Оценка генотоксических эффектов лекарственных препаратов на модели синаптонемных комплексов в сперматоцитах мыши тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Ацаева, Марет Махмудовна

• Ацаева, Марет Махмудовна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Ацаева, Марет Махмудовна

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Особенности сперматогенеза мыши и человека и их роль в 8 защите клеток сперматогенного ряда от мутагенного действия генотоксичных факторов

1.2. Синаптонемный комплекс. Структура и функции

1.3. Синаптонемный комплекс как индикатор хромосомных 15 нарушений

1.4. Действие ксенобиотиков на сперматогенез млекопитающих

1.5. Трансгенерационный эффект

1.6. Характеристика общих генотоксических свойств 26 лекарственных препаратов, использованных в работе

1.6.1. Циклофосфан - противоопухолевый цитостатик

1.6.2. Фурацилин - антисептик из группы нитрофурановых 28 препаратов

1.6.3. Цифран - антибиотик группы фторхинолонов

1.6.4. Секстофаг - пиобактериофаг поливалентный

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Группы животных, которым вводили лекарственные 36 препараты

2.2. Получение потомства Р1 от скрещивания интактных самок с 38 самцами, которым вводили лекарственные препараты

2.3. Получение тотальных препаратов распластанных СК

2.4. Подготовка препаратов для электронно-микроскопического 40 анализа

2.5. Иммуноокрашивание препаратов СК и их анализ методом 40 флуоресцентной микроскопии

2.6. Статистическая обработка данных

ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Исследование распластанных ядер сперматоцитов мыши на 43 разных сроках после окончания введения воды для инъекций

(I группа сравнения)

3.1.1 Иммуноцитохимический анализ ядер сперматоцитов

3.1.2 Электронно-микроскопический анализ СК

3.2. Исследование распластанных ядер сперматоцитов мыши на 48 разных сроках после окончания введения циклофосфана (II

группа сравнения)

3.2.1 Иммуноцитохимический анализ ядер сперматоцитов

3.2.2. Электронно-микроскопический анализ СК

3.3. Исследование распластанных ядер сперматоцитов мыши на 53 разных сроках после окончания введения фурацилина

3.3.1 Иммуноцитохимический анализ ядер сперматоцитов

3.3.2 Электронно-микроскопический анализ СК

3.4. Исследование распластанных ядер сперматоцитов мыши на 58 разных сроках после окончания введения цифрана

3.4.1 Иммуноцитохимический анализ ядер сперматоцитов

3.4.2 Электронно-микроскопический анализ СК 60 3.5 Исследование распластанных ядер сперматоцитов мыши на

разных сроках после окончания введения секстофага

3.5.1 Иммуноморфологический анализ ядер сперматоцитов

3.5.2 Электронно-микроскопический анализ СК 63 3.6. Иммуноцитохимический анализ тотальных препаратов СК

распластанных ядер сперматоцитов I порядка самцов мыши из потомства Р1, полученного от скрещивания интактных самок с самцами, получавшими противомикробные препараты

ГЛАВА 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

п

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка генотоксических эффектов лекарственных препаратов на модели синаптонемных комплексов в сперматоцитах мыши»

ВВЕДЕНИЕ

Изучение генотоксического действия лекарственных препаратов на половые клетки человека является одной из актуальных проблем современной генетики. Актуальность этой темы обусловлена риском формирования наследственной патологии, новообразований, мужского и женского бесплодия, невынашивания беременности у потомков в результате формирования хромосомных нарушений в половых клетках их родителей. Внимание к этой проблеме заметно обострилось в связи с данными о постепенном снижении фертильности мужчин в разных регионах мира.

В течение последних 50 лет прошлого века (за период жизни двух генераций человека) произошло резкое снижение количества нормальных сперматозоидов (в среднем в два раза) и повышение доли терато- и некрозооспермии в эякулятах мужчин в разных регионах мира (Colborn & Smolen, 1998). Причины этого драматического явления не установлены до настоящего времени. Предполагалось, что основной причиной снижения фертильности мужчин может служить широкое распространение органохлоринов в быту (Colborn & Smolen, 1998). Однако позже было высказано предположение о возможной роли широкого внедрения антибиотиков в медицинскую практику (Wong et al., 2003).

Известно, что формирующиеся половые клетки высокочувствительны к действию факторов окружающей среды. Ранее установлено, что лекарственные препараты, в первую очередь противоопухолевые препараты, вызывают разрывы мейотических хромосом животных и нарушение процесса десинапсиса хромосом (Сухачева и др., 2001, 2003), могут вызывать стойкое и даже необратимое нарушение фертильности мужчин (Фосса, 1989; Marchetti et al., 2006). Противомикробные препараты также обладают

з

высокой метаболической активностью. Однако сведения об их генотоксичности для половых клеток довольно противоречивы (Кушнирук, 1974; Коломиец и др., 2001а; Guay et al., 1991; Maura & Pino, 1991; Millsop et al, 2013). Это обусловлено разнообразием химической структуры препаратов разных фармакологических групп, различием механизмов их биологического действия, а также использованием разных экспериментальных моделей и методов анализа нарушений сперматогенеза.

Одним из наиболее информативных методов идентификации нарушений структуры и поведения хромосом в профазе I мейоза является анализ тотальных препаратов синаптонемных комплексов (СК) в распластанных ядрах сперматоцитов I порядка (Коломиец и др., 2001 ; Counce & Meyer, 1973; Moses, 1977.). СК - специфическая трехполосная структура, формирующаяся между двумя гомологичными хромосомами у представителей всех групп эукариот. СК участвует в процессах мейотической конъюгации, рекомбинации и десинапсиса гомологичных хромосом. Метод анализа СК позволяет идентифицировать характер нарушений синапсиса хромосом, все типы хромосомных аберраций. Применение методов иммуноцитохимического анализа белков позволяет выявлять участки инактивации хромосом, нарушения рекомбинации и синапсиса и, соответственно, риска анеуплоидии половых клеток (Valiente et al., 2006; Ко & Martin, 2009).

Цели исследования: сравнительная оценка повреждающего действия антимикробных лекарственных препаратов на хромосомы сперматоцитов 1 порядка мыши; анализ механизмов селекции клеток с нарушениями структуры СК; анализ потенциальных рисков, которые разные типы хромосомных нарушений несут потомству.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительное иммуноцитохимическое и электронно-микроскопическое исследование распластанных ядер сперматоцитов 1

4

порядка мыши на разных сроках после окончания введения им противомикробных препаратов: фурацилина, цифрана и секстофага. В качестве групп сравнения использовать самцов после введения воды и самцов после введения им противоопухолевого цитостатика циклофосфана;

2. Охарактеризовать разные типы нарушений структуры СК в ядрах сперматоцитов подопытных и контрольных животных; оценить их роль в селекции сперматоцитов;

4. Проанализировать потенциальные трансгенерационные риски формирования разных типов нарушений структуры СК;

3. Получить потомство от интактных самок, скрещенных с самцами, получавшими цифран, циклофосфан, секстофаг и фурацилин; исследовать структуру СК в ядрах сперматоцитов потомков.

Научная новизна работы. Впервые на основе электронно-микроско-скопического и иммуноцитохимического анализа СК проведена оценка повреждающего действия противомикробных лекарственных препаратов на сперматоциты I порядка мыши.

Установлено 6 типов основных нарушений в структуре и поведении СК.

Впервые выявлено, что тотальная селекция сперматоцитов I порядка после введения высокотоксичных и высокогенотоксичных препаратов (фурацилина и цифрана) осуществляется с помощью механизма «мейотической катастрофы».

Установлено, что сперматоциты I порядка с нарушениями синапсиса хромосом, как правило, но не всегда подвергаются селекции с помощью механизма пахитенного ареста. Такие преодолевшие контрольно-пропускной пункт (КПП) мейоза сперматоциты несут потенциальный риск формирования анеуплоидных сперматозоидов. Хроматин фрагментов хромосом не подвергается транскрипционному сайленсингу, фрагменты хромосом не ассоциируют с половым бивалентом. Такие ядра потенциально несут риск

формирования сложных перестроек хромосом или кольцевых хромосом в потомстве.

Впервые в ядрах сперматоцитов самцов, получавших секстофаг, выявлены кольцевые структуры, «отпочковывающиеся» от боковых элементов СК. Кроме того, в ядрах сперматоцитов этой группы животных выявлены фрагменты СК и единичные кольцевые СК.

Цифран вызывает нарушения в структуре и поведении СК, фрагментацию хромосом, нарушение синапсиса хромосом. Впервые проведен анализ СК у потомков самцов, которым в течение 10 дней вводили перечисленные выше антибактериальные препараты. У потомков самцов, получавших цифран, в 5,9% ядер сперматоцитов выявлены кольцевые хромосомы, что свидетельствует об увеличение ломкости теломерных сайтов хромосом у этих животных.

Практическая значимость работы. Сравнительный электронно-микроскопический и иммуноцитохимический анализ СК в распластанных ядрах сперматоцитов мыши показал высокую эффективность количественной и качественной оценки генотоксического действия лекарственных препаратов на незрелые половые клетки мыши. Разработанные подходы к анализу хромосомных нарушений на основе СК могут быть использованы для оценки потенциальной генотоксичности как лекарственных препаратов, так и других ксенобиотиков.

Получены убедительные доказательства необходимости предохранения от зачатия в течение нескольких месяцев после приема курса антибиотиков.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Анализ СК в ядрах сперматоцитов мышей после введения лекарственных препаратов выявил пять основных типов нарушений хромосом: а) формирование фрагментов осевых элементов хромосом; б) формирование фрагментов СК; в) формирование кольцевых СК; г) формирование унивалентов аутосом и половых хромосом; д) ассоциация

6

аутосом с половым бивалентом, приводящая к нарушение формирования структуры полового тельца и пахитенному аресту сперматоцитов;

2. Лекарственные препараты циклофосфан и фурацилин вызывают тотальный некроз ядер сперматоцитов на стадии лептотены-зиготены, сопровождающийся множественной фрагментацией хромосом. Этот механизм селекции клеток мы называем «мейотической катастрофой» и рассматриваем его в качестве селективного, защитного механизма, блокирующего формирование сперматозоидов с множественными хромосомными нарушениями;

3. Наибольший генотоксический риск для потомства могут нести ксенобиотики, вызывающие формирование фрагментов СК и кольцевых СК, так как признаков пахитенного ареста в ядрах с такими нарушениями не выявлено;

4. У самцов из потомства Б1, полученного от скрещивания двух интактных самок с самцами, которым вводили цифран, выявлено достоверное увеличение сперматоцитов (5,9%) с кольцевыми СК. Это может свидетельствовать об увеличение ломкости теломерных сайтов хромосом у потомков. В потомстве от самцов, получавших фурацилин и секстофаг, нарушения в структуре ядер сперматоцитов не выявлены. Самцы, получавшие циклофосфан, оказались бесплодными.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Особенности сперматогенеза мыши и человека и их роль в защите клеток сперматогенного ряда от мутагенного действия генотоксичных

факторов

Сперматогенез - динамический процесс развития мужских половых клеток, находящийся под строгим генетическим и гормональным контролем. Половые клетки развиваются в полостях углублений питающих клеток (клеток Сертоли) и по мере дифференцировки перемещаются из базального отдела сперматогенного эпителия в адлюминальный. Количество клеток Сертоли постоянно. От клеток Сертоли зависит количество вырабатываемой спермы.

Сперматогенез млекопитающих находится под контролем гормонов гипофиза: лютеинизирующего гормона (ЛГ) и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). ФСГ стимулирует функцию клеток Сертоли, а ЛГ стимулирует выработку тестостерона клетками Лейдига. Секреция ФСГ и ЛГ контролируется гонадотропин-рилизинг-гормоном (ГнРГ) гипоталамуса. Эта система называется гипоталамо-гипофизарно-гонадный комплекс и играет центральную роль в управлении мужской фертильностью. В частности, любое вещество, которое нарушает функцию ГнРГ и препятствует секреции ФСГ, ЛГ и тестостерона, может отрицательно сказаться как на сперматогенезе, так и на половой функции (Атогу, 2007).

Имеются специфические особенности сперматогенеза у разных видов животных, которые обусловлены продолжительностью их жизни и количеством потомков, которые они способны оставить.

Сперматогенез мыши. У мышей выделено семь типов сперматогониев: Asingle - сперматогониальная стволовая клетка. Apair и Aaligned -недифференцированные сперматогонии. AI - А4 - дифференцирующиеся сперматогонии (de Rooij, 1998; Rooij & Russell, 2000; Dettin et al., 2003).

Asingle сперматогонии являются единственными самообновляющимися (стволовыми) сперматогониями в семенниках у мышей и крыс. Они претерпевают неравный митоз («неравный» по результату - одна из дочерних клеток становится самообновляющимся сперматогонием Asingle, а вторая Apair делится и вступает на путь неполного митоза), при котором между делящимися клетками сохраняются цитоплазматические мостики. Эти подтипы сперматогониев не подвергаются самообновлению Clermont & Bustos-Obregon, 1968).

Согласно данной модели, у грызунов нет отдельных популяций стволовых клеток и предшественников, a Asingle сперматогониии выполняют задачи как регенеративного, так и функционального резервов. Все дифференцирующиеся половые клетки одного клона происходят непосредственно из единственной стволовой клетки Asingle. Однако большое число последующих митотических делений обеспечивает большое количество сперматозоидов.

Проходит восемь митотических делений, после чего клетки вступают в мейотическое деление на стадии сперматоцита. Теоретически, 1024 сперматоцитов а, следовательно, 4096 гаплоидных сперматид и столько же зрелых сперматозоидов могут быть получены из каждой стволовой сперматогониальной клетки у мыши. Такая незащищенность мейоза компенсируется слабой митотической активностью Asingle стволовых клеток, быстрой сменой поколений и огромным числом потомков.

Гаплоидность генома каждой отдельно взятой сперматиды компенсируется тем, что в процессе спермиогенеза через цитоплазматические мостики из клетки в клетку циркулируют метаболиты всего диплоидного генома. Наличие таких мостиков обеспечивает дифференцировку сперматид до зрелых сперматозоидов, содержащих только половину генома, только X, или только Y хромосому, а так же анеуплоидных сперматид, за счет диффузии продуктов недостающих генов (Lindsley & Tokuyasu, 1980; Willison & Ashworth, 1987).

Весь период сперматогенеза у мышей длится в среднем 35 суток, (Oakberg, 1955 а, б, 1956), а процесс мейоза - 14 дней, 13 из которых приходится на профазу I мейоза (Adler, 1996).

чр

Л S I

Г>1

—* Ар, —» Аа| —► Ai — А2 $ [4>9>161 1161

[321

Аз — A4 — I — В — Spc • [64] [128| [256] [512] (1024]

П4096]

ч

=1«.

Spc

м

I"* Apaie —• В -

ul [2] [41 Н16)

Клетки предшественники С'перматогониальиые стволовые клетки Недифференцированные сперматогоиии

Рисунок 1. Отличия дифференцировки сперматогониальных клеток мыши и человека. В скобках указано общее количество дочерних клеток - потомков одной из клеток- предшественников, вступивших в дифференцировку. Sps- сперматоциты (по Adler, 1996).

Особенности сперматогенеза человека. Стволовые клетки -сперматогонии обеспечивают пул долгоживущих, самообновляющихся, многократно делящихся резервных клеток.

Выделяют два морфологических типа сперматогониальных стволовых

клеток в семенниках человека: темные (Adark) - истинные стволовые клетки

и светлые (Apale) - клетки предшественники (Ehmcke et al., 2005а, b;

Simorangkir et al., 2005). Функция темных сперматогониев заключается в

ю

поддержании регенеративного резерва, а клетки-предшественники обеспечивают функциональный резерв (пул пролиферирующих дифференцирующихся клеток). По сравнению с клетками-предшественниками, стволовые (Аёагк) сперматогонии в нормальных условиях обладают низкой митотической активностью, что способствует сохранению целостности генома в зародышевой линии. Клетки-предшественники вследствие высокой митотической активности обеспечивают ежедневное производство миллионов подвижных сперматозоидов у половозрелых мужчин.

Таблица 1. Стадии развития половых клеток у человека и мыши (по Adler, 1996)

Продолжительность Продолжительность

Стадии развития половых клеток стадии развития половых клеток стадии спермато - и спермиогенеза

у мыши у человека

в часах (сутках) в часах (сутках)

Стволовые клетки и дифференцирующиеся сперматогонии

А- сперматогонии 69 (2,9) -223 (9.5)

Промежуточные сперматогонии 45.4 (1,8) -

В-сперматогонии 29.4(1,2) 158.4 (6.5)

143,8.(6) 921.6(16)

Сперматоциты I и 11

Профаза I мейоза

Прелеплотена (конец Б фазы) 20.6 (0,8) 62.4 (2.5)

Лептотена 44.0(1,8) 134.4 (5.5)

Зиготена 32.7(1.4) 26.4 (1.0)

Пахитена ** 193.7(8) 355.2 (15)

Диплотена 21.4 (< 0,9) -

М1 и МП 20.8 (< 0,7) 26.4 (1.0)

333.2 (13,8) 604.8 (25)

Сперматиды (постмейотическая стадия)

Ранние сперматиды 117.6 (5) 220.8 (9.2)

Поздние сперматиды 97.5 (4) 160.8 (6.7)

215.1 (9) 381.6 (16)

Сперматозоиды 146.4 (6) 158.4 (6.5)

Сперматогенез 35 сут 64 сут

После высвобождения из семенных канальцев сперматозоиды остаются в придатке около

1 недели

Выход сперматозоидов в эякулят 39-41сут 72-81 сут

**0Т А-сперматогониев до начала пахитены проходит 8 суток, до стадии средней пахитены -10 суток

Клетки-предшественники дифференцируются в поколение В сперматогониев, которые, в свою очередь, дифференцируются в сперматоциты. Таким образом, теоретически, инициация деления предшественника приводит к образованию лишь четырех сперматоцитов и 16 сперматид соответственно. Таким образом, хромосомные нарушения в одной стволовой Ара1е клетке могут привести к нарушению только 16 сперматозоидов, а не 4096, как это может произойти при поражении А 81Пё1е клетки у самцов мыши.

Основная роль митотически неактивной клеточной популяции Аёагк стволовых клеток человека является защита целостности генома и восстановления сперматогенного эпителия после гонадотоксического повреждения в мужской зародышевой линии.

Рисунок 2. Сперматогенный эпителий тестикул

1 — базальная пластинка

2 — сперматогоний

3 — сперматоцит 1-го порядка

4 — сперматоцит II порядка

5 — сперматида (округлая)

6 — зрелая сперматида (удлиненная)

7 — клетка Сертоли

8 — цитоплазматический мостик

(по Уег^1ас! & а!., 2008)

Сперматозоиды выполняют уникальную биологическую функцию — переносят ДНК, которая наряду с ДНК яйцеклетки, определяет программу развития следующих поколений.

Геном формирующихся и зрелых сперматозоидов находится под строгим генетическим контролем, обеспечивающим селекцию клеток и мощную систему репарации ДНК, как на стадиях, предшествующих мейозу, так и в течение мейоза, и даже после оплодотворения, когда репарация осуществляется в мужском пронуклеусе за счет репаративной системы яйцеклетки.

1.2. Синаптонемный комплекс. Структура и функции

Мейоз - особый тип клеточного деления, протекающий в два этапа, обеспечивающий формирование гаплоидных половых клеток. Результатом первого (редукционного) деления является уменьшения числа хромосом в два раза и кроссинговер (обмен участками гомологичных хромосом).

Ключевые события мейоза: спаривание, синапсис гомологичных хромосом, кроссинговер и десинапсис гомологичных хромосом происходят в профазе первого деления мейоза. Осуществление этих функций связано с формированием между гомологами уникальной нуклеопротеиновой структуры - синаптонемного комплекса (CK) (Moses, 1968).

Термины, использованные в работе

л«т«рсам пет стен» зиготен» гиям длдаотеиэ •

последовательность событий при синапсисе и десинапсисе хромосом

Рисунок 3. Схема этапов формирования и деградации CK (по: Богданов, Коломиец, 2007).

В профазе I мейоза выделяют пять стадий: лептотена, зиготена, пахитена, диплотена и диакенез.

На стадии лептотеиы вдоль длинной оси хромосом формируются тонкие осевые элементы, состоящие из когезинов, которые объединяют две сестринские хроматиды, и белков СК - SCP3, SCP2 и др. В ранней лептотене мейоз-специфические эндонуклеазы (Spo 11) вносят двунитевые разрывы в молекулу ДНК, что способствует инициации рекомбинации. На этой стадии происходит ATM-зависимое фосфорилирование гистона Н2АХ. На стадии зиготены осевые элементы гомологичных хромосом начинают соединяться попарно и превращаются в латеральные элементы СК. Между ними формируется центральный элемент СК, объединяющий оба гомолога в один мейотический бивалент. На хроматине асинаптированных участках аутосом к концу зиготены происходит вторая волна ATR-зависимого фосфорилирования гистона ШАХ (Chicheportiche et al., 2007).

На стадии пахитены формируется половое тельце и усиливается инактивация генов половых хромосом. Этот процесс называют мейотической инактивацией половых хромосом (MSCI - meiotic sex chromosome inactivation). В норме на стадии пахитены фосфорилированный гистон уН2АХ выявляется только в хроматине полового тельца и на асинаптированных участках аутосом. Половой бивалент всегда лежит обособлено от аутосомных СК (Васькова и др., 2010; Forejt J. 1984; Homolka et al., 2007; 2012).

На стадии диплотены гомологи начинают десинаптировать отталкиваться друг от друга, при этом центральный элемент СК постепенно деградирует, короткие участки СК сохраняются в зоне хиазм, обеспечивая попарное продвижение гомологов вплоть до формирования метафазной пластинки на стадии ML Белки СК сохраняются также и в зоне центромер, они удерживают сестринские хроматиды попарно до формирования метафазной пластинки на стадии М II.

На стадии диакинеза хромосомы максимально укорачиваются, и клетка переходит к первому делению мейоза (по Богданов, Коломиец, 2007)

Первоначально методом исследования СК был электронно-микроскопический анализ ультратонких серийных срезов ткани семенников половозрелых самцов и яичников женских плодов, так как профаза I мейоза у самок протекает в пренатальном периоде онтогенеза. Реконструкции трехмерных структур ядер и СК проводили путем послойного наложения друг на друга изображений десятков серийных срезов. СК был обнаружен у представителей всех царств эукариот: животных, растений и грибов.

В 1973 г. Counce & Meyer предложили новый метод анализа мейотических хромосом в профазе I мейоза, заключающийся в распластывании ядер сперматоцитов на поверхности гипотонического раствора с последующим контрастированием и анализом поведения осевых элементов хромосом и СК. На основании метода, предложенного Counce & Meyer, удается в одном препарате наблюдать десятки клеток на всех стадиях профазы I мейоза, проследить все детали формирования осевых элементов, начало их физического сближения и синапсиса на стадии зиготены; синапсис и его коррекцию у гетерозигот по хромосомным перестройкам на стадии пахитены; динамику десинапсиса хромосом на стадии диплотены.

1.3. Синаптонемный комплекс как индикатор хромосомных

нарушений

Соляри (Solari, 1971) был первым, кто сообщил о том, что гететерозиготная реципрокная транслокация хромосом у мыши сопровождается крестообразной конфигурацией латеральных элементов СК. Это было существенной находкой и означало, что осевые элементы хромосом, а начиная со стадии пахитены, латеральные элементы СК, точно отражают все детали синапсиса хромосом. Таким образом, постепенно стало

15

очевидным, что СК является своеобразным скелетом мейотического бивалента, а конфигурация осевых элементов, приобретающих роль боковых элементов в структуре СК, служит парадигмой поведения гомологов' на стадии профазы I мейоза (Moses, 1982).

Было предсказано, что метод анализа СК сыграет существенную роль в цитогенетике (Holm et al., 1982) . Этот метод позволяет наблюдать на одном препарате полные наборы СК и кариотипировать клетки на основе СК. Благодаря большой чувствительности метод анализа тотальных распластанных препаратов СК позволяет выявлять все типы хромосомных аберраций, в том числе микроскопические (Коломиец, 1998; Коломиец, Богданов, 2007; Moses et al., 1982; Ashley at al., 1986; и др.).

Известно, что стерильность человека и животных может быть обусловлена блоком мейоза у гетерозигот по хромосомным аберрациям. Иногда хромосомные мутации возникают de novo в клетках сперматогенного ряда. Трансгенеративная передача такой мутации может стать служить причиной нарушения и носителя такой мутации, и фертильности его потомков (Kalikinskaya et al, 1986;).

Согласно работам группы Форейта и др. (Forejt et al., 1982), нарушение синапсиса гомологов в сперматоцитах I порядка приводит к ассоциации асинаптированных участков аутосом с осями полового бивалента и нарушению формирования структуры полового тельца. В норме половой бивалент обосабливается и формирует т.н. половое тельце, укрытое белковым покрывалом. При ассоциации XY хромосом с аутосомами происходит заякоривание полового бивалента внутри ядра. В настоящее время установлено, что это приводит к транскрипционной активации хроматина инактивированной в норме Х-хромосомы и сайленсингу хроматина асинаптированных участков хромосом и, в конечном итоге, -аресту мейоза на стадии пахитены (Turner et al., 1984). Этот механизм селекции сперматоцитов, обусловленный нарушением синапсиса хромосом у

16

гетерозигот по хромосомным аберрациям, Форрейт назвал «пахитенным арестом» (Forejt et al., 1982).

Если клетки с хромосомными нарушениями все же преодолевают пахитенный контрольно-пропускной пункт, они подвергаются мейотическому контролю на стадиях Ml и MIL Прохождение этих КПП или формирование мутаций на стадиях Ml и Mil может служить причиной наследственных заболеваний потомков, гибели эмбрионов, невынашиванию беременности.

Особого внимания заслуживает тот факт, что половой бивалент во многих клетках ассоциирует с осями морфологически нормальных СК. В таком случае возникает предположение о том, что исследованные животные могут быть гетерозиготами по микроаберрациям, не выявляемым даже электронно-микроскопически. Так выявлена ассоциация полового бивалента с аутосомными СК у мышей, гетерозиготных по микроаберрациям в t-локусе. Такой тип аберраций невозможно выявить даже на ультраструктурном уровне, так как их размер составляет всего несколько тысяч пар нуклеотидов, и они регистрируются только путем секвенирования ДНК индивидуальных хромосом (Сафронова и др., 1988).

Важно, что анализ СК родителей, подверженных действию мутагенных факторов до зачатия, и их потомков позволяет установить, произошла ли мутация у предков, или de novo в половых клетках потомков. В ядрах сперматоцитов самца, подвергавшегося радиационному облучению (в районе ЧАЭС), обнаруживались сперматоциты с разными типами хромосомных аберраций (Коломиец и др., 1992). У стерильного самца, полученного от облученного родителя, все сперматоциты были гетерозиготны по транслокации одного типа, что дает основание для вывода о том, что аберрантная хромосома получена им от самца.

Важно, что при анализе СК у облученных самцов выявлялось в два раза больше хромосомных нарушений, чем у тех же самцов на стадиях метафазы-

17

анафазы I (Коломиец, 1998). По мнению автора, это объясняется селекцией поврежденных клеток на стадии пахитены; высокой разрешающей способностью электронного микроскопа, возможной реституцией транслоцированных хромосом при реципрокных транслокациях. Кроме того, на стадии ранней пахитены легко идентифицировать дупликации и инверсии у гетерозигот по этим типам аберраций, в то время как на более поздних стадиях мейоза они не различимы ни в световом, ни в электронном микроскопе, так как дупликационные и инверсионные петли в структуре CK сглаживаются посредством механизма мейотической пригонки уже на стадии средней-поздней пахитены.

Успехи, достигнутые цитогенетикой на основе анализа CK, свидетельствуют о перспективности использования этого метода для изучения хромосомной изменчивости, эволюции кариотипов, проблем нарушения фертильности у человека, животных, растений и грибов. Этот метод нашел применение для решения актуальных проблем генетической безопасности (Коломиец; Богданов, 2007; Коломиец и др., 2001; Allen et al., 1982; и др.).

1.4. Действие ксенобиотиков на сперматогенез млекопитающих

Известно, что многие химиотерапевтические препараты приводят к олигоспермии или азооспермии у онкологических больных. В эксперименте такие данные получены и для самцов лабораторных животных, вследствие повреждения клеток зародышевого эпителия. Клетки Лейдига страдают от химиотерапии меньше, чем сперматогенные клетки. Наиболее опасны для половых клеток алкилирующие химиотерапевтические агенты, такие как циклофосфамид, хлорамбуцил, мелфалан, бусульфан, цисплатин и прокарбазин (Howell & Shalet, 1998). Около 90% мужчин, с болезнью Ходжкина страдали азооспермией после завершения курса лечения

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ацаева, Марет Махмудовна, 2013 год

Список литературы

1. Асланов, Б.И. Обоснование применения бактериофага для борьбы с синегнойной инфекцией в травматологическом стационаре [Текст] \ Б.И. Асланов, Дис. кан. мед. наук. - 2001.

2. Богданов, Ю. Ф. Синаптонемный комплекс - индикатор динамики мейоза и изменчивости хромосом [Текст] \ Ю. Ф. Богданов, О. Л. Коломиец \\ М: КМК. - 2007 - С. 358.

3. Богданов, Ю.Ф. Ультраструктура хромосом в мейозе и синаптонемный комплекс. В кн. Цитология и генетика мейоза [Текст] \ Ю.Ф. Богданов,

B.В.Хвостова \\ М. Наука. - 1975 - С. 58-95.

4. Васькова, Е. АМейотическая инактивация половых хромосом у млекопитающих [Текст] \ Е. Васькова, С. В. Павлова, А. И.Шевченко,

C. М. Закиян \\ Генетика. -2010 - Т 46 (4) - С. 437-447.

5. Гордеева, Е.Г. Частота анеуплоидий в гаметах у фертильных мужчин

[Текст] \ Е.Г. Гордеева, Л.В. Шилейко, О.С. Панкратова, Л.Ф. Курило \\ Генетика.-2011 - Том. 47-№ 6 - С. 828-835.

6. Карпова, О.И. Некоторые свойства ДНК из выделенной фракции синаптонемных комплексов мышей [Текст] \ О.И. Карпова, В.В. Сафронов, С.П. Зайцева, Ю.Ф. Богданов \\ Мол. биол. - 1989 - Т. 23 -№ 2 - С. 571-579.

7. Коломиец, О.Л. Естественная деградация синаптонемных комплексов на стадии диплотены мейоза позволяет анализировать организацию его ультраструктурных компонентов [Текст] \ О.Л. Коломиец, Ю.С. Федотова, Ю.Ф. Богданов \\ Биологические мембраны. - 2001-Т. 18—С. 230-249.

8. Коломиец, О.Л. Синаптонемный комплекс как индикатор хромосомной изменчивости [Текст] \ О.Л. Коломиец \\ Дисс. доктора биол. наук в форме научного доклада. И-т общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН. М.-1998 - С. 60

9. Коломиец, О.Л. Электронно-микроскопический анализ синаптонемных комплексов самцов лабораторных мышей, экспонированных в период эмбриогенеза в районе Чернобыльской АЭС [Текст] \ Коломиец О.Л., Мазурова Т.Ф., Померанцева М.Д. \\ Генетика. - 1992. - Т. 28. - № 9. -С. 49-57.

10.Курило, Л.Ф. Возможности цитогенетического исследования мейоза при мужском бесплодии [Текст] \ Л.Ф. Курило \\ Цитология и генетика. - 1989-Т. 23-С. 63-70.

П.Кушнурук, Ю.И. Гонадотоксичность некоторых атнибиотиков и возможные пути его преодоления: [Текст] \ Ю.И. Кушнурук // Дис. канд . биол. наук. - 1974.

12.Митрофанов, Ю.А. Индуцированная изменчивость хромосом эукариот [Текст] \ Ю.А. Митрофанов \\ Наука. - 1994 - С. 143.

13.0нищенко, Г.Е. Митотическая катастрофа как вариант апоптоза [Текст] \ Г.Е. Онищенко \\ Эстетическая медицина. - 2007 - Т. 4. № 3 -283-293.

14.Померанцев, А.П. Сравнение терапевтического эффекта антибиотиков тетрациклиновой группы при лечении сибирской язвы, вызываемой штаммом, наследующим ТЕТ-ген плазмиды рВС16 [Текст] \ А.П. Померанцев, Н.А. Шишкова, Л.А. Маринин \\ Антибиотики и химиотерапия. - 1992 - № 4 - С. 31-34.

15.Сафронова, Л.Д. Ассоциация между СК половых и аутосомных бивалентов у самцов мышей 1хМ:у как возможная причина их стерильности [Текст] \ Л.Д. Сафронова, ОЛ. Коломиец, Ю.Ф. Богданов, В.А.Б Сафронов, Т.Ф. Мазурова \\ Генетика.-1988-Т. 24-№7-С. 1187-1198.

16.Сухачева, Т.В. Влияние ингибиторов ДНК-топоизомеразы II на структуру и поведения мейотических хромосом в профазе I мейоза [Текст] \ Т.В. Сухачева, О.Л. Коломиец \\ Цитология. -2000 - Т. 42 - С. 310-311.

17.Сухачева, Т.В. Влияние ингибиторов ДНК-топоизомеразы II на структуру и поведения мейотических хромосом в профазе I мейоза [Текст] \ Т.В. Сухачева, O.JI. Коломиец \\ Цитология. - 2000 - Т. 42 -С. 310-311.

18.Сухачева, Т.В. Повреждающее действие таксола на клетки сперматогенного эпителия [Текст] \ Т.В. Сухачева, Т.А. Богуш, О.Л. Коломиец \\ Бюлл. экспер.биол.и мед - 2001 - Т. 132 - С.554-560.

19.Сухачева, Т.В., Повреждающее действие вепезида - ингибитора ДНК-топозомеразы II на сперматогенез мыши [Текст] \ Т.В. Сухачева, Т.А. Богуш, О.Л. Коломиец \\ Бюлл. экспер. биол. и мед. - 2003 - Т. 135 -С. 546-551.

20.Тулупов, П.Е. Химические превращения НДМГ в атмосфере воздуха и идентификация их продуктов [Текст] \ П.Е. Тулупов, С.В. Колесников,

B.П. Кирюхин \\ Загрязнения атмосферы и почв. Тр. Всесоюз. совещ. Обнинск. - 1989 - С. 87-102.

21.Фосса, С. Проблема сохранения способности к оплодотворению при лечении больных тестикулярными опухолями [Текст] \ С. Фосса \\ Мат. Конф. Breast Cancer Sym. Сан-Антонио.-1998 httpAVwww.rosoncoweb.ru\library\sanantonio\l.htm

22.Яковлев, С. В. Новое поколение фторхинолонов — новые возможности лечения внебольничных инфекций дыхательных путей [Текст] \ С. В. Яковлев \\ Антибиотики и химиотерапия. - 2001 - №6 -

C. 38-42.

23.Abouzeid, АН Н.Е., The effects of maternal irradiation during adulthood on mutation induction and transgenerational instability in mice [Текст] \ Ali H.E. Abouzeid,, R.C. Barber, Y.E. Dubrova \\ Mutat Res. - 2012 - V. 73 -P.31.

24.Adler, ID. Comparison of the duration of spermatogenesis between male rodents and humans [Текст] \ ID. Adler, \\ Mutat Res. - 1996 - V. 352 - № 1-2-P. 169-172.

25.Aghajanyan, A. Analysis of genomic instability in the offspring of fathers exposed to low doses of ionizing radiation [Текст] \ A. Aghajanyan, N. Kuzmina, A. Sipyagyna, L. Baleva, I. Suskov \\ Environ Mol Mutagen. -2011 -V. 52-P. 538-546.

26. Allen, J.W. Review of literature on chemical-induce aneuploidy in mammalian male germ cells [Текст] \ J.W. Allen, J.C. Liang, A.V. Carrano, R.J. Preston \\ Mutat Res. - 1986-V. 167-P.123-137

27.Anderson, D. Cyclophosphamide: review of its mutagenicity for an assassment of potential germ cell risks [Текст] \ D. Anderson, J.B. Bishop, R.C. Garner, P. Ostrosky-Wegman, P.B. Selby \\ Mut. Res. - 1995 - V. 330 (1-2)- P. 115-181.

28.Anserini, P. Semen analysis following allogeneic bone marrow transplantation. Additional data for evidence-based counseling [Текст] \ P. Anserini, S. S. et al Chiodi Spinelli \\ Bone Marrow Transplant. - 2002 -v.30- P. 447^151

29.Arrault, X. Comparison of kinetics of induction of DNA adducts and gene mutations by a nitrofuran compound, 7-methoxy-2-nitronaphtho[2,l-b]furan (R7000), in the caecum and small intestine of Big Blue™ mice [Текст] \ X. Arrault, , V. Michel, P. Quillardet, M. Hofnung, E. Touati \\ Mutagenesis. — 2002 - V 17 - № 4 - P. 353-359.

30.Ashley, T. Synaptonemal complex analysis of X7 translocations in male mice: R2 and R6 quadrivalents [Текст] \ T. Ashley, L.B. Russel, N.L.A. Cacheiro \\ Chromosoma (Berl.) - 1983-V. 88-P. 17-1179.

31.Backer, L.C. In: The Genetics and Biology of Drosophila (M. Ashburner, T.R.F. Wright, eds.) [Текст] \ J.B. Gibson, M.J. Moses, J.W. Allen, D.L. Lindsley, K.T. Tokuyasu Spermatogenesis.\\ Backer, L.C., New York, Academic. - 1980 - V. 2 - P. 225-294.

32.Backer, L.C. Synaptonemal complex damage in relation to meiotic chromosome aberrations after exposure of male mice to cyclophosphamide

[Текст] \ L.C. Backer, J.B. Gibson, M.J. Moses, J.W. Allen \\ Mutation Res. - 1988-V. 203 - P. 317.

33.Bagley, C.M. Clinical pharmacology of cyclophosphamide [Текст] \ C.M. Bagley, F.W. Bostick and V.T. DeVita \\ Cancer Res. - 1973 - 33 - P. 226-233.

34.Barber, R. Elevated mutation rates in the germ line of first- and second-generation offspring of irradiated male mice [Текст] \ R. Barber, M. A. Plumb, E. Boulton, I. Roux, Y.E. Dubrova \\ Proc Natl Acad Sci U S A. -2002-V 99-P. 6877-6882.

35.Barber, RC. Radiation-induced transgenerational alterations in genome stability and DNA damage [Текст] \ RC. Barber, P. Hickenbotham, T. Hatch, D. Kelly, N. Topchiy, et al. \\ Oncogene. - 2006 - V 25 - P. 73.

36.Barber, RC. The effects of in utero irradiation on mutation induction and transgenerational instability in mice [Текст] \ RC, Barber, RJ. Hardwick, ME. Shanks, CD. Glen, SK. Mughal, et al.W Mutat Res. - 2009 - V. 664 -P. 6-12.

37.Basinko, A. Clinical and molecular cytogenetic studies in ring chromosome 5: Report of a child with congenital abnormalities [Текст] \ A. Basinko, , M.L. Giovannucci Uzielli, G. Scarselli, M. Priolo, G. Timpani, M. De Braekeleer \\ European Journal of Medical Genetics. - 2012 - V. 55 - № -.P. 112-116.

38.Batanian, J.R. De novo apparently balanced complex chromosome rearrangement (CCR) involving chromosomes 4, 18, and 21 in a girl with mental retardation: report and review [Текст] \ J.R. Batanian, M.S. Eswara \\ Am J Med Genet. - 1998 - V. 8 - № - P. 44-51.

39.Briissow, H. Phages and the evolution of bacterial pathogens: from genomic rearrangements to lysogenic conversion. Microbiol [Текст] \ H. Brtissow, C. Canchaya, W.D. Hardt \\ Mol. Biol. Rev. - 2004 - V. 68 - № 3 - P. 560602.

40.Byers, KE, A hospital epidemic of vancomycin-resistant Enterococcus: risk factors and control. Infect [Текст] \ KE. Byers, AM. Anglim, CJ. Anneski, TP. Germanson, HS. Gold, LJ. Durbin, BM. Simonton, BM. Farr \\ Control. Hosp. Epidemiol. - 2001 - V. 22 - P. 140-147.

41.Cannon, J. Cyclophosphamide-associated carcinoma of urothelium: modalities for prevention [Текст] \ J. Cannon, C.A. Linke and L.R. Cos \\ Urology. - 1991 - V. 38 - P. 413-416.

42.Cebrian, L. Effect of exposure to fluoroquinolones and betalactams on the in vitro activity of other groups of antibiotics in Salmonella spp [Текст] \ L. Cebrian, JC. Rodriguez, I. Escribano, G. Royo \\ APMIS. - 2006 - V. 114 -P. 523-528.

43.Centers for Disease Control, Prevention (2008) Overview of Healthcareassociated MRSA, U.S. Department of Health and Human Services.

44.Chandley, A.C. Normal and abnormal meiosis in man and other mammals [Текст] \ A.C. Chandley \\ Genetic control of gamete production and function \ Eds. P.G .Crosignani, B.L. Rubin, M. Fraccaro. N. Y.-1982-P. 229-237.

45.Chanishvili, N. Bacteriophage therapy: experience from the Eliava Institute [Текст] \ N. Chanishvili, R. Sharp \\ Georgia. Aust. Microbiol. - 2008 - V. 20-P. 96-101.

46.Chicheportiche, A. Characterization of Spol 1 -dependent and independent phospho-H2AX foci during meiotic prophase I in the male mouse [Текст] \ A. Chicheportiche, J. Bernardino-Sgherri, B. de Massy, B. Dutrillaux \\ Journal of Cell Science. - 2007 - V. 120-P. 1733-1742

47.Clermont, Y. 1962. Quantitative analysis of spermatogenesis of the rat: a revised model for the renewal spermatogonia [Текст] \ Y. Clermont \\ Am. J. Anat. - 1962-V. 111-P. 111-129.

48.Clermont, Y. Duration of the cycle of the seminiferous epithelium in normal hypophysectomized and hypophysectomized hormone treated rats [Текст] \ Y. Clermont, S.C. Harvey \\ Endocrinology. - 1965-Vol. 76-P. 80-89.

49.Counce, S. J. Differentiation of the Synaptonemal complex and kinetochore in Locusta spermatocytes studied by whole mount electron microscopy [Текст] \ S. J., Counce, G. F. Meyer \\ Chromosoma. (Berl.). - 1973-V. 44-P. 231-238.

50.d'Herelle, F. Sur un microbe invisible antagoniste des bacteries dysenteriques [Текст] \ F. d'Herelle, C. R. Acad \\ Sci. - 1917 - V. 165 - P. 373-375.

51.Dellarco, P.E. Aneuploidy: Etiology and Mechanisms [Текст] \ P.E. Dellarco, Voytek and A. Hollaender (Eds.) \\ Plenum Press. New York. -1985 -P. 337-352.

52.Dobson, M.J. Synaptonemal complex proteins: occurrence, epitope mapping and chromosome disjunction [Текст] \ M.J. Dobson, R.E. Pearlman, A. Karaiskakis, B. Spyropoulos, P.B. Moens \\ J Cell Sci. -1994-V. 107-P.2749-2760

53.Dresser, M.E. Synaptonemal complex karyotyping in spermatocytes of the Chinese hamster (Cricetulus griseus) [Текст] \ M.E. Dresser, M.J. Moses \\ Chromosoma. - 1980 - V. 76 - P. 1-22.

54.Dubrova, Y.E. 134. Transgenerational mutation by radiation [Текст] \ Y.E. Dubrova,, M. Plumb, B. Gutierrez, E. Boulton, A.J. Jeffreys \\ Nature. -2000-№405 - P. 37.

55.Dubrova, Y.E. Paternal exposure to ethylnitrosourea results in transgenerational genomic instability in mice [Текст] \ Y.E. Dubrova,, P. Hickenbotham, C.D. Glen, K. Monger, H.-P. Wong, et al. \\ Environ Mol Mutagen. - 2008 - V. 49 - P. 31.

56.Ehmcke, J. Spermatogonial stem cells: questions, models and perspectives [Текст] \ J. Ehmcke, J. S. Wistuba, Schlatt \\ Hum Reprod Update. - 2006 -V.2-№3-P. 275-282.

57.Eichenlaub-Ritter, U. Gender differences in germ-cell mutagenesis and genetic risk [Текст] \ U. Eichenlaub-Ritter, ID. Adler, A. Carere, F. Pacchierotti \\ Environ Res. - 2007 V. 104 - № 1 - P. 22-36.

58.Engel, J.B. Drug insight: Clinical use of agonists and antagonists of luteinizing-hormone-releasing hormone [Текст] \ J.B. Engel, A.V. Schally. \\ Nat Clin Pract Endocrinol Metab. -2007 - V. 3 № 2 - P. 157-67

59.Escalante, A. Acute myelocytic leukemia after the use of cyclophosphamide in the treatment of polyarteritis nodosa [Текст] \ A. Escalante, R.L. Kaufman, and T.D. Beardmore \\ J. Rheumatol. - 1980 - V. 16 - P. 11471149.

60.Escribano, I. Relation between induction of the mar operon and cyclohexane tolerance and reduction in fluoroquinolone susceptibility in Salmonella spp. J. Infect [Текст] \ I. Escribano, JC. Rodriguez, V. Pertegas, L. Cebrian, G. Royo \\ Chemother. - 2006 - V. 12 - P. 177-180.

61.Fairchild, W.V. The incidence of bladder cancer after cyclophosphamide therapy [Текст] \ W.V. Fairchild, C.R. Spence, H.D. Solomon, M.P. Gangai \\ J. Urol. - 1979 - V. 122 - P. 163-164.

62.Fletcher, J. M. Light microscope analysis of meiotic prophase chromosomes by silver staining. Chromosoma. [Текст] \ J. M. Fletcher \\ - 1979 - V.72 (2)-P. 241-248.

63.Forejt, J. X-inactivation and its role in male sterility [Текст] \ J. Forejt \\ Chromosomes Today. - 1984 - Vol - 8 - P. 17-22.

64.Gandini, L. Effect of chemo - or radiotherapy on sperm parameters of testicular cancer patients [Текст] \ L. Gandini, P. Sgro, F. Lombardo, et al. \\ Hum Reprod. - 2006 - V. 21 - P. 2882-2889.

65.Gibhons, R.B. Acute non-lymphocytic leukaemia following short-term, intermittent, intravenous cyclophosphamide treatment of lupus nephritis [Текст] \ R.B. Gibhons and. E. Westerman \\ Arthritis Rheum. - 1988 - 31 -P. 1553-1554.

66.Gill, J. Phage choice, isolation and preparation for phage therapy. Curr. Pharm [Текст] \ J. Gill, P. Hayman \\ Biotechnol. - 2010 - V. 11 - P. 2-14.

67.Glen, C.D. Exposure to anticancer drugs can result in transgenerational genomic instability in mice [Текст] \ C.D. Glen, Y.E. Dubrova \\ Proc Natl Acad Sci U S A. - 2012 - V. 109 - P. 88.

68.Gold, H.S. Vancomycin-resistant enterococci: mechanisms and clinical observations [Текст] \ H.S. Gold \\ Clin. Infect Dis. - 2001 - V. 33 - P. 210-219.

69.Goldstein, F.W. Penicillin-resistant Streptococcus pneumoniae: selection by both b-lactam and non-b-lactam antibiotics. J. Antimicrob [Текст] \ F.W. Goldstein. \\ Chemother. - 1999 - V. 44 - P. 141-144.

70.Graham, M.A. Drug metabolism in carcinogenesis and cancer chemotherapy [Текст] \ M.A. Graham, R.J. Riley and. D.J. Kerr \\ Pharmac. Ther. - 1991 - V. 51 - P. 275-289

71 .Guay, D.R. Overview of the tolerability of clarithromycin in pre-clinical and clinical trials [Текст] \ D.R. Guay, D.R. Patterson, N. Seipman, J.C. Craft \\ Drug Saf. - 1993-V. 8-P. 350-360.

72.Guay, D.R. Overview of the tolerability of larithromycin in pre-clinical and clinical trials [Текст] \ D.R. Guay, D.R. Patterson, N. Seipman, J.C. Craft \\ Drug Saf. - 1993 - V. 8 - P. 350-364.

73.Hatch, T. Maternal effects of the scid mutation on radiation-induced transgenerational instability in mice [Текст] \ T. Hatch,, A.A. Derijck, P.D. Black, G.W. van der Heijden, P. De Boer, et al. \\ Oncogene. - 2007 - V. 26 -P. 47.

74.Heckel, M.J. Production of oligospermia in a man by the use of testosterone propionate [Текст] \ M.J. Heckel \\ Proc Soc Exp Biol Med. - 1939 - V. 40 -P. 658-9

75.Heddle, J. Quinolone-Binding Pocket of DNA Gyrase: Role of GyrB. Antimicrob [Текст] \ J. Heddle, A. Maxwell \\ Agents Chemother. - 2002 -V.46 - P.1805-1815.

76.Hellstrom, W.J.G. Semen and sperm reference ranges for men 45 years of age and older [Текст] \ W.J.G. Hellstrom, J.W. Overstreet, , S.C. Sikka, et al \\ J Androl- 2006 - V. 27 - P. 421- 428.

77.Holm, P. B. Three-dimensional reconstruction of chromosome pairing during the zygotene stage of meiosis in Lilium longiflorum (Thumb.) [Текст] \ P. B. Holm \\ Carlsberg Res. Commun. - 1977-V. 42-P. 103-151.

78.Homolka, D. Chromosomal rearrangement interferes with meiotic X chromosome inactivation [Текст] \ D. Homolka, R. Ivanek, J. Capkova, P. Jansa, J. Forejt \\ Genome Res. - 2007 - V. 17-№ 10-P. 1431-1437.

79.Homolka, D. Genetically enhanced asynapsis of autosomal chromatin promotes transcriptional dysregulation and meiotic failure [Текст] \ D. Homolka, P. Jansa, J. Forejt \\ Chromosoma. - 2012 - V. 121 - № 1 - P. 91-104.

80.Hooper, D.C. Adverse effects, in: D.C. Hooper, J.S. Wolfson (Eds.), Quinolone Antimicrobial Agents, American Society for Microbiology [Текст] \ D.C. Hooper, J.S. Wolfson \\ Washington, DC. - 1993 - P. 489512.

81.Howell, S.J. Gonadal damage from chemotherapy and radiotherapy [Текст] \ S.J. Howell, S.M. Shalet, \\ Endocrinol Metab Clin North Am. - 1998 - V. 27-P. 927-43

82.Huckins, C. The morphology and kinetics of spermatogonial degeneration in normal adult rats: an analysis using a simplified classification of the germinal epithelium \ C. Huckins \\ Anat. Rec. - 1978-V. 190-P. 905-926.

83.Johannisson, R. Cyclophosphamide-induced aberrations of chromosome pairing in pachytene oocytes [Текст] \ R. Johannisson, H. Ocker \\ Mutation Research. - 1997-P. 37

84.Kalikinskaya, E.I. Chromosome aberrations in F1 from irradiated male mice studied by their synaptonemal complexes [Текст] \ E.I. Kalikinskaya, O.L. Kolomiets, V.A. Shevchenko, Yu.F. Bogdanov \\ Mutat. Res. - 1986-V. 174—P. 59-65.

85.Каш, К.М. Quinolone-resistant Neisseria gonorrhoeae in Hong Kong [Текст] \ К.М. Kam, P.W. Wong, M.M. Cheung, N.K. Ho, K.K. Lo \\ Sex Transm.Dis. - 1996 - V. 23 - P. 103-8.

86.Kim, S.K. A case with balanced chromosome rearrangement involving chromosomes 9, 14, and 13 in a woman with recurrent abortion [Текст] \ S.K. Kim, H.J. Kim, Y.H. Yang, I.K. Kim, S.W. Bai, J.Y. Kim, K.H. Park, D.J. Cho, C.H. Song \\ Yonsei Med J. - 2001 - V.42 - № 3 - P. 345-34

87.Kinlen, L.J. Incidence of cancer in rheumatoid arthritis and other disorders after immunosuppressive treatment [Текст] \ L.J. Kinlen, \\ Am. J. Med. -1985 -V. 78-P. 44-49.

88.Knapp, J.S. Antimicrobial susceptibilities of strains of Neisseria gonorrhoeae in Bangkok, Thailand: 1994-1995 [Текст] \ J.S. Knapp, C. Wongba, K. Limpakarnjanarat et al. \\ Sex Transm.Dis. - 1997 - V 24 - P. 142-8.

89.Knapp, J.S. Antimicrobial susceptibilities of strains of Neisseria gonorrhoeae in Bangkok, Thailand: 1994-1995 [Текст] \ J.S. Knapp, C. Wongba, K. Limpakarnjanarat et al. \\ Sex Transm.Dis. - 1997 - V 24 - P. 142-8.

90.Ko, E. Immunofluorescence analysis of human spermatocytes [Текст] \ E. Ко, R.H. Martin \\ Methods in molecular biology. - 2009 - V. 558 - P. 401-18

91.Kolomiets, O.L. Sexual dimorphism in prophase I of meiosis in mole vole (Ellobius talpinus Pallas) with isomorphic (XX) chromosomes in males and females [Текст] \ O.L. Kolomiets, S.N. Matveevsky, I.Yu. Bakloushinskaya \\ Comparative Cytogenetics. - 2010 - V. 4 - № 1 - P. 55-66.

92.Kutateladze, M. Bacteriophages as potential new therapeutics to replace or supplement antibiotics [Текст] \ M. Kutateladze, R. Adamia \\ Trends in Biotechnology.-2010-V. 28 № 12-P. 591-595.

93.Kutter, E. Phage therapy in clinical practice: treatment of human infections. Curr. Pharm [Текст] \ E. Kutter, D. De Vos, G. Gvasalia, Z. Alavidze, L. Gogokhia, S. Kuhl, S.T. Abedon \\ Biotechnol. - 2010 - V. 11 - P. 69-86.

94.Lancranjan, I. Reproductive ability of workmen occupationally exposed to lead [Текст] \ I. Lancranjan, H.I. Popiscu, O. Gavanescu, et al. \\ Arch Environ Health. - 1975 - P. 30 - P. 396-9.

95.Lepage, Ph. Severe multiresistant Salmonella typhimurium systemic infections in Central Africa - clinical features and treatment in a paediatric department [Текст] \ Ph. Lepage, J. Bogaerts, F. Nsengumuremyi, D. G. Hitimana, C. Van Goethem, J. Vandepittef, J. P. Butzler \\ J. Antimicrob. Chemother. - 1984-V. 14-P. 153-159.

96.Liang, J.C. Chemical probes and possible targets for the induction of aneuploidy, in: V.L. Dellarco, P.E. Voytek and A. Hollaender (Eds.), Aneuploidy: Etiology and Mechanisms [Текст] \ J.C. Liang, and B.R. Brinkley \\ Plenum Press, New York. - 1985 - P. 491-505.

97.Lipsky, B.A. Fluoroquinolone toxicity profiles: a review focusing on newer agents [Текст] \ B.A. Lipsky, C.A. Bake \\ Clinical Infectious Diseases. -1999 - V. 28 - № 2 - P. 352-364.

98.Madan, K. What is a complex chromosome rearrangement? [Текст] \ K. Madan \\ American journal of medical genetics. - 2013 - V.161 - № 5 - P. 1181-1184.

99.Manterola, M. A high incidence of meiotic silencing of unsynapsed chromatin is not associated with substantial pachytene loss in heterozygous male mice carrying multiple simple Robertsonian translocations [Текст] \ M. Manterola, J. Page, C. Vasco, S. Berríos, M.T. Parra, A. Viera, J.S. Rufas, M. Zuccotti, S. Garagna, R. Fernández-Donoso \\ PLoS Genet. -2009 - V. 5. - № 8 - el000625

100. Marchetti, F. Disruption of maternal DNA repair increases sperm-derived chromosomal aberrations [Текст] \ F. Marchetti, J. Essers, R.

Kanaar, A. Wyrobek \\ Proc Natl Acad Sci USA.- 2007 - V. 104 - № 45 -P. 17725-17729.

101. Martin, R.H. Analysis of aneuploidy frequencies in sperm from patients with hereditary nonpolyposis colon cancer and an hMSH2 mutation [Текст] \ R.H. Martin, J. Green, E. Ко, L. Barclay, and A.W. Rademaker \\ American Journal of Human Genetics. - 2000 - V. 66 - P. 1149-1152.

102. Marvin, L. Meistrich, Male Gonadal ToxicityPediatr Blood [Текст] \ L. Marvin \\ Cancer. - 2009 - V. 53 - № 2 - P. 261-266..

103. Matthiesson, K.L. Male hormonal contraception: Concept proven, product in sight? [Текст] \ K.L. Matthiesson, R.I. McLachlan, \\ Hum Reprod Update. - 2006 - V. 12 - №4 - P. 463-82

104. Maura, A. Induction of sperm abnormalities in mice by norfloxacin [Текст] \ A. Maura, A. Pino \\ Mutat. Res. - 1991-V. 264-P. 197-200.

105. Meistrich, ML. Quantitative correlation between testicular stem cell survival, sperm production, and fertility in the mouse after treatment with different cytotoxic agents [Текст] \ M.L.Meistrich, \\ J Androl. - 1982 V. 3 P. 58-68.

106. Miething, A. Degeneration of spermatocytes during meiotic divisions in the golden hamster testis [Текст] \ A. Miething \\ J. Submicrosc. Cytol. Pathol. 1997.Vol.29. P.29 -35.

107. Moens, P.B. Anti-topoisomerase II recognizes meiotic chromosome cores [Текст] \ P.B. Moens, W.C. Earnshaw \\ Chromosoma. (Berl). -1989-V. 98-P. 317-322.

108. Monsees, Т.К. Sertoli cells as a target for reproductive hazards [Текст] \ Т.К. Monsees, M. Franz, S. Gebhardt, U. Winterstein, W.B. Schill, J. Hayatpour \\ Andrologia. - 2000 - V. 32 - №4-5 - P. 239-246,

109. Moore, M.J. Clinical pharmacokinetics of cyclophosphamide [Текст] \ M.J. Moore \\ Clin. Pharmacokinet. - 1991 - V. 20 - P. 194-208.

110. Moses, M. J. Synaptonemal complex analysis of mouse chromosome rearrangements. IV. Synapsis and synaptic adjustment in two paracentric

- 102 -

inversions [Текст] \ M. J. Moses, P. A. Poorman, Т. H. Roderick, M. T. Davisson \\ Chromosoma (Berl.). 1982. Vol. 84. № P. 457-475.

111. Moses, M .J. Microspreading and synaptonemal complex in cytogenetic study [Текст] \ M.J. Moses \\ Chromosomes Today. - 1977 -V. 6-P. 71-82.

112. Moses, M.J. Synaptonemal complex [Текст] \ M.J. Moses \\ Annu. Rev. Genet. - 1968 - V. 2 - P. 363- 412.

113. Moses, M.J. The synaptonemal complex in meiosis: Significance of induced perturbations, in: V.L. [Текст] \ M.J. Moses, P.A. Poorman, M.E. Dresser, G.K. DeWeese and J.B. Gibdon \\ Biology of mammalian germ cell mutagenesis N.Y- 1990 -P. 133-153

114. Muthusami, K.E. Effect of chronic alcoholism on male fertility hormones and semen quality [Текст] \ K.E. Muthusami, P. Chinnaswamy, \\ Fertil Steril. - 2005 - V. 84 - P. 919-24.

115. Navarro, J. A method for the sequential study of ck by light and electron microscopy [Текст] \ J. Navarro, R. Vidal. M. Quitart., J. Egozcue \\ Hum. Genet. - 1981 - V. 59 - P. 419-423.

116. Oakberg, E.F. A description of spermiogenesais in the mouse and its use in analysis of the cycle of the seminiferous epithelium and germ cell renewal [Текст] \ E.F. Oakberg, \\ Am. J. Anat. - 1956 - V. 99 - P. 391— 413.

117. Ochalski, M.E. Complex X chromosome rearrangement delineated by array comparative genome hybridization in a woman with premature ovarian insufficiency [Текст] \ M.E. Ochalski, N. Engle, A. Wakim, B.J. Ravnan, L. Hoffner, A. Rajkovic, U. Surti \\ Fertil Steril. - 2011 - V. 95 -№7-P. 2433-2439.

118. Overstreet, J.W. Chronic treatment with finasteride daily does not affect spermatogenesis or semen production in young men [Текст] \ J.W. Overstreet, V.L. Fuh, J. Gould, et al. \\ J Urol. - 1999 - V. 162 - № 4 - P. 1295-300

119. Page, J. Inactivation or non-reactivation: what accounts better for the silence of sex chromosomes during mammalian male meiosis? [Текст] \ J. Page, R. de la Fuente, M. Manterola, M.T. Parra, A. Viera, S. Berríos, R. Fernández-Donoso, J.S. Rufas \\ Chromosoma. - 2012 - V. 121 - № 3 - P. 307-326.

120. Pai, G.S. Complex chromosome rearrangements [Текст] \ G.S. Pai, G.H. Thomas, W. Mahoney, B.R. Migeon \\ Clin Genet. - 1980 - V. 18 -.P. 436-444.

121. Pedersen-Bjergaard, J.J. Carcinoma of the urinary bladder after treatment with cyclophosphamide for non-Hodgkin's lymphoma [Текст] \ J.J. Pedersen-Bjergaard, Ersboll and V.L. Hansen. \\ New Engl. J. Med. -1988 - 318 - P.1028-1032.

122. Pellestor, F. Complex chromosomal rearrangements: origin and meiotic behavior [Текст] \ F. Pellestor, T. Anahory, G. Lefort, J. Puechberty, T. Liehr, B. Hédon, P. Sarda \\ Hum Reprod Update. - 2011 -V. 1 - №4 - P. 476-494.

123. Roninson, I. В .If not apoptosis, then what? Treatment-induced senescence and mitotic catastrophe in tumor cells [Текст] \ I. B. Roninson, E.V. Broude, B.D. Chang \\ Drug Resist. Updates. - 2000 - V. 4 - № 5 - P. 303—313.

124. Roosen-Runge, E.C. Untersuchungen liber die degeneration samenbildender zellen in der normaler spermatogenese der Ratte \ E.C. Roosen-Runge \\ Z. Zellforsch. Mikrosk. Anat. Bd. 1955.41. S. 221-235.

125. Russell, L.D. Determination of the elongate spermatid-Sertoli cell ratio in various mammals [Текст] \ L.D. Russell, R.N. Peterson \\ J. Reprod. Fértil. - 1984-V. 70-№2-P. 635-641.

126. Salmon, G.G. Staphage lysate therapy in chronic staphylococcal infections [Текст] \ G.G. Salmon, M. Symonds, \\ J. Med. Soc. N. J. - 1963 -V. 60-P 188-193.

127. Schimenti, J. Synapsis or silence [Текст] \ J. Schimenti, \\ Nat Genet. - 2005 - V. 37-№ 1 - P. 11-13

128. Schleiermacher, E. Chemical mutagenesis in mammals and man. II. Cytological effects of radiomimetic drugs in meiosis in the male mouse [Текст] \ E. Schleiermacher, \\ Jap. J. Genet. -1968 - V. 44 № 2 - P. 80-81.

129. Schramm, P. Josamycin Concentration in human ejaculate and its influence on sperm motility: a contribution to antibiotic therapy in andrological patients [Текст] \ P. Schramm, R.E. Schopf, A. Wildfeuer \\ Andrologia. 1988.Vol. 20. P. 521-525.

130. Shaak, D.L. inventor. President & Fellows of Harvard College, assignee.Toxin-phage bacteriocide antibiotic and uses thereof. US patent

131. Shetty, N. Sitafloxacin in the treatment of patients with infections • caused by vancomycin-resistant enterococci and methicillin-resistant Staphylococcus aureus [Текст] \ N. Shetty, A.P.R. Wilson, \\ J. Antimicrob. Chemother. - 2000 - V. 46 - P 633-638.

132. Shevyakova, O.L. Effect of phages on the antibiotic-resistant bacteria Dysenteriae flexneri [Текст] \ O.L. Shevyakova, \\ Antibiotics. - 1956 - V. 6-P. 40-42.

133. Shevyakova, O.L. Treatment of dysentery in children with polymyxin and bacteriophages [Текст] \ O.L. Shevyakova, \\ Antibiotics. - 1964 - V. 3 -P. 269-272.

134. Shi, Q. Griseofulvin-induced aneuploidy and meiotic delay in male mouse germ cells: detected by using conventional cytogenetics and three-color FISH [Текст] \ I. Adler, Q. Shi, Т.Е. Schmid \\ Mutat Res. - 1999 -V. 441 - № 2 - P.181-190

135. Shiraishi, K. Persistent induction of somatic reversions of the pink-eyed unstable mutation in F1 mice born to fathers irradiated at the spermatozoa stage [Текст] \ K. Shiraishi, T. Shimura, M. Taga, N. Uematsu, Y. Gondo, et al. \\ Radiat Res. - 200 - V. 15 - P. 661-667.

136. Sigal, S.H. Carcinoma of bladder following long-term cyclophosphamide therapy [Текст] \ S.H. Sigal, J.E. Tomaszewski, J.J. Brooks, A. Wein and V.A. LiVasi \\ Arch. Pathol. Lab. Med. - 1991 - V. 115-P. 1049-1051.

137. Singer, R. Oligozoospermia, asthenozoospermia, and sperm abnormalities in ex-addict to heroin, morphine, and hashish [Текст] \ R. Singer, M. Ben-Bassat, Z. Malik, \\ Arch Androl. - 1986 - V. 16 - № 2 - P. 167-74.

138. Solari, A.J. The behaviour of chromosomal axes in Searle's X-autosomal translocation [Текст] \ A.J. Solari \\ Chromosoma (Berl). -1971-V. 34-P. 99-112.

139. Stillman, R. J. Obst. Sitafloxacin in the treatment [Текст] \ R. J. Stillman, J. Am. WGynecol. - 1982 - V. 142 - P. 905-921.

140. Stutz, G. The effect of alcohol, tobacco, and aspirin consumption on seminal quality among healthy young men [Текст] \ G. Stutz, J. Zamudio, M.E. Santillan, L. Vincenti, M.F. de Cuneo, R.D. Ruiz \\ Arch Environ Health. - 2004 - V. 59 - P. 548-52.

141. Tapsall, J.W. Surveillance of antibiotic resistance in Neisseria gonorrhoeae in the WHO Western Pacific Region, 1998. The WHO Western Pacific Gonococcal Antimicrobial Surveillance Programme [Текст] \ J.W. Tapsall, \\ Commun.Dis Intell. - 2000 - V. 24 - P. 1-4.

142. Tawn, E.J. Chromosomal analysis in childhood cancer survivors and their offspring - no evidence for radiotherapy-induced persistent genomic instability [Текст] \ E.J. Tawn, C.A. Whitehouse, J.F. Winther, G.B. Curwen, G.S. Rees, et al. \\ Mutat Res. - 2005 - V. 583 - P. 198.

143. Tepperberg, J.H. Colchicine effects on meiosis in the male mouse. II. Inhibition of synapsis and induction of nondisjunction \ J.H. Tepperberg, M.J. Moses, J. Nath \\ Nath. J. Mutat. Res. 1999.Vol. 429. P. 93-105.

144. Thome, S. Recombinagenic and mutagenic activities of fluoroquinolones in Drosophila melanogaster [Текст] \ S. Thome, C.R.

- 106 -

Bizarro, M. Lehmann, B.R. de Abreu, H.H. de Andrade, K.S. Cunha, R.R. Dihl \\ Mutation research. - 2012 - № 742 (1-2) - P. 43-7.

145. Thrasher, J.B. Bladder leiomyosarcoma following cyclophosphamide therapy for lupus nephritis [Текст] \ J.B. Thrasher, G.J. Miller and J.N. Wettlaufer \\ J. Ural. - 1990 - V. 143-P. 119-121.

146. Tommerup, N. Disease associated balanced chromosome rearrangements: a resource for large scale genotype-phenotype delineation in man [Текст] \ N. Tommerup, \\ Journal of Medical Genetics. - 2000 - V. 37 № 11 - P. 858-65.

147. Toth, A. Reversible toxic effect of salicylazosulfapyridine on semen quality [Текст] \ A. Toth, \\ Fertil Steril. - 1979 - P. 31 № 5 - P. 538^10.

148. Travis, L.B. Bladder cancer after chemotherapy for non-Hodgkin's lymphoma [Текст] \ L.B. Travis, R.E. Curtis, J.D. Boice and J.F. Fraumeni \\ New Engl. J. Med. - 1989 - 321 - P. 544-545.

149. Turek, P.J. The reversibility of anabolic steroid-induced azoospermia [Текст] \ P.J. Turek, R.H. Williams, J.H. Gilbaugh, et al. \\ J Urol. - 2001 -V. 153-№ 5 1628-P. 30.

150. UNSCEAR. Hereditary effects of radiation New York: United Nations.-2001 - P. 160

151. Vallente, R. U. The synaptonemal complex and meiotic recombination in humans:' new approaches to old questions [Текст]\ R. U.Vallente, E. Y.Cheng, T. J. Hassold \\ Chroosoma (Berl.).-2006-Vol.l 15-P. 241-249.

152. Verhofstad, N. New methods for assessing male germ line mutations in humans and genetic risks in their offspring [Текст] \ N. Verhofstad, J.O. Linschooten, J. van Benthem, Y.E. Dubrova, H. van Steeg, F.J. van Schooten, R.W. GodschalkW Mutagenesis. - 2008 - V. 23 - No 4 - P. 241247

153. von Borstel, R.C. Higgins John A. Janus carcinogens and mutagens [Текст] \ R.C. von Borstel \\ Mutation Research. - 1998 - V. 402 - P. 321329.

154. Wallace, D.C. & Fan W.W. Energetics, epigenetics, mitochondrial genetics [Текст] \ D.C. Wallace, & W.W. Fan \\ Mitochondrion. - 2010 -V. 10-P. 12-31.

155. Whitehead, E. The effects of Hodgkin's disease and combination chemotherapy on gonadal function in the adult male [Текст] \ E. Whitehead, S.M. Shalet, G. Blackledge, et al. \\ Cancer. - 1982 - V. 49 -№3- P. 418-22.

156. Willison, K. Mammalian spermatogenic gene expression [Текст] \ K. . Willison, A. Ashworth \\ Trend Genet. - 1987 -V - №3 - P.351-355

157. Winder, C. Reproductive and chromosomal effects of occupational exposure to lead in the male [Текст] \ C. Winder, \\ Reprod Toxicol. - 1989 -V. 3 -№4-P. 221-33.

158. Winterstein, A.G. Sensorineural hearing loss associated with neomycin eardrops and nonintact tympanic membranes [Текст] \ A.G. Winterstein, W. Liu, D. Xu, P.J. Antonelli \\ Otolaryngol Head Neck Surg. -2013,-V. 148 -№2. P-277-83.

159. Wong, W. Y. New evidence of the influence of exogenous and endogenousfactors on sperm count in man [Текст] \ W. Y.Wong, , G. A.Zielhuis, , С. M G.Thomas,., H. M. W. M. Merkus, & R. P. M.Steegers-Theunissen, \\ Eur. J. Obstet. Gyn. Reprod. Biol. - 2003 - V. 110-P.49-54

160. Zeh, J. A. From father to son: transgenerational effect of tetracycline on sperm viability [Текст] \ A.G. Winterstein, M.M. Bonilla, A.J. Adrian, S. Mesfin & D.W. Zeh \\ Scientific Reports. - 2012 - №375 -doi:10.1038/srep00375

161. Zenilman, J.M. Update on Quinolone Resistance in Neisseria gonorrhoeae [Текст] \ J.M. Zenilman, \\ Curr.Infect Dis Rep. - 2002 - V. 4 _ P. 144-7.

162. Zhang, Z. The radiation-induced block in spermatogonia! differentiation is due to damage to the somatic environment, not the germ

cells [Текст] \ Z. Zhang, S. Shao, M. Meistrich \\ J Cell Physiol. - 2007 -V. 211-P. 149-158. 163. Zuccarello, D. Azoospermia in a man with a constitutional ring 22 chromosome [Текст] \ D. Zuccarello, B. Dallapiccola, Novelli, C. Foresta \\ Eur J Med Genet. - 2010 - V.53 - № 6 - P. 389-391

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CK Синаптонемный комплекс

ЛГ Лютеинизирующий гормон

ФС Фолликулостимулирующий гормон

ГнРГ Гонадотропин-рилизинг гормон

ЭКО Экстракорпоральное оплодотворение

CCR Комплексные хромосомные перестройки (Complex

chromosome rearrangement) MSCI Мейотическая инактивация половых хромосом (Meiotic sex

chromosome inactivation) MSUC Мейотическая инактивация асинаптированного хроматина

(Meiotic silencing of unsynapsed chromatin) ATR/ATM ДНК зависимые протеинкиназы уН2АХ Фосфорилированный гистон Н2АХ SCP3 Белок боковых элементов синаптонемного комплекса

SCP2 Центральный элемент синаптонемного комплекса

АСА Поливалентный белок к кинетахоре

DAPI 4,6-диамидино-2-фенилиндол дигидрохлорид - краситель

который связывается с ДРЕК FISH Флуоресцентная гибридизация in situ