Получение и биологические особенности бруцелл в L-форме тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Баранникова, Наталья Леонидовна

• Баранникова, Наталья Леонидовна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Баранникова, Наталья Леонидовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ВОЗБУДИТЕЛЬ БРУЦЕЛЛЕЗА В Ь-ФОРМЕ

1.1 Общее представление об Ь-формах бактерий

1.2 Роль Ь-форм микроорганизмов в течение заболевания

1.3 Бруцеллы в Ь-форме 17 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Штаммы микроорганизмов

2.2 Питательные среды

2.3 Диагностические препараты

2.4 Лабораторные животные

2.5 Используемые методы исследования

2.6 Основное оборудование и приборы 48 ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ ПО- 50 ЛУЧЕНИЯ, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ВЫДЕЛЕНИЯ БРУЦЕЛЛ В Ь-ФОРМЕ

3.1 Подбор питательных сред для получения экспериментальных 50 Ь-трансформантов бруцелл

3.2 Конструирование питательных сред для бактериологической 56 диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в Ь-форме

3.3 Испытание сконструированных питательных сред для выде- 64 ления бруцелл в Ь-форме от больных людей и животных

ГЛАВА 4. КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА 70 БРУЦЕЛЛ В Ь-ФОРМЕ

4.1 Культуральные свойства

4.2 Морфология клеток бруцелл в Ь-форме 72 ГЛАВА 5. ХАРАКТЕРИСТИКА БРУЦЕЛЛ В Ь-ФОРМЕ, ПОЛУЧЕННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО И ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ ДИАГНОСТИ- 79 ЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНЫХ БРУЦЕЛЛЕЗОМ ЛЮДЕЙ

5.1 Применение ПЦР при исследовании бруцелл в L-форме

5.2 Способность к реверсии

5.3 Изучение дифференциальных свойств бруцелл в L-форме

5.4 Вирулентность

5.5 Чувствительность к антибиотикам

5.6 Патоморфологические изменения при экспериментальном 90 бруцеллезе у морских свинок

ГЛАВА 6. ХАРАКТЕРИСТИКА АНТИГЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ, 94 ПРИГОТОВЛЕННЫХ НА ОСНОВЕ L-СУБКУЛЬТУРЫ В. ABORTUS И-206 12 ПАССАЖА И СЫВОРОТОК, ПОЛУЧЕННЫХ К НИМ

6.1 Специфичность антигенных препаратов из бруцелл в S- и 94 L-формах

6.2 Получение кроличьих сывороток против бруцелл в L-форме и 98 их характеристика

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Аг антиген

Ат антитела

БО базовая основа

ГНУ ВНИИБТЖ Государственное научное учреждение «Всероссийский на-Россельхозака- учно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкуле-

демии за животных» Российской академии сельскохозяйственных

наук

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ЗФР забуференный физиологический раствор

ИВ индекс высеваемости

ИИ индекс инфицированности

КОЕ колоний образующих единиц

КРС крупный рогатый скот

КС клеточная стенка

м.к. микробная клетка

МИД минимальная инфицирующая доза

МПА мясопептонный агар

MPC мелкий рогатый скот

НДС нормальная лошадиная сыворотка

об/об объем/объем

ПАФ полный адъювант Фрейнда

ПЦР полимеразная цепная реакция

РА реакция агглютинации

РК реакция Кумбса

РПГА реакция пассивной гемагглютинации

РСК реакция связывания комплемента

РХ реакция Хеддльсона

ТЭ термоэкстракт

ЦПМ цитоплазматическая мембрана

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и биологические особенности бруцелл в L-форме»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Бруцеллез представляет значительную социально-экономическую проблему для многих стран мира, в том числе и для России. В очагах бруцеллеза интенсивность эпидемиологических проявлений зависит от активности эпи-зоотий среди сельскохозяйственных животных [45, 113]. Имеющиеся данные позволяют предполагать, что одной из причин длительного существования эпизоотических очагов бруцеллеза и низкой эффективности их оздоровления является трансформация 8- в Я- или Ь-формы возбудителя [28, 36, 73, 105]. Недостаточные знания об условиях образования и свойствах Ь-форм возбудителя инфекции, а также отсутствие надежных методов их выявления и идентификации, не позволяют в полной мере оценить их роль в эпизоотическом процессе и эпидемических проявлениях. Сложность лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в Ь-форме, связана с изменением его биологических свойств при частичной или полной утрате клеточной стенки (КС) в условиях сохранения репродуктивной способности, а также отсутствием соответствующих сертифицированных диагностических препаратов и питательных сред. Немногочисленные нормативно-методические документы [50, 58, 64], посвященные методам лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в Ь-форме, не решают полностью данную проблему. Поэтому до настоящего времени отмечены лишь единичные случаи бактериологического подтверждения заболевания бруцеллезом с выделением возбудителя инфекции в Ь-форме из организма человека и животных [105, 139]. По данным В.Г. Ощепкова и др. [58] методами индикации Ь-форм бруцелл можно дополнительно выявлять до 20-30 % больных сельскохозяйственных животных.

Рекомендованные ранее различные основы питательных сред оказались недостаточно эффективными для бактериологической диагностики атипичного бруцеллеза, обусловленного Ь-формой возбудителя [5, 6, 9, 10, 102, 116, 125, 129, 139]. В соответствии с действующими Методическими указаниями

[64] для выделения бруцелл в L-форме рекомендуются питательные среды на основе печеночного настоя или смеси мясной воды и пептона Мартена. Их приготовление требует использования трудоемких технологических операций и до настоящего времени отсутствует серийный выпуск этих сред. Поэтому конструирование питательных сред для культивирования и выделения бруцелл в L-форме, получение и изучение свойств экспериментальных L-трансформантов и изолятов бруцелл в L-форме, выделенных от больных людей, оптимизация лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме, актуальны.

Цель исследования. Получить бруцеллы в L-форме и изучить их биологические особенности для совершенствования методов лабораторной диагностики бруцеллеза.

Основные задачи исследования:

1. Подобрать оптимальные питательные среды и селекционировать штаммы бруцелл, находящиеся на различных стадиях L-трансформации.

2. Сконструировать питательные среды для получения, выделения и культивирования бруцелл в L-форме.

3. Выявить биологические особенности полученных штаммов бруцелл, находящихся на различных стадиях L-трансформации, а также изолятов из диагностического материала от больных бруцеллезом людей.

4. Получить и охарактеризовать антигенные препараты на основе бруцелл в L-форме и сыворотки, полученные к ним.

Научная новизна исследований С целью усовершенствования лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме:

- Впервые получен и депонирован в Государственную коллекцию патогенных бактерий «Микроб» (ГКПБ «М») Российского научно-исследовательского противочумного института «Микроб», штамм Brucella abortus И-206 L-форма, которому присвоен номер Brucella abortus KM 4. Штамм находится в стабильной L-форме.

- Сконструированы высокочувствительные селективные питательные среды для выделения и культивирования бруцелл в Ь-форме.

- Изолированы и впервые охарактеризованы штаммы бруцелл в Ь-форме, длительно персистировавшие в организме больных бруцеллезом людей.

- Показана возможность использования штамма бруцелл в стабильной Ь-форме при создании антигенного диагностикума, для выявления специфических антител в сыворотках крови больных людей и животных.

- Разработан способ получения растворимого антигенного препарата из бруцелл в Ь-форме, пригодного для конструирования диагностических тест-систем (защищено патентом «Способ получения антигенного препарата из бруцелл в Ь-форме» № 241629, зарегистрированном в Государственном реестре изобретений РФ 20 апреля 2011 г.).

- Получена высокоспецифичная и высокоактивная кроличья Ь-сыворотка для идентификации бруцелл в Ь-форме.

Практическая значимость работы

- В процессе экспериментальных исследований разработаны питательные среды для выделения и культивирования бруцелл в Ь-форме, имеющие преимущества перед рекомендуемыми в действующих методических указаниях [64]. Питательные среды обладают выраженными селективными свойствами, подавляют полностью рост бруцелл в 8-форме, не препятствуют при этом росту Ь-форм возбудителя. Среды просты в приготовлении, не требуют фильтрации и автоклавирования, могут готовиться в сухом виде, что увеличивает срок хранения, поэтому позволяет использовать их как в лабораторных, и, что особенно важно, в полевых условиях. Питательная среда для выделения и культивирования Ь-форм бруцелл на основе рыбного гидролизата прозрачна. С использованием предлагаемых питательных сред изолированы два штамма бруцелл в Ь-форме, длительно персистировавшие в организме больных людей с хронической формой заболевания, что позволяет рекомендовать их для совершенствования лабораторной диагностики бруцеллеза. «Питательная среда для выделения и культивирования Ь-форм бруцелл су-

хая» прошла испытания в ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных Россельхозакадемии (акт медицинских испытаний от 24.10.2012 г.) и во ФКУЗ Ставропольский противочумный институт Роспотребнадзора (акт медицинских испытаний от 26.10.2012 г.).

Разработаны вставки для чашки Петри, применяемые при изучении ростовых свойств питательных сред, позволяющие улучшить визуализацию результатов, сократить количество лабораторной посуды и сэкономить питательные среды (защищено патентом «Вставка для чашки Петри» № 79562, зарегистрированном в Государственном реестре полезных моделей РФ 10 января 2009 г.).

Материалы исследований включены в «Методические рекомендации по выделению бруцелл в Ь-форме», утвержденные директором ФГУЗ Иркут-скНИПЧИ Сибири и ДВ Роспотребнадзора (протокол № 5 от 28 апреля 2010), Методические указания МУК 4.2.3010-12 «4.2. Методы контроля: биологические и микробиологические факторы. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней», утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Они-щенко 29.03.2012 г.

Диссертационная работа выполнена в рамках двух НИР: 010-2-10 «Разработка и совершенствование лабораторных методов выявления неманифестных очагов бруцеллеза» № ГР 01200511207 (2006-2010 гг.) и 010-2-11 «Оптимизация лабораторной диагностики бруцеллеза, обусловленного возбудителем в Ь-форме» № ГР 01201068221 (2011-2015 гг.).

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Разработанный способ получения бруцелл в Ь-форме, основанный на постепенном увеличении концентрации антибиотика в питательной среде,

позволяет получать бруцеллы на различных стадиях L-трансформации, в том числе в стабильной L-форме.

2. Печеночный настой и рыбный гидролизат выбранные в качестве базовых основ питательных сред позволяют конструировать высокочувствительные и селективные питательные среды для выделения и культивирования бруцелл в L-форме.

3. L-трансформанты бруцелл, полученные экспериментально и выделенные из диагностического материала от больных бруцеллезом людей, по биологическим свойствам, в том числе по культурально-морфологическим, вирулентности, антибиотикочувствительности существенно отличаются от бруцелл в S-форме.

4. Полученные корпускулярные и водорастворимые антигены бруцелл в L-форме обладают высокой специфичностью и активностью, что определяет возможность конструирования на их основе диагностических тест-систем.

5. Применение двухцикловой схемы иммунизации инактивированным антигеном из штамма В. abortus И-206 в L-форме 12 пассажа позволяет получать высокоактивную и высокоспецифичную кроличью сыворотку к бруцел-лам в L-форме, пригодную для идентификации возбудителя бруцеллеза в L-форме.

Апробация материалов диссертации

Материалы, посвященные вопросам L-трансформации, свойствам бруцелл в L-форме, диагностике бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме, представленные в диссертации, апробированы: на двух международных научных конференциях (Санкт-Петербург, 2008; Ставрополь, 2010), трех всероссийских научных и научно-практических конференциях, конгрессах (Киров, 2008; Оболенск, 2010; Москва, 2012), научных конференциях Иркутского противочумного института (2008-2012). Диссертационная работа обсуждена и одобрена на научной конференции ФКУЗ Иркутский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора (протокол № 1 от 10.01.2014 г).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них 5 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ, два патента на изобретения.

Личное участие автора

Автору принадлежит ведущая позиция в научном обосновании исследования, планировании и проведении экспериментов и обобщении полученных результатов. В этапах, выполненных в соавторстве, автором лично проведена экспериментальная работа, теоретический анализ, обсуждение полученных результатов и представление их в научных докладах и публикациях и внедрение их в практику.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 130 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав результатов собственных исследований и их обсуждений, заключения, выводов и списка литературы, включающего 145 библиографических источника, из которых - 116 отечественных, - 29 иностранных. Работа проиллюстрирована 13 таблицами и 30 рисунками.

ГЛАВА 1. ВОЗБУДИТЕЛЬ БРУЦЕЛЛЕЗА В L-ФОРМЕ 1.1 Общее представление об L-формах бактерий

Впервые способность бактерий существовать при отсутствии КС была описана Н.Ф. Гамалеей в 1894 г. [37, 60, 87]. Е. Клинебергер в 1935 г. впервые предложила термин «L-форма», который обозначает начальную букву института имени Листера в Лондоне, где она работала. По её мнению, L-трансформация - это спонтанно возникающий процесс, а L-формы — плев-ропневмониеподобные организмы, живущие в симбиозе с Streptobacillus moniliformis [134]. Dawson М.Н. и Hobby G. в 1939 г. показали, что Streptobacillus moniliformis и выделенные из культуры этого микроба клетки в L-форме, имеют общие антигены [121]. В дальнейшем многие исследователи занимались изучением измененных форм бактерий, в том числе и L-форм. Рассматривались вопросы получения, культивирования L-форм бактерий, условия их персистенции в клетках макроорганизма, особенность их морфологии, физиологии и антигенной структуры [86, 88, 97, 136].

В различные периоды развития учения об L-формах бактерий существовали концепции, объясняющие механизм этого явления. Предполагалось, что L-трансформация - патологический процесс, возникающий под влиянием неблагоприятно действующего фактора, или продукт летальной дегенерации клеток [108, 140, 141, 142]. Адаптационная гипотеза образования L-форм основывалась на простом взаимодействии бактериальной клетки с агентом, повреждающим КС [82, 123]. Гипотеза матричного синтеза КС заключается в том, что стабильные L-формы не имеют КС, которая является матрицей при синтезе своих собственных компонентов, поэтому случайная потеря КС необратимо препятствует ее нормальному биосинтезу и только создание определенных условий на специальных питательных средах позволяет бактериям репродуцироваться без КС [143, 144].

Адаптационно-мутационная гипотеза наиболее полно отражает механизмы процесса L-трансформации. При этом нестабильные культуры L-форм рассматриваются как явление фенотипической изменчивости бактерий, а ста-

бильные культуры Ь-форм - как мутанты с дефектом синтеза КС, селекционированные в популяции с помощью Ь-трансформирующих факторов [51, 97, 119]. Мутационную теорию следует рассматривать, как частный случай адаптационно-мутационной гипотезы, согласно которой стабильные культуры Ь-форм представляют собой мутанты с генетически детерминированным дефектом синтеза КС. Гипотеза определяет природу только стабильных Ь-форм бактерий, но не может распространяться на другие проявления процесса Ь-трансформации, связанные с образованием форм несбалансированного роста, протопластов, сферопластов и нестабильных Ь-форм бактерий [135].

В настоящее время можно считать доказанным возможность существования бактерий большинства видов в двух формах, имеющих различную структурную организацию: первая - бактериальные формы с КС и вторая -Ь-формы без КС [44, 97].

Образование Ь-форм представляет собой сложный процесс, развитие которого зависит от взаимодействия четырех основных компонентов: свойств популяции микроорганизмов, свойств питательной среды и условий культивирования, факторов индукции Ь-форм.

Факторами индукции могут быть антибиотики (пенициллин и его производные, полимиксин, ванкомицин, стрептомицин и другие), аминокислоты (глицин, метионин, аргинин, фенилаланин, лейцин), ферменты (лизоцим, ав-толитические ферменты), факторы иммунитета (комплемент, специфические иммуноглобулины), биологические агенты (бактериофаги), физические факторы (ультрафиолет и лучи Рентгена, резкое изменение температуры), а также различные химические факторы (озон, перекись водорода, препарат «Йо-дез-катапол», «Диметилсульфоксид») [35, 79, 122, 124, 128, 138].

По механизму действия факторы Ь-индукции делят на две группы: первая - воздействует на КС, нарушая те или иные этапы синтеза мукопептидов, вторая - влияет на генетический аппарат клетки с образованием мутантов,

дефектных по отдельным генам, кодирующим этапы синтеза пептидогликана [87].

Антибиотики подавляют синтез КС бактерий, ингибируя ферменты биосинтеза нуклеотидных предшественников пептидогликана, или блокируя липидный переносчик субъединиц КС, либо образуя комплекс с так называемой точкой роста, который препятствует сборке пептидогликановой цепи. Наиболее универсальным фактором для Ь-трансформации практически для всех видов патогенных бактерий следует считать пенициллин и его производные [87]. Успешное применение антибиотиков пенициллинового ряда для получения бруцелл в Ь-форме отмечено рядом исследователей [6, 25, 41, 71, 76, 105]. Точкой приложения пенициллина является подавление образования сшивок в структуре пептидогликана за счет ингибирования транспептидаз-ной и карбопептидазной активности [87].

Большая роль в процессе индукции Ь-форм в условиях макроорганизма принадлежит лизоциму. Результат действия лизоцима на бактериальную клетку может найти свое проявление в бактерицидном действии, изменении морфологии и способности к окраске, повреждении клеточных структур, нарушении деятельности некоторых ферментных систем и другом [19, 106].

Несомненное значение для образования Ь-форм имеет влияние специфических антител (Ат), что показано в экспериментах с применением диффузионных камер, введенных в организм иммунных и неиммунных животных. С применением этого метода изучена возможность индукции и персистенции Ь-форм брюшнотифозной инфекции у кроликов. В результате эксперимента установлено, что, спустя 18 месяцев (срок наблюдения), из органов животных лишь в отдельных случаях выделяли бактериальные формы, вместе с тем формы несбалансированного роста и нестабильные культуры Ь-форм выявляли с высокой частотой. Полученные результаты позволили авторам сделать вывод о том, что в организме животных, перенесших острый инфекционный процесс, происходит Ь-трансформация значительной части популяции возбудителя, которая, наряду с бактериальными формами, а нередко и самостоя-

тельно, может играть существенную роль в поддержании очага инфекции [115].

Принципиальная схема и классификация основных этапов процесса образования и стабилизации Ь-форм бактерий основана на природе явления, обусловленного присутствием или отсутствием генетических детерминант, определяющих морфологический фенотип бактериальной клетки. В этой схеме категории изменений представлены тремя фазами: фаза сбалансированного роста, фаза несбалансированного роста и Ь-фаза. Постепенность перехода одной фазы в другую, отсутствие четких критериев, позволяющих отнести пограничные формы (формы несбалансированного роста и незавершенные Ь-формы) к той или иной фазе, позволяют рассматривать процесс пребывания бактерий в виде этих форм как границы не разделяющие, а связывающие отдельные этапы в единый процесс Ь-трансформации. Поэтому фаза сбалансированного роста включает бактериальные клетки и формы несбалансированного роста, сферопласты, протопласты и незавершенные Ь-формы; Ь-фаза - нестабильные Ь-формы, условно стабильные Ь-формы и стабильные Ь-формы. Ь-фаза объединяет различные Ь-формы и представляет объекты, для которых характерен цикл взаимных превращений шаровидных и элементарных тел (сферо- и протопластов) [87].

1.2 Роль Ь-форм микроорганизмов в течение заболевания

В целом роль измененных бактерий и, в частности, Ь-форм в инфекционном процессе остается недостаточно изученной. В литературе процесс Ь-трансформации связывают с хронизацией и проявлением рецидивов различных инфекционных заболеваний, вызываемых многими микроорганизмами в атипичной форме. Хронический рецидивирующий характер большинства заболеваний, вызываемых стрептококками, связывают со способностью возбудителя под действием антибиотиков или других факторов переходить в Ь-формы, а при определенных условиях, реверсировать в исходные бактерии [114]. Так, длительное внутридермальное сохранение Ь-форм стрептококка в

виде очагов эндогенной инфекции, в том числе в макрофагах дермы, приводит к хроническому течению рожи [34]. Ю.В. Вульфович, P.C. Амбарджанян в опытах на лабораторных животных показали роль L-форм стрептококка в этиологии и патогенезе ревматических заболеваний. L-формы стрептококка, персистирующие в печени, вызывали хронический гепатит с некрозом отдельных клеток, а в почечных тканях — гломерулонефрит [24]. Описан случай бактериемии, вызванный L-формой Streptococcus sanguis у человека, при этом источником инфекции явилась домашняя собака [120]. L.H. Mattman и P.E. Mattman выделяли из крови больных подострым бактериальным эндокардитом и при септицемии не реагировавших на антибиотикотерапшо Streptococcus faecalis в L-форме. Причем L-варианты, сферопласты и другие переходные формы, реверсировавшие в исходную культуру, удалось выделить только на средах, пригодных для культивирования L-форм, в то время как на обычных питательных средах бактериальные формы не выделялись [137]. У детей больных гломерулонефритом, хроническим пиелонефритом выделили 21 культуру в L-форме, которые реверсировали в стрептококки, что свидетельствовало о видовой принадлежности их к стрептококку [52].

Е.Б. Вишневская и др. с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) подтвердили, что изоляты в L-форме от пациентов с экспульмональным туберкулезом относятся к Mycobacterium tuberculosis [38]. L-формы возбудителя выделяются в 56,7 % случаев от туберкулиноположительных лиц с остаточными туберкулезными изменениями [107].

R.G. Wittler и др. показали, что пенициллинотерапия при септическом эндокардите приводила к ремиссиям, которые сопровождались выделением переходных и нестабильных L-форм Corynebacterium. При прекращении ан-тибиотикотерапии наступали рецидивы, в этот период выявлялись бактериальные формы Coiynebacterium spp., а изолировать L-формы не удавалось [131].

Г.А. Лёвина и др. показали возможность длительной персистенции L-форм Salmonella typhi в организме лабораторных животных. По их мне-

нию, это свидетельствует о возможности участия L-форм S. typhi в процессе длительной персистенции возбудителя в организме переболевших лиц и бактерионосителей [39].

Сферопластоподобные L-формы (SL) Borrelia burgdorferi выделялись в 60-80 % случаев болезни Лайма после лечения антибиотиками; как показали V. Preasc Mursic и др., культивирование В. burgdorferi на среде с пенициллином приводит к образованию таких же SL-форм. Авторы предполагают, что эти формы являются причиной длительного выживания возбудителя в организме человека и отмечают исчезновение титров антител против SL-форм в период ремиссии, а также повторного нарастания титров SL-антител после рецидива заболевания [127].

1.3 Бруцеллы в L-форме

Изучение бруцелл в L-форме началось с середины прошлого века. L-трансформанты получали из различных штаммов бруцелл в экспериментальных условиях как in vitro, так и in vivo.

Для получения L-форм in vitro использовали плотные, жидкие и полужидкие питательные среды различного состава, трансформирующим агентом в основном служил антибиотик пенициллинового ряда, а также налидиксовая кислота. Питательную среду на основе бульона Альбими, содержащую тио-нин (100 г/%), никотинамид (100 г/%) и агар Дифко (2 %), для выделения бруцелл в L-форме применил E.L. Nelson [139]. H.H. Островская и др. для получения L-трансформантов бруцелл испытали различные питательные среды: печеночно-глюкозо-глицериновую, среду Альбими, мясо-пептонную, сывороточно-декстрозную, приготовленные в полужидком (0,1-0,3 % агар-агара) и плотном состоянии (1-1,3 % агар-агара), с различными концентрациями добавок: нормальной лошадиной сыворотки (НЛС), сахарозы - 10, 15 и 20 %, 2 % раствора магния сернокислого в объеме 10, 15 и 20 %, натрия хлорида 0,1, 0,6, 1,5 и 3 %. Трансформирующим агентом служил пенициллин. Наиболее хорошие результаты были получены на печеночно-глюкозо-

глицериновой среде [71]. Другие исследователи, применив печеночно-глюкозо-глицериновый агар с добавлением осмотических стабилизаторов, показали, что L-трансформирующим действием обладает только бициллин-3, в то время как лизоцим и бруцеллезная агглютинирующая сыворотка не вызывали индукции L-форм у бруцелл разных видов [112]. П.А. Триленко получал L-субкультуры бруцелл на питательной среде, приготовленной по прописи: отвар мышцы сердца крупного рогатого скота (КРС) -1000 мл, пептона 1 %, натрия хлорида 0,5 %, агар-агара 0,3-2,0 %, сахарозы 2 % при рН 7,6, трансформирующим агентом служил пенициллин [105]. По мнению И.А. Ба-зикова, питательную среду на основе триптического перевара сердца КРС с добавлением 10-20 % сахарозы, 0,05-5 % магния сульфата, 0,1-1 % натрия хлорида, 1 % глицерина, 15-20 % НДС, 0,01-0,03 % налидиксовой кислоты и комбинации бициллина-3 с глицином в качестве трансформирующего агента более эффективно применять для L-трансформации бруцелл. Стабильные L-формы бруцелл получали на жидкой печеночной питательной среде с 20 % HJIC, 0,05 % магния сульфата и 10 % сахарозы с последующим пересевом на полужидкий агар на основе триптического перевара сердца КРС [5, 6, 9, 116]. Е.Б. Барабанова для получения L-форм бруцелл использовала жидкие, полутвердые и плотные мясопептонные и мясопептонные-глюкозо-глицериновые питательные среды с добавлением осмотических стабилизаторов: сахарозы, сернокислой магнезии, хлорида натрия и 15-20 % сыворотки КРС; индуцирующим агентом служила калиевая соль бензилпенициллина [10].

Под влиянием возрастающих концентраций пенициллина на полутвердом мартеновском глюкозо-глицериновом агаре с 20 % НЛС удалось получить сферопласты, а затем и L-формы из вирулентных штаммов В. abortus [102]. Также показано, что в результате пассирования на плотной питательной среде под действием возрастающих концентраций препаратов бруцеллы повышают устойчивость к тетрациклину и стрептомицину в 5-40 раз, рифам-пицину в 860-2400 раз [99], а мутанты, устойчивые к действию антибиотиков

пенициллинового ряда, приобретают устойчивость к тетрациклину и хлор-тетрациклину, а некоторые из них и к левомицетину [48].

Некоторые исследователи получали и культивировали бруцеллы в L-форме на культуре тканей [125, 130]. Для выделения бактерий в L-форме (В. subtilis, Streptococcus haemoliticus, Salmonella typhi, и S. typhimurium, Proteus vulgaris, Listeria monocytogenes) применяли линейные градиенты плотности урографина 60 % и фиколла 45 % с культуральной жидкостью и последующим центрифугированием при 40000 об/мин и температуре 4 °С. В результате опытов получали L-формы бактерий неоднородные по плотности [32], что, по-видимому, возможно применять и в отношении бруцелл. Заслуживает внимания метод выращивания бактерий на миллипоровых фильтрах в среде на основе перевара бычьих сердец с добавками осмотических стабилизаторов и НДС с целью изучения структуры L-форм методом сканирующей электронной микроскопии. Применение этого метода выращивания позволило выявить некоторые структурные особенности L-форм бактерий, заключающиеся в обнаружении соединений друг с другом в виде тяжей, и наличии тонкой пленки, окружающей колонии в виде кокона, химическая природа которой не установлена [78, 85].

Бруцеллы в L-форме получали также непосредственно в организме животных. Биологической моделью служили белые мыши и морские свинки. Белым мешам вводили адаптированные in vitro к бициллину-3 штаммы бру-

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Баранникова, Наталья Леонидовна, 2014 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Активность ТТХ-редуктазы псевдотуберкулезного микроба в присутствии компонентов цитратного цикла и глюкозы / О.Г. Татарникова, Г.А. Яромюк, Э.С. Каретникова / Иркут. НИПЧИ Сибири и ДВ. - Иркутск,1992. : Деп. ВИНИТИ 22.07.92. - 2412-В92. - 19 с.

2. Афанасьев E.H. Сравнительная характеристика антигенной структуры бактерий рода BRUCELLA : автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07/ Всесоюзн. НИПЧИ «Микроб». - Саратов, 1984. - 20 с.

3. Ашмарин И.П., Воробьев A.A. Статистические методы в иммунологии -Л.: Медгиз, 1962.- 180 с.

4. Базиков И.А. Л-трансформация бруцелл // Эпидемиол., микробиол. и иммунол. бактериальных и вирусных инфекций: Тез докл. обл. науч. конф. молодых ученых. 17-20 октября 1989 г. - Ростов-на-Дону, 1989. -С. 5-8.

5. Базиков И.А. Морфологическая характеристика L-форм рода бруцелла, полученных при их стабилизации // ООИ на Кавказе: Тез. докл. к шестой краевой науч. конф., посвящ. 70-летию Великой Октябрьской социалистической революции, - Ставрополь, 1987. - С. 215-216.

6. Базиков И.А. Получение и характеристика L-форм бруцелл и их ревер-тантов: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 03.00.07 / НИПЧИ Кавказа и Закавказья. - Саратов, 1990. - 16 с.

7. Базиков И.А. Совершенствование лабораторной диагностики бруцеллеза / И.А. Базиков // Совр. аспекты профилакт. зооноз. инф.: Тез. докл. науч. конф. - Ставрополь, 1991. - С. 5-7.

8. Базиков И.А., Бондаренко А.И. Ультарструктурная организация Л-форм бруцелл и культур-ревертантов // Журн. ЖМЭИ. 1991. - № 1. - С. 17-20.

9. Базиков И.А., Таран И.Ф. Получение и сравнительная характеристика Л-форм бруцелл и их ревертантов // Актуал. вопр. профилакт. бруцеллеза и организации мед. помощи больным: Тез. докл. Всесоюзн. конф., Новосибирском., 1989.-С. 61-63.

10. Барабанова Е.Б. Изучение метода лазерной спектроскопии в целях использования для индикации L-форм бруцелл: автореф. дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / ВНИИБТЖ. - Омск, 1996. - 17 с.

11. Братцев А.Ю. Идентификация глубоко измененных форм бруцелл комплексным методом // Эпизоотол., диагност, и профилакт. хронических инф. болезней животных: сб. науч. тр. материалы международной науч. конф. посвященной 175-летию аграрной науки Сибири, Омск, - 2003. -С. 200-2003.

12. Братцев А.Ю. Способность к реверсии L-вариантов бруцелл in vitro и in vivo // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инф. болезнях животных : сб. науч. тр. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. - Омск, 2004. - С. 77-80.

13. Братцев АЛО. Характеристика морфологических и тинкториальных признаков культур-ревертантов, изолированных от морских свинок при однократном пассировании штамма Brucella abortus 19 L3 // Инф. патология животных, Омск, 2011, - С. 154-155.

14. Братцев А.Ю., Гордиенко JI.H. Персистенци L-форм бруцелл в организме лабораторных животных // материалы Всероссийской науч. конф. по проблемам хронических инфекций : сб. тр. / РАСХН. Сиб. отд-ние. ВНИИБТЖ. - Омск, 2001. - С 96-98.

15. Братцев А.Ю., Гордиенко JI.H. Степень патогенности бруцелл в зависимости от их происхождения и форм существования // Актуальные проблемы ветеринарной медицины : сб. науч. тр. / СО РАСХН. ВНИИБТЖ. -Омск, 2005.-С 68-71.

16. Братцев А.Ю., Гордиенко Л.Н., Ощепков В.Г. Диагностические качества L-бруцеллезных антигенов и антисывороток при выявлении хронических и латентных форм инфекции у северных оленей // Эпизоотология, диагностика и профилактика хронических инф. болезней животных: сб. науч. тр. материалы международной науч. конф. посвященной 175-летию аграрной науки Сибири, Омск, - 2003. - С. 194-199.

17. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / И.А. Косилов, П.К. Ара-келян, С.К. Димов, А.Г. Хлыстунов. - Новосибирск, 1999. - 343 с.

18. Булдыгин Д.В., Гордиенко JI.H., Шестаков В.А. Степень выраженности реакции организма лабораторных животных в зависимрсти от введенной дозы L-культур бруцелл // материалы Всероссийской науч. конф. по по-блемам хронических инфекций (бруцеллез, туберкулез), Омск, 2011. - С. 86-92.

19. Бухарин О.В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О.В. Бухарин, Н.В. Васильев. - Томск, 1974. - 178 с.

20. Вершилова П.А. Персистенция бруцеллезных L-культур в организме экспериментального животного и длительность иммунитета / П.А. Вершилова, H.A. Грекова, Т.А. Толмачева // Вестн.АМН СССР. - 1985. - № З.-С. 10-13.

21. Вершилова П.А., Толмачева Т.А. Изучение состояния иммунитета у морских свинок, зараженных L-формами Brucella // Журн. микробиол. -1982.-№9.-С. 107-109.

22. Воробьев А.Л. Биологические свойства сапрофитных вариантов бруцелл // Ветеринарная патология. -2010. - № 1.-С. 11-17.

23. Воробьев А.Л. Литический спектр фагов L-форм бруцелл // Ветеринарная патология. -2010. -№ 2. - С. 11-16.

24. Вульфович Ю.В., Амбарджанян P.C. Хронический рецидивирующий патологический процесс, вызванный персистирующими L-формами стрептококка группы А в эксперименте // Вестн. АМН СССР. - 1983. -№ 3. - С. 17-21.

25. Гордиенко Л.Н. Культуральные и биологические свойства L-вариантов В. abortus, индуцированных пенициллином // Инфекц. и паразитарные болезни с.-х. животных : сб. науч. работ вет. института. — Л., 1981. - № 68.-С. 35-37.

26. Гордиенко Л.Н. Свойства измененных форм бруцелл, изолированных от северных оленей в очагах «оленьего» бруцеллеза // Эпизоотология, ди-

агностика и профилактика хронических инф. болезней животных (матер, междунар. науч. конф., посвященной 175-летию аграрной науки Сибири: сб. науч. тр. / СО ВНИИБТЖ РАСХН. - Омск, 2003. - С. 222-224.

27. Гордиенко JI.H. Фенотипическая изменчивость бруцелл в процессе L-трансформации in vitro // Весник Алтайского государственного аграрного ун-т. - 2011. - № 8 (82). - С. 71 -73

28. Гордиенко Л.Н., Гертман О.Г. Индикация L-вариантов бруцелл, выделенных от крупного рогатого скота на территории Амурсой области // Актуал. вопр. профилактики бруцеллеза и организация мед. помощи больным : Тез. докл. Всесоюзн. конф. (24-25 окт. Новосибирск). - М., 1989.-С. 135-136.

29. Гордиенко Л.Н., Толстиков В.Г., Шварева А.Ю. Эффективность применения R- и L-диагностикумов в общем комплексе лабораторных исследований северных оленей на бруцеллез // Материалы Всероссийской науч. конф. по проблемам хронических инфекций (бруцеллез, туберкулез) (16-17 ма 2001 г.) : сб. науч. тр. - Омск, 2011. - С. 57-63.

30. Грекова H.A., Толмачева Т.А., Вершилова П.А. К вопросу о патогенно-сти нестабильных Л-форм бруцелл и их Ревертантов // Журн. гигиены, эпидемиол., микробиол. и иммунол. - 1979. - Т. 23 - № 2. - С. 120-124.

31. Диагностика бруцеллеза, обусловленного возбудителем в L-форме/ Михайлов Л.М. Калиновский А.И. Баранникова Н.Л. и др. // Всероссийская научная конференция, посвященная 80-летию со дня основания ФГУ «48 ЦНИИ Минобороны России» Киров, 2008 г. - С. 94-99;

32. Дианова-Клокова H.A., Тартаковский И.С., Прозоровский C.B. Выделение L-форм бактерий из смешанных микробных популяций методом ультрацентрифугирования // Журн. микробиол. - 1980. - № 2. - С. 81-84.

33. Драновская Е.А., Толмачева Т.А., Ростовцева H.A. Изучение антигенной структуры и химического состава бруцелл в процессе их L-трансформации и реверсии // Журн. микробиол. - 1981. - № 7. - С. 3135.

34. Жаров М.А. Рожа: клинико-эпидемиологическая характеристика, совершенствование методов лечения и прогнозирования течения болезни: Автореф. дис. ... док.мед.наук: 14.00.10 / ФГУН "Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии". - Москва, 2007

35. Жолкевич А.Я. К вопросу о влиянии лучей Рентгена на бактерии // Вестник рентгенологии и радиологии. - 1926. - Т. 4. - № 2. - С. 7-22.

36. Значение Jl-форм бруцелл в эпизоотическом процессе / М.М. Ременцо-ва, В.М. Семенцова, В.М. Нифантьев и др. // Актуал. вопр. профилактики бруцеллеза и организация мед. помощи больным : Тез. докл. Всесо-юзн. конф. - М.,1989. - С.60-61.

37. Зыкин Л.Ф. L-формы возбудителей зооантропонозов / Л.Ф. Зыкин, Д.А. Васильев. - Ульяновск, 2000. — 68 с.

38. Идентификация Л-форм Mycobacterium tuberculosis с помощью полиме-разной цепной реакции (ПЦР) / Е.В. Вишневская, А.П. Бобченок, Н.Н. Мельникова, В.И. Вишневский // Пробл. туберкулеза - 2001. - № 4. - С. 38-40.

39. Изучение процесса персистенции L-форм брюшнотифозных бактерий в организме экспериментальных животных методом иммунорадиметриче-ского анализа / Г.А. Левина, А.Л. Горелов, Э.Н. Князева и др. // Журн. микробиол. - 1988. -№ 3. - С 85-90.

40. Изучение роли L-форм бруцелл, их ревертантов и исходных культур / И.Ф. Таран, Б.П. Цыбин, А.А. Крылова, Т.А. Аболина // Журн. микробиол. -1981. - № 6. - С. 39-43.

41. Индукция L-форм бруцелл и изучение их биологических свойств / Б.П. Цыбин, И.Ф. Таран, А.А. Крылова, Е.Н. Афанасьев // Микробиол., им-мунол., клиника и эпидемиол. инфекц. Заболеваний: Сб. науч. работ, Ставрополь, 1979. - С. 28-29.

42. Использование реакции молекулярной ДНК-ДНК гибридизации для определения принадлежности атипичных культур к роду Brucella / С.К. Артюшин, В.И. Мельниченко и др. // Всесоюзная конф. Актуальные во-

просы профилактики бруцеллеза и организации мед. помощи больным : тез. докл., М., 1989, - С. 70-71.

43. К патоморфологии экспериментального бруцеллеза, вызываемого некоторыми штаммами бруцелл овечьего вида, длительно культивированных в средах с антибиотиками / В.И. Терновой, З.Д. Хахина, В.И. Николаева, B.C. Уралева // Пробл. ООН. - Саратов, 1969. - Вып. 4. - С. 71-76.

44. Каган Г .Я. Изменчивость микроорганизмов / Г.Я. Каган, B.C. Левашов. - М., 1957. - Вып. 2. - С. 363.

45. Калиновский А.И. Эпидемиологическая обстановка по бруцеллезу в Сибири и на Дальнем Востоке и проблема его профилактики // Журн. инфекционной патологии, - № 1, - том 4, - Иркутск, 1997

46. Карпеченкова О.В., Куликова Е.В., Гордиенко Л.Н. Выявление иммуноглобулинов в сыворотке крови северных оленей к S, R, L-формам бруцелл // Эпизоотология, патология и ветеринарно-санитарные мероприятия при инфекционных болезнях животных: сб. науч. тр. ВНИ-ИБТЖ. - Омск, 2004. - С. 95-100.

47. Козлов Ю.А. Питательные среды в микробиологии / Ю.А. Козлов - М.: Медгиз, 1950.-252 с.

48. Кондратьева О.В., Степанов В.М., Медведенко Н.П. Изучение влияния некоторых антибиотиков пенициллинового ряда на свойства бруцелл // Антибиотики. - 1979. - № 6. - С. 454-458.

49. Лабораторная диагностика бруцеллеза у людей. Инструкция 4.2.10-1965-2005, Минск, 2005. - 38 с.

50. Лабораторная диагностика опасных инфекционных болезней / Практическое рук. под ред. Г.Г. Онищенко, В.В. Кутырева, М., Медицина, Ши-ко.-2009.-470 с.

51. Левашов B.C. Генетическая характеристика L-форм бактерий, процессов их образования и реверсии: Дис. ... докт. мед. наук: 03.00. 07/ М., 1966.-481 с.

52. Машков A.B. Видовая принадлежность L-форм, выделенных из крови детей при гломерулонефрите и хроническом пиелонефрите // Журн. микробиол. - 1978. -№ 1. - С. 35-36.

53.Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники. - JI. : Медицина, 1969.-423 с.

54. Методические рекомендации Бактериологическая диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота с учетом R- и L-форм бруцелл / Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н. : Омск, - СО ВАСХНИЛ, 1987. - 11с.

55. Методические рекомендации по детекциибруцелл в различном биологическом материале с помощью полимеразной цепной реакции / М.Ю. Шестопалов, C.B. Балахонов, А.И. Калиновский: Метод, рекомендации / ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ. - Иркутск, 1997. - 8 с.

56. Методические рекомендации по повышению результативности исследований эктопаразитов в природных очагах чумы / Л.П. Базанова, М.П. Маевский, З.И. Васильева и др. / Иркут. НИПЧИ Сибири и ДВ. — Иркутск, 1990.-6 с.

57.Методические рекомендации по составу фиксаторов и режима двойной фиксации материала для электронной микроскопии / С.Р. Саямов, В.Я. Курилов / ВНИПЧИ. - Волгоград, 1983. - 5 с.

58. Методические рекомендации. Методы индикации и идентификации L-форм бруцелл / В.Г. Ощепков, Л.Н. Гордиенко, А.Ю. Братцев, В.И. Око-лелов, Е.Б. Барабанова. - Омск, 2005. - 19 с.

59. Методические рекомендации по контролю специфической стерильности биологических препаратов, приготовленных из бруцелл/ О.С. Петухова, А.И. Калиновский., И.В. Лаукнер и др.: Метод, рекомендации / ИркутскНИПЧИ Сибири и ДВ. - Иркутск, 1987. - 4 с.

60. Многотомное руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней / под ред. член АМН ССР проф. H.H. Жу-ков-Вережников , том 1, М. : МЕДГИЗ, 1962. - С. 574-594.

61. Монцевичюте-Эрингене В. Статистическая обработка результатов // Патология, физиология и экспериментальная терапия. - 1965. - № 4. - С. 71-78.

62. Морфо- и сероварианты L-форм В. abortus начального этапа трансформации и их биологические свойства / В.Г. Ощепков, JI.H. Гордиенко, А.Ю. Шварева, Д.В. Булдыгин // Актуал. пробл. бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. СО ВНИИБТЖ РАСХН. - Омск, 2000. - С. 257-270.

63. МУ 1.3.1794-03. Организация работы при исследованиях методом ПНР материала, инфицированного микроорганизмами I-II групп патогенно-сти : Методические указания, - М., 2003. - 39 с.

64. МУ 3.1.7.1189-03 Профилактика и лабораторная диагностика бруцеллеза людей. Профилактика инфекционных болезней. Инфекции общие для человека и животных : Методические указания. -М., 2003 г. - 38 с.

65. МУК 4.2.2495-09. Определение чувствительности возбудителей опасных бактериальных инфекций (чумы, сибирской язвы, холеры, туляремии, бруцеллеза, сапа и мелиоидоза) к антибактериальным препаратам : Методические указания, - М., - 2009.

66. Никитин В.М. Справочник методов иммунологии / В.М. Никитин. -Кишинев: ШТИИНЦА, 1982. - С. 62-65.

67. Нифантьев В.М., Ищанова Р.Ж. Пути усовершенствования диагностики бруцеллеза // Актуал. вопр. профилактики бруцеллеза и организация мед. помощи больным : Тез. докл. Всесоюз. конф. - М., 1989. - С. 93-94.

68. Новые питательные среды из непищевого сырья для культивирования возбудителя туляремии / Н.П. Роговая, О.В. Шеремет, И.Я. Черепахина и др. // Разработка и производство препаратов мед. биотехнологии, тез. конф. - Махачкала, 1990. - ч. Д. - С. 35-36.

69.0 стимулирующем действии некоторых препаратов молибдена на рост возбудителя чумы на агаре Хоттингера и синтетических средах / Л.Н. Классовский, Л.И. Терентьева, В.М. Самыгин и др. // XI Межреспубл.

науч. - практ. конф. пртивочумн. учреждений Средней Азии и Казахстана по профилакт. чумы: Тез докл. - Алма-Ата, 1981. — С. 57-60.

70. Особенности лабораторной диагностики экспериментального бруцеллеза, вызванного S- и L- формами возбудителя / Михайлов JI.M. Калинов-ский А.И. Баранникова Н.Л. и др. // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН, 2012. -№2(84). - часть 1.-С.131-134.

71. Островская H.H., Вершилова П.А., Толмачева Т.А. К вопросу об образовании у бруцелл L-форм в условиях искусственной питательной среды // Журн. микробиол. - 1972. -№ 4. - С. 108-112.

72. Островская H.H., Толмачева Т.А. Вирулентность для морских свинок L-форм бруцелл вида Abortus // Журн. микробиол. - 1974. - № 6. - С. 146147.

73. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н. L-трансформация бруцелл - значение в эпизоотическом процессе и эволюции рода Brucellae // Вет. патология.-2004.-№4.-С. 36-46.

74. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н. Антигенные и вирулентные свойства Л-вариантов бруцелл, выделенных от крупного рогатого скота // Эпизоотология и иммунопрофилактика болезней с.-х. животных. - Новосибирск, 1983.-С. 8-15.

75. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н. Получение и применение специфических сывороток для идентификации L-форм бруцелл // Паразиты и вызванные мим болезни в Сибири : тез. докл. второй науч. конф. Новосибирского отделения Паразитологического общества РАН, Новосибирск, 1997, - С. 86-87.

76. Ощепков В.Г., Гордиенко Л.Н. Свойства L-вариантов бруцелл, полученных из S- и R-форм В. abortus под действием пенициллина // Диагност., патогенез и лечение инфекционных и инвазивных заболеваний с.-х. животных. - Омск, 1984. - С.60-64.

77. Ощепков В.Г., Кривошеев И.О. L-трансформация Brucella canis in vitro и в организме собак // Ифекционная патология животных. - 2001. - С. 140144.

78. Павлова И.Б. Закономерности развития популяций бактерий в окружающей среде (электронно-микроскопическое исследование): Дис. ... в виде науч. докл. докт. биол. наук: 16.00.06 / ВНИИВСГЭ. - М., 1999. -59 с.

79. Павлова И.Б., Левченко Е.М., Банникова Д.А. Атлас морфологии популяций патогенных бактерий. - М.: Колос, 2007. - 180 с.

80. Перминова Н.Г. Роль некоторых компонентов цикла Кребса в редукции теллурита калия холерным вибрионом и конструирование селективных сред для диагностики холеры: автореф. дис. ... канд. мед.наук : 03.00.07 / Всесоюзн. НИПЧИ «Микроб». - Саратов, 1983. - 13 с

81. Персистенция и трансформация бруцелл в иммунном организме крупного рогатого скота / Л.Н. Гордиенко, B.C. Бронников и др. //Материалы Всероссийской науч. конф. по проблемам хронических инфекций (бруцеллез, туберкулез) (16-17 мая 2001 г.), Омск, 2001, - С. 51-57.

82. Пешков М.А. Цитология бактерий / М.А. Пешков. - М.-Л.: Изд-воАНСССР, 1955.-220 с.

83.Питательная среда для выделения и культивирования чумного микроба сухая: Регламент производства № 983-00 / Иркут. НИПЧИ Сибири и ДВ. -Иркутск, 2000.- 137 с.

84. Питательная среда для определения потребности чумного микроба в ионах кальция сухая (ВМ): Регламент призводства № 951-00 / Иркут. НИПЧИ Сибири и ДВ. - Иркутск, 2000. - 134 с.

85. Применение метода выращивания микроорганизмов на миллипоровых фильтрах для изучения их структуры со сканирующим электронным микроскопом / Г.А. Левина, Л.Н. Лаврова, Л.Р. Семенова и др. // Журн. микробиол. - 1980. - № 2. - С. 98-102.

86. Прозоровский C.B. Роль L-формы в персистенции патогенных бактерий // Вестн. АМН СССР. - 1985. - № 3. - С. 3-9.

87. Прозоровский C.B. L-формы бактерий / C.B. Прозоровский, JI.H. Кац., Г.Я. Каган. - М.: Медицина, 1981. - 239 с.

88. Процессы JI-трансформации бактерий и реверсии L-форм в организме аргасовых клещей / Г.А. Левина, В.М. Подборонов, C.B. Прозоровский и др. // Журн. микробиол. - 1983. - № 7. - С. 47-51.

89. Реакция латексной агглютинации для выявления антител к Л-формам бруцелл / И.А. Базиков, И.Ф. Таран, Е.П. Ерохин, Ю.В. Лукин // тез. докладов VI Всероссийского съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов, 1991. - Т. 2. - С. 242-243.

90. Ременцова М.М. Экология возбудителя бруцеллеза // Acta Microbiol. Bulgarica. - 1984. - С. 3-7.

91. СанПиН 2.1.7.728-99. Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений : Санитарные правила и нормы. -М., 1999

92. Свойства Л-культур бруцелл / Р.Ж. Ищанова, В.М. Семенцова, В.М. Нифантьев, Н.Х. Хасанов // Ветеринария. - 1986. - № 9. - С. 30-32

93. Современные методы исследования в диагностике бруцеллеза /Л.Б. Бе-лоножкина, А.К. Гражданов, С.И. Рамазанова и др. // материалы X Меж-гос. науч.-практической конф. государств - участников СНГ, - Ставрополь, 2010,-С. 165-166.

94. СП 1.2.036-95. Порядок учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности : Санитарные правила. - М., 1995

95. СП 1.3.1285-03. Безопасность работы с микроорганизмами I-II групп патогенности (опасности) : Санитарно-эпидемиологические правила. - М., 2003 - 85 с.

96. Степень выраженности реакции организма лабораторных животных в зависимости от введенной дозы L-культуры бруцелл / Д.В. Булдыгин,

JI.H. Гордиенко, B.A. Шестаков, A.IO. Братцев // Матер, всерос. науч. конф. по пробл. хронических инф. - Омск, 2001. - С. 86-92.

97. Тимаков В.Д. L-формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии / В.Д. Тимаков, Г.Я. Каган. - М.: Медицина, 1973. - 392 с.

98. Толмачева Т.А. Биологические свойства и ультраструктура бруцелл в процессе JI-трансформации и реверсии : автореф. дис... канд. биол. наук : 03.00.07 / Акад. мед. наук СССР Ордена трудового красного знамени ин-т эпидемиологии и микробиол. им. почетного академика Н.Ф. Гамалеи.-М., 1980-25 с.

99. Толмачева Т.А. Изучение L-трансформирующего действия на клетки бруцелл тетрациклина, стрептомицина, рифампицина и их комбинаций с пенициллином в опытах in vitro // Журн. микробиол. - 1976. - № 9. - С. 771-774.

100. Толмачева Т.А. Реверсия L-форм бруцелл in vitro и in vivo и свойства полученных ревертантов // Журн. микробиол. - 1975. — № 1. - С. 145146.

101. Толмачева Т.А. Судьба Л-форм бруцелл в организме (экспериментальные данные) // Матер. Всесоюз. науч.-практ. конф. по бруцеллезу: тез. докл. - М., 1978. - С. 58-60.

102. Толмачева Т.А., Кац Л.Н. Биологические свойства и ультраструктура бруцелл в процессе L-трансформации и реверсии // Журн. микробиол. -1977.-№ 1.-С. 90-93.

103. Толмачева Т.А., Кац Л.Н., Грекова H.A. Структура клетки и патоген-ность бруцелл на разных этапах L-трансформации // Журн. микробиол. -1979.-№8.-С. 63-67

104. Толмачева Т.А., Мельниченко В.И., Артюшин С.К. Реакция молекулярной ДНК-ДНК-гибридизации как метод идентификации L-форм бруцелл // ЖМЭИ. - 1988. - № 10. - С. 110.

105. Триленко П.А. Бруцеллез сельскохозяйственных животных / П.А. Три-ленко. - Л.: Колос, 1976. - 279 с.

106. Федорова Г.И. Протопласты и сферопласты бактерий, как этап образования Л-форм : Автореф. дис. ... канд. мед.наук / 2-й Московский гос. мед. ин-т. им. Н.И. Пирогова. - Москва, 1966. - 25 с.

107. Хоменко А.Г., Кочемасова З.Н., Дыхно М.И. Значение L-трансформации и реверсии возбудителя в эпидемиологии туберкулеза // Журн. микробиол. - 1984. - № 3. - С. 9-15.

108. Хуз У. Строение и развитие индуцированных длинных форм бактерий. В. кн. : Анатомия бактерий (1956), пер. с англ. - М., 1960, - С 371-392.

109. Цыбин Б.П., Лунина E.H., Таран И.Ф. Влияние персистирующих Л-форм бруцелл на генез реакции ГЗТ и восприимчивость к заражению вирулентными штаммами бруцелл // ООИ на Кавказе : Тез. докл. к шестой краевой науч. конф., посвящ. 70-летию Великой Октябрьской Социалистической революции. - Ставрополь, 1987. - С. 247-249.

110. Цыбин Б.П., Таран И.Ф. Получение L-форм бруцелл и изучение их приживаемости в организме белых мышей // Всесоюз. науч.-практ. конф. по бруцеллезу: Тез докл. Май 1978, Алма-Ата. - М., 1978. - С. 57-58.

111. Цыбин Б.П., Таран И.Ф., Ельников А.Т. Антитела к Л-формам бруцелл у человека и сельскохозяйственных животных // Актуальные вопросы иммунодиагностики ООИ : тез.докл. Всесоюзной науч.-практ. конф., Ставрополь, 1986,-ч. 2,-С. 158-162.

112. Цыбин Б.П., Таран И.Ф., Крылова A.A. Сравнительная оценка методов индукции L-форм бруцелл и изучение их приживаемости в организме животных / Б.П. Цыбин, // Журн. микробиол. - 1974. - № 4. - С. 66-70.

113. Черкасский Б.Л. Эпидемиологический надзор за зоонозами / Б.Л. Черкасский, С.А. Амиреев, А.Г. Кноп. - Алма-Ата : Изд-во Наука, 1988. -159 с.

114. Чурилова Н.С. Субмикроскопическая организация гемолитических стрептококков и их Л-форм : автореф. дис. ... канд.биол.наук : 03.00.07 / . - Москва, 1985

115.Ягуд С.JI. Кишечные инфекции / С.Л. Ягуд, М.И. Грутман. - Киев, 1979.-вып. 11.-С. 14-18.

116. L-трансформация В. ovis на искусственных питательных средах и в организме овец / В. Г. Ощепков, И.Г. Копейкин, Е.М. Степанов и др. // Диагностика и профилактика инфекц. и инвазивных заболеваний с.-х. животных : Сб. науч. тр. ОМСХИ. - Омск. - 1986. - С.21-28.

117. Attempts of ultrastructural and biochemical characterization of cell wall deficient Brucella / J. Schmitt-Slomska, R. Caravano, P. Thomas, J. Roux // Ann. Microbiol. - 1982. - Vol 133, № 3. - P. 377-386.

118. Betty A.Y., Sulkin S.E. Intracellular Prjduction of Brucella L Forms II. Induction and Survival of Brucella abortus L Forms in Tissue Culture // Journal of Bacteriology. - 1966. - Vol. 91. -№ 1. - P. 14-20.

119. Bloss-Bender L. Uber modificative und mutativ L- formen von Proteus vulgaris // Arch. Microbiol. - 1959. - Vol. 34. - P 16.

120. Chmel H. Graft infection and bacteremia with a tolerant L-form of Streptococcus sanguis in a patient receiving hemodialysis // J Clin Microbiol. — 1986. -Vol. 24(2).-P. 294-295.

121. Dawson M.H., Hobby G. Pleuropneumonia-like organisms as a variant phase of Streptobacillus moniliformis // Abstracts of communications on third International congress for Microbioligy, Baltimore, - 1939, - P. 21.

122. Dienes L., Weinberger H., Madoff S. The transformation of typhoid bacilli into L-forms under various conditions // J. Bact. — 1950. - Vol. 59. — P. 755764.

123. Dienes L., Weinberger H. The L-forms of bacteria // Bact. Rev. -1951. — Vol.15.-P. 245.

124. Dienes L., Zamecnik P. C. Transformation of bacteria into L-forms by amino acids // J. Bact. - 1952. - Vol. 64. - P. 770-771.

125. Egwu I. N., Eveland W.C. Cytological change related to Brucella canis variants uptake in vitro // Med. Microbiol. Immunol. - 1979. - Vol. 167. - № 2. -P. 107-115.

126. Electron Microscopy of Tissue Culture Cells Infected with Brucella abortus / Betty A.H., Shyi Yi Huang, M.L. Schulze et all. // J. Bacteriol. - 1971. -Vol. 108.- №1.- P. 535-544.

127. Formation and cultivation of Borrelia burgdorferi spheroplast-L-form variants / Preasc Mursic V., Wanner G., Reinhardt S., Busch U., Maget W. // Infection. - 1996. - Vol. 24. - P. 218-226.

128. Guillaume J., Derieux J. G., Wattel F. Formes spheriques bactériennes induites par les acides amines // Compt rend, hebdom. d. séances Acad. Sei. -1960. - Vol. 250. - № 23. - P. 3900-3902.

129. Hatten B.A., Sulkin E.S. Intracellular Production of Brucella L Forms. Induction and Survival of Brucella abortus L Forms in Tissue Culture // J. Bacteriol. - 1966. - Vol. 91. -№1. - P. 14-20.

130. Hatten B.A., Sulkin E.S. Intracellular production of Brucella L-forms. Re-covex of L-forms tissue culture cells infected with brucella // J. Bacteriol. — 1966. - Vol. 91. -№1. - P. 285-296.

131. Isolation of a corynebacterium and its transitional forms from a case of subacute bacterial endocarditis treated with antibiotics / Wittler R.G., Malizia W.F., Kramer P.E. et al. // J. gen. Microbiol. - 1960. - Vol. 23. - P. 315.

132. Isolation of L-forms from the spleens of Brucella suis infected Penicillin -treademice / J. Schmitt-Slomska, R. Caravano, M. Anoal, B. Gayatal. // Ann. Microbiol. - 1981. - Vol. 132, - № 3. - P. 253-265.

133. Joint FAO/WHO expert committee on Brucellosis sixth report World Health Organisation Technical Report Series. - Geneva, 1986. - 133 p.

134. Klieneberger E. The natural occurrence of pleuropneumonialike organisms in apparent symbiosis with Streptobacillus moniliformis and other bacteria // J. Pathol. Bacteriol. - 1935. - Vol. 40. - P. 93-105.

135. Lederberger J., Clair St. Protoplasts and L-type growthof Escherichia coli // Bacteriol.- 1958.-Vol. 75.-P. 143.

136. Mattman L. Cell wall deficient forms / L. Mattman. - New-York: Acad. Press, 1974.-403 p.

137. Mattman L.H., Mattman P.E. L-forms of Streptococcus faecalis in septicemia // Arch. Intern. Med. - 1965. - Vol. 115. - P. 315.

138. Michel M. F., Hijmans W. The additive effect of glycine and other amino acids on the induction of the L-phase of group A B-haemolytic streptococci by penicillin and D-cycloscrine // J. Gener. Microbiol. - 1960. - Vol. 23. - № 1.-P. 35-46.

139. Nelson E. L., Pickett M.J. Tho covere of L-form of Brucella and their relation to brucella phage // Infect. Dis. - 1951. - Vol. 89. - P. 221.

140. Orskov J. Eine morphologische Untersuchung über einen Paratyphus-B-Bacillen stamm // Ztschr. F. Hyg. - 1925.-Vol. 104. -P. 311-318.

141. Pitzurra M., Mori M. Sulla capacita evolutiva delle colonie L da penicillin doro subculture in terreno normale, studiata in un ceppo di Proteus vulgaris // Boll. Ist. Sieroterap., Milanese. - 1958. Vol. 37. -№ 3-4. -P. 171-182.

142. Seiffert W. Vergleichende Färbeversuche an lebebden und toten // Bakterien. Zbl. F. Bakt. - 1922. - Vol. 1. -№ 88. - P. 151-158

143. Taubeneck U. Demonstration of lysogeny in stable L-forms of Proteus mirabilis // Bacteriol. - 1963. - Vol. 86. - P. 1265.

144. Taubeneck U. Zur Fragder Reversionderstabilen L-Forminihre Aus-gangsbacterien // Zbl. Bakt. I. Abt. Orig. - 1962. - Vol. 184. -P. 290.

145. Ultrastructure of Brucella abortus L-Forms Induced by Penicillin in a Liquid and in a Semisolid Medium / Betty A. Hatten, Mary L. Schulze, Shyi Yi-Huang, and al. // J. Bacteriol. - 1969. - Vol. 99. - № 2. - P. 611-618.

I