Патогенетическое и клиническое значение плазмоцитоидных дендритных клеток при вирусном гепатите С у детей и взрослых тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.09, кандидат медицинских наук Хохлова, Ольга Николаевна

• Хохлова, Ольга Николаевна
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Хохлова, Ольга Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1 ПЛАЗМОЦИТОИДНЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ И

ИХ РОЛЬ В ОРГАНИЗМЕ ЧЕЛОВЕКА

ГЛАВА 2 ПЛАЗМОЦИТОИДНЫЕ ДЕНДРИТНЫЕ КЛЕТКИ В

ПАТОГЕНЕЗЕ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С

ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ

3.1. Клиническая характеристика обследованных

3.1.1. Состав всех обследованных

3.1.2. Клиническая характеристика больных

3.2. Методы обследования 50 3.2.1 Базовые методы обследования

3.2.2.Методы тестирования маркёров вируса гепатита С

3.2.3. Дополнительные методы обследования

3.2.4. Специальные методы исследования 51 3.2.5 Дополнительные специальные методы

3.2.6. Дизайн исследования

3.2.7. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 4. КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПДК В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА С

4.1. Количественные показатели ПДК у здоровых детей и взрослых

4.1.1 Количественные показатели ПДК у больных ХГС и здоровых

4.2.Связь количественных показателей ПДК с клинико-лабораторными параметрами у детей, больных ХГС

4.3.Связь количественных показателей ПДК с клинико-лабораторными параметрами у взрослых, больных ХГС

4.4.Сравнительная количественная характеристика ПДК у детей и взрослых, больных ХГС

ГЛАВА 5. ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ПДК ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ВИРУСНОМ ГЕПАТИТЕ С

5.1. Функциональное состояние ПДК у здоровых детей и взрослых

5.2 Функциональное состояние ПДК у больных ХГС детей и взрослых

5.2.1 Связь функционального состояния ПДК с клинико-лабораторными параметрами у детей, больных ХГС

5.3.Связь функционального состояния ПДК с клинико-лабораторными параметрами у взрослых, больных ХГС

5.4.Сравнительный анализ функционального состояния ПДК у детей и взрослых, больных ХГС

ГЛАВА 6. СООТНОШЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ПДК И ПРОТИВОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ (ПВТ) У БОЛЬНЫХ ХГС

6.1.Соотношение количественных показателей ПДК и ПВТ у детей

6.2. Соотношение количественных показателей ПДК и ПВТ у взрослых

6.3. Сравнительная характеристика количественных показателей ПДК и ПВТ у детей и взрослых, больных ХГС

6.4.Соотношение функциональных показателей ПДК и ПВТ у детей, больных ХГС

6.5. Соотношение функциональных показателей ПДК и ПВТ у взрослых

6.6. Сравнительная характеристика функциональных показателей ПДК и ПВТ у детей и взрослых

6.7. Соотношение функциональных показателей ПДК и эффективности ПВТ у детей

6.8. Соотношение функциональных показателей ПДК и эффективности ПВТ у взрослых

6.9 Соотношение показателей ПДК с ПВТ у пациентов с отсутствием вирусной репликации (с авиремией). б.Ю.Новый тест для прогнозирования ответа на противовирусную терапию (ПВТ) при хроническом гепатите С (ХГС)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Патогенетическое и клиническое значение плазмоцитоидных дендритных клеток при вирусном гепатите С у детей и взрослых»

Вирусные гепатиты представляют серьёзную проблему здравоохранения, подлинную угрозу для человечества, ввиду повсеместного распространения гепатитов В, С, Д, наличия хронического носительст-ва, а также тяжёлых и фульминантных форм и исхода в цирроз печени с угрозой малигнизации и развития гепатакорциномы [Покровский

B.И., 1996-2004г.; Соринсон С.Н., 1996-1998г.; Михайлов М.И. и др., 1996-2004г.].

В настоящее время особенно тревожна ситуация с гепатитом С: в мире насчитывается 180 миллионов (по некоторым данным до 500 миллионов) инфицированных людей, то есть от 3% до 8% всемирной популяции, и ежегодно выявляются новые 3-4 миллиона случаев. В связи с этим, изучение данной проблемы приобретает с каждым годом всё большую актуальность.

Наряду с огромными успехами, связанными с открытием возбудителя, внедрением молекулярно-биологических методов диагностики и возможностей противовирусной терапии [Михайлов М.И., 1990г.; Михайлов М.И., Шахгильдян И.В., Онищенко Г.Г., 2003г.; Мукомолов

C.JI. и др., 1994г.], многое в проблеме вирусных гепатитов остаётся не изученным.

Для решения вопросов течения, прогрессирования и исходов вирусных гепатитов первостепенное значение имеет знание глубинных механизмов патогенеза этих заболеваний, в том числе особенностей иммунного ответа.

Исход инфицирования зависит не только от свойств вируса, но и в высокой степени от адекватного иммунного ответа организма. Начальной реакцией организма на внедрение вируса является экспрессия антивирусных цитокинов, таких как ИНФ I типа, которые обеспечивают антивирусный эффект и играют доминирующую роль в активации клеток естественного иммунитета (NK-клеток и макрофагов) и адаптивного иммунного ответа (СД8+ Т-лимфоцитов). Взаимоотношения отдельных звеньев иммунитета при острых инфекциях отличаются от таковых при хронических и латентных вирусных инфекциях, в том числе, одной из основных причин хронизации признают дефект клеточного иммунитета, в частности, нарушение антигенпрезентирующеш ответа, направленного на элиминацию вируса. Роль иммунных реакций организма в течении и исходах вирусных гепатитов давно и интенсивно изучается.

Одним из новейших и многообещающих направлений в понимании механизмов иммунного ответа при вирусных гепатитах является изучение недавно открытого уникального типа иммунных клеток-плазмоцитоидных дендритных клеток (ПДК), роль и значение которых, как возможных ключевых факторов патогенеза вирусных гепатитов, начали изучать лишь в самое последнее время.

ПДК являются отдельным видом клеток крови, близким по развитию и генетическому профилю общим дендритным клеткам, впервые описанным R.M. Steinman и Z.A. Cohn в 1973 году [1]. ПДК были впервые открыты Celia М., Jarrosay D., Fecchetti F. et al [7]; Siegal F.P., Ka-dowaki N., Shodell M. et al [16] в 1999году. Они имеют костномозговое происхождение и развиваются из стволовой клетки через ряд предшественников [Merad М., Manz M.G. 2009год], в этом процессе принимает участие ген, названный Е2-2 (открыт в 2008 году B.Reizis et al) [13], который регулирует программу развития и дифференцировки ПДК. У здоровых людей ПДК обнаружены в крови и лимфоидных органах и в минимальных количествах присутствуют в других органах и тканях. Единственным органом, где они представительствуют и куда эффективно мигрируют в зрелом состоянии, является печень.

При активации, во время воспалительного ответа, ПДК мигрируют как в зону Т-клеток лимфоидных органов, так и в воспалённую ткань паренхимы [Celia М., Jarrossay F. et al 1999; Lai W.K., Curbishley S.M. et al 2007год]. Путь их миграции гематогенный, предположительно через высокие эндотелиальные венулы [Matsutani Т., Tanaka Т. et al 2007год], но в целом, механизм миграции в ткани остаётся недостаточно изучен. Эти клетки, генетически родственные дендритным клеткам, обладают морфологией плазматических клеток, экспрессируют специфические маркёры, такие как BDCA-2, ILT7 и высокий уровень CD 123. Эндосомы человеческих ПДК содержат То11-подобные специфические рецепторы: TLR7 и TLR9 [Kadowaki N., Antonenko S., Lau Y.J. 2000год], распознающие вирусные нуклеиновые кислоты - одноцепо-чечную РНК и неметилированную CpG, содержащую ДНК, подготавливая их к ответу на инфицирование патогенном.

Плазмоцитоидные дендритные клетки (ПДК), являются основными естественными продуцентами интерферонов (ИНФ) I типа и способны продуцировать в 100-1000 раз больше интерферона - а, чем другие типы клеток, в ответ на вирусемию, что ставит их на первое место, как принципиально важных участников антивирусного иммунного ответа [Celia М., Jarrosay D., Fecchetti F. et al 1999 год, Kadowaki N., Shodell M. et al 1999 год]. Первый тип интерферона напрямую активирует натуральные киллеры, усиливая их цитотоксическую активность [Lee С.К., Rao D. Т., Gertner R. 2000 год] и стимулирует продукцию интерлейкина-15 [Nguyen К.В., Salazar-Mather Т.Р. et al 2002 год], который играет роль в их пролиферации. Кроме продуцирования интерферона, ПДК могут напрямую взаимодействовать почти со всеми клетками иммунного типа, в том числе с антигенпрезентирующими дендритными клетками, обеспечивая отчётливый механизм их активации [Yoneyama Н., Matsuno К., Matsuno N., et al 2005год], а также самостоятельно выступать в этом качестве. Таким образом, характеризуясь сочетанием уникально быстрой и массивной

- юпродукции интерферона I типа с активацией презентации антигена, ПДК обладают одновременно свойствами как лимфоцитов, так и классических дендритных клеток, что позволяет им быть ключевым звеном между врождённым и приобретённым иммунитетом [B.Reizis et al 2010год].

Клинические работы по изучению ПДК появились в самое последнее время и преимущественно посвящены проблемам онкологии и онкогематологии [Banchereau J., Palucka A.K. 2005 год; Vicari А. 2002 год; Pacrensny S. 2004год; De Vries 2003 год]. Немногочисленные работы по изучению роли ПДК при вирусных гепатитах единичны и касаются взрослых пациентов [Ito Т., Kanzler Н., Liu Y.J. 2006 год; Ulsen-heimer А., Gerlach J.T., Jung M.C. et al 2005год;КаЩо Т., Inoue M., Miya-take H. 2004 год]. У детей подобные исследования отсутствуют.

Всё это определяет актуальность и перспективность избранной нами темы, и является основанием для проведения настоящей работы. Цель исследования:

Установление патогенетического и клинического значения плазмоци-тоидных дендритных клеток (ПДК) при хроническом гепатите С у детей и взрослых.

Задачи исследования

1. Определить нормальные количественные показатели и функциональное состояние (выработка ими интерферона) ПДК у детей и взрослых пациентов.

2. Установить количество и функциональное состояние ПДК у детей с вирусным гепатитом С, в зависимости от течения и фазы инфекционного процесса, характера и стадии противовирусного лечения.

3. Исследовать те же параметры ПДК у взрослых пациентов, больных вирусным гепатитом С.

4. Выявить особенности и дать сравнительную характеристику направленности изменений количества и функционального состояния ПДК у взрослых и детей, больных вирусным гепатитом С.

5. На основании полученных результатов сформулировать положения о роли ПДК в патогенезе вирусного гепатита С, их влиянии на течение инфекционного процесса, а также на эффективность противовирусной терапии (ПВТ).

Научная новизна

1.Впервые установлены нормальные количественные и функциональные показатели (интенсивность интерфероногенеза (ИФН-генез)) ПДК у здоровых детей и их соотношение с показателями у здоровых взрослых лиц.

2.0бнаружен феномен наличия в крови здоровых детей и взрослых ингибиторов ИФН - генеза в ПДК, в связи с чем ПДК здоровых лиц находятся в состоянии «покоя» (выработка ИФН в них не определяется).

3.Выявлено, что количественные и функциональные показатели ПДК у детей и взрослых, страдающих ХГС, достоверно отличаются от таковых у здоровых лиц, а также, что параметры ПДК в детском возрасте существенно отличаются от показателей у взрослых, больных ХГС.

4.Впервые продемонстрировано важное участие ПДК в патогенезе ХГС у взрослых и детей в виде тесной взаимосвязи количества и функции ПДК с вирусной нагрузкой, степенью цитолиза и фиброза, т.е. с основными факторами, определяющими течение и исход ХГС:

- Количество ПДК снижено у всех больных ХГС.

- Количество клеток обратнопропорционально уровню цитолиза (снижается при повышении активности трансаминаз).

- Степень снижения максимальна при продвинутом фиброзе (4 балла).

- Высокой виремии соответствует низкий интерфероногенез в ПДК.

5. Впервые установлено, что противовирусная терапия (ПВТ) существенно влияет на показатели ПДК: резко стимулирует ИФН - генез в ПДК в процессе терапии. Показано, что ответ на ПВТ закономерно связан с изменениями количества и функции ПДК, а степень подъёма выработки ИФН в ПДК может служить надёжным прогностическим тестом ответа на противовирусную терапию (заявка на патент № 2012157606 от 27.12.2012)

6. Продемонстрирован особый механизм воздействия ПВТ на характер иммунного ответа при ХГС: без неё состояние авиремии достигается максимальным напряжением ИФН - генеза в ПДК. Напротив, после ПВТ при достижении авиремии происходит нормализация функции ПДК.

7.На основании полученных данных сформулированы новые научные положения о роли ПДК при ХГС, их влиянии на течение заболевания и эффективность противовирусной терапии.

Практическая значимость

1 .Установление нормальных параметров количества и функционального состояния ПДК у детей делает возможным использование этих методов в педиатрии.

2.Полученные данные могут служить дополнительными критериями оценки течения и прогнозирования исходов ХГС у детей и взрослых.

3.На основании результатов исследования предложен прогностический тест, который может служить критерием оценки эффективности проводимой терапии.

Суть нового прогностического теста заключается в том, что степень повышения уровня ИФН - генеза в ПДК на 12ой неделе терапии является показателем её эффективности: повышение выработки ИФН в ПДК в 20 раз и более по сравнению с исходными значениями (определяемыми перед началом противовирусной терапии) и в 2,6x102 раз у взрослых и 1,2x102 у детей по сравнению с нормальными показателями ИФН-генеза у здоровых (если отсутствуют показатели ИФН-генеза перед началом ПВТ), позволяет, с достоверностью 96%, предсказать стойкий вирологи-ческий ответ (заявка на патент: per. № 2012157606 от 27.12.2012).

Своевременная (в первые 12недель) оценка ответа на противовирусную терапию является важнейшей составляющей современной персонализированной терапии ХГС.

Объем исследования

Обследован 161 человек: 58 детей и 75 взрослых, больных хроническим гепатитом С в открытом контролируемом рандомизированном исследовании, а также 16 здоровых детей в возрасте 4-16 лет и 12 взрослых для установления количественных и функциональных показателей ПДК.

Апробация работы

Результаты исследований были доложены на IV и V Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (март 2012г и 2013г, Москва); XVII и XVIII Ежегодном Российском Конгрессе «Ге-патология сегодня» (март 2012г и 2013г); на 18-й Российской Гастроэнтерологической неделе с международным участием (октябрь 2012г.); на Всероссийской конференции «Хочу всё знать по вирусным гепатитам» (декабрь 2012г.) Работа принимала участие и заняла I место в Конкурсе молодых ученых на V Ежегодном Всероссийском Конгрессе по инфекционным болезням (март 2013г.) и XVIII Ежегодном Российском Конгрессе «Гепатология сегодня» (март 2013г). Материалы работы приняты к публикации и постерному докладу на конференции «GASTRO 2013 APDW/WCOG Shanghai» (сентябрь 2013г.), а также к устному докладу на конференции «United European Gastroenterology Week Berlin» (октябрь 2013г.). United European Gastroenterology присудило автору работы звание «National Scholar Award 2013».

Внедрение результатов

Результаты работы внедрены в практику работы клинико-диагностического центра ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнад-зора и Детского Гастроэнтерологического Центра Департамента здравоохранения г. Москвы.

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 3 научные работы в изданиях, рекомендуемых ВАК РФ и 2 работы в зарубежных журналах.

Структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты исследований и их обсуждение, выводы, список цитированной литературы, включающий 130 источников, приложение. Работа иллюстрирована 27 рисунками и 49 таблицами; приведены 4 выписки из историй болезни.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Инфекционные болезни», Хохлова, Ольга Николаевна

выводы

1. Количественные показатели (абсолютное и процентное содержание) ПДК в крови здоровых лиц достоверно выше в детском возрасте, чем у взрослых.

У больных ХГС количественные показатели ПДК закономерно снижены по сравнению со здоровыми лицами, но степень снижения у детей достоверно меньшая.

2. Количественные показатели ПДК как у детей, так и у взрослых с ХГС тесно связаны с наличием и уровнем вирусной нагрузки, с генотипом вируса и возрастом пациентов: наиболее низкие показатели при высокой виремии, у больных с 1 генотипом вируса, в пубертатном периоде и у лиц старше 40 лет.

У взрослых пациентов количество ПДК также достоверно снижается в связи с нарастанием цитолиза и фиброза.

3. Функциональное состояние ПДК (выработка ИФН) у здоровых лиц (как детей, так и взрослых) блокирована находящимися в плазме ингибиторами, в связи с чем в норме ИФН в ПДК не определяется.

4. У больных ХГС как взрослых, так и детей, выработка ИФН в ПДК достоверно выше нормальных значений. Степень повышения закономерно связана с уровнем вирусной репликации, цитолиза, фиброза и генотипа вируса. Интенсивность ИФН - генеза в ПДК более выражена у взрослых пациентов.

5. Противовирусная терапия существенно влияет на состояние ПДК. Имеет место:

- закономерное снижение количества ПДК в крови, более выраженное у взрослых пациентов

- стимуляция ИФН - генеза в ПДК

6. Степень стимуляции ИФН - образования в ПДК достоверно связана с ответом на ПВТ. Уровень подъема ИФН - генеза в ПДК на 12ой неделе лечения может служить надёжным прогностическим тестом

-143эффективности проводимой ПВТ: чем выше достигнутый уровень выработки ИФН в ответ на ПВТ, тем вероятнее благоприятный ответ.

7. Состояние ПДК у детей, как здоровых, так и больных ХГС, по многим показателям существенно отличается от таковых у взрослых. Главной особенностью ПДК у детей является значительно более высокое содержание этих клеток (как абсолютное, так и процентное по отношению к общему числу лимфоцитов) в норме, при ХГС без лечения и в ответ на ИФН-терапию, что возможно лежит в основе более благоприятного течения и результатов ПВТ у детей.

8. Обнаруженная закономерная взаимосвязь количества и функции ПДК с вирусной нагрузкой, степенью цитолиза и фиброза, а также ответом на ПВТ при ХГС у взрослых и детей демонстрирует важную роль ПДК в патогенезе этой инфекции, её течении, исходах и результатах терапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В дополнение к традиционным клинико-лабораторным методам показатель выработки ИФН в ПДК в периферической крови предлагается как новый тест для прогнозирования эффективности ПВТ у больных ХГС (детей и взрослых) на 12 неделе её проведения.

Способ, предлагаемый нами, осуществляется следующим образом: у пациента, страдающего ХГС, проводят забор венозной крови до назначения противовирусной терапии и на 12ой неделе её проведения. Забор венозной крови осуществляют стандартным способом в пробирку 10 мл (или 5 мл) с консервантом ЭДТА. Венозную кровь хранят не более 6 часов. Исследование осуществляют сразу после забора крови, учитывая время, необходимое для клеточной стабилизации (не менее 40мин.). Далее в ламинаре, в стерильных условиях, отбирают 100 мкл крови, к которым добавляют 200 мкл раствора А (для приготовления раствора А необходим стимулятор клеточного роста ODN2216 - синтетический олигонуклеотид, иммуностимулирующий сугубо TLR9 рецепторы) и 200 мкл раствора В (для приготовления раствора В необходим IL3, который стимулирует дифференцировку муль-типотентных гемопоэтических стволовых клеток). Затем пробу помещают в С02 инкубатор на 24 часа, после чего кровь центрифугируют и отбирают супернатант культуры клеток, который замораживают при -80°С до последующей стадии обработки пробы. На следующем этапе пробы размораживаются и проходят стандартную постановку методом ИФА «ELISA», который предназначен для определения уровня выработки ИФН.

Полученные результаты оцениваются врачом на основании предложенного нами прогностического теста. Степень повышения уровня ИФН в ПДК на 12ой неделе терапии в 20 раз и более у взрослых и детей по сравнению с исходными данными до начала ПВТ) или в 2,6x102 раз у взрослых и 1,2x102 у детей по сравнению с нормальными показателями ИФН-генеза у здоровых (если отсутствуют показатели ИФН-генеза перед началом ПВТ), прогнозируют эффективность проводимого лечения с вероятностью 96,9%, что может служить основой построения персонализированного подхода к противовирусной терапии ХГС у взрослых и детей.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Хохлова, Ольга Николаевна, 2013 год

1. Steinman RM, Cohn ZA. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution /Steinman RM, Cohn ZA //J Exp Med. 1973. - Vol.137. - № 5. - C.l 142-1162.

2. Ronnblom L, Ramstedt U, Aim GV et al. Properties of human natural interferon-producing cells stimulated by tumor cell lines.// Eur J Immunol 1983. - Vol.13. -№6. -C.471-6.

3. Fitzgerald-Bocarsly P. Human natural interferon-alpha producing cells. //Pharmacol Ther. 1993. - Vol.60 - №1. - C.39-62.

4. BjOrck P, Flores-Romo L, Liu YJ. Human interdigitating dendritic cells directly stimulate CD40-activated naive B cells. // Eur J Immunol. 1997 - Vol.27. - №5. -C. 1266-74.

5. Rissoan MC, Soumelis V, Kadowaki N et al. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation.// Science. 1999. - Vol.192. - C.l 183-1186.

6. Cella M, Jarrossay D, Facchetti F et al. Plasmacytoid monocytes migrate to inflamed lymph nodes and produce large amounts of type I interferon. // Nat Med. -1999. Vol.5. - №8 - C.919-923.

7. Banchereau J, Briere F, Caux C et al. Immunobiology of dendritic cells. // Annu Rev Immunol. 2000. - Vol. 18 - C.767-811.

8. Ueno H, Klechevsky E, Morita R et al. Dendritic cell subsets in health and disease. // Immunol Rev. 2007. - Vol.219. - C.l 18-42.

9. Dzionek, A., Sohma, Y., Nagafune et al. BDCA-2, a novel plasmacytoid dendritic cell-specific type II C-type lectin, mediates antigen capture and is a potent inhibitor of interferon alpha/beta induction. // J. Exp. Med. 2001. - Vol.194. - C. 1823-1834.

10. Kim H. S., Zhang X., and Choi Y. S. Activation and proliferation of follicular dendritic cell-like cells by activated T lymphocytes. // J. Immunol 1994. Vol.153 -C.2951-2961.

11. Cella, M., Jarrossay, D., Facchetti, F. et al. Plasmacytoid monocytes migrate to inflamed lymph nodes and produce large amounts of type I interferon. // Nat. Med. 1999 Vol.5.-C.919-923.

12. Cisse B, Caton ML, Lehner M et al. Transcription factor E2-2 is an essential and specific regulator of plasmacytoid dendritic cell development. // Cell. 2008. -Vol.3 №135. - C.37-48

13. Ghosh H.S., Cisse B., Bunin A. et al. Continuous expression of the transcription factor e2-2 maintains the cell fate of mature plasmacytoid dendritic cells. // Immunity- 2010. Vol.33 - C.905-916.

14. Reizis B, Bunin A, Ghosh HS et al. Plasmacytoid dendritic cells: recent progress and open questions. // Annu. Rev. Immunol. 2011,- Vol.29. - C.163-83.

15. Siegal, F. P., Kadowaki, N., Shodell, M. et al. The nature of the principal type 1 interferon-producing cells in human blood. // Science. 1999. - Vol.284. - C.1835-1837.

16. Lund, J., Sato, A., Akira, S., Medzhitov, R. et al. Toll-like receptor 9-mediated recognition of Herpes simplex virus-2 by plasmacytoid dendritic cells. // J. Exp. Med.- 2003. Vol.198. - C.513-520.

17. Hochrein H, O'Keeffe M. Dendritic cell subsets and toll-like receptors. \\ Handb Exp Pharmacol. 2008. - Vol.183. - C. 153-79.

18. Swiecki, M., and Colonna, M. Unraveling the functions of plasmacytoid dendritic cells during viral infections, autoimmunity, and tolerance. // Immunol. Rev. 2010. -Vol.234.-C. 142-162.

19. Hemmi H, Akira S. TLR signalling and the function of dendritic cells. // Chem Immunol Allergy. 2005. - Vol.86. - C. 120-35.-148

20. Steinman, R. M., Inaba, K., Turley, S. et al. Antigen capture, processing, and presentation by dendritic cells: recent cell biological studies. // Hum. Immunol. -1999. Vol.60. - C.562-567.

21. Dudziak, D. et al. Differential antigen processing by dendritic cell subsets in vivo. // Science. 2007. - Vol.315. - C. 107-111.

22. Hawiger, D., Inaba, K., Dorsett, Y., et al. Dendritic cells induce peripheral T cell unresponsiveness under steady state conditions in vivo. // 2001. Vol. 194. - № 6. -C.769-779.

23. Steinman, RM. Dendritic cells: versatile controllers of the immune system. // Nat Med. 2007. - Vol.13. - №10. - 1155-1159.

24. Lin, R.; Heylbroeck, C.; Genin, P. et al. "Essential Role of Interferon Regulatory Factor 3 in Direct Activation of RANTES Chemokine Transcription". // Mol Cell Biol. 1999. - Vol.19. - №2. - C.959-66.

25. Swiecki M, Colonna M. Unraveling the functions of plasmacytoid dendritic cells during viral infections, autoimmunity, and tolerance. // Immunol Rev. 2010. -Vol.234-№1.-C. 142-62.

26. Colonna M, Trinchieri G, Liu YJ. Plasmacytoid dendritic cells in immunity. // Nat Immunol. 2004. - Vol.5. - C.1219-1226.

27. Iwasaki A, Medzhitov R. Toll-like receptor control of the adaptive immune responses. // Nat Immunol. 2004. - Vol.5. - C.987-995.

28. Heil F, Hemmi H, Hochrein H et al. Species-specific recognition of single-stranded RNA via toll-like receptor 7 and 8. // Science. 2004. - Vol.303. - №5663. -C. 1526-1529.

29. Guiducci C, Ott G, Chan JH et al. Properties regulating the nature of the plasmacytoid dendritic cell response to Toll-like receptor 9 activation. // J Exp Med. 2006. -Vol.203. -№8,-C. 1999-2008.

30. Ken Takahashi, Shinichi Asabe, Stefan Wieland et al. Plasmacytoid dendritic cells sense hepatitis C virus-infected cells, produce interferon, and inhibit infection. // Proc Natl Acad Sci U S A. 2010. - Vol.107. - №17. - C.7625-7626.

31. Cao W, Bover L, Cho M et al. Regulation of TLR7/9 responses in plasmacytoid dendritic cells by BST2 and ILT7 receptor interaction. // J. Exp. Med. 2009. -Vol.206.-C.1603-1614.

32. Martinelli E, Cicala C, Van Ryk D et al. fflV-1 gpl20 inhibits TLR9-mediated activation and IFN-{alpha} secretion in plasmacytoid dendritic cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2007. Vol.104. - C.3396-3401.

33. Xu Y, Hu Y, Shi B et al. HBsAg inhibits TLR9-mediated activation and IFN-alpha production in plasmacytoid dendritic cells. // Mol. Immunol. 2009. - Vol.46. -C.2640-2646.

34. Liu YJ. IPC: professional type 1 interferon-producing cells and plasmacytoid dendritic cell precursors. //Annu. Rev. Immunol. 2005. - Vol.23. - C.275-306.

35. Kadowaki N., YJ Liu. Natural type I interferon-producing cells as a link between innate and adaptive immunity. // Hum. Immunol. 2002. - Vol.63. - C.l 126-1132.

36. Grouard G, Rissoan MC, Filgueira L et al. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with interleukin (IL)-3 and CD40-ligand. // J. Exp. Med. -1997.-Vol.185.-C.1101-11.

37. Sapoznikov A, Fischer J A, Zafit T et al. Organ-dependent in vivo priming of naive CD4+, but not CD8+, T cells by plasmacytoid dendritic cells. // J. Exp. Med. -2007. Vol.204. - C.1923-33.

38. Cella M, Facchetti F, Lanzavecchia A et al. Plasmacytoid dendritic cells activated by influenza virus and CD40L drive a potent TH1 polarization. // Nat. Immunol. -2000,- Vol.1. -C.305-310.

39. Bachmann MF. Evaluation of vesicular stomatitis virus-specific cytotoxic T cell reponses. // Immunology Methods Manual. London: Academic Press Ltd. 1996. -C. 1897-1907.

40. Wolf AI et al. Plasmacytoid dendritic cells are dispensable during primary influenza virus infection. // J Immunol. 2009. - Vol.182. - C.871-879.

41. Woltman AM, Op den Brouw ML, Biesta PJ et al. Hepatitis В virus lacks immune activating capacity, but actively inhibits plasmacytoid dendritic cell function. // PLoS One. 2011. - Vol.6. - №1.

42. Протокол диагностики и лечения больных вирусными гепатитами В и С. // РЖГГК. 2010. - Т. XX. - №6.

43. Salvi V, Scutera S, Rossi S et al. Dual regulation of osteopontin production by TLR stimulation in dendritic cells. // J Leukoc Biol. 2013.pr 22. Epub ahead of print.

44. Karrich JJ, Jachimowski LC, Nagasawa M et al. IL-21-stimulated human plasmacytoid dendritic cells secrete granzyme B, which impairs their capacity to induce T-cell proliferation. // Blood. 2013. - Vol.121. - №16. - C.3103-111.

45. Parcina M, Miranda-Garcia MA, Durlanik S, et al. Pathogen-triggered activation of plasmacytoid dendritic cells induces IL-10-producing В cells in response to Staphylococcus aureus. // J Immunol. 2013. - Vol.190. - №4. - C.1591-602.

46. Cao W, Bover L, Cho M et al. Regulation of TLR7/9 responses in plasmacytoid dendritic cells by BST2 and ILT7 receptor interaction. // J. Exp. Med. 2009. -Vol.206.-C.1603-14.

47. Hoene V., Peiser M., Wanner R. Human monocyte-derived dendritic cells express TLR9 and react directly to the CpG-A oligonucleotide D19. // J. Leukoc. Biol.- 2006. Vol.80. - №6. - C. 1328-1336.

48. Kumar H, Kawai T, Akira S. Toll-like receptors and innate immunity. // Biochem Biophys Res Commun. 2009. - Vol.388. - №4. - C.621-625.

49. Hong B, Lee SH, Song XT, et al. A super TLR agonist to improve efficacy of dendritic cell vaccine in induction of anti-HCV immunity. // PLoS One. 2012. Vol.7.- №11. Epub 2012 Nov 7.

50. Shi B, Ren G, Hu Y, et al. HBsAg inhibits IFN-a production in plasmacytoid dendritic cells through TNF-a and IL-10 induction in monocytes. // PLoS One. 2012. -Vol.7. №9. Epub 2012 Sep 14.

51. Severa M, Giacomini E, Gafa V, Anastasiadou E, et al. EBV stimulates TLR- and autophagy-dependent pathways and impairs maturation in plasmacytoid dendritic cells: implications for viral immune escape. // Eur J Immunol. 2013. - Vol.43. - №1.- C.147-158.

52. Krug A, French AR, Barchet W, et al. TLR9-dependent recognition of MCMV by IPC and DC generates coordinated cytokine responses that activate antiviral NK cell function. // Immunity. 2004. - Vol.21. - №1. - C. 107-119.-152

53. Jego G, Palucka AK, Blanck JP, et al. Plasmacytoid dendritic cells induce plasma cell differentiation through type I interferon and interleukin 6. // Immunity. 2003. -Vol.19.- №2. -C.225-234.

54. Uematsu S, Sato S, Yamamoto M, et al. Interleukin-1 receptor-associated kinase-1 plays an essential role for Toll-like receptor (TLR)7- and TLR9-mediated interferon-a induction. // Journal of Experimental Medicine. 2005. - Vol.201. - №6. - C.915-923.

55. Hoshino K, Sugiyama T, Matsumoto M, et al. IkB kinase-a is critical for interferon-a production induced by Toll-like receptors 7 and 9. // Nature. 2006. -Vol.440. - №7086. - C.949-953.

56. Ken Takahashi, Shinichi Asabe, Stefan Wieland, et al. Plasmacytoid dendritic cells sense hepatitis C virus-infected cells, produce interferon, and inhibit infection. // Proc Natl Acad Sei USA.- 2010. Vol.107. - №17. - C.7625-7626.

57. Salio M, Cella M, Vermi W, et al. Plasmacytoid dendritic cells prime IFN-y-secreting melanoma-specific CD8 lymphocytes and are found in primary melanoma lesions. // European The Journal of Immunology. 2003. - Vol.33. - №4. - C.1052-1062.

58. Nestle FO, Conrad C, Tun-Kyi A, et al. Plasmacytoid predendritic cells initiate psoriasis through interferon-a production. // Journal of Experimental Medicine. -2005. Vol.202. - №1. - C. 135-143.

59. Colonna M. Toll-like receptors and IFN-a: partners in autoimmunity. // Journal of Clinical Investigation. 2006. - Vol.116. - №9. - C.2319-2322.-153

60. Marshak-Rothstein A. Toll-like receptors in systemic autoimmune disease. // Nature Reviews Immunology. 2006. - Vol.6. -№11.- C.823-835.

61. Byun EH, Kim WS, Kim JS, et al. Mycobacterium paratuberculosis CobT activates dendritic cells via engagement of Toll-like receptor 4 resulting in Thl cell expansion. // J Biol Chem. 2012. - Vol.287. - №46. - C.38609-38624.

62. Herbeuval JP, Smith N, Theze J. Characteristics of plasmacytoid dendritic cell and CD4+ T cell in HIV elite controllers. // Clin Dev Immunol. 2012. Epub 2012 Nov 21.

63. Machmach K, Leal M, Gras C, et al. Plasmacytoid dendritic cells reduce HIV production in elite controllers. // Journal of Virology. 2012. - Vol.86. - №8. -C.4245-4252.

64. Н.Д. Ющук, O.O. Знойко, K.P. Дудина с соавт. Проблемы учета заболеваемости и смертности от хронического гепатита С в Российской Федерации. // Журнал "Здравоохранение". 2012. - № 12.

65. Ивашкин В.Т. с соавт. Стандартный интерферон-а в лечении больных хроническим гепатитом С. // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатоло-гии, колопроктологии. 2007. - Том17. - №1. - С.14-19.

66. Lau DT, et al. Interferon regulatory factor-3 activation, hepatic interferonstimu-lated gene expression, and immune cell infiltration in hepatitis С virus patients. // Hepatology. 2008. - Vol.47. - C.799-809.

67. C161ia Dental, Jonathan Florentin, Besma Aouar et al. Hepatitis С Virus Fails To Activate NF-кВ Signaling in Plasmacytoid Dendritic Cells. // J Virol. 2012. -Vol.86. - №2. - C. 1090-1096.

68. Gondois-Rey F, Dental C, Halfon P, et al. Hepatitis С virus is a weak inducer of interferon alpha in plasmacytoid dendritic cells in comparison with influenzaand human herpesvirus type-1. // PLoS One. 2009. - Vol.4. - №2.

69. Dreux M, Garaigorta U, Boyd B, et al. Short-range exosomal transfer of viral RNA from infected cells to plasmacytoid dendritic cells triggers innate immunity. // Cell Host Microbe. 2012. - Vol.12. - №4. - C.558-570.

70. Yonkers NL, Rodriguez B, Milkovich KA, et al. TLR ligand-dependent activation of naive CD4 T cells by plasmacytoid dendritic cells is impaired in hepatitis C virus infection. // J Immunol. 2007. - Vol.178. - №7. -C.4436-4444.

71. Dong LW, Kong XN, Yan HX, et al. Signal regulatory protein alpha negatively regulates both TLR3 and cytoplasmic pathways in type I interferon induction. // Mol Immunol. 2008. - Vol.45. -№11,- C.3025-35.

72. Malmgaard L. Induction and regulation of IFNs during viral infections. // J Interferon Cytokine Res. 2004. - Vol.24. - №8. - C.439-454

73. Deonarain R, Chan DC, Platanias LC, et al. Interferon-alpha/beta-receptor interactions: a complex story unfolding. // Curr Pharm Des. 2002. - Vol.8. - №24. -C.2131-2137.

74. Foy E, Li K, Sumpter R Jr, et al. Control of antiviral defenses through hepatitis C virus disruption of retinoic acid-inducible gene-I signaling. // Proc Natl Acad Sci U S A. 2005. - Vol.102. - №8. - C.2986-2991.

75. Kanto T, Inoue M , Miyatake H , et al. Reduced numbers and impaired ability of myeloid and plasmacytoid dendritic cells to polarize T helper cells in chronic hepatitis C virus infection. // J Infect Dis. 2004. - Vol.190. - №11. - C.1919-1926.

76. Liang H , Russell RS , Yonkers NL , et al. Differential effects of hepatitis C virus JFH1 on human myeloid and plasmacytoid dendritic cells. // J Virol. 2009. - Vol.83.- №11. C.5693-5707.

77. Zhang YL , Guo YJ , Bin Li , et al. Hepatitis C virus single stranded RNA induces innate immunity via Toll-like receptor 7. // J Hepatol. 2009. - Vol.51. - №1.- C.29-38.

78. Mengshol JA, Golden-Mason L et al. Impaired plasmacytoid dendritic cell maturation and differential chemotaxis in chronic hepatitis C virus:associations with antiviral treatment outcomes. // Gut. 2009. Vol.58. - №7. - C.964-973.

79. Ulsenheimer A, Gerlah JT, Jung MC, et al. Plasmacitoid dendritic cells in acute and chronic hepatitis C virus infection. // Hepatology. 2005. - Vol.41. - C.643-51.

80. Kanto T, Inoue M, Miyatake H, et al. Reduced numbers and impaired ability of myeloid and plasmacytoid dendritic cells to polarize T helper cells in chronic hepatitis C virus infection. // J Infect Dis. 2004. - Vol.190. - C. 1919-1926.

81. Lai WK , Curbishley SM , Goddard S , Alabraba E et al. Hepatitis C is associated with perturbation of intrahepatic myeloid and plasmacytoid dendritic cell function. // J Hepatol. 2007. -Vol.47. - №3. - C.338-347.

82. Piccioli D , Tavarini S , Nuti S , et al. Comparable functions of plasmacytoid and monocyte-derived dendritic cells in chronic hepatitis C patients and healthy donors. // J Hepatol. 2005. - Vol.42. - № 1. - C.61-67.

83. Shiina M, Kobayashi K, Kobayashi T et al. Dynamics of immature subsets of dendritic cells during antiviral therapy in HLA-A24-positive chronic hepatitis Cpa-tients. // J Gastroenterol. 2006. - Vol.41. - №8. - C.758-764.

84. Albert ML, Decalf J, Pol S. Plasmacytoid dendritic cells move down on the list of suspects: in search of the immune pathogenesis of chronic hepatitis C. // J Hepatol. 2008. Vol.49. - №6. -C. 1069-1078.

85. Goutagny N, Vieux C, Decullier E et al. Quantification and functional analysis of plasmacytoid dendritic cells in patients with chronic hepatitis C virus infection. // J Infect Dis. 2004. - Vol.189. - №9. - C. 1646-1655.

86. Longman RS, Talal AH, Jacobson IM et al. Normal functional capacity in circulating myeloid and plasmacytoid dendritic cells in patients with chronic hepatitis C. // J Infect Dis. 2005. - Vol.192. - №3. - C.497-503.

87. Wang T, Blatt LM, Seiwert SD. Immunomodulatory activities of IFN-gammalb in combination with type I IFN: implications for the use of IFN-gammalb in the treatment of chronic HCV infections. // J Interferon Cytokine Res. 2006. - Vol.26. №7. -C.473-483.

88. Dolganiuc A, Chang S, Kodys K et al. Hepatitis C virus (HCV) core protein-induced, monocyte-mediated mechanisms of reduced IFN-alpha andplasmacytoid dendritic cell loss in chronic HCV infection. // J Immunol. 2006. Vol.177. - №10. -C.6758-6768.

89. Cicinnati VR, Kang J, Sotiropoulos GC et al. Altered chemotactic response of myeloid and plasmacytoid dendritic cells from patients with chronic hepatitis C: role of alpha interferon. // J Gen Virol. 2008. - Vol.89. - №5. - C.1243-53.

90. Amjad M, Abdel-Haq N, Faisal M et al. Decreased interferon-alpha production and impaired regulatory function of plasmacytoid dendritic cells induced by the hepatitis C virus NS 5 protein. // Microbiol Immunol. 2008. - Vol.52. - №10. -C.499-507.

91. Heinze A, Elze MC, Kloess S et al. Age-matched dendritic cell subpopulations reference values in childhood. // Scand J Immunol. 2013. - Vol.77. - №3. - C.213-220.

92. Müller Trutwin M, Hosmalin A. Role for plasmacytoid dendritic cells in anti-HIV innate immunity. // Immunol Cell Biol. - 2005. - Vol.83. - №5. - C.578-583.

93. Cavaleiro R, Baptista AP, Soares RS, et al. Major depletion of plasmacytoid dendritic cells in HIV-2 infection, an attenuated form of HIV disease. // PLoS Pathog. -2009.-Vol.5.-№11.

94. Patricia Fitzgerald-Bocarsly, Evan S, et al. Plasmacytoid dendritic in HIV infection: striking a delicate balance. // J Leukoc Biol. 2010. - Vol.87. - №4. -C.609-620.

95. Swiecki M, Colonna M. Unraveling the functions of plasmacytoid dendritic cells during viral infections, autoimmunity, and tolerance. // Immunol Rev. 2010. -Vol.234.-№l.-C.142-62.

96. Mansour H, Laird ME, Saleh R, et al.Circulating plasmacytoid dendritic cells in acutely infected patients with hepatitis C virus genotype 4 are normal in number and phenotype. 2010. - Vol.202. - №11. - C.l671-1675.

97. Jérémie D., Sandrine F., Randy L., et al. Plasmacytoid dendritic cells initiate a complex chemokine and cytokine network and are a viable drug target in chronic HCV patients. // J Exp Med. 2007. - Vol.204. - №10. - C.2423-2437.

98. Teig N, Moses D, Gieseler S, et al. Age-related changes in human blood dendritic cell subpopulations. // Scand J Immunol. 2002. - Vol.55. - №5. - C.453-457.

99. Santana-de Anda K, Gómez-Martín D, Soto-Solís R, et al. Plasmacytoid dendritic cells: Key players in viral infections and autoimmune diseases. // Semin Arthritis Rheum. 2013. - Vol.43. - №1. - C.131-136.

100. Ioannou M, Alissafi T, Boon L, et al. In vivo ablation of plasmacytoid dendritic cells inhibits autoimmunity through expansion of myeloid-derived suppressor cells. // J Immunol. 2013. - Vol. 190. - №6. - C.2631-2640.

101. Diana J, Simoni Y, Furio L, et al. Crosstalk between neutrophils, B-la cells and plasmacytoid dendritic cells initiates autoimmune diabetes. // Nat Med. 2013. -Vol.19. -№l.-C.65-73.

102. Ioannou M, Alissafi T, Boon Let al. In vivo ablation of plasmacytoid dendritic cells inhibits autoimmunity through expansion of myeloid-derivedsuppressor cells. // J Immunol. 2013. Vol.190. - №6. - C.2631-2640.

103. Banchereau J, Pascual V. Type I interferon in systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases. // Immunity. 2006. - Vol.25. - №3. - C.383-392.

104. Ronnblom L, Aim GV, Eloranta ML. Type I interferon and lupus. // Curr Opin Rheumatol. 2009. - Vol.21. - C.471-477.

105. Teig N, Moses D, Gieseler S et al. Age-related changes in human blood dendritic cell subpopulations. Scand. // J. Immunol. 2002. - Vol.55. - C.453 - 457.

106. Malmgaard L.Induction and regulation of IFNs during viral infections. // J Interferon Cytokine Res. 2004. - Vol.24. - №8. - C.439-54.

107. Deonarain R, Chan DC, Platanias LC, et al. Interferon-alpha/beta-receptor interactions: a complex story unfolding. // Curr Pharm Des. 2002. - Vol.8. - №24. -C.2131-2137.

108. Foy E, Li K, Sumpter R Jr, et al. Control of antiviral defenses through hepatitis C virus disruption of retinoic acid-inducible gene-I signaling. // Proc Natl Acad Sci U S A. 2005. - Vol. - Vol.102. - №8. - C.2986-2991.

109. Kanto T , Inoue M , Miyatake H , et al. Reduced numbers and impaired ability of myeloid and plasmacytoid dendritic cells to polarize T helper cells in chronic hepatitis C virus infection. // J Infect Dis. 2004. - Vol.190. - №11. - C.1919-1926.

110. Hardy GA, Sieg S, Rodriguez B, et al. Interferon-a is the primary plasma type-I IFN in HIV-1 infection and correlates with immune activation and disease markers. // PLoS One. 2013. - Vol.8. - №2.

111. Lai WK, Curbishley SM, Goddard S, et al. Hepatitis C is associated with perturbation of intrahepatic myeloid and plasmacytoid dendritic cell function. // J Hepatol. 2007. Vol.47. - №3. - C.338-347.

112. Kadowaki N, Antonenko S, Lau JY, et al. Natural interferon alpha/beta-producing cells link innate and adaptive immunity. // J Exp Med. 2000. - Vol.192. -№2.-C.219-226

113. Lee CK, Rao DT, Gertner R, et al. Distinct requirements for IFNs and STAT1 in NK cell function. // J Immunol. 2000. - Vol.165. - №7. - C.3571-3577.

114. Nguyen KB, Salazar-Mather TP, Dalod MY, et al. Coordinated and distinct roles for IFN-alpha beta, IL-12, and IL-15 regulation of NK cell responses to viral infection. // J Immunol. 2002. - Vol.169. - №8. - C.4279-4287.

115. Yoneyama H, Matsuno K, Toda E, et al. Plasmacytoid DCs help lymph node DCs to induce anti-HSV CTLs. // J Exp Med. 2005. - Vol.202. - №3. - C.425-435.

116. Рейзис А.Р., Хохлова О.Н. Плазмоцитоидные дендритные клетки и их роль в патогенезе и интерферонообразовании при хроническом гепатите С. // Журнал «В мире вирусных гепатитов». 2012. - №3-4. - С.17-23.