Пьезокварцевые иммуно- и ПМО-сенсоры для определения ряда антибиотиков и природных токсинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Карасева, Надежда Александровна

• Карасева, Надежда Александровна
• кандидат химических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат химических наук Карасева, Надежда Александровна

Содержание

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. Обзор литературы

1.1. Пьезокварцевые сенсоры для определения низко- и высокомолекулярных соединений

1.2. Полимеры с молекулярными отпечатками для применения в

пьезокварцевых сенсорах

Глава II. Экспериментальная часть

II. 1. Характеристика объектов исследования, химических

реагентов, иммунореагентов и аналитического оборудования

II.2. Иммобилизация биомолекул на поверхности золотого

электрода пьезокварцевого иммуносенсора

И.З. Электросинтез пленок полимеров с молекулярными отпечатками

11.4. Синтез наночастиц полимеров с молекулярными отпечатками методом преципитации

11.5. Кинетические исследования иммунохимических реакций антиген-антитело

11.6. Определение коэффициентов перекрестного реагирования антител и ПМО

11.7. Пробоподготовка образцов пищевой продукции

Глава III. Разработка пьезокварцевых иммуносенсоров для определения высоко - и низкомолекулярных

соединений

III. 1 .Формирование рецепторного покрытия иммуносенсора

III. 1.1. Генерирование подложки методом электрополимеризации. 47 III. 1.2. Иммобилизация биомолекул на поверхности электрода

сенсора

III.2. Характеристика применяемых иммунореагентов

Ш.З. Выбор регенерирующего раствора

Ш.4. Метрологические характеристики разработанных

пьезокварцевых иммуносенсоров

Глава IV. Сенсоры на основе полимеров с молекулярными

отпечатками

IV. 1. Формирование покрытия на основе полимеров с

молекулярными отпечатками методом электрополимеризации

IV.2. Применение ПМО цефотаксима и пенициллина в в

пьезокварцевых сенсорах

IV.3. Синтез наносфер с поверхностными отпечатками методом

преципитации

ГУ.3.1. Применение частиц полимеров с молекулярными

отпечатками в пьезокварцевых сенсорах

Глава V. Применение пьезокварцевых иммуно- и ПМО-сенсоров для определения антибиотиков и природных

токсинов в пищевой продукции

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пьезокварцевые иммуно- и ПМО-сенсоры для определения ряда антибиотиков и природных токсинов»

Введение

Актуальность работы.

Необходимость определения следовых концентраций биологически активных веществ в пищевой продукции и биологических пробах стимулировала развитие экспрессных, высокочувствительных и селективных методов анализа, основанных на применении сенсоров различной природы.

Пьезокварцевые гравиметрические сенсоры положительно зарекомендовали себя при анализе газов и жидкостей. Чувствительность определения аналитов связана со свойствами пьезокварцевого преобразователя, в то время как рецепторный слой на поверхности его электродов влияет на чувствительность и селективность детектирования. Наиболее часто при анализе жидких сред в качестве распознающих молекул используются иммунореагенты, позволяющие существенно упростить и сократить процесс пробоподготовки при анализе сложных многокомпонентных проб. Способ создания рецепторного слоя на поверхности электрода сенсора зависит от свойств иммобилизуемых биомолекул и может существенно повысить чувствительность определения индивидуальных соединений. Как правило, для формирования распознающего слоя используется ковалентное закрепление иммунореагентов на предварительно сформированную подложку, обеспечивающую прочную связь с поверхностью металлического электрода и влияющую на продолжительность его службы. Наиболее часто применяются подложки на основе самоорганизованных монослоев тиолов и силоксанов. Способы иммобилизации биомолекул на электрополимеризованные тонкопленочные покрытия в пьезокварцевых сенсорах используются значительно реже, несмотря на возможность изменять их характеристики непосредственно в процессе генерирования.

Кроме иммунореагентов для создания рецепторного слоя пьезокварцевых сенсоров применяются полимеры с молекулярными отпечатками (ПМО), которые, как правило, получают методом блочной

полимеризации. Перед нанесением полимеров на поверхность электрода сенсора требуется их размельчение, фракционирование и последующее закрепление в виде суспензии, что является причиной невысокой воспроизводимости свойств покрытия. Применение метода электрополимеризации позволяет существенно повысить надежность получения слоя с воспроизводимыми характеристиками, сократить продолжительность получения покрытия и упростить процедуру анализа. Поэтому получение полимеров непосредственно на поверхности электрода сенсора методом электрополимеризациии или применение наночастиц с поверхностными отпечатками определяемого соединения расширит возможности использования ПМО в пьезокварцевых сенсорах в качестве заменителей антител, как в прямом, так и конкурентном формате псевдоиммуноанализа.

Предложенные подходы планируется реализовать при создании сенсоров для определения следовых концентраций антибиотиков бета-лактамной группы, хлорамфеникола, природных фико- и бактериотоксинов, содержание которых в пищевой продукции строго нормируется.

Работа выполнялась при финансовой поддержке ведомственной целевой аналитической программы Минобрнауки РФ «Развитие научного потенциала высшей школы (2009-2011)» (№2.1.1/14142), гранта РФФИ «Иммунохимические системы для молекулярного распознавания антибиотиков и оценка безопасности пищевых продуктов» (09-03-97566-р_центр_а), темплана Минобрнауки РФ «Пъезокварцевые биосенсоры нового поколения для определения токсинов и физиологических активных веществ» (№3.2727.2011), Фонда развития малых форм предприятий «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» «У.М.Н.И.К» (тема № 17126, 2012-2013 гг.)

Цель исследования - создание пьезокварцевых сенсоров на основе иммунореагентов и полимеров с молекулярными отпечатками для селективного определения следовых концентраций ряда антибиотиков и

природных токсинов. Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

- изучить условия ковалентной иммобилизации гаптен-белковых конъюгатов и антител на электрополимеризованные пленки полианилина и полипиррола;

- определить кинетические характеристики обратимой гетерогенной иммунохимической реакции, протекающей на поверхности сенсора, рассчитать константы аффинности и коэффициенты перекрестного реагирования гомологичных и групп-специфичных антител;

- изучить условия получения in situ методом электрополимеризации покрытий на основе полимеров с молекулярными отпечатками пенициллина G и цефотаксима;

- изучить закономерности синтеза методом преципитации наносфер с молекулярными отпечатками пенициллинов и исследовать условия их использования в пьезокварцевых сенсорах;

- разработать пьезокварцевые иммуносенсоры для определения индивидуальных биологически активных соединений (хлорамфеникол, пенициллин G, ампициллин, окадаиковая кислота, стафилококковый энтеротоксин А) и суммарного количества пенициллиновых антибиотиков; ПМО-сенсоры для определения пенициллина G, ампициллина, цефотаксима в пищевой продукции.

Научная новизна.

Установлено влияние условий получения электрополимеризованных тонкослойных пленок полианилина и полипиррола на характеристики рецепторного слоя сенсоров, предназначенных для определения следовых концентраций антибиотиков и природных токсинов. Показано, что иммобилизация гаптен-белковых конъюгатов и антител на полипиррольную подложку обеспечивает более высокую чувствительность определения биологически активных соединений.

Предложен электрохимический способ формирования распознающего слоя на основе полимеров с молекулярными отпечатками цефотаксима и пенициллина в непосредственно на поверхности электрода пьезокварцевого сенсора. Показано, что формирование покрытия методом циклической вольтамперометрии и применение в качестве кросс-мономеров диоксибензолов (гидрохинон, резорцин) способствует созданию однородного слоя ПМО оптимальной массы и толщины, с высокой поверхностной концентрацией молекулярных отпечатков.

Впервые изучены условия синтеза наносфер с поверхностными отпечатками пенициллинов методом преципитации и обосновано влияние природы функционального и кросс-мономеров, органического растворителя, температуры и ультразвука на размер и дисперсность наночастиц ПМО. Показана возможность применения наночастиц ПМО в пьезокварцевых сенсорах.

Практическая значимость.

Разработаны сенсоры для определения следовых концентраций индивидуальных биологически активных веществ (пенициллин О, ампициллин, цефотаксим, окадаиковая кислота и стафилоккоковый энтеротоксин А) и суммарного количества антибиотиков пенициллиновой группы. Разработаны способы синтеза тонких пленок ПМО цефотаксима и пенициллина О и наночастиц ПМО пенициллинов методом преципитации. Сенсоры апробированы при анализе реальных пищевых объектов (мясо, молоко, яйца, мед, креветки, кальмары). Научная новизна способа определения хлорамфеникола подтверждена положительным решением Роспатента о выдаче патента (№ 2011129725 от 3 марта 2013 г.).

На защиту выносятся:

распознающие слои иммуносенсоров, полученные ковалентной

иммобилизацией гаптен-белковых конъюгатов и антител на

электросинтезированные подложки полианилина и полипиррола,

позволяющие существенно повысить чувствительность определения

биологически активных соединений по сравнению с сенсорами на основе у-аминопропилтриэтоксисилана;

способ электросинтеза тонкослойных пленок ПМО цефатоксима и пенициллина О непосредственно на поверхности электрода пьезокварцевого сенсора, характеризующихся высокой степенью импринтинга и поверхностной концентрацией молекулярных отпечатков, механической прочностью;

- результаты изучения условий синтеза методом преципитации наносфер ПМО пенициллинов и заключение о влиянии природы функционального и кросс-мономеров, органического растворителя, температуры и ультразвука на размер и дисперсность наночастиц ПМО и возможности применения наносфер в пьезокварцевых сенсорах;

- пьезокварцевые иммуносенсоры, позволяющие определять следовые концентрации хлорамфеникола, пенициллина О, ампициллина, окадаиковой кислоты, стафилококкового энтеротоксина А, суммарное содержание пенициллиновых антибиотиков и ПМО-сенсоры для определения цефотаксима и пенициллина С в пищевой продукции.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на

следующих конференциях: Всероссийской конференции «Аналитика

России», Краснодар, 2009; Всероссийской конференции «Проведение

научных исследований в области индустрии наносистем и материалов»,

Белгород, 2009; «Экотоксикология - 2009, 2011», Пущино, Тула; Съезде

аналитиков России, Москва, 2010; XX Российской молодежной научной

конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной химии»,

Екатеринбург, 2010, 2011, 2012; Всероссийской конференции

«Биосовместимые материалы и покрытия», Саратов, 2011; Международной

научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых

«Ломоносов-2009, 2011», Москва; V Всероссийской конференции "Фагран-

2010", Воронеж; XIII Международной конференции «ИОНИТЫ - 2011»

Воронеж; 2-ой Научной региональной конференции с международным

8

участием «Химия-2011», Коломна; Общероссийской научной конференции

«Полифункциональные химические материалы и технологии», Томск, 2012;

th •

The 7 International conference on instrumental methods of analysis modern trends and application, Греция, 2011; Всероссийской конференции «ЭМА-2012», Уфа, 2012; Всероссийской конференции «Химия биологически активных веществ», Саратов, 2012; International Conference on Materials and Applications for Sensors and Transducers, Венгрия, 2012; 1-ой школе-конференции с международным участие «Новые методы аналитической химии», Санкт-Петербург, 2013.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 статей (в том числе 6 статей в журналах, входящих в Перечень ВАК) и 7 тезисов докладов

Структура работы. Диссертационная работа изложена на 128 страницах печатного текста, включает 37 рисунков, 21 таблицу. Состоит из введения, обзора литературы, глав экспериментальной части, выводов и библиографического списка, включающего 198 ссылок на работы.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Пьезокварцевые сенсоры для определения низко- и высокомолекулярных соединений

В настоящее время актуальным является разработка экспрессных, высокочувствительных и селективных методик определения органических соединений в сложных по составу пробах. Решение этой проблемы стимулировало развитие химической и биосенсорики.

Сенсоры представляют собой аналитические устройства, небольшие по размеру, простые по конструкции и легкие в эксплуатации, позволяющие в режиме on-line получать информацию о содержании различных компонентов в анализируемых пробах. Селективность и чувствительность детектирования определяемых соединений связана со свойствами селектирующей мембраны и физического преобразователя (трансдьюсер) (рис. 1).

, © « ® _

щ ф

т. ic А • ©

★ Ш JL.

w ^

©

Проба

«

S о.

3 <11 и

2

> « л

а. о f ч

х ч и

£ u X го

и о.

с; н

ш

и

Рис. 1. Схема устройства сенсора

В зависимости от вида рецепторных молекул сенсоры подразделяются на химические и биосенсоры [1-3]; по природе применяемого трансдьюсера -на электрохимические [4-10], пьезоэлектрические [10-13], оптические [1415] сенсоры.

Сенсоры характеризуются небольшими размерами, простотой применения, высокой избирательностью, чувствительностью и экспрессностью, позволяют осуществлять селективное и

высокочувствительное определение различных веществ как в газовых, так и в жидких средах при отсутствии длительной и сложной пробоподготовки.

В настоящее время большой интерес вызывают безметочные

пьезоэлектрические сенсоры. По принципу формирования аналитического

сигнала их можно подразделить на сенсоры на основе объемных сдвиговых

волн (кварцевые микро - и нановесы), поверхностных акустических волн,

сдвиговых акустических мод пластины и т.д. Весьма перспективным для

анализа различных соединений является использование

массочувствительных пьезокварцевых сенсоров, работающих по принципу

объемных акустических волн [1, 3, 10-13]. Пьезокварцевый

гравиметрический сенсор представляет собой тонкий диск кристалла а-

кварца АТ-среза, на обеих сторонах которого сформированы электроды из

золота, серебра, платины и т.д. [11]. Аналитическим сигналом

пьезокварцевых сенсоров наиболее часто служит уменьшение частоты

колебаний при увеличении массы рецепторного слоя в результате его

взаимодействия с определяемым соединением [16]. Предел обнаружения

10

пьезокварцевого сенсора с частотой колебаний 10 МГц составляет 10"" г/мл [16-24].

Однако при использовании пьезокварцевых сенсоров в жидких средах необходимо учитывать влияние таких факторов как вязкость, плотность и диэлектрическая проницаемость жидкости, в связи с чем были разработаны QCM-D сенсоры (Quartz crystal microbalance with dissipation monitoring) [2528], позволяющие одновременно с изменением частоты колебания измерять степень рассеяния энергии, зависящую от вязкоэластичных свойств анализируемого раствора. При анализе растворов с близкими параметрами влияние вязкости и диэлектрической проницаемости учитывают при градуировке сенсора.

Пьезокварцевые сенсоры получили широкое распространение для

определения как высоко - (белки [29], ДНК [30], антитела [31-32], токсины

[36]), так и низкомолекулярных соединений (пестициды [33], лекарственные

11

препараты [34], диамины [35] и т. д.) в биологических пробах, пищевой продукции, объектах окружающей среды и т.д.

Чувствительность, селективность и воспроизводимость аналитического сигнала, а также продолжительность службы пьезокварцевого сенсора напрямую зависят от свойств рецепторного покрытия, сформированного на поверхности его электрода. К рецепторному слою предъявляются следующие требования: сохранение высокой активности иммобилизованных биораспознающих элементов, равномерность распределения активных центров связывания по всей поверхности электродов, минимальная масса и толщина, физическая и химическая устойчивость при многократных измерениях [1].

В качестве биораспознающих элементов используются ферменты [37, 38], ДНК [39-43], аптамеры, клеточные структуры/клетки, антитела/антигены [44-45] и т.д.

В энзимосенсорах наиболее широкое применение нашли такие

ферменты, как протеиназа, дегидрогеназа, оксидоредуктаза, эстераза,

ацетилхолинэстераза и некоторые другие [37-38, 47-48]. При связывании

фермента, иммобилизованного на поверхности сенсора, и ингибиторов,

присутствующих в растворе, происходит увеличение массы рецепторного

слоя, в результате чего возможна регистрация аналитического сигнала.

Наиболее полно применение ферментов как биораспознающих молекул

описано в обзоре Мачини [47]. Например, для определения

фосфорорганических пестицидов разработан пьезокварцевый энзимосенсор

на основе ацетилхолинэстеразы. В основу определения положен метод

конкурентного ингибирования, заключающийся в предварительном

связывании пестицида с ферментом. Перед регистрацией аналитического

сигнала в пробу вводили известную концентрацию субстрата - 3-

ацетиоксииндола, под действием фермента преобразуемого в нерастворимую

форму, сорбирующуюся на поверхности электродов [47]. Однако

пьезокварцевые энзимосенсоры не нашли широкого применения в

аналитической практике из-за необратимости большинства ферментативных реакций и, следовательно, невозможности регенерации рецепторного слоя. В основном они используются для изучения кинетики реакций фермент-ДНК, фермент-гликан [49], а также процессов иммобилизации ферментов при разработке электрохимических сенсоров [48].

Двухцепочечных и одноцепочечных молекулы ДНК применяются в пьезокварцевых сенсорах для определения высоко- и низкомолекулярных токсичных соединений, для которых затруднена выработка антител, а также установления комплементарных нуклеотидных последовательностей [42,43, 50-52]. Так, пьезокварцевый сенсор на основе ДНК был рекомендован для обнаружения генетически модифицированных организмов. Аналитический сигнал регистрировали в результате проведения гибридизации между генным фрагментом (одноцепочечная молекула ДНК), иммобилизованным на поверхности сенсора и отвечающим за проявления мутации, и ДНК, извлеченной из исследуемого материала [52]. Кроме того предложено использовать ДНК-сенсоры на основе нативных или денатурированных молекул ДНК для высокочувствительного определения ДНК-антител, являющихся биомаркерами аутоиммунных заболеваний (системная красная волчанка, ревматоидный полиартрит и т.д.), что может быть актуально для ранней клинической диагностики [53].

В последнее время перечень биорецепторных молекул расширился за

счет использования пептидов, фрагментов ДНК и РНК (аптамеры), по

специфичности подобных антителам, но отличающихся от них большей

устойчивостью при хранении и способностью к обратимой денатурации,

отсутствием необходимости их выработки в живом организме [54-55].

Аптамеры с требуемыми свойствами выделяют из библиотек случайных

последовательностей методами селекции in vitro (SELEX - systematic

evolution of ligands by exponential enrichment), используя их способность

специфически взаимодействовать с соответствующими иммобилизованными

лигандами [56]. Разработан сенсор на основе 3'- биотинилированного

13

аптамера для определения а-тромбина [57]. Проведено сравнение способов иммобилизации аптамера на электрополимеризованную подложку из фенотиазиновых красителей и анилина и с помощью аффинного комплекса авидин-биотин или комплекса тиолированный аналог авидина -ньютравидин с биотином. Было отмечено, что по сравнению с авидином и ньютравидином, иммобилизованными непосредственно на золотом электроде, положительно заряженные полифенотиазиновые красители подавляют неспецифическую сорбцию белка.

Гораздо реже в пьезокварцевых сенсорах используются клетки или клеточные структуры [58-60]. Биораспознавание целевых молекул осуществляется всей клеткой или определенным клеточным компонентом, который способен к специфическому связыванию с определяемыми соединениями. Предложен способ исследования взаимодействия иммобилизованных бактериальных эндотоксинов, основных компонентов клеточной стенки грамотрицательных бактерий, с синтетическими липополисахарид-связывающими пептидами [60]. Полученные результаты показывают возможность применения сенсоров на основе эндотоксинов для оценки эффективности противотоксичных и других лекарственных препаратов.

Наиболее перспективно использование в качестве распознающих молекул антител, что связано с их уникальной специфичностью и высокой чувствительностью при иммунохимическом взаимодействии. Гораздо чаще в пьезокварцевых сенсорах применяются иммуноглобулины в С^в), реже -термолабильные иммунореагины С^Е), принимающие участие в протекании аллергических реакции. Антитело представляет собой сложную биомолекулу, состоящую из сотен отдельных аминокислот, выстроенных в определенной последовательности [1, 61-62] (рис. 2).

Рис. 2. Строение антител

Специфичность антител обусловлена химическим строением белковой молекулы, состоящей из четырех полипептидных цепей: двух идентичных легких - Ь, содержащих около 220 аминокислот, и двух идентичных тяжелых - Н, включающих 440-700 аминокислотных остатков. Н- и Ь- цепи соединены между собой дисульфидным мостиком таким образом, что каждая легкая цепь прикреплена к одной из тяжелой, а тяжелые цепи связаны между собой. Легкие цепи также как и тяжелые всегда идентичны друг другу и состоят из двух участков: вариабельного, находящегося в Ы-концевой области полипептидной цепи и постоянного или стабильного (константного), расположенного в С-концевой цепи [1].

Именно индивидуальные особенности химического строения антител определяют их специфичность, то есть способность взаимодействовать только с определенным комплементарным антигеном. Важными характеристиками антител являются авидность и аффинность, определяющие прочность связи между отдельными антидетерминантами и комплементарными детерминантами антигенов или гаптенами. Использование антител позволяет селективно определять широкий круг аналитов в сложных по составу смесях [63-65].

В качестве биораспознающих молекул в пьезокварцевых иммуносенсорах используются антитела или антигены (или белковые конъюгаты низкомолекулярных гаптенов). Пьезокварцевые иммуносенсоры нашли широкое применение для контроля качества пищевой продукции [6668], в мониторинге объектов окружающей среды [69], клинической диагностике [70-73], что вызвано простотой их использования, низкой стоимостью и высокой чувствительностью [74-77].

Измерение аналитического сигнала пьезокварцевого иммуносенсора может проводиться как в статическом, так и в динамическом режиме. В первом случае сенсор выдерживают в анализируемом растворе и после взаимодействия аналита с рецепторным слоем, удаления не прореагировавших реагентов и высушивания биослоя до постоянной массы измеряют приращение массы на воздухе. Метод получил название - "dip & dry" (окунуть и высушить).

В динамическом режиме используется проточная ячейка с закрепленным в ней сенсором, контактирующим только одной стороной с анализируемым раствором, пропускаемым через ячейку с определенной скоростью [1].

В зависимости от способа определения биологически активных

веществ с помощью пьезокварцевых иммуносенсоров (прямой и

конкурентный форматы анализа) аналитический сигнал может быть прямо

или обратно пропорционален концентрации анализируемого соединения в

пробе. Определение высокомолекулярных соединений (бактерии, вирусы,

антитела, белковые антигены, нуклеиновые кислоты, токсины) обычно

проводят путем прямого детектирования - аналитический сигнал фиксируют

по увеличению массы электрода иммуносенсора в результате

непосредственного взаимодействия иммунореагентов, иммобилизованных на

его поверхности, с антителами или антигенами, содержащимися в пробе.

Низкомолекулярные соединения (лекарственные препараты, гормоны,

пестициды) в силу малых изменений частот при прямом детектировании

16

определяют по конкурентной схеме. Для этого в пробу, содержащую аналит, вводят фиксированное количество специфичных антител и смесь пропускают через ячейку детектирования с иммуносенсором, на поверхности которого закреплен гаптен-белковый конъюгат. Не связавшиеся ранее антитела взаимодействуют с гаптен-белковым конъюгатом, что является причиной возникновения аналитического сигнала. По чувствительности конкурентный метод превосходит прямой и в настоящее время для определения низкомолекулярных веществ этот метод используется довольно широко.

Для закрепления биомолекул на поверхности пьезокварцевого сенсора наиболее часто используются методы физической и химической сорбции [7880]. Поскольку универсальные методы отсутствуют, то выбор способа иммобилизации обусловлен свойствами анализируемых соединений и иммобилизованных биокомпонентов.

Физическая сорбция является наиболее простым и быстрым способом закрепления биомолекул. Она осуществляется за счет неспецифических взаимодействий или водородных связей и обеспечивает сохранение активности иммунореагентов [81-82]. Применение такого способа иммобилизации описано при получении рецепторного слоя на основе белковых молекул [83-85]. Основными недостатками физической сорбции являются малая величина сорбционной емкости и неустойчивость покрытия.

С помощью химической сорбции получают плотные рецепторные покрытия, устойчивые при анализе жидких сред. Такой метод предпочтительнее для проточного или проточно-инжекционного анализа. При ковалентной иммобилизации происходит более прочное закрепление покрытия на электроде, что повышает устойчивость при длительном контакте с жидкостью, обеспечивая таким образом высокую воспроизводимость аналитического сигнала и многократность применения сенсора.

I Формирование рецепторного покрытия методом химической сорбции

чаще всего проводится в три этапа. Вначале на поверхность электрода

17

;

•V

сенсора наносят подложку, содержащую активные функциональные группы, а затем закрепляют биомолекулы на поверхности электрода сенсора с помощью бифункционального реагента [1].

Техника с применением самоорганизованных монослоев предлагает один из простейших способов создания подложек, обеспечивающих воспроизводимость и высокую упорядоченность слоев для дальнейшего закрепления антител, что влияет на повышение чувствительности определения, скорость и воспроизводимость анализа. С целью увеличения эффективности связывания между антигеном и антителами, применяют смешанные тиолы, силоксаны, липоевую кислоту [86], цистеамин [87-88], что приводит к увеличению плотности функциональных групп и их стерической доступности. Широкое распространение в качестве подложки получили тиолы. Так, разработан высокочувствительный и селективный пьезоэлектрический иммуносенсор для количественного определения инсулина в сыворотке крови на базе тиольных самоорганизованных монослоев [74]. Для создания селектирующей мембраны сенсора использованы антитела к инсулину, модифицированные сульфосукцинимид 6-[3'-(2 пиридилтиол)пропионамидо]гексаном и «собранные» на поверхности золотого электрода в виде самоорганизованного монослоя. Оптимизированы pH буферного раствора и продолжительность анализа. Стабильность биослоя и возможность многократного его использования были улучшены за счет применения при регенерации мягких вымывающих агентов (буферные растворы с pH 7-8), разрушающие только связи между молекулами инсулина и антителами без затрагивания целостности рецепторного покрытия.

Существенное влияние способа иммобилизации иммунореагентов продемонстрировано при создании пьезокварцевого иммуносенсора на основе тиолов, в том числе с использованием белка А для определения стафилококкового энтеротоксина А [77] . Показано, что применение белка А вдвое увеличивает количества антител, иммобилизованных на поверхности

сенсора, не изменяя их стерической доступности, что сопровождается увеличением аналитического сигнала сенсора.

Разработаны [68] пьезокварцевые иммуносенсоры для определения сульфапрепаратов. Рассмотрены способы формирования биорецепторных покрытий на основе белковых конъюгатов сульфаметоксазола и показано, что наилучшие оперативные характеристики сенсоров достигаются при иммобилизации иммунореагентов на силоксановой или липоевой подложке с помощью глутарового альдегида или 1-этил-3(3-диметиламинопропил) карбодиимида. Иммуносенсор позволяет проводить определение сульфаметоксазола на уровне 0,15 нг/мл в присутствии антибиотиков родственной структуры.

Показана возможность закрепления молекул денатурированной ДНК на у-аминопропилтриэтоксисилане с помощью бифункционального реагента, а также молекул биотинилированной ДНК на подложке из авидина с применением частиц коллоидного золота, диаметром 5 нм. Данные способы иммобилизации позволяют повысить чувствительность определений антител

к ДНК по сравнению с иммуноферментным методом анализа практически в

1

два раза (с 13,8 до 25 Гц-см -мкг" ) [90].

Устойчивость рецепторного слоя возрастает при применении подложек на основе полиэтиленамина и полиэтиленгликоля. Так, при разработке сенсора для определения альфа-фетопротеина [70-71] изучены несколько способов иммобилизации иммунореагентов на подложки из полиэтиленамина и самоорганизованных монослоев цистамина и цистеамина. Было установлено, что использование полиэтиленамина приводит к существенному возрастанию концентрации иммобилизованных антител по сравнению с тиольными монослоями [71]. Аналогичные выводы были сделаны и при изучении способов создания рецепторного слоя сенсора для определения стафилококкового энтеротоксина Б. Иммобилизация антител на подложку из полиэтиленгликоля более предпочтительна и

позволяет проводить определения стафилококкового энтеротоксина Б в диапазоне 2,5-60 мкг/мл [88].

Существенные преимущества имеет способ создания рецепторного покрытия пьезокварцевого сенсора на основе электросинтезированного , полимерного слоя. При электрогенерации полимерных подложек

непосредственно на поверхности золотого электрода возможно контролировать массу и толщину покрытия путем изменения потенциала и скорости его развертки [99-100]. Изучены способы получения подложек на основе пиррола [101], анилина [102-104], о-фенилендиамина [105], тиофена [106] методом электрополимеризации и показано превалирующее влияние на структуру и свойства пленки материала электрода и морфологии его поверхности, режима полимеризации, физико-химических свойств мономера и фонового электролита.

Увеличение концентрации поверхностно-активных «сайтов» связывания может быть достигнуто при использовании наночастиц золота или цепочек на их основе, что облегчает формирование трехмерной структуры биослоя с доступно расположенными биомолекулами [108-109].

1.2. Полимеры с молекулярными отпечатками для применения в

пьезокварцевых сенсорах

В настоящее время наряду с биомолекулами в аналитическую практику активно внедряются полимеры с молекулярными отпечатками, выполняющие в анализе роль искусственных антител [114-116].

ПМО имеют ряд преимуществ по сравнению с биологическими аналогами: устойчивость при хранении и изменении температуры, инертность к органическим растворителям, кислотам и основаниям, агрессивному воздействию окружающей среды. Кроме того, возможно получение ПМО на высокотоксичные соединения, поликлональные антитела

к которым в живых организмах выработаны быть не могут [117-121].

20

¡

В процессе синтеза ПМО в присутствии молекулы-шаблона (темплат) растущий полимерный скелет адаптируется к молекуле темплата, образуя, таким образом, отпечаток. После полимеризации шаблон удаляют экстракцией. Внутри полостей, остающихся в полимерном материале, содержатся функциональные группы, комплементарно соответствующие молекуле темплата, поэтому ПМО могут быть использованы для его селективного определения. Благодаря «молекулярной памяти», заложенной в сверхсшитой полимерной матрице, эти участки способны к комплементарному высокоспецифичному взаимодействию с молекулами темплата, как и в случае антител.

Процедура анализа с применением ПМО и природных антител практически не отличается (рис. 3), поскольку включает этап формирования рецепторного слоя на поверхности сенсора, его контактирование с анализируемой пробой, измерение аналитического сигнала и регенерацию покрытия.

¿налит

Полимер с

молекулярными

отпечатком«

111

полн мерим vifl

V J. А

A JL *" А'

А .. Д А А

А А Д

Аивлит

д О «РдР^

Антитела

°д Д

Измерим*

С НГ юле ................—>

а)

д О ~ д

б)

Рис. 3. Схема анализа с помощью пьезокварцевого ПМО- (а) и

иммуносенсора (б) [150]

В обоих случаях на величину аналитического сигнала влияет масса присоединенных реагентов, кинетические характеристики реакции и полнота регенерации рецепторного слоя.

Полимерные слои могут быть получены непосредственно на поверхности электрода сенсора или закреплены после соответствующей подготовки в виде суспензий [116].

Широкое распространение для синтеза ПМО получил метод блочной полимеризации [123-124], включающий несколько стадий. В начале темплат, функциональный мономер, кросс-мономер растворяют в подходящем растворителе. Далее в систему вводят инициатор полимеризации [наиболее часто азобисизобутиронитрил (АИБН)], нагревают или облучают электромагнитным излучением УФ-диапазона. По окончании синтеза полимер, полученный в виде монолита, измельчают, фракционируют и экстрагируют темплат органическим растворителем.

ПМО, полученные методом блочной полимеризации, наиболее часто

используют при разработке сенсоров для определения органических

соединений (кофеин, гидрохинона, фенол, даминозид и т.д. [119-121]). Для

получения однородного рецепторного слоя ПМО на поверхности электрода

сенсора частицы полимера обрабатывают подходящим растворителем,

повышающим адгезию к поверхности металлического электрода. При этом

возможно набухание полимерной матрицы и, следовательно, изменение

размера «полостей» в ПМО, что может являться причиной снижения

доступности отпечатков, уменьшения сорбционной способности и скорости

связывания целевых молекул [121]. Измельчение полимера и отсеивание

фракций частиц фиксированного размера, получение суспензии в

органическом растворителе и ее закрепление на поверхности электрода

сенсора приводит к увеличению продолжительности формирования

рецепторного слоя (1-2 суток), удлиняет анализ в целом и снижает его

производительность. Многостадийность операций на стадии создания

рецепторного слоя на основе ПМО также является причиной снижения

22

воспроизводимости анализа. При получении и использовании ПМО макромолекул затруднено их встраивание в матрицу и последующее экстрагирование из нее, что сказывается не только на кинетике взаимодействия, но также влияет на селективность и чувствительность анализа. Поэтому ПМО высокомолекулярных соединений применяются редко не только в пьезокварцевых сенсорах, но и в сенсорах другой природы [123].

Для получения отпечатков макромолекул с использованием матрицы на основе полидиметилсилоксана используется метод софтлитографии [125]. Разработаны полимеры с молекулярными отпечатками бактерий 5упескососст и микроорганизмов [126]. Однако, применение данного способа ограничивается неустойчивостью полидиметилсилоксана в большинстве органических растворителей, используемых для вымывания темплата [116].

Описан золь-гель метод получения химически модифицированных оксидных поверхностей, способных к молекулярному распознаванию, в основе которого лежит реакция поликонденсации алкоксисиланов в порах или на поверхности силикагеля, проводимая в присутствии молекул темплата. Данный метод использован при создании полимеров с молекулярными отпечатками гербицидов [127-128].

Метод электрополимеризации позволяет получать селективные молекулярные отпечатки в структуре полимера непосредственно на поверхности электрода сенсора без длительных предварительных стадий, характерных для метода блочной полимеризации [129-134]. Дополнительными преимуществами данного способа является химическая стабильность электрогенерированных ПМО по отношению к водным и органическим растворителям, прочность связи с металлической поверхностью электрода и высокая воспроизводимость по массе по сравнению с применением ПМО, синтезированных методом блочной

полимеризации. Кроме того, при электрохимическом способе возможно контролировать качество покрытия непосредственно в процессе получения.

Как правило, при создании полимерного слоя на основе ПМО базовыми компонентами реакционной смеси являются функциональный мономер и темплат, растворенные в подходящем фоновом электролите. Описаны условия получения электрогенерированных полимеров на основе о-фенилендиамина, анилина, метакриловой кислоты с отпечатками допамина [135], сорбитола [136], атропина [137], нандролона [138], парацетамола, никотина [139] и др. Установлено, что морфология и свойства электросинтезируемых полимерных покрытий зависит от концентрации мономера [141] и природы ионов фонового электролита, поскольку в процессе полимеризации происходит встраивание и освобождение ионов из структуры полимера [140]. Также на процесс полимеризации влияет структура и материал подложки, на которой электроосаждается полимер [140-147].

Однако использование только одного функционального мономера для получения полимерной матрицы может негативно влиять на количество получаемых молекулярных отпечатков, что связано со сложностью встраивания темплата в линейную структуру полимера. В тоже время перспективно электрогенерирование гетерополимерных покрытий на основе функционального мономера, ответственного за формирование линейной структуры полимера, и кросс-мономера, способствующего поперечной сшивке отдельных слоев и «разрыхлению» структуры ПМО, что облегчает процесс встраивания и экстракции молекул темплата. Описан процесс получения покрытий ПМО с применением двух мономеров (о-фенилендиамин и анилин) при создании сенсоров для определения атропина в сыворотке крови человека и урине на уровне 2-10"6 М [148]. Однако характеристики слоя ПМО существенно зависят от правильности выбора сополимеров.

Описаны пьезокварцевые сенсоры на основе полимеров с молекулярными отпечатками для определения глюкозы, органических растворителей [155, 157], пропранолола [174], кофеина [161], ацетона, хлороформа, этанола [159], амилазы, липазы, лизосом [175] и т.д. Рассмотрены основные факторы, влияющие на аналитический сигнал сенсора, воспроизводимость и селективность определения, такие как природа, толщина и масса полимерного слоя, природа растворителя, продолжительность формирования слоя ПМО и т.д.

Так, для сенсора на основе ПМО с1-(+)-метамфетамина, синтезированного методом блочной полимеризации, устойчивость рецепторного слоя и аналитический сигнал существенно зависят от массы слоя и рН пробы [153]. Увеличение массы ПМО вызывает симбатное изменения аналитического сигнала и расширяет диапазон определяемых содержаний, вследствие возрастания количества доступных молекулярных отпечатков. При увеличении продолжительности иммобилизации ПМО от 1 до 24 часа чувствительность сенсора на с!-(+)-метамфетамин изменяется от 105 Гц-мл'мкг-1 до 175 Гц-мл-мкг-1, что может быть связано с длительностью стадии «созревания» полимера (процесс структурирования и закрепления на поверхности электрода сенсора). Поддержании рН на уровне 8-9, обеспечивает присутствие с!-(+)-метамфетамина (рКа 9,5) в пробе в молекулярной форме и способствует регистрации максимального значения сигнала сенсора. Отмечено, что линейность аналитического сигнала и чувствительность определения с!-(+)-метамфетамина больше при проведении измерений в боратном буферном растворе по сравнению с фосфатным [153].

Влияние значения рН наблюдается уже на стадии синтеза ПМО,

например, при получении ПМО домоевой кислоты на основе допамина [152].

В кислой среде замедляется процесс полимеризации, высокое же значение

рН влияет на ослабление связей между домоевой кислотой и допамином при

формировании предполимеризационного комплекса. Максимальное значение

аналитического сигнала ПМО-сенсора зарегистрировано для полимерного

25

слоя, синтезированного при рН 7,5. Полученный полимер с молекулярными отпечатками домоевой кислоты проявляет низкую селективность по отношению к фталевой кислоте, имеющей сходное строение [152].

Немаловажную роль в процессе формирования ПМО играет выбор соотношения мономер-темплат, что было подробно изучено при разработке пьезокварцевого сенсора на основе политиофена для определения пинаколилметилфосфоната. Стабильный предполимеризационный комплекс формируется при смешивании мономера и темплата в соотношении 2:1 [160], что было установлено путем моделирования процесса синтеза с помощью программы Spartan '08 с учетом максимального значения энергии образования комплекса. Установлено влияние толщины ПМО, зависящей от числа циклов полимеризации, на количество доступных молекулярных отпечатков и как следствие возможность определения пинаколилметилфосфоната. Если покрытие обладает большой толщиной, то количество отпечатков может быть ограничено, что связано с включением молекул темплата не только в поверхностные, но и в объемные слои полимера, что затрудняет процесс их извлечения.

Ключевым моментом в процессе формирования полимера с молекулярными отпечатками фолиевой кислоты методом циклической вольтамперометрии являлось использование мономера биотиофенсиланового дендрона, образующего предполимеризационный комплекс с темплатом и выступающим в роли функционального мономера. Разработанный сенсор позволяет проводить определение фолиевой кислоты в области 0-100 мкМ на уровне 15.4 мкМ (6,8 мкг) в присутствии других соединений.

В пьезокварцевых сенсорах в качестве «синтетических антител» в

прямом и конкурентном форматах анализа могут применяться наночастицы

полимеров с молекулярными отпечатками 168-174]. Предложены различные

способы получения частиц с молекулярными отпечатками широкого круга

соединений (диаметром от нанометров до миллиметров): суспензионный

26

(suspension polymerization) в воде, в жидких перфторуглеродах или минеральных маслах, мини- и микроэмульсионный (mini-, micro-emulsion), многоступенчатый (multi-step swelling), а также эмульсионный «ядро-оболочка» (core-shell) и преципитации (precipitation) [170-176].

Суспензионная полимеризация - гетерогенный способ синтеза, позволяющий получать сферические частицы относительно большого размера (от нескольких микрометров до миллиметров). В качестве дисперсионной среды используют воду (перфторуглероды или минеральные масла), в которую последовательно добавляют мономеры, темплат, инициатор реакции. Поскольку образуемая суспензия не является стабильной в нее вводят стабилизатор (ПАВ), предотвращающий слипание капель и сополимеризацию полимеризационных цепей в процесса синтеза ПМО. Молекулы стабилизатора адсорбируются на поверхности «капель» мономеров и темплата, образуя тонкий слой, который играет роль стерического барьера, препятствующего коалесценции. В качестве инициаторов полимеризации применяют органические пероксиды, не растворимые в воде, но растворимые в мономере. Полимеризация происходит по свободно-радикальному механизму [170] в одну стадию и в течение короткого времени (примерно 3 час) по сравнению с более длительным блочным процессом (24-48 ч). После завершения реакции, полимерные гранулы-бусины тщательно промывают, чтобы удалить непрореагировавшие компоненты и темплат. Недостатком суспензионной полимеризации является необходимость длительного процесса отмывания полимера от стабилизатора суспензии.

Способы мини- и микроэмульсионной полимеризации, основанные на

полуковалентном связывании, включают этап высокоскоростной

гомогенизации и обязательное применение сурфактантов для получения

частиц размером 50-500 нм. Применение ПАВ и со-ПАВ увеличивают

стабильность и однородность частиц, а также ограничивает количества

отпечатков на поверхности частиц ПМО, что может одновременно являться

27

причиной снижения доступности отпечатков для молекулярного распознавания по сравнению с микрочастицами, полученными, например, методом преципитации [170]. Примером использования эмульсионной полимеризации является получение частиц с отпечатками глюкопиранозида [173]. Основное преимущество данного метода - это возможность получения монодиперсных частиц относительно малого размера. К недостаткам можно отнести невозможность полного удаления темплата и ПАВ из нанопор.

Чтобы наиболее эффективно контролировать распределение частиц ПМО по размеру и форме был разработан многоступенчатый метод полимеризации, позволяющий получать частицы размером 2-50 мкм и более. В процессе синтеза первоначально формируются небольшие монодисперсные частицы, содержащие молекулы темплата, которые затем набухают, сливаясь с каплями микроэмульсии. Набухание идет в два этапа: в первом участвуют активирующий растворитель и инициатор полимеризации, во втором - мономеры. По достижению необходимого размера набухшие частицы полимеризуются [170]. Этот метод широко используется для синтеза импритированных частиц с применением различных темплатов. Недостатком метода является необходимость присутствия воды в системе, что приводит к нарушению связей между молекулой темплата и функциональным мономером.

«Ядро-оболочка» эмульсионная полимеризация, используемая для прямого синтеза наночастиц ПМО (0,05-2 мкм) с молекулами темплатов различных размеров, включает две стадии - синтез монодисперсных «ядер» и создание импринтированной оболочки [175-177]. Основное преимущество данного способа полимеризации - возможность осуществлять контроль за размером синтезируемых частиц в ходе синтеза. Однако, как и в многоступенчатом способе полимеризации, присутствие воды в полимеризационной среде снижает прочность образуемых связей в частицах полимера, кроме того требуются длительные и сложные стадии очистки.

Метод преципитации является наиболее удобным и простым подходом получения наночастиц ПМО высокой степени однородности [178-180]. Впервые описание метода дано в работе [178]. Процесс полимеризации происходит в присутствии большого количества растворителя. Контролируя параметры растворимости полимера и полярность порогенного растворителя получают частиц с порами постоянного размера и неизменными значениями среднего диаметра в интервале от 0,01 до 1 мкм. Изменение диаметра частиц возможно с помощью интенсивного перемешивания либо центрифугирования.

Главным достоинством метода преципитации является возможность получения монодисперсных частиц малого диаметра с фиксированным числом молекулярных отпечатков на поверхности. Описано применение метода преципитации для синтеза частиц полимеров с молекулярными отпечатками гербицидов, антибиотиков, пестицидов и др. соединений [180].

Однако, несмотря на явные достоинства частиц ПМО в качестве заменителей антител, разработка сенсоров на их основе началась сравнительно недавно [153]. В работе [162] наночастицы полимеров с молекулярными отпечатками были иммобилизованы на поверхность сенсора с помощью полиэтилентерефталата (PET). За счет контроля условий осаждения (время выдерживания, объем раствора с наночастицами ПМО) была улучшена прочность связывания наночастиц со слоем PET, таким образом, чтобы впоследствии сайты распознавания на поверхности

наночастиц были доступны при анализе.

* *

*

Обзор литературы показал, что пьезокварцевые иммуносенсоры

перспективны для селективного и высокочувствительного определения

следовых концентраций биологически активных соединений. Однако их

возможности реализованы далеко не полностью. Систематические

29

исследования пьезокварцевых иммуносенсоров, предназначенных для определения следовых концентраций антибиотиков бета-лактамной группы, хлорамфеникола, природных фико- и бактериотоксинов, ранее не проводились.

В тоже время актуальными являются исследования по разработке пьезокварцевых сенсоров на основе полимеров с молекулярными отпечатками, так называемых синтетических антител, для определения биологически активных соединений в прямом и конкурентном форматах анализа. Внедрение полимеров с молекулярными отпечатками позволит снизить стоимость анализа, повысить срок хранения применяемых биорецепторов, а также провести определение высокотоксичных соединений, на которые невозможно получить природные антитела.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Карасева, Надежда Александровна

выводы

1. Показано, что иммобилизация гаптен-белковых конъюгатов и антител на электросинтезированных тонких пленках полипиррола способствует получению устойчивого распознающего слоя пьезокварцевого иммуносенсора с высокой концентрацией доступных активных «сайтов» распознавания, что позволяет осуществлять высокочувствительное и селективное определение биологически активных соединений (хлорамфеникол, пенициллин О, ампициллин, окадаиковая кислота, стафилококковый энтеротоксин А) в широком диапазоне определяемых содержаний.

2. Предложены способы электрогенерации рецепторного слоя сенсора на основе полимеров с молекулярными отпечатками методом циклической вольтамперометрии непосредственно на поверхности электрода сенсора. Установлено влияние природы и концентрации кросс-мономера на степень импринтинга ПМО цефотаксима и пенициллина О, концентрацию молекулярных отпечатков и механическую стабильность. Показано, что оптимальные характеристики рецепторного слоя достигаются при использовании при электросинтезе ПМО цефотаксима смеси анилина (0,2 М) и гидрохинона (0,01 М), ПМО пенициллина в - п-аминофенола (0,3 М) и резорцина (0,03 М). Селективность ПМО сенсоров для определения цефотаксима и пенициллина О возрастает со снижением концентрации антибиотиков в растворе.

3. Обоснованы условия синтеза наночастиц ПМО пенициллинов методом преципитации. Установлено, что размер и дисперсность синтезируемых наносфер зависит от природы функционального и кросс-мономера, порогенного растворителя, применения ультразвуковой обработки. Отмечено влияние продолжительности ультразвукового воздействия на уменьшение диаметра, однородность и морфологию наночастиц ПМО. Показана возможность применения наночастиц ПМО пенициллинов в прямом и конкурентном форматах псевдоиммуноанализа.

4. Разработаны пьезокварцевые иммуносенсоры для определения индивидуальных биологически активных соединений (хлорамфеникол, пенициллин в, ампициллин, окадаиковая кислота, стафилококковый энтеротоксин А) и суммарного количества пенициллиновых антибиотиков; ПМО-сенсоры для определения пенициллина в, ампициллина, цефотаксима. Сенсоры апробированы при анализе мяса, молока, яиц, морепродуктов, меда и позволяют осуществлять детектирование биологически активных соединений на уровне МДУ и ниже.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Карасева, Надежда Александровна, 2013 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ермолаева, Т.Н. Пьезокварцевые сенсоры: аналитические возможности и перспективы: монография / Т. Н. Ермолаева, Е.Н. Калмыкова. -Липецк: ЛГТУ, 2007. - 190 с.

2. Эггинс, Б. Химические и биологические сенсоры / Б. Эггинс. - М.: Техносфера, 2005. - 336 с.

3. Каттрал, Р. В. Химические сенсоры / Р. В. Каттрал. - М.: Научный мир, 2000. - 144 с.

4. Wang, Y. Electrochemical Sensors for Clinic Analysis / Y. Wang, H. Xu, J. Zhang, G. Li // Sensors. - 2008. - V. 8. - P. 2043-2081.

5. Ikebukuro, K. Novel electrochemical sensor system for protein using the aptamers in sandwich manner / K. Ikebukuro, C. Kiyohara, K. Sode // Biosensors and Bioelectronics. - 2005. - V. 20. - P. 2168-2172.

6. Grieshaber, D. Electrochemical Biosensors - Sensor Principles and Architectures / D. Grieshaber, R. MacKenzie, J. Voros, E. Reimhult // Sensors. - 2008. - V. 8. - P. 1400-1458.

7. Kim, DM. An amperometric chloramphenicol immunosensor based on cadmium sulfide nanoparticles modified-dendrimer bonded conducting polymer / DM Kim, MA Rahman, MH Do, С Ban, YB Shim // Biosens Bioelectron. - 2010. - V. 25. - No. 7. - P. 1781-1788.

8. Thavarungkul, P., Detecting penicillin G in milk with impedimetric labelfree immunosensor / P. Thavarungkul, S. Dawan, P. Kanatharana, P. Asawatreratanakul // Biosensors and Bioelectronics. - 2007. - V. 23. - P. 688-694.

9. Giroud, F. Impedimetric immunosensor based on a polypyrrole antibiotic model film for the label-free picomolar detection of ciprofloxacin / F.

Giroud, K. Gorgy, C. Gondran, S. Cosnier, D. G. Pinacho, M.-P. Marco, F. J. Sanchez-Baeza // Anal. Chem. - 2009. - V. 81. - P. 8405-8409.

10.Su, X.D. Design and application of piezoelectric quartz crystal based immunoassay / X.D. Su, F.T. Chew, S.F.Y. Li // Anal. Sci. - 2000. - V. 16. -P. 107-111.

ll.Skladal, P. Piezoelectric biosensor for real-time monitoring of hybridization and detection of hepatitis C virus / P. Skladal, C.S. Riccardi, H. Yamanaka, P.L Costa// J. of Virolog. Meth. -2004. - V. 117. - P. 145.

12.Susmel, S. Human cytomegalovirus detection by a quartz crystal microbalance immunosensor / S. Susmel, C.K. O'Sullivan, G.G. Guilbault // Enzyme and Microb. Technol. - 2000. - V.27. - P. 639.

13.Zhou, X.D. Detection of hepatitis B virus by piezoelectric biosensor / X.D. Zhou, L.J. Liu, M. Hu, L.L. Wang, J.M. Hu // J. Pharm. Biomed. Anal. -2002.-V. 27. -№ 1-2.-P. 341.

14.Adrian, J. Waveguide interrogated optical immunosensor (WIOS) for detection of sulfonamide antibiotics in milk / J. Adrian, S. Pasche, J-M. Diserens, F. Sanchez-Baeza, H. Gao, M.-P. Marco, G. Voirin // Biosensors and Bioelectronics. - 2009. - V. 24. - Issue 11. - P. 3340-3346.

15. Kim, N. Food chemistry Sulfamethazine detection with direct-binding optical waveguide lightmode spectroscopy-based immunosensor /_N. Kim, D.-K. Kim, W.-Y. Kim // Food Chemistry. - 2008. - V. 108, Issue 2. - P. 768-773.

A

16.BarkoA, G. Application of principal component analysis for the characterisation of a piezoelectric sensors array / G. BarkoA, J. Hlavay // Analytica Chimica Acta. - 1998. - V. 367. - P. 135-143.

17.Kuo, C.-W. Cryptand/metal ion coated piezoelectric quartz crystal sensors with artificial back propagation neural network analysis for nitrogen dioxide and carbon monoxide / C.-W. Kuo, J.-S. Shih // Sensors and Actuators B. -2005.-V. 106.-P. 468-^76.

18.Huang, M. Correlations of the impedance parameters and conductivity and permittivity of liquid and gel phases in a series piezoelectric quartz crystal sensor / M. Huang, D. Shen, L. M. Chow, M. Yang // Sensors and Actuators B.-2001.-V. 72.-P. 21-27.

19.Han, L. The effect of bonding layer properties on the dynamic behavior of surface-bonded piezoelectric sensors / L. Han, X.D. Wang, Y. Sun // International Journal of Solids and Structures. - 2008. - V. 45. - P. 55995612.

20.Li, P. An arbitrarily distributed tactile piezoelectric sensor array / P. Li, Y. Wen // Sensors and Actuators A. - 1998. - V. 65. - P. 141-146.

21.Suresh, K. Piezoelectric based resonant mass sensor using phase measurement / K. Suresh, G. Uma, S. Kumar, U. V. Kumar, M. Umapathy // Measurement. - 2011. - V. 44. - P. 320-325.

22.Zhou, W. Simulation and design of piezoelectric microcantilever chemical sensors / W. Zhou, A.l Khaliq, Y. Tang, H. Ji, R. R. Selmic // Sensors and Actuators A. - 2005. - V. 125. - P. 69-75.

23.Wei, L.F. Fullerene-cryptand coated piezoelectric crystal urea sensor based on urease / L.F. Wei, J.S. Shih // Anal. Chim. Acta. - 2001. - V. 437. - P. 77-85.

24.Tang Alice, X.J. Immunosensor for okadaic acid using quartz crystal microbalance / X.J. Tang Alice, M. Pravda, George G. Guilbault // Analytica Chimica Acta. 2002. V.471. P. 33-40.

25. Andersson, M. Quartz crystal microbalance-with dissipation monitoring (QCM-D) for real time measurements of blood coagulation density and immune complement activation on artificial surfaces / M. Andersson, J. Andersson, A. Sellborn, M. Berglin, B. Nilsson, H. Elwing // Biosens Bioelectron. - 2005. - V.21. - Issue 1. - P. 79-86.

26. Dixon, M.C. Quartz crystal microbalance with dissipation monitoring: Enabling real-time characterization of biological materials and their interactions / M.C. Dixon // J. Biomol. Tech. - 2008. - V. 19. - P. 151-158.

27. Marx, K.A. The quartz crystal microbalance and the electrochemical QCM: Applications to studies of thin polymer films, electron transfer systems, biological macromolecules, biosensors, and cells / K.A. Marx // Piezoelectric Sens. - 2007. - V. 5. - P. 371-424.

28.Rodahl, M. Simultaneous frequency and dissipation factor QCM measurements of biomolecular adsorption and cell adhesion / M. Rodahl, Hook, F. Fredriksson, C. Keller, C.A. Krozer, A. Brzezinski, P. Voinova, M. Kasemo // Faraday Discuss. - 1997. - V. 107. - P. 229-246.

29.Chen, HM. A metal-chelating piezoelectric sensor chip for direct detection and oriented immobilization of polyHis-tagged proteins / HM Chen, WC Wang, SH.Chen // Biotechnol Prog. - 2004. - V. 20. - Issue 41. - P. 237-244.

30.Bustabad, A. A biosensor for detetion of DNA sequences based on a 50 MHz QCM electronic oscillator circuit / A. Bustabad, G. Garsia // Sensors. -2009.-V. 1-3.-P. 687-690.

31.Li, W. Preparation and application of a trimethoprim ion-selective piezoelectric sensor / W. Li, X. Su, H. Guo, W. Wei, S. Yao// Analyst. -1999.-V. 124.-P. 91-95.

32.Pan, N.Y. Piezoelectric crystal IgG immunosensor based on fullerene immobilized C60-anti human IgG / N.Y. Pan, J.S. Shih // Sens. Actuators. -2004.-V. 98.-P. 180-187.

33.Erbahara, D. D. Pesticide sensing in water with phthalocyanine based QCM sensors / D. D. Erbahara, , I. Giirola,, G. Gumu§a,, E. Musluoglua, Z. Ziya Oztiirka, V. Ahsena, M. Harbecka // Sensors and Actuators B: Chemical. -2012.-V. 173.-P. 562-568.

34.Stobiecka, M. Piezoelectric Sensor for Determination of Genetically Modified Soybean Roundup Ready in Samples not Amplified by PCR / M. Stobiecka, J. M. Ciesla, B. Janowska, B. Tudek, H. Radecka // Sensors. -2007.-V. 7.-P. 1462-1479.

35.Wang, C. A piezoelectric quartz crystal sensor array self assembled calixarene bilayers for detection of volatile organic amine in gas / C. Wang, X.-W He, L.-X. Chen // Talanta. - 2002. - V. 57. - N. 6. - P. 1181-1188.

36.Attili, Bassam S. A piezoelectric immunosensor for the detection of cocaine original research / Bassam S. Attili, Ahmad A. Suleiman // Microchemical Journal. - 1996. -V. 54. - Issue 2. - P. 174-179.

37.Navani, N. K. Nucleic acid aptamers and enzymes as sensors / N. K Navani, Y. Li // Current Opinion in Chemical Biology. - 2006. - V. 10. - P. 272281.

38.Liu, Y. Study of the immobilization of alcohol dehydrogenase on Au-colloid modified gold electrode by piezoelectric quartz crystal sensor, cyclic voltammetry, and electrochemical impedance techniques / Y. Liu, F. Yin, Y. Long, Z.i Zhang, S. Yao // Jouranl of Colloid and Interface Science. - 2003. -V. 258.-Issue l.-P 75-81.

39.Tombelli, S. Piezoelectric biosensors: Strategies for coupling nucleic acids to piezoelectric devices / S. Tombelli, M. Minunni, M. Maccini // Methods. -2005.- V.37.-Is. 1.-P. 48-56.

40.Zhang, B. Specific binding DNA-based piezoelectric quartz crystal microbalance biosensor array for the study of NF-kB / B. Zhang, J. Yao, H-H. Yan, W-L. Fu // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2010. - V. 149. -Is. 1,P. 259-263.

41.Dell'Atti, D. Development of combined DNA-based piezoelectric biosensors for the simultaneous detection and genotyping of high risk Human Papilloma Virus strains / D. Dell'Atti, M. Zavaglia, S. Tombelli, G. Bertacca, A. O. Cavazzana, G. Bevilacqua, M. Minunni, M. Maccini // Clinica Chimica Acta. - 2007. - V. 383. - Issue 1-2. - P. 140-146.

42.Duman, M. A new approach for immobilization of oligonucleotides onto piezoelectric quartz crystal for preparation of a nucleic acid sensor for following hybridization / M. Duman, R. Saber, E. Piskin // Biosensor and Bioelectronics. - 2003.- V. 18. - Issue 11. - P. 1355-1363.

43.Kaewphinit, T. Detection of non-amplified mycobacterium tuberculosis genomic dna using piezoelectric dna-based biosensors / T. Kaewphinit, S. Santiwatanakul, C. Promptmas, K. Chansiri // Sensors. - 2010. V. 10. - P. 1846-1858.

44. Rajakovicl, L. Adsorption on film-free and antibody-coated piezoelectric sensors / L. Rajakovicl, V. Ghaemmaghami, M. Thompson // Analytica Chimica acta. - 1989.-V. 217. -P. 111-121.

45.Park, I-S. Thiolated Salmonella antibody immobilization onto the gold surface of piezoelectric quartz crystal / I-S. Park, N. Kim // Biosensors and Bioelectronics. - 1998. - V. 13. - Issue 10. - P. 1091-1097.

46. Jeng, K.C.G. Sesamonin: Nature's Therapeutical Lignans / K.C.G. Jeng, H. Sesamin // Current Enzyme Inhibition. - 2005. - V. 1. - N.l. - P. 11-20.

47.Kuswandi, B. Enzyme Inhibition Based Biosensors for Environmental Monitoring / B. Kuswandi, M. Mascini // Current Enzyme Inhibition. -2005.-V. l.-P. 11-20

48.0kahata, Y. Part III: Application based on advanced QCM-Techniques, Enzyme reaction on a 27 MHZ Quartz Crystal Microbalance / Y. Okahata, T.Mori, H. Furusawa, T.Nihira // Springer Series on Chemical Sensors and Biosensors Methods. Series editor: O.S. Wolfbeis. V. editors: Claudia Steinern, Andreas Janshoff. - 2007. - P. 341-370.

49.Vaughan, R.D. Part II: Piezoelectric sensor, Piezoelectric immunosensor / R.D. Vaughan, G.G. Guilbault // Springer Series on Chemical Sensors And Biosensors Methods. Series editor: O.S. Wolfbeis. V. editors: Claudia Steinern, Andreas Janshoff. - 2007. - P. 237-280

50.Caruso, F. Quartz crystal microbalance study of DNA immobilization and hybridization for DNA sensor development / F. Caruso, E. Rodda, N. Furlong, K. Niikura, Y. Okahata // Anal Chem. - 1997. - V. 69. - Issue 11.-P. 2043-2049.

51.Sankarana, S. Olfactory receptor based piezoelectric biosensors for detection of alcohols related to food safety applications / S. Sankarana, S. Panigrahia, S. Mallik // Sensors and Actuators B. - 2011. - V. 155. - P. 8-18.

52.Mannelli, I. Quartz crystal microbalance (QCM) affinity biosensor for genetically modified organisms (GMOs) detection / I. Mannelli, M. Minunni, S. Tombelli, M. Mascini // Biosensors and Bioelectronica. - 2003. -V. 18.-P. 129-140.

53.Калмыкова, E.H. Разработка пьезокварцевых иммуносенсоров для проточно-инжекционного анализа высоко- и низкомолекулярных

соединений / Е.Н. Калмыкова, Т.Н. Ермолаева, С.А. Еремин // Вестн. Моск. Ун-та, сер. 2. Химия. - 2002. - Т. 43. - №46.

54.Song, S. Aptamer-based biosensors S. Song, L.a Wang, J. Li, C. Fan, J. Zhao // Trends in analytical chem. - 2008. - V. 27. - Issue 2. - P. 108-117.

55.Luzi, E. New trends in affinity sensing - aptamers for ligand binding / E. Luzi, M. Minunni, S. Tombelli, M. Mascini // Trends in analytical chem. -2003. - V. 22. - Issue 11. - P. 810-818.

56. Tombelli, S. New trends in nucleic acids based biosensors / S. Tombelli, M. Minunni, E. Luzi, M. Mascini // Analytical letters. - 2004. - V. 37. - N. 6. -P. 1037-1052.

57.Hianik, T. Nanostructured surfaces for development of aptamer-based biosensors / T. Hianik, G. Castillo, A. Porfireva, U. Cherkina, G. Evtugyn, A. Ebner, M. Snejdarkova, A. Poturnayova, A. Miodek, H. Korri-Youssoufi // 5th International Conference on Micro - Nanoelectronics, Nanotechnologies and MEMS, Aquis Arina Sand Hotel, Kokkini Hani, Heraklion, Crete, Greece, 7-10 October 2012. Conf.Proceedings. - 2012. -P.213.

58.Adhikari, B. Polymers in sensor applications / B. Adhikari, S. Majumdar // Progress in Polymer science. - 2004. - V.29. - Issue 7. - P. 699-766.

59.Yano, K. Development of a chemical vapor sensor using piezoelectric quartz crystals with coated unusual lipids / K. Yano, H. Yoshitake, U. T. Bornscheuer, R. D. Schmid, K. Ikebukuro, K. Yokoyama, Y. Masuda, I. Karube // Analytica Chimica Acta. - 1997. - V. 340. - Issue 1-3. - P. 41-48.

60.Chang, H.-C, Yang C.-C // Analytica Chimica Acta. - 1997. - V. 340, - P. 49.

61.Babacan, S. Evaluation of antibody immobilization methods for piezoelectric biosensor application / S. Babacan, P. Pivarnic, S. Letcher, A.G. Rand // Biosensors and Bioelectronics. - 2000. - V. 15. - Issue 11-12.-P. 615-621.

62.Ngeh-Ngwainbi, J. Piezoelectric crystal biosensors / J. Ngeh-Ngwainbi, A. A. Suleiman, G. G. Guilbault // Biosensor and Bioelectronic. - 1990. - V. 5. -Issue 1. - P. 13-26.

63.Wu, Z. An amplified mass piezoelectric immunosensor for Schistosoma japonicum / Z. Wu, J. Wu, S. Wang, G. Shen, R. Yu // Biosensors and Bioelectronics. - 2006. - V. 22. - Issue 2. P. 207-212.

64.Susmel, S. A piezoelectric immunosensor based on antibody entrapment within a non-totally rigid polymeric film / S. Susmel, R. Toniolo, A. Pizzariello, N. Dossi, G. Bontempelli // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2005. - V. 11. -P. 331-338.

65.Zougagh, A. M. Self-assembled monolayer-based piezoelectric flow immunosensor for the determination of canine immunoglobulin / A. M. Zougagh, C. Arce, A. Moreno, A. Rios, M. Valcarcel // Biosensors and Bioelectronics. - 2007. - V. 22. - Issue 12. - P. 3217-3223.

66.Karaseva, N.A. A piezoelectric immunosensor for chloramphenicol detection in food / N.A. Karaseva, T.N. Ermolaeva // Talanta. - 2012. - V. 93.-P. 44-48

67.Dergunova, E.S. Flow-Injection determination of nonilphenol in liquid media using a piezoelectric immunosensor / E.S. Dergunova, E.N. Kalmykova, S.A. Eremin, T.N. Ermolaeva // Journal of Analytical Chemistry. - 2006. - V. 61. - Issue 6. - P. 665.

68. Melihova, E.V. Using a piezoelectric flow immunosensors for determining sulfamethoxazole in environmental samples / E.V. Melihova, E.N.

no

Kalmykova, S.A. Eremin, T.N. Ermolaeva // Journal of Analytical Chemistry. - 2006. - V. 61. - Issue 7. - P. 744-750.

69.March, C. A piezoelectric immunosensor for the determination of pesticide residues and metabolites in fruit juices / C. March, J.J. Manclús, Y. Jiménez, A. Arnau, A. Montoya // Talanta. - 2009. - V. 78. - Issue 3. - P. 827-833.

70.Tsai, W.-C. Development of a piezoelectric immunosensor for the detection of alpha-fetoprotein / W.-C. Tsai, I-C. Lin // Sensors and Actuators B. -2005. - V. 106. - P. 455-460.

71.Ding, Y. A piezoelectric immunosensor for the detection of a-fetoprotein using an interface of gold/hydroxyapatite hybrid nanomaterial / Y. Ding, J. Liu, H. Wang, G. Shen, R. Yu // Biomaterials. - 2007. - V. 28. - Issue 12. -P. 2147-2154.

72.Zeng, H. Development of quartz-crystal-microbalance-based immunosensor array for clinical immunophenotyping of acute leukemias / H. Zeng, H. Wang, F. Chen, H. Xin, G. Wang, L. Xiao, K. Song, D. Wu, Q. He, G. Shen // Analytical Biochemistry. - 2006. - V. 351. - Issue 1. - P. 69-76.

73 .Kim, N. Development of indirect-competitive quartz crystal microbalance immunosensor for C-reactive protein / N. Kim, D.-K. Kim, Y.-J. Cho // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2009. - V. 143. - Issue 1. - P. 444-448

74.Zhang, B. Development of a spiral piezoelectric immunosensor based on thiol self-assembled monolayers for the detection of insulin / B. Zhang, Y. Jiang, H. Kuang, C. Yao, Q. Huang, S. Xu, D. Tang, W. Fu // Journal of Immunological Methods. - 2008. - V. 338. - P. 7-13.

75.Wen, Z. A novel liquid-phase piezoelectric immunosensor for detecting Schistosoma japonicum circulating antigen / Z. Wen, Shiping W., Z. Wu, G. Shen // Parasitology International. - 2011. - V. 60. - P. 301-306

76.Tang, A.X.J. Immunosensor for okadaic acid using quartz crystal microbalance / A.X.J. Tang, M. Pravda, G. G. Guilbault // Analytica Chimica Acta. - 2002. - V. 471. - P. 33-40.

77.Salmain, M. Piezoelectric immunosensor for direct and rapid detection of staphylococcal enterotoxin A (SEA) at the ng level / M. Salmain, M. Ghasemi, S. Boujday, J. Spadavecchia, C. Techer, F.Val, V. Le Moigne, M. Gautier, R. Briandet, C.-M. Pradier // Biosensors and Bioelectronics. - 2011. -V. 29.-Issue l.-P. 140-144.

78. Wang, H. A reusable piezo-immunosensor with amplified sensitivity for ceruloplasmin based on plasma-polymerized film / H. Wang, D. Li, Z. Wu, G. Shen, R. Yu // Talanta. - 2004. - V. 62. - P. 201-208.

79.Wong, Y.T. Immunosensor for the differentiation and detection of Salmonella species based on a quartz crystal microbalance / Y.T. Wong, S.P. Ng, M.H. Ng, S.H. Si, S.Z. Yao, Y.S. Fung // Biosensor and bioelectronics. - 2002. - V. 17. - Issue 8. - P. 676-684.

80.Park, I.-S Development of a direct-binding chloramphenicol sensor based on thiol or sulfide mediated self-assembled antibody monolayers / D.-K Kim, N. Adanyi, M. Varadi, N. Kim // Biosensors and Bioelectronics. -2004.-V. 19.-P. 667-674.

81.Bojorge, R. The evaluation and developments of immunosensors for health and environmental monitoring: problems and perspectives / R. Bojorge, A.M. Salgado, B. Valdman // Braz. journal of chemical engineering. - 2009. -V. 26.-№2.-P. 227-249.

82.Rodrigues-Mozaz, S. Biosensors for environmental application: future development trends / S. Rodrigues-Mozaz, M.-P. Marco, M.J. Lopez de Alda, D. Barcelo // Pure Appl.chem. - 2004. - V. 76. - N. 4. - P. 723-752.

83.Sakti, S.P. Disposable HSA QCM-immunosensor for practical measurement in liquid / S.P. Sakti, P. Hauptmann, B. Zimmermann, F. Buhling, S. Ansorge // Sensors and actuators B. - 2001. - V. 78. - Issue 1-3. - P. 257262.

84.Arce, L. Self-assembled monolayer-based piezoelectric flow immunosensor for the determination of canine immunoglobulin / L. Arce, M. Zougagh, C. Arce, A. Moreno, A. Rios, M. Valcarcel // Biosensors and bioelectronics. -2007.-V. 22.-P. 3217-3223.

85.Liu, Y.-C. Comparison of Different Protein Immobilization Methods on Quartz Crystal Microbalance Surface in Flow Injection Immunoassay / Y.-C. Liu, C.-M. Wang, K.-P. Hsiung // Analytical biochemistry. - 2011. - V. 299. -Is. 2.-P. 130-135.

86.Shen, G. Piezoelectric immunosensor based on gold nanoparticles capped with mixed self-assembled monolayer for detection of carcinoembryonic antigen / G. Shen, J. Lu // Thin Solid Films. - 2010. - V. 518. - Issue 17. - P. 5010-5013.

87.Deng, T. A novel immunosensor based on self-assembled chitosan/alginate multilayers for the detection of factor В / T. Deng, H. Wang, J.-S. Li, S.-Q. Hu, G.-L. Shen, R.-Q. Yu // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2004. - V. 99.-Issue l.-P. 123-129.

88.Lin, H.-C. Piezoelectric crystal immunosensor for the detection of staphylococcal enterotoxin В / H.-C. Lin, W.-C. Tsai // Biosensors and Bioelectronics. -2003.-V. 18.-P. 1479-1483.

89.Шашканова, О.Ю. Морфология и оптимизация условий получения рецепторного слоя пьезокварцевого ДНК-сенсора / О.Ю. Шашканова, Т.Н. Ермолаева // Известия вузов. Прикладная химия и биология. -2012. - Выпуск №2 (3). - С. 75-81.

90.Vedrinea, C. Strategy to design DNA-biosensors: Single-stranded probe grafting versus target-probe duplex grafting / C. Vedrinea, M. Lazergesb, H. Perrotb, C. Compered, C. Pernelle // Sensors and actuators B: Chemical. -2012. - V. 171-172. - P. 719-725.

91 .Zhang, Y. A reusable piezoelectric immunosensor using antibody-adsorbed magnetic nanocomposite / Y. Zhang, H. Wang, B. Yan, Y. Zhang, J. Li, G. Shen, R. Yu // Journal of Immunological Methods.. - 2008. - V. 332. - P. 103-111.

92.Montrel, M.M. Spectroscopic study of thin multilayer films of the complexes of nucleic acids with cationic amphiphiles and polycations : their possible use a sensor elements / M.M. Montrel, G.B. Sukhorukov, A.I. Petrov, L.I. Shabarchina, B. I. Sukhorukov // Sensors and actuators B : Chemical. - 1997. - V. 42. - Issue 3. - P. 225-231.

93.Bardea, A. Amplified microgravimetric quartz-crystal microbalance analysis of oligonucleotide complexes : a route to a tay-sachs sensor / A. Bardea, A. Dagan, I. Ben-Dov, B. Amit, I. Willne // Chemical Communication. - 1998. -V. 7.-P. 839-840.

94.Wittunng-Stafshede, P. Detection of point mutation in DNA by DNA-based quartz-crystal biosensor / P. Wittunng-Stafshede, M. Rodahl., B. Kasemo, P. Nielsen, B. Norden // Colloids and surfaces A, Physicochemical and Engineering Aspects. - 2000. - V. 174 - P. 269-273.

95.Zhou, XC Microgravimetric DNA sensor based on quartz crystal microbalance: comparison of oligonucleotide immobilization methods and the application in genetic diagnosis / Zhou XC, Huang LQ, Li SF // Biosens Bioelectron.-2001. - V. 16.-Issue 1-2.-P. 85-95.

96.F. Patolsky, A. Lichtenstein and I. Willner Electronic Transduction of DNA Sensing Processes on Surfaces: Amplification of DNA Detection by Tagged Liposomes//J. Am. Chem. Soc. - 2001.-V. 123.-P. 5194-5205.

97.Towery, RB Genomic DNA hybridizes with the same rate constant on the QCM biosensor as in homogeneous solution / RB. Towery, NC. Fawcett, P. Zhang, JA. Evans // Biosens Bioelectron. - 2001. - V. 16. - Issue 1-2. - P. 18.

98.Yamaguchi, S. Adsorption, Immobilization, and Hybridization of DNA Studied by the Use of Quartz Crystal Oscillators / S. Yamaguchi, T. Shimomura, T. Tatsuma, N. Oyama // Anal. Chem. - 1993. - V. 65. - P. 1925-1927.

99.Whitcombe, Michael J. Chapter 7. Imprinted polymers // Electropolymerization: Concepts, Materials and Applications. Edited by Serge Cosnier, Arkady Karyakin. - 2010. P.133-148.

100.Cosnier, S. Fabrication of biosensors by attachment of biological macromolecules to electropolymerized conducting films / S. Cosnier, Ch. Gondran // ANALUSIS. - 1999. - V. 27. -N. 7.

lOl.Shengjun Tian Thin Functional Conducting Polymer Films Preparation, Properties and Applications: dissertation zur Erlangung des Grades "Doktor der Naturwissenschaften'V Shengjun Tian. - China Mainz. - 2005.

102.Li, G. Development of QCM Trimethylamine Sensor Based on Water Soluble Polyaniline / G. Li, J. Zheng, X. Ma, Y. Sun, J. Fu, G. Wu // Sensors. - 2007. - V. 7. - P. 2378-2388.

103. Yan, G. Y. Polyaniline-Modified Quartz Crystal Microbalance Sensor for Detection of Formic Acid / G. Y. Yan, D. Lu, H. Zhou, H. Hou, T. Zhang, L. Wu, L. Cai // Water, Air, & Soil Pollution. - 2012. - V. 223. - Issue 3. -P. 1275-1280.

104.Ма, X. Preparation, modification, morphology tailor and application of conjugated conductive polymer in chemical sensors / X. Ma, M. Gaoa, H. Xua, G. Li // Second International Conference on Smart Materials and Nanotechnology in Engineering, edited by Jinsong Leng, Anand K. Asundi, Wolfgang Ecke, Proc. of SPIE V. 7493.

105.Cheng, Z. Capacitive detection of glucose using molecularly imprinted Polymers / Z. Cheng, E. Wang, X. Yang // Biosensors & Bioelectronics. -2001.-V. 16.-P. 179-185

106.Vergara, A. V. QCM Sensing of a Chemical Nerve Agent Analog Via Electropolymerized Molecularly Imprinted Polythiophene Films / A. V. Vergara, R. B. Pernites, S. Pascua, C. A. Binag, R. C. Advincula // Journal of polymer science part a: Polymer chemistry. - 2012. - V. 50. - P. 675685.

107.Zhang, Y. A reusable piezoelectric immunosensor using antibody-adsorbed magnetic nanocomposite / Y. Zhang, H. Wang, B. Yan., Y. Zhang, Li J., G. Shen, R. Yu // Journal of Immunological Methods. - 2008. - V. 332. - Issue 1-2.-P. 103-111.

108.Guo, X. A piezoelectric immunosensor for specific capture and enrichment of viable pathogens by quartz crystal microbalance sensor, followed by detection with antibody-functionalized gold nanoparticles / X. Guo, C.-S. Lin, S.-H. Chen, R. Ye, V. C.H. Wu // Biosensors and Bioelectronics. -2012. V. 38. - Issue 1. - P. 177-183

109.Ермолаева, Т.Н. Глава 2.2. Возможности пьезокварцевых иммуносенсоров для выявления инфекций и ранней клинической диагностики. / Т.Н. Ермолаева, Е.Н. Калмыкова // Химический анализ в медицинской диагностике (Т. 11) под ред. Г.К. Будникова; Казанский гос. Университет. - 2010. - 504. - С. 212- 242.

110.Niemeyer, L. DNA-directed immobilization: efficient, reversible, and site-selective surface binding of proteins by means of covalent DNA-streptavidin conjugates / L. Niemeyer, B. Boldt, D. Ceyhan, Blohm // Anal. Biochem. - 1999. - V. 268. - P. 54-63.

111. Shen, G. The fabrication of a piezoelectric immunosensor based on DNA-antibody conjugate layer / G. Shen, J. Lu, C. Cai // Analytical Biochemistry. -2011.-V.418.-P. 167-171.

112.Sano, T. Immuno-PCR: very sensitive antigen detection by means of specific antibody-DNA conjugate / T. Sano, C.L. Smith, C.R. Cantor // Science. - 1992. - V. 258. - P. 120-122.

113.Duman, M. A new approach for immobilization of oligonucleotides onto piezoelectric quartz crystal for preparation of a nucleic acid sensor for following hybridization / M. Duman, R. Saber, E. Piskin // Biosensors and Bioelectronics. -2003. - V. 18.-P. 1355-1363.

114.Avila, M. Molecularly imprinted polymers for selective piezoelectric sensing of small molecules / M. Avila, M. Zougagh, A. Escarpa, A. Rios // Trends in Analytical Chemistry. - 2008. - V. 27. - No. 1. - P. 54-65.

115.Vasapollo, G. Molecular Imprinted polymers: Present and Future Prospecrive / G. Vasapollo, R. Del Sole, L. Mergola, M. R. Lazzoi, A. Scardino, S. Scoranno, G. Mele // Int. Journal of Molecular Science. - 2011. - V. 12. - P. 5908-5945.

Пб.Гендриксон, О. Д. Молекулярно импринтированные полимеры и их применение в биохимическом анализе / О. Д. Гендриксон, А. В. Жердев, Б. Б. Дзантиев. // Успехи биологической химии. - 2006. - Т. 46.-С. 149-196.

117.Alexander, С. Molecular imprinting science and technology: a survey of the literature for the years up to and including 2003 / C. Alexander, H. S.

117

Andersson, L. I. Andersson, R. J. Ansell // J. Mol. Recognit. - 2006. - V. 19.-P. 106-180.

118.Kriz, D. Peer Reviewed: Molecular Imprinting: New Possibilities for Sensor Technology / D. Kriz, O. Ramstrom, K. Mosbach // Anal. Chemi. -1997. - V. 69. - Issue 11. - P. 345-349.

119.Theodoridis, G. Selective solid-phase extraction sorbent for caffeine made by molecular imprinting polymers / G. Theodoridis, P. Manesiotis // Anal. Bioanal. Chem. - 2004. - V. 378. - P. 1331-1337.

120.Dickert, F.L. Sensors based on fingerprints of neutral and ionic analytes in polymeric materials / F.L. Dickert, K. Halikias, O. Hayden, Piu L. Sikorski R. // Sensors and Actuators B: Chemical. - 2001. - V. 76. - P. 295-298.

121.Haupt, K. Molecularly imprinted polymers in analytical chemistry / Haupt K. // Analyst. - 2001. - V. 126. - P. 747-756.

122.Peng, H. Development of a new atropine sulfate bulk acoustic wave sensor based on a molecularly imprinted electrosynthesized copolymer of aniline with o-phenylenediamine / H. Peng, C. Liang, A. Zhou, Y. Zhang, Q. Xie, S. Yao // Analytica Chimica Acta. - 2000. - V. 423. - P. 221-228.

123.Farrington, K. Investigation of the nature of MIP recognition: The development and characterisation of a MIP for Ibuprofen / K. Farrington, F. Regan // Biosensors and Bioelectronics. - 2007. - V. 22. - Issue 6. - P. 1138-1146.

124. Avila, M. Molecularly imprinted polymers for selective piezoelectric sensing of small molecules / M. Avila, A. Zougagh, A. Escarpa // Trends in Analytical Chemistry. - 2008. - V. 27. No. 1. - P. 54-65.

125. Lieberzeit, P. A. Softlithography in Chemical Sensing - Analytes from Molecules to Cells / P. A. Lieberzeit, G. Glanznig, M. Jenik, S. S. Gazda-

Miarecka, F. L. Dickert, A. Leidl // Sensors. - 2005. - V. 5. - Issue 12. - P. 509-518.

126.Schirhagl, R. Separation of bacteria with imprinted polymeric films / R. Schirhagl, E.W. Hall, I. Fuereder, R. N. Zare // Analyst. - 2012. - V. 137. -P. 1495-1499.

127.Tokonami, S. Review: Micro- and nanosized molecularly imprinted polymers for high-throughput analytical applications / S. Tokonami, H. Shiigi, T. Nagaoka // Analytica Chimica Acta. - 2009. - V. 641. - Issue 1-2. -P. 7-13

128.Mujahid, A. Chemical Sensors Based on Molecularly Imprinted Sol-Gel Materials / A. Mujahid, P. A. Lieberzeit, F. L. Dickert // Materials. - 2010. -V. 3. - Issue 4. - P. 2196-2217.

129.Yan, H. Characteristic and Synthetic Approach of Molecularly Imprinted Polymer / H. Yan, K. Ho Row // Int. J . Mol. Sci. - 2006. - V. 7. - P. 155178.

130.Blanco-Lypez, MC Electrochemical sensors based on molecularly imprinted polymers / MC Blanco-Lypez, MJ Lobo-Castacyn, AJ Miranda-Ordieres, P. Tucyn-Blanco // TrAC.Trends in Analytical Chemistry. - 2004. -V. 23.-Issue 1.-P. 36-48.

131.Perez-Moral, N. Analytica Comparative study of imprinted polymer particles prepared by different polymerisation methods / N. Perez-Moral, A.G. Mayes // Chimica Acta. - 2004. - V. 504. - P. 15-21.

132.Peng, H. Development of a thickness shear mode acoustic sensor based on an electrosynthesized molecularly imprinted polymer using an underivatized amino acid as the template / H. Peng, Y. Zhang, J. Zhang, Q. Xie, L. Nie, S. Yao // Analyst. - 2001. - V. 126. - Issue 2. - P. 189-194.

133. Pernites, R. Electropolymerization molecularly imprinted polymer (E-MIP) SPR sensing of drug molecules: Pre-polymerization complexed terthiophene and carbazole electroactive monomers / R. Pernites, R. Ponnapati, M. J. Felipe, R. Advincula // Biosensors and Bioelectronics. -2011. - V. 26. - P. 2766-2771.

134.Malitesta, C. Molecularly Imprinted Electrosynthesized Polymers: New Materials for Biomimetic Sensors / C. Malitesta, I. Losito, P. G. Zambonin // Anal. Chem. - 1999. -V. 71. - P. 1366-1370.

13 5.Song, W. Dopamine sensor based on molecularly imprinted electrosynthesized polymers / W. Song, Y. Chen, J. Xu, X.-R. Yang, D.-B. Tian // J. Solid State Electrochem. - 2010. - V. 14. - P. 1909-1914

136.Feng, L. Biosensor for the determination of sorbitol based on molecularly imprinted electrosynthesized polymers / L Feng, Y Liu, Y Tan, J Hu // BiosensBioelectron. -2004. - V. 19.-Issue 11.-P. 1513-1519.

137.Peng, H. Development of a new atropine sulfate bulk acoustic wave sensor based on a molecularly imprinted electrosynthesized copolymer of aniline with o-phenylenediamine / H. Peng, C. Liang, A. Zhou, Y. Zhang, Q. Xie, S. Yao // Analytica Chimica Acta. - 2000. - V. 423. - P. 221-228.

138. Percival, C. J. Molecular imprinted polymer coated QCM for the detection of nandrolone / C. J. Percival, S. Stanley, A. Braithwaite, M. I. Newton, G. McHale // Analyst. - 2002. - V. 127. - Issue 8. - P. 1024-1026.

139.Tan, Y A study of a new TSM bio-mimetic sensor using a molecularly imprinted polymer coating and its application for the determination of nicotine in human serum and urine / Tan Y, Yin J, Liang C, Peng H, Nie L, Yao S. // Bioelectrochemistry. - 2001. - V. 53. - Issue 2. - P. 141-148.

140.Malinauskas, A. Conducting polymer-based nanostructurized materials:electrochemical aspects / A. Malinauskas, J. Malinauskien'e, A. Ramanavivcius //Nanotechnology. - 2005. - V. 16. - P. 51-62.

141.Li, G. Hydrogen Peroxide Sensor Prepared by Electropolymerization of Pyrrole Based on Screen-Printed Carbon Paste Electrodes / G. Li, Y. Wang, H. Xu // Sensors. - 2007. - V. 7. - P. 239-250.

142.Ramanavicienea, A. Molecularly imprinted polypyrrole-based synthetic receptor for direct detection of bovine leukemia virus glycoproteins / A. Ramanavicienea, A. Ramanaviciusa // Biosensors and Bioelectronics. -2004. - Issue 20. - P. 1076-1082.

143,Owino, J. H. O. Modelling of the impedimetric responses of an aflatoxin B1 immunosensor prepared on an electrosynthetic polyaniline platform / J. H. O. Owino, A. Ignaszak, A. Al-Ahmed, P. G. L. Baker, H. Alemu, J. C. Ngila, E. I. Iwuoha // Anal Bioanal Chem. - 2007. - V. 388. - P. 10691074.

144.Guan, G. Imprinting of Molecular Recognition Sites on Nanostructures and Its Applications in Chemosensors / G. Guan, B. Liu, Z. Wang, Z. Zhang // Sensors. - 2008. - V. 8. - P. 8291-8320.

145.Keyhanpour, A. Glucose Oxidase Modified Electrodes of Polyaniline and Poly (aniline-co- 2-anilinoethanol) as a Biosensor: A Comparative Study / A. Keyhanpour, S. Mohammad, S. Mohaghegh, A. Jamshidi // J Biosens Bioelectron. - 2012. P. 3.

146. Song, W. Dopamine sensor based on molecularly imprinted electrosynthesized polymers / W. Song, Y. Chen, J. Xu, X.-R. Yang, D.-B. Tian // J Solid State Electrochem. - 2010. - Issue 14. - P. 1909-1914.

147.Li, G. Development of QCM Trimethylamine Sensor Based on Water Soluble Polyaniline / G. Li, J. Zheng, X. Ma, Y. Sun, J. Fu, G. Wu // Sensors. - 2007. - V. 7. - P. 2378-2388.

148.Malitesta, C. Molecularly Imprinted Electrosynthesized Polymers: New Materials for Biomimetic Sensors / C. Malitesta, I. Losito, P. G. Zambonin // Anal. Chem. - 1999. -V. 71. - P. 1366-1370.

149.Cheng, Z. Capacitive detection of glucose using molecularly imprinted polymers / Z. Cheng, E. Wang, X. Yang // Biosensors & Bioelectronics. -2001.-V. 16.-P. 179-185.

150.Guan, G. Imprinting of Molecular Recognition Sites on Nanostructures and Its Applications in Chemosensors / G. Guan, B. Liu, Z. Wang, Z. Zhang // Sensors. - 2008. - V. 8. - P. 8291-8320.

151.Sergeyeva, T.A. Molecularly-imprinted polymers as synthetic mimics of bioreceptors. 2. Applications in modern biotechnology / T.A. Sergeyeva // Biopolymers and cell. - 2009. - V. 25. - N 6.

152.Zhoua, W.-H. A quartz crystal microbalance sensor based on mussel-inspired molecularly imprinted polymer / W.-H. Zhoua, S.-F. Tanga, Q.-H. Yao, F.-R. Chen, H.-H. Yang, X.-R. Wang // Biosensors and Bioelectronics. - 2010.-V. 26.-P. 585-589

153.Arenas, Leveriza F. Enantioselective piezoelectric quartz crystal sensor for d-methamphetamine based on a molecularly imprinted polymer / Leveriza F. Arenas, Benilda S. Ebarvia, Fortunato B. Sevilla // III Anal Bioanal Chem. -2010.-V. 397.-P. 3155-3158.

154.Latif, U. Duel and tetraelectrode QCMs using imprinted polymers as receptors for ions and neutral analytes / U. Latif, A. Mujahid, A. Afzal, R. Sikorski, PA Lieberzeit, FL. Dickert // Anal BioanalChem.- 2011. - V. 400. -P. 2507-2515.

155Jenik, M. Pollen-imprinted polyurethanes for QCM allergen sensors / M. Jenik, A. Seifner, P. Lieberzeit, F. L. Dickert // Anal Bioanal Chem. - 2009. -V. 394.-P. 523-528.

156.Schirhagl, R. Natural and Biomimetic Materials for the Detection of Insulin / R. Schirhagl, U. Latif, D.r Podlipna, H. Blumenstock, F. L. Dickert // Anal. Chem. - 2012. - V. 84. - P. 3908-3913.

157.Apodaca, D. C. Electropolymerized Molecularly Imprinted Polymer Films of a Bis-Terthiophene Dendron: Folic Acid Quartz Crystal Microbalance Sensing / D. C. Apodaca, R.B. Pernites, R. R. Ponnapati, F.R. Del Mundo, R. C. Advincula // ACS Appl. Mater. Interfaces

158.Madhuri, R. Biomimetic piezoelectric quartz sensor for folic acid based on a molecular imprinting technology / R. Madhuri, M. Prasad Tiwari, D. Kumar, A. Mukharji, B. Bali Prasad // Adv. Mat. Lett. - 2011. - V. 2. - Issue 4.-P. 264-267.

159.Gao, N. Development of molecularly imprinted polymer films used for detection of profenofos based on a quartz crystal microbalance sensor / N. Gao, J. Dong, M. Liu, B. Ning, C. Cheng, C. Guo, C. Zhou, Y. Peng, J. Bai, Z. Gao // Analyst. - 2012. - V. 137. - P. 1252.

160.Vergara, A. V. QCM Sensing of a Chemical Nerve Agent Analog Via Electropolymerized Molecularly Imprinted Polythiophene Films / A. V. Vergara, R. B. Pernites, S. Pascua, C. A. Binag, R. C. Advincula // Journal of polymer science part a: polymer chemistry. - 2012. - V. 50. - P. 675685.

161.Lee, M.-H. Sensing of Digestive Proteins in Saliva with a Molecularly Imprinted Poly(ethylene-co-vinyl alcohol) Thin Film Coated Quartz Crystal Microbalance Sensor / M.-H. Lee, J. L. Thomas, H.-Y. Tseng, W.-C. Lin,

B.-D. Liu, H.-Y. Lin // ACS Appl. Mater. Interfaces. - 2011. - V. 3. - P. 3064-3071.

162.Reimhulta, K. Characterization of QCM sensor surfaces coated with molecularly imprinted nanoparticles / K. Reimhulta, K. Yoshimatsub, K. Risvedenb, S. Chena, L. Yeb, A. Krozera // Biosensors and Bioelectronics. -2008. - V. 23. - P. 1908-1914.

163.Alexander, C. Molecular imprinting science and technology: a survey of the literature for the years up to and including 2003 / C. Alexander, H. S. Andersson, L. I. Andersson, R. J. Ansell, N. Kirsch, I. A. Nicholls, J. O'Mahony, M. J. Whitcombe // J. Mol. Recognit. - 2006. - V. 19. - P. 106180.

164.Apodaca, D. C. Electropolymerized Molecularly Imprinted Polymer Films of a Bis-Terthiophene Dendron: Folic Acid Quartz Crystal Microbalance Sensing / D. C. Apodaca, R. B. Pernites, R. R. Ponnapati, F. R. Del Mundo, R. C. Advincula // ACS Applied Materials & Interfaces. - 2010. - V. 3. -Issue 2.-P. 191-203.

165.Piletsky, S.A. Imprinted Polymers and their Application in Optical Sensors / S.A. Piletsky, A.P.F. Turner // Optical biosensors: today and tomorrow / edited by Frances S. Ligler and Chris Rowe Taitt.- 2008. - P. 543.

166.Zhang, J.-h. Selective solid-phase extraction of bisphenol A using molecularly imprinted polymers and its application to biological and environmental samples / J.-h. Zhang, M. Jiang, L. Zou, D. Shi, S. Mei, Y. Zhu, Y. Shi, K. Dai, B. Lu // Anal BioanalChem. - 2006. - P. 780-786.

167.Kaabi, F. B. H. Different Approaches to Synthesizing Molecularly Imprinted Polymers for Solid-Phase Extraction / F. B. H. Kaabi, V. Pichon. // LCGC North America. - 2007. - P. 536-545.

168.Guyot, A. In Synthesis and separations using functional polymers / A. Guyot, D.C. Sherington, P. Hodg // John Wiley and Sons: London, UK. -1988.-P. 265-298

169.Munger, M. In Polymerization processes / M. Munger, E. Tromsdorf, C.E. Schildkecht, I. Skeist // Wiley Interscience, New York, USA. - 1977. - P. 540-560.

170.Poma, A. Advances in the manufacture of MIP nanoparticles / A. Poma, A. P.F. Turner, S.A. Piletsk// Cranfield Health, Cranfield University, Cranfield. -2010.-P. 629-637.

171.Jing, T. Preparation of high selective molecularly imprinted polymers for tetracycline by precipitation polymerization / T. Jing, X. D. Gao, P. Wang, Y. Wang, Y. F. Lin, X. C. Zong, Y. K. Zhou, S. R. Mei // Science Direct. Chinese chemical letters. - 2007. - V. 18. - P. 1535-1538.

172.Haginaka, J. Monodispersed, molecularly imprinted polymers as affinity-based chromatography media / J. Haginaka // Journal of Chromatography B. -2008. - V. 866.-P. 3-13.

173.Vaihinger, D. Molecularly imprinted polymer nanospheres as synthetic affinity receptors obtained by miniemulsion polymerisation / D. Vaihinger, K. Landfester, I. Kräuter, H. Brunner, G. E. M. Tovar // Macromolecular Chemistry and Physics. - 2002. - V. 203. - Issue 13. - P. 1965-1973.

174.Haginaka, J. Uniform-sized molecularly imprinted polymer material for (S)-propranolol / J Haginaka, Y.Sakai // J.Pharm. Biomed.Anal. - 2000. - V. 22. - P. 899-907.

175.Pérez, N. Molecularly imprinted nanoparticles prepared by core-shell emulsion polymerization / N. Pérez, M. J. Whitcombe // Journal of Applied Polymer Science. - 2000. - V. 77. - Issue 8. - P. 1851-1859.

176.Evgeny, N. Surface imprinting of cholesterol on submicrometer core-shell emulsion particles / N. Evgeny, P. N Vulfson, MJ Whitcombe, EN Vulfson.// Macromolecules. - 2001. - V. 34. - P. 830-836.

177.Pérez-Moral, N. Non-Covalent Imprinting in the Shell of Core-Shell Nanoparticles / N. Pérez-Moral, A.G. Mayes // Langmuir. - 2004. V. 20. -P. 3775 - 3779.

178. Lai, J.-P. Molecularly imprinted microspheres and nanospheres for di(2-ethylhexyl)phthalate prepared by precipitation polymerization / J.-P. Lai, M.-L. Yang, R. Niessner, D. Knopp // Analytical and Bioanalytical Chemistry. - 2007. - V. 389. - Issue 2. - P. 405-412.

179.Yoshimatsu, K. Uniform molecularly imprinted microspheres and nanoparticles prepared by precipitation polymerization: the control of particle size suitable for different analytical applications / K. Yoshimatsu, K. Reimhult, A. Krozer, K. Mosbach, K. Sode, L. Ye //Anal. Chim. Acta. -2007.-V. 584.-P. 112-121.

180.LÍ, P. Morphologies and binding characteristics of molecularly imprinted polymers prepared by precipitation polymerization / P. Li, F. Rong, C. Yuan // Polymer International. - 2003. - V. 52. - Issue 12. - P. 1799-1806.

181.Lee, M.-H. Sensing of Digestive Proteins in Saliva with a Molecularly Imprinted Poly(ethylene-co-vinyl alcohol) Thin Film Coated Quartz Crystal Microbalance Sensor / M.-H. Lee, J. L. Thomas, H.-Y. Tseng, W.-C. Lin, B.-D. Liu, H.-Y. Lin // ACS Appl. Mater. Interfaces. - 2011. - V. 3. - P. 3064-3071.

182.Codex Alimentarius, V.3, Rome, 1996; WHO Technical Report Series N 799, 1990.

183.СанПиН 2.3.2.1078-01. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы "Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов

184.S0rensen, L. К. Determination of cephalosporins in raw bovine milk by high-performance liquid chromatography / L. K. S0rensen, L. K. Snor // Journal of Chromatography A. - 2000. - V. 882. - P. 145-151.

185.EUMRPLs 2003/181/EC dated 3/13/2003

186.Технический регламент Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" от 9 декабря 2011 года.

187.Medina, М. В. A biosensor method for detection of staphylococcal enterotoxin A in raw whole egg / M. B. Medina // Jiornal of rapid methods and automation in microbiology. - 2006. - V. 14. - P. 119-132.

188.Егоров A.M., Теория и практика иммуноферментного анализа/ A.M. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантиев. - М., Высш. шк. - 1991. - с. 438.

189.Мелихова, Е.В. Применение проточного пьезокварцевого иммуносенсора для определения сульфаметоксазола в объектах окружающей среды / Е.В.Мелихова, Е.Н. Калмыкова, С.А.Еремин, Т.Н. Ермолаева // Журнал аналитической химии. - 2006. - Т61. N.7. - С. 687693.

190.Sauerbrey, G. The use of quartz oscillators for weighing thin layers and for microweighing / G. Sauerbrey // Zeitschrift fuer Physik - 1959. - P. 155-206

191.Нартова, Ю.В. Пьезокварцевый иммуносенсор для определения ацетохлора в водных средах / Ю.В. Нартова, С.А. Еремин, Т.Н. Ермолаева // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2006. -Т. 6. - N 5. - С. 764-772.

192.Karaseva, N.A. A piezoelectric immunosensor for chloramphenicol detection / N.A. Karaseva, T.N. Ermolaeva // Talanta. - V.93. - 2012. - P. 44-48.

193 .Karaseva N.A. Piezoelectric immunosensors for toxins' detection in foodstuffs / N.A. Karaseva, T.N. Ermolaeva // Key Engineering Materials. -2013.-Vol. 543. - P. 515-518.

194. Овсянникова, E.B. Автокаталитический характер анодной полимеризации анилина в водно-органических кислых растворах / Е.В. Овсянникова // Электрохимия. - 2004. - Т. 40. - № 10. - С. 1265-1268.

195. Халхали Р.А. Электрохимический синтез и характеристики проводящих электроактивных полимеров на основе полипиррола / Р.А. Халхали // Электрохимия. 2005. Т. 41. № 9. С. 1071-1078.

196. Joseph, К. Н. Ma Determination of equilibrium constants and binding capacities using a modified scatchard method in drug-protein binding studies / К. H. Ma Joseph, H. W. Jun, L. A. Luzzi // Journal of Pharmaceutical Sciences. - 1973. - V. 62.- Issue 12.- P. 2038-2040.

197.J., A. Marine biotoxins in shellfish - okadaic acid and analogues / A. J., G. A. Audunsson, B. D. // The EFSA Journal. - 2008. - V.589. - P. 1-62.

198.Технический регламент Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" от 9 декабря 2011 года.