of gene rearrangements in Ig kappa. EMBO J. 1993, 12:811-820.

186. Zuk, P.A., Zhu, M., Mizuno, H., Huang, J., Futrell, J.W., Katz, A.J., Benhaim, P., Lorenz, H.P., Hedrick, M.H. Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies. Tissue Eng. 2001, 7: 211-228.

187. Zuk, P.A., Zhu, M., Ashjian, P., De Ugarte, D.A., Huang, J.I., Mizuno, H., Alfonso, Z.C., Fraser, J.K., Benhaim, P., Hedrick, M.H. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Mol. Biol. Cell. 2002, 13: 4279-4295.

188. Zwaka, T.P., Thomson, J.A. Homologous recombination in human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 2003, 21: 319-321.1. БЛАГОДАРНОСТИ

189. Спасибо всем сотрудникам ИБГ РАН за помощь в решении технических вопросов обеспечения и проведения научно-исследовательских работ.