Подавление экспрессии лейкозных онкогенов с помощью РНК-интерференции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат биологических наук Спирин, Павел Владимирович

• Спирин, Павел Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Спирин, Павел Владимирович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.:.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.1.

1. ОСТРЫЙ МИЕЛОИДНЫЙ ЛЕЙКОЗ (ОМЛ).

1.2 МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ АНОМАЛИИ ПРИ ОМЛ.

1.3 CBF-ОМЛ.

1.3.1 Ген ЛМЫ (R UNX1).

Белок AML1 как активатор и репрессор транскрипции.

Мутации гена AML1.

1.3.2 Ген ЕТО.

Прямые и непрямые взаимодействия белков ЕТО с HD АС.

Взаимодействие белка ЕТО с репрессорами транскрипции PLZF и Gfi-1.

Ядерная локализация белка ЕТО.

1.3.3 Мутантный белок AML1-ETO.

Белок AML 1-ЕТО как репрессор транскрипции.

Белок AML 1-ЕТО как активатор транскрипции.

Потеря функций линиеспецифических факторов транскрипции опосредованная

AML 1-ЕТО.

Взаимодействия AML 1-ЕТО с репрессорами транскрипции PLZF и Gfi-1.

Функции белка AML 1-ЕТО.

1.4 МУТАЦИИ C-KIT И РАЗВИТИЕ ОМЛ.

1.4.1 Структура гена c-kit.

1.4.2 Строение белка KIT.

1.4.3 Альтернативный сплайсинг c-kit.

1.4.4 Ввзаимодействие KIT-SCF и передача сигнала.

Взаимодействие KIT с SCF.

Сигнальные пути, запускаемые KIT.

1.4.5 Нарушения экспрессии c-kit при онкологических заболеваниях.

Гиперэкспрессия KIT.

Аутокринная петля.

Мутации, нарушающие функции KIT.

1.4.6 Роль c-kit в развитии ОМЛ.

2. РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИЯ.

2.1 ИСТОРИЯ ОТКРЫТИЯ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ (PHKi).

2.2 МЕХАНИЗМ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ.

2.3 ВИДЫ МАЛЫХ РНК, ПРИНИМАЮЩИХ УЧАСТИЕ В,

ПОСТТРАНСКРИПЦИОННОЙ РЕГУЛЯЦИИ ЭКСПРЕССИИ ГЕНОВ.

2.3.1 siPHK, образующиеся при вирусной инфекции.

2.3.2 Эндогенные siPHK.

2.4 ТЕХНОЛОГИЯ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ.

2.4.1 Синтез siPHK in vitro.

2.4.2 Экспрессия малых РНК внутри клетки.

2.6. ПРИМЕНЕНИЕ ТЕХНОЛОГИИ РНК-ИНТЕРФЕРЕНЦИИ В МЕДИЦИНЕ.

2.6.1 Борьба с вирусными инфекциями.

2.6.2 Терапия онкологических заболеваний.

2.7 ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ТЕХНОЛОГИИ РНК

ИНТЕРФЕРЕНЦИИ.

3. ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ.

3.1 Структура генома и жизненный цикл лентивирусов.

3.2 Основные принципы конструирования лентивирусных векторов.

3.3 Проблема образования релликационно-компетентных вирусных частиц.

3.4 Инсерционный мутагенез.

3.5 Проблема доставки генетической информации в клетки-мишени.

3.6 Лентивирусы в генотерапии.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Подавление экспрессии лейкозных онкогенов с помощью РНК-интерференции»

Злокачественное перерождение клеток, обусловленное молекулярными структурно-функциональными нарушениями различных генов, в том числе активацией протоонкогенов, лежит в основе целого ряда онкологических заболеваний. В настоящее время общепринятым является представление о том, что этот процесс является многостадийным, и вовлекает, по крайней мере, два активированных онкогена. Для большинства видов опухолей установлены лишь некоторые из онкогенов, участвующих в канцерогенезе. Это затрудняет разработку и выбор терапевтических подходов, и. в частности, терапевтических целей - генов-мишеней и их белковых продуктов.

Особое место среди злокачественных заболеваний человека и животных занимают лейкозы. В случае острых миелоидных лейкозов человека с высокой частотой выявляются мутации генов, ответственных за пролиферацию и дифференцировку клеток крови. Транслокация между 8 и 21-ой хромосомами приводит к образованию химерного гена AML1-ETO, кодирующего слитный белок AML1-ETO, обладающий онкогенными свойствами. Данная мутация обнаруживается примерно у 20% больных М2 OMJI (по классификации FAB). Мутации гена с -kit, расположенного на 4-ой хромосоме, у пациентов с ОМЛ встречаются значительно реже, не более чем в 5% случаев. Примерно в 20% случаев их выявляют у больных CBF-ОМЛ с транслокацией t(8;21). Гиперэкспрессия продукта гена c-kit, рецепторной тирозин киназы KIT, наблюдается более чем у 80% пациентов с ОМЛ.

Мутации гена c-kit приводят к нарушению сигнальных каскадов, которые запускаются в результате активации KIT. Это обуславливает усиление пролиферативных свойств клеток и их выживаемости. AML1-ETO влияет на функции факторов транскрипции или компонентов ко-активаторных комплексов, нарушая дифференцировку и апоптоз клеток. Предполагается, что сочетание этих процессов может быть причиной злокачественного перерождения гемопоэтических клеток-предшественников, приводящего к развитию ОМЛ.

Несмотря на интенсивный поиск подходов к терапии лейкозов; до сих пор не существует схем, позволяющих добиться излечения большинства больных. Три стратегии, применяемые в настоящее время для лечения лейкозов (пересадка костного мозга, химиотерапия, лучевая терапия), создают дополнительную опасность для жизни пациентов и являются неэффективными в большинстве случаев.

Считается, что методы, основанные на принципе РНК-интерференции могут быть перспективными для борьбы с онкологическими заболеваниями. Подход, основанный на принципе РНК-интерференции, является эффективным методом избирательной инактивации экспрессии генов.

Основным препятствием использования интерферирующих РНК в терапевтических целях является несовершенство методов их доставки в клетки-мишени. Одной из удобных и эффективных систем переноса и экспрессии генов в клетках животных и человека in vitro и in vivo являются системы, основанные на использовании лентивирусных векторов. В качестве целевого гена такие векторы несут малую шпилечную РНК — предшественник малой интерферирующей РНК.

Целью работы являлась разработка подхода для эффективного подавления экспрессии активированных «лейкозных» онкогенов AML1-ETO и c-kit на посттранскрипционном уровне с помощью РНК-интерференции.

В задачи работы входило:

Создание модельной линии клеток, геном которых содержит «лейкозный» онкоген AML1-ETO, RUNX1 (K83N) или c-kit с точечными мутациями;

Дизайн и оценка эффективности действия siPHK (РНК-дуплексов), предназначенных для подавления активности «лейкозных» онкогенов;

Получение лентивирусных векторных частиц, несущих в своем геноме последовательность, кодирующую shPHK (предшественник siPHK), и оценка эффективности их действия на модельной линии клеток;

Оценка эффективности действия shPHK, направленных против AML1-ETO, на линии клеток, полученной от пациента с острым миелоидным лейкозом.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ*

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Спирин, Павел Владимирович

выводы

1. Получены стабильные линии трансгенных модельных клеток, геном которых содержит экзогенную экспрессирующую кассету промотор - целевой ген - IRES - маркёрный ген eGFP. В'качестве целевого гена использовалась одна их последовательностей, кодирующая мутантный AMLl-ETO; RTJNX1(K83N) или с-kit(N822K). Поскольку в экспрессирующей кассете целевой и маркёрный ген находятся под общим промотором и разделены последовательностью IRES, то по уровню экспрессии маркёрного гена осуществляется с сопоставимой эффективностью. Это позволяет судить об эктопической экспрессии целевых генов методом проточной цитофлуориметрии.

2. Показано, что такие клетки являются удобной моделью как при поиске новых потенциальных терапевтических средств, направленных на подавление функциональной активности активированных "лейкозных" онкогенов, так и для исследования молекулярных механизмов действия онкогенов.

3. Использование синтетических интерферирующих РНК (siPHK), содержащих модифицированные основания, позволило достичь значительного подавления экспрессии целевого и маркёрного генов в модельных клетках. Наличие специфических модификаций в синтетических siPHK позволяет увеличить их устойчивость к действию нуклеаз in vitro и in vivo. Последнее особенно важно, поскольку повышение стабильности синтетических siPHK необходимо для их эффективной доставки в клетки-мишени, при разработке подходов комбинированной терапии с использованием siPHK.

4. Были получены лентивирусные векторные частицы, несущие в своем геноме последовательность, кодирующую одну из 51гРНК(предшественник siPHK): shPHK-AML 1 -ETO, shPHK-AML5\ shPHK-KIT-1, shPHK-KIT-2. Была осуществлена оценка эффективности их действия на модельных линиях клеток. Показано, что после трансдукции онкоген-экспрессирующих модельных клеток лентивирусными частицами, происходит значительное, не зависящее от времени снижение экспрессии маркерного гена eGFP и целевого онкогена.

5. Была осуществлена оценка эффективности действия вЬРЬЖ, направленных против АМЫ-ЕТО, на линии клеток, полученной от пациента с острым миелоидным лейкозом. Показано, что при использовании рекомбинантных лентивирусных векторов, направляющих синтез зЬРНК-АМЬ-ЕТО или вИРНЬС-АМЫ-5', уровень экспрессии АМЫ-ЕТО в трансдуцированных клетках-мишенях снижается в 8 и в 12 раз соответственно по сравнению с контролем.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нами был разработан подход для эффективного- подавления экспрессии активированных «лейкозных» онкогенов AML1-ETO и c-kit на посттранскрипционном уровне с помощью РНК-интерференции. Подход, использованный в работе, основан на удачном опыте применения лентивирусных векторов, несущих последовательности, кодирующие shPHK. Однако он отличается использованием оригинальных лентивирусных векторов и оригинальных модельных клеточных линий. Для определения функциональной активности синтетических siPHK и лентивирусных векторов, направляющих в клетках синтез shPHK, в нашей лаборатории была создана модельная линия клеток, геном котрых которых содержит экспрессионную кассету «промотор -целевой ген — IRES - eGFP». В качестве целевого гена была использована последовательность одного из онкогенов: RUNX1(K83N), AML1-ETO или c-kit. Такая модельная клеточная линия позволяет быстро определять эффективность действия интерферирующих РНК (как синтетических siPHK, так и лентивирусных векторов, направляющих синтез shPHK — предшественников siPHK, комплементарных различным участкам этих онкогенов).

Мы показали, что с использованием синтетических модифицированных siPHK можно получить двукратное подавление экспрессии целевого онкогена. Данные, полученные в опытах с синтетическими siPHK, позволили осуществить дизайн и синтез последовательностей ДНК, кодирующих shPHK. Эти последовательности были клонированы в лентивирусный рекомбинантный вектор pLSLP. С помощью лентивирусных векторных частиц данные последовательности были внесены в онкоген-экспрессирующие модельные клетки. Благодаря этому в них осуществляется постоянный внутриклеточный синтез эЬРНК. Анализ популяций трансдуцированных онкоген-экспрессирующих модельных клеток показал десятикратное снижение экспрессии целевого онкогена. Необходимо добавить, что блокирование экспрессии онкогена, опосредованное БИРИК-экспрессирующими лентивирусными частицами, в модельных клетках не зависит от времени. Это свидетельствует о высокой эффективности сконструированных нами лентивирусных векторов.

Также в нашей лаборатории были сконструированы лентивирусные векторы (на основе рЬЯЬР), кодирующие последовательности, направляющие синтез бЬРНК против онкогена АМЫ-ЕТО. Данные векторы при введении их в модельные клетки также вызывали значительное подавление экспрессии целевого гена. В рамках исследования была показана высокая эффективность этих векторов в отношении подавления экспрессии активированного лейкозного онкогена АМЫ-ЕТО в клетках линии Казшш-1, полученных от больного ОМЛ.

Проведенное исследование заложило основу для использования РНК-интерференции с целью подавления "лейкозных" онкогенов у лабораторных модельных животных с экспериментально вызванным лейкозом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Спирин, Павел Владимирович, 2010 год

1. Баскаран Д., Спирин П. В., Прасолов В: С., Активированные лейкозные онкогены, определяющие злокачественное перерождение кроветворных клеток. Молекулярная биология. 2010, 44, с. 418-430

2. Bennett J.M., Catovsky D., Daniel M.T., Flandrin G., Galton D.A., Gralnick H.R., Sultan C. 1976. Proposals for the classification of the acute leukaemias. French-American-British (FAB) co-operative group. Br. J. Haematol. 33,451—458.

3. Gilliland D.G. 1998. Molecular genetics of human leukemia. Leukemia. 12 Suppl 1, S7--12.

4. Frankfurt O., Licht J.D., Tallman M.S. 2007. Molecular characterization of acute myeloid leukemia and its impact on treatment. Curr. Opin. Oncol. 19, 635—649.

5. Peterson L.F., Zhang D.E. 2004. The 8;21 translocation in leukemogenesis. Oncogene. 23, 4255-4262.

6. Satake N., Maseki N., Kozu Т., Sakashita A., Kobayashi H., Sakurai M., Ohki M., Kaneko Y. 1995. Disappearance of AMLl-MTG8(ETO) fusion transcript in acute myeloid leukaemia patients with t(8;21) in long-term remission. Br. J. Haematol. 91, 892-898.

7. Peterson L.F., Boyapati A., Ahn E.Y., Biggs J.R., Okumura A.J., Lo M.C., Yan M., Zhang D.E. 2007. Acute myeloid leukemia with the 8q22;21q22 translocation:secondary mutational events and alternative t(8;21) transcripts. Blood. 110; 799— 805.

8. Bonnet D., Dick J.E. 1997. Human acute myeloid leukemia is organized as ahierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell. Nat. Med. 3, 730— 737.

9. Paschka P. 2008. Core binding factor acute myeloid leukemia. Semin, Oncol. 35, 410-417.

10. Harada H., Harada Y., Niimi H., Kyo T., Kimura A., Inaba T. 2004. High incidence of somatic mutations in the AML1/RUNX1 gene in myelodysplasia syndrome and low blast percentage myeloid leukemia with myelodysplasia. Blood. 103,2316-2324.

11. Yamagata T., Maki K., Mitani K. 2005. RUNX1/AML1 in normal and abnormal hematopoiesis. Int. J. Hematol. 82, 1—8.

12. Downing J.R. 2003. The core-binding factor leukemias: lessons learned from murine models. Curr. Opin. Genet. Dev. 13, 48—54.

13. Niebuhr B., Fischer M., Tager M., Cammenga J., Stocking C. 2008. Gatekeeper function of the RUNX1 transcription factor in acute leukemia. Blood Cells Mol. Dis. 40,211-218.

14. Osato M. 2004. Point mutations in the RUNX1/AML1 gene: another actor in RUNX leukemia. Oncogene. 23, 4284-4296.

15. Huang G., Shigesada K., Ito K., Wee H.J., Yokomizo T., Ito Y. 2001. Dimerization with PEBP2beta protects RUNX1/AML1 from ubiquitin-proteasome-mediated degradation. EMBO J. 20, 723—733.

16. Miller J., Horner A., Stacy T., Lowrey C., Lian J.B., Stein G., Nuckolls G.H., Speck N.A. 2002. The core-binding factor beta subunit is required for bone formation and hematopoietic maturation. Nat. Genet. 32, 645—649.

17. Perry C., Eldor A., Soreq P; 2002. RUNX1/AML1 in leukemia: disrupted association with diverse protein partners. Leuk. Res. 26, 221—228.

18. Kitabayashi I., Yokoyama A., Shimizu K., Ohki M. 1998. Interaction and functional cooperation of the leukemia-associated factors AML1 and p300 in myeloid cell differentiation. EMBO J. 17, 2994-3004.

19. Durst K.L., Hiebert S.W. 2004. Role of RUNX family members in transcriptional repression and gene silencing. Oncogene. 23, 4220—4224.

20. Taniuchi I., Osato M., Egawa T., Sunshine M.J., Bae S.C., Komori T., Ito Y., Littman D.R. 2002. Differential requirements for RUNX proteins in CD4 repression and epigenetic silencing during T lymphocyte development. Cell. Ill, 621-633.

21. Izutsu K., Kurokawa M., Imai Y., Maki K., Mitani K., Hirai H. 2001. The corepressor CtBP interacts with Evi-1 to repress transforming growth factor beta signaling. Blood. 97, 2815-2822.

22. Yoshida T., Kanegane H., Osato M., Yanagida M., Miyawaki T., Ito Y., Shigesada K. 2003. Functional analysis of RUNX2 mutations in cleidocranial dysplasia: novel insights into genotype-phenotype correlations. Blood Cells Mol. Dis. 30, 184-193.

23. Miyoshi H., Kozu T., Shimizu K., Enomoto K., Maseki N., Kaneko Y., Kamada N., Ohki M. 1993. The t(8;21) translocation in acute myeloid leukemia results in production of an AML1-MTG8 fusion transcript. EMBO J. 12, 2715-2721.

24. Fukuyama T., Sueoka E., Sugio Y., Otsuka T., Niho Y., Akagi K., Kozu T. 2001. MTG8 proto-oncoprotein interacts with the regulatory subunit of type II cyclic AMP-dependent protein kinase in lymphocytes. Oncogene. 20, 6225-6232.

25. Sacchi N., Tamanini F., Willemsen R., Denis-Donini S., Campiglio S., Hoogeveen. A.T. 1998. Subcellular localization of the oncoprotein MTG8 (CDR/ETO) in neural cells. Oncogene. 16, 2609—2615.

26. Erickson P.P., Robinson Mi, Owens G., Drabkin H:A?. 1994. TKe ETO portion» of acute myeloid leukemia t(8;21) fusion; transcript encodes a highly evolutionarily conserved, putative transcription factor. Cancer Res. 54, 1782—1786.

27. Feinstein* P.G., Kornfeld K., Hogness O.S., Mann R.S. 1995; Identification of homeotic target genes in Drosophila melanogaster including nervy, a proto-oncogene homologue. Genetics. 140> 573—586.

28. Elagib K.E., Goldfarb A.N. 2007. Oncogenic pathways of AML1-ETO in acute myeloid leukemia: multifaceted manipulation of marrow maturation. Cancer Lett. 251, 179-186.

29. Hug B.A., Lazar M.A. 2004. ETO interacting proteins. Oncogene. 23, 4270-4274.

30. Davis J.N., McGhee L., Meyers S. 2003.The ETO (MTG8) gene family. Gene. 303, 1-10.

31. Gelmetti V., Zhang J., Fanelli M., Minucci S., Pelicci P.G., Lazar M.A. 1998. Aberrant recruitment of the nuclear receptor corepressor-histone deacetylase complex by the acute myeloid leukemia fusion partner ETO. Mol. Cell. Biol. 18, 7185-7191.

32. Hildebrand D., Tiefenbach J., Heinzel T., Grez M., Maurer A.B. 2001. Multiple regions of ETO cooperate in transcriptional repression. J. Biol. Chem. 276, 9889— 9895.

33. Odaka Y., Mally A., ElliottL.T., Meyers S. 2000. Nuclear import and subnuclear localization of the proto-oncoprotein ETO (MTG8). Oncogene. 19, 3584--3597.

34. Wang J., Saunthararajah Y., Redner R.L., Liu J.M. 1999. Inhibitors of histone deacetylase relieve ETO-mediated repression and induce differentiation of AML1-ETO leukemia cells. Cancer Res. 59, 2766-2769.

35. Grisolano J.L., O'Neal J., Cain J., Tomasson M.H. 2003. An activated receptor tyrosine kinase, TEL/PDGFbetaR, cooperates with AML1/ETO to induce acute: myeloid leukemia in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 100, 9506—9511.

36. Rosenbauer F., Koschmieder S., Steidl U., Tenen D.G. 2005: Effect of transcription-factor, concentrations on leukemic stem cells. Blood. 106, 1519— 1524.

37. Frosina G. 2000. Overexpression of enzymes that repair endogenous damage to DNA. Eur. J. Biochem. 267, 2135-2149.

38. Miyamoto T., Weissman I.L. Akashi K. 2000. AML1/ETO-qxpressing nonleukemic stem cells in acute myelogenous leukemia with 8;21 chromosomal translocation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 97, 7521-7526.

39. GFHC) and the Groupe Francais de Cytogenetique Hematologique (GFCH). Blood. 101, 1277-1283.

40. Holyoak, T. L. 2001 Recent advances in the molecular and cellular biology of chronic myeloid leukaemia: lessons to be learned from the laboratory. Br J Haematol. 113, 11-23.

41. Andre C., Martin E., Cornu F., Hu W-X., Wang X-P., Galibert F. 1992 Genomic organization of the human c-kit gene: evolution of the receptor tyrosine kinase subclass III. Oncogene. 7, 685-691.

42. Gokkel E., Grossman Z., Ramot B., Yarden Y., Rachavi G., Givol D. 1992 Strucrural organizarion of the murine c-kit proto-oncogene. Oncogene. 7, 14231429.

43. Vandenbark G.R., de Castro C.M., Taylor H., Dew-Knight S., Kaufman R.E. 1992 Cloning and structural analysis of the human c-kit gene. Oncogene. 7(7), 12591266.

44. Yasuda H., Galli S.J., Geissler E.N. 1993 Cloning and functional analysis of the mouse c-kit promoter. Biochem Biophys Res Commun. 191(3), 893-901.

45. Colucci F., Di Santo J. P. 2000 The receptor tyrosine kinase c-kit provides, a critical signal for survival, expansion, and maturation of mouse natural killer cells. Blood. 95, 984-991.

46. Sperling C., Schwartz S., Büchner T., Thiel E., Ludwig W-D: 1997 Expression of the stem cell factor receptor c-kit (cd 117) in acute leukemias. Haematologica. 82, 617-621.

47. Sattler M., Salgia R. 2004 Targeting c-kit mutations: basic science to novel therapies. Leuk Res. 28 (1), 11-20.

48. Chan P. M., Ilangumaran S., La Rose J., Chakrabartty A., Rottapel R. 2003 Autoinhibition of the kit receptor tyrosine kinase by the cytosolic juxtamembrane region. Mol Cell Biol. 23, 3067-3078.

49. Crosier P. S., Ricciardi S. T., Hall L. R., Vitas M. R., Clark S. C., Crosier, K. E. 1993 Expression of isoforms of the human receptor tyrosine kinase c-kit in leukemic cell lines and acute myeloid leukemia. Blood. 82, 1151-1158.

50. Caruana G., Cambareri A. C., Ashman L. K. 1999 Isoforms of c-KIT differ in activation of signalling pathways and transformation of NIH3T3 fibroblasts. Oncogene. 18, 5573-5581.

51. Albanesi C., Geremia R., Giorgio M., Dolci S., Sette C., Rossi P. 1996 A cell- and developmental stage-specific promoter drives the expression of a truncated c-kit protein during mouse spermatid elongation. Development. 122, 1291-1302.

52. Huang E.J., Nocka K.H., Buck J., Besmer P. 1992 Differential expression and processing of two cell associated forms of the kitligand: KL-1 and KL-2. Mol Biol Cell. 3, 349-362.

53. Yuzawa S., Opatowsky Y., Zhang Z., Mandiyan V., Lax I., Schlessinger J. 2007 Structural-Basis for Activation of the Receptor Tyrosine Kinase KIT by Stem Cell Factor. Cell. 130, 323-334.

54. Liu H., Chen X., Focia P. and He X. 2007 Structural basis for stem cell factor-KIT signaling and activation of class III receptor tyrosine kinases. EMBO J. 26, 891901.

55. Blume-Jensen P., Claesson-Welsh L., Siegbahn A., Zsebo K.M., Westermark B., Heldin C.H. 1991 Activation of the human c-kit product by ligand-induced dimerization mediates circular actin reorganization and chemotaxis. EMBO J. 10, 4121-4128.

56. Lemmon M.A., Pinchasi D., Zhou M., Lax I., Schlessinger J. 1997 Kit receptor dimerization is driven by bivalent binding of stem cell factor. J Biol Chem. 272, 6311-6317.

57. Pati S., Gurudutta G.U., Kalra O.P., Mukhopadhyay A. 2010 The structural insights of stem cell factor receptor (c-Kit) interaction with tyrosine phosphatase-2 (Shp-2): An in silico analysis. BMC Res Notes. 22, 3-14.

58. Roskoski Jr.R. 2005 Structure and regulation of Kit proteintyrosine kinase—the stem cell factor receptor. Biochem Biophys Res Commun. 338, 1307-1315.

59. Roskoski Jr.R. 2005 Signaling by Kit protein-tyrosine kinase—the stem cell factor receptor. Biochem Biophys Res Commun. 337, 1-13.

60. Jensen B.M., Akin C., Gilfillan A.M. 2008 Pharmacological targeting of the KIT growth factor receptor: a therapeutic consideration for mast cell disorders Br J Pharmacol. 154, 1572-1582.

61. Thommes K., Lennartsson J., Carlberg M., Ronnstrand L. 1999 Identification of Tyr-703 and Tyr-936 as the primary association sites for Grb2 and Grb7 in the c-kit/stem cell factor receptor. Biochem. J. 341,211-216.

62. Linnekin D. 1999 Early signaling pathways activated by ckit in hematopoietic cells. Int J Biochem. Cell. Biol. 31, 1053-1074.

63. Sun J., Pedersen M., .Ronnstrand L. 2008 Gab2 Is Involved in Differential Phosphoinositide 3-Kinase Signaling by Two Splice Forms of c-Kit. J Biol Chem. 283* (41), 27444-27451.

64. Montagut C., Settleman J. 2009 Targeting the RAF-MEK-ERK pathway in cancer therapy. Cancer Lett. 283(2), 125-134.

65. Chou C.C., Chou M.J., Tzen C.Y. 2010 Prediction of KIT mutation in gastrointestinal stromal tumors by the immunoprofile of the tumor cells. J Formos Med Assoc. 109(1), 25-31.

66. Garrido M., Bastian B.C. 2010 Kit as a therapeutic target in melanoma. J Invest Dermatol. 130(1), 20-27.

67. Mosesson Y., Yarden Y. 2004 Oncogenic growth factor receptors: implications for signal transduction therapy. Semin Cancer Biol. 14, 262-270.

68. Huo L., Sugimura J., Tretiakova M. S., Patton K. T., Gupta R., Popov B., Laskin W. B., Yeldandi A., Teh B. T., Yang X. J. 2005 C-kit expression in renal oncocytomas and chromophobe renal cell carcinomas. Hum Pathol. 36, 262-268.

69. Stec R., Grala B., M^czewski M., Bodnar L., Szczylik C. 2009 Chromophobe renal cell cancer review of the literature and potential methods of treating metastatic disease. J Exp & Clin Cancer Res. 28 (134), 1-6.

70. Lennartson J., Jelacic T., Linnekin D., Shivaakrapa R. 2005 Normal and oncogenic forms of the receptor tyrosine kinase KIT. Stem cells.23, 16-43.

71. Lennartsson J., Voytyuk O., Heiss E., Sundberg C., Sun J., Ronnstrand L. 2005 C-Kit signal transduction and involvement in cancer. Review. Cancer Ther.3, 5-28.

72. Furitsu T., Tsujimura T., Tono T., Ikeda H., Kitayama H., Koshimizu U., Sugahara H., Butterfield J. H., Ashman L. K., Kanayama Y. Matsuzawa Y.,

73. Kitamura Y., Kanakura Y 1993 Identification of mutations in the coding sequence of the proto- oncogene c-kit in a human mast cell leukemia cell line causing ligand-independent activation.of с-kit product. J Clin Invest. 92, 1736-1744.

74. Patnaik M.M., Tefferi- A., Pardanani A. 2007 Kit: molecule of interest for the diagnosis and treatment of mastocytosis and other neoplastic disorders. Curr Cancer Drug Targets. 7, 492-503.

75. Torrent M., Rickert K., Pan B: S., Sepp-Lorenzino L. 2004 Analysis of the activating mutations within the activation loop of leukemia targets Flt-3 and c-Kit based on protein homology modeling. J Mol Graph Model. 23, 153-165.

76. Boissan M., Feger F., Guillosson J-J., Arock M. 2000 C-kit and c-kit mutations in mastocytosis and other hematological diseases. J Leukoc Biol. 67(2), 135-48.

77. Kahler C., Didlaukat S., Feller A.C., Merz H. 2007 Sensitive and reliable detection of KIT point mutation Asp 816 to Val in pathological material. Diag Pathol. 2, 37-41.

78. Longley B.J., Reguera M.J., Ma Y. 2001 Classes of c-kit activating mutations: proposed mechanisms of action and implications for disease classification and therapy. Leuk Res. 25, 571-576.

79. Zaker F., Mohammadzadeh M., Mohammadi M. 2010 Detection of KIT and FLT3 mutations in acute myeloid leukemia with different subtypes. Arch Iran Med. 13(1), 21-25.

80. Schnittger S., Kohl T.M., Haferlach Т., Kern W., Hiddemann W., Spiekermann K., Schoch C. 2006. KIT-D816 mutations in AML1-ETO-positive AML are associated with impaired event-free and overall survival. Blood. 107(5), 17911799.

81. Agrawal N., Dasaradhi P.V., Mohmmed A., Malhotra P., Bhatnagar R.K., Mukherjee S.K. 2003. RNA interference: biology, mechanism, and applications. Microbiol. Mol. Biol. Rev. 67, 657-685.

82. Вильгельм А.Э., Чумаков С.П., Прасолов B.C. 2006 Интерференция РНК: биология и перспективы применения в биомедицине и биотехнологии. Мол биол. 40(3), 387-403.

83. Van Blokland R., vander Geest N, Mol J.N.M., Kooter J.M. 1994. Transgene-mediated suppression of chalcone synthase expression in Petunia hybrida results from an increase in RNA turnover. Plant J. 6, 861-877.

84. Ingelbrecht I., Van Houdt H., Van Montagu M., Depicker A. 1994. Posttranscriptional silencing of reporter transgenes in tobacco correlates with DNA methylation. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91, 10502-10506.

85. Metzlaff M., O Dell M., Cluster P.D., Flavell R.B. 1997. RNA-mediated RNA degradation and chalcone synthase A silencing in Petunia. Cell. 88, 845-854.

86. Covey S. N., Al-Kaff N. S., Langara A., Turner D. S. 1997 Plants combat infection by gene silencing. Nature. 385, 781-782.

87. Ratcliff F., Harrison B.D., Baulcombe D.C. 1997 A similarity between viral defense and gene silencing in plants. Science. 276, 1558-1560.

88. Fire A., Xu S., Montgomery M.K., Kostas S.A., Driver S.E., Mello C.C. 1998. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-11.

89. Ngo H.,Tschudi C., Gull K., Ullu E. 1998 Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proc Natl Acad Sci USA. 95, 14687-14692.

90. Kennerdell J. R., Carthew R.W. 1998 Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell. 95, 1017-1026.

91. Cogoni G., Macino G. 1997. Conservation of transgene-induced posttranscriptional gene silencing in plants and fungi. Trends Plant Sci. 2, 438-443.

92. Gil J., Esteban M. 2000 Induction of apoptosis by the dsRNA-dependent protein kinase (PKR): Mechanism of action. Apoptosis. 5, 107-114.

93. Elbashir S. M:, Harborth J., LendeckelW., Yalcin A., Weber K., Tuschl T. 2001 Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA* interference in cultured mammalian cells. Nature. 411, 494-498.

94. Elbashir S.M., Lendeckel W., Tuschl T. 2001 RNA interference is mediated by 21-and 22-nucleotide RNAs. Genes Dev. 15, 188-200.

95. Martinez J.,Tuschl-T. 2004 RISC is a 5' phosphomonoester-producing RNA endonuclease. Genes Dev. 18, 975-980.

96. Hammond S.M., Bernstein E., Beach D., Harmon GJ. 2000 An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature. 404, 293-296.

97. Bernstein E., Caudy A.A., Hammond S.M., Hannon G.J. 2001 Role for a bidentate ribonuclease in the initiation step of RNA interference. Nature. 409, 363366.

98. Shuey D.J., McCallus D.E., Giordano T. 2002. RNAi: gene-silencing in therapeutic intervention. DrugDiscov. Today. 7, 1040-1046.

99. Scherr M., Morgan M.A., Eder M. 2003. Gene silencing mediated by small interfering RNAs in mammalian cells. Curr. Med. Chem. 10, 245-256.

100. MacRae I. J., Ma E., Zhou M., Robinson C.V., Doudna J. A. 2008 In vitro reconstitution of the human RISC-loading complex. Proc Natl Acad Sei USA 105, 512-517.

101. Miyoshi K., Okada T.N., Siomi H., Siomi M.C. 2009 Characterization of the miRNA-RISC loading complex and miRNA-RISC formed in the Drosophila miRNA pathway. RNA. 15, 1282-1291.

102. Wang Y., Juranek S., Li H., Sheng G., Tuschl T., Patel D.J. 2008 Structure of an argonaute silencing complex with a seed-containing guide DNA and target RNA duplex. Nature. 456,921-926.

103. Zeng Y., Cullen B.R. 2002. RNA interference in human cells is restricted to the cytoplasm. RNA. 8, 855-860.

104. Xie Z., Johansen L.K., Gustafson A.M., Kasschau K.D., Lellis A.D., et al. 2004. Genetic and functional diversification of small RNA pathways in plants. PLoS Biol. 2, E104.

105. Fagard M., Vaucheret H. 2000. Systemic silencing signals. Plant Mol. Biol. 43, 285-293.

106. Baulcombe D.C., Molnar A. 2004. Crystal structure of pl9~a universal suppressor of RNA silencing. Trends Biochem. Sci. 29, 279-281.

107. Pfeffer S., Zavolan M., Grasser F.A., Chien M., Russo J.J., et al. 2004. Identification of virus-encoded microRNAs. Science. 304, 734-736.

108. Aravin A.A., NaumovaN.M., Tulin A.V., Vagin V.V., Rozovsky Y.M., Gvozdev V.A. 2001. Double-stranded RNA-mediated silencing of genomic tandem repeats and transposable elements in the D. melanogaster germline. Curr. Biol. 11, 10171027.

109. Vazquez F., Vaucheret H., Rajagopalan R., Lepers C., Gasciolli V., et al. 2004. Endogenous trans-acting siRNAs regulate the accumulation of Arabidopsis mRNAs. Mol. Cell. 16, 69-79.

110. Ambros V., Lee R.C., Lavanway A., Williams P.T., Jewell D. 2003. MicroRNAs and other tiny endogenous RNAs in C. elegans. Curr. Biol. 13, 807-818.

111. Kuwabara T., Hsieh J., Nakashima K., Taira K., Gage F.H. 2004. A small modulatory dsRNA specifies the fate of adult neural stem cells. Cell. 116, 779-793.

112. Mochizuki K., Gorovsky M.A. 2004. Small RNAs in genome rearrangement in Tetrahymena. Curr. Opin. Genet.Dev. 14, 181-187.

113. Vazquez F., Vaucheret H., Rajagopalan R., Lepers C., Gasciolli V., Mallory A.C., Hilbert J.L., Bartel D.P., Crete P. 2004 Endogenous trans-acting siRNAs regulate the accumulation of Arabidopsis mRNAs. Mol. Cell. 16, 69-79.

114. Kim V. N. 2005 Small RNAs: Classification, Biogenesis, and Function. Mol Cells. 19(1), 1-15.

115. Lee R.G., Feinbaum R.L., Ambros V. 1993 The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14. Cell. 75, 843854.

116. Choudhuri S. 2010 Small, Noncoding RNAs: Biogenesis, Function, and* Emerging Significance in.Toxicology. JBiochem Mol Toxicol. Epub.

117. Kuwabara. T., Hsieh J., Nakashima K., Taira K., Gage F.H. 2004 A. small modulatory dsRNA specifies the fate of adult neural stem cells. Cell. 116, 779-793.

118. Reinhart B.J., Bartel D.P. 2002 Small RNAs correspond to centromere heterochromatic repeats. Science. 297, 1831.

119. Matzke M.A., Birchler J.A. 2005. RNAi-mediated pathways in the nucleus. Nat. Rev. Genet. 6, 24-35.

120. Schramke V., Allshire R. 2003 Hairpin RNAs and retrotransposon LTRs effect RNAi and chromatin-based gene silencing. Science. 301, 1069-1074.

121. Aravin A.A., Sachidanandam R., Girard A., Fejes-Toth K., Hannon G.J 2007 Developmentally regulated piRNA clusters implicate MILI in transposon control. Science. 316, 744-747.

122. Birney E. et al. 2007 Identification and analysis of functional elements in 1% of the human genome by the ENCODE pilot project. Nature. 447, 799-816.

123. Lee Y., Ahn C., Han J., Choi H., Kim J., et al. 2003. The nuclear RNase III Drosha initiates microRNA processing. Nature. 425, 415-419.

124. Denli A.M., Tops B.B., Plasterk R.H., Ketting R.F., Hannon G.J. 2004. Processing of primary microRNAs by the Microprocessor complex. Nature. 432, 231-235.

125. Hutvagner G., McLachlan J., Pasquinelli A.E., Balint E., Tuschl T., et al. 2001. A cellular function for the RNAinterference enzyme Dicer in the maturation of the let-7 small temporal RNA. Science. 293, 834-838.

126. Khvorova A., Reynolds A., Jayasena S.D: 2003. Functional siRNAs and miRNAs exhibit strand bias. Cell. 115, 209-216.

127. Grosshans H., Slack F.J. 2002. Micro-RNAs: small is plentiful. J. Cell Biol. 156, 17-21.

128. Yekta S., Shih I.H., Bartel D.P. 2004 MicroRNA-directed cleavage of HOXB8 mRNA. Science. 304, 594-596.

129. Ameres S.L., Martinez J., Schroeder R. 2007 Molecular basis for. target RNA, recognition and cleavage by human RISC. Cell. 130,101-112.

130. Selbach M., Schwanhausser B., Thierfelder N., Fang Z., Khanin R., Rajewsky N. 2008 Widespread changes in protein synthesis induced by microRNAs. Nature: 455, 58-63.

131. Saito K., Sakaguchi Y., Suzuki T., Suzuki T., Siomi H., Siomi M.C. 2007 Pimet, the Drosophila homolog of HEN1, mediates 2'-0-methylation of Piwi-interacting RNAs at their 3'-ends. Genes Dev.21, 1603-1608.

132. Provost P., Dishart D., Doucet J., Frendewey D., Samuelsson B., Radmark O. 2002. Ribonuclease activity and RNA binding of recombinant human Dicer. EMBO J. 21, 5864-5874.

133. Manche L., Green S.R., Schmedt C., Mathews M.B. 1992. Interactions between double-stranded RNA regulators and the protein kinase DAI. Mol. Cell. Biol. 12, 5238-5248.

134. Elbashir S.M., Harborth J., Weber K., Tuschl T. 2002. Analysis of gene function in somatic mammalian cells using small interfering RNAs. Methods. 26, 199-213.

135. Kim D.H., Longo M., Han Y., Lundberg P., Cantin E., Rossi J.J. 2004. Interferon induction by siRNAs and ssRNAs synthesized by phage polymerase. Nat. Biotechnol. 22, 321-325.

136. Bridge A.J., Pebernard S., Ducraux A., Nicoulaz A.L., Iggo R. 2003. Induction of an interferon response by RNAi vectors in mammalian cells. Nat. Genet. 34, 263-264.

137. Chiu Y.L., Rana T.M. 2002. RNAi in human cells: basic structural and functional features of small interfering RNA. Mol. Cell. 10, 549-561.

138. Kim N.V. 2003. RNA interference in functional genomics and medicine. J. Korean Med. Sci. 18,309-318.

139. Bantounas I., Phylactoul L.A., Uney JIB. 2004. RNA interference and the use of small interfering RNA to study gene function in mammalian, systems J. Mol. Endocrinol: 33, 545-557.

140. Brummelkamp T.R:, Bernards R:, Agami R. 2002. A system for stable expression of short interfering RNAs in mammalian cells. Science. 296, 550-553.

141. Boden D., Pusch O., Silbermann R., Lee F., Tucker L., Ramratnam B.,2004. Enhanced gene silencing of HIV-1 specific siRNA using microRNA designed hairpins. Nucleic*Acids Research. 32, 1154-1158.

142. Lee N.S., Dohjima T., Bauer G., Li H., Li M.J., Ehsani A., Salvaterra P., Rossi J.2002. Expression of small interfering RNAs targeted against HIV-1 rev transcripts in human cells. Nat. Biotechnol. 20, 500-505.

143. Miyagishi M., Matsumoto S., Taira K. 2004. Generation of an shRNAi expression library against the whole human transcripts. Virus Res. 102, 117—124.

144. Tiscornia G., Singer O., Ikawa M., Verma I.M. 2003. A general method for gene knockdown in mice by using lentiviral vectors» expressing small interfering RNA. PNAS. 100,1844-1848.

145. Butz K., Ristriani A., Hengstermann A., Denk C., Scheffner M., Hoppe-Seyler F.2003. siRNA targeting of the viral E6 oncogene efficiently kills human papillomavirus positive cancer cells. Oncogene. 22, 5938-5945.

146. Martinez M.A., Clotet B. and Este J.A. 2002. RNA interference of HIV replication. Trends Immunol. 23, 559-562.

147. Tompkins S.M., Lo C.Y., Tumpey T.M., Epstein S.L. 2004. Protection against lethal influenza virus challenge by RNA interference in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101,8682-8686.

148. Giladi H., Ketzinel-Gilad M., Rivikin L., Felig Y., Nussbaum O., Galun E. 2003. Small interfering RNA inhibits hepatitis B virus replication in mice. Mol. Ther. 8, 769-776.

149. Brummelkamp T.R., Bernards R., Agami R. 2002. Stable suppression of tumorigenicity by virus-mediated RNA interference. Cancer Cell. 2, 243-247.

150. Wilda M., Fuchs U., Wossmann W., Borkhardt A. 2002. Killing of leukemic cells with a BCR/ABL fusion gene by RNA interference (RNAi). Oncogene. 21, 5716-5724.

151. Wu H., Hait W.N., Yang J.M. 2003. Small interfering RNA-induced suppression of MDR1 P-glycoprotein restores sensitivity to multidrug-resistant cancer cells. Cancer Res. 63, 1515-1519.

152. Zhang L., Yang N., Mohamed-Hadley A., Rubin S.C., Coukos G. 2003. Vector-based RNAi, a novel tool for isoform-specific knock-down of VEGF and anti-angiogenesis gene therapy of cancer. Biochem. Biophys. Res. Commun. 303, 1169-1178.

153. Song E., Lee S.K., Wang J., Ince N., Ouyang N., Min J., Chen J., Shankar P., Lieberman J. 2003. RNA interference targeting Fas protects mice from fulminant hepatitis. Nat. Med. 9, 347-351.

154. Ghildiyal M., Zamore P.D. 2009 Small silencing RNAs: an expanding universe. Nat Rev Genet. 10(2), 94-108.

155. Seroogy C.M., Fathman C.G. 2000. The application of gene therapy in autoimmune diseases. Gene Ther. 7, 9—13.

156. Chang, M. I., Panorchan P., Dobrowsky T. M., Tseng, Y., Wirt D. 2005. Single-molecule analysis of human immunodeficiency virus type 1 gpl20-receptor interactions in living cells. J. Virol. 79, 14748--14755.

157. Pages J.C., Bru T.J. 2004. Toolbox for retrovectorologists. Gene Med. 6, 67-82.

158. Depienne C., Mousnier A., Leh H., Le Rouzic E., Dormont D., Benichou S., Dargemont C. 2001. Characterization of the nuclear import pathway for HIV-1 integrase. J. Biol. Chem. 276, 18102-18107.

159. Piller S.C., Caly L., Jans D.A. 2003. Nuclear import of the pre-integration complex (PIC): the Achilles heel of HIV? Curr. Drug Targets. 4, 409-429.

160. Li L., Olvera J.M., Yoder K.E., Mitchell R.S., Butler S.L., Lieber M., Martin S.L., Bushman F.D. 2001. Role of the non-homologous DNA end joining pathway in the early steps of retroviral infection. EMBO J. 20, 3272-3281.

161. Schroder A.R., Shinn P., Chen H., Berry C., Ecker J.R., Bushman F. 2002. HIV-1 integration in the human genome favors active genes and local hotspots. Cell. 110, 521-529.

162. Das S.R., Jameel S. 2005. Biology of the HIV Nef protein. Indian J.Med.Res. 121,315-332.

163. Lever A.M., Strappe P.M., Zhao J. 2004. Lentiviral vectors. J. Biomed. Sci. 11, 439-449.189. ufferey R., Nagy D. 1997. Multiply attenuated lentiviral vector achieves efficient gene delivery in vivo. Nat. Biotechnol. 15, 871—875.

164. Mangeot P.E., Negre D. 2000. Development of minimal lentivirus vectors derived from simian immunodeficiency virus (SIVmac251) and their use for gene transfer into human dendritic cells. J. Virol. 74, 8307—8315.

165. Poeschla E.M-, Wong-Staal F. 1998. Efficient transduction of nondividing human cells by feline immunodeficiency virus lentiviral vectors. Nat. Med. 4, 354-357.

166. Berkowitz R., lives H., 2001. Construction and molecular analysis of gene transfer systems derived from bovine immunodeficiency virus. J. Virol. 75, 3371— 3382.

167. Mselli-Lakhal L., Favier C. 1998. Defective RNA packaging is responsible for low transduction efficiency of CAEV-based vectors. Arch. Virol. 143, 681—695.

168. Olsen J.C. 1998. Gene transfer vectors derived from equine infectious anemia virus. Gene Ther. 5, 1481-1487.

169. Metharom P., Takyar S. 2000. Novel bovine lentiviral vectors based on Jembrana disease virus. J. Gene Med. 2, 176—185.

170. Stewart S.A., Dykxhoorn D.M. 2003. Lentivirus-delivered stable gene silencing by RNAi in primary cells. RNA. 9, 493-501.

171. Dull T., Zufferey R. 1998. A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system. J. Virol. 72, 8463-8471.

172. Rossi G.R., Mautino M.R. 2003. High-efficiency lentiviral vector-mediated gene transfer into murine macrophages and activated splenic B lymphocytes. Hum. Gene Ther. 14,385-391.

173. Kim V.N., Mitrophanous K. 1998. Minimal requirement for a lentivirus vector based on human immunodeficiency virus type 1. J. Virol. 72, 811—816.

174. Gasmi M., Glynn J: 1999. Requirements for efficient production and transduction of human immunodeficiency virus type 1-based vectors. J. Virol. 73, 1828—1834.

175. Mautino M.R., Keiser N. 2000. Improved titers of HIV-based lentiviral vectors using the SRV-1 constitutive transport element. Gene Ther. 7, 1421—1424.

176. Kotsopoulou E., Kim V.N. 2000. A Rev-independent human immunodeficiency virus type 1 (HlV-l)-based vector that exploits a codon-optimized HTV-1 gag-pol gene. J. Virol. 74, 4839-4852.

177. Wagner R., Graf M. 2000. Rev-independent expression of synthetic gag-pol genes of human immunodeficiency virus type 1 and simian immunodeficiency virus: implications for the safety of lentiviral vectors. Hum. Gene Ther. 11, 2403— 2413.

178. Wu X., Wakefield J.K. 2000. Development of a novel trans-lentiviral vector that affords predictable safety. Mol. Ther. 2, 47—55.

179. Cherepanov P., Pluymers W. 2000. High-level expression of active HIV-1 integrase from a synthetic gene in human cells. FASEB J. 14, 1389—1399.

180. Corbeau P., Kraus G. 1998. Transduction of human macrophages using a stable HIV-l/HIV-2-derived gene delivery system. Gene Ther. 5, 99-104.

181. Stitz J., Muhlebach M.D. 2001. A novel lentivirus vector derived from apathogenic simian immunodeficiency virus. Virology. 291, 191—197.

182. Hacein-Bey-Abina S., von Kalle C. 2003. LM02-associated clonal T cell proliferation in two patients after gene therapy for SCID-X1. Science. 302, 415— 419.

183. Bushman F., Lewinski M. 2005. Genome-wide analysis of retroviral DNA integration. Nat. Rev. Microbiol. 3, 848-858.

184. Hacein-Bey-Abina S., von Kalle C. 2003. A serious adverse event after successful gene therapy for X-linked severe combined immunodeficiency. N. Engl. J. Med. 348, 255-256.

185. Trono D. 2003. Virology. Picking the right spot. Science. 300, 1670-1671.

186. Wu X., Li Y. 2003. Transcription start regions in the human genome are favored targets for MLV integration. Science. 300, 1749-1751.

187. Cavazzana-Calvo M., Hacein-Bey S. 2000. Gene therapy of human severe combined immunodeficiency (SCID)-Xl disease. Science. 288, 669—672.

188. Schroder A.R., Shinn P. 2002. HtV-1 integration in the human genome favors active genes and local hotspots. Gell. 110; 521—529.

189. Han Y., Lassen K. 2004. Resting CD4+ T cells from human immunodeficiency virus type 1 (HlV-l)-infected individuals carry integrated HIV-1 genomes within actively transcribed host genes. J. Virol. 78, 6122—6133.

190. Zufferey R., Dull T. 1998. Self-inactivating lentivirus vector for safe and efficient in vivo gene delivery. J. Virol. 72, 9873—9880.

191. Iwakuma T., Cui Y. 1999. Self-inactivating lentiviral vectors with U3 and U5 modifications. Virology. 261, 120—132.

192. Page K.A., Landau N.R. 1990. Construction and use of a human immunodeficiency virus vector for analysis of virus infectivity. J. Virol. 64, 5270— 5276.

193. Landau N.R., Page K.A. 1991. Pseudotyping with human T-cell leukemia virus type I broadens the human immunodeficiency virus host range. J. Virol. 65, 162— 169.

194. Akkina R.K., Walton R.M. 1996. High-efficiency gene transfer into CD34+ cells with a human immunodeficiency virus type 1-based retroviral vector pseudotyped with vesicular stomatitis virus envelope glycoprotein G. J. Virol. 70, 2581—2585.

195. Naldini L., Blomer U. 1996. In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector. Science. 272, 263—267.

196. Altstein A.D., Zhdanov V.M., Omelchenko T.N., Dzagurov S.G., Miller G.G., Zavada J. 1976. Phenotypic mixing of vesicular stomatitis virus and D-type oncornavirus. Int. J. Cancer. 15, 780—784.

197. Schnitzer T.J., Weiss R.A., Zavada J. 1977. Pseudotypes of vesicular stomatitis virus with the envelope properties of mammalian and primate retroviruses. J. Virol. 23. 449-454.

198. Burns J.C., Friedmann T. 1993. Vesicular stomatitis virus G glycoprotein pseudotyped retroviral vectors: concentration to very high titer and efficient genetransfer into mammalian and nonmammaliarvcells. Proc. Natl. Acad; Sci: USA; 90^ 8033-8037.

199. Schlegel R>, Tralka T.S. 1983- Inhibition of VSV binding and infectivity by phosphatidylserine: is phosphatidylserine a VSV-binding site? Cell. 32, 639—646.

200. CoihDIA;, Miller;A.D. 2004. Phosphatidylserine: is: not; the cellf surface receptor for vesicular stomatitis virus, j. Virol. 78, 10920-10926.

201. Ory D.S., Neugeboren B.A. 1996. A stable human-derived packaging cell line for production of high titer retrovirus/vesicular stomatitis virus G pseudotypes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93, 11400-11406.

202. Cronin J., Zhang X.Y. 2005. Altering the tropism of lentiviral vectors through pseudotyping. Curr. Gene Ther. 5, 387—398.

203. Stein C.S., Martins I. 2005. The lymphocytic choriomeningitis virus envelope glycoprotein targets lentiviral gene transfer vector to neural progenitors in: the murine brain. Mol. Ther. 11, 382-389.

204. Kobinger G.P., Weiner DJ. 2001. Filovirus-pseudotyped lentiviral vector can efficiently and stably transduce airway epithelia in vivo. Nat. Biotechnol. 19, 225-230.

205. Verhoeyen E., Cosset F.L. 2004. Surface-engineering of lentiviral vectors. J. Gene Med; 6, 83-94.

206. Lu. X., Humeau L. 2004. Safe two-plasmid production for the first clinical lentivirus;vector that achieves > 99% transduction in primary cells using a one-step protocol. J. Gene Med. 6, 963-973.

207. Levine B.L., Humeau L.M. 2006. Gene transfer in humans using a conditionally replicating lentiviral vector. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103, 17372-17377.

208. Puthenveetil G., Scholes J. 2004. Successful correction of the human beta-thalassemia major phenotype using a lentiviral vector. Blood: 104, 3445—3453.

209. Galimi F., Noll M, 2002. Gene therapy of Faneoni anemia: preclinical efficacy using lentiviral vectors. Blood. 100, 2732—2736.

210. Kordower J.H., Emborg M.E. 2000. Neurodegeneration prevented by lentiviral vector delivery of GDNF in primate models of Parkinson's disease. Science. 290, 767-773.

211. Consiglio A., Quattrini A. 2001. In vivo gene therapy of metachromatic leukodystrophy by lentiviral vectors: correction of neuropathology and protection against learning impairments in affected mice. Nat. Med. 7, 310—316.

212. Stein C.S., Kang Y. 2001. In vivo treatment of hemophilia A and mucopolysaccharidosis type VII using nonprimate lentiviral vectors. Mol. Ther. 3, 850-856.

213. Kobinger G.P., Louboutin J.P. 2003. Correction of the dystrophic phenotype by in vivo targeting of muscle progenitor cells. Hum. Gene Ther. 14, 1441—1449.

214. Ikawa M., Tergaonkar V. 2002. Restoration of spermatogenesis by lentiviral gene transfer: offspring from infertile mice. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99, 7524—7529.

215. Выражаю глубокую благодарность своему научному руководителю профессору Владимиру Сергеевичу Прасолову за плодотворные дискуссии и помощь, оказанную на всех этапах работы, а также всем сотрудникам лаборатории биологии клетки за всестороннюю поддержку.

216. Особую благодарность выражаю профессору Кэрол Стокинг и сотрудникам Института экспериментальной вирусологии им. Генриха Петте за помощь в постановке отдельных экспериментов и обсуждение результатов.