Оценка исходного материала фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.) для создания высокоэффективных растительно-микробных систем тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат сельскохозяйственных наук Барбашов, Максим Вячеславович

• Барбашов, Максим Вячеславович
• кандидат сельскохозяйственных наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Барбашов, Максим Вячеславович

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

ВВЕДЕНИЕ

1. ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БОБОВЫХ РАСТЕНИЙ С СИМБИОТИЧЕСКИМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ (обзор литературы)

1.1. Бобово-ризобиальный симбиоз

1.2. Симбиоз с эндомикоризными грибами 01отш Бр

1.3. Принципы селекции растений на взаимодействие с симбиотиче-

20

скими микроорганизмами

Заключение

2. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ, МАТЕРИАЛ И

29

МЕТОДЫ

2.1. Условия проведения исследований

2.2. Материал для исследований

2.3. Методы проведения исследований

3. ОЦЕНКА КОЛЛЕКЦИОННЫХ СОРТООБРАЗЦОВ ФАСОЛИ ПО МОРФОБИОЛОГИЧЕСКИМ ПРИЗНАКАМ И СИМБИОТИЧЕ- 42 СКИМ ПОКАЗАТЕЯМ

3.1. Морфобиологические и симбиотические особенности коллекционных сортообразцов фасоли

3.2. Клубенькообразующая способность сортообразцов фасоли

3.3. Нитрогеназная активность сортообразцов фасоли

3.4. Взаимосвязи основных хозяйственно полезных признаков фасоли

3.5. Кластерный анализ сортообразцов фасоли по основным хозяйст-

68

венно полезным признакам

4. ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ СТАБИЛЬНОСТЬ, ПЛАСТИЧНОСТЬ И АДАПТИВНОЙ ЦЕННОСТИ РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИ- у8

ПОВ ФАСОЛИ

4.1. Экологическая пластичность и стабильность сортообразцов фасо- 78 ли

5. СОЗДАНИЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ СОРТО-МИКРОБНЫХ

86

СИСТЕМ ФАСОЛИ

5.1. Отзывчивость сортообразцов фасоли на инокуляцию клубеньковыми бактериями и грибами арбускулярной микоризы

5.2. Биохимические особенности сортообразцов фасоли

5.2.1 Содержание белка в семенах

5.2.2 Аминокислотный состав семян фасоли

6. СОЗДАНИЕ НОВЫХ ВЫСОКОПРОДУКТИВНЫХ ЛИНИЙ ФАСОЛИ, ОТЗЫВЧИВЫХ НА ИНОКУЛЯЦИЮ КЛУБЕНЬКОВЫМИ БАКТЕРИЯМИ И ГРИБАМИ АРБУСКУЛЯРНОЙ МИКОРИ-

104

ЗЫ

ВЫВОДЫ

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка исходного материала фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.) для создания высокоэффективных растительно-микробных систем»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Способность бобовых растений, в частности фасоли, формировать симбиозы с агрономически полезными микроорганизмами позволяет им существенно обогащать почву азотом, улучшать водный статус растений, снабжать необходимыми элементами минерального питания (труднодоступным фосфором и азотом), повышать устойчивость к болезням (Борисов с соавт., 2011).

Выявление общих генов, необходимых для формирования этих симбиозов, привело к заключению, что бобовые обладают единой генетической системой, контролирующей развитие многостороннего симбиоза: бобовое растение + грибы арбускулярной микоризы + полезные ризосферные/клубеньковые бактерии. Этот факт очень важен для дальнейшего развития симбиотической селекции, открывает возможности расширения адаптивных свойств растений, придания им новых метаболических функций и позволяет получать повышенные урожаи экологически чистого высокобелкового растительного сырья (На-умкина с соавт., 2011).

В связи с вышеизложенным, исследования по изучению исходного материала фасоли обыкновенной (Phaseolus vulgaris L.) и использованию его для создания высокоэффективных растительно-микробных систем относятся к приоритетным в науке и являются особенно актуальными.

Решению этих вопросов посвящена диссертационная работа, выполненная в рамках заданий 08.03.02. «Изучить генетический механизм взаимодействия растения-хозяина при симбиотических взаимоотношениях у гороха» и 02. Об. 02. «Создать растительно-микробные системы на основе изучения на уровне нанопространства и сигналинга генетической интеграции агрономически полезных микроорганизмов и растений» Программ фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению агропромышленного комплекса Российской Федерации на 2006...2010 гг. и 20112015 гг. Российской академии сельскохозяйственных наук, гранта РФФИ 09-04-99036-р_офи.

Цель исследований - выявление морфобиологических и симбиотиче-ских особенностей коллекционных сортообразцов фасоли и выделение исходного материала с высоким симбиотическим потенциалом для создания высокоэффективных растительно-микробных систем.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

- изучить изменчивость и взаимосвязи морфобиологических признаков и симбиотических показателей у коллекционных сортообразцов фасоли в естественных условиях и при взаимодействии с ризобиями и грибами арбуску-лярной микоризы.

- оценить адаптивную способность и стабильность генотипов фасоли в изменяющихся условиях среды;

- изучить биохимические особенности сортообразцов фасоли;

- выделить линии фасоли, сочетающие высокую семенную продуктивность с повышенной симбиотической активностью.

Научная новизна исследований. Впервые в условиях северной части Центрально-Черноземного региона России изучена изменчивость основных морфобиологических признаков и симбиотических показателей сортообразцов фасоли различного эколого-географического происхождения; выделены источники высокой продуктивности и симбиотической активности. Получены новые данные о клубенькообразующей способности и симбиотической деятельности фасоли при инокуляции ризобиями и грибами арбускулярной микоризы. Проведена оценка экологической пластичности, стабильности и адаптивной ценности сортообразцов. Выявлены биохимические особенности генотипов фасоли. Сформированы эффективные сорто-микробные системы. Выявлен селекционный материал с высокой урожайностью и симбиотической активностью.

Практическая значимость. Выделен ценный исходный материал для селекции фасоли на повышение симбиотической активности. Предложен новый подход для создания высокоэффективных растительно-микробных систем, сочетающих высокую семенную продуктивность с отзывчивостью на

инокуляцию штаммами ризобий и грибов арбускулярной микоризы. Выделены линии фасоли, обладающие повышенной семенной продуктивностью в сочетании с отзывчивостью на тройной симбиоз.

Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения изменчивости и взаимосвязей морфобиологи-ческих признаков и симбиотических показателей у сортообразцов фасоли, позволившие выявить формы, ценные для создания высокоэффективных растительно-микробных систем.

2. Оценка адаптивной способности и стабильности генотипов в изменяющихся условиях среды для выделения форм с высокой продуктивностью и симбиотической активностью.

3. Результаты изучения биохимических особенностей генотипов фасоли.

4. Созданные автором новые линии фасоли, сочетающие повышенную семенную продуктивность и симбиотическую эффективность.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Ученых советах ГНУ ВНИИЗБК Россельхозакадемии (2009, 2010, 2011 гг.); региональных научно-практических конференциях молодых ученых, аспирантов и студентов «Неделя науки» ОрелГАУ (2009, 2010, 2011 гг.); Всероссийской научно-практической конференции «Аграрная наука - сельскому хозяйству» (Курск, 2009); Всероссийской конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России» (Сергиев Посад, 2009).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 6 печатных работах, в том числе двух в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Личное участие автора в проведении экспериментов составляет 100%. Закладка полевых, вегетационных и лабораторных опытов, анализ и обобщение результатов исследований были проведены автором лично.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах компьютерного текста, состоит из введения, 6 глав, выводов, реко-

мендаций для селекционной практики, включает 32 таблицы, 13 рисунков и 15 приложений. Список использованной литературы состоит из 200 наименований, в том числе 41 на иностранных языках.

Автор выражает искреннюю благодарность директору ГНУ ВНИИЗБК Россельхозакадемии, доктору сельскохозяйственных наук, профессору Зоти-кову В.И., заведующей лабораторией генетики и биотехнологии, кандидату сельскохозяйственных наук Суворовой Г.Н., заведующему лабораторией селекции зернобобовых культур, кандидату сельскохозяйственных наук Кон-дыкову И.В., ведущему научному сотруднику лаборатории селекции зернобобовых культур, кандидату сельскохозяйственных наук Мирошниковой М.П. за консультации по обсуждаемым в данной работе вопросам.

Автор признателен кандидатам биологических наук, ведущим научным сотрудникам лаборатории генетики и биотехнологии ВНИИЗБК Васильчи-кову А.Г и Гурьеву Г.П. за сотрудничество и помощь в проведении исследований.

ГЛАВА 1. ОСОБЕННОСТИ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БОБОВЫХ РАСТЕНИЙ С СИМБИОТИЧЕСКИМИ МИКРООРГАНИЗМАМИ (обзор

литературы)

1.1. Бобово-ризобиальиый симбиоз

Растительно-микробные взаимодействия являются одной из интереснейших и сложнейших проблем биологии. В фитоценозах за счет симбиоза с микроорганизмами растения обеспечиваются минеральным питанием, защитой от патогенов и растительноядных животных, а иногда регуляцией развития. Эти функции выполняют различные внутриклеточные симбионты (эндо-микоризные грибы, клубеньковые бактерии), эндофиты тканей надземных и подземных органов (азотфиксаторы Äcetobacter, Azoarcus или спорыньевые грибы) (Лутова, Проворов, Тиходеев, Тихонович, 2000; Белимов, 2008).

Понятие «симбиоза» как феномена совместной жизни разных организмов было впервые предложено швейцарским ботаником А. Де Бари в 1879 году и включало как паразитизм, так и мутуализм. Впоследствии это понятие наполнялось различными значениями, сузившись до мутуалистических отношений (Jacob, 1982). На современном этапе развития знаний симбиоз определяется как долговременное сожительство двух организмов, относящихся к разным видам, которое сопровождается существенным возрастанием экологического потенциала хотя бы одного из партнёров (Тихонович, Проворов, 1998).

Симбиозы интересны как пример специализированных взаимодействий, связанных с глубокими физиологическими адаптациями, а их изучение вносит важный вклад в понимание природы растительно-микробных отношений и их роли в биосфере (Квиспел, 2002).

Из всех типов симбиозов микроорганизмов с растениями наиболее изучен симбиоз бобовых растений с клубеньковыми бактериями (ризобиями), который возник в меловом периоде, то есть 60...70 млн. лет назад - в эпоху дивергенции основных семейств цветковых (Doyle, Doyle, 1997). Это связано с

практической ценностью данного типа симбиоза и относительной легкостью исследования клубеньковых бактерий (Баймиев, 2006).

Ризобии {АгогЫгоЫит, ВгадугЫгоЫит, МеяогЫгоЫит, ЯЫгоЫит, 57-погЫгоЫит) - факультативные симбионты. Большинство бобовых культур может полноценно развиваться за счет питания связанным азотом, а популяции ризобий - стабильно существовать в почве в отсутствии растения-хозяина. При взаимодействии с хозяевами ризобии индуцируют процесс клу-бенькообразования, тесно связанный с основными функциями растений -цитодифференцировкой и органогенезом, азотным и углеродным обменом, защитой от патогенов и регуляцией развития (Тихонович, Проворов, 1998; Проворов, 2009).

Специфические органы фиксации азота - корневые (реже стеблевые) клубеньки образуются в результате взаимодействия бобовых растений с бактериями родов ЯЫгоЫит, Вга&ШгоЫит и АгогЫгоЫит. Наиболее распространенный способ проникновения их в корень - через корневые волоски: бактерии индуцируют закручивание верхушек корневых волосков, затем формируется структура, называемая инфекционной нитью, которая прорастает через корневой волосок и кортекс. Из инфекционной нити высвобождаются бактерии, превращаясь, в составе симбиосом, в азотфиксирующие бактероиды. На некотором расстоянии от растущей инфекционной нити в коре корня индуцируются клеточные деления, дающие начало меристеме и при-мордию клубенька (Курчак, Проворов, Симаров, 1995).

В изучении механизмов симбиоза к настоящему времени достигнуты большие успехи. Инфекционный процесс хорошо исследован на микроскопическом уровне, изучены биохимия, генетика и частично физиология процесса азотфиксации, охарактеризованы многие бактериальные и растительные гены и их продукты, участвующие в симбиозе (Борисов, Цыганов, Колычева, 1994; Овцына, 1997; Сидорова, Шумный, Власова, 1997; Сидорова, Ужинцева, 1992; 1994; Тихонович, Борисов, Цыганов и др., 2004; Федорова, Моржина, Филатов, 1995).

Растительные сигналы регулируют экспрессию микробных генов, участвующих как в ризосферной конкуренции (хемотаксис), так и в специфических взаимодействиях {nod и vir) гены. К настоящему времени в молекулярном диалоге между партнерами по симбиозу наиболее полно охарактеризованы два этапа. Первый этап - это выделение растением сигналов флавоно-идной природы, которые посредством взаимодействия с продуктом регуля-торного гена nod D стимулируют координированную экспрессию nod генов бактерии (Peters et. al., 1986; Firmin et. al., 1993). Второй этап - это синтез продуктами nod генов молекул Nod факторов — олигомеров N - ацетилглюко-замина с различными заменителями, которые вызывают морфологические изменения в корне и стимулируют образование клубенька (Fisher, 1994). Синтез и действие Nod - факторов описаны весьма подробно (Schultze, Коп-dorosi, 1998; Овцына, 1997; Овцына, Тихонович, 2004). Именно Nod факторы во многом определяют специфичность взаимодействия партнеров по симбиозу (Spaink et. al., 1991; Truchet et. al., 1991). Специфичность взаимодействия означает, что каждый растительный штамм способен образовывать эффективно функционирующие клубеньки только на определенном числе видов растений-хозяев. Виды растений, восприимчивые к инфекции одним и тем же видом или биотипом ризобий относятся к одной кросс - инокуляционной группе: Medicago, Melilotus, Trigonella - с Rhizobium melilotï, Trifolium - с Rhizobium bv. trifolii и т.д. В кросс-инокуляционную группу Rhizobium legu-minosarum bv. viciae входят виды родов Lathyrus, Lens, Pisum и Vicia. Внутри кросс-инокуляционной группы гороха существует и более узкая специализация. Так, формы гороха афганского происхождения не заражаются Западно- Европейскими и Северо - Американскими штаммами Rhizobium legu-minosarum (Кругова, Остапенко, Мандровская 1994).

Количество симбиотически фиксируемого азота и его доля в азотном балансе растений зависит от многих генетических и средовых факторов, в том числе от вида растений.

По способности преимущественно формировать урожай за счет определенных источников азота Н.А. Проворов (1996) все бобовые делит на три группы: 1. - с преобладанием автотрофного типа питания азотом (горох, вика посевная, кормовые бобы и др.): эти растения формируют урожай в основном за счёт минерального азота, и вклад биологически фиксированного азота в общем балансе у них не превышает 30%; 2. - без заметного преобладания одного типа питания над другим (фасоль, соя): доля биологического азота в этих растениях составляет от 30 до 60%; 3. - с преобладанием симбиотрофно-го типа питания (клевер, вика мохнатая, козлятник восточный, люцерна посевная): доля биологического азота в этих растениях превышает 50%. По мнению И.А. Тихоновича (2000) такое положение объясняется давностью вовлечения определенного вида растений в культуру.

Одним из факторов, ограничивающих эффективность симбиотической азотфиксации, является её высокая энергетическая стоимость, покрываемая за счет поступающих в клубеньки продуктов фотосинтеза. Бактероиды получают от растения углерод в форме дикарбоновых кислот, расщепляемых в цикле Кребса с целью выработки АТФ. Лимитирующей стадией этого процесса является перенос дикарбоновых кислот через перепактероидную мембрану, осуществляемый бектериальной пермеазой DctA. Введение в клубеньковые бактерии дополнительных копий генов, кодирующих этот фермент, может повысить нитрогеназную активность клубеньков в 1,5...2,0 раза (Bos-worth, 1994). В вегетационных опытах это может привести к возрастанию количества азота, накапливаемого в зеленой массе, на 70...80%. Однако сама биомасса растений возрастает при этом только на 15...20%, подтверждая факт неэффективного усвоения сортами фиксируемого азота и существенное повышение продуктивности симбиоза возможно только в процессе параллельной селекции обеих партнеров (Проворов с соавт., 2002; Проворов. 2005).

Многими отечественными и зарубежными учеными было установлено, что многолетние кормовые бобовые культуры обеспечивают более интенсивную фиксацию азота, чем однолетние зерновые бобовые культуры (табл. 1).

Таблица 1 - Азотфиксирующая активность и её экономический эффект у различных бобовых культур (по данным Вэнс, 2002).

Виды бобовых растений Среднее количество фиксируемого N2 (кг на га за сезон) Средний % фикси-рованого азота в растениях Эквивалентная стоимость азотных удобрений, в долларах США

Кормовые культуры

Desmodium sp. 200 85 140.0

Medicago sativa 180 70 126.0

Trifolium, repens 172 75 120.4

Trifolium pretense 170 59 119.0

Vicia sativa 130 70 91.0

Lotus corniculatus 92 55 64.4

Зерновые культуры

Lupinus angustifolius 170 65 119.0

Vicia faba 151 80 105.7

Glycine max 120 53 84.0

Arachis hypogaea 114 57 79.8

Lens culinaris 100 63 70.0

Vigna angularus 80 70 56.0

Pisum sativum 72 35 50.4

Phaseolus vulgaris 65 40 45.5

Эти различия могут быть связаны с тем, что многолетние кормовые бобовые растения образуют недетерминированные клубеньки, которые могут фиксировать азот в течение продолжительного времени (Орлов, Орлова, Гре-бенюк, 1983).

Исследования в области генетического контроля за продуктивностью растения - хозяина при взаимодействии с биотическими факторами, особенно с микроорганизмами, у бобовых культур органически вытекают из большого количества работ, в которых устанавливается факт неоднозначной реакции видов и сортов как на различные штаммы ризобий, так и на фитопато-генную микрофлору (Вавилов, 1967; Кашаева, Садыков, 1991; Катуков, 1994; Курчак с соавт.,1995а; Кругова с соавт.,1994; Остапенко с соавт,.1993; Проворов, Симаров, 1986; Сухоносенко, Великанов, 1995; Фесенко с соавт.,

1994; Яньков, Сердюк, Проскурякова, 1992; Hardarson,et.al.,1979, 1993 и другие).

Важное значение этих работ состоит в том, что они дают новый импульс исследованиям в области микробиологии, фитопатологии, физиологии и, конечно, частной генетики и селекции (Тихонович, Проворов, 1998; Луто-ва, Проворов, Тиходеев с соавт., 2000).

К настоящему времени у ряда бобовых растений (горох, соя, клевер, люцерна, фасоль, нут, арахис, кормовые бобы, вигна, донник, лядвенец) выявлено более 400 генов, участвующих в становлении и функционирвоании симбиоза. Наибольшее число симбиотических мутантов и генов было обнаружено у гороха посевного (Pisum sativum L.), который является традиционным объектом для разработки ряда направлений генетики растений. Наличие обширных генетических коллекций и детальных хромосомных карт позволило локализовать многие симбиотические гены гороха (Темных, 1994; Федорова М.Ю., 1993; Тихонович, 1991; Ляпкова, 1990; Бободжанов, 1974; Борисов, Розов, Цыганов, 1994; Заленский, Козик, Схерев, 1991; Сидорова, Журба, 1990; Сидорова, 1981,1988,1989; Сидорова, Шумный,1999, 2003; Сидорова,

Ужинцева, 1992, 1994; Козик, Матвиенко, Мень, 1992; Ужинцева, 1989). Од-

12 0

нако большой размер горохового генома (2,5 10" г на гаплоидный набор хромосом) затрудняет молекулярное картирование и клонирование его симбиотических генов (Борисов, 1999; Борисов, Проворов, Тихонович и др. 1998).

Картирование симбиотических генов бобовых проводилось на различных видах бобовых с использованием, в основном, молекулярных маркеров в виду неразработанности генетических карт, основанных на классических морфологических маркерах. Примерами таких работ могут служить картирование гена nts-1 сои {Glycine max (L.) Merr.) (Kolchinski et al., 1997), гена in6 тетраполидной люцерны {Medicago sativa L.) (Kiss et al., 1995) и нескольких симбиотических генов фасоли (Phaseolus vulgaris L.) (Nodari et al., 1993).

1.2. Симбиоз с эндомикоризными грибами Glomus sp.

В отличие от азотфиксирующих клубеньков, образуемых лишь некоторыми двудольными (единственным небобовым растением, образующим клубеньки с ризобиями считается Parasponia (сем. Ulmaceae), арбускулярная микориза (AM) - универсальный растительно - микробный симбиоз: его формирует, по разным подсчетам, 75-90% видов надземных растений. Для AM - грибов (класс Zygomycetes, порядок Glomales) симбиоз является обли-гатным: вне растения они существуют лишь в форме покоящихся спор. Для растений, использующих AM, главным образом как источник фосфатов, симбиоз является, как правило, "экологически облигатным" (Проворов, Борисов, Тихонович, 2002), то есть необязательным для прохождения онтогенеза, но необходимым для выживания в типичных для данного растения экологических условиях. Он наиболее важен для деревянистых и кустарниковых форм, а также для растений со слабо развитыми корневыми волосками и низкой поглотительной способностью корней (Селиванов, 1981; Муромцев с соавт., 1985; Каратыгин, 1993; Gianinazzi-Pearson, 1996). У микоризованных растений резко усиливается поглощение из почвы фосфора, а также кальция, азота, калия, натрия, магния, железа, марганца, меди, бора, цинка, алюминия и серы (Муромцев, Маршунова, 1989).

Арбускулярная микориза (AM) - намного более древняя система, чем бобово-ризобиальный симбиоз. В научной литературе указывается, что способность к её образованию возникла на заре эволюции наземных растений (400-500 млн. лет назад). Этот вывод основан на том, что, во-первых, образование арбускулярной микоризы характерно для подавляющего большинства современных и вымерших надземных растений (Каратыгин, 1993) и во-вторых - AM - грибы составляют монофилетическую группу, возникновение которой (по данным 16S рРНК) датируется тем же приодом, что и появление наземной флоры. Существует предположение, что сам выход растений на сушу стал возможным благодаря симбиозу с грибами, снабжавшими своих

лишенных настоящих корней хозяев водой и минеральными веществами (Проворов, Борисов, Тихонович 2002).

Непрекращающийся интерес с эндомикоризе обусловлен широким распространением эндофитов в большинстве почв разных климатических зон, в том числе России, их способностью инфицировать важнейшие сельскохозяйственные культуры и вследствие этого значительно улучшать минеральное, особенно фосфорное питание (Муромцев с соавт., 1985; Селиванов, 1981).

Значимость этого явления особенно четко проявляется у растений с заниженной начальной фазой роста на почвах с низким содержанием подвижного фосфора. В отсутствие микоризы рост и развитие растений затормаживается. Микоризные же растения в этих условиях не испытывают стресса, что связано со способностью эндофитов усиливать поступление фосфора в растения и влиять на его гормональный статус (Муромцев, Маршунова, Павлова, 1985).

Исследования растительного генетического контроля данного типа эн-досимбиотической системы сопряжено с определенными трудностями. Поэтому исследования в данном направлении были начаты после первого сообщения о возможности обнаружения мутантов, не формирующих микоризу, среди мутантов с дефектами развития азотфиксирующего симбиоза (Duc et al., 1989).

В настоящее время горох посевной является наиболее изученным видом бобовых растений в отношении растительного контроля развития эндо-микоризного симбиоза так же, как и в отношении бобово-ризобиального симбиоза - именно у гороха получено наибольшее количество мутантов и идентифицировано наибольшее количество растительных генов, контролирующих формирование арбускулярной микоризы (Наумкина, Агаркова, Беляева, 2006). До сегодняшнего времени вся терминология генетических и молекулярных исследований арбускулярной микоризы базируется на разработанной терминологии исследователей бобово-ризобиального симбиоза, на-

пример, микоризииы - молекулярные продукты, синтезируемые растением

при развитии эндомикоризы; Мус" - неспособность формировать микоризу, Мус+/" - сниженная способность к формированию внутрикорневых структур гриба и т.д. (Gianinazzi-Pearson, 1996). Система фенотипических кодов для описания различных стадий развития арбускулярной микоризы, существующая сегодня, безусловно, будет подвергаться ревизии и усложняться при накоплении данных о генетическом контроле растения над развитием данного симбиоза.

Первым видимым эффектом взаимодействий между растением и эндо-микоризным грибом при развитии симбиоза является ветвление гиф гриба, следующее за формированием аппрессориума, специальной структуры, обеспечивающей прикрепление микросибионта к поверхности корня. Именно на последующей стадии - рост инфицирующих гиф, колонизирующих корень -были обнаружены первые аномалии развития, детерминируемые мутациями генов растения. Эта стадия была обозначена Мус 1 (Gianinazzi-Pearson, 1996). На сегодняшний день показано, что Мус"1 фенотипом обладают мутанты гороха по генам sym8, sym9, syml9 и sym30 (Duc et al., 1989; Gianinazzi-Pearson, 1996). Все мутанты по этим генам характеризуются фенотипом Нас". Таким образом, идентифицирована серия генов, контролирующих ранние стадии развития обоих симбиозов бобовых.

Блоком развития микоризы на этой же стадии характеризуются линия бобов (Vicia faba L.), несущая специфическую природную аллель гена sym-1, детерминирующую штаммспецифичный мутантный фенотип в отношении

развития симбиотических клубеньков - Nocí или Fix~ (Duc et al., 1989). Далее было показано, что линия тетраплоидной люцерны (Medicago sativa L.)

MNIN-3811 (Нас" фенотип при развитии симбиотических клубеньков) и серия мутантов по двум симбиотическим генам, полученным на диплоидной люцерне (Medicago truncatula Gaertn.) характеризуются также фенотипом

Мус"1 при формировании эндомикоризы (Sagan et al., 1995).

Гены, контролирующие стадию Coi (инфицирование коры корня, от англ. "cortex invasion"), были идентифицированы только у лядвенца {Lotus japonicus (Regel) К. Larsen). Показано, что у мутантов по генам sym2, sym3, syní4 микросимбионт способен колонизировать эпидермальный слой клеток, но инфекция абортируется при росте гиф вглубь кортикальных клеток (Wegel

et al., 1998). Мутации в данных генах детерминируют Nod" фенотип при развитии азотфиксирующих клубеньков.

Следующей стадией развития микоризы является так называемый ин-трацеллюлярный (внутрь клеток, а не между ними) рост ответвлений гиф и формирование арбускул. У гороха был описан мутант RisNod24 {sym36\ у которого наблюдается абортация микоризных гиф в начале процесса интер-целлюлярного роста и формирования арбускулы (Sagan et al., 1994; Gianinazzi-Pearson, 1996). Таким образом, стадия развития эндомикоризы связанная с формированием арбускул получила обозначение Мус (Gianinazzi-Pearson, 1996). В отношении азотфиксирующего симбиоза мутант RisNod24 {sym36) характеризуется нарушениями на стадии роста инфекционной нити в клетке корневого волоска (фенотип Ith"). У фасоли обыкновенной также был описан мутант R69, характеризующийся блоком формирования арбускул (Мус"2). В отношении азотфиксируюшего симбиоза данный мутант характеризуется отсутствием инфицированных бактериями клеток клубенька

(Ваг"), то есть наблюдаются аномалии функционирования инфекционных нитей.

А.Ю. Борисовым (1999) был описан Nod" мутант гороха SGENod"-2 {syml4), характеризующийся снижением встречаемости микоризной инфекции в корнях

(Мус+/") и эффективности функционирования эндомикоризы, при этом у него наблюдались все морфологически различимые внутрикорне-вые сруктуры гриба. В отношении азотфиксирующего симбиоза данный мутант характеризуется фенотипом Iti". Различными нарушениями процесса формирования эндомикоризы характеризовались также неаллельные мутан-

ты гороха SGEFix"-l (sym40), SGEFix"-2 (sym33) и RisFixA. Наиболее критичные отклонения фенотипа от линии „"дикого типа" наблюдались у линий

SGEFix"-2 (,sym33) и RisFixA, фенотип которых может быть определен, как Мус+/". В отношении симбиоза с клубеньковыми бактериями данные мутанты характеризуются нарушениями формирования инфекционных нитей.

Приведенные выше данные об идентификации симбиотических генов бобовых, контролирующих развитие обоих типов эндосимбиозов, и сравнение возраста данных симбиотических систем (эндомикориза - 400 млн. лет (Pirozynski, Dalpe, 1989), азотфиксирующий - 70-80 млн. лет (Sprent, 1994) подтверждают гипотезу о том, что генетическая система бобовых, контролирующая развитие бобово-ризобиального симбиоза, в значительной степени эволюционировала на основе генов, контролирующих более древнюю эндомикоризную систему (LaRue, Weeden, 1994; Gianinazzi-Pearson, 1996).

Следует отметить, что последовательность действия генов в развитии этих двух симбиотических систем не является колинеарной. Например, растительные мутанты, с нарушением стадий Нас (скручивание корневых волосков) и Ith (развитие инфекционной нити в корневом волоске) имеют блоки в развитии микоризы, а мутанты с нарушенной промежуточной стадией Iti (инициация инфекционной нити) и, заблокированные на более поздних, чем Ith, стадиях Itn и Idd, - характеризуются только снижением интенсивности развития внутрикорневых структур гриба и/или снижением эффективности функционирования данного типа эндосимбиоза. Можно предположить, что в процессе эволюции бобово-ризобиального симбиоза возникли дополнительные (по сравнению с микоризой) стадии симбиотического взаимодействия, которые обеспечивают специфические взаимодействия между партнерами данной системы симбиоза (Проворов, 1996).

Представленные выше данные о существовании общих генов, функционирующих в ходе развития симбиотических клубеньков и эндомикоризы, обосновывают также необходимость рассматривать генетическую систему бобовых, контролирующую два эндосимбиоза, как единую, контролирую-

щую трехсторонний (англ. аналог tripartite) симбиоз - бобовое растение + эн-домикоризный гриб + клубеньковые бактерии. Последнее заключение является очень важным для возможного использования трехстороннего симбиоза в сельскохозяйственной практике.

Учеными были идентифицированы серии растительных и бактериальных генов, контролирующих развитие азотфиксирующего симбиоза бобовых (Caetano-Anolles, Gresshoff, 1991; 1994; Борисов с соавт., 1998). Тем не менее, до последнего времени знание о генетических системах симбионтов, обеспечивающих эффективное взаимодействие, было недостаточным для использования в селекционных программах бобовых с целью увеличения их симбио-тического потенциала (Phillips, Teuber, 1992). В дополнение было показано, что в процессе селекции коммерческие сорта бобовых "теряли" ценные для взаимодействий с клубеньковыми бактериями (и, предположительно, с микоризными грибами тоже) аллели симбиотических генов .

Почти сенсационным явилось первое сообщение о том, что часть генов необходимых для развития азотфиксирующего симбиоза гороха посевного {Pisum sativum L.) и кормовых бобов (Vicia faba L.), также участвует в контроле развития эндомикоризы (Duc et al., 1989). Затем, такие гены были обнаружены и у других видов бобовых растений: люцерны (Medicago sativa L.) (Bradbury et al., 1991), диплоидной люцерны {Medicago truncatula Gaertn.) (Sagan et al., 1995) и фасоли {Phaseolus vulgaris L.) (Shiztliffe, Vessey, 1996)). В дополнение, было показано, что серия одних и тех же молекулярных растительных продуктов синтезируется в ходе становления обеих симбиотических систем (Gianinazzi-Pearson, 1996).

Данные, представленные выше, свидетельствуют о том, что два эндо-симбиоза бобовых растений, являясь эволюционно родственными, имеют много общих генетических и молекулярных механизмов становления и, следовательно, должны рассматриваться как трехсторонний симбиоз: растение-гриб-бактерии. Следовательно, в настоящее время появились теоретические предпосылки идентификации (создания) генотипа одного из видов бобовых

растений (например, гороха посевного (Pisum sativum L.) с высоким симбио-тическим потенциалом взаимодействия с обоими эндосимбионтами (Сидорова, Шумный, 1999).

Следует отметить, что в мире существует только один пример попытки создания такой высокопродуктивной симбиотической системы с использованием бобового растения Anthyllis cytisoides L. (Requena et al., 1997). Результаты упомянутой работы выглядят многообещающими для создания высокопродуктивных растительно-микробных ассоциаций с целью восстановления плодородия почв в полупустынных районах юго-востока Испании.

1.3. Принципы селекции растений на взаимодействие с симбиоти-ческими микроорганизмами

Известно, что современная селекция наряду с традиционными запросами производства (продуктивность, устойчивость к неблагоприятным факторам, скороспелость, технологичность и т.д.) ориентируется на развивающиеся в мире новые тенденции использования культур и новые технологии их переработки. При этом при создании сорта любого направления использования должен учитываться агроэкологический принцип, так как в условиях нашей страны с её огромной территорией и разнообразием почвенно-климатических условий значение адаптированных сортов особенно велико (Жученко, 2003, 2004).

Адаптация растений к условиям внешней среды путем симбиотиче-ских взаимодействий с микроорганизмами является одним из фундаментальных свойств высших растений (Возняковская, 1969). Обладая способностью полностью обеспечивать себя углеродом и энергией, получаемыми в процессе фотосинтеза, большинство растений испытывает недостаток во многих элементах минерального питания, в первую очередь - в азоте и фосфоре. Поэтому симбиозы с микроорганизмами, фиксирующими азот (ризобии, акти-номицеты, цианобактерии, эндофитные и ризосферные бактерии) или оптимизирующими получение питательных веществ из почвы (микоризные гри-

бы), характерны для подавляющего большинства растений (Лутова, Прово-ров, Тиходеев, Тихонович, 2000). Кроме того, многие растения поддерживают в своих тканях или на поверхности микроорганизмы, которые регулируют развитие хозяина путем выработки фитогормонов, защищают его от фитофагов благодаря синтезу токсинов, либо подавляя развитие патогенов (Tikhono-vich, Lugtenberg, Provorov, 2004).

К сожалению, созданная человеком культурная флора характеризуется резким снижением природного симбиотического потенциала (Тихонович, Проворов Н.А., 2003). Следствием этого является необходимость восполнять утраченные симбиотические функции растений путем использования агро-химикатов (удобрения, средства защиты, регуляторы роста), которые являются одним из основных источников загрязнения окружающей среды. Поэтому создание систем устойчивого сельского хозяйства (sustainable agriculture), с которым экологи не без основания связывают выживание человека и сохранение биосферы, немыслимо без восстановления и преумножения симбиотического потенциала культурных растений (Тихонович, Проворов, 2005; Vasilchikov, 1996; Bloemberg, Lugtenberg, 2001; Halal, 1997).

Практическая селекция фасоли направлена на преодоление таких негативных с точки зрения сельскохозяйственного производства биологических особенностей культуры, как индетерминантный рост, неравномерность созревания, полегаемость растений, растрескиваемость бобов и осыпаемость семян, поражаемость болезнями, низкое прикрепление нижнего боба. Все эти признаки обуславливают нестабильную урожайность, приводят к снижению качества зерна, что значительно сдерживает её производственное распространение (Русских, 2008).

Следует отметить, что длительное время внимание генетиков и селекционеров было обращено на изучение надземных признаков растения: морфологии стебля, листьев, цветков, бобов; вегетационного периода; реакции на фотопериод; устойчивости к заболеваниям; факторов, влияющих на продуктивность и так далее. И лишь в последние годы предметом пристального

изучения стали признаки, связанные с развитием корневой системы, образованием корневых клубеньков и азотфиксацией (Сидорова, 2003).

В настоящее время в селекции зернобобовых культур становится актуальной разработка нового направления - селекции на повышенную симбио-тическую активность.

К сожалению, современные сорта зернобобовых культур интенсивного типа в силу генетических особенностей не всегда способны к взаимодействию с полезной почвенной микрофлорой. Как показывают ученые из ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии у большинства бобовых культур потенциал симбиотической азотфиксации в модельных опытах в 3...4 раза превышает таковой в производственных условиях, то есть реально достигаемый (Кожемяков, Тихонович, 1998). Установлено, что примитивные сорта и дикорастущие формы гороха превосходят сорта интенсивного типа по азотфикси-рующей активности. По всей видимости, это связано с тем, что селекцию культуры проводили на фоне достаточного, а часто и избыточного содержания азота, что привело к отбору генотипов «склонных» к энергетически менее затратному автотрофному питанию (Проворов, Тихонович, 2005).

В то же время за счет селекции бобовых и совершенствования технологии применения микробных препаратов интенсивность симбиотической азотфиксации можно увеличить не менее чем на 300% (Vance, 1998). У дикорастущих форм и местных сортов гороха при инокуляции грибами арбу-скулярной микоризы средняя прибавка по массе растений составила +356,9%, а по накоплению в них фосфора - +184,0% (Якоби с соавт., 2000). У современных сортов гороха интенсивного типа эти прибавки составляют +12,3% и +42,6%. По мнению И.А. Тихоновича и H.A. Проворова (2003) актуальной задачей современной селекции является восстановление природного симбиотического потенциала, утраченного в ходе адаптации к условиям агроценоза. Для этого необходима серьезная перестройка селекции растений: она должна перейти от создания сортов интенсивного типа, ориентированных на использование минеральных удобрений и химических средств защи-

ты, к конструированию «адаптивных» сортов, формирующие высокую продуктивность за счёт биологического потенциала самих растений, достигнутого в ходе длительной коэволюции с окружающими организмами. При этом для улучшения симбиотических свойств растений должны быть использованы вавиловские принципы селекции: максимальное использование дикорастущих форм, сохранивших высокий симбиотический потенциал (Проворов, 2005). Наиболее ценным источником этого материала является параллельное варьирование растений и их микросимбионтов, наблюдаемое в центрах происхождения бобовых культур. Так, на Ближнем Востоке - в центре происхождения гороха- были выявлены мелкосемянные формы, неспособные заражаться штаммами ЯЫгоЫит \eguminosarum Ьу. угсгае европейского происхождения (Говоров, 1928). Растения этих генотипов дефектны по наиболее ранним стадиям сигнального взаимодействия, связанным с рецепцией N0(1-факторов (Овцына, Тихонович, 2004). Бактериальные штаммы, инокулирую-щие ближневосточные формы гороха, были выделены из почв Афганистана, Израиля и Турции. У них обнаружен ген поёХ, определяющий присоединение к Мос1-фактору дополнительной ацетильной группы. Такая структура сигнала оказалась необходимой для преодоления устойчивости растений к инокуляции, определяемой рецессивным геном 8уш2, который кодирует один из компонентов рецептора для ^с1-факторов.

Возможны различные критерии отбора бобовых культур с повышенной способностью к азотфиксации: по общему содержанию азота в растениях, по количеству и (или) массе клубеньков, по содержанию в них леггемог-лобина, по их азотфиксирующей активности и др. В 2001 году рядом авторов (Сидорова, Назарюк, Шумный, Кленова, 2001) предложена новая модель для определения эффективности бобово-ризобиального симбиоза, как наиболее достоверный перспективный метод, заключающийся в использовании мутантов с неэффективными клубеньками или бесклубеньковых для сравнения с исходными сортами с нормальной нодуляцией и азотфиксацией. В

природе обнаружить растения без клубеньков довольно трудно (Старчен-ков, Белима, Желюк и др., 1984).

Пока ни один из этих критериев не получил широкого применения в селекционной практике. Поэтому в настоящее время задача состоит в том, чтобы разработать методы быстрой оценки симбиотической активности линии или формы, с использованием метода культуры ткани размножить найденный генотип и включить его в селекционный процесс для создания сорта с повышенной симбиотической активностью (Посыпанов, 1992).

Наиболее эффективной, по-видимому, будет параллельная селекция микро-и макросимбионтов как единой симбиотической системы для определённых экологических условий. Параллельная селекция одновременно обоих симбионтов дополнительно усилит их генетическое сродство, и на этой основе станет возможным увеличение общей продуктивности симбиотической азотфиксации не менее чем в 2-3 раза (Чундерова, 1981).

В 1981 году была разработана модель северного экотипа сои с большим активным симбиотическим аппаратом. В соответствии с моделью ведётся работа в лаборатории растениеводства ТСХА, на Рязанской опытной сельскохозяйственной станции, в Калужском филиале ТСХА по созданию таких сортов. Уже получены сорт Магева и сорт Приокская и ряд новых форм (Посыпанов, 1992). В институте сельскохозяйственной микробиологии (Украина) разработана методика повышения симбиотического потенциала сои путём индивидуального отбора высокоэффективных генотипов внутри сорта и формирования из них улучшенной сортопопуляции. Улучшенный по эффективности симбиотической азотфиксации сорт сои Южанка повысил прибавку урожая зерна от нитрагинизации на 1,5-4,6 ц/га и содержание в зерне «сырого протеина» на 2 8-3,5% в сравнении с исходной сортопопуляцией (Толкачёв, 1997). Таким образом, предложенный метод даёт возможность повышения генетического потенциала симбиотической азотфиксации бобовых культур путём внутрисортовой селекции.

Впервые разработана модель сорта небуреющей тарелочной чечевицы с активным симбиотическим аппаратом.

Начата селекция на повышенную симбиотическую активность люцерны, клевера ползучего, вики посевной.

Серьёзные успехи в селекции люцерны на повышенную азотфикси-рующую активность достигнуты в Ставропольском НИИ сельского хозяйства (Посыпанов, 1992).

Во ВНИИЗБК активно ведётся селекция на повышение симбиотиче-ской азотфиксации у гороха (Зубов, 1970; Орлов, Орлова, Гребенюк, 1983). Введение гена 8ут2 в коммерческие сорта гороха (Норд, Битюг) позволило создать изогенные линии, отличающиеся от них только аллельным состоянием гена Бушг и образующие в полевых условиях клубеньки с комплементарным штаммом ризобий А-1, способным преодолевать 8ут2-контролируемую устойчивость растения-хозяина благодаря присутствию на симбиотической плазмиде гена поёХ (Наумкина с соавт., 2005).

Симбиотическая селекция требует оценки большого количества растительных генотипов на эффективность взаимодействия с микроорганизмами, что технически часто оказывается сложным. Поэтому было разработано несколько групп экспресс-методов, позволяющих решать данную задачу (Про-воров, Тихонович, 2003):

1. Отбор растений на обедненных субстратах. Для бобовых весьма эффективным является отбор растений, способных активно развиваться при инокуляции ризобиями на безазотном (резко обедненном по азоту) фоне.

2. Учет интенсивности колонизации растений микроорганизмами, например числа образуемых клубеньков. В то же время отбор по этому показателю имеет некоторые ограничения, связанные с тем, что число клубеньков хорошо коррелирует с азотфиксирующей и симбиотической активностью лишь для форм с низкими уровнями проявления этих признаков. Повышение числа клубеньков выше определенного предела может вызвать снижение

урожайности растений, обусловленное перерасходом продуктов фотосинтеза на поддержание избытка симбиотических структур.

3. Измерение ферментативных активностей, обеспечивающих эффективность симбиоза. При изучении азотфиксирующих систем в первую очередь должна быть измерена активность нитрогеназы, катализирующей восстановление N2. Для этого используют прямые и косвенные методы. Прямые методы, связанные с использованием нерадиоактивного изотопа 15 N, дают наиболее точную оценку количества фиксируемого азота (Hardarson, 1993). Однако для экспресс-анализа селекционного материала применение этих дорогостоящих и трудоемких методов не целесообразно. Поэтому широкое распространение получил косвенный метод, связанный со способностью нитрогеназы восстанавливать ацетилен до этилена (Hardy, Berns, Holsten, 1973). Несмотря на некоторые методические ограничения, ацетиленредуктаз-ная активность может быть использована для сравнительной оценки большого числа генотипов, так как систематические ошибки метода нивелируются в ходе сравнения. Особенно удобен этот метод на первых этапах селекции, когда решается задача отбраковки большого числа симбиотически неактивных растений (Barnes, Heichel, Vance, Ellis, 1984).

Окончательное раскрытие природы различной эффективности симбиотических систем представляет собой одну из актуальных задач в области исследования биологической фиксации молекулярного азота. Понимание механизма и кода узнавания специфичности растения-хозяина в симбиозе бобовых растений и клубеньковых бактерий представляет большой научный и практический интерес.

Заключение

Поскольку микробно-растительный симбиоз является продуктом сопряженной эволюции партнеров, то и его эффективность зависит от генотипов как микросимбионта, так и растения-хозяина. Поэтому для улучшения эффективности симбиоза необходима координированная работа с растениями и микроорганизмами. Для организации этой работы важно знать, каковы от-

носительные генотипические вклады партнеров в определение симбиотиче-ской эффективности. Общим подходом к решению данной задачи является двухфакторный дисперсионный анализ данных об эффективности симбиоза, образуемого различными генотипами растений и микроорганизмов. Этот подход позволяет разделить общее варьирование симбиотической активности на составляющие, которые соответствуют аддитивным (неспецифическим) действиям сортов растений и штаммов бактерий, а также их неаддитивному (специфическому) взаимодействию (Phillips, Teuber, 1992).

За последние годы отмечен прорыв в изучении генетических основ симбиотической азотфиксации. Результаты обширных исследований, выполненных отечественными и зарубежными учёными на молекулярном и орга-низменном уровнях как макро- так и микросимбионта, позволили существенно углубить понимание процесса симбиотической азотфиксации и сделать ряд практических рекомендаций для повышения эффективности бобово-ризобиального симбиоза (Тихонович, 1987; Тихонович, Проворова, 1998; Шумный, Сидорова, 1991; Шумный, Сидорова, Гляненко и др., 2004; Gres-shoff, 1993). Это касается создания высокоэффективных штаммов клубеньковых бактерий и выделения доноров для селекции бобовых растений на улучшение симбиотических свойств. На этой основе селекция на повышенную симбиотическую активность становится одним из приоритетных направлений в селекции бобовых культур. Это большой не используемый резерв увеличения урожайности, содержания белка, защиты от болезней и повышения ценности бобовых как азотонакопителей, улучшающих плодородие почвы (Берестецкий, Тихонович, 1985; Черемисов, 1985, 2006).

Решение комплекса проблем, связанных с организацией симбиотической селекции, требует проведения междисциплинарных исследований, в которых участвуют специалисты разных профилей. Природные микробно-растительные системы могут быть познаны и улучшены только «научными симбиозами» - сообществами ученых, владеющих знаниями и методами в комплементарных областях изучения макро- и микроорганизмов. Создание

тесно интегрированных научных коллективов, изучающих фундаментальные и прикладные аспекты симбиотических взаимодействий, - чрезвычайно актуальная задача, для решения которой должны быть использованы организационные возможности современной науки (Симаров, Аронштам, Новикова 1992).

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Барбашов, Максим Вячеславович

ВЫВОДЫ

1. У фасоли наибольшей изменчивостью характеризуются признаки: масса семян с растения (33,1%), число бобов на растении (30,6%), число бобов на продуктивный узел (29,3%). Среднюю степень изменчивости имеют признаки: число семян с растения (26,9%), число продуктивных узлов на растении (22,6%), число семян в бобе (20,9%). Наибольшей стабильностью отличаются длина стебля (9,3%), высота прикрепления нижнего боба (14,4%) и масса 1000 семян (17,5%).

2. Наибольшее влияние на семенную продуктивность фасоли оказывает число бобов с растения (г=0,698), число семян с растения (г=0,663) и масса 1000 семян с растения (г=0,348).

3. С учетом уровня проявления основных хозяйственно-полезных признаков изученные сортообразцы фасоли формируют 4 кластера: 1- Kanamito, Tondina, Станичная, л.00-106; 2 - Шоколадница, л. 00-572, Мечта хозяйки, София, Рубин; 3 - Услада, Гелиада, Шубинская, Glen lyon, Zitekid, Оран, Aura, Pricor, Samorinska, л. 02-174.

4. Сортообразцы Tondina, Aura, Glen lyon, Kanamito, Шоколадница, Zitekid обладают повышенной способностью к образованию эффективного бо-бово-ризобиального симбиоза и могут быть использованы в сопряженной селекции растительно-микробных систем.

5. Селекционные линии л.00-106 и л.02-174 сочетают высокую продуктивность со стабильностью показателя селекционной ценности генотипа (СЦГ). Эти образцы лучше противостоят стрессовым факторам в условиях Орловской области и рекомендуются для включения в селекционные программы в качестве источников адаптивности.

6. Наиболее высокую эффективность симбиоза с производственным штамом клубеньковых бактерий 653 показали сортообразцы фасоли Aura,

Шоколадница, Рубин. Прибавка семенной продуктивности растений по отношению к контролю составила 14,4-70,0%.

7. Установлено, что предпосевное внесение в почву комплексного микробиологического удобрения (КМУ) повышало семенную продуктивность на 4,7 - 61,9% и симбиотическую активность в 1,2-1,5 раза у сортообразцов Капатко, Услада, Гелиада.

8. Содержание белка в семенах фасоли существенно зависит от генотипа сорта и погодных условий в период налива бобов и формирования семян. Высокая температура воздуха в этот период способствовала увеличению содержания белка.

9. Выделена перспективная селекционная линия 2-10 (Капатко х Рубин), отзывчивая на одновременную инокуляцию клубеньковыми бактериями и грибами арбускулярной микоризы, на 24,0% превосходящая по урожайности контрольный вариант без обработки и на 32,7% выше стандарта Рубин при двойной инокуляции.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКИ И

ПРОИЗВОДСТВА

1. В селекции фасоли рекомендуются следующие источники хозяйственно-ценных и морфобиологических признаков: раннеспелости (продолжительность периода вегетации 72-80 суток): Гелиада, Шоколадница, Рубин, Оран, Услада, л.00-572; короткостебельности (длина стебля 32-50 см): Гелиада, Шоколадница, Рубин, Оран, Услада, л.00-572, София, л.00-106, л.02-174, Шубинская, Мечта хозяйки, Glen lyon, Aura, Zitekid, Samarinska, Pricor, Tondina; высокого прикрепления нижнего боба (19-20 см): Шубинская, Станичная, Гелиада; комплекса основных хозяйственно-полезных признаков и симбиотических показателей: Tondina, Aura, Glen lyon, Kanamito, л.00-106.

2. При создании сортов фасоли нового поколения с повышенной эффективностью симбиоза в качестве исходного материала для гибридизации целесообразно использовать сортообразцы Tondina, Aura, Glen lyon, Kanamito, Шоколадница, Zitekid. Отбор генотипов на ранних этапах селекционного процесса и формирование селекционного материала следует проводить на фоне инокуляции семян штаммом ризобий 653 и предпосевного внесения в почву комплексного микробиологического удобрения, содержащего штаммы ризобий и грибов арбускулярной микоризы.

3. Учитывая простоту предпосевной инокуляции семян и внесения в почву арбускулярной микоризы (AM) и комплексного микробиологического удобрения (КМУ), их дешевизну и экологические преимущества, необходимо чтобы эти приемы стали обязательной составной частью агротехнологии фасоли для повышения эффективности симбиотических систем культуры.

4. Для создания нового высокоурожайного сорта фасоли с высокой эффективностью симбиоза рекомендуется использовать селекционную линию 2-10 (Kanamito х Рубин).

Заключение

Поскольку микробно-растительный симбиоз является продуктом сопряженной эволюции партнеров, то и его эффективность зависит от генотипов как микросимбионта, так и растения-хозяина. Поэтому для улучшения эффективности симбиоза необходима координированная работа с растениями и микроорганизмами. Для организации этой работы важно знать, каковы относительные генотипические вклады партнеров в определение симбиотиче-ской эффективности. Общим подходом к решению данной задачи является двухфакторный дисперсионный анализ данных об эффективности симбиоза, образуемого различными генотипами растений и микроорганизмов. Этот подход позволяет разделить общее варьирование симбиотической активности на составляющие, которые соответствуют аддитивным (неспецифическим) действиям сортов растений и штаммов бактерий, а также их неаддитивному (специфическому) взаимодействию (Phillips, Teuber, 1992).

За последние годы отмечен прорыв в изучении генетических основ симбиотической азотфиксации. Результаты обширных исследований, выполненных отечественными и зарубежными учёными на молекулярном и орга-низменном уровнях как макро- так и микросимбионта, позволили существенно углубить понимание процесса симбиотической азотфиксации и сделать ряд практических рекомендаций для повышения эффективности бобово-ризобиального симбиоза (Тихонович, 1987; Тихонович, Проворова, 1998; Шумный, Сидорова, 1991; Шумный, Сидорова, Гляненко и др., 2004; Gres-shoff, 1993). Это касается создания высокоэффективных штаммов клубеньковых бактерий и выделения доноров для селекции бобовых растений на улучшение симбиотических свойств. На этой основе селекция на повышенную симбиотическую активность становится одним из приоритетных направлений в селекции бобовых культур. Это большой не используемый резерв увеличения урожайности, содержания белка, защиты от болезней и повышения ценности бобовых как азотонакопителей, улучшающих плодородие почвы (Берестецкий, Тихонович, 1985; Черемисов, 1985, 2006).

Решение комплекса проблем, связанных с организацией симбиотической селекции, требует проведения междисциплинарных исследований, в которых участвуют специалисты разных профилей. Природные микробно-растительные системы могут быть познаны и улучшены только «научными симбиозами» - сообществами ученых, владеющих знаниями и методами в комплементарных областях изучения макро- и микроорганизмов. Создание тесно интегрированных научных коллективов, изучающих фундаментальные и прикладные аспекты симбиотических взаимодействий, - чрезвычайно актуальная задача, для решения которой должны быть использованы организационные возможности современной науки (Симаров, Аронштам, Новикова 1992).

ГЛАВА 2. УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ,

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 2009-2011 гг. в лаборатории генетики и биотехнологии Государственного научного учреждения Всероссийский научно - исследовательский институт зернобобовых и крупяных культур Россельхозака-демии.

2.1. Условия проведения исследований

Орловская область расположена в северо-западной части Центрального Черноземья, ее площадь составляет 24,7 тыс. км . Она занимает северный и западный склоны Среднерусской возвышенности. Протяжённость с запада на восток свыше 200 км, с севера на юг - 150 км. По рельефу область представляет собой сильно волнистую равнину, изрезанную глубокими долинами рек, оврагами и балками.

Климат территории умеренно-континентальный с достаточным количеством тепла и влаги, однако, с неравномерным распределением осадков.

Летом в области преобладают ветры южного, юго-западного, западного и юго-восточного направлений, а зимой - южного, юго-западного, западного и восточного. Западные и юго-западные ветры сопровождаются осадками. Восточные и особенно юго-восточные ветры - сухие, знойные, как правило, вызывают явления засухи. Они имеют большую повторяемость в период вегетации растений.

Среднегодовая температура воздуха в области - +4,9°С. Абсолютный максимум - +37°С. Абсолютный минимум - - 38°С. Средняя температура воздуха наиболее тёплого месяца июля - составляет 17,9.19,6°С, а наиболее холодного месяца - января - -9,0.-10,5 °С.

Орловская область относится к полосе произрастания среднеранних и среднеспелых культур. Период со среднесуточными температурами выше 10°С начинается в начале мая и заканчивается в середине октября и продолжительность его в среднем составляет 141 день. Сумма положительных температур > 10 °С - 2200.2300. За период с температурой >10 °С в среднем выпадает 300 мм осадков. Гидротермический коэффициент равен 1,2. 1,3, что является показателем достаточной влагообеспеченности растений в вегетационный период. За год выпадает 570.580 мм осадков, в дождливые годы их количество возрастает до 790 мм, а в засушливые - уменьшается до 360 мм. При этом наибольшее их количество выпадает в июле (в среднем 98 мм), а на вегетационный период приходится около 40.50 % от их общего количества.

Влагообеспеченность сельскохозяйственных культур характеризуется запасом продуктивной влаги в почве. Наибольшие запасы продуктивной влаги в метровом слое (200.225 мм) имеют суглинистые почвы севера Орловской области в начале вегетации растений. Наименьшие запасы влаги (100. 125 мм) содержат песчаные почвы. В целом влагообеспеченность культур составляет 60 - 90% оптимальной.

К неблагоприятным метеорологическим явлениям, наносящим значительный ущерб сельскохозяйственным культурам, относятся заморозки, засухи, суховеи. Весенне - летние засухи различной интенсивности повторяются здесь один раз в 3.4 года, а иногда следуют 2 года подряд. Засушливость на серых лесных почвах в летний период обычно начинает проявляться на 12. 13 день после прошедших дождей, а на почвах слабоокультуренных-на 7.8 день.

Установление среднесуточной температуры воздуха выше 0°С считается началом весны. Такая температура воздуха в Орловской области бывает уже в третьей декаде марта. После 8 июня заморозки в области обычно не наблюдаются.

Лето в Орловской области начинается с установлением среднесуточных температур воздуха +12,5 °С. Летние месяцы - июнь, июль и август характеризуются тёплой погодой, дождями грозового характера, возможны ливни, сопровождающиеся выпадением града. В начале лета часто наблюдается засушливая погода, иногда с суховеями.

У фасоли при относительно длительном критическом периоде водо-потребления, который охватывает фазы от набухания семян в почве до полного цветения, урожайность культуры существенно зависит от условий тепло- и влагообеспеченности в течение периода вегетации.

Таким образом, климатические условия Орловской области в целом благоприятны для возделывания многих сельскохозяйственных культур, в том числе и фасоли.

Орловская область расположена в лесостепной зоне и представляет собой зону переходных почв от дерново-подзолистых к чернозёмам. По комплексу природных факторов (рельеф, климат, почвенный покров) на территории области выделено три агропочвенных района: западный, центральный и юго-восточный.

Полевые опыты закладывались в севообороте лаборатории генетики и биотехнологии ГНУ ВНИИ зернобобовых и крупяных культур Россельхоза-кадемии, который находится в Орловском районе Орловской области и относится к центральной зоне с преобладанием серых лесных, темно-серых лесных почв и оподзоленных чернозёмов.

Почвы опытных участков темно-серые лесные, среднесуглинистые, подстилаемые лессовидным суглинком, средней окультуренности. Микрорельеф участка выровненный. По основным физико-химическим показателям данные почвы пригодны под все районированные в области сельскохозяйственные культуры и являются типичными для данной природно-экономической зоны. Содержание гумуса - 3,93%, подвижного фосфора -12,5, обменного калия - 5,9 мг/100 г почвы, рН солевой вытяжки - 5,5, гидролитическая кислотность - 4,4 мг экв/100 г почвы).

Пахотный и метровый слои почвы характеризуются высокой водо-удерживающей способностью (118 и 345 мм, соответственно). Возможные запасы доступной растениям влаги в слое 0 - 30 см - 88, а в метровом - 262 мм. Максимальная гигроскопическая влажность - 7,5 % от массы почвы, влажность устойчивого завядания - 9,6. 13,3 % (табл.2).

Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Барбашов, Максим Вячеславович, 2012 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антошкин, A.A. Агротехника и семеноводство фасоли овощной / A.A. Антошкин, М.П. Мирошникова, Е.П. Пронина, C.B. Гончаров // Селекция и семеноводство овощных культур: сб. науч. тр. ВНИИССОК. - М., 2009.-Вып. 43.-С. 35-37.

2. Астахов, Н.В. Влияние антиоксиданта амерола - 2000 на рост и корнеоб-разование фасоли / Н.В. Астахов //Интродукция нетрадиционных сельскохозяйственных растений: матер. IV Междунар. конф - Ульяновск, 2002. - Т. 2. - С. 85.

3. Баймиев, Е. Современное состояние проблемы изучения симбиоза микроорганизмов с растениями /Е. Баймиев [Электронный ресурс] http.//ib.ksc.komi.ru/t/ru/ir/vt/03-68/01 .html.

4. Барбашов, M.B. Изменчивость основных хозяйственно-полезных признаков фасоли /М.В. Барбашов // Инновационный потенциал молодых ученых - АПК Орловской области - Орел: Орел ГАУ, 2010. - С.34-36.

5. Берестецкий, O.A. Повышение эффективности биологической фиксации азота за счет селекции бобовых по признакам симбиоза / O.A. Берестецкий, И.А. Тихонович // Докл. ВАСХНИЛ. - 1985. - №6. - С. 9.

6. Бободжанов, В.А. Эколого-генетическое изучение индуцированных мутантов гороха Pisum sativum L.: 03.00.15 «Генетика» (дис. написана на русском яз.): автореф. дис. на соиск. уч. степ. канд. биол. наук / Вахоб Акбарович Бободжанов. - Алма-Ата, 1974- 31с.-Библиогр.: с.30-31.

7. Борисов, А.Ю. Выделение симбиотических генов гороха (Pisum sativum L.) с использованием экспериментального мутагенеза /А.Ю. Борисов, С.М. Розов, В.Е. Цыганов //Генетика. - 1994. - Т.30, №11. - С.1484 -1494.

8. Борисов, А.Ю. Генетическая система гороха посевного (Pisum sativum Г.), контролирующая развитие симбиозов с клубеньковыми бактериями (Rhizobium leguminozarum bv. viceae) и эндомикоризными грибами

(Glomus sp.): 03.00.15 «Генетика»: атореф. дисс. на соиск. учен. степ, д-ра биол. наук / Алексей Юрьевич Борисов; [ВИР]. - СПб, 1999. - 38с-Библиогр.: с.37-38.

9. Борисов, А.Ю., Генетический контроль взаимодействия бобовых растений с клубеньковыми бактериями /А.Ю. Борисов, H.A. Проворов, И.А. Тихонович // Генетика симбиотической азотфиксации с основами селекции; под ред. И.А.Тихоновича, H.A. Проворова - СПб.: Наука, 1998. -194 с.

Ю.Буравцева, Т.В. Оценка исходного материала фасоли обыкновенной из коллекции ВИР и выделение источников хозяйственно-ценных признаков / Т.В. Буравцева, A.B. Лагутина, М.В. Гуркина // Роль генетических ресурсов и селекционных достижений в обеспечении динамичного развития сельскохозяйственного производства: науч. сб. матер, междунар. н. - прак. конф., дня поля и ярмарки сортов (8-9 июля 2009 г., Орел, Ша-тилово). - Орел: Картуш, 2009. - С. 219-232.

П.Вавилов, Н.И. Географическая изменчивость растений: избр. труды - М.; Л., 1965. -Т.5.- С. 120-126.

12.Вавилов, Н.И. Селекция как наука: избр. произведения - Л.: Наука, 1967. -Т.1.-С. 328-342.

13.Васильчиков А.Г. Определение вклада симбиотической азотфиксации в повышение продуктивности зернобобовых культур / А.Г. Васильчиков // Физиологические аспекты продуктивности растений. - Орел, 2004. - Ч. 2. - С. 255-256.

14. Васильчиков, А.Г. Влияние моно и двойной инокуляции на продуктивность фасоли / А.Г. Васильчиков, М.В. Барбашов //Пути повышения устойчивости растениеводства к негативным природным и техногенным воздействиям: Сборник материалов Международной научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов (21-25 марта 2011 г. Орел); [Орел ГАУ].- Орел, 2011. - С.33-35.

15.Васильчиков, А.Г. Влияние ризоторфина и минерального азота на сим-

биотическую активность и урожайность сои / А.Г. Васильчиков // Повышение устойчивости производства сельскохозяйственных культур в современных условиях: сб. науч. матер. - Орел: Картуш, 2008. - С.453-459.

16.Васильчиков, А.Г. Использование симбиозов бобовых при создании высокоэффективных растительно-микробных систем для адаптивного растениеводства / Т.С. Наумкина, А.Ю. Борисов, О.Ю. Штарк [и др.] // Аграрная Россия. - 2011. - №3. - С. 35-37.

17.Васильчиков, А.Г. Определение вклада симбиотической азотфиксации в повышении продуктивности зернобобовых культур / А.Г. Васильчиков // Физиологические аспекты продуктивности растений. - Орел, 2004. - 4.2. - С.255 - 256.

18.Васильчиков, А.Г. Повышение симбиотического потенциала фасоли / А.Г. Васильчиков, М.П. Мирошникова // Системы воспроизводства плодородия почв в ландшафтном земледелии: матер. Всерос. научно-практ. конф. [ НИИСХ]. - Белгород: Белгород: крестьянское дело, 2001. - С. 42 - 44.

19.Васильчиков, А.Г. Повышение эффективности биологической фиксации азота у фасоли / А.Г. Васильчиков, В.П. Орлов // Биологический потенциал зернобобовых, крупяных культур и пути его реализации: матер, науч. конф. приурочен. К 35 - летию ВНИИ ЗБК. - Орел, 1999. - С. 176 -179.

20.Вишнякова, М.А. Эколого-географическое разнообразие генофонда зернобобовых ВИР и его значение для селекции/ М.А.Вишнякова //Экологическая генетика культурных растений: матер, шк. молод, учен.; [ВНИИ риса]. - Краснодар, 2005. - С. 117-133.

21.Возняковская, Ю.М. Микрофлора растений и урожай ЯО.М. Возняковская-Л.: Колос, 1969.-240с.

22.Вэнс, К. Симбиотическая азотфиксация у бобовых: сельскохозяйственные аспекты /К.Вэнс //Rhizobiaceae молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. - СПб, 2002. - С.561-563.

23.Генетика развития растений / Л.А.Лутова [ и др.]; под ред. С.Г.Инге-Вечиомова.- СПб: Наука, 2000. - С. 344-384.

24.Генофонд и селекция зернобобовых культур (люпин, вика, соя, фасоль) : Теоретические основы селекции; под ред. Б.С. Курловича ; С.И. Репьева. - СПб : ВИР, 1995. - Т. Ш. - 433 С.

25.Гнетиева, Л.Н. Условия минерального питания и отзывчивость фасоли на удобрения / Л.Н. Гнетиева, А.И. Седов // Бюллетень НТИ ВНИИ зернобобовых и крупяных культур - Орел, 1973 - С.56-65.

26.Говоров, Л.И. Горох Афганистана /Л.И.Говоров // Тр. по прикладн. бо-тан. и селекции; [ВИР] - Л., 1928 .- Т. 19, вып. 2. - С.497-522.

27.Гогия, С.Н. Рост и развитие растений фасоли в зависимости от обеспечения элементами минерального питания / С.Н. Гогия, И.В. Туаева // Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки: матер.УП Междунар. конф. молодых ученых, посвященная 75 - летию профессора A.B. Газданова [Горский ГАУ]. - Владикавказ, 2011. - С. 84-86.

28.Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта: с осовами ста. обраб. результатов исслед.: учеб.пособие по агр. спец.: - 5-е изд., доп. и перераб. -М.: Агропромиздат, 1985. - 351 е., ил.

29.Драгавцев, В.А. Алгоритмы эколого-генетической инвентаризации генофонда и методы конструирования сортов сельскохозяйственных растений по урожайности, устойчивости к качеству - СПб., 1993.-211 с.

30.Дупляк, О.Т. Создание и оценка исходного материала Phaseolus vulgaris L. для селекции на продуктивность / О.Т. Дупляк // Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке: состояние, проблемы, перспективы: тез. докл. II Павловской междунар. конф. - СПб., 2007. - С. 450-451.

31.Егорова, Г.П. Оценка клубенькообразующей способности образцов фа-

соли / Г.П. Егорова // Повышение устойчивости производства сельскохозяйственных культур в современных условиях: сб. науч. матер. - Орел, 2008. - С. 540-549.

32.Елагин, И.Н. Биологический азот / И.Н. Елагин // Химия в с.-х-ве. -1993. №5-6.-С.6-7.

33.Жученко, A.A. Адаптивная система селекции растений (эколого-географические основы) : монография. В 2 т. - М.: РУДН, 2001 - Т. 1. -780 С.

34.Жученко, A.A. Ресурсный потенциал производства зерна в России (теория и практика) /A.A. Жученко- М.: Агрорус, 2004.-С.1109.

35.Жученко, A.A. Роль селекции, сортоиспытания и семеноводства растений в адаптивной системе сельскохозяйственного природопользования / А.А Жученко // Пути повышения эффективности сельскохозяйственной науки; [ОГАУ].- Орел: ОГАУ, 2003. - С. 3-25.

36.Задорин, А.Д. Новая технология получения белково-углеводных продуктов из зерна бобовых культур / А.Д. Задорин, П.И. Шумилин, Н.В. Ше-лепина // Кормопроизводство - 2003. - №10. - С.30-32.

37.Задорин, А.Д. Новые продукты переработки зерна бобовых и крупяных культур / А.Д.Задорин, В.Ф.Король, Н.В. Шелепина [и др.] // Актуальные проблемы инновации с нетрадиционными растительными ресурсами и создания функциональных продуктов - М., 2001. - С.202-205.

38.Задорин, А.Д. Средообразующая роль бобовых культур / А.Д.Задорин, А.П.Исаев, А.П. Лапин. - Орёл,2003.- 128 с.

39.Зайцев, В.Н. Перспективы селекции сои на севере ЦентральноЧерноземного региона / В.Н. Зайцев, А.И. Зайцева // Вестник РАСХН-2006.-№2.-С.51.

40.Заленский, А.О. Гены гороха (Pisum sativum L.), участвующие в симбиозе с азотфиксирующими бактериями. Сообщ. 1. Исследование экспрессии гена раннего нодулирования Е12 с помощью реакции цепной ам-

плификации ДНК /А.О. Заленский, А.В. Козик, Б. Схерес //Молекулярная биология. - 1991. - Т.25, вып.З. - С.787-794.

41.Зернобобовые культуры - источник растительного белка /В.И.Зотиков; [ГНУ ВНИИЗБК]. - Орел, 2010. -266 е., с илл.

42.3отиков, В.И. Продукционная и средоулучшающая роль зернобобовых и крупяных культур / В.И. Зотиков // Проблемы интенсификации и экологизации земледелия России : сб. матер, науч. сессии Россельхозакадемии (13-15 июня 2006 г., п. Рассвет Ростовской области).-М.,2006.-С.400-414.

43.Зотиков, В.И. Современное состояние отрасли зернобобовых и крупяных культур в России / В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина, B.C. Сидоренко // Вестник ОрелГАУ.-2006.-Вып. 1.- С. 14-17.

44.3отиков, В.И. Эффективность применения ФлорГумата универсального на семенах и вегетирующих растениях /В.И. Зотиков, А.И. Ерохин, М.В. Барбашов //Земледелие, 2011. - №8. - С.44-45.

45.Зотиков, В.И. Эффективные сорта зернобобовых и просовидных культур / В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина, B.C. Сидоренко // Земледелие-2009-№6.-С.44-47.

46.Зотиков, В.И. Эффективные сорта зернобобовых и просовидных культур / В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина, B.C. Сидоренко // Земледелие-2009-№6.-С.44^17.

47.Зубов, А.Е. К вопросу селекции гороха на усиление симбиоза с клубеньковыми бактериями как приёма внедрения высококачественных сортов / А.Е. Зубов // Вопросы качества продукции зернобобовых культур; [ВНИИЗБК].-Орёл, 1970.-С. 128-131.

48.Исаев, А.П. Зернобобовые и крупяные культуры в решении проблем адаптации полеводства / А.П. Исаев, A.M. Платонов, В.М. Новиков // Научное обеспечение производства зернобобовых и крупяных культур (40-лет ВНИИЗБК): сб. науч. тр.; [ГНУВНИИЗБК]. - Орел, 2004. - С.97-98.

49.Каратыгин, И.В. Коэволюция грибов и растений / И.В. Каратыгин // Труды ботанического института РАН. - М., 1993. — Вып. 9. - С. 1-118.

50.Катаева, С.Р. Влияние штаммов клубеньковых бактерий с различными симбиотическими свойствами на урожай гороха /С.Р. Катаева, Б.Ф. Са-дыков //Труды ВНИИ сельскохозяйственной микробиологии. -Л., 1991. - Т.61. - С.42-50.

51.Катуков, М.В. Фотосинтетическая деятельность, урожайность и белковая продуктивность посевов сои и гороха в зависимости от активности симбиоза (в условиях предгорной зоны Северного Кавказа): автореф. дисс. на соиск. уч. степ, канд.с.-х.н / М.В. Катуков . - М.,1994. - 19с-Библиогр.: с. 19.

52.Квиспел, А. Эволюционные аспекты симбиотических адаптаций: вклад Rhizobium в эволюцию ассоциации /А. Квиспел //Rhizobiaceae молекулярная биология бактерий взаимодействующих с растениями. - СПб, 2002.-С.519-535.

53.Кильчевский, A.B. Метод оценки адаптивной способности и стабильности генотипов, дифференцирующей способности среды / A.B. Кильчев-ский, Л. Хотылева // Генетика.-1985. - Т. XXI, № 9. - С. 1481.

54.Кильчевский, A.B. Метод оценки адаптивной способности и стабильности генотипов [растений], дифференцирующей способности среды. Сообщение 1. Обоснование метода / A.B. Кильчевский, Л.В. Хотылева // Генетика. -1985.- Т. 21, №9. - С. 1481-1490.

55.Клименко, В.Г. Белки семян бобовых культур / В.Г. Клименко // Растительные белки и их биосинтез. - М.: Наука, 1975. - С. 97-115.

56.Коваль, И.М. Современные приемы повышения продуктивности зернобобовых культур / И.М. Коваль // Сборник статей научных сотрудников и аспирантов Белорусского НИИ земледелия и кормов. - Минск, 2002. -С. 175-177.

57.Коваль, С.Ф.Растение в опыте /С.Ф. Коваль, В.П. Шаманин - Омск: Ом-скбланкиздат, 1998. - 201 с.

58.Кожемяков, А.П. Использование инокулянтов бобовых и биопрепаратов комплексного действия в сельском хозяйстве / А.П. Кожемяков, И.А. Тихонович // Доклады РАСХН.- 1998. - № 6. - С.7-10.

59.Кожемяков, А.П. Использование инокулянтов бобовых и биопрепаратов комплексного действия в сельском хозяйстве / А.П. Кожемяков, И.А. Тихонович // Доклады РАСХН. - 1998. - №6. - С. 7-10.

60.Козик, A.B. Гены гороха (Pisum sativum L.), участвующие в симбиозе с азотфиксирующими бактериями. III. Исследование структуры гена раннего нодулина ENOD12 для различных сортов гороха помощью полиме-разной цепной реакции (PCR) /A.B. Козик, М.А. Матвиенко, А. Е. Мень [и др.] //Молекулярная биология. - 1992. - Т.26. - С.591-595.

61.Кондыков, И.В. Основные направления и результаты селекции гороха и фасоли во ВНИИЗБК /И.В. Кондыков, А.Н. Зеленов, М.П. Мирошникова [и др.] //Научное обеспечение производства зернобобовых и крупяных культур: сб. науч. тр.; [ВНИИЗБК]. - Орел, 2004. - С.19-28.

62.Креславский, В.Д. Влияние предобработки хлорхолинхлоридом на устойчивость ФС и растений фасоли к УФ - В радиации, содержание фи-тогармонов и перекиси водорода // Физиология растений. - 2011. - Т. 58, №2.-С. 262-267.

63.Кругова, Е.Д. Сортвоая специфичность у гороха при инокуляции разными штаммами клубеньковых бактерий / Е.Д. Кругова, Д.Д. Остапенко, Н.М. Мандровская //Физиология и биохимия культурных растений. -

1994.-Т.26, №3. - С.245-252.

64.Курлович, Б.С. Генофонд и селекция зерновых бобовых культур (люпин, вика, соя, фасоль) / Б.С. Курлович, С.И. Репьев [и др.] - СПб.: ВИР,

1995.-T.III. - 438 с.

65.Курчак, О.Н. Эффективность симбиоза с клубеньковыми бактериями у различных видов рода Vicia L. / О.Н. Курчак, Н.А Проворов, Б.В. Сима-ров // Раст. ресурсы.- 1995.- Т.31, № 1.- С.88-93.

66.Курчак, О.Н. Эффективность симбиоза с клубеньковыми бактериями у различных видов рода Vicia L./ О.Н. Курчак, Н.А Проворов, Б.В. Сима-ров // Раст. ресурсы.- 1995. - Т.31, № i _ С.88-93.

67.Лазарева, Е.К. Содержание белка в зерне различных генотипов фасоли / Е.К. Лазарева, М.П. Мирошникова // Физиологические аспекты продуктивности растений - Орел, 2004. - Ч. 2. - С. 246-247.

68.Летуновский, В.И. Современные технологии возделывания и уборки фасоли / В.И. Летуновский, A.C. Акулов. // Вестник РАСХН. - 2004. - №3. - С.48-51.

69.Лопатина, Г.В. Ход накопления белка у люпина в связи с деятельностью беньковых бактерий /Г.В. Лопатина // Ботанический журнал СССР. -1935. -Т.20, № 1 - С.79-83.

70.Лоскутов, И.Т. История мировой коллекции генетических ресурсов растений в России / И.Т.Лоскутов; [ВИР]. - СПб,2009. - 294 с.

71. Лукашевич, Н.П. Методика оценки селекционного материала гороха на урожайность / Н.П. Лукашевич // Земледелие и селекция в Беларуса: сб. науч. тр.; [Институт земледелия и селекции HAH Беларуси]. -Минск, 2003. - Вып. 39. - С. 200-202.

72.Лутова, Л.А. Генетика развития растений / Л.А. Лутова и др.; под ред. С.Г. Инге - Вечтомова. - С Пб.: Наука, 2000. - С. 344-384.

73.Ляпкова, Н.С. Изучение спонтанных и индуцированных мутаций, возникающих в длительно культивируемых каллусных тканях гороха: авто-реф. дисс. на соиск. уч. степ, канд.биол.наук / Н.С. Ляпкова. - М., 1990.-17с- Библиогр.: с.17.

74.Макашева, Р.Х. Генетика гороха //Генетика культурных растений: Зернобобовые, овощные, бахчевые /Р.Х. Макашева; под ред. Т.С. Фадеевой, В.И. Буренина. - Л.:ВО Агропромиздат, 1990. - С. 15-80.

75.Манжесов, В.И. Перспективы использования бобов фасоли для получения белковых концентратов / В.И. Манжесов // Хранение и переработка сельхозсырья. - 2011. - №8 - С. 64-65.

76.Марковская, Г.К. Влияние ризоторфина на формирование азотфикси-рующих клубеньков в смешанных посевах гороха / Г.К. Марковская, A.B. Васин, Н.С. Иванайская // Актуальные вопросы агрономической науки в XXI веке: сб. науч. тр. [ФГОУ ВПО Самарская ГСХА].- Самара, 2004.-С. 401^406.

77.Мережко, А.Ф. Генетический анализ количественных признаков для решения задач селекции растений / А.Ф. Мережко //Генетика. - 1994. -Т.30, №10. - С.1317 - 1325.

78.Методы биохимических исследований растений; под ред. Ермакова А.И. - Л.: Колос, 1972. - С.243 - 245.

79.Мирошникова, М.П. Агротехника и семеноводство фасоли овощной / М.П. Мирошникова, A.A. Антошкин [ и др.] // Селекция и семеноводство овощных культур: сб. науч. тр. ВНИИССОК. - М., 2009. - Вып. 43. - С. 35-39.

80.Мирошникова, М.П. Изучение источников хозяйственно - ценных признаков, направленное на создание перспективного исходного материала на зерновой фасоли / М.П. Мирошникова // Новые методы селекции и создание адаптивных сортов сельскохозяйственных культур: тезисы докладов научной сессии (1-3 июля 1998г. Киров). - Киров, 1998 - С. 43-44.

81 .Мирошникова, М.П. Повышение товарно-экономических возможностей производства семян фасоли от внедрения новых высокоурожайных технологичных сортов / М.П. Мирошникова, И.В. Кондыков, В.Н. Зайцев // Экономика и организация семеноводства зерновых и др. сельскохозяйственных культур в Южном Федеральном округе в условиях рыночной экономики: матер, межд. науч. - практ. конф. в Ставрополе НИИСХ (7-8 июня 2001г. Ставрополь). - Ставрополь, 2001. - С. 85-86.

82.Мирошникова, М.П. Пригодность среды пункта ВНИИССОК для селекции и семеноводства фасоли овощной / М.П. Мирошникова, Е.Г. Доб-руцкая, Ф.Б.Мусаев // Селекция и семеноводство овощных культур: сб.

науч. труд. ВНИИССОК - М., 2009. - Вып. 43. - С.65 - 70.

83.Муромцев, Г.С. Роль почвенных микроорганизмов в фосфорном питании растений / Г.С. Муромцев, Г.Н. Маршунова, В.Ф. Павлова [и др.] // Успехи микробиологии: сб. ст.; под ред. А.Имшенецкого [и др.] - М.: Наука, 1985. - Т. 20. - С. 174-198.

84.Наумкина, Т.С. Инновационная деятельность по внедрению наукоемкой продукции в растениеводстве /В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина //Социально-экономические преобразования в аграрном секторе региона: итоги и перспективы: матер. Междунар. н.-практ. конф - Орел, 2005. - Ч. 2.-С. 3134.

85.Наумкина, Т.С. Взаимодействие бобовых с полезными почвенными микроорганизмами: от генов растений к сортам / А.Ю. Борисов, О.Ю. Штарк [и др.] // Сельскохозяйственная биология. - 2011. - №3. - С. 41-47.

86.Наумкина, Т.С. Инновационные технологии в производстве зернобобовых и крупяных культур / В.И. Зотиков, B.C. Сидоренко, Т.С. Наумкина // Новые сорта сельскохозяйственных технологий в растениеводстве: сб. науч. матер. Шатилов, чтений, посвящ. 115 - летию Шатиловской СХОС (12-13 июля 2011 г. Орел). [ВНИИЗБК, Шатиловская СХОС]. - Орел, 2011.-С. 21-28.

87.Наумкина, Т.С. Использование симбиозов бобовых при создании высокоэффективных растительно-микробных систем для адаптивного растениеводства /Т.С. Наумкина, А.Ю. Борисов, О.Ю. Штарк, А.Г. Васильчи-ков, A.A. Молошонок, М.В. Барбашов, М.В. Донская //Аграрная Россия, 2011. - №3. -С.35-37.

88.Наумкина, Т.С. Перспективная ресурсосберегающая технология производства фасоли: метод, реком. / Т.С. Наумкина [и др.]. - М., 2010. - С. 36-37.

89.Наумкина, Т.С. Роль биопрепаратов в повышении симбиоза и продуктивности фасоли / Н.В. Парахин, Т.С. Наумкина, A.A. Осин [и др.] // Вестник Орел ГАУ. - 2008. - №4 (3). - С. 2-4.

90.Наумкина, Т.С. Симбиотическая деятельность посевов фасоли при моно - и двойной инокуляции биопрепаратами / Т.С. Наумкина // Интенсификация и оптимизация продукционного процесса сельскохозяйственных растений: матер. Международно - практ. конф. (6-8 октября 2009 г. Орел). - Орел: ГНУ ВНИИЗБК, 2009. - С.315-318.

91.Наумкина, Т.С. Создание и использование в селекции гороха источников высокой симбиотической эффективности /Т.С. Наумкина, С.Н. Агаркова, Р.В. Беляева //Научные труды МСХА РГАУ им. К.А. Тимирязева. - М, 2006. - Вып. 279. - С. 124-127.

92.Наумкина, Т.С. Состояние и перспективы развития селекции и семеноводства зернобобовых культур / В.И. Зотиков, Т.С. Наумкина, B.C. Сидоренко // Земледелие. - 2011. - №6. - С. 8-10.

93.Новикова, Н.Е. Особенности развития корневой системы у различных генотипов гороха /Н.Е. Новикова //Научные основы создания моделей агроэкотипов сортов и зональных технологий возделывания зернобобовых и крупяных культур для различных регионов России. - Орел, 1997. -С.73-78

94,Овцына, А.О. Структура и функции сигнальных молекул в симбиозе между афганскими линиями гороха и Rhizobium leguminozarum bv. vicae: автореф. дисс. на соиск. уч. степ, канд.биол.наук / А.О. Овцына -СПб,1997. - 16с.- Библиогр.: с.16.

95.Овцына, А.О. Структура, функции и возможность практического применения сигнальных молекул, инициирующих развитие бобово- ризоби-ального симбиоза /А.О. Овцына, И.А. Тихонович // Экол. генетика-2004.-Т. 1, № 3. - С.14-24.

96.Орлов, В.П. Оценка селекционного материала гороха на азотфиксирую-щую способность / В.П. Орлов, И.Ф. Орлова, П.В. Гребенюк //Актуальные вопросы селекции сортов зернобобовых культур интенсивного типа: сб. науч. тр. ВНИИЗБК. - Орел, 1983. - С.75-87.

97.Остапенко, Д.Д. Взаимосвязь интенсивности процессов азотфиксации и фотосинтеза у различных морфотипов гороха / Д.Д. Остапенко, Е.Д. Кругова, Д.А. Киризий //Физиология и биохимия культурных растений. - 1993. -№3- С.329-335.

98.Павловская, Н.Е. Белковый комплекс зернобобовых культур и пути повышения его качества / Н.Е. Павловская // Научное обеспечение производства зернобобовых и крупяных культур: сб. науч. тр. ВНИИЗБК. -Орел, 1998.-С. 56-66.

99.Павловская, Н.Е. Белковый комплекс зернобобовых культур и пути повышения его качества / Н.Е. Павловская, П.И. Шумилин, А.Д. Задорин [и др.]. - Орел: Орел ГАУ, 2003. - С. 216-218.

100. Павловская, Н.Е. Формирование полипептидного состава белков семян гороха и фасоли в процессе созревания / Н.Е. Павловская, H.H. Корниенко, И.Н. Гагарина [и др.] // Вестник РАСХН. - 2007. - №3. - С. 39^11.

101.Павлюшин, В.А. / Фасолевая зерновка и меры борьбы с ней // Зерновое хозяйство.- 2004. - №8.- С.26-29.

102.Павлюшин, В.А. Фасолевая зерновка / В.А. Павлюшин, В.А. Лазарев // Защита и карантин растений. - 2005. - №12 - С. 34-36.

ЮЗ.Парахин, Н.В. Влияние моно- и двойной инокуляции биопрепаратов на перспективных сортах фасоли / Н.В. Парахин // Роль новых направлений селекции в повышении эффективности растений: матер. Всерос. н-практ. конфер. - Орел, 2009. -С. 96-101.

104. Парахин, Н.В. Роль биопрепаратов в повышении симбиоза и продуктивности фасоли / Н.В. Парахин, Т.С. Наумкина, А.А Осин [и др.] // Вестник Орел ГАУ. - 2008. - №4 (13). - С. 24-26.

105.Паршина, О.В. Изучение уровня изменчивости некоторых количественных признаков у овощной фасоли / О.В. Паршина // Повышение эффективности селекции и семеноводства сельскохозяйственных растений: доклады и сообщ. VIII генетико - селекционной шк. - Новосибирск, 2002.-С. 322-330.

106. Паршина, O.B. Оценка коллекционного материала овощной фасоли по комплексу хозяйственно-ценных признаков / О.В. Паршина // Научное наследие фундаментального развития отечественного и мирового сельского хозяйства: матер, межд. (27-28 ноября 2007г. Москва); [ФГОУ ВПОР ГАУ МСХА им. К.А. Тимирязева]. - М., 2007. - С. 96-97.

107. Пивоваров, В.Ф. Состояние и перспективы развития селекции и семеноводства овощных бобовых культур / В.Ф. Пивоваров, JI.K. Гуркина // Селекция и семеноводство овощных культур: сб. науч. тр. ВНИИССОК.

- М., 2009. - Вып. 43. - С. 9-27.

Ю8.Посыпанов, Г. С. Биологический азот /Г. С. Посыпанов // Свободное объединение исследователей симбиотической азотфиксации (СОИСАФ).

- Калуга, 1992.-85 с.

109. Посыпанов, Г.С. Методы изучения биологической фиксации азота воздуха / Г.С. Посыпанов - М.: Агропромиздат, 1991.- 154 с.

1 Ю.Проворов, H.A. Внутрисортовая изменчивость люцерны по активности симбиоза с Rhizobium meliloti / H.A. Проворов, Симаров Б.В // С.-х. биология. - 1986. - № 3.-С.37-40.

111. Проворов, H.A. Соотношение симбиотрофного и автотрофного питания азотом у бобовых растений: генетико- селекционные аспекты /H.A. Проворов // Физиология растений. - 1996. - Т.43,№2. - С. 127-135.

112. Проворов, H.A. Сравнительная генетика и эволюционная морфология симбиозов растений с микробами-азотфиксаторами и эндомикоризными грибами /H.A. Проворов, А.Ю. Борисов, H.A. Тихонович //Журнал общей биологии. - 2002. - Т.63, №6. - С.451^72.

113.Проворов, H.A. Эволюционная генетика микробо - растительного взаимодействия и ее практическое значение / H.A. Проворов, И.А. Тихонович // Экологическая генетика культурных растений: матер, шк. молод. учен.; [ВНИИриса]. -Краснодар, 2005. - С. 221-231.

114. Ростова, Н.С. Корреляции : структура и изменчивость. - СПб. , 2002. -308 с.

115.Русских, И.А. Селекция фасоли на повышение семенной продуктивности / Производство растениеводческой продукции: резервы снижения затрат и повышение качества: материалы международной научно - практической конференции (10-11 июля 2008, г. Жидино); [НАН Белоруссии по земледелию]. - Минск, ИВЦ Минфина, 2008. - Т. 2. - С. 178-180.

116. Сазонова, JI.B. Корнеплодные растения (морковь, сельдерей, петрушка) /Л.В. Сазонова, Э.А. Власова- Л.: Агропромиздат Ленингр. отделение, 1990.-С. 199-201.

117. Сдобникова, О.В. Влияние инфицирования растений эндомикоризными грибами на урожай, усвоение азота и фосфора бобовыми культурами /О.В. Сдобникова, А.Н. Кулешова, И.В. Пайкова, О.П. Мазур, Г.Н. Мар-шунова // Вестн. с.-х. науки, 1991- № 7. - С.78-83.

118. Селиванов, И.А. Микосимбиотрофизм как форма консортивных связей в растительном покрове Советского Союза / И.А. Селиванов.- М.: Наука, 1981. -С.81-126.

119. Серегин, С.В. Технология возделывания новых сортов зернобобовых культур с учетом их биологических особенностей /С.В. Серегин, В.Н. Золотарев // Повышение устойчивости производства с/х культур в современных условиях: сб. науч. матер.-Орел: Картуш, 2008.-С.405-409.

120. Сидорова К.К., Генетика симбиотической азотфиксации и основы селекции для самоопыляющихся бобовых культур (на примере Pisum sativum L.) /К.К. Сидорова В.К., Шумный //Генетика. -1999. - Т. 35,№ 11.- С.1550-1557.

121. Сидорова, К.К. Генетика и селекция бобово-ризобиального симбиоза / К.К. Сидорова, В.К. Шумный, Т.М. Мищенко, Е.Ю. Власова, Т.А. Гаева //Генетика в XXI веке: современное состояние и перспективы развития: материалы III съезда ВОГиС. - Москва. - 2003. - Т.50. - С.496-498.

122. Сидорова, К.К. Генетика мутантов гороха /К.К.Сидорова. - Новосибирск, 1981.-18с.

123.Сидорова, K.K. Генетические аспекты бобово-ризобиального симбиоза (на примере Р. sativum L.) / K.K. Сидорова // С.-х. биология. - 1989. - № 3. -С.35 -40.

124. Сидорова, К.К. Генетические аспекты роста растений гороха //Рост и устойчивость растений. - Новосибирск, 1988. - №3. - С.81-90.

125. Сидорова, К.К. Использование мутантов для выявления генов, контролирующих симбиотические признаки у гороха /К.К. Сидорова, Л.П. Ужинцева //Генетика. - 1992. - Т. 28, №4. - С. 144-151.

126. Сидорова, К.К. Мутанты гороха с измененными симбиотическими признаками /К.К. Сидорова, Т.А. Журба //Генетика хозяйственно-ценных признаков высших растений. - Новосибирск, 1990. - С. 100-106.

127. Сидорова, К.К., Локализация доминантного гена nod4, контролирующего супернодуляцию у гороха /К.К. Сидорова, Л.П. Ужинцева //Доклады РАН. - 1994. - Т.336, №3. -С.847-849.

128.Симаров, Б.В. Генетические основы селекции клубеньковых бактерий / Б.В. Симаров, A.A. Аронштам, Н.И. Новикова [и др.] - Л.: Агропром-издат, 1992.-С. 192-193.

129. Стаканов, Ф.С. Фасоль. Кишинев, 1986.-267с.

130.Сулимова, Г.Е. Практикум по полиморфизму ДНК и белков- М., 2002.-213с.

131.Сухоносенко, Е.Ю. Патогенность грибов рода Fusarium Link., вызывающих коревую гниль гороха при оценке разными методами / Е.Ю. Сухоносенко, Л.Л. Великанов //Микология и фитопатология. - 1995. -Т.6, вып. З.-С. 52-56.

132. Темных, C.B. Картирование генов, контролирующих процесс симбио-тической азотфиксации у гороха: автореф. дис. на соиск.уч. степ. канд. биол. наук/ C.B. Темных-Новосибирск, 1994. - 16с -Библиогр.: с.16.

133.Тихонович, И.А. Генетика симбиотической азотфиксации с основами селекции / И.А. Тихонович, H.A. Проворов. - СПб.: Наука, 1998. -С.194-196.

134. Тихонович, И.А. Генетический контроль симбиотической азотфикса-ции у гороха (Pisum sativum L.): 03.00.15 «Генетика»: автореф. дис на соиск. уч. степ, д-ра биол. наук / Игорь Анатольевич Тихонович. - СПб, 1991.-34 е.- Библиогр.: с.32-34.

135. Тихонович, И.А. Интеграция генетических систем растений и микроорганизмов при симбиозе / И.А. Тихонович, А.Ю. Борисов, В.Е. Цыганов [ и др.] //Доклады РАСХН.- 2004.-№3.- С.58-62.

136. Тихонович, И.А. Повышение эффективности симбиотической азото-фиксации за счёт использования генетических факторов высшего растения / И.А. Тихонович // Симбиотрофные азотфиксаторы и их использование в сельском хозяйстве. - Киев, 1987. - С.6-7.

137. Тихонович, И.А. Принципы селекции растений на взаимодействие с симбиотическими микроорганизмами /И.А. Тихонович, H.A. Проворов //Вестник ВОГиС,- 2005.- Т.9, №3.- С. 295-305.

138. Тихонович, И.А. Создание высокоэффективных микробно- растительных систем / И.А. Тихонович // С.-х. биология. - 2000. №1. - С.28-33.

139. Тихонович, И.А. Создание высокоэффективных микробно-растительных систем/ И.А. Тихонович // С.-х. биология - 2000. - №1. -С. 28-33.

140. Толкач, В.Ф. Некоторые свойства Дальневосточных изолятов вируса желтой мазаики фасоли, выявленных на бобовых культурах / В.Ф.Толкач, Р.В. Гнутова // С.-х. биология. - 2011. -№1. - С. 104-111.

141. Толкачёв, Н.З. Возможности повышения генетического потенциала абиотической азотфиксации сои путём внутрисортовой селекции / Н.З. Толкачёв //Бюллетень и-та с.-х. микробиологии. -Чернигов, 1997. - №1. -С.8-12.

142.Ужинцева, Л.П. Генетика мутанта гороха с детерминированным ростом стебля /Л.П. Ужинцева //Частная генетика сельскохозяйственных растений. - Новосибирск, 1989. - С. 157-168.

143.Фарниев, А.Т. Биологическая азотфиксация и продуктивность бобовых

культур в разных почвенно-климатических зонах Предкавказья: авто-реф.дис.на соиск.учен.степ.доктора с.-х. наук / А.Т. Фарниев. - Воронеж, 1998. - 34с. - Библиогр.: с.34.

144. Федорова, М.Ю. Генетический контроль клубеньковых форм аспарта-таминотрансферазы у гороха (Pisum sativum L.). - СПб, 1993. - 16с.

145. Фесенко, А.Н. Роль генотипа сорта гороха (Pisum sativum L.) и штамма Rhizobium leguminozarum определении эффективности образуемого симбиоза /А.Н. Фесенко, H.A. Проворов, И.Ф. Орлова [ и др.] // Генетика. -1994. - № 5 - С.823-827.

146.Хайлова, Г.Ф. Симбиотическая азотфиксация системы бобовых растений (обзор) / Г.Ф. Хайлова, Г.А.Жизневская // Агрохимия. -1986. -№3. -С.7-18.

147.Хугаева, JI.M. Влияние удобрений на рост растений и структуру урожая семян различных сортов фасоли / Хугаева, J1.M., А.Т. Несаев, Б.В. Кибизов [ и др.] // Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки: матер.УП Междунар. конф. молодых уч., посвягц. 75 - летию профессора A.B. Газданова [Горский ГАУ]. - Владикавказ, 2011. - С. 8688.

148. Хугаева, JI.M. Качество семян различных сортов фасоли / Хугаева, JI.M. // Актуальные и новые направления сельскохозяйственной науки: матер.УП Междунар. конф. молодых ученых, посвященная 75 - летию профессора A.B. Газданова; [Горский ГАУ]. - Владикавказ, 2011. - С. 88-89.

149. Цыганок, Н.С. О продолжительности фаз развития овощных сортов фасоли / Н.С. Цыганок // Вестник РАСХН. - 2011. -№2. - С. 44-46.

150. Цыганок, Н.С. Устойчивость сортов фасоли овощной к антракнозу / Н.С. Цыганок, Н.Г. Казыдуб // Защита и карантин растений. - 2010. -№11.-С. 26-27.

151. Черемисов, Б.М. Селекция бобовых растений и клубеньковых бактерий на интенсификацию их симбиоза /Б.М. Черемисов. - М., 1985. - 105 с.

152.Чиканова, В.М. Влияние некоторых факторов на эффективность инокуляции / В.М. Чиканова, А.Н. Цурган, А.Н. Абменто // Симбиотические азотфиксаторы. - Киев, 1987. - С.98-99.

153.Чундерова, А. И.Отзывчивость сортов гороха на инокуляцию клубеньковыми бактериями и эффективность нитрагина /А. И. Чундерова, С. М. Алисова // Экология и физиология почвенных микроорганизмов. - JL, 1976. - С.58-64.

154. Чундерова, А.И. О взаимоотношениях клубеньковых бактерий с растением-хозяином и перспективах повышения эффективности симбиоза / А.И. Чундерова // Сб. науч. тр. ВНИИ с.-х. микробиологии. - JL, 1980. -Т.50. - С.7-29.

155.Шпаар, Д. Зернобобовые культуры / Д. Шпаар, Ф. Эльмер, А. Постинков, Г. Таранухо [и др.]. - Минск: ФАУ- информ, 2000.-334 с.

156.Штарк, О.Ю. Биотехнология создания принципиально новых коммерческих сортов бобовых с повышенной эффективностью взаимодействия с полезной почвенной микрофлорой (09-04-13895) / О.Ю. Штарк, А.Ю. Борисов, Г.А. Ахтемова, Т.Н. Данилова, Т.С. Наумкина, А.Г. Васильчи-ков, В.К. Чеботарь, М.В. Барбашов, В.И. Зотиков //Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России 28-30 октября 2009 г.: материалы конференции РАСХН-РФФИ, Сергиев Посад, 2009. - С.35-38.

157. Ягодин, Б.А. Содержание микроэлементов во фракциях клубеньков и их влияние на фиксацию азота / Б.А. Ягодин, М.С. Савич // Новое в изучении биологической фиксации азота; под ред. E.H. Мишустина. - М.: Наука, 1995.-С. 75 -80.

158.Якоби, JIM. Полиморфизм форм гороха посевного по эффективности симбиоза с эндомикоризным грибом Glomus sp. В условиях инокуляции ризобиями /Л.М. Якоби, A.C. Кукалев, К.В. Ушаков [и др.] //С.-х. биология. - 2000. - №3. - С.94-102.

159.Яньков, И.И. Влияние ризоторфитна на урожайность и устойчивость к фузариозу гороха в условиях Тамбовской области / И.И. Яньков, В.П.,Сердюк, Г.И. Проскурякова // Бюллетень ВИР. - 1992. - Вып.220. - С.58-60.

160. Akao, S. Use of lacZ and gus Reporter Genes to trace the infection process of nitrogen-fixing bacteria / S. Akao, Y. Minakawa, Jr C.A Taki [ et al.] // JARQ.- 1999. -Vol. 33, №2.- P. 77-84.

161. Barnes, D.K. A multiple trait breeding program for improving the simbiosis for N2 fixation between Medicago sativa L. and Rhizobium meliloti / D.K. Barnes, G.H.Heichel, C.P.Vance [ et al.] //Plant and Soil. -1984.-V. 32. -P. 303-314.

162.Bloemberg, G.V. Molecular basis of plant growth promotion and biocontrol by rhizobacteria / G.V. Bloemberg, B.JJ. Lugtenberg // Current Opinion in Plant Biology. - 2001. - Vol. 4. - P. 343-350.

163.Bosworth, A.H. Alflafa yield response to inoculation wich the recjmbinant strains of Rhizobium meliloti with an extra copy os dctABD/or modified nifA expression / A.H. Bosworth, М/К/ Williams, K.A. Albrecht [et al.] //Appl. Environ. Microbiol. - 1994. - V.60. -P.3815- 3832.

164. Bradbury, S.M. Interaction between three alfalfa nodulation genotypes and two Glomus species /S.M. Bradbury, R.L., S.R Peterson Bowley // New Phy-tologist.— 1991.-Vol. 119.-P. 115-120.

165.Caetano - Anoll S.G. Efficiency nodule initiation and autoregulatory responses in a nodulating soybean mutant / S.G. Caetano - Anoll, P.M. Gres-shoff//Appl. Environm. Micr.-1991. - V.57. - P.2205-2210.

166.Celik, I. Effect of compost, mycorrhiza, manure and fertilizer on some physical properties of a Chromoxerert soil. / I. Celik, I. Ortas, S. Kilic // Soil and Tillage Research. - 2004. - №78. - P. 415-432.

167. Doyle, J.J.Philogenetic ptrspectives on the origins and evolution of nodulation in the legumes and allies / J.J. Doyle, J.L. Doyle //Biological fixation of nitrogen for ecology and sustainable agriculture // Berlin-Heidelberg: Springer-Verlag - 1997. - V. 39. - P.307-312. - (NATO ASI ser. Ecol.Sci.).

168. Due, G. Mutagenesis of pea (Pisum sativum L.) and the isolation of mutants for nodulation and nitrogen fixation /G. Due, A. Messager //Plant Sci. - 1989. -V.60. - P.207-213.

169. Firmin, J.L. Resistance to nodulation of cv. Afganistan peas is overcomed by nodX, which mediates an OOacetylation of the Rhizobium leguminosarum li-pooligosaccharide nodulation factor / J.L. Firmin, K.E. Wilson, R.W. Carlson [et al.] // Mol. Microbiol. - 1993. - V.10. - P.351-360.

170. Fisher, H.-M. Genetic regulation of nitrogen fixation in rhizobia /H.-M. Fisher //Microbiol. Rev.-1994. - V.58. - P. 353-386.

171. Gianinazzi-Pearson, V. Plant cell responses to arbuscular mycorrhizal fungi: getting to the roots of the symbiosis / V. Gianinazzi-Pearson, // The Plant Cell.-1996.-V. 8.-P. 1871-1883.

172.Hardarson, G. Effect of temperature on competition among strains of Rhizobium trifolii for nodulation of two white clover varieties / G. Hardarson, D. Jones // Annals of Applied Biology. - 1979. - V.92, № 2. - P.229-236.

173.Hardarson, G. Methods for enhancing symbiotic nitrogen fixation /G. Hardarson // Plant and Soil.- 1993.- Vol. 152. - P.l-18.

174.Heijden van der, M. G. A., Klironomas J. N., Ursic M. et. al. Micorrhizal fungi diversity determines plant biodiversity, ecosystem variability and productivity. / M. G. A. Heijden van der, J. N. Klironomas, M. Ursic et. al // Nature. - 1998. - V.396. - P. 69-72.

175. Jacobsen, E. A mutant showing efficic nodulation in the presence of nitrate /E. Jacobsen, H.A. Nijdam//PisumNewslett. - 1983. - V.15.-P.31-32.

176. Jacobsen, E. Morphological studies on the highly nodulating mutant nod-3 and its parent variety "Rondo"/ E. Jacobsen, A. Schuil // The Pisum Newsletter. - 1985.-V. 17.-P.30-31.

177. Jacobsen, E., A new pea mutant with efficient nodulation in the presence of nitrate /E. Jacobsen, W.J. Feenstra // Plant Sci. Letters.- 1984. -Vol. 33.- P. 337-344.

178. Kiss, G.B. Map based cloning system in Medicago suitable for isolating genes involved in leaf morphogenesis, nodule formation and effectiveness of nitrogen fixation / G.B .Kiss, P.Kalo, G. Csanadi [et al.) // Nitrogen Fixation: Fundamentals and Applications; Eds. I.A. Tikhonovich, N.A. Provorov, V.I. Romanov, W.E. Newton. - Dordrecht, Boston, London: Kluwer Academic Publishers, 1995. - P. 437^142.

179.Kolchinski, A. Map order and linkage distances of molecular markers close to supernodulation (nts-1) locus of soybean /A. Kolchinski, D. Landau-Ellis, P.M. Gresshoff // Mol. Gen. Genet. - 1997. - Vol. 254. -P. 29-36.

180.LaRue, T.A. Induced symbiosis genes of pea / T.A. LaRue, N.E. Weeden // Pisum Genetics. - 1992. - Vol. 24. - P.5-12.

181. Marques, M.S. Dual inoculation of a woody legume (Centrolobium tomen-tosum) with rhizobia and mycorrhizal fungi in south-eastern Brasil /M.S. Marques, M. Ragano, and M. Scotti // Agroforestry System - 2001- Vol. 52 -P. 107-117.

182.Nodari, R.O. Toward an integrated linkage map of common bean. III. Mapping genetic factors controlling host-bacteria interactions / R.O. Nodari, S.M. Tsai, P. Guzman [et al.] // Genetics. - 1993. - Vol.134. - P.341-350.

183.Peters, N.K. A plant flavone, luteolin, induces expression of Rhizobium me-liloti nodulation genes / N.K. Peters, J.W. Frost, S.R. Long // Science. - 1986. -Vol. 233. -P.977-980.

184. Phillips, D.A. Plant genetics of symbiotic nitrogen fixation / D.A. Phillips, L.R. Teuber // Biolog. Nitrogen Fixation: Eds. G. Stacey et al. Chapman and Hall, N. Y. -London, 1992. - P. 625-647.

185.Pirozynski, K.A. Geological history of the Glomaceae, with particular reference to mycorrhizal symbiosis / K.A. Pirozynski, Y. Dalpe // Symbiosis. -1989.-Vol.7.-P.l-36.

186.Sagan, M. Kinetics of nodule development in pea CV Frisson and in two supernodulating mutants / M.Sagan, P.M. Gresshoff // Abstracts volume 10th

Intern. Congr. On Nitrogen Fixation. Saint-Petrsburg (Russia). - 1995. -P.289

187. Shirtliffe, S.J. A nodulation (Nod+/Fix") mutant of Phaseolus vulgaris L. has nodule-like structures lacking peripherial vascular bundles (Pvb") and is resistant to mycorrhizal infection (Myc") / S.J. Shirtliffe, J.K. Vessey // Plant Sci. - 1996. - Vol. 118. - P.209-220.

188.Shtark, O.Y. Multipartite symbiotic systems in legumes: genetics, natural history and the use in sustainable agriculture / O.Y. Shtark, A.Y. Borisov, V.A. Zukov, G.A. Akhtemova., E.S. Ovchinnikova, M.V. Barbachov // Adaptation to Climate Change in the Baltic Sea Region: Contributions from Plant and Microbial Biotechnology (July 12-17, 2010). - Michelin, Finland 2010.-P.15.

189. Spaink, H.P. A novel highly unsaturated fatty acid moiety of lipooligosac-charide signals host specificity of Rhizobium / H.P. Spaink, D.M. Sheeley, A.A.N, van Brussel // Nature. - 1991. - Vol.354. - P.125-130.

190. Sprent, J.I. Evolution and diversity in the legume-rhizobium symbiosis -chaos theory / J.I. Sprent // Plant and Soil, 1994. - Vol.161. - P. 1-10.

191.Tilman, D. Forecasting agriculturally driven global environmental change / D. Tilman, J. Fargeone, B. Wolff B. // Science.- 2001. -V. 292. - P. 281-284.

192. Trouvelot, A. Mesure du taux de mycorhization VA d'un systeme radiculare, Recherche de methods d'un estimation ayant una signification fonctionnelle / A. Trouvelot, J. Kough, V. Gianninazzi-Pearson // Mycorrhozae: physiology and genetics, ist. ESM: ler SEM. Dijon (1-5 Juli 1985, Paris).- Paris: CNRA, 1986.-P. 217-221.

193.Truchet, G. Sulplated lipooligosacharide signals of Rhizobium meliloti elicit root nodule organogenesis in alfalfa / G. Truchet, P. Roche, P. Lerouge [et al.] // Nature. - 1991. - Vol. 351.- P.670-673.

194. Vance, C.P. Nitrogen fixation in agriculture: application and perspectives / Vance C.P., Graham P.H. // Nitrogen fixation: fundamentals and applications

Eds Tikhonovich I [et al. ] Dordrecht; Boston; London: Kluwer Acad. Publ., 1995. -P.77-86.

195. Vance, C.P. Symbiotic nitrogen fixation and phosphorus acquisition. Plant nutrition in a world of declining renewable resources / C.P. Vance // Plant Physiology.- 2001.- Vol. 127. - P. 390-397.

196. Vance, C.P. Symbiotic nitrogen fixation and phosphorus acquisition. Plant nutrition in a world of declining renewable resources / C.P. Vance // Plant Physiology.- 2001.- Vol. 127. - P. 390-397.

197. Vance, C.P., Heichel G.H. // Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Mol. Biol.-1991.- V. 42.-P. 373-392.

198. Vasilchikov, A.G. Effect of Rhizobium inoculation on the yield of varietys of common beans A.G. Vasilchikov // Annu.Symp. "Phys.-chem. Basis Plant Physiol."- Penza, 1996. - P. 97.

199.Wegel, E. Mycorrhiza mutants of Lotus japonicus define genetically independent sreps during symbiotic infection /E. Wegel, L. Schauser, N. Sandal [et al.] // Mol. Plant-Microbe Interact. -1998. - Vol. 11, №.9. - P. 933-937.

200. Wegel, E., Mycorrhiza mutants of Lotus japonicus define genetically independent sreps during symbiotic infection /E. Wegel, L. Schauser, N. Sandal [et al.] // Mol. Plant-Microbe Interact. -1998. - Vol. 11, №.9. - P. 933-937.