Получение и исследование биодеградируемых полиэлектролитных микрокапсул с контролируемым выходом белков, ДНК и других биоактивных соединений тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат химических наук Бородина, Татьяна Николаевна

• Бородина, Татьяна Николаевна
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Бородина, Татьяна Николаевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Классификация методов иммобилизации биологически активных веществ.

1.2. Липосомы.

1.3. Микрокапсулы.

1.3.1. Основные преимущества и недостатки процесса микрокапсул ирования.

1.3.2. Полимерные материалы для микрокапсулирования биологически активных веществ.

1.3.3. Методы микрокапсулирования биологически активных веществ.

1.3.3.1. Физические методы микрокапсулирования.

1.3.3.1.1. Напыление в псевдоожиженном слое.

1.3.3.1.2. Микрокапсулирование экструзией.

1.3.3.1.3. Микрокапсулирование путем конденсации паров.

1.3.3.2. Химические методы микрокапсулирования.

1.3.3.2.1. Микрокапсулирование поликонденсацией.

1.3.3.2.2. Метод полимеризации.

1.3.3.2.3. Дубление мембран микрокапсул.

1.3.3.3. Аэрозольный метод микрокапсулирования.

1.3.3.4. Физико-химические методы микрокапсулирования.

1.3.3.4.1. Методы эмульгирования.

1.3.3.4.2. Микрокапсулирование в расплавы.

1.3.3.4.3. Высушивание распылением.

1.3.3.4.4. Методы основанные на простой и сложной коацервации.

1.4. Полиэлектролитные микрокапсулы, полученные методом послойной адсорбции.

1.4.1. Интерполиэлектролитные комплексы.

1.4.2. Интерполиэлектролитные комплексы для микрокапсулирования биологически активных веществ.

1.4.3. Подбор полиэлектролитов для формирования микрокапсул.

1.4.4. Технология послойной адсорбции полиэлектролитов.

1.4.5. Формирование полых микрокапсул.

1.4.6. Полиэлектролитные микрокапсулы как способы доставки биологически активных веществ.

1.4.6.1. Инкапсулирование высомолекулярных биологически активных веществ.

1.4.6.2. Некоторые подходы к регулированию выхода биологически активных веществ из микрокапсул.

1.4.6.2.1. Ферментативная деструкция полиэлектролитных микрокапсул.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и исследование биодеградируемых полиэлектролитных микрокапсул с контролируемым выходом белков, ДНК и других биоактивных соединений»

Сегодня трудно назвать область науки или производства, где микро- и нанотехнологии не нашли бы своего применения или эффективность их использования не была бы очевидна или принципиально доказана. Нанобиотехнологии все более широко используются в биотехнологии и биомедицине. В биомедицине особое внимание уделяется нано- и микрокапсулам. Это связано с тем, что микрокапсулирование позволяет:

- защитить биологически активные вещества (БАВ), такие как витамины, антибиотики, ферменты, вакцины и др. от окисления под воздействием внешней среды;

- разделить реагирующие между собой биоактивные компоненты в составе одного лекарственного препарата;

- обеспечить пролонгированный выход БАВ или его высвобождение в нужный момент времени;

- придать микрокапсулированным продуктам новые физические свойства.

Микрокапсулы используются как микроконтейнеры при разработке новых эффективных форм лекарств с пролонгированным и/или контролируемым высвобождением активных компонентов (белков, в том числе ферментов, пептидов, гормонов, различных антигенов, ДНК, РНК и т.д.). Благодаря возможности варьировать размер, структуру и физико-химические свойства микрокапсул, их можно применять в качестве систем доставки противоопухолевых и противомикробных препаратов, а также в генной терапии.

В настоящее время существует большое количество методов микрокапсулирования, однако далеко не все из них могут быть предложены для биомедицинских целей из-за достаточно жестких способов получения микрокапсул (использование повышенных температур, органических растворителей и других токсичных веществ, снижающих активность микрокапсулированных БАВ).

С этой точки зрения весьма перспективной является технология послойной (Ьауег-Ьу-Ьауег (ЬЬЬ)) адсорбции противоположно заряженных полиэлектролитов (ПЭ) на неорганических коллоидных микрочастицах. Метод ЬЬЬ является простым и универсальным подходом с точки зрения выбора как ПЭ, так и спектра веществ, которые можно инкапсулировать. Для получения микрокапсул с помощью данной технологии не требуется трудоемких методов полимерной химии. Кроме того, использование этого метода позволяет выполнять микрокапсулирование в физиологических условиях (температура, рН), что особенно важно при работе с лабильными биоактивными соединениями. Метод ЬЬЬ был разработан для формирования ПЭ микрокапсул на основе небиодеградируемых небиосовместимых синтетических полимеров, которые невозможно было использовать для создания систем доставки БАВ. Поэтому нам представлялось интересным предложить спектр биосовместимых биодеградируемых ПЭ для формирования мембраны микрокапсул. Кроме того, биодеградируемые микрокапсулы позволяют решить еще одну интересную и актуальную задачу, а именно - создание новых препаратов (инкапсулированных БАВ, терапевтических агентов и др.), время выхода которых можно регулировать путем контролируемого разрушения мембран микрокапсул с использованием соответствующих ферментов.

Цели и задачи исследования. Целью работы являлось получение полиэлектролитных микрокапсул на основе биосовместимых биодеградируемых полимеров с иммобилизованными в них биоактивными соединениями (белками, в частности ферментами, ДНК, экстрактами лекарственных растений), время выхода которых можно контролировать; исследование свойств таких микрокапсул и возможности применения в биомедицине, в частности для репарации тканей.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Предложить и оптимизировать методы включения биоактивных соединений (химотрипсин, проназа, ДНК, экстракты подорожника и календулы) в СаСОз микрочастицы.

2. Выбрать биодеградируемые ПЭ для формирования мембран на поверхности сферических микрочастиц карбоната кальция и на их основе методом ЬЬЬ получить микрокапсулы.

3. Исследовать возможность контролируемой биодеструкции микрокапсул в результате действия ферментов изнутри и снаружи.

4. Изучить активность биоактивных соединений (на примере инкапсулированного химотрипсина).

5. Исследовать кинетику выхода биоактивных соединений (ДНК, химотрипсина, экстрактов подорожника и календулы) при ферментативной деструкции ПЭ микрокапсул.

6. Продемонстрировать возможность использования микрокапсул с инкапсулированными в них экстрактами подорожника и календулы для репарации тканей в модели язвы желудка (крысы).

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Бородина, Татьяна Николаевна

выводы

1. Предложены и оптимизированы два метода (сорбция и соосаждение) включения биоактивных соединений (химотрипсин, проназа, ДНК, экстракты подорожника и календулы) в СаСОз микрочастицы.

2. Подобраны биодеградируемые полиэлектролиты (поли-Ь-аспарагиновая кислота, поли-Ь-аргинин, поли-Ь-лизин, альгинат натрия, сульфат декстрана, %-каррагинан и модифицированный хитозан) для формирования мембран на поверхности сферических микрочастиц карбоната кальция и на их основе методом LbL получены микрокапсулы с высоким содержанием капсулируемого вещества (не менее 95%, 75% и 65% в случае ДНК, белка и смеси экстрактов подорожника и календулы, соответственно).

3. Показано, что биодеградируемость микрокапсул можно обеспечить путем их обработки ферментами изнутри (в случае совместного инкапсулирования фермента и БАВ) или снаружи путем обработки микрокапсул раствором фермента. При этом выбор фермента определяется составом полимерной мембраны, а время выхода БАВ можно регулировать, варьируя концентрацию фермента.

4. Исследована кинетика выхода ДНК, инкапсулированной совместно с проназой, из (PAsp/PArg)3PAsp микрокапсул в модели in vitro. Показано, что время выхода ДНК можно регулировать от нескольких минут до нескольких часов путем варьирования концентрации фермента.

5. Изучена активность химотрипсина, инкапсулированного в (Alg/PLL)3 микрокапсулы, и показано, что фермент сохраняет не менее 86% от активности нативного.

6. Показано, что кинетика выхода химотрипсина из (Alg/PLL)3 микрокапсул в результате их обработки раствором трипсина (10" и 1(ПМ) зависела от концентрации последнего. При концентрации трипсина 10"4М более 90% инкапсулированного химотрипсина было обнаружено в супернатанте через 70 мин, а при концентрации 10"6М - через 600 мин.

7. Исследована кинетика выхода экстрактов подорожника и календулы из (Хит/Кар)4 микрокапсул в модели in vitro (искусственный желудочный сок). Продемонстрировано, что при увеличении концентрации пепсина с 10"6 до Ю^М количество вышедшего из микрокапсул ЭПК увеличивалась с 60% до 85% за 3 час.

8. Изучена возможность использования (Хит/Кар)4 микрокапсул с инкапсулированными в них экстрактами подорожника и календулы для репарации тканей и показано, что они ускоряют заживление язвы желудка в модели на крысах.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность следующим коллегам:

-Проф. д.техн.н. |С.М.Кунижеву| (Ставропольский государственный университет) за помощь в выборе темы диссертации, продолжительный интерес и неоценимую поддержку;

-Проф. Г.Б.Сухорукову за помощь в оформлении стипендии DAAD и FEBS и предоставление возможности выполнения части экспериментов в институте Макса Планка MPIKG (г. Гольм, Германия) и Университете королевы Марии QMUL (г. Лондон, Англия), а также сотрудникам MPIKG T.Mauser, Д.Андреевой, Д.Щукину, А.Скиртачу и Д.Разюк за неоценимые консультации при проведении экспериментов;

-Д-ру O.Kreft за помощь при выполнении экспериментов по капсулированию ДНК и подачу новых идей, положенных в основу диссертационной работы; -Проф. Л.Д.Румшу за неоценимые консультации и поддержку в период выполнения части работы с использованием химотрипсина и растительных экстрактов;

-Проф. С.М.Струковой за сотрудничество при исследовании эффективности микрокапсул in vivo на модели язвы желудка у крысы,

-A.Heilig за помощь в освоении атомно-силовой микроскопии, а также всем сотрудникам лаборатории Полимеры для биологии за постоянную помощь и доброжелательное отношение;

Особую благодарность автор выражает научному руководителю Е.А.Марквичевой за возможность проведения работы под ее внимательным руководством, помощь в проведении экспериментов, своевременные и полезные дискуссии при обсуждении полученных результатов, а также помощь при написании данной работы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Бородина, Татьяна Николаевна, 2008 год

1. Вудворд Дж. Иммобилизованные клетки и ферменты. - М.: Мир, 1988, 215с.

2. Каплун А.П., Ле Банг Шон, Краснопольский Ю.М. Липосомы и другие наночастицы как средство доставки лекарственных веществ.- Вопр. мед. химии, 1999, т.45, №1, с. 3-13.

3. Марголис Л.Б., Бергельсон Л.Д. Липосомы и их взаимодействие с клетками. (Ред. Л. М. Чайлахян) М.: Наука, 1986, 240с.

4. Бабак В.Г. Коллоидная химия в технологии микрокапсулирования. (Ред. Т.В. Мамонтова) 4.1. Свердловск: Изд-во Урал. Ун-та, 1991, 171с.

5. Солодовник В.Д. Микрокапсулирование. (Ред. Г.М. Медников)- М.: Химия, 1980,216с.

6. Айсина Р.Б., Казанская Н.Ф. Микрокапсулирование физиологически активных веществ и их применение в медицине. М.: Итоги науки и техники, 1986, Сер. Биотехнология, т.6, с.6-52.

7. Штильман М.И. Полимеры в биологически активных системах. -Соросовский образовательный журн., 1998, т.4, №5, с. 48-53.

8. Lameiro М.Н., Lopes A., Martins L.O., Alves P.M., Melo E. Incorporation of a model protein into chitosan-bile salt microparticles. Int. J. Pharm., 2006, v.312, №1, p. 119-130.

9. Grenha A., Seijo В., Remunan-Lopez C. Microencapsulated chitosan nanoparticles for lung protein delivery. Eur. J. Pharm. Sci., 2005, v.25, № 4-5, p. 427-437.

10. Lambert G., Fattal E., Couvreur P. Nanoparticulate systems for the delivery of antisense oligonucleotides. Adv. Drug. Deliv. Rev., 2001, v. 47, № 1, p. 99-112.

11. G. De Rosa, Quaglia F., M. La Rotonda, Besnard M., Fattal E. Biodegradable microparticles for the controlled delivery of oligonucleotides. Int. J. Pharm., 2002, v. 242, № 1-2, p. 225-228.

12. Hattori Y., Maitani Y. Folate-linked lipid-based nanoparticles for targeted gene delivery. Curr. Drug. Deliv., 2005, v. 2, № 3, p. 243-252.

13. Lu L., Yaszemski M.J., Mikos A.J. TGF-ßl Release from Biodegradable Polymer Microparticles: Its Effects on Marrow Stromal Osteoblast Function. The Journal of Bone and Joint Surgery, 2001, v. 83, p. 82-92.

14. Березин И.В., Клячко H.JI., Левашов A.B., Мартинек К., Можаев В.В., Хмельницкий Ю.Л. Иммобилизованные ферменты. М.: Высшая школа, 1987, 157с.

15. Афанасьев А.Г. Химия за рубежом (Применение микрокапсул: обзор с примерами). М.: Знание, 1985, 48с.

16. Piskin Е. Biodegradable polymers as biomaterials. J. Biomater. Sei. Polym. Ed., 1995, v. 6, №9, p. 775-795.

17. K.Y. Win, S. Feng. Effects of particle size and surface coating on cellular uptake of polymeric nanoparticles for oral delivery of anticancer drugs. Biomaterials, 2005, v. 26, p. 2713-2722.

18. Thies C. Microencapsulation of food ingredients. (Ed. by Per Vilstrup) -Leatherhead publishing, 2001, 270p.

19. Shahidi F., Han X.-Q. Encapsulation of food ingredients. Critical Reviews in food science and nutrition, 1993, v.33, № 6, p.501-547.

20. Nawar W.W. Lipids./ In. Fennema O, Food Chemistry. New York: Marcel Dekker, 1996, p.225-320.

21. Тимофеев Б.А. Профилактика лекарственных осложнений у сельскохозяйственных животных.- М.: Росагропромиздат, 1989, 160 с.

22. Williams D.F., Zhong S.P. Biodeterioration/biodegradation of polymeric medical devices in situ. International Biodeterioration & Biodegradation, 1994, v.95, p. 95130.

23. Sommerville G.R. USA Patent 3 015 128, 1962.

24. Luzzi L., Palmieri A. An overview of pharmaceutical applications./ In. Biomedical applications of microencapsulation (F. Lim, Ed.). Florida: CRC Press, 1984. p.1-18.

25. Chang T.M.S. Artificial Cell Biotechnology for Medical Applications. Blood Purif., 2000, v.18, p.91-96.

26. Lim F. Microencapsulation of living cells and tissues-theory and practice./ In: Biomedical application of microencapsulation (F. Lim ed.). Florida: CRC Press, 1984, p.137-154

27. Чанг T.M.C. Полимеры в медицине. (Ред. Платэ Н.А.) Пер. с англ. М.: Мир, 1969, 240с.

28. Chang T.M.S. Enzymes Immobilized by Microencapsulation Within Spherical Ultrathin Polymeric Membranes. J. Macromol. Sci. A, v. 10, № 1-2, p.245-258.

29. Speiser P. Microencapsulation by coacervation, spray encapsulation and nanencapsulation./ In. Drugs and Pharmaceutical Science (Ed. Nixon J.R.) N.Y.: Marcel Dekker, 1976, p. 1-20.

30. Robbis R.C., Thomas J.J., Cadle R.D. Aerosol particle encapsulation by simultaneous condensation and polymerization J. Coll. Sci., 1963, v. 18, № 5, p.483-485.

31. Langer G., Yamate G. Encapsulation of liquid and solid aerosol particles to form dry powders. J. Coll. Interface Sci., 1969, v.29, № 3, p.450-455.

32. Vert M., Schwach G., Engel R., Coudane J. Something new in the field of PLA/GA bioresorbable polymers. J. Control. Release, 1998, v. 53, p. 85-92.

33. Kim C.K., Yoon Y.S., Kong J.Y. Preparation and evaluation of flurbiprofen dry elixir as a novel dosage form using a spray-drying technique. Int. J. Pharma, v. 120, p.21-31.

34. Green B.K., Schleicher L. Oil-containing microscopic capsules and method of making them /USA Patent 2800457, 1957.

35. Кабанов В.А. Физико-химические основы и перспективы применения растворимых интерполиэлектролитных комплексов. ВМС, 1994. т. 36. № 2, с. 183-197.

36. Biesheuvel P.M., Stuart М. А. С. Electrostatic Free Energy of Weakly Charged Macromolecules in Solution and Intermacromolecular Complexes Consisting of Oppositely Charged Polymers. Langmuir, 2004, v. 20, p. 2785-2791.

37. Зезин А.Б. Кооперативные реакции между полиэлектролитами и полиэлектролитные комплексы. Диссертация докт. хим. наук., М.: МГУ, 1977, 370С.

38. Зезин А.Б., Луценко В.И., Рогачева В.Б. Кооперативное взаимодействие полиэлектролитов в водных растворах. ВМС А, 1972, т. 14, №4, с. 772-779.

39. Зезин А.Б., Кабанов В.А. Новый класс комплексных водорастворимых полиэлектролитов. Успехи химии, 1982, т. 51, №9, с. 1447-1483.

40. Зезин А.Б., Рогачева В.Б., Комаров B.C., Разводовский Е.Ф. Образование амидных связей в полиэлектролитных комплексах. ВМС А, 1975, т.17, №12, с. 2637-2643.42. http://www.xumuk.rU/encyklopedia/2/3526.html

41. Алюшин М.Т., Ли В.Н., Алексеев К.В. и др. Полимеры в фармации. (Ред. А. И. Тенцова, М. Т. Алюшин) М.: Медицина, 1985, 254с.

42. Платэ Н. А., Васильев А. Е. Физиологически активные полимеры. М.: Химия, 1986, 296с.

43. Tiourina О.Р., Sukhorukov G.B. Multilayer alginate/protamine microsized capsules: encapsulation of a-chymotrypsin and controlled release study.- Inter. J. of pharm., 2002, v. 242, № 1-2, p.155-161.

44. Sukhorukov GB, Donath E, Moya S, Susha AS, Voigt A, Hartmann J, Mohwald H. Microencapsulation by means of step-wise adsorption of polyelectrolytes. J Microencapsul., 2000, v. 17, № 2, p. 177-185.

45. Berth G., Voigt A., Dautzenberg H., Donath E., Mohwald H. Polyelectrolyte complexes and layer-by-layer capsules from chitosan/chitosan sulfate. -Biomacromolecules, 2002, v. 3, № 3, p.579-590.

46. Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И. Получение и характеристика полиэлектролитных частиц с белком. Биохимия, 2004, т. 69, №7, с.930-936.

47. Платэ Н.А. Полимеры для медицины. Наука в СССР, 1986, № 1, с.2-9

48. Синтетические полимеры медицинского назначения: Тез. докл. VII всесоюз. симпоз. (Ред. Л. И. Валуев). Минск: Университетское, 1985, 114с.

49. Коршак В.В., Штильман М.И. Полимеры в процессах иммобилизации и модификации природных соединений. (Ред. Т.Н. Сергеева) М.: Наука, 1984, 261с.

50. Iler R.K. Multilayers of colloidal particles. J. Colloid Interface Sci.,1966, v.21, № 6, p. 569-594.

51. Hammond P.T. Recent explorations in electrostatic multilayer thin film assembly, Curr. Opin. Colloid Interface Sci., 1999, v.4, № 6, p. 430-442.

52. Decher G.; Schlenoff J.B. Multilayer Thin Films: Sequential Assembly of Nanocomposite Materials. Wiley-VCH, Weinheim, 2003, p.14-69.

53. Decher G. Fuzzy nanoassemblies: toward layered polymeric multicomposites. -Science, 1997, v. 277, p. 1232-1237.

54. Gao M.Y., Richter В., Kirstein S. and Mohwald H. Electroluminescence studies on self-assembled films of PPV and CdSe nanoparticles. J. Phys. Chem. B, 1998, v. 102, №21, p. 4096-4103.

55. Gao M.Y., Gao M.L., Zhang X., Yang Y., Yang B. and Shen J.C. Constructing PbI2 Nanoparticles into a Multilayer Structure Using the Molecular Deposition (Md) Method. J. Chem. Soc. Chem. Commun., 1994, v. 24, p. 2777-2778.

56. Feldheim D.L., Grabar K.C., Natan MJ. and Mallouk T.E. Electron transfer in self-assembled inorganic polyelectrolyte/metal nanoparticle heterostructures. J. Amer. Chem. Soc., 1996, v. 118, № 32, p. 7640-7641.

57. Schmitt J., Decher G., Dressick W.J., Brandow S.L., Geer R.E., Shashidhar R. and Calvert J.M. Metal nanoparticle/polymer superlattice films: Fabrication and control of layer structure. Adv. Mater., 1997, v. 9, № 1, p. 61-66.

58. Kotov N.A. Layer-by-layer self-assembly: The contribution of hydrophobic interactions. Nanostructured Materials, 1999, v. 12, p.789-796.

59. Sukhorukov G.B., Donath E., Lichtenfeld H., Knippel E., Knippel M., Budde A., Möhwald H. Colloids Surfaces A, 1998, v. 137, p.253-266.

60. Sukhorukov G.B., Donath E., Davis S., Lichtenfeld H., Caruso F., Popov V.l., Möhwald H. Stepwise polyelectrolyte assembly on particle surfaces: a novel approach to colloid design. Polym. Adv. Technol., 1998, v. 9, № 10-11, p.759-767.

61. Peyratout C.S., Dähne L. Tailor-Made Polyelectrolyte Microcapsules: From Multilayers to Smart Containers. Angew. Chem. Int. Ed., 2004, v. 43, № 29, p.3762-3783.

62. Gao C., Moya S., Donath E., Möhwald H. Melamine Formaldehyde Core Decomposition as the Key Step Controlling Capsule Integrity: Optimizing the Polyelectrolyte Capsule Fabrication. Macromol. Chem. Phys., 2002, v. 203, № 7, p.953-960.

63. Dejugnat C., Sukhorukov G.B. pH-Responsive Properties of Hollow Polyelectrolyte Microcapsules Templated on Various Cores. Langmuir, 2004, v.20, № 17, p.7265-7269.

64. Antipov A.A., Shchukin D., Fedutik Y., Petrov A.I., Sukhorukov G.B., Möhwald H. Carbonate microparticles for hollow polyelectrolyte capsules fabrication. -Colloids Surfaces A, 2003, v. 224, № 1-3, p.175-183.

65. Adalsteinsson T., Dong W.-F., Schönhoff M. Diffusion of 77 000 g/mol Dextran in Submicron Polyelectrolyte Capsule Dispersions Measured Using PFG-NMR. J. Phys. Chem. B, 2004, v. 108, № 52, p.20056-20063.

66. Itoh Y., Matsusaki M., Kida T., Akashi M. Preparation of Biodegradable Hollow Nanocapsules by Silica Template Method. Chem. Lett., 2004, v. 33, № 12, p. 15521553.

67. Köhler K., Shchukin D.G., Möhwald H., Sukhorukov, G.B. Thermal Behavior of Polyelectrolyte Multilayer Microcapsules. 1. The Effect of Odd and Even Layer Number. J. Phys. Chem. B, 2005, v.109, № 39, p.18250-18259.

68. Sukhorukov G.B., Volodkin D.V., Günther A.M., Petrov A.I., Shenoy D.B., Möhwald H. Porous calcium carbonate microparticles as templates for encapsulation of bioactive compounds. J. Mater. Chem., 2004, v. 14 , p.2073-2081.

69. Antipov A.A., Sukhorukov G.B. Polyelectrolyte multilayer capsules as vehicles with tunable permeability. Adv. Colloid Interface Sei., 2004, v. Ill, № 1-2, p.49-61.

70. Sukhorukov G.B., Brumen M., Donath E., Möhwald H. Hollow Polyelectrolyte Shells: Exclusion of Polymers and Donnan Equilibrium. J. Phys. Chem. B, 1999, v. 103, p. 6434-6440.

71. Ibarz G., Dähne L., Donath E., Möhwald H. Smart Micro- and Nanocontainers for Storage, Transport, and Release. Adv. Mater., 2001, v. 13, p. 1324-1327.

72. Radtchenko I.L., Sukhorukov G.B., Leporatti S., Khomutov G B., Donath E., Möhwald H. Assembly of Alternated Multivalent Ion/Polyelectrolyte Layers on

73. Colloidal Particles. Stability of the Multilayers and Encapsulation of Macromolecules into Polyelectrolyte Capsules. J. Colloid Interface Sei., 2000, v. 230, p. 272-280.

74. Radtchenko I.L., Sukhorukov G.B, Möhwald H. Incorporation of macromolecules into polyelectrolyte micro- and nanocapsules via surface controlled precipitation on colloidal particles. Colloids Surfaces A, 2002, v. 202, p. 127-133.

75. Dähne L., Leporatti S., Donath E., Möhwald H. Fabrication of Micro Reaction Cages with Tailored Properties. J. Am. Chem. Soc., 2001, v. 123, p. 5431-5436.

76. Qiu X., Donath E., Möhwald H. Permeability of Ibuprofen in Various Polyelectrolyte Multilayers. Macromol. Mater. Eng, 2001, v. 286, p. 591-597.

77. Caruso F., Yang W., Trau D. Renneberg, R. Microencapsulation of Uncharged Low Molecular Weight Organic Materials by Polyelectrolyte Multilayer Self-Assembly. Langmuir , 2000, v. 16, p. 8932-8936.

78. Antipov A.A., Sukhorukov G.B., Donath E., Möhwald H. Sustained Release Properties of Polyelectrolyte Multilayer Capsules. J. Phys. Chem. B, 2001, v. 105, p. 2281-2284.

79. Дарбре А. Практическая химия белка. M.: Мир, 1989, 621с.

80. Lvov Y., Antipov A.A., Mamedov A., Möhwald H., Sukhorukov G.B. Urease Encapsulation in Nanoorganized Microshells. Nano. Lett., 2001, v.l, p. 125-128.

81. Antipov A.A., Sukhorukov G.B., Leporatti S., Radtchenko I.L., Donath E., Möhwald H. Polyelectrolyte multilayer capsule permeability control. Colloids Surfaces A, 2002, v. 198-200, p. 535-541.

82. Sukhorukov G.B., Antipov A.A., Voigt A., Donath E., Möhwald H. pH-Controlled Macromolecule Encapsulation in and Release from Polyelectrolyte Multilayer Nanocapsules. Macromol. Rapid Commun., 2001, v. 22, p. 44-46.

83. Dejugnat С., Halozan D., Sukhorukov G.B. Defined Picogram Dose Inclusion and Release of Macromolecules using Polyelectrolyte Microcapsules. Macromol. Rapid Commun., 2005, v. 26, p. 961-967.

84. Tong W., Gao C., Mohwald H. Stable Weak Polyelectrolyte Microcapsules with pH-Responsive Permeability. Macromolecules, 2006, v. 39, p. 335-340.

85. Antipov A.A., Sukhorukov G.B., Leporatti S., Radtchenko I.L., Donath E. and Mohwald H. Polyelectrolyte multilayer capsule permeability control. Colloid. Surf.: Physicochem. Eng. Aspects, 2002, v. 198, p. 535-541.

86. El-Hashani A., Toutianoush A., Tieke B. Layer-by-layer assembled membranes of protonated 18-azacrown-6 and polyvinylsulfate and their application for highly efficient anion separation. J Phys Chem В., 2007, v. 111, № 29, p. 8582-8588.

87. Skirtach A.G., Antipov A.A., Shchukin D.G., Sukhorukov G.B. Remote Activation of Capsules Containing Ag Nanoparticles and IR Dye by Laser Light. -Langmuir, 2004, v. 20, p. 6988-6992.

88. B.G. De Geest, Vandenbroucke R.E., Guenther A.M., Sukhorukov G.B., Hennink W.E., Sanders N.N., Demeester J., Stefaan C. De Smedt Intracellularly degradable polyelectrolyte microcapsules. Adv. Materials, 2006, v. 18, p. 1005-1009.

89. Itoh Y., Matsusaki M., Kida Т., Akashi M. Enzyme-Responsive release of encapsulated proteins from biodegradable hollow capsules. Biomacromolecules, 2006, v. 7, p. 2715-2718.

90. Васильев A.E. Химия и технология высокомолекулярных соединений. -Итоги науки и техники, М.:ВИНИТИ, 1981, с. 3-119.

91. Maurer P.N., Pinchuk P. In: Nucl. Acids Immunol.: Proc. Symp. (1967)/Ed. O.J. Plescia. N.Y.: Spring-Verl., 1968, p.301-308; Chem. Abstr., 1970, v.73, 118587.

92. Escorcia F.E, McDevitt M.R, Villa C.H, Scheinberg D.A. Targeted nanomaterials for radiotherapy. Nanomed. 2007, v. 2, № 6, p. 805-15.

93. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. (Ред. К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова). М.: Наука, 2002, 368с.99. http://www.sigmaaldrich.com/img/assets/19500/dextranasedextrans.gif

94. R.A.A. Muzzatelli, M. Tetbojevich, A. Cosani. Chitin Enzymology. Ed. Italy, Atec Edizioni, 1996, v.2, p. 69-82.101. http://www.sigmaaldrich.com/img/assets/19500/chitosanasechitosan.gif

95. Кольман Я., Рем К.-Г. Наглядная биохимия (пер. с нем.) (Ред. П.Д. Решетов, Т.И. Соркина). М.: Мир, 2000, 469с.103. http://tonga.usip.edu/gmoyna/biochem341/trypsin.gif

96. Bradford М.М. Analytical Biochemistry. 1976, v. 72, p. 248-252.

97. Wortington Enzyme Manual. Worthington Biochemical Corporation, USA, p. 97-105, p. 288-289

98. Okabe H.S., Roth J.L.A., Pfeiffer C.J. A method for experimental, penetrating gastric and duodenal ulcers in rats. Observations on normal healing. Amer. J. Digestive Disease, 1971, v. 16, № 3, p. 277-284.

99. Роговин 3. А. Химия целлюлозы. M.: Химия, 1972, 520с.

100. Volodkin D.V., Petrov A.I., Prevot M., Sukhorukov G.B. Matrix Polyelectrolyte Microcapsules: New System for Macromolecule Encapsulation. Langmuir, 2004, v. 20, p. 3398-3406.

101. Volodkin D.V., Larionova N.I., Sukhorukov G.B. Protein Encapsulation via Porous СаСОз Microparticles Templating. Biomacromolecules, 2004, v. 5, p. 19621972.

102. Petrov A.I., Volodkin D.V., Sukhorukov G.B. Protein-Calcium Carbonate Coprecipitation: A Tool for Protein Encapsulation. Biotechnol. Progr., 2005, v. 21, p. 918-925.

103. Lu Z.H., Prouty M.D., Guo Z.H., Golub V.O., Kumar C., Lvov Y.M. Magnetic switch of permeability for polyelectrolyte microcapsules embedded with Co@Au nanoparticles. Langmuir, 2005, v. 21, № 5, p. 2042-2052.

104. Shchukin D.G., Gorin D. A., Mohwald H. Ultrasonically induced opening of polyelectrolyte microcontainers. Langmuir, 2006, v. 22, № 17, p. 7400-7404.

105. Colfen H. Qi L. A Systematic Examination of the Morphogenesis of Calcium Carbonate in the Presence of a Double-Hydrophilic Block Copolymer. Chem. Eur. J., 2001, v. 7, № l,p. 106-116.

106. Guo J., Severtson S.J. Application of Classical Nucleation Theory To Characterize the Influence of Carboxylate-Containing Additives on CaCC>3 Nucleation at High Temperature, pH, and Ionic Strength. Ind. Eng. Chem. Res., 2003, v. 42, p. 3480-3486.

107. Meldrum F.C., Hyde S.T. Morphological influence of magnesium and organic additives on the precipitation of calcite. J. Crystal Growth, 2001, v. 231, p. 544 -558.

108. Orme C.A., Noy A., Wierzbicki A., McBride M.T., Grantham M., Teng H.H. Formation of chiral morphologies through selective binding of amino acids to calcite surface steps. Nature, 2001, v. 411, p. 775 -779.

109. Manoli F. and Dalas E. Spontaneous precipitation of calcium carbonate in the presence of ethanol, isopropanol and diethylene glycol. J. Crystal Growth, 2000, v. 218, p. 359 -364.

110. Raz S., Weiner S., Addadi L. Formation of high magnesian calcites via an amorphous precursor phase: possible biological implications. Adv. Mater., 2000, v. 12, p. 38-42.

111. Shen F.H., Feng Q.L., Wang C.M. The modulation of collagen on crystal morphology of calcium carbonate. J. Crystal Growth, 2002, v. 242, p. 239-244.

112. Yang L., Guo Y., Ma X., Hu Z., Zhu S., Zhang X., Jiang K. Cooperativity between pepsin and crystallization of calcium carbonate in distilled water. J. Inorg. Biochem., 2003, v. 93, p. 197-203.

113. Hardikar V.V., Matijevic E. Influence of ionic and nonionic dextrans on the formation of calcium hydroxide and calcium carbonate particles. Colloids Surf. A, 2001, v. 186, p. 23 -31.

114. Naka К., Tanaka Y., Chujo Y. Effect of anionic starburst dendrimers on the crystallization of СаСОЗ in aqueous solution: size control of spherical vaterite particles. Langmuir, 2002, v. 18, p. 3655 -3658.

115. Машковский М.Д Лекарственные средства. M.: Медицина, 1993, т. 2, 685с.

116. Марквичева Е.А. Хитозан и его производные в биоинкапсулировании./В кн. Хитин и хитозан. Получение, свойства и применение. М.: Наука, с. 315

117. Шарова О.В., Куркин В.А. Флавоноиды цветков календулы лекарственной. Химия растительного сырья, 2007, т. 1, с. 65-68.

118. Олейников Д.Н., Samuelsen A.B., Танхаева JI.M. Подорожник большой (PLANTAGO MAJOR L). Химический состав и применение. Химия растительного сырья, 2007, т. 2, с. 37-50.

119. Vishu Kumar A.B., Tharanathan R.N. A comparative study on depolymerization of chitosan by proteolytic enzymes. Carbohydrate Polymers, 2004, v. 58, p. 275

120. Tao H., Wei W., Mao Y., Zhang S., Xia J. Study on Degradation Characteristics of Chitosan by Pepsin with Piezoelectric Quartz Crystal Impedance Analysis Technique. Analytical sciences, 2005, v. 21, p. 1057-1061.

121. Vishu Kumar A.B., Varadaraj M.C., Gowda L.R., Tharanathan R.N. 391 Biochem. J., 167-175.

122. Kumar B.A., Varadaraj M.C., Tharanathan R.N. Low Molecular Weight Chitosan-Preparation with the Aid of Pepsin, Characterization, and Its Bactericidal Activity. Biomacromolecules, 2007, v. 8, № 2, p. 566-572.

123. Il'ina A.V., Varlamov V.P. Effect of the Degree of Acetylation of Chitosan on Its Enzymatic Hydrolysiswith the Preparation Celloviridin G20kh. Applied biochemistry and microbiology, 2003, v. 39, № 3, p. 239-243.327.283.