Оценка влияния различных факторов среды на инвазионную активность энтомопатогенных нематод и приемы ее повышения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.07, кандидат биологических наук Ахмед Мохамед Али Эль Диб

• Ахмед Мохамед Али Эль Диб
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ахмед Мохамед Али Эль Диб

Содержание

1. Введение

2. Биологические особенности развития энтомопатогенных нематод из рода

81етегпета

2.1. Влияние различных факторов внешней среды на активность нематод

2.1.1. Активность нематод в зависимости от температуры

2.1.2. Роль влажности

2.1.3. Особенности распределения нематод в почве по вертикали

2.2. Инвазионная активность разных видов энтомопатогенных нематод

2.2.1. Влияние некоторых факторов на длительность сохранения

жизнеспособности нематод

2.3. Длительность сохранения инвазионной активности

3. Использование энтомопатогенных нематод в борьбе с экономически значимыми насекомыми

3.1. Восприимчивость различных стадий вредителей

3.2. Экономическая эффективность применения энтомопатогенных нематод

4. Заключение по обзору литературы

5. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

5.1. Материалы и методы исследований

5.2. Определение инвазионной активности нематод

6. Особенности распространения энтомопатогенных нематод

6.1. Особенности локализации

6.2. Инвазионная активность энтомопатогенных нематод в зависимости от влажности и температуры почвы

6.3. Восприимчивость разных вредителей и их стадий к заселению нематодами

6.4. Влияние органических веществ на активность нематод

7. Сравнительная оценка эффективности нематодных препаратов против

различных вредителей

7.1. Разработка технологии накопления инвазионной активной личиночных стадий энтомопатогенных нематод

7.2. Влияние различных добавок для повышения эффективности энтомопатогенных нематод

7.3. Активность энтомопатогенных нематод на разных почвах

7.4. Сравнительная эффективность нематодных суспензий против разных вредителей

8. Экономическая эффективность применения энтомопатогенных препаратов

Выводы

Литература

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка влияния различных факторов среды на инвазионную активность энтомопатогенных нематод и приемы ее повышения»

1. Введение

Защита сельскохозяйственных культур от вредителей и, в частности, хлопчатника от наиболее вредоносного вредителя этой культуры - хлопковой совки (Spodoptera littoralis), имеющей в своем цикле развития почвенные стадии представляет особую сложность из-за способности их накапливаться при бессменном возделывании (Ellis, 1980, Shapiro-Ilan et al., 2002, 2006, 2010). Так, потери урожая хлопка - сырца при этом достигают 10-20 % (Burrows et al., 1982). Вместе с тем применение радикального химического метода борьбы с вредителями этой культуры, несмотря на очевидный эффект, приводит к нежелательным последствиям, в частности, загрязнению пестицидами окружающей среды, особенно при многократных обработках, стимулированию появления резистентных к ним форм вредных организмов, подавлению или уничтожению полезных видов, участвующих в регуляции их численности. Не случайно поэтому, все шире в системах защитных мероприятий используются приемы биологической борьбы с вредителями (Jeffords, Hodgins, 1995). Следовательно, разработка приемов, способных активизировать естественные механизмы регуляции численности вредных видов, и внедрение их в производство путем замены в применяемых системах защиты пестицидных обработок биологическими средствами, ограничивающими развитие патогенов, является важной актуальной задачей (Помазков, Заец, 1998).

В последнее время в практике защиты растений от вредителей весьма интенсивно используются энтомопатогенные формы нематод, средой обитания которой является почва и находящиеся в ней их почвенные стадии. Заражая насекомых, они способны вызывать стерилизацию и гибель жертвы. Вместе с тем, они совершенно безопасны в отличие от химических веществ и даже некоторых биопрепаратов (например, Bacillus thuringiensis) для растений и животных. При их использовании не требуются какие - либо средства безопасности. Они способны инфицировать десятки различных видов насекомых-

вредителей, не оказывая негативных последствий на полезных насекомых (Georgis et al., 1991; Akhurst, Smith, 2002). Для их массового производства и накопления не требуется специального оборудования. Однако, как и другие агенты биологической борьбы, нематоды требуют определенных условий для своего развития. Они быстро инактивируются под действием ультрафиолетового света, при высыхании почвы, что определяется ее типом, структурой и плодородием и ирригационным режимом. Их эффективность проявляется в сравнительно узком диапазоне температур (как правило, от 20°С и 30°С), по сравнению с химическими веществами (Georgis, Gaugler, 1991; Shapiro-Ilan et al., 2006).

К наиболее перспективным для биологической борьбы с вредителями относятся нематоды из семейств Steinernematidae и Heterorhabditidae (Poinar, 1978, Wouts, 1985). Уже известно около 50 видов насекомых, в которых нематоды способны паразитировать (Doucet, 1994, Dergham, 1995, Scheepmaker et al, 1997, Jaworska, 1999). Однако их летальное действие на некоторые виды, против которых применяют нематодные препараты в виде суспензий инвазионных личинок 2-го возраста, не всегда обеспечивает должную эффективность вследствие их недостаточной плотности в местах локализации вредителей, чувствительности к действию факторов внешней среды (температура, влажность, тип почвы, наличие условий для сохранения и устойчивой циркуляции их популяций). Делаются многочисленные попытки для ее повышения. В частности, для этих целей испытываются их различные комплексы с пестицидами, патогенными грибами, маслами и другими компонентами. Так, для борьбы с походным червем Spodoptera frugiperda (Smith, 1997) (Lepidoptera: Noctuidae) - основным вредителем посевов кукурузы в Бразилии применяли энтомопатогенных нематод в комплексе препаратами, способными вызывать гибель вредителя. Использовали распыление смесей. Энтомопатогенные нематодные препараты уже предложены производству (Akhurst et al., 1990, Akhurst, 1990, Vanninen, 1990, Zimmerman et al., 1990, Kaya,

1993). Однако до массового их внедрения еще далеко, поскольку недостаточно изучены биологические и экологические особенности жизнедеятельности наиболее перспективных видов нематод и не решены проблемы их культивирования, накопления и хранения. Относительно малая подвижность их инвазионных стадий предполагает многократное искусственное заселение энтомопатогенными формами популяций вредных видов. Это естественно создает трудности для практического использования нематодных "препаратов".

2. Биологические особенности развития нематод из рода Steinernema

Для наиболее эффективного использования энтомопатогенных нематод в практической защите растений от вредителей необходимо знать их биологические особенности.

Нематоды, паразитирующие в насекомых, которые для своего существования и регулярного завершения жизненных циклов, используют энергетические ресурсы последних, не обособлены в какую-либо отдельную таксономическую группу в пределах класса Нематод. Вместе с тем, одной из характерных групп паразитических нематод насекомых являются Мермитиды, представители отряда Mermithida, семейства Mermithidae. Они широко распространены и встречаются повсеместно, паразитируя в стадии личинки.

При контакте с вредными видами нематоды активно проникают в их тело через анус, дыхальца, непосредственно через покровы или пассивно с потребляемой пищей. Личинки нематод заселяют кишечник, питаясь находящейся в нем массой, клетками его тканей. Поглащение пищи из гемолимфы хозяина происходит непосредственно через поверхность тела и стенки пищевода. Часто они вносят внутрь различные, в том числе и патогенные, бактерии и другие микроорганизмы. Взаимоотношения нематод с бактериями, в частности различными видами Xenorhabditis (Cranshaw, Zimmerman, 1999), носят симбиотический характер. Последние не проявляют

активности вне нематод в полости членистоногих. Их совместное действие усиливает патогенный эффект и значительно увеличивает смертность пораженных особей. В практических целях уже используются их комплексы, например, с нематодой РНбИопсНш ит/огтш против зимующих стадий колорадского жука. Наблюдения показывают, что в весенний период число инвазионных личинок достигало 85%. Причем при инфицировании их гемолимфы бактериями гибель наступала в течение 10 часов. Погибшие особи мумифицируются, вследствие ингибирования процессов гниения антибиотическими веществами, выделяемыми бактериями. В зависимости от размеров насекомого нематоды съедают мумию за 9-20 дней. Затем личинки впадают в анабиоз, сохраняясь в этом состоянии до нескольких лет, постоянно готовые к инвазии при наступлении благоприятных условий.

Завершив фазу паразитического развития, нематоды покидают жертву, линяют, коопулируют и откладывают яйца (от 1 до 6 тыс.шт.). Следует отметить, что у большинства видов нематод, патогенных для членистоногих, отдельные этапы развития проходят вне тела жертвы, например, яйцекладка и формирование первых личиночных возрастов у отряда МепшЙпёае. С другой стороны, образование яиц у взрослых нематод, например, Steinernema /еШае, проходит внутри тела жертвы. Созревание личинок на первом этапе проходит внутри яиц и представляют собой 2-ую ювенильную стадию. Они способны выживать вне хозяина в естественной среде несколько месяцев в ожидании жертвы. (Рубцов, 1978, Артюховский, 1990). Разнообразие МегткЫёае достаточно высоко. Наиболее значимыми группами отряда ЗДтЬсШёа являются семейства 81етегпетайс1ае и НегегогИаЬсН^ёае,

Собственно семейство 81етегпета1:1с1ае включает 23 вида собственно рода 81етегпеша и состоящий из единственного вида род Нео81етегпета (Спиридонов, 2001). По своим биологическим особенностям близки и почти идентичны им 8 видов энтомопатогенных нематод другого семейства гетерорабдитид - Heterorhabclitidae, представители которого более присущи

тропическим и умеренным районам. Последние связаны с бактериями из рода Xenorhabditis по типу мутуализма, то есть получающие временную взаимную выгоду от совместного сосуществования (Doucet, 1990, Poinar, 1990).

За период с 1985 г. в печати появились различные публикации по энтомопатогенным нематодам, включая некоторые аспекты биологии, биоконтроля, генетики и биотехнологии, эпизоотиологии (Kaya, 1985, 1987,

1990, Gaugier, 1987, Woodring, Kaya, 1988, Georgis, Poinar, 1989, Georgis, Hague,

1991, Poinar, 1991, Wouts, 1991, Popiel, Hominick, 1992). Ряд работ по штейнернемам обубликован в Японии (Ishibashi, 1987, 1990).

В Индии из популяции Scirpophaga excerptalis (Pyralidiae, Lepidoptera), паразитирующей на сахарном тростнике были выделены нематоды из рода Heterorhabditis, описанные как новый вид Н. indicus п. sp. с характерной укороченной инфекционной стадией развития инвазионных личинок. Показано, что Н. indicus проявляет патогенные свойства по отношению к Holotrichia serrata и Leucopholis lepidoptera (Scarabaeidae, Coleóptera) (George et al., 1992). По мнению авторов, вид перспективен для использования в биологической защите, т.к. возможно его массовое размножение при отсутствии полового цикла.

Shahina, Maqbool (1996) сообщили о распространении Heterorhabditid и Steinernematid в Пакистане. В процессе интенсивного их изучения в различных районах страны было выделено 3 изолята штейнернема и 59 изолятов гетерорабдитид, а причем 22 из них были идентифицированы как Н. indicus (Shahina et al., 1998).

Энтомопатогенные нематоды обладают малой миграционной подвижностью. Поэтому для них характерна очаговая локализация. Однако личиночные стадии Heterorhabiditis более подвижны, чем Steinernema.

Распространение нематод происходит в основном с помощью зараженных, но еще не умерших насекомых. При контакте с вредными видами нематоды активно проникают в их тело через анус, дыхальца, непосредственно через

покровы и пассивно с потребляемой пищей. Личинки нематод заселяют кишечник, питаясь находящейся в нем массой, клетками его тканей. Часто они вносят внутрь различные, в том числе и патогенные, бактерии и другие микроорганизмы. Взаимоотношения нематод с бактериями, в частности различными видами Xenorhabditis (Cranshaw, Zimmerman, 1999), носят симбиотический характер. Последние не проявляют активности вне нематод в полости членистоногих. Их совместное действие усиливает патогенный эффект и значительно увеличивает смертность пораженных особей. В зависимости от размеров насекомого нематоды съедают мумию за 9-20 дней. Затем личинки впадают в анабиоз, сохраняясь в этом состоянии до нескольких лет, постоянно готовые к инвазии при наступлении благоприятных условий. Энтомопатогенные нематоды обычно не являются специализированными видами. Так, вид Н. bacteriophora способен заражать 104 вида насекомых, которые погибали через 20 - 60 ч. после инвазии. Наиболее устойчивыми оказались хищники и опылители (Doucet, Giayetto, 1994).

2.1. Влияние различных градиентов внешней среды на активность

нематод

Хорошо известно, что оптимальное развитие любого организма зависит от влияния факторов внешней среды, что, очевидно, и обусловлено их адаптацией к условиям определенных географических регионов.

2.1.1. Активность нематод в зависимости от температуры

Влияние температуры на выживание, активность инвазии, скорость развития и патогенность нематод - представителей Steinernematid и Heterorhabditid изучалась многими авторами (Schmeige, 1963, Kaya, 1977 Saringer et al., 1998, Nek Dara et al., 2007). Так, Schmeige (1963) показано, что

вид S. feltiae способен сохранять жизнеспособность в пределах от -10°С до 35°С, причем, инвазионная активность проявлялась от +9° до 33°С. Тем не менее, важно отметить, что в большинстве случаев состояние популяций зависит от влияния комплекса физических факторов внешней среды, включая, кроме температуры, и влажность почвы. Именно они определяют жизнеспособность популяций энтомопатогенных нематод. В частности, при повышении температуры почвы до 30°С и выше (до 40°С), но оптимальной влажности в поверхностном слое S. carpocapsae может сохранять свою инвазионную способность около 2 недель (Gray, Johnson, 1983). Однако во влажной среде длительность выживания этого вида Neoaplectana carpocapsae при 3°С увеличивалась и превышала 1 год (Howell, 1979, Wiliams, Walters, 1994). Таким образом, подчеркивается, что факторы - температура и влажность окружающей среды действуют комплексно. Инфекционность нематод была продемонстрирована Molyneux (1984, 1985) на личинках мясной мухи {Lucilla cuprina). С другой стороны, нематода S. glaseri, которая адаптирована к тропическим условиям, неспособна выживать при температурах ниже 10°С. Вместе с тем, в песчаных почвах до 90% особей этого вида нематод при 15°С сохраняют активность в отсутствии насекомого - хозяина более 32 недель (Molyneux, 1985), тогда как у S. carpocapsae даже при температуре 10°С выживает около 60%. Численность выживших личинок среди представителей Heterorhabditis sp. в культуре при температурах от 6,0 до 0,4°С существенно не меняется даже после 63 дней (Klinger, 1990). Причем, их инвазионная активность против Otiorhynchus sulcatus сохранялась при температуре 6°С в течение до 66 дней.

Как показано Fan и Hominick (1991), в песчаных и суглинистых почвах при недостатке в почве кислорода S. carpocapsae сохраняется лучше, чем S. glaseri.

В летние месяцы нематоды преимущественно локализуются в верхних слоях (10 см) почвы (Mracek, Webster, 1993). При этом заметна их приуроченность к участкам, где произошли изменения под влиянием деятельности человека

(пашни, плантации с/х культур и др.). В местах, не подвергавшихся антропогенному воздействию (леса, естественные луга) нематод обычно не обнаруживали.

Реализация патогенных свойств у S. carpocapsae была значительно выше при более низких температурах (2-25°С), чем высоких (35°С), тогда как S. glaseri, наоборот, проявляла большую активность при относительно высоких температурах (15 -35°С), чем низких (5°С) (Kung et al., 1991).

Уже определены тепловые температурные параметры для развития, инфицирования и воспроизводства 12 видов энтомопатогенных нематод, собранных в различных климатических зонах. В частности, показано, что S. riobravis способна инфицировать тест-объект - личинки Gallería mellonella - в наиболее широком интервале температур (10 -39°С), тогда как инвазия вида S. feltiae проходила в пределах 8 -30°С. Температурная ниша для развития S. glaseri находилась между 0° и 37°С. Размножение С. glaseri проходило при 2 -32°С. Близкие температурные рамки отмечены для С. carpocapsae (20-30°С), S. scapteristic (20 -32°С), S. riobravis (20 - 35°С) и Steinernema sp. (20 -32 ° С). В более прохладных условиях (10 - 25°С) проходит развитие S. feltiae. Проведенные исследования влияния температуры на способность видов Steinernema riobravis и S. carpocapsae заражать личинок Pectinophora gossypiella показали, что чувствительность к ней и негативный результат при 35,6 - 38,5°С для второго вида была выше (Henneberry et al., 1996). Подобная реакция связывается Abu-Hatab и Gaugler (1997) с содержанием и составом липидов и жирных кислот. Таким образом, различные виды энтомопатогенных нематод обладают определенными биологическими особенностями, влияющими на степень их адаптации к температурным условиям местности (Grewal et al., 1994). Важно подчеркнуть, что активность инвазии (на примере S. kushidai против личинок Anómala cuprea) в зависимости от температуры, вероятно, может быть связана и с отношением к этому фактору симбиотических бактерий, участвующих в инфекционном процессе вместе с нематодами (Fujiie et al.,

1995). В частности, отмечены качественные изменения в их активности. Вместе с тем, лабораторные исследования не выявили четкого влияния температуры (10, 15 и 35°С) на рост их колоний.

Отмечена также расовая дифференциация по реакции на влияние рассмотренного фактора. Изучение способности 7 штаммов Steinernema feltiae = (S. bibionis) размножаться при 10°С показало, что наибольшую подвижность и инвазионную активность проявили штаммы CA. Важно подчеркнуть, что выявлена корреляция по темпам роста колоний бактерий, изолированных из рода Xenorhabdus, указывающая на их определенную ассоциацию (Wright, 1992). Развитие отдельных видов нематод проходит в определенном температурном режиме. Так, S. feltiae способна сохранять жизнеспособность в пределах от 10°С до 35°С (Schmeige, 1963). Инфекционность их при этом проявляется в несколько более узком интервале 9°С и 33°С (Yoshihara, 1991).

Способность к длительному выживанию (около 1 года) в условиях лаборатории при 3°С продемонстрирована для S. (=Neoaplectanaj carpocapsae Howell (1979). В течение второго года хранения смертность возросла в среднем всего на 37%. Однако при данной температуре в естественных условиях в пылеватых суглинистых почвах при ее относительной влажности 10-30% уже в течение 1-2 нед. сохранялось менее 75% жизнеспособных особей (Gray, Johnson, 1983). При более высоких температурах (особенно выше 30°С) число живых особей резко падало, хотя в лаборатории данный вид - S. carpocapsae может выдерживать и 40°С.

Многим авторам это дает основание утверждать, что влияние физических факторов играет главную роль в видовой дифференциации энтомопатогенных нематод. Сообщается, что при одних и тех же условиях температуры и влажности S. glaseri обладает большей подвижностью по сравнению с S. carpocapsae. При этом подвижные формы часто остаются жизнеспособными дольше (Womersley, 1990). Вместе с тем найдено, что повышение температуры приводит к повышению эффективности обеих нематод (Miduturi et al., 1994).

Очевидно, что выявленные особенности в распространении различных видов энтомопатогенных нематод в различных средах обитания позволяют оптимизировать стратегию их использования против почвенных стадий вредителей, локализирующихся либо в поверхностном горизонте (личинки Agriotis Ípsilon (Lepidoptera: Noctuidae), либо в более глубоких слоях почвенного профиля (личинки долгоносика винограда- Otiorhynchus sulcatus (Coleoptra: Curculionidae) (Kaya et ah, 1993).

Найдено, что личинки мясной мухи Lucilia cuprina эффективнее заражаются Heterorhabditis sp. раса Dl при более высоких температурах, S. glaseri (Molyneux, 1984). Очевидно, что первый вид лучше адаптирован к тропическим условиям. С другой стороны, более 90% нематод S. glaseri не утратили свою жизнеспособность при 15°С даже при отсутствии насекомого - хозяина в течение 32 нед. При более низких (и более высоких температурах), выживаемость их уменьшилась (Molyneux, 1985). Однако для другого вида - S. carpocapsae - лучшая сохраняемость отмечалась при более низких температурах (10°С). Аналогичную тенденцию зарегистрировали и у Я. bacteriophora. Таким образом, очевидно, что реакция на влияние факторов среды имеет видовые и расовые различия.

Наблюдения, проведенные Klinger (1990) за сохранностью культуры Heterorhabditis sp. на субстрате - Otiorhynchus sulcatus - в колбах Эрленмейера при температуре 6°С показало, что инфекционные личинки оставались живыми 66 дн. без значительного снижения инвазионной активности. Эти эксперименты показали возможности коммерческого массового планового производства энтомопатогенных нематод для с/х производства.

2.1.2. Роль влажности

Из физических факторов среды наиболее существенное влияние на сохранение и деятельность инвазионных личинок энтомопатогенных нематод, в частности, вида S. carpocapsae, оказывает влажность (Moore, 1965, 1973, Gray, Johanson, 1983, Glazer et al., 1992). Найдено, что при отсутствии влаги личинки нематод быстро погибают. В частности, при относительной влажности 50% в капсулах их живых особей не обнаружено, при влажности 72% свою жизнеспособность после 24 ч. сохраняли до 71,2% нематод (Kaya, Nelson, 1985). Это нашло подтверждение и в лабораторных экспериментах с S. feltiae и Heterorhabditis heliothidis. Так, нематоды, которые находились после инвазии в личинках Spodoptera exigua, капсулированных с поверхности для поддержания влажности альгинатом кальция и липидов, сохраняли при 4° С и абсолютной влажности свою жизнеспособность и инфекционность в течение 8 мес. (Kaya, Nelson, 1985). Они легко декапсулируются и заражают размещенных в чашках Петри вредителей. Смертность при этом достигала 100%.

При относительной влажности (RH) - 45, 60 и 80% выживание мексиканской расы нематоды, нанесенной путем опрыскивания на листву растений фасоли, в течение 6 ч. постепенно снижается. Добавление в среду (чашки Петри) анти-осушителя "Foicate" (6% W/W) увеличивало выживаемость ее даже при относительной влажности 60% (Р <0,05). Тоже показано при использовании суспензии вида на листьях томата, сои, хлопчатника и перца. Подвижность и активность инвазии нематоды оставалась почти неизменной в течение 4 ч. В частности, отмечена 75% смертность личинок хлопкового червя S. littoralis. Однако через 6 и 8 час. наблюдалось снижение эффективности.

Исследования образцов, выделенных из образцов почвы засушливых земель пустыни "Негев", показали, что нематод в них представлены в основном расами вида Н. bacteriophora. Проведенные в течение 3 ч. наблюдения показали, что при 37°С их жизнеспособность снижается до 20% от контроля,

хотя индекс выживания при этом у различных рас мог различаться в 3 - 4,5 раза. Отмечено, что на жизнеспособность другого обнаруживаемого в образцах вида - S. carpocapsae- термический фактор такого влияния не оказывает. Очевидно, что на возможность развития и сохранения нематод существенное влияние оказывала низкая относительная влажность, уровень которой коррелирует с температурой окружающей среды. Так, пребывание их в течение 3 - час. в условиях 50 - 60% относительной влажности приводило к 55 - 85% снижению численности популяций. Относительно высокая толерантность к высыханию отмечена для изолятов Н. bacteriophora - IS1 и IS3 (Glazer et al., 1993).

Лабораторная оценка инвазионной активности энтомопатогенных нематод S. scapterisci, поддерживаемых в чашках Петри, показала, что некоторые насекомые проявляют устойчивость к их заселению (Grewal et al., 1993). Найдено, что при относительно высоких температурах S. scaptersci более эффективно проникают в их тело, чем S. carpocapsae. Так, оптимальной температурой для нематод инвазии личинок Gallería mellonella для S. carpocapsae была 24°С, а для S. scaptersci 32°С. При данной температуре S. carpocapsae способна в течение 16 - недель сохранять инфекционность. Уровень выживания ее особей при 10 и 25°С выше, чем при 4°С. Таким образом, S. scaptersci следует отнести к видам лучше адаптированных к теплому климату.

Полевые испытания на орошаемых полях S. feltiae и Heterorhabditis sp. в качестве биопрепарата против личинок чешуекрылых показали их высокую эффективность в течение 2-х лет. Лучшие результаты по снижению численности вредителей были получены при использовании смесей этих 2-х видов (Ippolito, Triggiani, 1995).

Сравнительная оценка инвазионной активности S. riobravis и S. carpocapsae против куколок и предкуколок Helicoverpa earworm на кукурузе показала большую эффективность для первой (Cabanillas, Raulston, 1996).

На модельном объекте - личинках вощинной моли - Galleria mellonella было показано, что степень инвазии нематод (S. carpocapsae, S. riobravis и S. feltiae) снижалась на 40 - 60% в случаях, если заражению подвергались уже их инфицированные каким - либо видом особи (Glazer, 1997).

Подобное явление наблюдалось и на других вредителях (Helicoverpa armígera и S. littoralis). Вероятно, первичная инфекция индуцирует образование каких-то веществ, обладающих аттрактивными свойствами.

При низкой влажности почвы выживание S. carpocapsae и S. glaseri не превышает 2 и 4% соответственно. Инвазионная способность в отношении личинок Gallería mellonella при этом сохраняется на уровне 16%. При 25% влажности S. carpocapsae выживает не более 2 дней, a S. glaseri около 4 час. (Yoshihara, 1991).

Многочисленные работы посвящены исследованию влияния влажности почвы на выживание и патогенность энтомопатогенных нематод особенно тех видов, которые уже используются в практической защите растений в качестве биопрепаратов, в частности из семейств Steinernematididae и Heterorhbditidae. Так, S. carpocapsae способна в течение 20 дн. выживать в почве с 70% относительной влажности (Moore, 1965, Gray, Johanson, 1983). При относительной влажности выше 90% личинки ее расы DD-136 сохраняли подвижность в течение нескольких часов в ночное время даже на листовой поверхности при 35 и 5°С (Moore, 1973). Причем в ходах, проделанных сосновым короедом, их живые особи обнаруживали и через 24 дн. (Simons, Poinar, 1973). Виды S. carpocapsae и S. glaseri лучше сохранялись при низкой влажности почвы (2 и 4% соответственно) (Kung et al., 1990).

Изоляты нематод из Уругвая заражали почвенные стадии сверчков, в диапазоне влажности 5 - 15% при 30°С (Hudson, Nguyen, 1989).

Наличие двойной кутикулы у инфекционных личинок Heterorhbditids защищает их от паразитических грибов (Timper et al., 1991).

При оценке факторов, влияющих на выживание и инвазионную активность личинок 2-го возраста (IJ2) мексиканского изолята S. carpocapsae найдено, что уровень их смертности зависит от относительной влажности воздуха и растения, на которых используются их суспензии. Так, после опрыскивания надземной части бобов (листья, стебли, генеративные органы) нематодными препаратами при 45, 60% и 80% относительная влажности воздуха отмечается постепенное отмирание их особей. В частности, при 80% и 60% относительной влажности этот процесс продолжался около 6-ти час., а при 45% не более 2-х. Следует подчеркнуть, что на листьях томатов и сое численность личинок, сохранившихся в указанные периоды на 30 - 35% выше, чем на хлопчатнике, перце, фасоли и фильтровальной бумаге (Glazer, 1992).

Сравнительные лабораторные испытания эффективности различных рас и видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae, S. feltiae (Biosys S 27), S. glaseri (Biosys S2), H. bacteriophora (Пойнар HP 88 и CI), изолированных в Мексике, против личинок японского жука показали, что смертность вредителя колебалась от 17,8 до 99,4%, в зависимости от вида использовавшихся нематод и скорости отмирания объекта. Наилучшие результаты наблюдались после применения S. glaseri. Во всех вариантах смертность возрастала при увеличении концентрации инвазионных нематод в суспензии (Yeh, Aim, 1992).

При использовании нематодных биопрепаратов в полевых условиях весьма важно знать, как долго сохраняют жизнеспособность инвазионные личинки после обработки защищаемых растений. Buhler и Gibb (1994) провели оценку эффективности 2-х видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae и S. glaseri) в борьбе с черной совкой - Agrotis Ípsilon. Найдено, что смертность вредителя в случаях применения S. carpocapsae несколько выше, чем от S. glaseri. Отмечается увеличение сроков их выживания и эффективности инвазии на надземных частях растений в условиях высокой относительной влажности окружающей среды (Wiliams, Walters, 1994). Анализ почвенных образцов с разных горизонтов показал их сравнительно равномерное распределение.

Вместе с тем, S. carpocapsae проявляет большую активность в засушливых условиях, чем 5". glaseri (Koppenhofer et al., 1995).

При оценке действия S. feltiae и Heterorhabditis sp. против листовых минеров Liriomyza huidobrensis при 20°С и 85 - 90% относительной влажности выявлены различия по их эффективности. Значительная смертность вредителя отмечена в случаях применения S. feltiae, которая возрастает при относительной влажности > 90%. Показано, что инвазионные стадии энтомопатогенных нематод внедряются в туннель мины в течение первых 12 час., заражая до 15% особей личиночных возрастов (Wiliams, Macdonald, 1995).

2.1.3. Особенности распределения нематод в почве по вертикали

Найдено, что выявляемая картина распределения нематод в почвенном горизонте, в частности, Steinernema riobrave, зависит от влажности почвы (Buhler, Gibb, 1994), их вида или штамма (Curran, Heng, 1992, Gouge et al., 2000), а также техники взятия почвенного образца (Hass et al., 2002). Это наглядно продемонстрировано при прямых анализах почвенных образцов, взятых непосредственно в посевах и посадках различных сельскохозяйственных культур, а также с помощью 30 см песчаных колонок, в которые на разную глубину в качестве тестовых насекомых через каждые 2,5 см размещали личинок Pectinophora gossypiella. В последнем случае на поверхность колонки наносили суспензию инвазионных личинок (IJ) энтомопатогенных нематод S. riobrave. Одновременно с анализом зараженности насекомых определяли влажность почвы и численность нематод. Показано, что основная плотность последних локализуется в верхнем слое 12,7 см в потенциальном диапазоне ° 40 к - 0,0055 МПа (от 2% до 14% влажности). Нематоды способны мигрировать вниз по песчаной колонке. На 28-й день наблюдений зарегистрировано их перемещение до 15-23 см в глубину. Инвазионные личинки нематод сохраняли

свою жизнеспособность в потенциальном диапазоне влажности 0.1-0,012 МПа (5,2% до 9,5% влажности).

Большинство видов нематод локализуется и проявляет свою активность в поверхностном слое почвы (Albrecht et al., 1996). Например, S. glaseri доминирует на глубине 2-10 см, вытесняя S. carpocapsae. Это сказывается и на конкурентной борьбе за субстрат, в частности, тест - насекомых - личинок восковой моли.

Показано, что вертикальное распределение Steinernema riobrave (Gouge et al., 2000) определяется водным потенциалом почвы. Так, в верхней части колонки инфекционные несовершеннолетние особи (IJ) в основном группировались в 12,7 см слое, где влажность колебалась от 2% до 14%. По мере обезвоживания почвы они мигрировали на глубину 15-23 см.

2.2. Инвазионная активность разных видов энтомопатогенных нематод

В лабораторных условиях изучали инвазионную активность 7 видов штейнернематид и хетерорабдитид против S. littoralis и Agriotos sp. (Maghraby et al., 1991). Результаты показали, что их эффективность дифференцирована. Через 7 дн. после обработки наибольшая смертность при их использовании наблюдалась среди предкуколок и куколок, которая достигала 100% в вариантах с S. feltiae, 83,8 и 86,5% с S. bibionis и S. glaseri, соответственно. Штаммы видов Heterorhabditis (НР-88 и V-16) оказались сравнительно менее активными (89-2 и 54,1%). В целом во всех случаях восприимчивость куколок была ниже. Хлопковая совка проявила большую чувствительность к инвазии нематодами при испытанных дозах (125, 250, 500, 1000 и 2000 особей/чашка S. bibionis DBS 111 и S. feltiae).

Найдено, что инвазионная активность S. feltiae меняется в зависимости от состояния и условий развития S. littura. Показано, что с увеличением размеров и массы тела возрастает число личинок нематод, необходимых для достижения

летального исхода. Инвазия нематод, как правило, происходит через анус вредителя. При этом отмечается, что уровень их проникновения в питающиеся личинки меньший, чем в голодающие (Копёо, 1987).

2.2.1. Влияние некоторых факторов на длительность сохранения

жизнеспособности нематод

2.3. Длительность сохранения инвазионной активности

В качестве основного фактора, влияющего на возможность реализации биологического потенциала энтомопатогенных нематод, выступает временная ограниченность существования их инфекционных стадий - личинок младших возрастов (8е1уап е! а1., 1993). При изучении физиологических параметров, определяющих стабильность сохранения жизненных функций у видов Heterorhabditis ЬаМепоркога, 3(етегпета ca.rpoca.psae и & g/ш•er/, культивируемых на личинках восковой моли (7. те11опе11а или содержащихся в воде при 25°С, найдено, что численность выживших не превышает 20%. Причем glaseri жизнеспособные особи обнаруживались и через 36 недель, тогда как сагросарБае и Н. Ьас1егюркога сохранялись 16 и 7 недель соответственно. Показано, что выжившие особи содержали на 14 - 16% больше воды, чем исходные формы. Отмечена положительная корреляция между содержанием общих липидов и содержанием воды (Оео^Х Бип1ор, 1994). Важно отметить, что в процессе хранения содержание ненасыщенных жирных кислот увеличивалось по сравнению с содержанием насыщенных жирных кислот. Считается, что стабильность сохранения Н. Ьа^епоркога связана с наличием большего количества ненасыщенных жирных кислот. Более того, отмечается меньшее накопление липидов нематодами, выращенными при 15°С, чем при других температурах.

Состав и концентрация липидов, например у S. riobravis разнообразен. Развитие особей при высокой температуре (30°С) способствует накоплению липидов и жирных кислот, обеспечивающих адаптивную термическую стабильность. Выявление данной зависимости позволило рекомендовать режим культивирования S. riobravis при 25 - 30°С (Abu-Hatab, Gaugler, 1997).

Найдено, что коммерческая и конкурентная целесообразность применения препаративных форм энтомопатогенных нематод по сравнению с химическими инсектицидами зависит от способности их инвазионных стадий выживать и сохранять активность при 4 - 25°С в течение 6 мес.

Grewal et al. (1994) выявили дифференциацию у 12 их географически отдаленных видов и разновидностей. В частности, найдено, что энтомопатогенные нематоды Steinernema riobravis, собранные в различных климатических зонах, сохраняли жизнеспособность в инфицированных личинках G. mellonella в более широком интервале температур (от 10 до 39°С) по сравнению с S. feltiae (8 - 30°С). Температурные рамки для выживания S. glaseri находились в пределах 10 -37°С, а у S. feltiae - 8 -30°С. Размножение нематод проходило в несколько уменьшенных границах - для S. glaseri между 12 и 32°С, S. carpocapsae -20 и 30°С, S. feltiae - 10 и 25°С, S. scapteristic - 20 и 32°С и S. riobravis в пределах 20 -35°С. Подобную зависимость отмечали также Selfuk Hazir et al. (2001). В целом, представители Heterorhabditis (Н. bacteriophora и X. megedis) оказались более термостойкими, чем Steinernematids (Miduturi et al., 1994). Важно подчеркнуть, что в зависимости от температурных условий меняется и их инсектицидная активность (Fujiie et al., 1995). Так, применение S. kushidai против личинок Anómala cuprea выявляет качественные изменения в функционировании симбиотических бактерий. Смертность личинок составила 95, 100 и 85% при 20, 25 и 30°С соответственно, но значительно меньше, чем при 10, 15 и 35°С. Найдено, что ювенильные стадии 3-го возраста в водной суспензии сохраняются значительно лучше, чем в почве.

При этом смертность личинок Pectinophora gossypiella при инфицировании S. riobravis в температурном диапазоне 15,6 -38,5°С показало, что наиболее эффективно проходит инвазия при температуре > 21,5°С, когда летальный исход зараженных особей отмечался уже через 24 ч. При 15,6°С случаи отмирания наблюдаются позже - на 2-6 дня (Henneberry et al., 1996). Наилучший эффект (смертность 94%) при использовании С. feltiae против Pieris brassicae (1000 особ./мл) был получен при 27°С (Saringer et al., 1998).

Georgis et al. (1995) предложил для использования в промышленных целях гранулированную форму нематод, сохраняющие патогенность до 6 мес. при 4 -25°С и до 8 нед. при 30°С.

Таким образом, очевидно, что паразитические нематоды, обладающие свойствами идеальных биологических агентов, весьма чувствительны к экстремальным температурам, что ограничивает их использование (Selvan et al., 1996).

Влияние разных субстратов на жизнеспособность энтомопатогенных нематод 4 видов {Steinernema carpocapsae, S. feltiae, Heterorhabditis indica и H. bacteriophora) изучали Nek Dara et al. (2007). Против имаго Phaedon cochleariae использовались личинки 1 возраста. Найдено, что Н. indica проявляет наибольшую активность при температуре 30°С. Однако максимальная смертность (до 90% погибших личинок) наблюдается при обработке суспензией S. carpocapsae. При 25°С эффективность Н. indica (97,5%>) превышает действие Н. bacteriophora, S. carpocapsae и S. feltiae.

Найдено, что при постепенном медленном обезвоживании почвы (до 70%> относительной влажности) S. carpocapsae остаются жизнеспособными значительно дольше - до 20 дн. (Moore, 1965). Так, некоторые ее штаммы, например DD-136, сохраняют подвижность в ночное время на сухой поверхности опавшей листве при 35 и 5°С в течение нескольких часов, а в туннелях, проделанных в древесине сосновым короедом в древесине, до 24 дн. (Moore, 1973, Yeh, Aim, 1992). Это подтверждено Simons и Poinar (1973),

показавших, что в смоделированных условиях при сравнительно низкой влажности почвы выживает около 90% особей, хотя и со сниженной инвазионной активностью (Gray, Johanson, 1983). Найдено, что в песчаной почве S. carpocapsae и S. glaseri лучше сохраняются при низкой влажности почвы (2 и 4% соответственно) Kung et al. (1990). Однако со временем (в течение 32 дн.), отмечено снижение патогенности обоих видов с 100 до 25%. Вместе с тем, S. carpocapsae проявляет большую жизнеспособность по сравнению с S. glaseri (Kung et al., 1991). Как указывают Timper et al. (1991), степень выживания нематод определяется особенностями строения кутикулы у 2-ой ювенильной стадии. Причем более высокая стабильность Н. bacteriophora связана с деятельностью симбиотических грибов.

Отмечено влияние заселяемой культуры на выживаемость инвазионных стадий. Так, на листьях томатов и сои степень жизнеспособность личинок нематод сохранялась на 30 - 35% более высоком уровне, чем на листьях хлопчатника, перца, фасоли, а также на фильтровальной бумаге (Glazer, 1992). В значительной степени эффективность заражения зависит от объекта, на которых они паразитируют (Buhler, Gibb, 1994). В частности, смертность черных совок Agrotis Ípsilon на участках, где была внесена нематода, была значительно большей, чем болотной - Abentgrass grostis. Биологической контроль в лабораторных условиях с использованием теста - большой восковой моли - Gallería mellonella (L.) и Cadaver reinfest подтвердили эти результаты. Вместе с тем, в сообщении Hudson и Nguyen (1989), наоборот, утверждается, что инфекционность нематод при заражении личинок сверчков в подобных условиях (30°С и влажности почвы в диапазоне от 5 до 15%), не претерпевает никаких существенных изменений. Косвенно это подтверждает и Koppenhofer et al. (1995), показавшие, что личинки Gallería mellonella, инфицированные младшими возрастами S. carpocapsae и S. glaseri распространены в почве равномерно. Тем не менее, в целом, отмечается, что первый вид проявляет большую эффективность в засушливые годы.

Wiliams и Macdonald (1995) исследовали при 20°С и относительной влажности 85 - 90% активность инвазии нематод S. feltiae и Heterorhabditis sp. (штамм В 211) на личинках Liriomyza huidobrensis трех возрастов. Найдено, что наименьшее число выживших личинок обнаруживается для 2-го возраста при относительной влажности > 90%.

Найдено, что разные виды и расы энтомопатогенных нематод из рода Steinernematidae в зависимости от температуры окружающей среды различаются по своей способности инфицировать насекомых. В частности, сравнительное изучение длительности сохранения жизнеспособности и при хранении и активности инвазионных личинок при температуре 23 ± 2°С и 5 ± 1°С показал, что у расы ОЛИ St. rarum указанные показатели выше (95%), чем у расы IJS. Снижение уровня выживания отмечено после 5 недель, а инвазии уже через 2 недели (Cagnolo, Campos, 2008).

Проведено биотестирование инвазионной активности 2 изолятов Steinemema (Filipjev) = S. bibionis (Bovien) на личинках Gallería sp. после хранения в стерильном песке при 5°С и 15°С. инфекционная нагрузка составляла 200-258 инфекционных особей. Ее удавалось регистрировать и через 16 недель хранения. Нематоды лучше выживали при 5°С (Fan, Hominick, 1991).

Данные эксперименты указывают на возможность хранения энтомопатогенных нематод при низких температурах, что имеет большое значение для практики.

Энтомопатогенные нематоды S. feltiae Filipjev, выделенные из погибших особей S. exigua и Pseudalectia unipuncta, при повторной инвазии этих же 2-х видов вредителей в дозах 10, 25, 50, 100, 200 шт./личинка сохранили свою достаточно высокую эффективность. Однако, у только отродившихся личинок S. exigua отмечена меньшая восприимчивость к инфекции по сравнению 3 и 8 дневными их стадиями. Смертность новорожденных личинок при этом (при дозе 50 и более нематод) колебалась от 68 до 74%, а более поздних - от 91 до 100% (Кауа, 1985).

Сравнительные наблюдения за поведением S. glaseri и S. carpocapsae показывают, что их более подвижные особи сохраняются дольше, чем менее подвижные (Womersley, 1990). Более того, отмечается, что S. glaseri обладает большим объемом запасающих веществ, что также способствует их выживанию (Abu-Hatab, Gaugier, 1997).

Найдено, что жизнеспособность нематод зависит и от уровня их дыхания (Fan, Hominick, 1991). При низкой концентрации кислорода, например, в песчаных суглинистых почвах, содержание которого колеблется от 20 до 1 %, S. carpocapsae сохраняется лучше, чем S. glaseri. Следовательно, содержание кислорода в среде играет важную роль и способно влиять на выживание нематод также как и другие факторы - влажность, температура и тип почвы.

Видовые различия по индексам выживаемости и патогенности между S. carpocapsae и S. glaseri на воздействие температуры почвы и относительная влажность, присутствие капельной влаги выявляемые в лаборатории показывают, что в целом при температурах 2 -25°С они выше, чем при 35°С (Kung et al., 1991). Однако, S. glaseri более активна при температурах 15 -35°С, чем 5°С. S. carpocapsae и S. glaseri лучше сохранялись при низкой влажности почвы (2 - 4%). При 100% влажности выживаемость их резко снижается. Вместе с тем, показано, что после регидратации тенденция к выживанию и патогенности восстанавливаются.

Важным фактором успешной инвазии жертвы является присутствие в инокулюме энтомопатогенных нематодам бактерий рода Xenorhabdus, способных развиваться с ними в комплексе. Оценка эффективности заражения модельного объекта - личинок вощинной моли Galleria mellonella 7 расами S. feltiae показала, что при 10°С изолированый клон 069 имели наибольший темп роста (Wright, 1992). Найдено, что способность к воспроизводству определяется темпами роста Xenorhabdus.

Изучение поведенческих реакций энтомопатогенных нематод в зависимости от типа почв (Reeo, Carne, 1967, Pye, Burman, 1978) показало, что от их состава

зависит активность миграции и поиска хозяина. Так, с увеличением глинистых компонентов снижается интенсивность инфицирования жертв (Poinar, Нош, 1986 Molynex, Badding, 1986, Kamione et al., 1997).

Сравнительное изучение 2-х видов энтомопатогенных нематод показало, что они различаются по стратегии поиска вредителей в почве насекомые, т.е. в той же среде обитания. S carpocapsae, которая локализуется, как правило, вблизи поверхности почвы, проявляет высокую эффективность против личинок черной совки (Agriotis ípsilon), развивающихся в том же горизонте. Вид Н. bacteriophora сосредоточивается в значительно более глубоких слоях почвенного профиля в местах обитания личинок долгоносика (Otiorhynchus sulcatus), который питается на корнях растений, в частности, черного винограда. Активность их инвазии зависит от температуры почвы. Так, при 22°С S. carpocapsae вызывала 100% гибель насекомых в течение 1 нед. Этот вид (но не Н. bacteriophora) и при 16°С заражал личинок черной совки (Kaya et al., 1993). Важно подчеркнуть, что энтомопатогенные нематоды из рассмотренных родов чаще обнаруживались и проявляли свою активность на участках, подвергшихся влиянию человека, например, сельскохозяйственных угодьях, лесных и кустарниковых защитных полосах), но не на естественных пастбищах и девственных лесах (Mracek, Webster, 1993).

Для практического использования нематод в качестве биопрепаратов важно учитывать возможные сроки сохранения инфекционности у инвазионных личинок (Selvan et al., 1993). При изучении физиологических параметров, влияющих на их стабильность при хранении с использованием в качестве субстрата личинок восковой моли - G. mellonella - найдено, что при 25°С у S. glaseri 20% выживших особей обнаруживается в течение 36 нед., S. carpocapsae и Н. bacteriophora 16 и 7 нед., соответственно. Выявляется положительная корреляция между жирно-кислотным составом общих липидов и содержанием воды в теле инфекционных личинок младших возрастов.

Найдено, что при добавлении влагопоглащающих веществ в нематодные препараты (Steinernema sp.H Heterorhabditis sp.) длительность их выживания при 4 - 25°С с сохранением патогенности возросла и составила, по крайней мере, 6 мес., что делает их коммерчески конкурентоспособными с химическими инсектицидами (Georgis, Dunlop, 1994, Georgis et al., 1995).

Определены температурные параметры для оптимального развития 12 видов энтомопатогенных нематод из различных климатических зон (Grewal et al., 1994). Так, S. riobravis обладали способностью инфицировать личинок G. mellonella в интервале 10 -39°С, тогда как S. feltiae в более узком -8 -30°С. Температурные пределы для развития S. glaseri (10 - 37°С) оказались более широкими, чем для S. feltiae (8 - 30°С). Размножение других видов, в частности, S. carpocapsae происходит в диапазоне 20 -30°С, S. scapteristic 20 -32°С, S. riobravis 20 -35°С. Несмотря на приуроченность Heterorhabditis sp. к тропическим условиям оптимальными для видов Н. bacteriophora и X megedis являются явно более низкие температурные параметры, даже по сравнению с изолятами Steinernematid sp. из Южной Америки и Карибского бассейна.

Подобная чувствительность к температурному фактору (Miduturi et al., 1994) сказывается на эффективности инвазии. Наибольшая активность отмечена для Heterorhabditis sp. и S. carpocapsae против долгоносика на винограде при температуре 20 - 25°С. Более низкая или высокая температуры не приводили к полному контролю. Подобная картина наблюдается и при исследовании поведения других видов. Так, инсектицидная активность S. kushidai против личинок Anómala cuprea составила 95, 100 и 85% при 20, 25 и 30°С, соответственно (Fujiie et al., 1995).

Важно отметить, что заселение отдельных видов вредителей проходит при определенной температуре. Так, гибель личинок хлопковой моли Pectinophora gossypiella после инфицирования S. riobravis наступает в температурном диапазоне 15,6 - 38,5°С (Henneberry et al., 1996). При, температуре 35,6 и 38,5°С смертность их от инвазии S. riobravis и S. carpocapsae была ниже, чем при 21 и

32,5°С. Таким образом, видно, что влияние температурного фактора ограничивает практическое использование энтомопатогенных препаратов (Selvan et al., 1996).

Для уничтожения личинок Pieris brassicae применяли суспензию S. feltiae (SO 5А) -1000 шт./мл. Наилучший эффект (94% летальности) был получен при 27°С (Saringer et al, 1998).

Оценка эффективности 5-ти географических изолятов S. feltiae (из Турции, Франции, США, Аргентины и Гавайских островов) на модельном объекте -личинках восковой моли - G. mellonella (Sel9uk Hazir et al, 2001). Показала, что 100% смертность отмечена при 8 -25°С. Лучшими температурными условиями для всех изолятов является 15°С. На примере другого объекта - свекловичных совках Spodoptera exigua - показано, что размеры инвазионных личинок, развивающиеся в теле зараженного вредителя при 8°С, имели большую длину, чем при 23°С. Это указывает на то, что их формирование зависит от типа субстрата и качества пищи.

Влияние температурного фактора на развитие инфекционных личинок 4-х видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae, S. feltiae, Н. indica и Н. bacteriophora) и их летальное действие в отношении горчичного долгоносика (хреновый листоед) Phaedon cochleariae было изучено Nek Dara J. et al. (2007). Найдено, что при 25°С наибольшей активностью обладает S. carpocapsae. Наивысшая плодовитость для Н. indica отмечена при температуре 30°С. При этом виды в гомологичном ряду по показателю смертности вредителя до уровня 90% располагались при 25°С в следующем порядке - S. carpocapsae, затем следуют S. feltiae, Н. indica и Н. bacteriophora, а при 30°С (летальность до 97,5%) ряд выглядел несколько иначе - Н. indica, Н. bacteriophora, S. carpocapsae и S. feltiae. Это указывает на необходимость учитывать реакцию вредителя на действие определенных видов энтомопатогенных нематод и температурные условия применения их суспензий.

3. Использование энтомопатогенных нематод в борьбе с экономически значимыми насекомыми

К настоящему времени уже получены практические результаты в использовании паразитических нематод против различных скрытноживущих вредителей, а также их почвенных видов (Васильева-Некрасова, Метлицкий, 1997).

3.1. Восприимчивость различных стадий вредителей

Обычно действие инвазионных личинок нематод проявляется уже через 48 ч. (Sikora et al., 1978). Причем, как показал анализ, восприимчивость различных стадий вредителей, против которых они используются, неодинакова. Большинство из них, за исключением предкуколок и куколок, весьма чувствительны к заражению даже при малых дозах (1000 шт./мл) (Sikora et al., 1979). Смертность их колеблется у предкуколок от 10 до 24% и у куколок от 10 до 83%. Имаго вредителя становилось восприимчивых к нематодам только после выхода их из куколки в почву. Вместе с тем, отмечается, что гибель насекомых при 15°С и 20°С была меньшая, чем при 25°С. По данным, приведенным в работе Kaya и Grieve (1982), видно, что нематоды N. carpocapsae способны инфицировать до 90% куколок совки S. exigua в почве при концентрациях 5 особей/см2. С повышением их концентрации (до 25 и 50 шт./см2) эффективность нематод резко увеличивалась.

Применение в практической защите растений в качестве биопрепаратов различных организмов, в том числе нематод, для подавления популяций вредных видов становится все более широким. Были проведены многочисленные эксперименты в лабораторных условиях для оценки их эффективности.

Уже в первых опытах была отмечена высокая эффективность суспензий, содержащих 4000 шт./мл инвазионных личинок N. carpocapsae против вредящих стадий Spodoptera frugiperda. Летальный исход достигал 100% (Landazabal et al., 1973). Использование в полевых условиях той же концентрации энтомопатогенных нематод при обработках плантаций кукурузы во влажную погоду смертность вредителя снизилась до 50 - 60%, т.е. была значительно меньшая, чем после обработок Diptrex 80 (1,5 кг/га). В сухую погоду эффективность нематодных суспензий вообще была сведена к нулю.

Опрыскивание водными суспензиями нематод S. bibionis посадок салата, заселенных репной совкой Agrotis segetum показали возможность подавления вредителя в полевых условиях даже при неблагоприятных условиях (Theunissen, Fransen, 1984).

При внесении S. carpocapsae на поверхность почвы отмечался более высокий процент смертности 4-й, 5-й, 6-й возрастов личинок черной совки -Agrotis ípsilon, чем в пахотном горизонте (Abdel-Kawy et al., 1987). В условиях лаборатории показано, что действие разных видов и рас видов энтомопатогенных нематод (S. carpocapsae, S. bibionis и S. feltiae, S. glaseri, H. bacteriophora и H. heliothidis) дифференцировано в зависимости от природы объекта и концентрации (Capinera et al., 1988, Morris et al., 1990).

В настоящее время существуют трудности при решении проблем, связанных с накоплением, хранением и использованием нематодных биопрепаратов (культивирование инвазионных личинок в пластиковых контейнерах на разных субстратах (компост, отруби и др.). Найдено, что в ряде случаев использование препаратов в виде гранул эффективнее, чем при опрыскивании суспензиями нематод, особенно при их низких концентрациях (Georgis et al., 1989).

Сравнительные испытания показали, что 2-х кратная обработка суспензиями S. carpocapsae более эффективна против A. Ípsilon на кукурузе, чем опрыскивания химическими инсектицидами (фонофос, тефлутрин, хлорпирифос и перметрин) (Levine, Oloumi - Sadeghi, 1992). По результатам

биотеста действие нематод заканчивается через 8 дн. Найдено, что наиболее перспективно использование энтомопатогенных нематод на этой культуре при орошении. В дозе 32 IJs/r почвы (инфекционный молодая личинка steinernema) они в лабораторных условиях через 48 и 72 час. вызывали полную гибель личинок совок A. ípsilon и Spodoptera litara соответственно (Vyas, Yadov, 1992).

В некоторых случаях смертность оказалась меньше расчетной величины, что объясняется несовпадением между степенью активности нематод, уровнем их инвазионной способности и чувствительностью объекта.

Проведена количественная оценка инвазивной активности 2-х мексиканских изолятов S. carpocapsae в отношении личинок последнего возраста походного червя Spodoptera frugiperda и черной совки A. ípsilon. Способность к заражению колебалась от 10 до 50%. Эффективность инвазии зависит от продолжительности контактирования субъектов комплекса, их соотношения в расчете на единицу площади и концентрации нематод (Epsky, Capinera, 1993).

Показатель смертности по уровню ЬС5о был предложен в качестве меры эффективности нематод. Эффективность изолятов S. carpocapsae против 3-х видов чешуекрылых (A. ípsilon, S. frugiperda и G. mellonella) варьировала от 4 до 91%. Концентрация инвазионных личинок нематод при этом колебалась от 10 до 100 особей/личинка вредителя (Epsky, Capinera, 1994). Следует отметить, что уровень проникновения (или процент внедрившихся в жертву инвазионных личинок от их первоначальной концентрации в суспензии), используемый в качестве показателя инфекционности энтомопатогенных нематод, как правило, не совпадает с летальностью. Очевидно, это связано с разным влиянием на вредителя другого компонента системы - бактерий. Оценка их комбинаций, в частности, Steinernema carpocapsae, S. glaseri, S. feltiae, S. riobravis и 2-х штаммов Heterorhabditis bacteriophora по показателю проникновения в тело восковой моли - G. mellonella, личинки Tenebrio moliter, гусеницы свекловичной - Spodoptera exigua и черной - Agrotis Ípsilon совок, кукурузного

мотылька - Ostrinia nubilalis при унифицированной нагрузке (200 особей/объект), выявила подобное ранжирование по инфекционности в зависимости от вида насекомых (Caroli et al.,1996).

5.2. Экономическая эффективность применения энтомопатогенных

нематод

Считается, что энтомопатогенные нематоды из родов Steinernema и Heterorhabditis уже доступны для коммерческого использования в качестве препаратов против различных стадий насекомых, заселяющих почвы (Georgis et al, 1995). Прорывом в этом стала разработка уникальной гранулированной формы их продуктов с достаточно продолжительным сроком сохранения инвазионной активности (до 6 месяцев при 4 - 25°С и до 8 нед. при температуре 30°С) и способностью препаратов к быстрому растворению в водной среде. Очевидно, что энтомопатогенные нематоды обладают многими свойствами из атрибутов идеального биологического средства по ограничению вредной фауны (Selvan et al., 1996). Вместе с тем, основным фактором, ограничивающим их применения, остается повышенная чувствительнотсь к экстремальным температурам. Именно поэтому, начались кропотливые исследования по оценке различных видов и географических изолятов в отношении данного параметра (Sel^uk Hazir et al., 2001). Так, изучение 5 изолятов S. feltiae показало, что формы, взятые в тропических и субтропических регионах, в целом, лучше сохраняют свою патогенность, чем виды, изолированные из других областей.

В качестве метода биологической борьбы с личинками репной моли Agrotis segetum проведены полевые испытания водных суспензий Neoaplectana bibionis (Theunissen, Fransen, 1984). Найдено, что нематоды способны эффективно контролировать численность почвенных стадий даже при неблагоприятных условиях для своего развития. Активность личинок 4, 5 и 6-ой возрастов другой

нематоды - Н. carpocapsae - против того же вредителя при обработки поверхности почвы дали высокий процент смертности (Abdel-Kawy et al., 1987).

Оценка эффективности суспензий S. feltiae (= Neoaplectana carpocapsae), С. bibionis и Heterorhabditis heliothidis в отношении личинок черной совки, культивируемой на пшеничных отрубях и капсулах альгината кальция, показало, что мексиканские изоляты нематод проявляют большую активность (Capinera et al., 1988). Полевые исследования подтвердили возможность значительного снижения повреждений кукурузы совками при использовании их водной суспензии (Levine, Oloumi- Sadeghi, 1992). Установлено, что наибольшую восприимчивость к к инфицированию нематодами проявили совки Agrostis ípsilon и Spodoptera litura. Полная гибель личинок вредителей отмечена через 48 и 72 часов соответственно при дозе 32 IJs/r почвы (Vyas, Yadov, 1992).

В лабораторных условиях лучшие результаты против Scateriscus gryllotalpa vicinus и совок A. Ípsilon (особенно при низких концентрациях) по сравнению с водной суспензией энтомопатогенных нематод S. feltiae показали препараты, применявшиеся в виде дустов из уже зараженных особей насекомых (Georgis et al., 1989).

Скрининг 9 комплексов нематод (S. feltiae, S. glaseri, S. bibionis, H. bacteriophora и X. heliothidis) с бактериями по показателю вирулентности в отношении личинок совок (Mamestra cofigurata, Peridroma saucia, Еихоа ochrogaster, Pseudaletia unipunctata, Mythimna unipunctata, Agrotis Ípsilon, Paleacrita vernata) и огневок (Galleria mellonella, M. configurata) (Morris et al., 1990).

Количественная оценка инвазивной способности 2-х мексиканских штаммов S. carpocapsae против последних возрастов личинок Spodoptera frugiperda, черной совки (A. ípsilon), и большой восковой моли {G. mellonella) показала, что эффективность заражения колеблется от 10 до 50% (Epsky, Capinera, 1993). Найдено, что успех заражения определяется не только штаммовыми различиями, но и зависит от продолжительности контакта, численности особей

на единицу поверхности хозяина. Следует подчеркнуть, что во всех случаях смертность личинок оказалась меньшей, чем индекс их заселения. Эффективность инвазии часто оценивали с привлечением индекса LC50 (Epsky, Capinera, 1994), что позволяло компьютезировать учеты.

Лабораторные испытания 4-х видов Steinernema (S. carpocapsae, S. glaseri, S. feltiae, S. riobravis) и 2-х изолятов H. bacteriophora в смеси с низкими концентрациями химических пестицидов в отношении личинок Spodoptera depravata, Parapediasia teterrella и Agrotis Ípsilon показали, что только S. carpocapsae по сравнению с другими, проявил высокую активность против личинок Scarabaeidae (Hastsukada, 1994).

Caroli et al. (1996) предложил в качестве показателя биологической эффективности энтомопатогенных нематод использовать так называемый уровень проникновения (процент от первоначальной концентрации инфекционного материала к числу особей, вторгшихся в тело насекомого хозяина). Найдено, что указанный параметр находится в зависимости от вида заселяемого насекомого.

Использование вида S. feltiae на основе приманок из пшеничных отрубей против A. ípsilon показало, что на всех участках наблюдается значительное сокращение личинок вредителя, увеличение урожайности защищаемой культуроы по сравнению контрольными вариантами - биопрепаратами Bacillus thuringensis и В. hostathion, а также фосфорорганическим пестицидом -triazophos (Zaki, 1996).

4. Заключение по обзору литературы

Анализ имеющихся источников свидетельствует, что энтомопатогенные нематоды, в частности из рода Steinernema, являются достаточно эффективным природным регулятором численности почвенных стадий различных вредителей сельскохозяйственных культур. Их исследование активно ведется во многих

лабораториях мира в направлениях по изучению характера локализации, особенностей биологии, взаимодействия с другими почвенными организмами. Практическое значение имеют работы по подбору, испытанию и внедрению технологических приемов их производства в промышленных масштабах. В этой связи, особо перспективными достижениями следует считать разработку методов накопления и хранения энтомопатогенных нематод, а также получения активных инвазионных препаратов для практического использования в системе защитных мероприятий. Найдено, что их биологическая эффективность зависит от влияния целого ряда факторов внешней среды (температуры и влажности почвы, наличия, плотности, состояния и вида жертвы, выращиваемой культуры и технологии ее возделывания и др.).

цель и задачи исследования настоящей работы является определение возможностей для снижения численности вредителей сельскохозяйственных культур (колорадский жук на картофеле, хлопковая совка на хлопчатнике, малый мучной хрущак) при использовании энтомопатогенных нематод, а также изучение факторов, способствующих увеличению их инвазионной активности. В задачи наших исследований входило:

- выделение местных изолятов энтомопатогенных нематод из рода 81етегпета и сравнительное изучение их патогенности в лабораторных и полевых условиях,

- практическая апробация методов ускоренного размножения донорских насекомых и энтомопатогенных нематод в целях массового накопления инвазионного материала,

- проведение оценки роли некоторых факторов, способствующих увеличению вирулентности нематод.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

5.1. Материалы, методы и условия исследований

Проводилось сравнительное изучение 6 видов энтомопатогенных нематод Rhabditida, 5 из семейства Steinernematidae рода Steinernema (S. riobrave, S. feltiae, S. carpocapsae, S. rarum и S. glaseri) и 1 вида из семейства Heterorhabditidae, рода Heterorhabditis (Я. bacteriophora Poinar (раса HP88). В период проведения экспериментальных работ основные климатические параметры не отличались от средних многолетних значений (прил. 1). Нематоды изолировались из погибших насекомых, обнаруженных в почве, путем мацерации их трупов с помощью препаравальных иголок в капле воды.

Образцы почвенных проб (прил. 2) отбирали с помощью почвенного бура в насаждениях отдела защиты растений НИИ сельского хозяйства в Докки (Египет). Образцы нематод хранились в темноте в холодильнике при 2 - 4°С). После извлечения нематод культивировали, согласно Dutkey et al. (1964), на живом субстрате - личинках большой восковой моли - Galleria mellonella L. Полученные инвазионные личинки 2-го возраста хранились в дистиллированной воде при температуре 12°С в течение одной недели до эксперимента (Woodring, Kaya, 1988). При оценке эффективности испытывали их суспензии в 3 концентрациях - 1000 , 2000 и 3000 шт./мл. В качестве «прилипателей» и возможных стимуляторов инвазии использовали растительные экстракты из 3-х видов растений (Ocimum basilicum, Thymus vulgaris и Azadirachtha indica - в виде промышленного препарата нимацаль) в 3-х концентрациях - 1, 3 и 5 ррм. Повторность 3-х кратная. В каждой повторности бралось по 30 особей имаго малого мучного хрущака (Tribolium castaneum). Учеты погибших вредителей в чашках Петри проводили через 7 дн. В качестве контроля использовали различные химические пестициды

(хлорпирифос, децис, матч, дельтафос, димилин, сталлион, каратэ, трасер, хлорпирифос, циперметрин, трифлумурон и перметрин).

При изучении влияния органических веществ на развитие энтомопатогенных нематод использовали свежий навоз крупного рогатого скота, компост из придонных отложений р. Нил и торф в смеси с глиной или песчаной почвой, полученной с опытных полей факультета сельского хозяйства университета Загазиг (Каир, Египет) и осваиваемых площадей в районе Эль-Хаттара (провинция Шаркия) в соотношении от 0, 25, 50, 75 до 100% в смеси (табл. 1). Механический состав глинистой почвы состоял из 46,2% глины, 35,3%) ила и 18,5%) песка, а песчанной - 95,7% песка, 1,2% ила и 3,1 % глины соответственно. Почва и ее смеси стерилизовали в автоклаве при 1,2 атм. в течение 1 ч., где и оставляли на 24 ч. перед использованием-

Объектами исследования нами использовались личинки и куколки хлопковой совки S. littoralis, а также объект внешнего карантина для России - личинки и нимфы хлопковой моли Pectinophora gossypiella. Для культивирования S. littoralis в поле с поврежденных растений собрали деформированные листья с яйцами вредителя, которые поместили в сосуды (350 мл), сверху затянутые с помощью резинок капроновой тканью. В сосуды ежедневно добавляли для подкармливания вылупившихся личинок свежие листья Recinus communis.

Через несколько дней после появления личинки были пересажены в более крупные банки (2 л), покрытых марлей, закрепленной с помощью резинки, в которых до их 6-го возраста поддерживался тот же режим питания. Затем выращенных личинок для окукливания перенесли в 5-литровые банки, содержащих сухие древесные опилки. Образовавшиеся куколки использовались для экспериментов в чашках Петри, выложенных фильтровальной бумагой. Отрождающихся имаго подкармливали 15% сахарным сиропом. Спаривание и откладка яиц проходила на листьях Nerium oleander. Собранные яйца хранили в чашках Петри при 15С°.

Образующихся бабочек G. mellonella содержали на полосках гофрированной бумаги, смоченной раствором сахара. Собираемые с них яйцекладки сайтов ежедневно переносились в банки на искусственную среду из 40 г кукурузной муки, 20 г пшеничной муки, 40 г молотого нута, 20 г обезжиренного сухого молока, 10 г дрожжевого экстракта, 40 мл пчелиного меда и 40 мл глицерина. Все ингредиенты были тщательно перемешаны. Банки до момента отрождения и развития личинок содержались при температуре 30°С. Через 4 нед. личинок собирали и помещали по 100 шт. в 250 мл пластиковые коробки с крышками и хранили при температуре 10°С (Poinar, 1975). Часть из них в целях поддержания популяции оставляли в прежних условиях до появления имаго.

Для культивирования нематод Steinernematid и Heterorhabditid использовались личинки 6-го возраста хлопковой совки (S. littoralis) и большой восковой моли (G. mellonella), размещаемые в пластиковых бюксах на 2-х-слоинои влажной фильтровальной бумаге, инфицирование которых проводили суспензией, содержащей 1000 инфекционных особей/мл стерилизованной дистиллированной воды. Зараженных личинок инкубировали при 26 ± 2°С. В каждой повторности брали по 10 здоровых личинок. Сбор инфекционного материала проводили по White (1927). Для этого каждые 2 дня после инвазии погибшие особи удалялись, промывались несколько раз стерильной дистиллированной водой, переносились в раствор 0,01% формалина и хранились в холодильнике при 9 - 10°С.

Жизнеспособность нематод определяли при их инкубировании в чашках Петри (5 см в диаметре) при 25±1°С, в которые вносили по 5 мл суспензии инвазионных личинок нематод (200 особей/0,1 мл) и для исключения испарения закрывали пленкой «Parafilm». (Dunphy, Webester, 1986). Ежедневно в течение 20 дн. учитывали количество погибших (неподвижных под микроскопом)) инвазионных личинок (Ishibashi, Takii, 1993). Расчеты сделаны по формуле Abbott (Abbott, 1925). LT50 для каждого вида нематод в испытанных концентрациях определяли по программе ЕРА (Агентство по охране

окружающей среды), используемой для расчета значения LC/EC, по версии 1.5 (Finney, 1971).

Вирулентность нематод и восприимчивость к ним мух проверяли в чашках Петри (7 см в диаметре) на фильтровальной бумаге, смоченной суспензией инвазионных стадий нематод (100 особей/мл).

Заключение диссертации по теме «Плодоводство, виноградарство», Ахмед Мохамед Али Эль Диб

Выводы:

1. В результате маршрутных обследований сельскохозяйственных угодий в Египте выявлено повсеместное распространение в пахотном горизонте почвы различных видов энтомопатогенных нематод. При анализе собранных почвенных образцов и погибших насекомых обнаружено 6 их видов из 2-х сем. Steinernematidae и Heterorhabditidae - S. riobrave, S. feltiae, S. carpocapsa, S. rarum, S. glaseri и H. bacteriophora. Найдено, что в процессе вегетации происходит снижение численности и активности их особей. Самая высокая инвазионная активность нематод отмечена в верхнем пахотном горизонте в посадках апельсина и манго, наименьшая - на хлопчатнике и кукурузе.

2. К доминирующим и наиболее распространенным относятся виды S. feltiae, S. carpocapsa и S. rarum, которые обнаруживаются в среднем в 35,6% всех образцов. При этом отмечена их приуроченность к многолетним культурам -манго и апельсин - до 42-52% образцов соответственно.

3. Наиболее адаптированы к местным условиям S. feltiae и S. glaseri, способные сохраняться и проявлять инвазионную активность при 37°С. Использование суспензий энтомопатогенных нематод - показало, что смертность хлопковой совки достигала 85,0%, что указывает на их высокую эффективность. Определены оптимальные режимы для применения суспензий (к-ция 3 тыс. шт./мл при 15-25°С).

4. Найдено, что активность инвазии зависит от типа почвы, ее плодородия и влажности. Наибольшая степень заражения почвенных стадий вредителей инвазионными личинками нематод отмечалась на легких песчаных почвах без удобрений или при малых их дозах (до 25%). Смертность вредителей в указанных случаях колебалась от 68.0 до 91%.

5. Использование в качестве субстрата личинок домашней мухи (М domestica) для накопления активных инвазионных стадий энтомопатогенных нематод Steinernema показало перспективность для указанных целей этого биологического материала. При данной технологии рабочие суспензии инвазионных личинок 3-х видов нематод удается получать в 2 раза быстрее и 3,8 раз дешевле, чем при их традиционном накоплении с помощью личинок большой вощинной моли.

6. Полученный по разработанной технологии биологический материал -суспензия инвазионных личинок энтомопатогенных видов Steinernema -показал высокую эффективность при лабораторных испытаниях на тест-объектах - колорадский жук и мучной хрущак, смертность которых после инфицирования достигала 53 и более 70% соответственно. При этом личиночные стадии проявили большую чувствительность, уровень заражения которых превышал 90%.

7. Расчет эффективности применения энтомопатогенных нематод показывает, что использование суспензий экономически выгодно и позволяет получать дополнительный урожай и прибыль. Рентабельность нематодных препаратов составляет 113,4 -124,2%, несколько уступая химическим пестицидам (118,7 -128,4%).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ахмед Мохамед Али Эль Диб, 2012 год

Литература

1. Агасьева И., Пушня М. Культивирование энтопатогенной нематоды Neoaplectana carpocapsae на различных насекомых-хозяевах //Мат. Веер, научн.- прозв. сов.» Экологически безопасные и беспестицидные технологии получения растениеводческой продукции, Пущино - Краснодар, 1994.- С. 144 - 146.

2. Артюховский А. Почвенные мерметиды: систематика, биология, использование //Из-во Воронежского ун-та, 1990.- 160 с.

3. Баканеева В.Ф. Биологически активные вещества из личинок Gallería mellonella и продуктов жизнедеятельности пчел как потенциальные кардиопротекторы и адаптогены при действии гиподинамических и стрессорных факторов на организм экспериментальных животных и человека //Автор.дисс. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук, М.-2002.

4. Безрученок Н., Микульская Н. Энтомопатогенные нематоды: состояние и перспективы использования в борьбе с вредными насекомыми в Беларуси //Ж. Защита растений, в.25, 2000.- С. 53 - 59.

5. Васильева-Некрасова С., Метлицкий О. Энтомопатогенные нематоды в защите садов и ягодников от вредителей (в условиях Подмосковья) //В сб. Производство экологически безопасной продукции растениеводства, Пущино, 1997.- С. 101-106.

6. Блинова С. Энтомопатогенные нематоды-паразиты вредителей леса. Семейство рабдитиды //М.: Наука, 1982.-133 с.

7. Веремчук Г. О массовом разведении энтомопатогенного нематодно-бактериального комплекса //Паразитология. - Т.6, вып. 4, 1972.- С. 376-380.

8. Данилов JI., Карпова Е., Шиловская Т. Энтомопатогенные нематоды против капустных мух //Ж. Защита растений, 1995, N7,-С.40.

9. Данилов JL, Махоткин А., Зверев А., Махоткина Л. Вредная черепашка и энтомопатогенные нематоды //Ж. Защита и карантин растений, N3, 2000.- С. 46.

10. Зверева Е.П. Плотность популяции при культивировании личинок комнатной мухи Musca domestica в курином помёте //Тез. докл. 1-го Всесоюз. сов. по проблемам зоокультуры.- М.- 1986.- С. 153-156.

11. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Вирусы, вироиды и микоплазмы растений //М.-РУДН.-2003.-157 с.

12. Кирьянова Е., Кралль Э. Паразитические нематоды растений и меры борьбы с ними.- Л.: Наука, 1969.-443 с.

13. Малахов В. Нематоды: строение, развитие, классификация и филогения//М.: Наука, 1984,- 215 с.

14. Помазков Ю., Заец В. Биологическая защита растений. М., РУДН, 1998.- 154 с.

15. Пушня М., Агасьева И., Исмаилов В. Новые препаративные формы //Ж. Защита и карантин растений, N1, 1997.- С. 46-47.

16. Спиридонов С.Э. Патогены насекомыхЖ структурные и функциональные аспекты (под ред. В. Глупова), М.: 2001.-С. 428-475.

17. Турьянов P.A., Мифтахов A.A. Оценка энтомоцидной активности нематоды Neoaplectana carpocapsae для насекомых - вредителей леса и перспективы ее использования в интегрированной системе защиты леса //Леса Башкортостана, Уфа, 1997.-С. 197-198.

18. Рубцов И. Мерметиды. Классификация, значение, использование //Л.: Наука. 1978. 207 с.

19. Слободянюк О. Энтомопатогенные нематоды двукрылых. Отряд Tylenchida //М.: Наука. 1984.- 198 с.

20.Хабиес М.М.А. Нематоды STEINERNEMA - эффективные паразиты насекомых //Сб. Концепции, практика и перспективы современного земледелия. -М. -РУДН. -2003 .-С.51-53.

21.Хабиес М.М.А, Изучение нематод-энтомофагов в районах султаната Омана // Сб. Концепции, практика и перспективы современного земледелия.-М.-РУДН.-2003.-С.53-54.

22. Ярчаковская С., Безрученок Н. Меры борьбы со смородинной

стеклянницей (Synanthedon tipuliformis CL.) в Беларуси //Ж.

Защита растений, N24, 2000. С. 15-23.

23. Abbott, W.S. A method of computing the effectiveness of the insecticide.

//J.Econ. Entomol. V.18.- 1925,- C. 265-267.

24.Abdel- Kawy A. G., Abdel- Bary N.A., El-Shrief, M.A. Susceptibility of Agrotis ipsilon, fourth, fifth and sixth instar larvae to Neoaplictana carpocapsae infection in soil //Bull. Zool. Soc., Egypt, V.37.-1987.-C.161-168.

25.Abu - Hatab M.A., Gaugler R. Influence of growth temperature on fatty acid phospholipids of Steinernema riobravis infective juveniles //J. Therm. Biol., V.22.- №4.- 1997.- C. 237- 244.

26.AdeI, M., Hussein, H. Effectiveness of entomopathogenic nematodes Steinernema feltiae and Heterorhabditis bacteriophora on the Colorado potato beetle Leptinotarsa decemlineata (Say) (Coleoptera: Chrysomelidae) under laboratory and greenhouse conditions.// Archives of Phytopathology and Plant Protection . V.43.- 2010.-P. 1485-1494.

27. Akhurst R. Controlling insects in soil with entomopathogenic nematodes//In: Fundamental and applied aspects of invertebrate pathology, /ed. R.Samson et al., Wageningen, 1986.- 711 p.

28.Akhurst R. Morfological and functional dimorphism in Xenorhabdus spp. bacteria symbiotically associated with the insect pathogenic nematodes

Neoaplectana and Heterorhabditis //J.Gen.Microbiol., V.121.- 1980.- P. 303 -309.

29.Akhurst R. Neoaplectana species: specificity of association with bacteria of genus Xenorhabdus //Exp. Parasitai., V.55.- 1983,- P. 258-263.

30.Akhurst R., Bedding R. Natural occurrence of insect pathogenic nematodes (Steinernematidae: Heterorhabditidae) in soil on Australia //J. Aust. Entomol. Soc.,V. 25.- 1986,- P. 241-244.

31. Akhurst R., Boemare N. Biology and taxonomy of Xenorhabdus //See Réf., №68.- 1990.-P. 75-92.

32.Akhurst R., Brooks W. The distribution of entomophilic nematodes (Heterorhabditidae and Steinernematidae) in North Carolina //Invertebr. Pathol., №44.- 1984.-P. 140-145.

33.Akhurst R., Smith K. Regulation and safety. In: Gaugler, R. (Ed.) //Entomopathogenic Nematology. CABI, New York, NY, 2002.- P. 311-332.

34. Albrecht M. K., Parwinder S. G., Eugene M. F. Divergences in penetration routes and establishment rates of four entomopathogenic nematode species into four white grub species. //Journal of Invertebrate Pathology, V.94.-2007.-P. 184-195.

35.Armer C.A, Berry R.E., Reed G. L., Jepsen S. J. Colorado potato beetle control by application of the entomopathogenic nematode Heterorhabditis marelata and potato plant alkaloid manipulation //Entomología Exp. Appl.-V.11L- №1.- 2004.-P. 47-58.

36. Baudoin J.P., Kamoin N.F. Le Haricot-igname Africain (Sphenostylis stenocarpa (Hochst.ex A.Rich.) Harms) : une légumineuse à graines et à tubercules sous-exploitée //Troupeaux et Cultures des Tropiques.-V.2.- №5.2004.- P. 44-46.

37.Bednarek A., Gaugler R. Compatibility of Soil Amendments with Entomopathogenic Nematodes //J. Nematol.- V.29.- №2.-1997.-P. 220-227.

38.BeIton P. T., Rutherford A., Trotter D.B., Webster J.M. Heterorhabditis heliothidis: potential biological control agent of houseflies in caged- layer poultry barns //J. Nematol.- №19.- 1987.- P. 263-266.

39.Berry R.E., Liu J., Reed G. Comparison of endemic and exotic entomopathogenic nematode species for control of Colorado potato beetles (Coleoptera: Chrysomelidae) //J. Econ. Entomol. V.90.- 1997.- P. 1528-33.

46>.BuhIer W.G., Gibb T. J. Persistence of Steinernema carpocapsae and S. glaseri (Rhabditida: Steinernematidae) as measured by their control of Bentagrass //J. Econ. Entomol.-V. 87.- №3.-1994.- P. 638 - 642.

41. Cabanillas H.E., Raulston J.R. Evaluation of Steinernema riobarvis, S. carpocapsae and irrigation timing for the control of corn earworm, Helicoverpa zea //J. Nematol.,V. 28.- №1.- 1996.- P. 75- 82.

42.Cagnolo S., Campos, V. Effect of storage temperature on survival and infectivity of Steinernema rarum (OLI strain) (Rhabditida: Steinernematidae). //J. of Invertebrate Pathology.- V.98.- №1.- 2008.- P. 114115.

43.Capinera J. L., Pelissier D., Menout G.S., Epsky N.D. Control of black cutworm, Agrotis ipsilon (Lepidoptera: Noctuidae) with entomogenous nematodes (Nematoda: Steinernematidae, Heterorhabditdae) //J. Invertebr. Pathol., V. 52.- №3.-1988.- P. 427- 435.

44.Caroli L., Glazer L., Gaugler R. Entomopathogenic nematodes infectivity assay: Comparison of penetration rate into different hosts //Biocontrol Science and Technology, V.6.- №2.-1996.-P. 227 - 233.

45.Colombo M., Frasce D., Daolio E. Basil: experimental trial for control of Spodoptera littoralis //Colture Protette, V.26.- №5.-1997,- C. 73-78.

46.Curran J., Heng J. Comparison of three methods for estimating the number of entomopathogenic nematodes present in soil samples //]. Nematol.-№24.-1992.-P. 170-176.

47.Darwish A. A., Said S. A., Abdel-Kawy A. M., Attia A. M. Biological control of insects with insect parasitic nematodes //Annals of Agricultural Science, Moshtohor.- V.36.- №1.- 1998.- P. 603-618.

48.De Doucet M., Doucet M. Steinernema ritteri n.sp. (Nematoda: Steinernematidae) with a key to the species of the genus //Nematologica, №36.-1990.-P. 257 -265.

49.De Doucet M., Giayetto A. Gama de Huespedes y especificidad en Heterorhabditis bacteriophora Poinar (Heterorhabditidae: Nematoda) //Nematol. Medit., V.22.-1994.- P. 171 - 178.

50.Dergham Y. Biologische bekampfung //J. Champignon, №388.- 1995.- P. 280-281.

51.Dunphy G. B., Webster J. M. Temperature effects on the growth and virulence of Steinernema feltiae strains and Heterorhabdilis heliothidis //J. Nematol.,V.18.- 1986,- P. 270-272.

52.Dutkey S.R., Thompson J.V., Cantwell E. A. technique for the mass propagation of the DD-136 nematode //J. Insect. Path., V.6.- 1964.- P. 417422.

53.Eldeeb M.A. Economic entomology / Zagazig university A.R.E faculty of agriculture 1998.

54.EI-Maghraby M. M., Mahrous M.E., Hashem M.H. Susceptibility of Spodoptera littoralis (Boisd.) to certain species and strains of entomogenous nematodes //Zagazig J. Agric. Res., V.18.- №3.-1991.- P. 843- 848.

55.Ellers-Kirk C.D., Fleischer S.J., Snyder R. H., Lynch J. P. Potential of Entomopathogenic Nematodes for Biological Control of Acalymma vittatum (Coleoptera: Chrysomelidae) in Cucumbers Grown in Conventional and Organic Soil Management Systems //J. Economic Entomology.- V.93.- №3.-2000.-P. 605-612.

56.Epsky N. D., Capinera J. L. Quantification of invasion of two strains of Steinernema carpocapsae (Weiser) into three Lepidopteran larvae //J. Nematol., V.25.- №2.-1993. -P. 173 - 180.

57.Epsky N.D., Capinera J.L. Invasion efficiency as a measure of efficacy of the entomogenous nematode Steinernema carpocapsae (Rhabditida: Steinernematidae) //J. Econ. Entomol. V.87.- №7.- 1994.- PP. 366-370.

58.Fan X., Hominick W. Efficiency of the Galleria (wax moth) baiting technique for recovering infecive stage of entomopathogenic rhabditids (Steinernematidae and Heterorhabditidae) from sand and soil //Rev.Nematol., №14,.-1991.-P.381 -387.

59.Fan X., Hominick W.M. Effect of low storage temperature on survival and infectivity of two Steinernema species (Nematoda: Steinernematidae). //Rev. Nematol., V. 14,- 1991.- P. 407-412.

60.Finney J., Harding J. Some factors affecting the use of Neoaplectana sp. for mosquito control //Mosq.News, V.41.- 1981.- P. 798 - 799.

¿>/.Forlow L., Henneberry T.T. A method of distributing Steinernema riobravis in cotton furrow irrigation and pink bollworm larval mortality response //Proceedings BeHwide Cotton Confrences, Nashville, TN, USA, January 9-12 V. 2.-1996,- P. 707- 709.

62.Fujiie A., Tachibana M., Takata Y., YokoyamaT., Suzuki N. Effects of temperature on insecticidal activity of an entomopathogenic nematode, Steinernema kushidi (Nematoda: Steinernematidae), against Anomala coprea (Coleoptra: Scarabaeidae) larvae //Appl. Entomol. Zool., V.30.- №1.- 1995.-P. 23-30.

63.Geden C.J., Axtell R.C., Brooks W.M. Susceptibility of the house fly, Musca domestica (Diptera : Muscidae ), to the entomogenous nematodes Steinernema feltiae, S. glaseri (Steinernematidae) //J. Med. Entomol. №23.-1986.-P. 326-332.

64.George A. P., Niessen R. J., Campbell J. A. Pollination and selection in annona species (cherimoya, atemoya, and sugar apple) //Acta Horticulturae. V. 321.- 1992.-P. 178-185.

65.Georgis R. Formulation and application technology //See Ref. V.68.- 1990.-P. 173 - 191.

66.Georgis R., Gaugler R. Predictability in biological control using entomopathogenic nematodes //J. Econ. Entomol., №84.- 1991.- P. 713 - 720.

67.Georgis R., Hague N. Nematodes as biological insecticides //Pestic. Outlook, №2.- 1991,- P.29 - 32.

68. Georgis R., Mullens B., Meyer J. Survival and movement of insect parasitic nematodes in poultry manure and their infectivity against Musca domestica //J. Nematol.- №19.-1987.- P. 292 - 295.

69.Georgis R., Poinar G. Effect of soil texture on the distribution and infectivity of Neoaplectana carpocapsae (Nematoda: Sreinernematidae) //J. Nematol., №15.- 1983.- P. 308 - 311.

70.Georgis R., Poinar G. Field effectiveness of entomophilic nematodes Neoaplectana and Heterorhabditis //See Ref.- V.108.- 1989.- P. 213 - 224.

71.Georgis R., Dunlop D.B. Water dispersible granule: a novel formulation for nematode based bioinsecticides //Brighton Crop Protection Conference, Pesta and Diseases.- 1994,-P. 31-36.

72.Georgis R., Dunlop D.B., Grewal P.S. Formulation of entomopathogenic nematodes. In Biorational Pest Control Agents //Formulation and Delivary, ACS Symposium Series No.595.- Chapter 13. 1995.- P. 197- 205.

73. Georgis R., Wojcik W. F., SheltarD. J. Use of Steinernema feltiae'm a bait for control of blackworm (Agrotis ipsilori) and tawny mole crickets (Scapteriscus vicinus) //Florida Entomologist.- V.72.- №1.- 1989.- P. 203 -204.

74.Glazer I. Effects of infected insects on secondary invasion of steinernematid entomopathogenic nematodes //J. Parasitology.- V.114.- №6.- 1997,- C. 597 -604.

75.Glazer I. Survival and efficacy of Steinernema carpocapsae in an exposed environment //J. Biocontrol Science and Technology.- V.2.- 1992.- P. 101 -107.

76.GIazer I., Klein M., Navon A., Nakache Y. Comparison of efficacy of entomopathogenic nematodes combined with antidesiccants applied by canopy sprays against three cotton pests (Lepidoptera: Noctuidae) //J. Econ. Entomol.- V.85.- №5.- 1992.-P. 1635-1641.

77.Glazer I., Liran N., Poinar G.O., Smits P.M. Identification and biological activity of newly isolated heterorhabditid populations from Israel // J. Fundam Appl. Nematol.- V.16.- №5.-1993.- P. 467 - 472.

78.Gouge D. H., Reaves L. L., Stoltman M. M., Burke R. A., Forlow L., Henneberry T.T., Van - Berkum J.R. Control of pink bollworm Pectinophora gossypiella (Saunders) (Lepidoptera : Gelechiidae) larvae in Arizona and Texas cotton fields using the entomophathogenic nematode, Steinernema riobravis (Carbanillas, Poinar, and Raulston) Rhabditida: Steinernematidae) //Proc. Beltwide Cotton Conferences, Nashville, TN, USA.- January 9-12.- V.2.- 1996,- P. 1078- 1082.

79.Gouge D. H., Smith K.A., Lee L.L., Henneberry T.J. Effect of Soil Depth and Moisture on the Vertical Distribution of Steinernema riobrave (Nematoda: Steinernematidae) //J. Nematology.- V. 32,- №2.-2000.-P. 223228.

80.Gouge D.H., Smith K.A., Lee L. L., Henneberry T. J. Effect of Soil Depth and Moisture on the Vertical Distribution of Steinernema riobrave 111. Nematology.- V.32.- №2.-2000.-P. 223-228.

81. Gray P. A., Johnson D.T. Survival of the nematode Neoaplectana carpocapsae in relation to soil temperature, moisture and time //J. Georgia Entomol. Soc.- 1983.- P.18- 454.

82.GrewaI P.S., Gaugler R., Lewis E.E. Host recognition behavior by entomopathogenic nematodes during contact with insect gut contents // J. Parasitol. V.79.- №4.- 1993.-P.495 - 503.

83.Grewal P.S., Gaugler R., Kay a H.K., Wusaty M. Infectivity of the entomopathogenic nematode Steinernema scaptersci (Nematoda: Steinernematidae) //J. Invertebr. Pathol., V.62.-1993.-P. 22-28.

84.Grewal P.S., Selvan S., Gaugler R. Thermal adaptation of entomopathogenic nematodes: niche breath for infection, establishment and reproduction //J. Therm. Biol. V.19.- №4.-1994.. p. 245 - 253.

85.Haas G., Berg M., Koepke U. Agricultural Effects on Ground and Surface Waters (Steenvorden, J., F. Claessen, J. Willems, eds.) // Intern. Association of Hydrological Sciences, IAHS Publ, Oxfordshire, UK, №273.- 2002.-P.131-136.

86.Hastsukada M. Control of insect pests with entomopathogenic nematodes. II. Control of turfgrass insect pests with entomopathogenic nematodes in Japan //An. International Seminar on Use of Biological Control. Agents Under Integrated Pest Management in October 1993 in Japan. Technical Bulletin Food and Fertilizer Technology Center. V.139.- №1.-1994.- P. 14 -22.

87. Henneberry T.J., Forlow J.L., Burke R.A. Pink bollworm adult and larval susceptibility to steinernematid nematodes and nematode persistence in the soil laboratory and field tests in Arizona //Southwestern Entomologist.-V.21.- №4.- 1996.-P. 537- 368.

88.Henneberry T.J., Lindegreen J.E., Forlow J.L., Burke R.A. Pink bollworm (Lepidoptera: Galechiidae), cabbage looper, and beet armyworm (Lepidoptera: Noctuidae) pupal susceptibility to steinernematid nematodes

(Rhabditida: Steinernematidae) //J. Econ. Entomol.- V.88.- №4.- 1995.- P. 835-839.

89.Henneberry T.J., Lindegreen J.E., Forlow J.L., Burke

R.A. Pink bollworm (Lepidoptera: Galechiidae), cabbage looper, and beet armyworm (Lepidoptera: Noctuidae) pupal susceptibility to steinernematid nematodes (Rhabditida: Steinernematidae) //J. Econ. Entomol., V.88.- №4.-1995a.- P. 835-839.

90.Henneberry T.J., Lindegreen J.E., Jech L.F., Burke R.A. Pink bollworm (Lepidoptera: Galechiidae): effect of steinernematid nematodes on larval mortality //J. Southwestern Entomologists, V.20.- №1,- 1995b.- P. 25- 32.

91.Henneberry T.J., Forlow J. L., Burke R. A. Pink bollworm adult and larval susceptibility to steinernematid nematodes and nematode persistence in the soil laboratory and field tests in Arizona //J. Southwestern Entomologist.-V.21.- №4.- 1996a.- P. 537- 368.

92.Henneberry T. J., Jech, L., Burke, R.A., Lindegreen J.E. Temperature effects on infection and mortality of Pectinophora gossypiella (Lepidoptera: Gelechiidae) larvae by entomopathogenic nematode species //J. Environmental Entomology, V.25.- №1.-1996b.- P. 179- 183.

93.Howell J.F. New storage methods and improved trapping technique for the parasitic nematode, Neoaplectana carpocapsae //J. Invertebr. Pathol., V.33.-1979.-P. 155 - 158.

94.Hsiao W.F. Effects of animal manure on the survival and pathogenicity of the entomopathogenic nematode, Steinernema carpocapsae //Chinese J. Entomol.-V.17,- 1997,-P. 53-65.

95.Hudson W.G., Nguyen K.B. Effects of soil moisture, exposure time, nematode age, and nematode density on laboratory infection of Scapteriscus vicinus and S. acletus (Orthoptera: Gryllotalpidae) by Neoaplectana sp. (Rhabditida: Steinernematidae) //J. Environ. Entomol., V. 18.-1989.- P. 719 -722.

96.IppoIito R., Triggiani. The efficacy of Heterorhabditis sp. and Steinernema feltiae (=bibionis) fit for the control of larvae of Lepidoptera, Noctuidae in irrigated globe artichoke fields //J. Informatore Fitopatologico.- V.45.- №11.-1995.-P. 55-59.

97. Ishibashi N. Recent Advances in biological control of insect pests by entomogenous nematodes in Japan //Saga Univ. Japan, N59860005.- 1987.179 p.

94. Ishibashi N., Kondo E. Behavior of infective juveniles //See Ref., №68.-1990,-P. 139 - 153.

95. Ishibashi N., Takii, S. effect of insecticides on movement, nictation and infectivity of Steinernema carpocapsae //J. Nematol. V.25.- 1993.- P. 204-213.

96. Jaworska M. Porownanie efektywnosci ochrony pieczarek metoda biologiczna i chemiczna//Prog. Plant Prot., V. 39.- №1.-1999.- P. 180 - 186.

97. Jaworska M. mushroom pests Lycoriella auripila (Diptera: Sciaridae) and Megaselia halterata (Diptera: Phoridae) by Steinernema feltiae (Nematoda: Steinernematidae) in field experiments //Ann. Appl. Biol., V.131.- №3.1997,- P. 359-368.

98. Kaya H.K. Susceptibility of early stages of Pseudoletia unipuncta and Spodoptera exigua (Lepidoptera: Noctuidae) to the entomogenous nematode, Steinernema feltiae (Rhabditida: Steinernematidae) //J. Invertebr. Pathol.- V.46.- 1985,- P. 58 - 62.

99. Kaya H. K., Harra, A.H. Susceptibility of various species of Lepidopterous pupae to entomopathogenic nematode, Neoaplictana carpocapsae //J. Nematol., V.13.- №3.-1981.- P. 291 - 294.

100. Kaya H. K. Diseases caused by nematodesin (J.R. Fuxa, Y. Tanada eds.) //J. Epizootiology of insect diseases J. Wiley, New York. 1987.- P. 453-470.

101. Kaya H. K. princes from todes. AM. Nurserymun. V.167.- 1988.-P. 63-69.

102. Kaya H.K. Development of the DD- 136 strain of Neoaplectana carpocapsae at constant temperature //J. Nematol., V.9.- 1977.- P. 346 -349.

103. Kaya H.K., Grieve B.J. The nematode, oiNeoaplectana carpocapsae and the beet army worm, Spodoptera littoralis: infectivity ofpre-pupae in soil and adults emergence from soil //J. Invertebr. Pathol.- V.39.- 1982.- P. 192— 197.

104. Kaya H.K., Nelesen C.E. Encapsulation of steinernematid and heterorhabditid nematodes with calcium alginate: a new approach for insect control and other applications //Environ. Entomol., V.14.- №5.-1985.- P. 572-574.

105. Kaya H.K., Burlando T.M., Thurston G.S. Two entomopathogenic nematode species with different search strategies for insect suppression //Environ. Entomol.- V.22.-1993.- P. 859 - 864.

106. Khlibsuwan, W., Ishibashi, N., Kondo, E. Response of Stienernema carpocapsae infective juveniles to the plasma of three insect species //J. Nematol., V.24.-№1.-1992a.-P. 156- 159.

107. Khlibsuwan W., Ishibashi N., Kondo E. Effects of enzymes chemicals and temperature on Stienernema carpocapsae attraction to host plasma //J. entomol. V.24.- №4.- 1992b.- P. 482 - 488.

108. Klein M.G. Efficacy against soil-inhabiting insect pests.- In: Entomopathogenic nematodes in biological control (R. Gaugler, H. K. Kaya - eds.) //CRC, Boca Raton, FL.- 1990,- P. 195-214.

109. Klein M.G. Efficacy against soil-inhabiting insect pests //In: Entomopathogenicnematodes in biological control (R. Gaugler, H. K. Kaya - eds.) //CRC, Boca Raton, FL.- 1990.- P. 195-214.

110. Klinger J. Effect of cold storage on survival and parasitic activity of Heterorhabditis sp. //Entomophaga V.35.- №3.-1990,- P. 493 - 496.

111. Kondo E. Size- related susceptibility of Spodoptera littura (Lepidoptera: Noctuidae) larvae to entomogenous nematodes, Stienernema feltiae (DD-136) //Applied Entomology and Zoology.- V.22.- №4.-1987.- P. 560 - 569.

112. Koppenhöfer A.M., Baur M. E., Kaya H. K. Competition between Two Steinernematid Nematode Species for an Insect Host at Different Soil Depths //J. Parasitology. V. 82.- №1.-1996.-P. 34-40.

113. Koppenhofer A. M., Kaya H. K., Shanmugam S., Wood G. L. Interspecific competition between steinernematid nematodes within an insect host //J. of Invertebrate Pathology.- V.66.- №2.-1995.-P. 99-103.

114. Koppenhofer A.M., Kaya H.K., Taormino S.P. Infectivity of entomopathgenic nematodes (Rhabditida: Steinernematidae) at different soil depths and moistures //J. Invertebr. Pathol. V.65.- №2.- 1995.- P. 193 -199.

115. Kung S. P., Gaugier R., Kaya H. K. Effects of soil temperature, moisture and relative humidity on entomopathgenic nematodes persistence //J. Invertebr. Pathol.- V. 57,- №2,- 1991.-P. 242 - 249.

116. Kung S.P., Gaugier R., Kaya H.K. Influence of soil PH and oxygen on persistence of Steinernema spp. //J. Nematol., V.22.- №4.-1990.-C. 440 -445.

117. Landazabal A.J., Fernandez A.F., Figueroa P.A. Biological control of Spodoptera frugiperda (J.E. Smith), on maize by the nematode, Neoaplectana carpocapsae //Acta Agronómica, Colombia., V.23.- №3/4.-1973.-P. 41 -70.

118. Laumond C., Mauleon H., Kermarrec A. New data on the host range and parasitism by the entomopathgenic nematode, Neoaplectana carpocapsae //J. Entomophaga V.24.- №1.- 1979.-P. 13-27.

119. Laznik T.,Tóth T., Lakatos M., Trdan S. Control of the Colorado potato beetle {Leptinotarsa decemlineata [Say]) on potato under field conditions: a comparison of the efficacy of foliar application of two strains of

Steinernema feltiae (Filipjev) and spraying with thiametoxam //J. Plant Dis. Prot.- V.l 17.- №3,- 2010.-P.129 -135.

120. Levine E., Oloumi - Sadeghi H. Field evaluation of Steinernema carpocapsae (Rhabditida: Steinernematidae) against black cutworm (Lepidoptera: Noctuidae) larvae in field corn //J. Entomol. Science.- N21-№4.- 1992.-P. 427-435.

121. Lindegren J. E., Henneberry T.J., Jech L.J.F., Burke R.A. Pink bollworm suppression response and field persistence of two insect parasitic nematodes //Proc. Beltwide Cotton Conferences, San Antonio, TX, USA.-V.2.- 1995.-P. 944- 946.

122. Lindegren J.E., Valero K.A., Mackey B.E. Simple in Vivo production and storage methods for Steinernema carpocapsae infective juveniles //J. Nematol.-V.25.-№2.-1993.-P. 193 -197.

123. Lindegren J.E., Valero K.A., MackeyB.E. Simple in Vivo production and storage methods for Steinernema carpocapsae infective juveniles //J. Nematol. V.25.-№2.-1993.-P. 193 -197.

124. Lindegren, 3. E., Henneberry, T. J., Jech, L. J. F., Burke, R. A. Pink bollworm suppression response and field persistence of two insect parasitic nematodes //1995 Proceedings Beltwide Cotton Conferences, San Antonio, Tx, USA, January 4-7 V.2.- 1995.- P. 944- 946.

125. Lindegren J.E., Valero K.A., Mackey B.E. Simple in Vivo production and storage methods for Steinernema carpocapsae infective juveniles //J. Nematol. V.25.-№2.- 1993,-P. 193 -197.

126. Miduturi J.S., Clercq R. de., Casteels H., Griss A. de. Effect of temperature on the infectivity of entomopathgenic nematodes against black vine weevil (Otiorhynchus sulcatus F.) //J. Parasitica, V.50.- №3-4.- 1994.-P. 103 -108.

127. Molyneux A.S, Bedding R.A. Infuence of soil texture and moisture on the infectivity of Heterorhabditis sp. D1 and Steinernema glaseri for larvae

of the sheep blowfy Lucilia cuprina //Nematologica.- V.30.- 1984.- P. 358365.

128. Molyneux A. S. Survival of infective juveniles of Heterorhabditis spp. and Steinernema spp. (Nematoda: Rhabditida) at various temperatures and their subsequent infectivity for insects //Rev. Nematol., 1985.- P. 8- 165.

129. Molyneux A.S. The influence of temperature on the infectivity of heterorhabditid and stienernematid nematodes for the sheep blowfly, Lucilia cuprina //In: Pro. 4th Aust. Appl. Entomol.- Res. Conf., Adelaide, Bailey P., Swincer D. eds.-1984.- 344 p.

130. Moore G.E. Moisture requirements of the DD-136 strain of Neoaplectana carpocapsae (Nematoda: Rhabditida) as related to host infection //J. Experimental Parasitology, V.33.- 1973.-P. 207 - 211.

131. Moore G.E. The bionomics of an insect - parasitic nematode //J. Kansas Entomol. Soc.1965.-P. 83- 101.

132. Morris D.N., Converse V., Harding J. Virulence of entopmopathogenic nematode - bacteria complexes for larvae of noctuids, a geometrid, and a pyralid //J. Canadian Entomologist.- V.122.- №3-4.-1990.- P. 309-319.

133. Morris O.N. Susceptibility of 31 species of agricultural insect pests to the entomopathgenic nematodes, Steinernema feltiae and Heterorhabditis bacteriophora //J. Canadian Entomologist. V.l 17.-1985.- P. 401 -407.

134. Mracek Z., Webester J.M. Survey of Heterorhabditidae and Steinernematidae (Nematoda: Rhabditida) in Western Canada //J. Nematol., V.25.- №4,- 1993.-P. 710-717.

135. Mullens B.A., Meyer J.A., Cyr T.L. Infectivity of insect-parasitic nematodes (Rhabditida: Steinernematidae, Heterorhabditidae) for larvae of manure-breeding flies (Diptera: Muscidae) //Environ. Entomol. №16.-1987.-P. 769-773.

136. Hazir S., Stock P., Kaya H., Koppenhofer A., Kislin N. Developmental Temperature Effects on Five Geographic Isolates of the Entomopathogenic

Nematode Steinernema feltiae (Nematoda: Steinernematidae) //J. of Invertebrate Pathology.- V.77.- 2001.- P.243-250

137. Nek Dara J., Ali N.M., Ghulam M.M., Mohamad H.H., Abdulghani L., Abdul H.B. Effectiveness of entomopathogenic nematodes against the larvae of mustard bettle Phoedon cochleariae at different temperatures //Intern, j. of agriculture and biology.- V.9.- №6.- 2007.- P. 851-856.

138. Poinar G.O. Nematodes for biological control of insects //CRC, Boca Raton, FL.- 1979.

139. Poinar G.O. Mesidionema praecomasculatis gen. et sp. n. Mesidionematidae fam. n. (Drilonematoidea: Rhabditida), a nematode parasite of earthworms //Proc.Helminthol. Soc. Wash., D.C. V.45.- №1.-1978.-P. 97-102.

140. Poinar G.O. Entomogenous nematodes//J. E. Brillhiden. 1975.

141. Poinar G.O. Infection of the adult Lepidoptera by Neoaplectana carpocapsae (Nematoda) //J. Invertebr. Pathol. V.27.- 1975,- P. 413-414.

142. Poinar G.O., Himsworth P. T. Neoaplectana parasitism of larvae of greater wax moth, Galleria mellonella /Ibid. -V.9.- 1967.- P. 241-246.

143. Poinar G.O., Horn A. Survival and horizontal movement of infective stage Neoplectana carpocapsae in the field //J. Nematol. V.18.- 1986 .- P. 34-36.

144. Poinar G.O. Biology and taxonomy of Steinernematidae and Heterorhabditidae. In Entomopathogenic nematodes in biological control //R. Gauglar, H.K. Kaya -eds.- CRC Press, Boca Raton, Florida, 1990,- P. 23-62.

145. Poinar G.O. Description of Rhabditis (Rhabditoides) regina n. sp. (Nematoda : Rhabditidae) from the body cavity of beetle larvae in Guatemala//Revue de Nematologie.- V.14.-№1.- 1991.-P. 165-180.

146. Poinar G.O. Generation polymorphism in Neoaplectana glaseri Steiner (Steinernematidae: Nematoda), redescribed from Strigoderma arboricola

(Fab.) (Scarabaeidae: Coleoptera) in North Carolina //Nematologica.-V.24.- 1978.- P. 105-114.

147. Popiel I., Hominick W. Nematodes as biological control agents: Part II //Adv. Parasitol.- V. 31,- 1992,- P. 381 - 433.

148. Pye A.E., Burman M. Neoaplectana carpocapsae\ infection and reproduction in large pine weevil larvae, Hylobius abietis //Exp. Parasitol.-V.46.-1978.-P. 1-11.

149. Reed E.M, Carnei P.B. The suitability of nematode (DD-136) for control of some pasture insects //J. Invertebr. Pathol, 1967.- P. 9-196.

150. Renn N., Barson G., Richardson P. N. Preliminary laboratory tests with two species of entomophilic nematodes for control of Musca domestica in intensive animal units //Ann. Appl. Biol. №106.- 1985.-P. 229-233.

151. Sander H., Pezowicze E. New possibilities and perspectives in the use of parasitic nematodes in plant protction (Poznan, Poland) //J. Panstwowe Wydawnictwo RolniczeLesne Oddzial w Poznaniu (1979).- publ. 1980.- P. 345- 352.

152. Saringer G. Y., Lucskai A., Nadasy M., Fodor A., Sumegi Z.S., Klein

M. New experiments with entomopathogenic nematodes in Hungary //Intern. Symp. on crop protection, Jubilee of 50 years, Tuesday, May 5, 1998, Gent, Belgium.

153. Saringer G. Y., Lucskai A., Nadasy M., Fodor A., Sumegi Z.S., Klein M. New experiments with entomopathogenic nematodes in Hungary //Mededelingen -Faculteit Landbouwkundige en Toegepaste Biologische Wetenschappen, Universiteit Gent.- V.63.- №2.-1998.- P. 473-481.

154. Scheepmaker W., Geels F., Smits P., Griensven L., Shahina F., Maqbool M.A. Isolation of entomopathogenic nematodes (Heterorhabditidae and Steinernematidae) from Pakistan //Pak. J. Nematol., V.14.-1996.- P. 135-136.

155. Schmeige, D.C. The feasibility of using a neoaplectanid nematode for control of some forest insect pests //J. Econ. Entomol.- V.56.- 1963.- P. 427-431.

156. Selvan S., Gaugler R., Campbell J.F. Efficacy of entomopathogenic nematode strains against Popillia japónica (Coleóptera: Scarabaeidae) larvae. //J. of econ. entomol.- V.87.- 1993,- P. 353-359.

157. Selvan S., Grewal P.S., Leustek T., Gaugler R. Head chock enhances thermotolerance of infective juveniles insect-parasitic nematode, Heterorhabditis bacteriophora (Rhabditida: Heterorhabditidae) //Experiment.- V.52.-1996.- P. 727 - 730.

158. Shahina F., Maqbool M. A., Soomro M.H. Nematodes and their host association in northern areas Pakistan //Pak. J. Nematol.- V.16.- №1.1998.- P. 25-39.

159. Shapiro D. L., Tylka G. L., Lewis L.C. Effects of fertilizers on virulence of Steinernema carpocapsae //Appl. Soil Ecol. №3.- 1996. -P. 27-34.

160. Shapiro-Ilan D.I., Gouge D. H., Piggott S. J., Patterson J. F.

Application technology and environmental considerations for use of entomopathogenic nematodes in biological control //J. Biolog. Control.-V.38.-2006.- P. 124-130.

161. Sikora R.A., Salem I.E., Klingauf F. Susceptibility of Spodoptera littoralis to the entomogenous nematode Neoaplectana carpocapsae and the importance of environmental factors in an insect control programme //Med.Van de Faculteit Landbouw. Rijksun. Gent.- V.44.-1979.-P. 309 -321.

162. Sikora R.A., Salem I.E., Klingauf F. Susceptibility of Spodoptera littoralis to Neoaplectana carpocapsae, and observation on the effect of environmental factors on insect mortality levels //Proc. of the 4th Conf. of Pest Control.- 30 Septembe - 3 October.- Part II. Cairo, Egypt.- Acad, of Sci. Res. and Techn.- National Research Centre.- 1978.- 940 p.

163. Simons, W. R., Poiner, G. O. The ability of Neoaplectana carpocapsae (Steinernematodae : Nematoda) to survive extended period of desiccation //J. Invertebr. Pathol.- N22.- 1973.- P. 228-230.

164. Simons W.R., Poinar G.O. The ability of Neoaplectana carpocapsae, (Steinernematidae: Nematoda) to survive extended periods of desiccation //J. Invertebr. Pathol.- 1973.- P. 222- 228.

165. Smith C.M., Pantoja A., Robinson J.F. Development of the fall armyworm, Spodoptera frugiperda, strains from Louisiana and Puerto Rico //Envirom. Entomol.- V.16.- 1997.-P. 116-119.

166. Smith T.S., Graham M., Munn E.A., Newton S.F., Knox D.F., Coadwell W.J., Mcmichael P.D., Smith H., Smith W.D., Oliver J.J. Cloning and characterization of microsomal aminopeptidae from the intestine of the nematode Haemonchus contortus //Biochimia and Biophysica Acta.- 1997,- P. 295-306.

167. Theunissen J., Fransen J.J. Biological control of cutworm in lettuce //Med. Fac. Landbouww. Gent.- V.49.- №3.- 1984.- P. 771 - 776.

168. Timper P., Kaya H.K., Jaffee B.A. Survival of entomogenous nematodes in soil infested with the nematode -parasitic fungus, Hirsutella rhossiliensis (Deuteromycotina: Hyphomycetes) //Biol. Contr.- V. 1.-1991.- P. 42 - 50.

169. Vanninen I. Depletion of endogenous lipid reserves in Steinernema feltiae and Heterorabditis bacteriophora and effect on infectivity //In: Proc. Int. Colloq. Invertebr. Pathol. Microb. Control. 5th " 1990.-232 p.

170. Vyas R.V., Yadav D.N. Infectivity of entomopathogenic nematode, Steinernema glaseri to two soil dwelling Lepidopterans //Ann. of Biol.-V.8.-№l.-1992.-P. 59 - 63.

171. Wang J.X., Li L.Y. Entomogenous nematode research in China//Revue de Nematologie.- V.10.- №4.-1987,- P. 483 - 485.

172. White G.F. A method for obtaining infective nematode larvae from cultures //Science (Wash. D.C.).- №66.- 1927.- P. 302-303.

173. Williams B.C., Macdonald O.C. Critical factors required by the nematode, Steinernema feltiae for the control of the leafminers, Liromyza huidobrensis, Liriomyza broyoniae and Chronatomyia syngenesiae //Ann. Appl. Biol.-V.127.- 1995.- P.329-341.

174. Williams E.C., Walters K.F.A. Nematode control of leafminers: Efficacy, timing and temperature /Brighton Crop Protection Conference-Pests and Diseases.Farnham, Surrey, United Kingdom.-1994.- P.1079-1084.

175. Wolits W. M. Steinernema (Neoaplectana) and Heterorhabditis species //Manual of agriculture nematology.-New York.- M. Dekker., Nickle W.R., ed.-1991.-P 855-897.

176. Wolits W. M. Phylogenetic classification of the family Heteroderidae (Nematoda : Tylenchida)//System. Parasit.-. №7.1985.- P.295-328.

177. Womersley C.Z. Dehydration, survival and anhydrobiotic potential //In:Entomopathogenic in Biological Control.Gaugler R., Kaya H.K.,eds., CRC Press, Boca Raton, FL,Chap. 6.-1990.

178. Woodring J., Kaya H. Steinernematid and heterorabditid nematodes: a handbook of techniques //South.Coop.Ser. Bull.Arkans. Agric. Exp. Stn. Favetteville.V. 331.- 1988.- P.869 - 874.

179. Wright K.A. Peripheral sensilla of some lower invertebrates: the platyhelminths and nematoda//Microsc. Res. Tech.V .22.- 1992.- P.285-297.

180. Wright PJ. Cool temperature reproduction of steinernematid and heterirhabditid nematodes //J. Invertebr. Pathol., V.60.- №2.- 1992.- P. 148 -151.

181. Wu H.J., Chow Y.S. Susceptibility of Pieris rapae crucivora (Lepidoptera: Pieridae) to the imported entomogenous nematode, Steinernema feltiae //Bull, of the Ins. of Zoology, Academia. Sinica, V.28.-№4,- 1989.- P.237-244.

182. Yeh T., Aim S.R. Effects of entomopathogenic nematode species, rate of soil moisture, and bacteria on control of Japanese beetle (Coleoptera: Scarabaeidae) larvae in the laboratory //J. Econ. Entomol. V.85.- №6.-1992.-P. 2144-2148.

183. Yoshihara T. Effects of entomopathogenic nematode, Steinernemafeltiae (DD-136) on survival species of vegetable pests and related factors //Bulletin of the National Research Institute of Vegetables, Ornamental Plant and Tea. Series A V.4.- 1991.-P.15 - 29.

184. Zaki F.N. Field application of Steinernema feltiae in the form of baits against the greasy cutworm, Agrotis ipsilon in an okra field in Egypt //J. Anzeiger fur Schadlingskunde, Pflanzenschutz, Umweltschutz.-V.69.- №4,1996.- P.79-80.

185. Zimmerman R.J., Cranshaw W.S. Compatibility of three entomopathogenous nematodes (Rhabditida) in aqueous solutions of pesticides used in turfgrass maintenance //J. of Econom.Entomol.-V.83.-1990.-P. 97-100.

186. Zimmermann S., Sures B., Taraschewski H. Experimental studies on lead accumulation in the eel-specific endoparasites Anguillicola crassus (Nematoda) and Paratenuisentis ambiguous (Acanthocephala) as compared with their host, Anguilla anguilla /Arch Environ Contam.Toxicol.V.17.-1999.-P. 190-195.

Рекомендации производству

Для накопления инвазионных стадий энтомопатогенных нематод и получения их рабочих суспензий (3000 особей/мл) экономически целесообразно использовать в качестве субстрата личинок домашней мухи - М. domestica.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Ахмед М.А. Получение препаратов энтомопатогенных нематод и оценка их эффективности //Вестник РУДН.-№3.-2010.- С.

2. Заец В.Г., Ахмед М.А., Помазков Ю.И., ЕЬе^апу М.Е. Использование биодобавок для повышения эффективности энтомопатогенных // Защита и карантин растений.-№1.- 2012.-С.

3. Заец В.Г., Ахмед М.А., Помазков Ю.И., ЕЬе^апу М.Е. Влияние энтомопатогенных нематод на хлопковую совку при разных режимах удобрения //Ж. Защита и карантин растений.-№2.-2012.-С.