Особенности структуры и экспрессии генов NCL и NPM при метастатической меланоме кожи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Понкратова, Дарья Андреевна

• Понкратова, Дарья Андреевна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Понкратова, Дарья Андреевна

ВВЕДЕНИЕ......................................................................................................................3

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ................................................................................9

1.1 Понятие о меланоме кожи........................................................................................9

1.1.1 Классификация и виды меланом........................................................................11

1.1.2 Прогностические группы....................................................................................14

1.1.3 Метастатическая меланома.................................................................................14

1.1.4 Генетические факторы риска..............................................................................14

1.1.5 Молекулярные маркеры меланомы....................................................................15

1.1.6 Сигнальные пути, активированные при меланоме кожи.................................17

1.1.7 Регуляторы апоптоза в клетках меланомы........................................................25

1.1.8 Таргетная терапия меланомы..............................................................................26

1.1.9 Другие виды терапии меланомы кожи...............................................................28

1.2 Нуклеофозмин (NPM, В23, ньюматрин)...............................................................29

1.2.1 Строение молекулы В23......................................................................................30

1.2.2 Фосфорилирование В23.......................................................................................32

1.2.3 Основные функции В23.......................................................................................34

1.2.4 Роль В23 в клетке.................................................................................................36

1.2.5 Мутации гена ЫРЫ в опухолевых клетках........................................................39

1.3 Нуклеолин (С23, NCL)............................................................................................40

1.3.1 Структура гена ЫСЬ и молекулы С23................................................................41

1.4 Роль С23 и В23 в регуляции апоптоза..................................................................46

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ......................................................................49

2.1. Материалы...............................................................................................................49

2.1.1 Характеристика больных метастатической меланомой кожи.........................49

2.1.2 Характеристика больных меланомой слизистых оболочек.............................52

2.1.3 Характеристика контрольных образцов............................................................53

2.1.4 Характеристика клеточных линий.....................................................................53

2.1.5 Характеристика ксенографтов меланомы кожи человека mel6 и mel7..........56

2.2 Методы.....................................................................................................................56

2.2.1 Выделение геномной ДНК..................................................................................56

2.2.2 ПЦР-анализ...........................................................................................................56

2.2.3 Анализ ПЦР-продуктов в ПААГ........................................................................59

2.2.4 Анализ экспрессии генов ЫСЬ/ЫРЫ..................................................................59

2.2.5 Окрашивание срезов............................................................................................60

2.2.6 ИГХ-окрашивание................................................................................................61

2.2.7 Вестерн-блотинг...................................................................................................62

2.2.8 Тест на выживаемость клеток (МТТ-тест)........................................................62

2.2.9 Статистическая обработка результатов.............................................................63

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ............................................................64

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.............................................................................................................96

ВЫВОДЫ.......................................................................................................................98

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ...........................................................................................99

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ...........................................................................................100

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности структуры и экспрессии генов NCL и NPM при метастатической меланоме кожи»

ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

Меланома кожи (МК) - крайне агрессивное онкологическое заболевание с ранним началом метастазирования, составляющее около 10% всех злокачественных опухолей кожи. В структуре новообразований среди населения России МК составляет ~ 1 % от всех случаев рака, за последние 10 лет заболеваемость меланомой в России повысилась с 4,5 до 6,1 на 100 тыс. населения, ежегодно МК поражает 8-9 тыс. человек. На долю МК приходится 80% летальных исходов при злокачественных новообразованиях кожи. Ежегодно в России смертность составляет около 4000 случаев, что ниже, чем в странах ЕС, США (~20/100 тыс.) и Австралии (~54/100 тыс.) [1].

Для распространенной меланомы характерна высокая частота летальных исходов (~30%) и рецидивов, а также резистентность к большинству видов лекарственной терапии. Одна из причин высокой смертности - трудность диагностики на ранних стадиях: 80% выявляемых МК - метастатические меланомы III и IV стадий. Медиана выживаемости при метастатической меланоме составляет 6-7 месяцев и эффективной стандартной схемы лечения распространенной МК пока не существует. Характеристика гистологических подтипов МК, которые отличаются по молекулярно-генетическим нарушениям и характеру течения заболевания, позволяет обосновать тактику терапии и улучшить ее результаты. Для совершенствования методов ранней диагностики, профилактики и лечения этого заболевания необходимы принципиально новые молекулярно-генетические подходы. Одним из решений этой проблемы стала разработка молекулярно направленной (таргетной) терапии и развитие персонализированного подхода к лечению МК для повышения выживаемости и качества жизни пациентов.

Перспективной мишенью для молекулярной терапии меланомы может служить белок нуклеолин/С23, который с шапероном нуклеофозмином/В23 составляет около 70% от объема ядрышек. Эти белки выполняют в клетке

важнейшие транспортные и регуляторные функции. Они контролируют скорость клеточного цикла, пролиферацию, биогенез рибосом, сборку хроматина, клеточный сигналинг, ангиогенез и другие ключевые процессы канцерогенеза. Нарушение структуры генов ЫСЬ и/или ЫРМ и экспрессии кодируемых ими белков С23 и В23 может привести к неограниченной клеточной пролиферации и развитию опухолей. Поэтому исследование структуры и экспрессии генов, кодирующих данные белки, представляет собой актуальную проблему, решение которой необходимо для понимания механизмов канцерогенеза МК и разработки новых терапевтических подходов.

Цель и задачи исследования

Целью работы является изучение особенности структуры и экспрессии генов ЫСЬ и ЫРЫ, кодирующих белки С23 и В23, в биопсийном клиническом материале, ксенографтах и клеточных культурах метастатической меланомы кожи человека.

Для достижения цели поставлены следующие задачи:

1. Сформировать коллекции клинического материала меланомы кожи и контрольных образцов морфологически нормальной ткани, библиотеки ДНК/РНК, проанализировать истории болезни.

2. Сравнить структурные особенности генов ЫСЬ/ЫРМ в метастатической меланоме кожи и в контрольных образцах.

3. Сопоставить изменения в клеточных онкогенах и в генах ЫСЬ/ЫРЫ, выявленные в исследуемом материале.

4. Оценить взаимосвязь обнаруженных генетических изменений с клиническими характеристиками меланомы кожи.

5. Проанализировать особенности экспрессии генов ЫРМ/ЫСЬ и продукции нуклеолина/С23 и нуклеофозмина/В23 в операционном материале и в ксенографтах меланомы кожи.

Научная новизна и практическая значимость исследования

В работе впервые проанализирована структура и экспрессия генов ЫСЬ/ЫРМ в модельных клеточных линиях и ксенографтах МК, а также в

клинических образцах МК. Впервые описаны генетические изменения (полиморфные варианты и делеция н.п.), предположительно имеющие прогностическое значение. На двух клеточных культурах МК, ксенографтах и биопсийном материале подтверждена дифференциальная экспрессия генов NCL/NPM в опухолевых и нормальных клетках. В опухоли по сравнению с нормальной тканью уровень экспрессии этих генов достоверно выше. Показана коэкспрессия С23 и В23 в опухолевых клетках, что отражает их функциональное сходство, взаимодействие между молекулами и совместный вклад в важнейшие клеточные процессы.

В работе впервые предложено использовать для подавления пролиферации опухолевых клеток катионные пептиды (КП) - предполагаемые лиганды рецепторного С23. Впервые обнаружено, что гибель клеток МК обусловлена их апоптозом в ответ на воздействие малых доз КП. На модельных клеточных линиях МК отобран ряд КП, перспективных для дальнейшего исследования in vivo.

Теоретическая значимость работы состоит в том, что изучены особенности структуры и экспрессии генов NCL/NPM в норме и в опухоли - модельных клеточных линиях и клинических образцах МК. Это позволило выявить функционально значимые генетические изменения, особенности экспрессии белков С23/В23 и обосновать механизм индукции гибели опухолевых клеток с участием С23 и супрессора р53. Таким образом, результаты работы дополняют и расширяют имеющиеся данные по строению и функциям С23/В23, обосновывают прогностическое значение экспрессии этих белков в МК.

Практическая значимость работы состоит в том, что предложенные методики или их модификации, например анализ последовательностей ПЦР-продуктов в ПААГ для выявления генетических изменений, количественный анализ экспрессии белков на ИГХ-окрашенных срезах, можно использовать в экспериментах. Полученные данные о структуре генов NCL/NPM в клетках МК важны для картирования этих генов в солидных опухолях человека. КП, отобранные с помощью МТТ-теста и анализа клеток под микроскопом,

перспективны для исследования на моделях in vivo с целью их использования в клинической практике в качестве молекулярно-направленных средств с избирательной токсичностью для опухоли.

Методология и методы исследования

Проведен анализ образцов опухолей и нормальной ткани, полученных от 137 пациентов с меланомой кожи, 18 образцов опухолей от пациентов с меланомой слизистых оболочек, наблюдавшихся в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. В качестве контрольной группы сравнения проанализированы образцы крови от 94 здоровых лиц, не имеющих семейной отягощенности онкологией. В работе также использованы две низкодифференцированные клеточные линии меланомы кожи.

С помощью ПЦР, электрофореза ПЦР-продуктов в агарозном геле и ПААГ, с последующим прямым секвенированием отобранных образцов проанализирована структура генов NCL и NPM, кодирующих белки С23 и В23. Анализ экспрессии проводился с помощью ОТ ПЦР, вестерн-блотинга и окрашивания тканевых срезов. Полученные клинические и молекулярно-генетические данные были внесены в электронную базу на основе Microsoft Excel 2003 и обработаны с помощью программы Statistica for Windows (версия 6.1).

Для оценки цитотоксичности коллекции катионных пептидов использовали стандартный МТТ-тест.

Положения, выносимые на защиту

1. В доступной литературе и молекулярно-биологических базах данных детальная структура генов NCL и NPM в солидных опухолях не описана. Однако отмечается консервативность структуры отдельных экзонов и отсутствие мутаций [88]. Проведенный анализ структуры всех экзонов и прилегающих интронных последовательностей этих генов в клетках МК и слизистых оболочек выявил различные гаплотипы, включающие от 0 до 5 полиморфных вариантов (ПВ) и неизвестную ранее делецию трех нуклеотидов в экзоне 4 гена NCL.

2. Вопрос о взаимосвязи структурных генетических изменений NCL и NPM и клинических особенностей оставался открытым. В ходе работы было

обнаружено, что пациентов со сходными локализацией и гистологией опухоли, а также сходным спектром генетических изменений наблюдались различия в опухолевом процессе, включая отдаленное метастазирование. Чёткой взаимосвязи клинических характеристик и генетических изменений не выявлено.

3. Ранее структуры генов NCL и NPM в гистологически различных меланомах и других солидных опухолях не изучались и не сравнивались. В данной работе было показано, что спектр комбинаций ПВ исследуемых генов шире у пациентов с меланомой слизистых, при МК они сходны с популяционными (контролем). Частота ПВ генов NCL и NPM у пациентов с меланомой слизистых значительно отличается от МК и контроля. Различия в структуре генов NCL и NPM, в частоте и спектре мутаций онкогенов у пациентов с МК и с меланомой слизистых указывают на их тканеспецифичность.

4. Известно, что в опухолях уровень экспрессии С23/В23 выше, чем в нормальных клетках, что связано с высокой пролиферативной активностью опухолевых клеток. Результаты исследования показали, что уровни экспрессии исследуемых генов и продукции С23 и В23 в клетках МК выше, чем в норме, причем уровень экспрессии NCL превышает NPM и наблюдается коэкспрессия этих белков.

Результаты подтверждают роль С23 и В23 как маркеров клеточной пролиферации, имеющих прогностическое значение.

Степень достоверности и апробация результатов

Апробация диссертации состоялась 15 июля 2016 года на совместной научной конференции лаборатории онкогеномики, лаборатории биохимии опухолей, лаборатории генетики опухолевых клеток, лаборатории механизмов канцерогенеза, лаборатории онкогенных сигнальных путей, лаборатории механизмов гибели опухолевых клеток НИИ Канцерогенеза ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России.

Репрезентативные выборки пациентов и контрольной группы, включенных в исследование, использование современных методов исследования и статистической обработки данных позволило получить достоверные результаты.

Результаты представленного исследования доложены и обсуждены на конференции «Молекулярная онкология: итоги и перспективы» (Москва, 2016); «Молекулярная онкология: итоги и перспективы» (Москва, 2015); «XIX российский онкологический конгресс» (Москва, 2015); «УШ съезд онкологов и радиологов СНГ и Евразии» (Казань, 2014); «III Международная Конференция: Саркомы костей, мягких тканей и опухоли кожи» (Москва, 2014)

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Понятие о меланоме кожи

Меланома - злокачественная опухоль, развивающаяся из меланоцитов -пигментных клеток, локализованных на базальной мембране и продуцирующих меланин, который защищает кожу от УФ излучения. Меланома развивается вследствие злокачественной трансформации меланоцитов и меланобластов и является чрезвычайно агрессивным этиологически гетерогенным заболеванием.

Кожная форма меланомы - наиболее частая, в то время как на опухоли других локализаций (слизистые и мозговые оболочки, ткани глаза) приходится менее 10% случаев меланомы. МК занимает одно из лидирующих мест по частоте летальных исходов - до 80% от всех случаев злокачественных заболеваний кожи. Рост заболеваемости МК в мире составляет около 5% в год [1]. Существует множество факторов риска данного заболевания, которые можно разделить на экзогенные и эндогенные.

Экзогенные факторы:

1. Физико-химические, связанные с интенсивностью УФ облучения кожи, ионизирующей радиацией, предшествующими травмами кожи, воздействием химических канцерогенов. Избыточная инсоляция приводит не только к прямому повреждению кератиноцитов и меланоцитов, но и к нарушению функций лимфоцитов - натуральных киллеров, подавлению иммунитета и к повышению риска развития других опухолей.

2. Биологические факторы, связанные с фенотипом кожи, образом жизни, питанием, приемом лекарственных и гормональных препаратов. У представителей негроидной расы МК встречается редко, в основном на непигментированных участках кожи (ладони и стопы). Частота заболеваемости МК у лиц белой расы растет по мере приближения к экватору. Особенно восприимчивы люди со светлой кожей и рыжеволосые.

Эндогенные факторы

МК нередко предшествуют:

(1) Невусы - доброкачественные поражения кожи, развивающиеся из меланоцитов. Риск злокачественного перерождения невусов диаметром более 2 см составляет 5-20%. С возрастом частота заболеваемости злокачественной МК увеличивается вдвое каждые 15 лет жизни.

(2) Пигментная ксеродерма, которая развивается в результате дефектной репарации ДНК, и наследуется по аутосомно-рецессивному типу.

(3) Меланоз Дюбрея, практически все опухоли, возникающие на фоне меланоза Дюбрея, относятся к МК.

Наследственность.

Семейные (наследственные) меланомы наиболее часто связаны с изменениями генов-супрессоров опухолей, таких как СОКЫ2Л (р16) и СВК4 и наследуются по аутосомно-доминантному типу. Поэтому диагностика меланомы сопряжена с анамнезом пациентов и с определением онкологической отягощенности в их семьях. Эндокринные факторы.

Частота развития МК в препубертатном периоде невысока. В процессе меланомагенеза активную роль играют половые гормоны - эстрогены и андрогены, а также меланоцитстимулирующий гормон - МСГ. Популяционная частота заболеваемости МК у женщин выше, чем у мужчин и ее пик отмечен в 3-5 декадах жизни, когда уровень эстрогенов максимальный. Имеются данные, что заболевание протекает более благоприятно в предменопаузе. Беременность оказывает стимулирующее действие на малигнизацию существующих пигментных невусов вследствие высокого уровня женских половых гормонов. Иммунологические факторы.

Иммуносупрессия, например, при аллогенной трансплантации, и иммунодефицитные состояния организма повышают риск заболевания. Предшествующие меланоме заболевания и оперативные вмешательства.

Риск возникновения МК повышен при наличии кожных кератозов. В ряде случаев МК встречается в сочетании с лимфогранулематозом и микозом кожи. Также имеются данные о более высокой частоте заболеваемости МК у пациентов,

перенёсших тонзилэктомию. Риск заболевания уменьшается у женщин, которым была выполнена двусторонняя овариоэктомия [11].

1.1.1 Классификация и виды меланом

Общепринята классификация МК по гистологическому типу и распространенности опухолевого процесса:

1. Поверхностно-распространяющаяся МК составляет ~ 70% всех случаев заболевания. Развивается из меланоцитов и может возникать на фоне невусов. Такие опухоли обладают низкой способностью к метастазированию и, как правило, распространяются не глубже сосочкового слоя дермы. Фаза радиального роста может продолжаться 5 и более лет. Для фазы вертикального роста характерна инвазия клеток опухоли в ретикулярный и подкожно-жировой слой с последующим быстрым ростом. Чаще такие опухоли локализованы на спине и на голени, средний возраст больных - 50 лет, прогноз обычно благоприятный.

2. Узловая меланома (нодулярная) встречается в 10-30% случаев и морфологически представляет собой узловое образование тёмно-коричневого или чёрного цвета, иногда эти опухоли беспигментые. Иногда МК узловой формы может возникнуть на неизменной коже с очень короткой фазой горизонтального роста, прогноз обычно негативный.

3. Акрально-лентигиозная и слизистая меланомы (10% всех случаев) встречаются в старшем возрасте. Опухоли, как правило, с неровными краями, с медленным ростом в радиальном направлении, локализованы обычно в верхних слоях дермы (на ладонях, подошвах, кончиках пальцев, под ногтевым ложем). Прогноз зависит от степени инфильтрирующего роста опухоли. Эта форма МК является вариантом поверхностно-распространяющейся меланомы, но с более агрессивным течением, и чаще встречается на сильно пигментированной коже.

4. Лентиго-меланома (меланотические веснушки) - редкая форма МК у пожилых, которая развивается на фоне меланоза Дюбрея и проходит две фазы медленного роста в верхних слоях дермы в течение 10-20 лет. Опухолевые узелки

в виде пятен от желто-коричневого до почти черного цвета, диаметром 1.5-3 мм, формируются в гладких веснушках, как правило, на лице и чаще у женщин.

Ключевые характеристики некоторых форм МК представлены в таблице 1.

Таблица 1 — Клинико-гистологические варианты меланомы кожи

Особенности Поверхностно- Узловая МК МК типа Акрально-

распространя- злокачествен- лентигиозная

ющаяся МК ного лентиго МК

Средний 45 50 70 40-50

возраст(лет)

Локализация Нижние Туловище, Голова, шея, Ладони,

конечности и голова, шея кисти подошвы,

туловище подногтевая

Длительность Более 5 лет отсутствует Более 10 лет Около 2 лет

фазы

радиального

роста

Частота 65% 25% 7% 3%

5-летняя 70-84% 50-69% 80-85% 58%

выживаемость

Среди МК выделяют несколько наиболее часто встречающихся гистологических типов [из 11]:

а) эпителиоидноклеточная МК

б) веретеноклеточная МК

в) смешанный тип

г) мелкоклеточный тип

По некоторым данным известно, что клеточный состав не влияет на течение заболевания. Однако толщина опухоли по Бреслоу, уровень инвазии по Кларку (рис. 1), наличие изъязвления и морфология опухоли имеют прогностическое значение (табл. 2) [10].

5,4% 0.9% /

■ ■

■ >1

□ Ш

■ IV

■ ^

Рисунок 1 — Частота диагностированных случаев МК с различными уровнями инвазии по Кларку в российской популяции (римскими цифрами обозначены уровни инвазии по Кларку)

Таблица 2 — Характеристика прогностических факторов МК [по 144]

Прогностический фактор Клеточные маркеры Значение

Толщина опухоли Кадгерин Потеря экспрессии связана с формированием метастатического фенотипа

ALCAM(CD166), uPA/uPAR Активация матриксных металлопротеиназ, инвазия и метастазирование

Фибробласты, эпителиальные клетки Секреция цитокинов, хемокинов, факторов роста

Изъязвление первичной опухоли ^N3, остеопонтин Адгезия, хемотаксис, инвазия, метастазирование, гомеостаз эпидермиса

Митотическая активность Гены репарации ДНК Восстановление повреждений ДНК

ROF, секьюрин Репликация ДНК, разделение хромосом

Лимфоцитарная инфильтрация Опухоль- инфильтрирующие лимфоциты Противоопухолевый иммунный ответ

Пол Раково-тестикулярные антигены Мишени для иммунного ответа

1.1.2 Прогностические группы

На основании клинико-морфологических данных, выделяют следующие прогностические группы [по 11]:

1. Больные с риском рецидивирования МК выше 80% и выживаемостью не более 5 лет с момента постановки диагноза (III-IV стадии).

2. Пациенты с высоким риском (50-80%) рецидивирования МК в течение 5 лет при поражении л/у (III стадия) и при толщине опухоли более 4 мм (IIB-IIC стадия).

3. Пациенты с промежуточным риском рецидивирования МК (15-50%) при толщине первичной опухоли от 2 до 4 мм (IIA-IIB стадия).

4. Пациенты с низким риском рецидивирования (до 15%) при толщине первичной опухоли менее 2 мм (I-IIA стадия).

1.1.3 Метастатическая меланома Меланома метастазирует во многие органы, зачастую поражая желудочно-кишечный тракт (ЖКТ) и кожу, что не характерно для других злокачественных новообразований. Очень часто наблюдаются метастазы в головной мозг; выживаемость таких пациентов не превышает 4 месяцев. Именно поражение ЦНС обусловливает летальные исходы у 50% больных с метастатической МК. Прогноз метастатической МК неблагоприятный: 1-летняя выживаемость больных с поражением кожи, подкожной клетчатки и лимфатических узлов составляет 59%, при поражении лёгких - 57%, при поражении других внутренних органов, а также при повышении уровня лактатдегидрогеназы/ЛДГ - 41% [2].

1.1.4 Генетические факторы риска Частота заболеваемости наследственной меланомой составляет около 10% от всех случаев. Наличие семейной отягощённости повышает риск заболевания примерно в два раза [65]. Для наследственной меланомы характерно раннее начало и не менее двух случаев заболевания среди родственников первой линии родства, а также первично-множественные меланомы у пациентов.

Генетический анализ семей, отягощенных меланомой, выявил сцепление заболевания с хромосомным локусом 9р21, а именно с геном p16/CDKN2A -

мощным ингибитором клеточного цикла путем супрессии CDK4 [34, 138]. Ген CDKN2A состоит из четырёх экзонов и кодирует 2 различных белка p16INK4a и

л ziARF

р14 , которые участвуют в регуляции клеточного цикла и апоптоза, и образуются в результате альтернативного сплайсинга [40]. Абсолютный риск меланомы среди носителей мутаций CDKN2A зависит от родословной и факторов среды.

Эпидемиологические исследования показали прямую зависимость между светлой кожей и риском развития меланомы [65]. Среди множества известных генов регулирующих начальную и факультативную пигментацию выделяют экспрессию рецептора MC1R - умеренный фактор риска меланомы [115]. Около 80% рыжеволосых индивидов - носители терминальных полиморфных вариантов гена MC1R p.D84E, p.R151C, p.R160W, p.D294H, p.R142H и p.I155T тесно связаны с фенотипом RHC, в то время как варианты p.V60L, p.V92M и p.R163Q чаще встречаются у темнокожих [131]. MC1R активирует аденилатциклазу в ответ на связывание с a-MSH [66]. Далее увеличивается cAMP, связывающий транскрипционный фактор MITF, который индуцирует транскрипцию генов, синтезирующих эумеланин. Эумеланин - основной источник УФ-затухания в сильно пигментированной коже. Около 1% светлокожих пациентов с меланомой несут мутации MITF (E318K) и для них характерны патогенетические полиморфные варианты гена MC1R [169].

Среди генов-мишеней MITF, помимо генов, кодирующих пигменты, имеются гены, кодирующие ингибиторы клеточного цикла CDK (CDK1), p16Ink4a [106] и р21 [35]. Генами-мишенями, транскрипцию которых регулирует MITF, являются также CDK2 [54] и Slug, кодирующий белок-регулятор инвазии меланоцитов [76, 136], и гены тирозинкиназных рецепторов [111].

1.1.5 Молекулярные маркеры меланомы 1. Уровень лактатдегидрогеназы/ЛДГ - один из надёжных прогностических факторов метастатической МК. Гипоксия в клетках МК затрудняет синтез АТФ путём окислительного фосфорилирования глюкозы, в то время как при низких концентрациях кислорода или в анаэробных условиях ЛДГ катализирует

превращение пирувата в лактат. Высокий уровень ЛДГ является негативным предиктором ответа на терапию дакарбазином или комбинацией дакарбазин + облимерсен [16].

2. Низкомолекулярные белки семейства S100, которые выполняют множество значимых для клетки функций. Существует не менее 20 известных белков, каждый из которых кодируется отдельным геном. Белки семейства S100 фосфорилируют другие белки, участвуют в регуляции транскрипции, регулируют активность ферментов, уровень кальция и функции цитоскелета. Внеклеточные белки этого семейства регулируют лейкоцитарную хемоаттракцию, активацию макрофагов и модулируют клеточную пролиферацию, связанные с воспалительными процессами и канцерогенезом [135]. Несколько белков из семейства S100 регулируют р53 и апоптоз; некоторые из них действуют как опухолевые промоторы, а другие - как супрессоры опухолей. Для белков семейства S100 характерна тканевая и клеточная специфичность экспрессии. Белок S100В представлен как в нормальной ткани, так и в злокачественных опухолях. Уровень его экспрессии коррелирует с клинической стадией заболевания, включая злокачественную меланому, для которой этот маркер хорошо изучен и является диагностическим [9, 29, 78].

3. Белок с меланома-ингибирующей активностью (МИА) - белок, высоко экспрессируемый в клетках злокачественной меланомы. Кодируется одной копией гена на хромосоме 19q13.31-q13.33 и выступает в качестве аутокринного фактора роста. Его название на самом деле неправильно, и его гиперэкспрессия коррелирует с усилением инвазии, диссеминацией и метастазированием опухоли [28, 74]. Клинически высокий уровень белка МИА в опухоли связан с более поздней стадией и плохим прогнозом [31, 113, 146].

С поздними стадиями развития меланомы коррелирует также высокий уровень экспрессии VEGF, хотя этот маркёр обладает низкой чувствительностью и специфичностью. Однако в 90% случаев распространённой меланомы он является негативным предиктором процесса [124]. Существует множество других

маркёров, связанных со специфичностью сигнальных путей или характеристиками меланомных клеток (табл. 3).

Таблица 3 — Характеристика некоторых маркёров злокачественной меланомы

Группа Маркер

Меланоцитарные и меланома-специфичные маркеры Тирозиназа (TYR), TRP1 (Tyrosine Related Protein 1) и TRP2 (Tyrosine Related Protein 2) TYR2,допахром таутомераза, Gp100, MITF

Ассоциированные с меланомой антигенные маркёры Pmel 17, меланоцит-специфичный MART1 и др. белки I класса MHC-ограниченных опухолевых антигенов, меланотрансферрин (р97), MUC-18 (Melanoma cell adhesion molecule), высокомолекулярные меланома-ассоциированные антигены MAGE

Однако ни один из известных маркёров не является более достоверным, чем S100 или ЛДГ [12].

1.1.6 Сигнальные пути, активированные при меланоме кожи

В основе высокопролиферативной активности опухолевых клеток лежит гиперактивация множества сигнальных путей (рис. 2). Генетические нарушения лежат в основе неконтролируемого роста опухоли, устойчивости к апоптозу, способности к инвазии и метастазированию. Для МК характерна молекулярная гетерогенность, ряд мутаций встречается наиболее часто и имеет решающее значение для выживания и прогрессирования опухоли (табл. 4).

Рисунок 2 — Ключевые сигнальные пути и регуляция процессов, патологически активированных в опухолях [по 97]

Таблица 4 — Основные звенья сигнальных путей, патологически

активированных в клетках меланомы [8]

Сигнальный путь Ген Частота и характер изменений Функция

МАРК-митоген-активированные протеинкиназы Активирующие мутации (23% случаев), чаще в меланоме слизистых, ладоней и подошв Рецептор фактора роста стволовых клеток

NRAS Мутации гена из семейства кодирующих малые ГТФ-связывающие белки генов в 10-26% случаев МК. Активация нескольких ключевых сигнальных путей. Передача сигналов пролиферации от рецепторов фактора роста

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Понкратова, Дарья Андреевна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Давыдов, М.И. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2012 г / Под ред. М.И. Давыдова и Е.М. Аксель //М.: Издательская группа РОНЦ. - 2014. - 226 с.

2. Зенит-Журавлёва, Е.Г. Некоторые генетические особенности метастатической меланомы кожи человека / Е.Г. Зенит-Журавлёва, А.А. Лушникова, Д.А. Понкратова и др. // Молекулярная медицина. - 2014. - № 4. - С. 57-64

3. Зенит-Журавлёва, Е.Г. Нуклеофозмин и нуклеолин: кодирующие гены и экспрессия в различных тканях животных и человека / Е.Г. Зенит-Журавлёва, Е.М. Полковниченко, А.А. Лушникова и др. // Молекулярная медицина. - 2012. -№ 4. - С. 24-31

4. Коржевская, Е.В. Таргетная терапия генитальной меланомы у онкологически отягощенных пациенток с мутацией гена KIT (клинические наблюдения) / Е.В. Коржевская, А.А. Лушникова, Д.А. Понкратова и др. // Онкогинекология. - 2015. - № 4. - С. 23-28

5. Куликова, К.В. Сигнальный путь Wnt и его значение для развития меланомы / К.В. Куликова, А.В. Кибардин, Н.В. Гнучев и др. // СТМ. - 2012. - № 3. - С. 107-112.

6. Лушникова, А.А. Особенности экспрессии лептина и его рецептора при метастатической меланоме кожи / А.А. Лушникова, А.В. Балбуцкий, Д.А. Понкратова, Т.П. Казубская // Успехи молекулярной онкологи. - 2015. - Т. 2. - № 2. - С. 63-67

7. Михайлова, И.Н. Коллекция клеточных линий меланомы человека / Под ред. И.Н. Михайловой, А.Ю. Барышникова // НИИ ЭДиТО ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» МЗ РФ. - 2015. - 103 с.

8. Новик, А.В. Меланома кожи: новые подходы / А.В. Новик // Практическая онкология. - 2011. - Т. 12. - № 1. - С. 36-42

9. Решетов, И.В. Значение уровня сывороточного белка S-100 при меланоме / И.В. Решетов, Н.С. Сергеева, Д.Д. Пак и др. // Российский онкологический журнал. - 2007. - № 4. - C. 13-16

10. Франк, Г.А. Первое Всероссийское молекулярно-эпидемиологическое исследование меланомы: результаты анализа мутаций в гене BRAF / Г.А. Франк, Л.Э. Завалишина, Т.В. Кекеева // Архив патологии. - 2014. - T. 76. - № 3. - С. 6573

11. Чистяков, С. С. Онкология для практикующих врачей: учебное пособие / Под ред.С.С. Чистякова // М.: Авторская Академия. - 2009. - 632 с.

12. Шляхтунов, Е.А. Молекулярно-генетическая диагностика некоторых злокачественных солидных опухолей / Е.А. Шляхтунов, В.М Семенов // Новости хирургии. - 2014. - Т. 22. - № 4. - C. 481-487

13. Abdelmohsen, K. RNA-binding protein nucleolin in disease / K. Abdelmohsen, M. Gorospe // RNA Biol. - 2012. - Vol. 9. - N 6. - P. 799-808

14. Ackermann, J. Metastasizing melanoma formation caused by expression of activated N-Ras Q61 K on an INK4a-deficient background / J. Ackermann, M. Frutschi, K. Kaloulis et al // Cancer Res. - 2005. - Vol. 65. - N 10. - P. 4005-4011

15. Adachi, Y. Nucleolar targeting signal of Rex protein of human T-cell leukimia virus type I specificaly binds to nucleolar shuttle protein B23 / Y. Adachi, T. Copeland, M. Hatanaka et al // J. Biol. Chem. - 1993. - Vol. 268. - N 19. - P. 1393013934

16. Agarwala, S.S. LDH correlation with survival in advanced melanoma from two large, randomised trials (Oblimersen GM301 and EORTC 18951) / S.S. Agarwala, U. Keilholz, E. Gilles et al // Eur J Cancer. - 2009. - Vol. 45. - N 10. - P. 1807-1814

17. Algazi, A.P. Treatment of cutaneoes melanoma: current approaches and future prospects / A.P. Algazi, C.W. Soon, A.I. Daud // Cancer Manag. Res. - 2010. -Vol. 2. - P. 197-211

18. Askew, E.B. Transcriptional synergy between melanoma antigen gene protein-A11 (MAGE-11) and p300 in androgen receptor signaling / E.B. Askew, S. Bai,

A.J. Blackwelder, E.M. Wilson // The Journal of biological chemistry. - 2010. - Vol. 285. - N 28. - P. 21824-21836

19. Atkins, M.B. High-dose recombinant interleukin 2 therapy for patients with metastatic melanoma: Analysis of 270 patients treated between 1985 and 1993 / M.B. Atkins, M.T. Lotze, J.P. Dutcher // J Clin Oncol. - 1999. - Vol. 17. - N 7. - P. 21052116

20. Bai, S. Epidermal-growth-factor-dependent phosphorylation and ubiquitinylation of MAGE-11 regulates its interaction with the androgen receptor / S. Bai, E.M. Wilson // Molecular and cellular biology. - 2008. -Vol. 28. - N 6. - P. 19471963

21. Bardeesy, N. Dual inactivation of RB and p53 pathways in RAS-induced melanomas / N. Bardeesy, B.C. Bastian, A. Hezel // Mol Cell Biol. - 2001. - Vol. 21. -N 6. - P. 2144-2153

22. Barel, M. Nucleolin, a shuttle protein promoting infection of human monocytes by Francisella tularensis / M. Barel, K. Meibom, A. Charbit // PLoS One. -2010. - Vol. 5. - N 12. - P. 14193

23. Bastian, B.C. Mutations and copy number increase of HRAS in Spitz nevi with distinctive histopathological features / B.C. Bastian, P.E. LeBoit, D. Pinkel // Am J Pathol. - 2000. - Vol. 157. - N 3. - P. 967-972

24. Bastian, B.C. Understanding the progression of melanocytic neoplasia using genomic analysis: From fields to cancer / B.C Bastian // Oncogene. - 2003. - Vol. 22. - N 20. - P. 3081-3086

25. Berger, M.F. Melanoma genome sequencing reveals frequent PREX2 mutations / M.F. Berger, E. Hodis, T.P. Heffernan et al // Nature. - 2012. - Vol. 485. -N 7399. - P. 502-506

26. Bhat, U.G. Nucleophosmin interacts with FOXM1 and modulates the level and localization of FOXM1 in human cancer cells / U.G. Bhat, R. Jagadeeswaran, M. Halasi, A.L. Gartel // J Biol.Chem. - 2011. - Vol. 286. - N 48. - P. 41425-41433

27. Biggiogera, M. Simultaneous immunoelectron microscopic visualization of protein B23 and C23 distribution in the HeLa cell nucleolus / M. Biggiogera, S. Fakan,

S.H. Kaufmann et al // J Histochem. Cytochem. - 1989. - Vol. 37. - N 9. - P. 13711374

28. Bogdahn, U. Autocrine tumor cell growth-inhibiting activities from human malignant melanoma / U. Bogdahn, R. Apfel, M. Hahn et al // Cancer Res. - 1989. -Vol. 49. - N 19. - P. 5358-5363

29. Boni, R. Immunohistochemical localization of the Ca2+ binding S100 proteins in normal human skin and melanocytic lesions / R. Boni, G. Burg, A. Doguoglu et al // Br J Dermatol. - 1997. - Vol. 137. - N 1. - P. 39-43

30. Borner, C. Mutated N-ras upregulates Bcl-2 in human melanoma in vitro and in SCID mice / C. Borner, H. Schlagbauer Wadl, I. Fellay et al // Melanoma Res. -1999. - Vol. 9. - N 4. - P. 347-350

31. Bosserhoff, A.K. Melanoma-inhibiting activity, a novel serum marker for progression of malignant melanoma / A.K. Bosserhoff, M. Kaufmann, B. Kaluza et al // Cancer Res. - 1997. - Vol. 57. - N 15. - P. 3149-3153

32. Brandt, R. Nucleophosmin is a component of the fructoselysine-specific receptor in cell membranes of Mono Mac 6 and U937 monocyte-like cells / R. Brandt, M. Nawka, J. Kellermann et al // Biochim Biophys Acta. - 2004. - Vol. 1670. - N 2. -P. 132-136

33. Calle, A. Nucleolin is required for an efficient herpes simplex virus type 1 infection / A. Calle, I. Ugrinova, A. Epstein et al // J. Virol. - 2008. - Vol. 82. - N 10. -P. 4762-4773

34. Cannon-Albright, L.A. Assigment of a locus for Familial melanoma, MLM, to chromosome 9p13-p22 / L.A. Cannon-Albright, D.E. Goldgar, L.J. Meyer et al // Science. - 1992. - Vol. 258. - N 5085. - P. 1148-1152

35. Carreira, S. Mitf cooperates with Rb1 and activates p21Cip1 expression to regulate cell cycle progression / S. Carreira, J. Goodall, I. Aksan et al // Nature. - 2005. - Vol. 433. - N 7027. - P. 764-769

36. Cartlidge, R.A. Oncogenic BRAF (V600E) inhibits BIM expression to promote melanoma cell survival / R.A. Cartlidge, G.R. Thomas, S. Cagnol // Pigment Cell Melanoma Res. - 2008. - Vol. 21. - N 5. - P. 534-544

37. Chan, P.K. Isolation and characterization of the human nucleophosmin/B23 (NPM) gene: identification of the YY1 binding site at the 5' enhancer region / P.K. Chan, F.Y. Chan, S.W. Morris, Z. Xie // Nucleic. Acids. Res. - 1997. - Vol. 25. - N 6. - P. 1225-1232

38. Chapman, P.B. Improved survival with Vemurafenib in melanoma with BRAF V600E mutation / P.B. Chapman, A. Hauschild, C. Robert et al // N. Engl. J. -2011. - Vol. 364. - N 26. - P. 2507-2516

39. Chin, L. Malignent melanoma: Modern black plague and genetic black box / L. Chin, G. Merlino, R A. DePinho // Genes Dev. - 1998. - Vol. 12. - N 22. - P. 3467-3481

40. Chin, L. The genetics of malignant melanoma: Lessons from mouse and man / L. Chin // Nat Rev Cancer. - 2003. - Vol. 3. - N 8. - P. 559-570

41. Ching, R.H. Phosphorylation of nucleophosmin at threonine 234/237 is associated with HCC metastasis / R.H. Ching, E.Y. Lau, P.M Ling et al // Oncotarget. -2015. - N 6. - Vol. 41. - P. 43483-43495

42. Cho, J.L. Oestrogen receptor-beta signalling protects against transplanted skin tumour growth in the mouse / J.L. Cho, M. Allanson, V.E. Reeve // Photochem Photobiol Sci. - 2010. - Vol. 9. - N 4. - P. 608-614

43. Chudnovsky, Y. Use of human tissue to assess the oncogenic activity of melanoma-associated mutations / Y. Chudnovsky, A.E. Adams, P. B. Robbins et al // Nat Genet. - 2005. - Vol. 37. - N 7. - P. 745-749

44. Clevers, H. Wnt/beta-catenin signaling in development and disease / H. Clevers // Cell. - 2006. - Vol. 127. - N 3. - P. 469-480

45. Cohen, C. Mitogen-activated protein kinase activation is an early event in melanoma progression / C. Cohen, A. Zavala-Pompa, J.H. Sequeiral et al // Clin Cancer Res. - 2002. - Vol. 8. - N 12. - P. 3728-3733

46. Curtin, J.A. Distinct sets of genetic alterations in melanoma / J.A. Curtin, J. Fridlyand, T. Kageshita et al // N Engl J Med. - 2005. - Vol. 353. - N 20. - P. 21352147

47. Da Forno, P.D. WNT5A expression increases during melanoma progression and correlates with outcome / P.D. Da Forno, J.H. Pringle, P. Hutchinson et al // Clin. Cancer Res. - 2008. - Vol. 14. - N 18. - P. 5825-5832

48. Dabbous, M. Biomarkers of metastatic potential in cultured adenocarcinoma clones / M. Dabbous, M. Jefferson, L. Haney et al // Clin Exp Metastasis. - 2011. - Vol. 28. - N 2. - P. 101-111

49. Dai, D.L. Prognostic significance of activated Akt expression in melanoma: A clinicopathologic study of 292 cases / D.L. Dai, M. Martinka, G.Li // J Clin Oncol. -2005. - Vol. 23. - N 27. - P. 1473-1482

50. Davis, M.J. The genesis of Zelboraf: targeting mutant B-Raf in melanoma / M.J. Davis, J. Schlessinger // J Cell Biol. - 2012. - Vol. 199. - N 1. - P. 15-19

51. Delmas, V. Beta-catenin induces immortalization of melanocytes by suppression p16INK4a expression and cooperation with N-RAS in melanoma development / V. Delmas, F. Beermann, S. Martinozzi et al // Genes Dev. - 2007. -Vol. 21. - N 22. - P. 2923-2935

52. Di Matteo, A. Molecules that target nucleophosmin for cancer treatment an update / A. Di Matteo, M. Franceschini, S. Chiarella et al // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7. - N 28. - P. 44821-44840

53. Dissanayake, S.K. The WNT5A/protein kinase C pathway mediates motility in melanoma cells via the inhibition of metastatic suppressors and ignition of an epithelial to mesenchymal transition / S.K. Dissanayake, M. Wade, C.E. Johnson et al // J. Biol. Chem. - 2007. - Vol. 282. - N 23. - P. 17259-17271

54. Du, J. Critical role of CDK2 for melanoma growth linked to its melanocyte-specific transcriptional regulation by MITF / J. Du, H.R. Widlund, M. A. Horstman et al // Cancer Cell. - 2004. - Vol. 6. - N 6. - P. 565-576

55. Eichhoff, O.M. The immunohistochemistry of invasive and proliferative phenotype switching in melanoma: A case report / O.M. Eichhoff, M.C. Zisper, M. Xu et al // Melanoma Res. - 2010. - Vol. 20. - N 4. - P. 349-355

56. Eisenmann, K.M. Mitogen-activated protein kinase pathway-dependent tumor-specific survival signaling in melanoma cells through inactivation of the

proapoptotic protein bad / K.M. Eisenmann, M.W. VanBrocklin, N.A. Staffend et al // Cancer Res. - 2003. - Vol. 63. - N 23. - P. 8330-8337

57. Evans, M.S. Current and future trials of targeted therapies in cutaneous melanoma / M.S. Evans, S.V Madhunapantula, G.P Robertson, J.J. Drabick // Adv Exp Med Biol. - 2013. - Vol. 779. - P. 223-255

58. Faivre, S. Current development of mTOR inhibitors as anticancer agents / S. Faivre, G. Kroemer, E. Raymond // Nat Rev Drug Discov. - 2006. - Vol. 5. - N 8. -P. 671-688

59. Falini, B. Altered nucleophosmin transport in acute myeloid leykemia with mutated NPM1: molecular basis and clinical implications / B. Falini, N. Bolli, A. Liso et al // Leukemia. - 2009. - Vol. 23. - N 10. - P. 1731-1743

60. Fang, L. Role of cell-surface nucleolin in lipopolysaccharide-stimulated expression and secretion of TNF-alpha and IL-1beta / L. Fang, K.K. Wang, L. Jiang et al // Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. - 2008. - Vol. 33. - N 11. - P. 999-1004

61. Farin, K. Structure- function analysis of nucleolin and ErbB receptors interactions / K. Farin, A. Di Segni, A. Mor et al // PloS One. - 2009. - Vol. 4. - N 7. -P. 6128

62. Flaherty, K.T. Inhibition of mutated, activated BRAF in metastatic melanoma / K.T. Flaherty, I. Puzanov, K.B. Kim et al // N engl J Med. - 2010. - Vol. 363. - N 9. - P. 809-819

63. Frehlick, L. New insights into the nucleophosmin/ nucleoplasmin family of nuclear chaperones / L. Frehlick, J. Eirin-Lopez, J. Ausio // Bioassays. - 2007. - Vol. 29. - N 1. - P. 49-59

64. Fujiki, H. Cell-surface nucleolin acts as a central mediator for carcinogenic, anti-carcinigenic, and disease-related ligands / H. Fujiki, T. Watanabe, M. Suganuma // J Cancer Res Clin Oncol. - 2014. - Vol. 140. - N 5. - P. 689-699

65. Gandini, S. Meta-analisys of risk factors for cutaneous melanoma: ffl. Family history, actinic damage and phenotypic factors / S. Gandini, F. Sera, M.S. Cattaruza // Eur J Cancer. - 2005. - Vol. 41. - N 14. - P. 2040-2059

66. Garcia-Borron, J.C. Wild-type and mutant B-RAF activate C-RAF through distinct mechanisms involving heterodimerization / J.C. Garcia-Borron, H. Peterson, D. Barford, R. Marais // Mol Cell. - 2005. - Vol. 20. - N 6. - P. 963-969

67. Gilmartin, A.G. GSK1120212 (JTP-74057) is an ingibitor of MEK activity and activation with favorable pharmacokinetic properties for sustained in vivo pathway inhibition / A.G. Gilmartin, M.R. Bleam, A. Groy et al // Clin Cancer Res. - 2011. -Vol. 17. - N 5. - P. 989-1000

68. Gjerset, R. DNA damage, p14ARF, nucleophosmin (NPM1/B23), and cancer / R. Gjerset // J. Mol. Histol. - 2006. - Vol. 37. - N 5-7. - P. 239-251

69. Goel, V.K. Examination of mutation in BRAF, NRAS and PTEN in primary cutaneous melanoma / V.K. Goel, A.J. Lazar, C.L. Warneke // J Invest Dermatol. - 2006. - Vol. 126. - N 1. - P. 154-160

70. Gonzalez, V. The C-Terminal of Nucleoin Promotes the Formation of the c-MYC G-Quadruplex and Inhibits c-MYC Promoter Activity / V. Gonzalez, L.H. Harley // Biochemistry. - 2010. - Vol. 49. - N 45. - P. 9706-9714

71. Gorden, A. Analysis of BRAF and N-RAS mutations in metastatic melanoma tissues / A. Gorden, I. Osman, W. Gai et al // Cancer Res. - 2003. - Vol. 63. - N 14. - P. 3955-3957.

72. Grossmann, A.H. The small gtpase ARF6 stimulates ß-catenin transcriptional activity during wnt5a-mediated melanoma invasion and metastasis / A.H. Grossmann, J.H. Joo, J. Clancy et al // Sci. Signal. - 2013. - Vol. 6. - N 265. - P. 14

73. Gu, Y. The therapeutic target of estrogen receptor-alpha36 in estrogen-dependent tumors / Y. Gu, T. Chen, E. Lopez et al // Journal of translational medicine. -2014. - Vol. 12. - P. 16

74. Guba, M. Overexpression of melanoma inhibitory activity (MIA) enhances extravasation and metastatic of A-mel 3 melanoma cells in vivo / M. Guba, A.K. Bosserhoff, M. Steinbauer et al // Br J Cancer. - 2000. - Vol. 83. - N 9. - P. 1216-1222

75. Guo, J. Phase II, open-label, single-arm trial of imatinib mesylate in patients with metastatic melanoma harboring c-Kit mutation or amplification / J. Guo, L. Si, Y. Kong // J Clin Oncol. - 2011. - Vol. 29. - N 21. - P. 2904-2909

76. Gupta, P.B. The melanocyte differentiation program predisposes to metastasis after neoplastic transformation / P.B. Gupta, C. Kuperwasser, J.P. Brunet et al // Nat Genet. - 2005. - Vol. 37. - N 10. - P. 1047-1054

77. Hamilton, G. AKT regulates NPM dependent ARF localization and p53mut stability in tumors / G. Hamilton, A.G. Abraham, J. Morton et al // Oncotarget. - 2014.

- Vol. 5. - N 15. - P. 6142-6167

78. Heizmann, C.W. The multifunctional S100 protein family / C.W. Heizmann // Methods Mol Biol. - 2002. - Vol. 172. - P. 69-80

79. Hers, I. Akt signaling in health and disease / I. Hers, E.E. Vincent, J.M. Tavare // Cell Signal. - 2011. -Vol. 23. - N 10. - P. 1515-1527

80. Hingorani, К. Mapping the functional domains of nucleolar protein B23 / К. Hingorani, A. Szebem, M.O. Olson // J. Biol Chem. - 2000. - Vol. 275. - N 32. - P. 24451-24457

81. Hovanessian, A. Surface expressed nucleolin is constantly induced in tumor cells to mediate calcium-dependent ligand internalization / A. Hovanessian, C. Soundaramourty, D. El Khoury et al // PLos One. - 2010. - Vol. 5. - N 12. - P. 15787

82. Hu, J. DIGE-based proteomic analysis identifies nucleophosmin/B23 and nucleolin/C23 as over-expressed proteins in relapsed/refractory acute leukemia / J. Hu, M. Lin, T. Liu et al // Leuk. Res. - 2011. - Vol. 35. - N 8. - P. 1087-1092

83. Ilmonen, S. Ki-67, Bcl-2 and p53 expression in primary and metastatic melanoma / S. Ilmonen, M. Hernberg, S. Pyronen // Melanoma Res. - 2005. - Vol. 15.

- N 5. - P. 375-381

84. Inder, K. Nucleophosmin and nucleolin regulate K-Ras signaling / K. Inder, M. Hill, J. Hancock // Communicat. Integr. Biol. - 2010. - Vol. 3. - N 2. - P. 188-190

85. Inder, K.L. Nucleophosmin and nucleolin regulate K-Ras plasma membrane interactions and MAPK signal transduction / K.L. Inder, C. Lau, D. Loo et al // J Biol Chem. - 2009. - Vol. 284. - N 41. - P. 28410-28419

86. Ji, Z. Targeting the RAS pathway in melanoma / Z. Ji, K.T. Flaherty, H. Tsao // Trends Mol Med. - 2012. - Vol. 18. - N 1. - P. 27-35

87. Johnstone, R.W. Apoptosis: A link between cancer genetics and chemotherapy / RW. Johnstone, A.A. Ruefli, S.W. Lowe // Cell. - 2002. - Vol. 108. -N 2. - P. 153-164

88. Karhemo, P. An extensive tumor array analysis supports tumor suppressive role for nucleophosmin in breast cancer / P. Karhemo, A. Rivinoja, J. Lundin et al // Am. J. Pathol. - 2011. - Vol. 179. - N 2. - P. 1004-1014

89. Kharas, M.G. ABL oncogenes and phosphoinositide 3-kinase: Mechanism of activation and downstream effectors / M.G. Kharas, D.A. Fruman // Cancer Res. -2005. - Vol. 65. - N 6. - P. 2047-2053

90. Khurts, S. Nucleolin interacts with telomerase / S. Khurts, K. Masutomi, L. Delgermaa et al // J Biol Chem. - 2004. - Vol. 279. - N 49. - P. 51508-51515

91. Kiyohara, E. Circulating tumor cells as prognostic biomarkers in cutaneous melanoma patients / E. Kiyohara, K. Hata, S. Lam, D.S. Hoon // Methods in molecular biology. - 2014. - Vol. 1102. - P. 513-522.

92. Klaus, A. Wnt signaling and impact on development and cancer / A. Klaus, W. Birchmeier // Nat. Rev. Cancer. - 2008. - Vol.8. - N 5. - P. 387-398

93. Kotani, H. The delta isoform of protein phosphatase type 1 is localized in nucleolus and dephosphorylates nucleolar phosphoproteins / H. Kotani, M. Ito, T. Hamaguchi et al // Biochem Biophys Res Commun. - 1998. - Vol. 249. - N 1. - P. 292-296

94. Koutsioumpa, M. Interplay between avß3 integrin and nucleolin regulates human endothelial and glioma cell migration / M. Koutsioumpa, C. Polytarchou, J. Courty et al // J Biol Chem. - 2013. - Vol. 288. - N 1. - P. 343-354

95. Krause, A. Polo-Like kinase 2-dependent phosphorylation of NPM/B23 on serine 4 triggers centriole duplication / A. Krause, I. Hoffmann // PLoS One. - 2010. -Vol. 5. - N 3. - P. 9849

96. Kuramitsu, Y. Proteomic analysis for nucleolar proteins related to tumor malignant progression: a comparative proteomic study between malignant progressive cells and regressive cells / Y. Kuramitsu, E. Hayashi, F. Okada // Anticancer Res. -2010. - Vol. 30. - N 6. - P. 2093-2099

97. Kyrgidis, A. Melanoma: Stem cells, sun exposure and hallmarks for carcinogenesis, molecular concept and future clinical implications / A. Kyrgidis, T.G. Tzellos, S. Triaridis // J. Carcinog. - 2010. - Vol. 9. - N 3. - P. 1-15

98. Lazar-Molnar, E. Autocrine and paracrine regulation by cytokines and growth factors in melanoma / E. Lazar-Molnar, H. Hegyesi, S. Toth // Cytokine. - 2000.

- Vol. 12. - N 6. - P. 547-554

99. Lee, S.W. Nuclear Akt interacts with B23/NPM and protects it from proteolytic cleavage, enhancing cell survival / S.W. Lee, Z. Liu, K. Ye et al // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 2008. - Vol. 105. - N 43. - P. 16584-16589

100. Leiter, U. Antiapoptotic bcl-2 and bcl-xL in advanced malignant melanoma / U. Leiter, R.M. Schmid, P. Kaskel et al // Arch Dermatol Res. - 2000. - Vol. 292. - N 5. - P. 225-232

101. Li, Z. Nucleophosmin interacts directle with c-Myc and controls c-Myc-induced hyperproliferation and transformation / Z. Li, D. Boone, S.R. Hann // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 2008. - Vol. 105. - N 48. - P. 18794-18799

102. Lin, K. The role of B-RAF mutations in melanoma and the induction of EMT via dysregulation of the NF-KB/Snail/RKIP/PTEN circuit / K. Lin, S. Bariteki, L. Militello et al // Gen.Cancer. - 2010. - Vol. 1. - N 5. - P. 409-420

103. Lin, W.M. Modeling genomic diversity and tumor dependency in malignant melanoma / W.M. Lin, A.C. Baker, R. Beroukhim et al // Cancer Res. -2008. - Vol. 68. - N 3. - P. 664-673

104. Lindstrom, M. NPM/B23: a multifunctional chaperone in ribosome biogenesis and chromatin remodeling / M. Lindstrom // Biochem Res Int. - 2011. -Vol. 2011. - P. 195209

105. Liu, Y. Expression of nucleophosmin/NPM1 correlates with migration and invasiveness of colon cancer cells / Y. Liu, X-F. Zhang, L-Sh. Qi et al // J.Biochem.Sci.

- 2012. - Vol. 19. - P. 53

106. Loercher, A.E. MITF links differentiation with cell cycle arrest in melanocytes by transcriptional activation of INK4A / A.E. Loercher, E.M. Tank, R.B. Delston, J.W. Harbour // J Cell Bio. - 2005. - Vol. 168. - N 1. - P. 35-40

107. Losfeld, M.E. The cell surface expressed nucleolin is a glycoprotein that triggers calcium entry into mammalian cells / M.E. Losfeld, D.E. Khoury, P. Mariot et al // Exp Cell Res. - 2009. - Vol. 315. - N 2. - P. 357-369

108. Mascaux, C. The role of NPM, p14arf and MDM2 in precursors of bronchial squamous cell carcinoma / C. Mascaux, F. Bex, B. Martin et al // Eur Respir J. - 2008. -Vol. 32. - P. 678-686

109. McCloskey, R. Human papillomavirus type 16 E6/E7 upregulation of nucleophosmin is import for proliferation and inhibition of differentiation / R. McCloskey, C. Menges, A. Friedman // J. Virol. - 2010. - Vol. 84. - N 10. - P. 51315139

110. McGill, G.G. Bcl2 regulation by the melanocyte master regulator Mitf modulates lineage survival and melanoma cell viability / G.G. McGill, M. Horsmann, H.R. Widlund et al // Cell. - 2002. - Vol. 109. - N 6. - P. 707-718

111. McGill, G.G. c-Met expression is regulated by Mitf in the melanocyte lineage / G.G. McGill, R. Haq, E.K. Nishimura, D.E. Fisher // J Biol Chem. - 2006. -Vol. 281. - N 15. - P. 10366-10373

112. Meng, G.Z. Nucleolin expression is correlated with carcinogenesis and progression of cervical squamous cell carcinoma / G.Z. Meng, Y. Zi, H.Q. Li et al // Nan Fang Yi Ke Da Xue Xue Bao. - 2015. - Vol. 35. - N 10. - P. 1511-1514

113. Meral, R. Prognostic significance of melanoma inhibiting activity levels in malignant melanoma / R. Meral, D. Duranyildiz, F. Tas et al // Melanoma Res. - 2001. - Vol. 11. - N 6. - P. 627-632

114. Mikheev, A.M. Dickkopf-1 activates cell death in MDA-MB435 melanoma cells / A.M. Mikheev, S.A. Mikheeva, R. Rostomily et al // Biochem.Biophys.Res.Commun. - 2007. - Vol. 352. - N 3. - P. 675-680

115. Miller, A.J. New insights into pigmentary pathways and skin cancer / A.J. Miller, H. Tsao // Br J Dermatol. - 2010. - Vol. 162. - N 1. - P. 22-28

116. Mitchell, D.L. Acute exposure to ultraviolet-B radiation modulates sex steroid hormones and receptor expression in the skin and may contribute to the sex bias

of melanoma in a fish model / D.L. Mitchell, A.A. Fernandez, R. Garcia et al // Pigment cell & melanoma research. - 2014. - Vol. 27. - N 3. - P. 408-417

117. Mitrea, D.M. Cryptic disorder: an order-disorder transformation regulates the function of nucleophosmin / D.M. Mitrea, R.W. Kriwacki // Pac Symp Biocomput. -2012. - P. 152-163.

118. Mitrea, D.M. Nucleophosmin integrates within the nucleolus via multimodal interactions with proteins displaying R-rich linear motifs and rRNA / D.M. Mitrea, J.A. Cika, C.S. Guy et al // Elife. - 2016. - Vol. 5. - P. 13571

119. Mitrea, D.M. Structural polymorphism in the N-terminal oligomerization domain of NPM1 / D.M. Mitrea, C.R. Grace, M. Buljan et al // Proc Natl Acad Sci USA. - 2014. - Vol. 111. - N 12. - P. 4466-4471

120. Modena, P. Predictors of outcome in an AIEOP series of childhood ependymomas: a multifactorial analysis / P. Modena, F.R. Buttarelli, R. Miceli et al // Neuro Oncol. - 2012. - Vol. 14. - N 11. - P. 1346-56.

121. Montone, K.T. Protooncogene c-kit expression in malignant melanoma: Protein loss with tumor progression / K.T. Montone, P. van Belle, R. Elenitsas, D.E. Elder // Mod Pathol. - 1997. - Vol. 10. - N 9. - P. 939-944

122. O'Connell, M.P. Hear the Wnt ROR; How melanoma cells adjust to changes in wnt / M.P. O'Connell, A.T. Weeraratna // Pigment Cell Melanoma Res. -2009. - Vol. 22. - N 6. - P. 724-739

123. Okuwaki, M. The structure and functions of NPM1/nucleophosmin/B23, a multifunctional nucleolar acidic protein / M. Okuwaki // J. Biochem. - 2008. - Vol. 143. - N 4. - P. 441-448

124. Osella-Abate, S. VEGF-165 serum levels and tyrosinase expression in melanoma patients: correlation with the clinical course / S. Osella-Abate, P. Quaglino, P. Savoia et al // Melanoma Res. - 2002. - Vol. 12. - N 4. - P. 325-334

125. Papp, T. Mutational analysis of the N-ras, p53, p16INK4a, CDK4, and MC1R genes in human congenital melanocytic naevi / T. Papp, H. Pemsel, R. Zimmermann et al // J Med Genet. - 1999. - Vol. 36. - N 8. - P. 610-614

126. Piantaa, A. Nucleophosmin is overexpressed in thyroid tumors / A. Piantaa, C. Pyppina, A. Franzonib et al // Biochem Biophys Res Commun. - 2010. - Vol. 397. -N 3. - P. 499-504.

127. Plettenberg, A. Human melanocytes and melanoma cell constitutively express the Bcl-2 proto-oncogene in situ and in cell culture / A. Plettenberg, C. Ballaun, J. Pammer et al // Am J Pathol. - 1995. - Vol. 146. - N 3. - P. 651-659

128. Poletto, M. Nucleophosmin modulates stability, activity and nucleolar

rc\

accumulation of base excision repair proteins / M. Poletto, L. Lirussi, D.M. Wilson 3 , G. Tell // Mol Biol Cell. - 2014. - Vol. 25. - N 10. - P. 1641-1652

129. Pollock, P.M. PTEN inactivation is rare in melanoma tumors but occurs frequently in melanoma cell lines / P.M. Pollock, G.J. Walker, J.M. Glendening et al // Melanoma Res. - 2002. - Vol. 12. - N 6. - P. 565-575

130. Qi, W. NSC348884 a nucleolin inhibitor disrupts oligomer formation and induces apoptosis in human cancer cells / W. Qi, K. Shakalya, A. Stejskal et al // Oncogene. - 2008. - Vol. 27. - N 30. - P. 4210-4220

131. Raimondi, S. MC1R variants, melanoma and red hair color phenotype: A meta- analysis / S. Raimondi, F. Sera, S. Gandini et al // Int J Cancer. - 2008. - Vol. 122. - N 12. - P. 2753-2760

132. Reyes-Reyes, E.M. Cell-surface nucleolin is a signal transducing P-selectin binding protein for human colon carcinoma cell / E.M. Reyes-Reyes, S.K. Akiyama // Exp Cell Res. - 2008. - Vol. 314. - N 11-12. - P. 2212-2223

133. Rickards, B. Nucleolin is requuired for RNA polymerase I transcription in vivo / B. Rickards, S. Flint, M. Cole et al // Mol. Cell. Biol. - 2007. - Vol. 27. - N 3. -P. 937-948

134. Said, A.E. Pleiotrophin inhibits HIV infection by binding the cell surface expressed nucleolin / A.E. Said, J. Courty, J. Svab et al // FEBS J. - 2005. - Vol. 272. -N 18. - P. 4646-4659

135. Salama, I. A review of the S100 proteins in cancer / I. Salama, P.S. Malone, F. Mihaimed, J.L Jones // Eur J Surg Oncol. - 2008. - Vol. 34. - N 4. - P. 357364

136. Sanchez-Martin, M. SLUG (SNAI2) deletions in patients with Waardenburg disease / M. Sanchez-Martin, A. Rodriguez-Garcia, J. Perez-Losada et al // Hum Mol Genet. - 2002. - Vol. 11. - N 25. - P. 3231-3236

137. Selzer, E. Expression of Bcl-2 family members in human melanocytes, in melanoma metastases and in melanoma cell lines / E. Selzer, H. Schlagbauer- Wadl, I. Okamoto et al // Melanoma Res. - 1998. - Vol. 8. - N 3. - P. 197-203

138. Serrano, M. A new regulatory motif in cell-cycle control causing specific inhibition of cyclin D/CDK4 / M. Serrano, G.J. Hannon, D. Beach // Nature. - 1993. -Vol. 366. - N 6456 - P. 704-707

139. Sharpless, N.E. Both products of the mouse Ink4a/Arf locus suppress melanoma formation in vivo / N.E. Sharpless, K. Kannan, J. Xu et al // Oncogene. -2003. - Vol. 22. - N 32. - P. 5055-5059

140. Shen, S.S. Analysis of protein tyrosine kinase expression in melanocytic lesions by tissue array / S.S. Shen, P.S. Zhang, O. Eton, V.G. Prieto // J Cutan Pathol. -2003. - Vol. 30. - N 9. - P. 539-547

141. Sheng, J. Identification biomarkers for cervical cancer in peripheral blood lymphocytes by oligonucleotide microarrays / J. Sheng, W. Zhang // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. - 2010. - Vol. 90. - N 37. - P. 2611-2615

142. Skvara, H. Mcl-1 blocks radiation-induced apoptosis and inhibits clonogenic cell death / H. Skvara, C. Thallinger, V. Wacheck et al // Anticancer Res. -2005. - Vol. 25. - N 4. - P. 2697-2703

143. Slipicevic, A. Expression of activated Akt and PTEN in malignant melanomas: Relationship with clinical outcome / A. Slipicevic, R. Holm, M.T. Nguen et al // Am J Clin Pathol. - 2005. - Vol. 124. - N 4. - P. 528-536

144. Spatz, A. The biology of melanoma prognostic factors / A. Spatz, N. Stock, G. Batist et al // Discov. Med. - 2010. - Vol. 10. - N 50. - P. 87-93

145. Stahl, J.M. Loss of PTEN promotes tumor development in malignant melanoma / J.M. Stahl, M. Cheung, A. Sharma et al // Cancer Res. - 2003. - Vol. 63. -N 1. - P. 2881-2890

146. Stahlecker, J. MIA as a reliable tumor marker in the serum of patients with malignant melanoma / J. Stahlecker, A. Gauger, A. Bosserhoff // Anticancer Res. -2000. - Vol. 20. -N 6D. - P. 5041-5044

147. Stepanova, V. Nuclear translocation of urokinase-type plasminogen activator / V. Stepanova, T. Lebedeva, A. Kuo et al // Blood. - 2008. - Vol. 112. - N 1.

- P. 100-110

148. Storck, S. Conditional knockout of nucleolin in DT40 cells reveals the functional redundancy of its RNA-binding domains / S. Storck, M. Thiry, P. Bouvet // Biol Cell. - 2009. - Vol. 101. - N 3. - P. 153-167

149. Szebeni, A. Nucleolar protein B23 has molecular chaperone activities / A. Szebeni, M.O. Olson // Protein Sci. - 1999. - Vol. 8. - N 4. - P. 905-912

150. Szebeni, A. Nucleolar protein B23 stimulated neclear import of the HIV-1 Rev protein and NLS-conjugated albumin / A. Szebeni, B. Mehrotra, A. Baumann et al // Biochemistry. - 1997. - Vol. 36. - N 13. - P. 3941-3949

151. Takagi, M. Regulatoin of p53 translation and induction after DNA damage by ribosomal protein L26 and nucleolin / M. Takagi, M.J. Absalon, K.G. McLure, M.B. Kastan // Cell. - 2005. - Vol. 123. - N 1. - P. 49-63

152. Tate, A. Met-independent hepatocyte growth factor-mediated regulation of celladhesion in human prostate cancer cells / A. Tate, S. Isotani, M. Bradley et al // BMC Cancer. - 2006. - Vol. 6. - P. 197

153. Tediose, T. Interlay between REST and nucleolin transcription factors: a key mechanism in the overexpression of genes upon increased phosphorylation / T. Tediose, M. Kolev, B. Sivasankar et al // Nucleic Acids Res. - 2010. - Vol. 38. - N 9. -P. 2799-2812

154. Tron, V.A. Immunohistochemical analysis of bcl-2 protein regulation in cutaneous melanoma / V.A. Tron, S. Krajewski, H. Klein-Parker // Am J Pathol. - 1995.

- Vol. 146. - N 3. - P. 643-650

155. Tsao, H. Genetic interaction between NRAS and BRAF mutations and PTEN/MMAC1 inactivation in melanoma / H. Tsao, V. Goel, H. Wu et al // J Invest Dermatol. - 2004. - Vol. 122. - N 2. - P. 337-341

156. Tulchin, N. BRCA1 protein and nucleolin colocalize in breast carcinoma tissue and cancer cell lines / N. Tulchin, M. Chambon, G. Juan et al // Am J. Pathol. -2010. - Vol. 176. - N 3. - P. 1203-1214

157. Ugrinova, I. Inactivation of nucleolin leads to nucleolar disruption, cell cycle arrest and defects in centrosome duplication / I. Ugrinova, K. Monier, C. Ivalidi et al // BMC Mol Biol. - 2007. - Vol. 8. - P. 66

158. von Willebrand, M. FGF-2 blocks TGF-ß1- mediated suppression of Bcl-2 in normal melanocytes / M. von Willebrand, K. Kohler, T. Alanko et al // Exp Dermatol. - 2005. - Vol. 14. - N 3. - P. 202-208

159. Wada, T. Mitogen-activated protein kinases in apoptosis regulation / T. Wada, J.M. Penninger // Oncogene. - 2004. - Vol. 23. - N 16 - P. 2838-2849

160. Webster, M.R. A Wnt-ER migration: The confusing role of beta-catenin in melanoma metastasis / M.R. Webster, A.T. Weeraratna // Sci. Signal. - 2013. - Vol. 6.

- N 268. - P. 11

161. Weeraratna, A.T. WNT5A signaling directly affects cell motility and invasion of metastatic melanoma / A.T. Weeraratna, J. Jiang, G. Hostetter et al // Cancer Cell. - 2002. - Vol. 1. - N 3. - P. 279-288

162. Weeraratna, A.T. Wnt-er wonderland - the complexity of Wnt signaling in melanoma / A.T. Weeraratna // Cancer Metastasis Rev. - 2005. - Vol. 24. - N 2. - P. 237-250

163. Wehrle-Haller, B. The role of Kit-ligand in melanocyte development and epidermal homeostasis / B. Wehrle-Haller // Piment Cell Res. - 2003. - Vol. 16. - N 3.

- P. 287-296

164. Wong, J.C. Nucleophosmin 1, upregulated in adenoma and cancers of the colon, inhibits p53-mediated cellular senescence / J.C. Wong, M.R. Hasan, R. Rahman et al // Int.J.Cancer. - 2013. - Vol. 133. - N 7. - P. 1567-1577

165. Wu, B. Effect of C23 down-regulation on proliferation inhibition and apoptosis induced by cisplatin in human osteosarcoma SaOS-2 cells / B. Wu, W. Wang, Z. Li // Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. - 2012. - Vol. 37. - N 1. - P. 32-37

166. Wu, H. PTEN signaling pathways in melanoma / H. Wu, V. Goel, F.G. Haluska // Oncogene. - 2003. - Vol. 22. - N 20. - P. 3113-3122

167. Xie, Q. p85a promotes nucleolin transcription and subsequently enchances EGFR mRNA stability and EGF - induced malignant cellular transformation / Q. Xie, X. Guo, J. Gu et al // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7. - N 13. - P. 15536-15549

168. Yang, Y. C23 protein meditates bone morphogenetic protein-2-mediated EMT via up-regulation of Erk1/2 and Akt in gastric cancer / Y. Yang, C. Yang, J. Zhang // Med Oncol. - 2015. - Vol. 32. - N 3. - P. 76

169. Yokoyama, S. A novel recurrent mutations in MITF predisposes to familial and sporadic melanoma / S. Yokoyama, S.L. Woods, G.M. Boyle et al // Nature. -2011. - Vol. 480. - N 7375 - P. 99-103

170. Yun, J.P. Nucleophosmin/B23 is a proliferate shuttle protein associated with nuclear matrix / J.P. Yun, E.C. Chew, C.T. Liew et al // J. Cell Biochem. - 2003. -Vol. 90. - N 6. - P. 1140-1148

171. Zeller, K.I. Characterization of nucleophosmin (B23) as a Myc target by scanning chromatin immunoprecipitation / K.I. Zeller, T.J. Haggerty, J.F. Barrett et al // J. Biol. Chem. - 2001. - Vol. 276. -N 51. - P. 48285-48291

172. Zhang, X.D. Activation of ERK1/2 protects melanoma cells from TRAIL-patient survival, Bcl-2 expression, and proliferation / X.D. Zhang, J.M. Borrow, X.Y. Zhang et al // Clin Cancer Res. - 2003. - Vol. 11. - P. 5153-5157

173. Zhao, X. Cell cycle-dependent phosphorylation of nucleophosmin and its potential regulation by peptidyl-prolyl cis/trans isomerase / X. Zhao, J. Ji, L.R. Yu et al // J Mol Biochem. - 2015. - Vol. 4. - P. 95-103

174. Zhu, Y.I. Expression of c-kit (CD117) in Spitz nevus and malignant melanoma / Y.I. Zhu, J.E. Fitzpatrick // J Cutan Pathol. - 2006. - Vol. 33. - N 1. - P. 33-37