Пируваткиназа печени и ее роль в регуляции гликолиза у крыс при витамин B1-недостаточности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Коноваленко, Ольга Владимировна

• Коноваленко, Ольга Владимировна
• кандидат биологических наук
• 1992

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Коноваленко, Ольга Владимировна

ВВЕДЕНИЕ*.,

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика физико-химических и термодинамических свойств пируваткиназы.,,.

1.2. Выделение, очистка и характеристика свойств молекулярных форм пируваткиназы

1.3. Регуляция пируваткиназы L-типа.,.,.,,

Глава 2, УСЛОВИЯ ОПЫТОВ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Условия опытов.

2.2. Методы исследования.,,.*.,.»,.,.*.

Глава 3. ОЧИСТКА И НЕКОТОРЫЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ

СВОЙСТВА L-ПИРУВАТКИНАЗЫ ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫСЫ

3.1. Выделение и очистка фермента,,,.,,.,.,.

3.2. Фракционирование изоформ пируваткиназы печени крысы,.,.,,.

3.3. Гомогенность фермента, его субъединичный состав.

3.4. Влияние ионной силы раствора, ионов рН среды и нуклеозиддифосфатов на активность L-пируваткиназы тиаминдефицитных животных.

Глава 4. РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ L-ПИРУВАТКИНАЗЫ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ВИТАШЙН Bj -НЕДОСТАТОЧНОСТИ.,,.,.

Глава- 5. . И30#ЕРМЕНТНЫЙ СПЕКТР ПИРУВАТКИНАЗЫ ПЕЧЕНИ ТИАМИЦЦЕШЩТНЫХ КРЫС И КИНЕТИЧЕШЕ СВОЙСТВА L-ИЗОФОРШ iEPMEHTA.

- 3

Глава 6. ВЛИЯНИЕ ГОЛОДАНИЯ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ й ИЗОФЕРМЕНТНЫЙ СОСТАВ ПИРУВАТКИНАЗЫ ПЕЧЕНИ.,•••••.*.•.•••.•.•••••.«•.

Глава 7. РЕГУЛЯЦИЯ ГЛИКОЛИЗА НА УРОВНЕ ПИРУВАТКИНАЗЫ В ТКАНИ ПЕЧЕНИ КРЫС Ш ВИТАМИН В^-НЕДОСТАТОЧНОСТИ. . 80

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пируваткиназа печени и ее роль в регуляции гликолиза у крыс при витамин B1-недостаточности»

Гликолиз как универсальней метаболический путь представлен практически во веех видах клеток про- и эукариот, хотя имеются существенные различия в регуляции процесса и его значимости в зависимости от типа, ткани и ее метаболической активности (21, 86, 166), Гликолитические превращения представляют сложный, многоступенчатый ферментативной процесс превращения гексоз, регуляторные аспекты которого постоянно уточняются и дополняются. Особый интерес в последовательности реакций данного метаболического пути представляют гексокиназная, фосфо-фруктокиназная, пируваткиназная реакции, которые катализируются ключевыми ферментами гликолиза.

В последние годы исследователи уделяют большое внимание изучению одного из них - шруваткиназё, Пируваткиназа Ш1: пируват-фосфотрансфераза, КФ 2,7,1,40) - фермент, катализирующий реакцию перефосфорилирования #ЭП с АДФ и имеющий четыре изоферментные формы - Mj, М*»,Ь и Р. Фермент выделен и охарактеризован из различных тканей животного (21, 86, 150, 166), растительного происхождения (102), а также из микроорганизмов (157), Широк© проводятся исследования, направленные на изучение свойств фермента, регуляцию его активности интермедиата-ми гликолиза, фосфорилиро вание-дефосфорилированием (57, 86, 92, 120, 160), На основании этих исследований было установлено, что свойства пируваткиназы ъ- и М-типов существенно отличаются. Различия наблюдаются по кинетическим и регуляторным свойствам (86, 147, 158), Активность пируваткинаэы ъ-типа подвержена резким колебаниям в зависимости от физиологического состояния (диета, голодание, сахарный диабет) и находится под гормональным контролем (42, 74, 125, 136), тогда как активность фермента М-типа почти не изменяется нри различных физиологических состояниях»

Б решении вопроса о закономерностях регуляции углеводного обмена на уровне отдельных реакций метаболической системы клетки существенное место принадлежит витаминам, В метаболизме превращений углеводов регуляторную функцию выполняет тиамин, дифосфорний эфир которого, является коферментом дегидро-геназ альфа-кетокиелот, а также транскетолазы. Однако, многие изменения в углеводном обмене нри тиаминовом дефиците не находят удовлетворительного объяснения с позиции коферментных функзрй тиамина. Среди них и сдвиги на уровне ключевого фермента в гликолитической последовательности - пируваткиназы. Хотя исследования последних лет и расширили представления о структуре, свойствах и функционировании фермента, вместе е тем, значение пируваткинаэы в регуляции скорости гликолиза в печени крыс при витамин Bj-недоетаточнеети мало изучена (19), Отсутствуют биохимические данные, характеризующие особенности регуляции фермента, его изоферментном спектре, кинетических и физико-химических свойствах при витамин Bj-дефиците*

Цель настоящей работы заключалась в изучении активности, изоферментног© состава и свойств пируваткиназы печени при Bj-щфиците и голодании»

Задачи исследования:

- разработать доступный метод выделения и очистки отруваткииазы из печени крыс;

- определить влияние аллоетеричееких активаторов - глю-козо-6-фосфата, фруктоэо-I,б-дифосфата - на каталитическую активность L-пируваткиназы;

- охарактеризовать кинетические параметры и физико-хи-мичеекие свойства L-изоформы фермента из печени крыс, внз-ванных экспериментальным Bj-гиповитаминозом;

- ощенить влияние голодания на функциональную активность и изоферментный спектр пируваткиназы;

- изучить влияние экспериментального тиаминового дефицита на скорость гликолиза.

Научная новизна. Впервые исследованы кинетические характеристики и биохимические показатели внутриклеточного обмена углеводов в печени тиаминдефицитных крыс на уровне пируваткиназы. Установлено, что общая активность фермента снижается за счет L-изоформы в условиях витамин Bj-недостаточности» Дефицит тиашна, вызванный инъекцией окситиашна, не влияет на кинетические характеристики (К®*®, К^^, пн) L-изоформы, выделенной из печени интактных и гиповитаминоз-ных животных. Витамин Bj-недостаточность приводит к снижению активности пируваткиназы и изменению ее изоферментного спектра, характерных для голодающего животного. Это дает основание предположить, что одним из факторов, вызыващих данный эффект, является частичное голодание крыс, что подтверждается однонаправленным снижением скорости превращения ФЭП при парно-контрольном кормлении.

Радиометрическим методом, а также путем определения продукции лактата из глюкозы, глюкозо-6-фосфата, фруктозо-1,6-дифоефата, §ЭП и пирувата получены согласующиеся данные о торможении скорости гликолиза в печени Bj-гиновитаминозных крнс на уровне пируваткиназной реакции.

Практическая значимость работа. Разработан высокоэффективный метод разделения нируваткиназы из печени крыс на изо-формн, который может быть использован для препаративной наработки. Малая трудоемкость, доступность реактивов позволяют широко использовать его в биохишчееких лабораториях при изучении активности и изоферментного спектра пируваткиназы. Используя универсальность разработанного метода,можно по изо-ферментноцу спектру нируваткиназы крови производить дифференциальную диагностику заболевания печени, в частности, гепато-карциному, а также определять тиашновый статус организма.

Результаты исследования, представленные в работе вносят существенный вклад в понимание изменений в гликолиз© на уровне пируваткиназной реакции, наблюдающейся при витамин Bj-не-доетаточноети и могут быть использована в преподавательской практике в вузах медико-биологического профиля. 1а защиту выносятея следующие положения: I. Метод выделения высокоочищенного препарата L-шруват-киназм с удельной активностью 185 мкмоль/мин на X мг белка. Путем хроматографического фракционирования фермент разделен на две изоформы - и ь *

Z. Пируваткиназа L-типа, изолированная из ткани печени контрольных и опытных крнс, одинаково чувствительна к действию положительных эффекторов фермента - глюкозо-6-фосфата и фруктозо-I,6-дифосфата,

3. Физико-химичёевйе свойства и кинетические параметр! фермента - К^^, пн - из печени интактных животных и крыс, вызванных экспериментальным Bj-гиповитаммнозом, не раз

- 9 лшшэтея»

4. При полном голодании животных наблюдается снижение общей активности пируваткиназы и L-изоформы* Быстро нрогрес' сирующее падение активности L-изоформы фермента в первые еут ки голодания может быть обусловлен© изменением соотношения в процессах синтеза и деградации*

5» Торможение скорости гликолиза в ткани печени при экспериментальном Bj-гиновитаминоэе может быть обусловлено установленным фактом снижения активности пируваткиназы»

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Коноваленко, Ольга Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод выделения пируваткиназы печени крыс, позволяющий хроматографически разделить ее на две изоформы М^ и l # Получен высокоочищеншй препарат пируваткиназы L -тина id. удельной активностью 185 мкмоль/мин на I мг белка»

2. Способом фракционирования молекулярных форм пируваткиназы установлено, что снижение общей активности фермента в печени крыс, вызванных дефицитом тиамина обусловлено исключительно! -изоформой.

3. Экспериментальный дефицит тиамина не влияет на такие кинетические характеристики как К^®, К^1^, коэффициент Хил-ла L-изоформы пируваткиназы печени, что указывает на отсутствие модификации фермента фосфорилированием.

4. Экспериментальный Bj-гиповитаминоз сопровождается торможением скорости гликолиза в ткани печени, что может быть обусловлено установленным фактом снижения активности пируваткиназы.

5. Изменение изоферментног© спектра и активности L -изоформы пируваткиназы при полном голодании животных аналогичны изменениям при экспериментальном Bj-авитаминозе.

6. Быстро прогрессирующее падение активности L-изоформы пируваткиназы в первые сутки голодания может быть обусловлено изменением соотношения в процессах синтеза и деградации этого фермента.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Коноваленко, Ольга Владимировна, 1992 год

1. Асатиани Г.А. Ферментные методы анализа, М.: Наука, 1969. - 740 с.

2. Бородинский А.Н. Влияние окситиамина на активность фоефофруктокиназы печени крыс //I Сборник науч.работ Воен.мед. фак. при Куйбышев.мед.ин-те. 1979. - № 8, - С.41-43.

3. Бурштейн З.А. Сбоственная люминесценция белка (природа и применение) // Биофизика. ВИНИТИ. I., 1977. - Т.7. -190 с.

4. Горбач З.В., Маглыш С.С», Забродская С.В. // Специфические и метаболитные эффекты окситиамина // Укр.биох. журн, 1981. - Т.53, 16, - С.69-73.

5. Денисенко В.А., Горбач З.В. Активность гексокиназы при развитии тиаминового дефицита // Вести АН БССР. 1990. -№ 2. - С.78-81.

6. Горбач З.В., Маглым С.С., Нефедов Л.й. Закономерности внутриклеточного метаболизма углеводов и аминокислот у животных при недостаточности тиамина // Биохимия. 1987. -Т. 52, № I. - С.42-52.

7. Кароедова Л.М., Островский Ю.М. К характеристике особенностей обмена цитрата в печени крыс при введении в организм окситиамина // Вести АН БССР. 1981. -13, - С. 69-72.

8. Кожевникова К.А. Изоферменты пируваткиназы из коркового и мозгового слоя почки кролика // Биохимия. 1973. -Т,38, № 4, - 670 с.

9. Корниш-Боуден. Основы ферментативной кинетики. М.: Мир, 1979. - 170 с.

10. Кочетов Г,А, Практическое руководство по энзимологии,- М.: Высшая школа, 1980. 79 с.

11. Лакин Г.Ф. Биометрия, М.:Высшая школа, 1968. -284 с.

12. Лукашик Н.К., Кирилюк А.Г., Севостьянов А.Н. Изменения в углеводном обмене при Bj-гиповитаминозе // В кн.: Материалы 2-го симпозиума по тиамину. Гродно. - 1972.1. С,67-69,

13. Маглыш С.С,, Горбач З.В., Коноваленко О.В. Регуляция глюконеогенеза в печени витамин Bj-дефицитных крыс // Биохимия. 1990,- ^.55, № 8. - СД491-1497.'

14. Мандрик К.А,, Яроцкий Ю.В,, Виноградов В.В. Вьще-ление, очистка и изучение свойств пируваткиназы из коры надпочечников быка // Укр.биох.журн. 1984. - Т.56, № 1. - С. 14-18.

15. Мандрик К.А., Яроцкий Ю.В,, Виноградов В.В. Ингиби-рование аминокислотами пируваткиназы коры надпочечников быка // Доклады АН БССР. 1985. - Т.29, № 11. - С.1049-1050.

16. Мильман 1.С,, Юровицкий Ю.Г., Ермолаева 1.П. Методы биологии развития, М.: Наука, 1974. - 418 с,

17. Особенности обмена углеводов в печени крыс при недостаточности тиамина / Горбач З.В,, Маглыш С.С., Нефедов Л.И., Островский Ю.И. // Биохимия. 1987» - Т.52, № I.1. С,42-52,

18. Островский Ю.М. Тиамин. М.: Беларусь!, 1971. -131: с.

19. Островский Ю.М., Величко М.И., Якубчик Т.Н. Пиру-ват и лактат в живом организме, М.: Наука и техника, 1984.- 12 с.

20. Панин Т.А., Третьякова Г,С., Русских Е.Д. Особенности регуляций ключевых ферментов гликолиза и пентозофосфат-ного пути в тканях с различной функциональной специализацией // Вопр. мед. химии. 1982. - № 2. - С.26-30.

21. Пируваткиназа коры надпочечников быка / Мандрик К.А, Яроцкий Ю.В., Нефедов Л.И., Виноградов В.В. // Биохимия. -1984. Т.49, № 8. - C.I295-X299.

22. Синтез жирных кислот и особенности обмена ширувата в условиях острого авитаминоза Bp вызванного ОТ / Буко В.У., Якубчик Т.И., Ларин §.С., Островский Ю.М. // Биохимия. -1979. Т.44, П2. - C.2148-2I54.

23. ADP-ribosylation suppresses phosphorylation of the L-type pyruvate kinase / latsuura Ryoji, Tanigawa Joshinori, T.Suchiya Mikako et al. // Biochem.et biophys.acta. 1988. -7.969, 11. - P.57-65.

24. Affinity elution of pyruvate kinase from phosphoee-llulose / Schulz J., Wilhelm G., Lorenz G. et al. // Acta.biol. et med.ger. 1975. - V. 34» H 8. - P.I321-1332.

25. Ainswoth S., Macrarlane Ж.А. A kinetio study of rabbit muscle pyruvate kinase // Bioehem.J. -1973. V.131, I 3. -P.223-236. .

26. Baranowska В., Terlecki Z., Baranowcki T. The influence of inorganic phosphate and ATP on the kinetics of bovine heart muscle pyruvate kinase // Moll.and Cell.Biochem. 1984 - V.64, Ж 1. - P.45-50.

27. Berglund L., Lyungstrom G., Engstrom L. Purification and characterization of pig kidney pyruvate kinase type A // J.Biol.Chem. 1977. - 252, 14. - P.6108-6111.

28. Boivin P., Galand Collete, Estrada larianella. Pho-shporylation of human red cell and liver pyruvate kinase. Differences between liver and erythrocyte L-type subunits // Ex-perientia. 1980. - V.36, Ж 8. - P.900-901.

29. Bor-Shihg Lion, Rumio lagayama. Properties of pyruvate kinase from carp hepatopancreas and rainbow trout liver // Bull.Jap.Soc.Sci.Fich. 1986. - V.52, Ж 12. - P.21892195.

30. Liu Jin-bo, Zhehg Rong-lan, Ghem Hui-li. Immunological determination of pyruvate kinase isozymes in liver and plasma of nornal human and hepatоcarcinoma patients // Chin. Biochem. 1990. V.6, Ж 1. - P.82-87.

31. Boyer B.D., Pyruvate kinase // The Enzymes. 1962.-Y.6, Ж 1. - P.95-113.

32. Brown Charles E., Taylor Jacgueline M., Chan Lai-Ian. The effeet of pH on the interaction of substrates and effector to yeast and rabbit muscle pyruvate kinase //Biochimet Biophys. et Biophys acta. 1985. - V.829, Ж 3. - P.342-347

33. Carvajal N., Gonzales Ruby, Moran Arsento. Properties of pyruvate kinase from the heart of Concholepas concholepas // Comp.Biochem. and Physiol. 1986. - V.B85, I 3« - p.577-580.

34. Gharacteristies of pyruvate isoleted from the adduc tor muscle of the adritic mollusc Venus gallina / Carpene E., Cortesi P., Isani Z. et al. // Comp.Biochem. and Physiol.1984. M 4. P.693-698.

35. Chrispeels J., Gade G. Purification and characterize tion of pyruvate kinase from the foot muscle of the cockle, Cardium tuberculatum // Сотр.Biochem.Physiol. 1985. - V". B82, If 1. - P.163-172.

36. Chistopher Thomas, Ratledge Colin. Partial purification and properties of pyruvate kinase and its regulatory role during lipid accumulation by the oleaginous yeast Rhodospo ridieum toruloides CBS 14 // Can.J. Microbiol. 1985. - V. 31, N 5. - P.479-484.

37. Cimbala Michele A., bau David, Daingneault Joseph P. Starvation and feeding with a hing-carbohydrate diet induee changes in the specific activity of rat hepatic pyruvate kinase // Biochem.J. 1985. - V.226, 1 1. - P.299-303.

38. Clack Michael G., Patten G.S., Clack D.G. Hormonal regulation of L-type pyruvate in hepatocytes from phosphory-lase kinase-dificient rats // Biochem.J. 1984. - ¥.224., I 3. - P.863-869.

39. Gladaras C., Cottam G.L. Dietary alteration of translatable тША seguences coding for rat liver pyrivate kinase

40. J. Biol. Chem. 1980. - ¥.255., 5 4. - P.11499-11503.

41. Cleland W.W. The kineties of enzyme-catalyzed reac^-tion with two or more substrates or products, nomenclature and rate equations // Biochem.et Biophys.Acta. 1963. - V.67» Ж 1. - P.104-137.

42. Comparative kinetic behaviour and regulation by fructose-1,6-bisphosphate and ATP of pyruvate kinase from erythrocytes, reticulocytes and bone marrow cells // Comp.Bioch. and Physiol. 1987. - V.B87, Ж 3. - P.553-558.

43. Cottam Gene L., Hollenherg Paul P., Coon Minor J. Subunit structure of rabbit muscle pyruvate kinase // J.Biol. Chem. 1969. - ¥.244, H 6. - P.1481-1486.

44. Corcoran E., Phelan J.J., Fottrell P.P. Purification and properties of pyruvate kinase from human lung // Biochem. et biophys.acta. 1976. ¥.446, I 1. - P.96-104.

45. Crow Vaughan L., Pritchard Graham G. Purification and properties of pyruvate kinase from Streptococus lactic // Biochem. et biophys. acta. 1976. - ¥.438, 11. - P.90-91.

46. Cyclic nucleotide-pyruvate and hormoneinduced changes in pyruvate kinase activity in isoleted rat hepatocytes / Van Berkei Theo J.C., Krui^jt Johan K., Koster Johan P. et al. // Biochem . Res. Communs. 1976. - ¥.72, N3- - P.( 917-925.

47. Decaus J.P., Kahn A.A. Regulation of pyruvate by pho-shorylation and proteolysis // Biochem.J. 1989. - ¥.264, N 20. - P.11584-11590.

48. Differential effects of glucose and fructose on liver L-type pyruvate kinase gene expression in vivo /Munnich Arnold, Lyonnet Stanislas, Chauvet Dominique et al. // J.Biol. Chem. 1987. - ¥.262, Ж 35. - P.1700 -17071.

49. JJ -10052. Distribution of pyruvate kinase isozymes in adult and developing xenopus laevis / Ibsen К.Ж., J.P.Cardin, C.Chi et al. // Oomp.Biochem.Physiol. 198o - V.6-5 В, Ж 2. - P. 473-480.

50. Dolores A.F.B., Pilar del Valle, Joaguin Soler. A kinetic study of the effect h pH on the allosteric propertiesof pyruvate kinase from Phycomyees blakesleeanus // Bioeh. et Bioph.Acta. 1989. - V.998, I 2. - P.221-230.

51. Dwarkin M.B., Segll N., Dwarkin-Rastll E. Pyruvate kinase isozymes in zosytes and embryos from the frong Xenopus laevis // Сотр.Bioch.and Physiol. 1987. - V. 88B, N 5.- P.743-749.

52. Effects of gashing on tissue glucose-uhlition in conscions resting rats.Ma^or glucose-sparing effect on war-king muscles / Issad Т., Penicand L., Feerre P. et al. // Bioch.J. 1987. - V.246, Ш 1. - P.241-244.

53. Effects of insulin, glucagon and dexamethosone on pyruvate kinase in cultured hepatocytes / Pleing Wolfgang E. Geerling Irmling, Robert Heidemarie et al. // Biochem. et Biohys.Acta, 1984. - V.8G5, 12. - P.165-173.

54. Ekdahi Kristiana Uilson, Skman Pia. Hepatic L-type pyruvate kinase: separation of unphoshorylated, phoshoryla-ted and proteolyticcally modified in vivo forms // J.Bioch.- 1984. V.95, К 4. - 917-924.

55. Engstrom L., Ragarsson U., Zettergvist 0. Regulation of pyruvate by phosphorylation and proteolysis // Cold Spring Harbor Conf. 1981. - P.561-574.

56. Etges Robert, Mukkada Antony J. Purification and characterization of a metabolite-regulated pyruvate kinasefrom Leishamanis ma^or promastigotes 11 Mol.and Biochem. Pa-rasitol. 1988. - Y. 27, Ж 2-3. - P.281-289.

57. Epinephrine-stimulated phosphorylation оd pyruvate kinase in hepatocytes / Nagano lasanori , Ishibashi Hiromi, MoCully Vickie et al. // Arch. Biochem. and Biophys. 1980.- Y.23, Ж 1. P.271-281.

58. Etude immunocytometrigue de la pyruvate kinase Lda-ns les hepatocytes isoles du rat: effect du jeune et du dlu-cagon / Broer Yonne, Gali Paule, Rosselin Gabriel et al. // O.r.Acad.sci. 1982. - Y.295, I 5. - P.341-343.

59. Evans C., Miyanaga Osamu, Cottarn G.Larry. The long-tect effect of glucagon on pyruvate kinase activity in primary cultures of hepatocytes // Arch. Biochem. and Biophys.- 1984. V.233, Ж 2. - P.617-623.

60. Fujii Shinya. Molecular aging phosphorylation of erythrocyte pyruvate kinase // Bull. Yamaguchi Med.Seh. 1980.- Y.27, Ж 3-4. P.107-115.

61. Gali Paule. Localisation epilheliate de la pyruvate kinase dans le foie de Rat // G.r. Acad.Sci. 1980. - V.D289, Ж 14. - P.1029-1032.

62. Garcia-Ollala Concepcion, Garrido Partierra Amando. Purification and kinetic proerties of pyruvate kinase isoenzymes of Salmonella tyhimurium // Biochem.J. 1987. - ¥.241, 12. - P.573-581.

63. Garcia-Salguero Leticie, Lupianez Jose A. Long-term control on renal carbohydrate metabolism // Сотр.Biochem. and Physiol. 1989. - ¥.92, 11. - P.67-74.

64. Giles J.G., Poat P.G., Munday K.A. The kinetics of rabbit muscle pyruvate kinase. // Biochem.J. 1976. - V.157, ИЗ*- P.577-589.

65. Hartmann L., Gali P. Isozymes L et M de la pyruvate kinase hepatique et hormono-dependance //C.r.Soc.biol. -1982. ¥. *76, N 4. - P.804-8I6.

66. Hoffman K.H. Pyruvate kinase from muscle and catalytic studies // J. Сотр. Physiol. 1975. - ¥.104, H 1. - P. 59-69.

67. Hoie J. L-type pyruvate kinase from human liver // Biochim. et biophys.acta. 1976. -¥. 438, I 2. - P.393-^506.

68. Holness M.J., Sugden M.C. A kinetic study of rabbit muscle pyruvate kinase // Bioch.J. 1989. - V.258, Ж 2. -P.529-533.

69. Hopkirk T.J., Bloxham D.P. Studies on the biosynthesis of hepatic pyruvate kinase and its correlation with enhanced hepatic // Biochem.J. 1979. - ¥.182, H 2. - P.383-397.

70. Hopkirk T.J., Bloxham D.P. Studies on the synthesis of L-hepatic pyruvate kinase // Biochem.J. 1980. - ¥.192, Ж 2. - P. 507-516.

71. Human erythrocyte pyruvate kinase its purification and some properties / Staat G. E. J., J.P.Koster, H.Kampet al. / / Biochim.Biophys.Acta. 1971. - ¥.227, N 11. - P. 86-96.

72. Human liver Ъ-type pyruvate kinase deduced from the сMA seguence / KenzaburoT,, Hisaiekl Fugi Hisacki, Shigekazu N. et al. // Eur.J.Biochem. 1986. - ¥. 154, -2. - P.465-469.

73. Ibsen K.H., Trippet P. Interconvertible and nonin-terconvertible forms of rat pyruvate kinase // Biochemistry.- 1972. V.11, Ж 3. - P.4442-4450.

74. Imamura K., Tanaka T. Pyruvate kinase isozymes from rat // Methods in Enzymology. Hew York; Academic Press. -1982. ¥.90. - P.150-165.

75. Influence of phosphorylation on the interaction of effectors with rat liver pyruvate kinase / Il-llaghabi M.Raa-fat, Claus Thomas H., McGrane Molly M. et al. // J.Biol.Chem.- 1982. V.257, Ж 2. - P.233-240.

76. Inone Hiroyase louchi Tamio, Tanaka Takehiko. Complete amino acid sequence of rat L-type pyruvate kinase deduced from the сША sequence // Bur.J.Biochem. 1986. - V.154, 1 2. - P.465-469.

77. Irving l.G., Williams J.l. Purification M-type pyruvate kinase // Bioehem.J. 1985. - V.94, Ж 1. - P.3G-4C.

78. Jacobasch G., Holzhutter H. Molecular and cellular regulation of pyruvate kinase in red blood cells // Hemato-logia. 1984. - V.17, 12.- P.259-266.

79. James Milinda E., B. James B. Long-term modulation of type Ъ pyruvate kinase activity in yong and murute rats

80. Biochem.J. 1982. -¥.204, N 1. - P.89-95.

81. James В., Walker R.G. Eat liver pyruvate kinase;: influence of ligands on activity and fructose-1,6-bisphoshate // Arch.Biochem. and Biophys. 1984. - ¥.232, H 1, - P.202-213.

82. Kajda P*K., Birch H.J. Rat-brain pyruvate kinase: purification and effects of Lithuem //J.Inorg.Biochem. 1979.- ¥.11, Ж 4. P.361-366.

83. Kayne P.J., Pyruvate kinase. The Enzymes, Ili-ed lew York: Academic Press. 1973. - ¥.8. - P353-382.

84. Kayrin Levent, Ozer Inci. The effect of storage on the kinetic properties of sheep hepatic pyruvate kinase // Biochem. Med. and Metab. Biol. 1986. - ¥.35, I 1. - P. 50-58.

85. Kapoor M., Tronsgaard T.M. Pyruvate kinase of leu-rospora crassa; purification and some properties // iCan.J. Microbiol. 1972. - ¥.18, Ж 6. - P.805-815.

86. Kilinc R., Ozer 1. A rapid purification method for human erythrocyte pyruvate kinase // Biochem.Med. 1984. -V.32» I 3. - P.296-302.

87. Krebs H.A., Eggleston L.¥. The role of PK in regulation of gluconeagenesis // Biochem.J. 1985. - ¥.94» 11.- P.3C-4C.

88. Kwan C.J., Davis L.C. L-phenylalanine induced changes of sulfydryl reactivity in rabbit muscle pyruvate kinase // Can.J.Biochem. 1981. - ¥.59, 1 1.-P.92-99.

89. Kwan C.J., Erhard K., Davis R.C. Spectral properties of Co II and 11 II activated rabbit muscle pyruvate kinase // J.Biol.Chem. - 1975. - ¥.250, 1 7. - P.5951-5959.

90. Lin Min, Turpin David H. Pyruvate kinase isozymes from green alga, Selenastum minatum. Purification and physical and immunological characterization //Arch.Biochem.and Biophys.- 1989. V.269, IT 2. - P.219-227.

91. Lesicki A. Characteristic of isoenzymes of pyruvate kinase isolated from some crayfish Orconectes limosus tissues // Comp.Biochem.Physiol. 1976. - ¥.55, H 1. - P.273-277.

92. Ljunstrom 0., Hyelmquist G., Engstrom. Phosphorylation of purified rat liver pyruvate kinase by cyclic 3,5-AMP stimulated protein kinase // Biochem.Biophys.Acta. 1980. -V.358, Ж 2. - P.289-298.

93. Mac Donald Michael J., Chang-Min. Pancreatic islets contain the Mg isoenzyme of pyruvate kinase. Its phosholyla-tion has no effect on enzyme activity // Mol.and Cell.Biochem.- 1985. V.68, Ж 2. - P.115-120.

94. Marie J., Kahn A. Eroteolytic processing of human L-type pyruvate kinase increases its ability to be phosphory-lated //Biochem.and Biophys. Res. Commun. 1980. - V.94, Ж 4. - P.1387-1393.

95. Marie Joellke, Kahn Axel, Boivin R. L-type pyruvate kinase from human liver. Purification by double affinity elution, electrofocusing and immunological studies // Bioc-him. et biophys.acta. 1976. - V.438, Ж 2. - 393-406.

96. Mc Quate J.Т., Utter M.F. Eguilibruem and kinetic study of the pyruvate kinase reaction // J;Biol.Chem. 1959.- V.234, 11. P.2151-2157.

97. Melendez-Hevia Enorique, Siverio Jose M., Perez Jose A. Studies on glycolysis in vitro (role of glucose pho-shorylation and phosphofructokinase activity on total velocity 11 Int.J.Biochem. 1984. --V.16, Ж 5. - P. 469-476.

98. Meyerhof 0., Oesper P.J. Pyruvate kinase M-type // J.Biol.Chem. 1961. - V.236, Ж 2. - P.2277-2287.

99. Michaelidis В., Lazou A., Beis I. Purification, catalytic and regulatory properties of pyruvate kinase from the foot of Patella caerulea (L—} // Gomp.Biochem.and Physiol.1985. Y.B82, Ж 2. - P.405-412.

100. Migler R., Garcarano J. Glycolytic enzyme activities in liver, heart and gastrocnemius of sprague-dawley and wister rats: effect of high sucrose diet //Сотр.Biochem.and Physiol. 1982. - V.B73, Ж 3. - P.635-639.

101. Mildwan A.S., Granof J., Meshitsuka S. Mechanisms of metalaetivated and metalloenzymes // Inst.Cancer.Ress.Sci. Rept. 1980. - V.25, Ж 1. - P.155-162.

102. Molecular cloning of eUTA for ^at L-type pyruvatekinase and aldolase / Simon M.P., C.Besmond, D.Cottreau et al. // J.Biol.Chem. 1983. - V.258, Ж 4. - P.14576-14584.

103. Monstserrat P., Paz R.H., Jose L. Pyruvate kinase and response to allasteric effectors in rat erythrocytes and reticulocytes fractionated by multipleparitioning in squeous two phase systems // Cell.Biochem. and Funst. 1987. - V.5, Ж 1. - P.301-307.

104. Morris С.Ж., Ainsworth S., Kinderlerer J. The regulatory properties of yeast pyruvate kinase // Biochem.J. -1984. V.217, Ж 3. - P.641-647.

105. Morris С.Ж., Ainsworth S., Kinderlerer J. The regulatory properties of yeast pyruvate kinase. Effect of frue-tose-1,6-disphoshpate // Biochem.J. 1986. - V.243, Ж 2. -P.691-698.

106. Muihead H., Catalytic activity and regulation of pyruvate kinase // Biochemist. 1989. - V.11, Ж 4. - P.31-38.

107. Muscle and liver pyruvate kinase are closely related; amino acid sequence comparisons / Hoar Colin G., Жieoll Gordon W., Schiltz Emile et al. // PEBS Lett. 1984. - V. 171, I 2. - P.293-296.

108. Жoguchi Т., Inoue H., Tanaka T. Regulation of rat liver L-type pyruvate kinase mRNA by insulin by fructose // Eur.J.Biochem. 1982. - V.128, Ж 2. - P.583-588.

109. Oeampos Dario, Robrigues Edson, R.Rubens. Purification of musele pyruvatekinase from fish // Arg.biol.e tec-* hoi. 1986. - V.29, Ж 4. - P.699-705.

110. Oluoha U. Pyruvate kinase an enzyme subject to regulation in Dioscorea alata // Biol.plant. 1988. - V.30, Ж 5. - P.362-368.

111. Osterman J., Pritz P.J., Wuntch T. Pyruvate kinaseisozymes from rat tissues: developmental studies // J.Biol. Chem. 1973. - V.248, Ж 3. - P.1011-1018.

112. Patient with pyruvate kinase deficiency developed acute, myelogenous leukemia / Ieki Ryuji, Miwa Shiro, Fujii Hisaiohi et al. // Amer.J.Hematol. 1990. - ¥.34, Ж 1. - P. 64-68.

113. Pearce J. A comparison of the response of hepatic enzyme activity in the domestic folm and the rats to the feeding of diets containing large propertions of glucose and fructose // Comp.Biochem. and Physiol. 1980. - V.B65, Ж 3.- P.635-639.

114. Peter A., Kiener and Edward W.Westhead. Dephospho-rylation and reactivation of phosphorylated pyruvate kinase by a cytosolic phosphoprotein phosphatasi from human erythrocytes // Bioch.and Bioph.Res.Commun. 1990. - ¥.96, Ж 2. -551-557.

115. Phillips P.C., Ainsworth S. Allosteric properties of rabbit muscle pyruvate kinase // Int.J.Biochem. 1977. -7.8, Ж 3. - P.729-735.2+

116. Phosphorylation of L-type pyruvate kinase by Ca (calmodulin-dependent protein kinase) / Schworer Charles M., El-Maghabi M.Raafat, Pilkis Simon J. et al. // J.Biol.Chem.- 1985. ¥.260, Ж 34. - P.13018-13022.

117. Pilkis S.J., El-Maghrabi M.R., Pilkis J. The kineties of rabbit muscle pyruvate kinase // Cell.Endocrinol. -1982. ¥.25, N 3. - P.245-266.

118. Poat P,C,, Giles I.A., Munday K.A. An investigation into the apparent inhibition by arginine phosphate of the activity of Carcinus maenos type M-pyruvate kinase // Bioehem. Biophys.Acta. 1980. - ¥.613, Ж 2. - P.410-419.

119. Poole G.P., Bloxhara D.P. The turnover of Ь-type pyruvate kinase in cultured rat hepatocytes // Bioehem.J. -1982. ¥.204, К 1. - P.89-95.

120. Postle А.В., Bloxham D.P. Glucocorticoid hormones from have a permissive role in phoshorylation of L-type pyruvate kinase by glucagon // Eur.J.Biochem. 1982. - ¥.124, N 1. - P.103-108.

121. Prassannan K.G., Sundaresan R., Yenkalesan K. Glu-. cagon and liver glucose output in vivo // Experientia. 1983. - ¥.33, N 2. - P.169-170.

122. Propertries of chiken skeletal muscle pyruvate kinase and a proposal for its evolutionary relationship to the other avian and mammalian isozymes // Biochemistry. 1975.14, ж 10. p.2247-2252.

123. Protein measurement with the Polin reagent / Lowry O.H., Rosebrough H.J., Farr A.L. et al // J.Biol.Chem. 1951. ¥.193, Ж 1. - P.265-275.

124. Purification and properties of mouse pyruvate kinase К and M and of a modified К subunit / Ibsen K.H., Chiu R.H. Park H.R. et al. // Biochemisty. 1981. - ¥.20, Ж 2. - P.1197 -1506.

125. Purification of four pyruvate kinase isozymes of rats by affinity elution chomatography / Harada K., Saheki S.

126. Wada К. et al. // Biochem. et biophys.acta. 1978. - ¥.524, 12. - P.327-339.

127. Purified pyruvate kinase type 'Mjg from unfertilized hen's egg are substrates of protein kinase G / Shigern H., Horn Priedermann, binder Dietmar et al. // Eur.J.Biochem. -1986. ¥.155, H 3. - P.643-651.

128. Pyruvate kinase from pig liver / Kutzbach Carl, Bischofberger Hanspeter, Hess Benno et al. //Hoppe-Seyler's Zphysiol.Chem. 1973. - ¥.354, N 10-11. - P.1373-1489.

129. Pyruvate kinase isozymes in various tissues of rat and increase of spleen-type pyruvate kinase in liver by injecting ehromatius from spleen and tumor / Muroya J., lagao, Mi«Jazaki et al* // J.Biochem. 1976. - ¥.79, I 1. - P.203-215.

130. Pyruvate kinase isozymic shifts of different!ting chick myogenic cell in vivo and in culture / Cardenas J.M., Bandman E., Walker C. et al. // Dev.Biol. 1979. - ¥.68, H" 1. - P.326-333.

131. Rat-brain pyruvate kinase: purification and effects of Lithuem / Ka^da P.K., Birch I.J., O'Brien M.J. et al. // J.Inorg.Biochem. 1979. - ¥.11, H 4. - P.361-366.

132. Regulation of genes glycolysis enzymes in cultured rat hepatoma cell lines F Meienhofer M.C., Medicis E., Cognet 1. et al. // Eur.J.Biochem. 1974. - ¥.169, H 2. -P.237-243.

133. Regulation of glycolysis in lizards: kinetic studies on liver pyruvate and phosphofructokinase from Lacerta galloti / Torres lestor ¥., Sancher Luis В., Perez Jose A, et al. I! Сотр.Biochem.and Physiol. 1984. - ¥.B77, I 2.1. P.289-294.

134. Regulation of lever sea bass pyruvate kinase by temperature, substrates and some metabolic effectors / Pideu

135. Alonso M.D., Perez M.L. Perez, Amil M.Ruiz et al. // Сотр.Biochem. and Physiol. 1985- - Y.B82, I 4. - P.841-848.

136. Reinaeher M., Eigenbrodt E. Immunohistological demonstration of the same type of pyruvate kinase isoenzyme (ffig: in tumors of chicken and rat // Virchows Arch. 1981. - Y.B37, Ж 1. - P.79-88.

137. Rhodes Nicholas, Morris Claudia Ж. The regulatory properties of yeast pyruvate kinase. Effects of ЖИ^ and K+ concentrations // BiochemJ. 1986. - ¥.234, H 3. - P.705-713.

138. Rozengurt Enrigue, Jimenez de Asua Luis, Carminatti Hector. Some kinetic properties of liver pyruvate kinase (type L). Effect pH on its allosterie behavior // J.Biol,Chem. -1969- ¥.244, Ж 12. P.3142-3147.

139. Rydon H.M. Note on improved method for the prepation of oxythiamine // BiochemJ.- 1951. ¥.48, N 3. - P.383-387.

140. Saheki S., Saheki K., kanaka T. Peptide structures of pyruvate kinase isozymes. Comparison of the four pyruvate kinase isozymes of the rat // Biochem.Biophys.Acta. 1.982.-¥.704, Ж 3. - P.484-493.

141. Sakai Hiroshi, Suzuki Koichi, Imahori Kazutomo. Purification and properties of pyruvate kinase from Bacillus stearothermophilus // J.Biochem. 1986. - ¥.99, Ж 4. - P. 1157-1167.

142. Sand Ole. The effect of fructose-1,6-diphosphate on pyruvate kinase from the liver of the flounder // Сотр. Biochem. and Physiol. 1988. ¥.90, Ж2. P.401-407.

143. Sehloen L.H., Bamburg J.R., Sallack H.J. Isozymes of pyruvate kinase in tissues and egges of Rana pipiens // Biochem.Biophys.Res.Gommun. 1979. - ¥.36, Ж 2. - P.254-265.

144. Sehloen L.H., Rmiotek E.H., Sallack. Pyruvate kinase isozymes in adult tissues and eggs of Rana papiens // Arch. Biochem.Biophys. 1974.-V.164, 12,- P254-265.

145. Scopes R. Multiple enzyme purification from muscle extracts by usihg affinity-elution-chromatographic procedures //Biochem.J. 1977. ¥.161, Ж 2. - P.265-277.

146. Some kinetic properties of pyruvate kinase from Phycomyces blakesleeanus / Busto Felix, ¥alle Pilar del, Arri-aga Dolores de, Sol.er Joaquin et al. // Int.J.Biochem. 1985. - ¥.17, Ж 2. - P.253-257.

147. Srivastava L.K., Baguer Жа^та Z. Purification and priperties of rat brain pyruvate kinase // Arch.Biochem. and Biophys. 1985. -¥.238, Ж 2. - P.703-713.

148. Storey K.B., Hochachka P.W. Squit muscle pyruvate kinase: control properties in a tissue v?ith an active L-&Pcycle // Сотр.Biochem. and Physiol. 1985. - V.B52, 11.-P.187-191.i

149. Tsao Makepeace U. Kinetic properties of pyruvate kinase of rabbit brain // Mol. and Cell.Biochem. 1979. - V.24, 12.- P.75-81.

150. Vanhan C.L., Graham P.G. Purification аад properties of pyruvate kinase from Streptococcus lactis // Biochim. et biophys.acta. 1976. - V.438, 1 1. - P.90-101.

151. Wields H.A. Changes in kinetic properties of pyruvate kinase from Helix aspersa during recovery from aestivation // Amer.Zool. 1990. - V.30, 1 4. - 70a P.

152. Wiencke Christian. She response of pyruvate kinase from intertidal red alga Porphyra umbicalis to sodium and potassium ions // J.Plant Physiol. 1984. - T.116, 1 5. - P. 447-453.

153. Weber K., Osbom. The reliability of molecular weight determination by dodecyl sulfate-polyaerylamide gel electrophoresis. // J*Biol.Chem. 1969. - V.244, N 16. - P.4406-4412.

154. Wu S.W.I., long S.C., Jeung D. Comparative studies of vertebrate and invertebrate pyruvate kinase //Сотр.Biochem. Physiol. 1978. - V.61B, 11. - P.93-98.

155. Yokozawa Takao, Kitahara Uamiko, Oura Hikokichi. Influence of change in feeding schedule on pyruvate kinase activity // J.Agr.Chem.Sос.Jap. 1980. - ¥.54, Ж 3. - P. 181-185.

156. Zierz Stephan, Katz Norbert, Jungermann Kurt. Distribution of pyruvare kinase type L and Mg in microdissee-ted periportal and perivenous rat liver tissue with different dietary states // Hoppe-Seyler's Z.Physiol.Chem. 1983- ¥.364, Ж 10. P.1447-1453.

157. Об использовании (внедрении) результатов НИР в учебном процессе.

158. Подпись зав.каф,биохимии ГГМИ профессора Н.К.Лукашика заверяю:г