Особенности реассортации современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.02, кандидат наук Баженова, Екатерина Андреевна

• Баженова, Екатерина Андреевна
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Баженова, Екатерина Андреевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ 4

РАЗДЕЛ 1. ВВЕДЕНИЕ 5

РАЗДЕЛ 2. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ 10

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10

1.1. ВИРУС ГРИППА 10

1.1.1 Структура вируса гриппа А и В 11

1.1.2 Генетическая изменчивость вируса гриппа. Феномен реассортации 13

1.1.3 Методы оценки состава генома вируса гриппа 16

1.2. ПРОФИЛАКТИКА ГРИППА 20

1.2.1. Химиопрофилактика 20

1.2.2. Инактивированные гриппозные вакцины 21

1.2.3. Живые гриппозные вакцины 22

1.2.4. Достоинства и недостатки живых и инактивированных гриппозных 25 вакцин

1.2.5. Другие виды вакцин 26

1.3. ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ГРИППА 31

1.3.1. Способность вируса гриппа к размножению за верхними и нижними 31 пределами температурного оптимума

1.3.2. Чувствительность вируса гриппа к неспецифическим ингибиторам 33 сыворотки крови

1.4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ К ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ 35 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 36

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 41

3.1. РАЗРАБОТКА МЕТОДА МИКС-ПЦР ДЛЯ АНАЛИЗА СОСТАВА ГЕНОМА 41 ШТАММОВ СЕЗОННОЙ И ПАНДЕМИЧЕСКОЙ ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ

3.1.1. Подбор программ и праймеров для скрининга реассортантных 41 штаммов вируса гриппа типа А и В

3.1.2. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих сезонным 42 штаммам вируса гриппа A (H1N1) и A (H3N2)

3.1.3. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих сезонным 44 штаммам вируса гриппа В

3.1.4. Праймеры для идентификации генов, принадлежащих пандемическим 44 или потенциально пандемическим штаммам вируса гриппа A (H1N1) и (H5N1)

3.1.5. Описание метода микс-ПЦР 49

3.1.6. Заключение 53

3.2. ОСНОВНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА СОВРЕМЕННЫХ ВИРУСОВ 54 ГРИППА, ВЛИЯЮЩИЕ IIA ПОДГОТОВКУ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ

ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ

3.2.1. Анализ репродукции современных вирусов гриппа при различных 55 температурах инкубации

3.2.2. Анализ чувствительности вирусов гриппа к неспецифическим 59 ингибиторам нормальной сыворотки крови

3.2.3. Заключение 59

3.3. СЛОЖНОСТИ ПОДГОТОВКИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ ЖИВОЙ 61

ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ НА ОСНОВЕ СОВРЕМЕННЫХ СЕЗОННЫХ И

ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАНДЕМИЧЕСКИХ ВИРУСОВ ГРИППА

3.3.1. Сравнительный анализ наследования реассортантными штаммами 62 генов от донора аттенуации или от вируса гриппа «дикого» типа

разных лет выделения

3.3.2. Характер наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» 64 вирусов гриппа, обладающих са- или /¿-фенотипом

3.3.3. Характер наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» 65 вирусов гриппа, обладающих ингибиторочувствительным фенотипом

3.3.4. Роль нейраминидазы в формировании ингибиторочувствительного 69 фенотипа

3.3.5. Заключение 70

3.4. ОСОБЕННОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ Н5М1-РК8-1Ю РЕАССОРТАНТОВ В 75

КАЧЕСТВЕ ИСТОЧНИКА ПОВЕРХНОСТНЫХ АНТИГЕНОВ ДЛЯ

ПОДГОТОВКИ ПОТЕНЦИАЛЬНО ПАНДЕМИЧЕСКИХ ШТАММОВ

ЖИВОЙ ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ

3.4.1. Особенности использования Н5Ш-Р118-[Ю реассортантов в качестве 76 «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации

3.4.2. Особенности использования Р118-1Ю реассортантов для сезонной 81 инактивированной вакцины в качестве «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации

3.4.3. Особенности использования низкопатогенных вирусов гриппа птиц 81 А(Н5№) в качестве «диких» вирусов для скрещивания с донорами аттенуации

3.4.4. Особенности использования низкопатогенных вирусов гриппа птиц 82 А(Н5Ш) в качестве «диких» вирусов для скрещивания с вакцинным штаммом против гриппа А(НШ1)рс1т

3.4.5. Заключение 83

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 85

РАЗДЕЛ 3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 95

ВЫВОДЫ 100

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 101

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА 120

Y

СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

В/60 донор аттенуации В/СССР/60/69

ВОЗ Всемирная организация здравоохранения

ЖГВ живая гриппозная вакцина

ИГВ инактивированная гриппозная вакцина

ИУ ингибитороустойчивый

ИЧ ингибиторочувствительный

Лен/17 донор аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (H2N2)

ОТ-ПЦР обратная транскрипция с полимеразной цепной реакции

ПЦР полимеразная цепная реакция

РГА реакция гемагглютинации

РКЭ развивающиеся куриные эмбрионы

РТГА реакция торможения геммаглютинации

ХА холодоадаптированный

ЭИД50 50%-ная эмбриональная инфицирующая доза вируса

att, ¿«//-фенотип (attenuation) аттенуация, аттенуирующий фенотип

са, са-фенотип (cold-adaptation) холодоадаптированность

НА гемагглютинин

реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного Indo/5 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (H1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц

A/Indonesia/05/2005 (H5N1) NA нейраминидаза

реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного NIBRG-23 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (Н1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц

A/turkey/Turkey/1 /2005 (H5N1) PR8 «дикий» вирус A/PR/8/34 (H1N1)

репродуктивная способность при различных температурах

RCT

(reproductive capacity at different temperatures) RDE receptor-destroying enzyme

RFLP полиморфизм длин рестрикционных фрагментов

температурочувствительность (неспособность к репродукции

ts, ¿у-фенотип

при температуре выше оптимальной, temperature sensitivity) реассортант, подготовленный на основе высокоурожайного VN1203 (H5N1) вируса A/PR/8/34 (H1N1) (PR8) и вирусов гриппа птиц

A/Veitnam/1203/2004 (H5N1) WT «дикий» (эпидемический) вирус

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности реассортации современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины»

РАЗДЕЛ 1. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Одним из важных признаков вируса гриппа, как вируса, обладающего сегментированным геномом, является его способность к реассортации. Реассортация в природе может привести к шифтовым изменениям антигенной структуры вируса с появлением нового антигенного варианта. В лабораторных условиях принцип реассортации используется при подготовке штаммов живой гриппозной вакцины (ЖГВ) [1, 129, 197]. В основе лежит скрещивание «дикого» (WT) вируса с холодоадаптированным (ХА) донором аттенуации с последующим отбором реассортантов, унаследовавших от «дикого» родителя гены, кодирующие гемагглютишш (НА) и нейраминидазу (NA), а внутренние гены -от донора (формула генома 6:2). Допускается также формула генома 5:3. Этот принцип используется и для подготовки штаммов инактивированной (ИГВ). В этом случае в качестве источника внутренних генов используется донор высокой урожайности A/PR/8/34 (H1N1).

Существенной трудностью работы с противогриппозными вакцинами, отличающей их от других профилактических препаратов, таких, как вакцина против клещевого энцефалита, кори, полиомиелита и пр., является необходимость постоянной смены состава вакцинных штаммов, обусловленная непрерывным процессом эволюции вируса гриппа.

Отдел вирусологии Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Институт экспериментальной медицины» (ФГБНУ «ИЭМ») является единственным в России структурным подразделением, на которое Министерством здравоохранения России возложена обязанность ежегодной подготовки вакцинных штаммов сезонной ЖГВ. В соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в отделе дважды в год готовят новые вакцинные штаммы - для южного и северного полушария и затем передают их в ФГУП «НПО «Микроген» Минздрава России для производства ЖГВ в России и в ВОЗ - для развивающихся стран (Индия, Китай, Таиланд).

В последние годы ЖГВ заняла лидирующее место в мире среди профилактических противогриппозных препаратов. По мнению экспертов ВОЗ, ЖГВ является наиболее эффективным средством защиты восприимчивой популяции от вирусов гриппа, вызывающих не только сезонные эпидемии, но и глобальные пандемии.

Все вышесказанное определяет важность изучения биологических характеристик вируса гриппа для понимания механизмов, лежащих в основе реассортации вирусов гриппа, с последующей разработкой методических подходов, которые облегчили бы процедуру скрещивания «диких» вирусов с донорами аттенуации.

Степень разработанности темы. Несмотря на то, что вирус гриппа изучают на протяжении более, чем восьмидесяти лет, большая группа вопросов пока не нашла своего

ответа. В частности, причины, по которым одни вирусы легко вступают в реассортацшо, а другие - нет, до настоящего момента не известны. Опубликована всего одна работа [187], в которой описаны сложности получения реассортантов вакцинной формулы генома. Зависимость результатов скрещивания от конкретных биологических свойств родительских вирусов практически не изучалась. Не ясна роль других вирусных белков, кроме гемагглютинина, в формировании устойчивости к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови.

ВОЗ, рекомендуя новые кандидаты для подготовки гриппозных вакцин, учитывает только антигенную актуальность и новизну гриппозных штаммов, в то время как такие характеристики рекомендованного «дикого» вируса, как его чувствительность к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови, может поставить под угрозу возможность подготовки в срок вакцинных штаммов [26].

Вопрос об оптимальном соотношении фенотипических свойств «дикого» родительского вируса, используемого для подготовки ЖГВ, был очень кратко описан в работе [129], в которой предлагалось предварительно клонировать «дикий» родительский вирус при повышенной температуре для придания ему большей вирулентности.

На фоне достаточно большого числа работ, посвященных биологии вируса гриппа [117, 143, 154 и др.] и вакцинопрофилактике вызываемого им заболевания [49, 50, 104, 167, 169, 171, 189, 190 и др.] пока еще трудно сделать однозначный вывод о том, какое влияние определенные биологические свойства современных штаммов вируса гриппа могут оказывать на их способность к реассортацни с ХА вирусами; какие сложности возникают при подготовке вакцинных штаммов на основе современных сезонных и потенциально пандемических вирусов гриппа, каковы причины этого явления и существуют ли реальные пути их преодоления.

К моменту начала нашей работы систематические исследования в этом направлении в мире не проводились. Монографий на данную тему, а также защищенных диссертаций в открытом доступе не имеется. Все вышесказанное определяет важность изучения биологических характеристик вируса гриппа, а оценка особенностей реассортацни современных штаммов вируса гриппа с донорами аттенуации ЖГВ представляется весьма актуальной.

Таким образом, основной целью работы явилось изучение влияния биологических свойств современных вирусов гриппа на их способность к реассортацни с донорами аттенуации живой гриппозной вакцины.

Для решения поставленной цели в задачи исследования входило: 1. Разработка экспресс-метода оценки состава генома реассортантов, подготовленных на основе современных штаммов вируса гриппа.

2. Изучение основных биологических свойств современных эпидемических и пандемических штаммов вируса гриппа (устойчивости репродукции за верхними и нижними пределами температурного оптимума, чувствительности к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови) и оценка их влияния на эффективность подготовки вакцинных штаммов живой гриппозной вакцины.

3. Оценка возможности использования реассортантов для инактивированной вакцины на основе вируса А/РК/8/34 в качестве источника гемагглютинина и нейраминидазы для подготовки вакцинных штаммов живой гриппозной вакцины.

Научная новизна работы. Доказано, что НА вируса гриппа вносит определенный вклад в формирование его чувствительности к неспецифическим ингибиторам сыворотки крови млекопитающих и играет важную роль в реассортации «диких» вирусов гриппа с донорами аттенуации.

Впервые продемонстрировано наличие констелляции КА и РВ2 генов у некоторых вирусов гриппа. Эту жесткую связь не удается разорвать методами классической реассортации.

Показано, что в последние 20 лет при подготовке ЖГВ частота получения реассортантов с вакцинной формулой генома снизилась практически в два раза. Установлено наличие прямой связи между частотой получения вакцинных штаммов и фенотипическими свойствами «диких» родительских вирусов.

Теоретическая и практическая значимость работы. Показано, что получение вакцинных штаммов при реассортации «диких» вирусов гриппа человека и птиц и ХА доноров аттенуации во многом определяется уникальными фенотипическими свойствами «дикого» родительского штамма. Наиболее высокий выход вакцинных реассортантов достигается при использовании холодочувствительных, температуро- и ингибитороустойчивых «диких» родительских вирусов. Предварительная инактивация «дикого» родительского вируса ультрафиолетовым облучением позволяет существенно повысить эффективность подготовки вакцинных штаммов ЖГВ на основе современных вирусов гриппа человека и птиц.

Установлено, что не только гемагглютинин, но и нейраминидаза вируса гриппа вовлечена в формирование его ингибиторочувствительного фенотипа.

Разработан экспресс-метод оценки состава генома реассортантных штаммов вируса гриппа, подготовленных на основе современных «диких» штаммов вируса гриппа человека и птиц и доноров аттенуации.

Методология и методы исследования. Методологической основой исследования послужила совокупность вирусологических и молекулярно-биологических методов. В ходе работы использовались как классические методы исследований, так и авторская методика экспресс-анализа состава генома реассортантных вирусов гриппа.

Основные положения, выносимые на защиту. Современные штаммы вируса гриппа обладают широким набором фенотипических свойств от высокой устойчивости к репродукции при повышенных температурах инкубации до холодоустойчивости и чувствительности к неспецифическим ингибиторам, содержащимся в нормальной сыворотке крови млекопитающих, что влияет на эффективность их скрещивания с донорами аттенуации ЖГВ.

В последние годы при подготовке вакцинных штаммов ЖГВ значительно снизилась частота получения реассортантов, наследующих от «дикого» родительского вируса гены, кодирующие НА и ЫА, а остальные гены - от ХА донора аттенуацни. Если до 2000 года количество реассортантов с вакцинной формулой генома составляло 50,8%, то после 2000 года не превышало 26,4%. Наиболее высокая частота получения вакцинных штаммов достигается при скрещивании доноров аттенуации с «дикими» вирусами, устойчивыми к неспецифическим ингибиторам.

Показано наличие жесткой констелляции генов, кодирующих нейраминидазу и РВ2 субъединицу полимеразного комплекса, в составе вирусов гриппа А/Н5. Данную связь не удается разорвать методами классической реассортации с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ш).

Личный вклад автора заключается в непосредственном планировании и выполнении всех экспериментальных разделов работы и обработке полученных данных. Автором лично проведен анализ литературных и собственных данных, обобщены результаты исследований и подготовлены материалы к публикациям.

Внедрение результатов работы в практику. Подготовлены и переданы в производственные институты четыре вакцинных штамма сезонной ЖГВ на эпидемические сезоны 2012-2013 гг. (А/17/Виктория/2011/89 (НЗШ), В/60/Висконсин/2010/125) и 2013-2014, 2014-2015 гг. (А/17/Техас/2012/30 (НЗЫ2), В/60/Массачусетс/2012/10) и один штамм потенциально пандемической ЖГВ А/17/Индиана/11/72 (НЗШ)у на основе выделенного от человека вируса гриппа свиней. Штаммы депонированы в Государственную коллекцию вирусов (Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского. ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Д.Ф. Гамалеи» Минздрава России) под номерами 2723, 2724, 2737, 2740 и 2739. под номерами 2723, 2724, 2737, 2740 и 2739. Документация на подготовленные штаммы направлена в Федеральную службу по интеллектуальной собственности. На один штамм получен патент РФ, а на три штамма имеются положительные решения.

Все исследования входили в плановую научную тематику отдела вирусологии им. А.А.Смородинцева ФГБНУ «ИЭМ».

Степень достоверности и апробация результатов диссертации. Достоверность и обоснованность результатов работы обеспечена использованием современных средств и

методик проведения исследований, значительным объемом работы, большим массивом статистически обработанных данных и комплексным анализом полученных результатов.

Апробация работы осуществлялась на протяжении всего периода проведения исследований. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на 24 отечественных и международных научных конференциях и симпозиумах, в том числе, на 17-м Международном конгрессе медицинских наук (ШСОМЭ) (Гронинген, Нидерланды, 2010); на VII Международном конгрессе по контролю за гриппом (Гонконг, Китай, 2010); на Четвертой конференции Европейской научной рабочей группы по гриппу (ЕВ"\У1) (Мальта, 2011); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы эпидемиологии на современном этапе», посвященной 80-летию кафедры эпидемиологии и доказательной медицины ГОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М.Сеченова Минздравсоцразвития России (Москва, 2011); на Международном конгрессе «Человеческий фактор риска» Союза управления рисками в профилактической медицине (1Л1МРМ) (Лондон, Великобритания, 2012); на Научной конференции «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика, лечение», посвященной 45-летию ФГБУ «НИИ гриппа» Минсоцздравразвития России (Санкт-Петербург, 2012); на УШ-м Международном конгрессе по контролю за гриппом (Кейптаун, ЮАР, 2013); на У-м международном симпозиуме по гриппу, проводимому Европейской научной рабочей группой (Рига, Латвия, 2014), а также на заседаниях отдела вирусологии им. А.А.Смородинцева ФГБНУ «ИЭМ» (2010-2014) и Межлабораторной конференции ФГБНУ «Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова».

Публикации. По теме диссертации опубликовано 1 б научных статей, из которых 9 входят в перечень рецензируемых журналов, рекомендованных ВАК, или в международные реферативные базы данных и системы цитирования, и один патент РФ.

РАЗДЕЛ 2. ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. ВИРУС ГРИППА

Вирусы гриппа (Mixovirus influenzae) принадлежат к семейству Orthomyxoviridae, состоящему из пяти родов: род Thogotovirus (передаваемые клещами), род Isavirus (вирус инфекционной анемии лосося) и три рода вирусов гриппа - Infliienzavirus А, Influenzavirus В и Influenzavirus С. Для человека более актуальны представители двух родов - Influenzaviriis А и Infliienzavirus В, среди которых наибольшим антигенным разнообразием и эпидемической опасностью обладают вирусы гриппа А.

В соответствии с антигенной специфичностью поверхностных гликопротеидов -гемагглютинина и нейраминидазы - вирусы гриппа типа А подразделяются на сероподтипы. До последнего времени насчитывали 17 подтипов гемагглютинина и 10 - нейраминидазы [191]. В 2010 году в Перу от летучих мышей был выделен сероподтип A(H18N11) вируса гриппа А [192].

В отличие от вируса гриппа А, вирусы гриппа В и С разделяются не на сероподтипы, а линии: вирусы гриппа В разветвляются на 2 антигенно различные линии - B/Yamagata/16/88-подобные и B/Victoria/2/87-подобные вирусы. В свою очередь, вирусы гриппа С разделены на 6 линий: С/Тау1ог/1233/47-подобные, C/Aichi/1/81 -подобные, C/Sao Раи1о/378/82-подобные, C/Kanagawa/l/76-подобные, C/Yamagata/26/81 -подобные и C/Missippi/80-подобные вирусы [51, 86]

Важной характеристикой вирусов гриппа А и В является спектр нх хозяев. Вирусы гриппа А в естественных условиях широко распространены среди людей, птиц и целого ряда видов млекопитающих, включая свиней [77], лошадей [152], кошек [53, 105], собак [96, 156], тюленей [58]. Главными природными резервуарами вирусов гриппа А являются свиньи и водоплавающие птицы. Вирусы гриппа А у человека вызывают не только ежегодные сезонные эпидемии, но также глобальные пандемии, охватывающие население всего земного шара, повторяющиеся с интервалом 10-40 лет. В отличие от вирусов гриппа А, вирусы гриппа В инфицируют в основном людей, чаще всего детей, однако есть сведения о выделении вируса гриппа В от тюленей [151]. Вирусы гриппа В не вызывают пандемий и обычно являются причиной локальных вспышек и эпидемий, иногда охватывающих одну или несколько стран. Вирусы гриппа С были выделены в основном от людей, имеются сведения об их выделении от свиней [89].

Хотя долгое время считалось, что вирусы гриппа С ne несут эпидемический потенциал и не играют значительной роли в заболеваемости гриппам и ОРЗ [67], в последнее время появляются работы, описывающие вспышки, вызванные вирусом гриппа С, несущие эпидемический характер [86, 133]. В отличие от вирусов гриппа А и В, они не обладают нейраминидазой и, как следствие, нейраминидазной активностью и содержат всего один поверхностный гликопротеин - HEF - аналог гемагглютинина вирусов гриппа А и В.

1.1.1. Структура вируса гриппа А и В.

Вирион вируса гриппа имеет сферическую или продолговатую форму, размером 80-120 нанометров. В его сердцевине находится нуклеокапсид (молекула РНК, упакованная в оболочку из белка М1), окруженный липидной мембраной. В эту мембрану погружены белки оболочки. У вируса гриппа А их три: НА, NA и трансмембранный белок М2, у вируса гриппа В - четыре: НА, NA и два трансмембранных белка - ВМ2 и NB. Белки оболочки формируют внешнюю поверхность вириона. Два из них - гемагглютинин и нейраминидаза, играют основную роль в инфекционном процессе. Белки М2 и ВМ2 выполняют роль ионного канала (табл. 1). Также в вирионах присутствует дополнительный трансмембранный белок NB.

Геном вирусов гриппа А и В сегментирован и состоит из восьми фрагментов однонитчатой «минус-нитевой» РНК, которые кодируют гены гемагглютинина, нейраминидазы, вирусоспецифического фермента РНК-зависимой-РНК-полимеразы (транскриптазы) из трех субъединиц - белков РВ1, РВ2, РА, а также нуклеопротеида (NP), матриксных (М1 и М2) и неструктурных NS1 и NS2 (NEP) белков [154, 199]. Все сегменты крепятся к плазматической мембране, обладают различной длиной в зависимости от размера молекулы РНК, и образуют пучок, в котором один из них занимает центральное положение, а остальные 7 сегментов его окружают [147].

Отдельные сегменты генома вируса гриппа кодируют от 1 до 4 белков. Функциональная роль большей части вирусных белков в репродукции вирусов гриппа А и В установлена. Результаты, опубликованные в различных работах, суммированы в таблице 1.

Таблица 1. Функциональная роль белков вирусов гриппа А и В (по данным литературы)

Ген Белок и его роль в проявлении биологических функций вируса гриппа А

РВ2 РВ2 - катионная субъединица полимеразного комплекса; связывание 5'-концевых кэпов мРНК и клеточных npe-мРНК, активация РА-зависимой эндонуклеазной активности [154].

РВ1 РВ1- катионная субъединица полимеразного комплекса; обладает эндонуклеазной активностью; отщепляет хозяйские кэпы при синтезе вирусных мРНК; взаимодействует с РВ2 и РА [154]. PB1-F2 (виропорин) -синтезируется в макрофагах; локализован в оболочке митохондрии; стимулирует апоптоз инфицированных клеток; фактор патогенности [63, 62, 115, 134,214]. PB1-N40 - поддерживает баланс экспрессии между РВ1 и РВ1-F2 [201,203].

РА РА - анионная субъединица полимеразного комплекса; элонгация цепи, основной тип активности - эндонуклеазная, обладает также протеазной активностью [154]. РА-Х - функция белка не выяснена[100]. PA-N155 -функция белка не выяснена.[ 138]. PA-N182 - функция белка не выяснена [138].

НА Гемагглютинин: присоединение к поверхностным рецепторам клетки хозяина; адсорбция и проникновение вируса в клетку; вирусный антиген [131].

NP Нуклеопротеин: РНК-связанный белок; предохраняет РНК от разрушения; функционирует как часть полимеразного комплекса [154].

NA Нейраминидаза: вирусный антиген; способствует высвобождению вирусных частиц от поверхности клетки; препятствует аггрегации вирусных частиц [154].

M Матриксный белок (М1): заполняет пространство между оболочкой и нуклеокапсидом; определяет форму вириона; регулирует транспорт вирусных РНП из клеточного ядра в цитоплазму [59, 117]. М2 - Образует ионный канал -протонная помпа; снижает рН внутри вириона, обеспечивая высвобождение вирусного генома в цитоплазму; стабилизирует конформацию НА при его нахождении в аппарате Гольджи [57, 117]. М42 - функция белка не выяснена[202].

NS Неструктурный белок (NS1); антагонист интерферона; подавляет врожденный иммунный ответ хозяина, блокируя внутриклеточный сигналинг; препятствует апоптозу инфицированных клеток; контролирует полиаденшшрование и сплайсинг; ядерно-цитоплазматический транспорт [112]. NEP/NS2 - фактор ядерного экспорта; контролирует ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК fl 55, 162].

Ген Белок и его роль в ироявлении биологических функций вируса гриппа В

РВ2 РВ2 - катионная субъединица полимеразного комплекса; связывание 5'-концеых кэпов мРНК и клеточных пре-мРНК, активация РА-зависимой эндонуклеазной активности [154].

РВ1 РВ1- катионная субъединица полимеразного комплекса; обладает эндонуклеазной активностью; отщепляет хозяйские кэпы при синтезе вирусных м РНК; взаимодействие с РВ2 и РА [154].

РА РА - анионная субъединица полимеразного комплекса; элонгация цепи, основной тип активности - эндонуклеазная, обладает также протеазной активностью [154].

НА Гемагглютинин: присоединение к поверхностным рецепторам клетки хозяина; адсорбция и проникновение вируса в клетку; вирусный антиген [154].

NP Нуклеопротеин: РНК-связанный белок; предохраняет РНК от разрушения; функционирует как часть полимеразного комплекса [154].

NA Нейраминидаза: вирусный антиген; способствует высвобождению вирусных частиц от поверхности клетки; препятствует аггрегации вирусных частиц [154]. NB - трансмембранный белок; функция белка невыяснена [154].

M Матриксный белок (М1): заполняет пространство между оболочкой и нуклеокапсидом; определяет форму вириона; регулирует транспорт вирусных РНП из клеточного ядра в цитоплазму [154]. ВМ2 - образует ионный канал - протонная помпа; снижает рН внутри вириона, обеспечивая высвобождение вирусного генома в цитоплазму; стабилизирует конформацию НА при его нахождении в аппарате Гольджи [137].

NS Неструктурный белок (NS1); антагонист интерферона; подавляет врожденный иммунный ответ хозяина, блокируя внутриклеточный сигналинг; препятствует апоптозу инфицированных клеток; контролирует полиаденилирование и сплайсинг; ядерно-цитоплазматический транспорт [154]. NEP/NS2 - фактор ядерного экспорта; контролирует ядерно-цитоплазматический транспорт мРНК [154].

1.1.2. Генетическая изменчивость вируса гриппа. Феномен реассортации

Отличительная особенность вируса гриппа - высокая изменчивость его антигенных свойств. Как уже отмечалось выше, внутренние белки консервативны по своей структуре и определяют тип вируса (А, В и С). Поверхностные же антигены, напротив, гетерогенны и изменчивы, причем в большей степени это касается гемагглютинина, который наряду с нейраминидазой определяет подтип вирусов гриппа А (НШ1, Н2Ы2, НЗШ и т.д.) или принадлежность к линии В/Уагт^а1а/16/88-подобных или В/УЫопа/2/87-подобных вирусов гриппа В.

Антигенная изменчивость поверхностных белков во многом обусловлена двумя генетическими процессами - дрейфовыми и шифтовыми изменениями вирусного генома.

Антигенный дрейф вируса гриппа. Антигенный дрейф вызывает незначительные изменения структуры поверхностных антигенов, обусловленные точечными мутациями. Как правило, данные антигенные изменения происходят в среднем каждые 2-8 лет под действием селективного давления со стороны иммунной системы, чтобы «ускользать» от иммунитета человека [60]. В процессе антигенного дрейфа происходят точечные мутации в антитело-связывающем сайте белков НА или ИА. Вирус не может больше эффективно подавляться антителами хозяина, выработанными к циркулировавшему ранее штамму, что позволяет ему быстро распространиться среди населения. Данный вид эволюционной изменчивости харакререн для всех штаммов вируса гриппа А и В, хотя и варьирует в зависимости от штамма. Так, например, у вирусов гриппа А(НШ1) и В дрейфовые варианты часто социркулируют с несколькими существующими линиями, допуская повторное появление старых штаммов вируса гриппа. У вирусов гриппа А(НЗК2), напротив, антигенный дрейф происходит гораздо чаще, а новые варианты штаммов данного сероподтипа, как правило, вытесняют старые штаммы.

Антигенный шифт вируса гриппа. Феномен реассортации. Антигенный шифт встречается реже, но является наиболее существенным видом антигенной изменчивости. Шифтовые изменения обусловливают появление антигенно новых вирусов гриппа, к которым популяция не имеет иммунитета, и именно такие вирусы могут обладать пандемическим потенциалом. Эти новые вирусы гриппа содержат НА и/или ИА, полностью отличающиеся от НА и ЫА вирусов, циркулировавших в человеческой популяции в предыдущие годы [69].

Одним из важных признаков вируса гриппа, как вируса, обладающего сегментированным геномом, является его способность к реассортации. Реассортация в природе может привести к шифтовым изменениям антигенной структуры вируса гриппа с появлением нового антигенного варианта вируса вплоть до пандемического. Так в 2009 г. появился «тройной» реассортантный штамм A/California/07/09 (HlNl)pdm, вызвавший первую пандемию 21-го века, который считается «тройным», хотя в процессе реассортации унаследовал гены от четырех различных вирусов гриппа: гены РВ2 и РА - от североамериканской птичьего вируса A(IIINI), ген РВ1 - от человеческого вируса подтипа A(II3N2), гены НА, NP и NS - от классического свиного вируса A(H1N1), а гены NA и М - от Евразийской линии свиного вируса A(IIINI) [142, 143].

Социркуляция генетически различных вирусов гриппа является благоприятным фактором для их реассортации. При этом явление реассортации отмечено как среди вирусов гриппа человеческого происхождения, так и среди вирусов разнообразных групп млекопитающих и птиц. Одним из примеров может служить социркуляция в человеческой популяции вирусов гриппа А типов A(H1N1) и A(H3N2), которая привела к появлению реассортантных штаммов A(H1N2), унаследовавших гемагглютинин от вируса подтипа A/H1N1, а нейраминидазу - от A(H3N2). Первый случай заражения человека реассортантными штаммами A(II1N2), документально подтвержденный, датируется 1983 годом [146]. С 1988 по 1989 было выделено 19 вирусов подтипа A(IilN2) в 6 городах Китая [90, 123], но вирусы данного подтипа не распространились за пределы страны.

В январе 2002 года реассортантный штамм A/Wisconsin/12/2001 (HIN2) был типирован в Атланте (CDC). Данный вирус выделен в начале декабря 2001 от 6-ти месячного ребенка. Впоследствии, за эпидемический сезон 2001-2002 года из 890 выделенных в 41 стране вирусов подтипа А/Н1 51 вирус из Канады, Сингапура, Египта, Малайзии, Индии, Омана, Румынии, Соединного Королевства и США принадлежал подтипу A(H1N2) [212]. ВОЗ и Министерство здравоохранения Великобритании также сообщали о появлении вируса A(II1N2) в нескольких странах Европы и Азии [87, 205, 207].

В 2013 году в Китае была зарегистрирована вспышка, вызванная вирусом птичьего гриппа A(H7N9) у людей [80, 122], который в процессе реассортации унаследовал НА от вируса гриппа птиц подтипа A(II7N3), NA - от птичьего вируса гриппа A(II7N9), а внутренние гены - от вирусов гриппа птиц подтипа A(H9N2) [210].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Баженова, Екатерина Андреевна, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Александрова Г. И. Живая вакцина против гриппа / Г. И. Александрова, А. И. Климов - СПб.: Наука, 1994. - 151с.

2. Александрова Г.И. Применение метода генетической рекомбинации для получения вакцинных штаммов вируса гриппа / Г.И. Александрова // Вопр. вирусол. - 1977.-№4.-С.387-395.

3. Бехтемиров Т.А. Сравнительное изучение штаммов вируса атипичной чумы птиц (болезни Ньюкастла) различной вирулентности в культурах куриных эмбриональных тканей / Т.А. Бехтемиров, И.М. Соккар // Вопр. вирусол. - 1963. -Т.З. - С.330-338.

4. Боравлева ЕЛО. Получение и характеристика реассортантного вируса гриппа А с гемагглютинином Н5 и остальными генами от апатогенного вируса H6N2 / Е.Ю. Боравлева, Н.Ф. Ломакина, Е.А. Кропоткина и др. // Вопр. вирусол. - 2011. - Т.56, №6.- С.9-14.

5. Гармашова Л.М. Различия в температурном диапазоне репродукции вирулентных и аттенуированных холодоадаптированных вирусов гриппа А / Л.М. Гармашова, М.И. Гущина, А.Ю. Егоров и др. // Вопр. вирусол. - 1989. - № 4. - С.411-415.

6. Гендон Ю.З. Новые холодоадаптированные штаммы-доноры аттенуации для живых вакцин против гриппа / Ю.З. Гендон, С. Г. Маркушин, Т. М. Цфасман и др. // Вопр.вирусол. - 2013. - Т. 58, №1.- СЛ1-17.

7. Гендон Ю.З. Преимущества и недостатки инактивированной и живой вакцины против гриппа / Ю.З. Гендон // Вопр. вирусол. - 2004. - Т. 49, № 4. - С.4-12.

8. Гендон Ю.З. Характеристика генома некоторых рекомбинантов вируса гриппа / Ю.З. Гендон, А.И. Климов, Э. Тучкова // Молекулярная биология вируса гриппа. -М., 1979. -С.26-33.

9. Григорьева Е.П. Эффективность живой гриппозной реассортантной вакцины при циркуляции дрейфовых варианотов вирусов гриппа / Е.П. Григорьева, В.П. Дриневский, Е.М. Дорошенко и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. -2009. -№1.-С.45-53.

10. Гуськова Т.А. Арбидол - иммуномодулятор, индуктор интерферона, антиоксидант / Т.А. Гуськова, Р.Г. Глушков - М.: Тимотек, 1999. - 93с.

11. Дешева Ю.А. Определение состава генома реассортантных холодоадаптированных штаммов вируса гриппа В методом рестриктазного анализа / Ю.А. Дешева, Л.Г. Руденко, А.И. Климов // Вопр.вирусол. - 2007. - Т.52, №3. - С. 16-19.

12. Достижения в разработке вакцин против гриппа: Меморандум совещания ВОЗ // Бюлл. ВОЗ. - 1987. - Т.65, №3. - С.11-17.

13. Ершов Ф.И. Интерфероны и их индукторы (от молекул до лекарств) / Ф.И. Ершов, О.И. Киселев - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 356с.

14. Жилова Г.П. Принципы подготовки вакцинных штаммов вируса гриппа / Г.П. Жилова // Проблемы гриппа и вирусных ОРЗ. - JI., 1973. - С.54-64.

15. Жирнов О.П. Эволюционные изменения генов NA и НА вируса гриппа H3N2 в московском регионе в период 2003-2009 гг. / О.П. Жирнов, И.В. Воробьева, C.B. Поярков, О.А.Сафонова, H.A. Малышев // Вопр.вирусол. - 2011. - Т.56, №6. - С.9-15.

16. Иванова A.B. Антигенные и биологические свойства вирусов гриппа типа В, выделенных в России в 2006 - 2010 годах / A.B. Иванова, Д.М. Даниленко, Т.Г. Лобова и др. // Эпидемиологии и Вакцинопрофилактика. - 2011. - №1. - С.4-8.

17. Иванова H.A. Характеристика возбудителей различных заболеваний по ts-признаку / H.A. Иванова, Е.Б. Гринбаум, А.Ю. Тарос // Этиология и диагностика гриппа и других ОРЗ. - Л., 1982. - С. 138-142.

18. Киселева И.В. Анализ мутаций в геноме холодоадаптированных штаммов вируса гриппа А с использованием расширенной модификацией ПЦР-рестрикционного метода / И.В. Киселева, А. И. Климов И Вопр.вирусол. - 2002. - Т.47, №6. - С.24-26.

19. Киселева И.В. Изменение признака температурочувствительности как отражение эволюционной изменчивости эпидемических штаммов вирусов гриппа / И.В. Киселева, Н.В. Ларионова, О.М. Литвинова и др. // Мед. Акад. Ж. - 2002. - Т.2, №3. - С.49-57.

20. Киселева И.В. Метод рестрикционного анализа генома штаммов живой гриппозной вакцины / И.В. Киселева, Н.В. Ларионова, L.C.P. Teley, Л.Г. Руденко // Вопр.вирусол. - 2011. - Т.56, №3. - С.28-32.

21. Киселева И.В. Основы аттенуации вируса гриппа : дис. ... д-ра. биол. наук : 03.00.06 / Киселева Ирина Васильевна. - СПб., 2001. - 33с.

22. Климов А.И. Особенности мутационных изменений геномной РНК холодоадаптированных и hr-вариантов вируса гриппа А, выявляемые методом РНКРНК-гибридизации / А.И. Климов, В.В. Йотов // Молекул, генетика. - 1990. -№11. - С.18-21.

23. Климов А.И. Электрофорез двухцепочечных РНК вируса гриппа в пластинчатом геле как метод анализа состава генома рекомбинантов / А.И. Климов, Ю.З. Гендон

// Вирусные инфекции: энтеровирусные, респираторные, арбовирусные. -Свердловск, 1979. - С. 15-17.

24. Ковалева Т.П. Биологические свойства двух штаммов аденовируса серотипа 4 / Т.П. Ковалева, Т.П. Юрлова, В.К. Болдасов и др. // Вопр. вирусол. - 1971. - №6. -С.700-703.

25. Крашешок А.И. Разработка и производство нового поколения вирионных гриппозных вакцин : автореф. дисс. ... докт. мед. наук : 03.00.06 / Крашенюк Альберт Иванович. - СПб., 1995. - 85с.

26. Ларионова Н.В. Фенотипические особенности эпидемических штаммов вируса гриппа В разных лет выделения / Н.В. Ларионова, И.В. Киселева, И.Н. Исакова, О.М. Литвинова, Л.Г. Руденко // Вопр. вирусол. - 2006. - Т.51, №5. - С.38-41.

27. Ларионова Н.В. Штамм вируса гриппа А/17/Калифорния/2009/38 (H1N1) для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей / Н.В. Ларионова, И.В. Киселева, Г.И. Александрова, Л.Г. Руденко // Патент РФ №2413765 от 16.09.09. - Опубл. БИ 2011. - №7.

28. Ларионова Н.В. Штамм вируса гриппа В/60/Брисбен/08/83 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей / Н.В. Ларионова, И.В. Киселева, Г.И. Александрова, Л.Г. Руденко // Патент РФ №2422517 от 27.06.11. -Опубл. БИ2011.-№18.

29. Ленева И.А. Противовирусные этиотропные химиопрепараты: эффективность против вирусов гриппа А подтипа II5N1 / И.А. Ленева, A.M. Шустер // Вопр.вирусол. - 2006. - Т.51, №5. - С.4-8.

30. Лобова Т.Г. Эволюционная изменчивость вирусов гриппа В, циркулировавших в Российской Федерации с 2005 по 2012 г. / Т.Г. Лобова, A.B. Прокопец, А.Б. Комиссаров и др. // Вопр.вирусол. - 2012. - Т.57, №6. - С.22-26.

31. Лузянина Т.Я. Структура популяции вирусов гриппа А и В, выделенных на протяжении 1977-1986 гг. в системе всесоюзного центра по гриппу и ОРЗ в эпидемические и межэпидемические периоды / Т.Я. Лузянина, Е.Б. Гринбаум, А.И. Банников и др // Эпидемиологический надзор за гриппом и прогнозирование эпидемий - Л., 1987. - С.39^17.

32. Маркушин С.Г. Механизмы изменчивости в процессе пассажей в культуре тканей при пониженной температуре. III. Изменчивость вируса ящура / С.Г. Маркушин, Ю.З. Гендон // Acta Virol. - 1967. - Т. 11, №2. - С. 100-107.

33. Медведева Т.Е. Анализ температурочувствительных мутации в геноме эпидемических штаммов вируса гриппа А/ Т.Е. Медведева, H.A. Иванова // Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекции - JL, 1986. - С.34-43.

34. Метод, указания МУ 3.3.2.1758-03 Методы определения показателей качества иммунологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа (утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 28.09.2003 г.) // М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России. - 2005. - 36с.

35. Найхин А.Н. Противогриппозный иммунитет: отечественный вклад в изучение проблемы и перспективные направления развития исследований / А.Н.Найхин // Мед. Акад. Ж. - 2010. - Т.4, №10. - С.249-255.

36. Полежаев Ф.И. Аттенуированные рекомбинанты вируса гриппа В / Ф.И. Полежаев, A.A. Гаврилов, Г.Н. Будиловский и др. // Новое в эпидемиологии и профилактике вирусных инфекций. - J1., 1986. - С. 109-116.

37. Полежаев Ф.И. Выделение температурочувствительных штаммов вируса гриппа в эпидемию, вызванную вирусом A/Victoria в 1975-1976 гг. / Ф.И. Полежаев, Г.И. Александрова // Вопр. вирусол. - 1979. - Т.4. - С.430.

38. Полежаев Ф.И. Роль температурочувствительных мутантов в естественной эволюции вируса гриппа / Ф.И. Полежаев, A.A. Смородинцев // Вопр. вирусол. -1986. - Т.2. - С.148-152.

39. Потапчук М.В. Характеристика реассортантных штаммов вируса гриппа на основе нового донора А/Гонконг/1/68/162/35 (H3N2) / Потапчук М.В., Репко И.А., Сергеева М.В. и др. // Вопр. вирусол. - 2012. - Т.57, №6. - С.42-46.

40. Приказ №156/29 Министерства Здравоохранения Российской Федерации от 07.05.1998 «О подготовке новых вакцинных производственных и диагностических штаммов вируса гриппа и их внедрении в производство вакцинных и диагностических препаратов» - 1998. - 14с.

41. Приказ №708н Минздравсоцразвития Российской Федерации от 23.08.2010 «Об утверждении правил лабораторной практики» // Российская газета. - 2010. - №5319. - С.22.

42. Руководство по проведению клинических исследований лекарственных средств (иммунобиологические лекарственные препараты). Часть вторая / Под ред. А.Н. Миронова —М.: Гриф и К, 2012. — 212с.

43. Силуянова Э.В. Эволюционная изменчивость вируса гриппа A(H3N2) в период 2007-2012 гг. / Э.В. Силуянова, C.B. Альховский, Е.С. Шевченко и др. // Вопр.вирусол. - 2013. - Т.58, №6. - С.27-31.

44. Смородинцев А.А. Грипп и его профилактика / А.А. Смородинцев - М., 1984. -384с.

45. Смородинцев А.А. Изменения биологических свойств вирулентных для мышей штаммов вируса гриппа (II0N1) под воздействием гомологичных антител / А.А. Смородинцев, Н.А. Иванова, Т.Е. Медведева и др. // Вопр. вирусол. - 1984. - Т.6. -С.663-667.

46. Цыбалова Л.М. Универсальные вакцины против гриппа. Разработки, перспективы использования / Л.М. Цыбалова, О.И. Киселев // Вопр.вирусол. - 2012.- Т.57, №1. -С.9-14.

47. Цыбалова Л.М. Характеристика холодоадаптированного штамма вируса гриппа А/Гонконг/1/68/162/35 как потенциального донора аттенуации и высокой репродуктивности / Л.М. Цыбалова, Н.Е. Горев, М.В. Потапчук и др. // Вопр. вирусол. - 2012. - Т.57, №6. - С.13-17.

48. Abdulhaqq S.A. DNA vaccines: developing new strategies to enhance immune responses / S.A. Abdulhaqq, D.B. Weiner// Immunol. Res. - 2008. - V.42, № 1-3. - P. 219-232.

49. Alexandrova G.I. Live influenza vaccine in Russia / G.I. Alexandrova // Options for the control of influenza III. Cairns, Australia. - 1996. - P. 123-128

50. Alexandrova G.I. Recombinant cold-adapted attenuated influenza A vaccines for use in children: reactogenicity and antigenic activity of cold-adapted recombinants and analysis of isolates from the vaccinees / G.I. Alexandrova, F.I. Polezhaev, G.N. Budilovsky et al. // Infect. Immun. - 1984. - V.44, №3. - P.734-739.

51. Anton A. Influenza С virus surveillance during the first influenza A(IIINI) 2009 pandemic wave in Catalonia, Spain / A. Anton, M.A. Marcos., F.M Codoner et al. // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2011. - V.69, № 4. - P.419-427.

52. Beare A.S. Laboratory characteristics of attenuated influenza viruses / A.S. Beare // Bull. World. Health. Organ. - 1969. - V.41, № 3. - P. 595-598.

53. Beeler E. Influenza in dogs and cats / E. Beeler // Vet. Clin. North. Am. Small Anim. Pract. - 2009. - V.39, №2. - P.251-264.

54. Belshe R.B. Live attenuated versus inactivated influenza vaccine in infants and young children / R.B. Belshe, K.M. Edwards, T. Vesikari et al. // N. Engl. J. Med. - 2007. -V.356, №7. - P.685-696.

55. Brett I. Rapid confirmation by RFLP of transfer to vaccine candidate reassortment viruses of the principal «high yield» gene of influenza A viruses / I. Brett, J. Werber, E.D. Kilbourne//J. Virol. Methods.-2002.-V. 100.-P. 133-140.

56. Burnet F. Recombination of characters between two influenza virus stains / F. Burnet, P. Lind//Austral. J. Sci. - 1949. - V. 12, №1. - P. 109-110.

57. Cady S.D. Structure and Function of the Influenza A M2 Proton Channel / S.D. Cady, W. Luo, F. I-Iu, M. Hong // J. Biochemistry. - 2009. - V.48, № 31. - P.7356-7364

58. Callan R.J. The appearance of H3 viruses in seals / R.J. Callan, G. Early, II. Kida, V. S. Hinshaw // J. Gen. Virol. - 1995. - V.76. - P. 199-203.

59. Cao S. A nuclear export signal in the matrix protein of influenza a virus is required for efficient virus replication / S. Cao, X. Liu, M. Yu et al. // J. Virol. - 2012.-V.86, №9. -P.4883-4891.

60. Carrat F. Influenza vaccine: the challenge of antigenic drift / F. Carrat, A. Flahault // Vaccine. - 2007. - V.25, №39-40. - P.6852-6862.

61. Cha T. Determination of the genome composition of influenza virus reassortants using multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction followed by fluorescent singlestrand conformation polymorphism analysis / T. Cha, J. Zhao, E. Lane, M.A. Murray, D.S. Stec // Anal. Biochem. - 1997. - V.252, №1. - P.24-32.

62. Chen C.J. Differential localization and function of PB1-F2 derived from different strains of influenza A virus / C.J. Chen, G.W. Chen, C.H. Wang et al. // J. Virol. - 2010 - V.84, №19. -P.10051-10062.

63. Chen W. A novel influenza A virus mitochondrial protein that induces cell death / W. Chen, P.A. Calvo, D. Malideb et al. // Nat. Med. - 2001. - V.7, №12. - P.1306-1312.

64. Chung E.Y. Safety of influenza vaccine administration in egg-allergic patients / E.Y. Chung, L. Huang, L. Schneider// Pediatrics. - 2010. - V.125, №5. -P.el024-1030.

65. Coelingh K.L. Development of live attenuated influenza vaccines against pandemic influenza strains / K.L. Coelingh, C.J. Luke, H. Jin, K.R .Talaat // Expert Rev. Vaccines. -2014. - V.13,№7. -P.855-871.

66. Copper L.A. A simple restriction fragment length polymorhism-based strategy that can distinguish the internal genes of human H1N1, H3N2 and II5N1 influenza viruses / L.A. Copper, K. A. Subbarao // J. Clin. Microbiol. - 2000. - V.38. - P.2579-2583.

67. Cox N.J. The molecular epidemiology of influenza viruses / N.J. Cox, C.A. Bender // J. Virol. - 1995. - V.6. - P.359-370.

68. Cox N.J. Comparative studies of wild-type and cold-mutant (temperature-sensitive) influenza viruses: nonrandom reassortment of genes during preparation of live virus vaccine candidates by recombination at 25 degrees between recent H3N2 and H1N1 epidemic strains and cold-adapted A/An Arbor/6/60 / N.J. Cox, II.F. Maassab, A.P. Kendal // Virology. - 1979. - V.97, №1.- P. 190-194.

69. Cox N.J. Influenza / N.J. Cox, K. Subbarao // Lancet. - 1999. - V.354, №9186. - P. 12771282.

70. Deng Y.M. Rapid detection and subtyping of human influenza A viruses and reassortants by pyrosequencing / Y.M. Deng, N. Caldwell, I.G. Barr // PLoS One. - 2011. - V.6, №8. - P.e23400

71. Deng Y.M. The use of pyrosequencer-generated sequence-signatures to identify the influenza B-lineage and the subclade of the B/Yamataga-lineage viruses from currently circulating human influenza B viruses / Deng Y.M., Iannello P., Caldwell N. et al. // J. Clin. Virol. - 2013. - V.58. - P.94-99.

72. Deyde V.M. Detection of molecular markers of drug resistance in 2009 pandemic influenza A (H1N1) viruses by pyrosequencing / V.M. Deyde, T.G. Sheu, A.A. Trujillo et al. // Antimicrob. Agents Chemother. - 2010. - V.54, №3. - P.l 102-1110.

73. Ding H. Superior neutralizing antibody response and protection in mice vaccinated with heterologous DNA prime and virus like particle boost against HPAI H5N1 virus / II. Ding, C. Tsai, R.A. Gutiérrez et al. // PLoS One. - 2011. - V.6, №1. - P.e 16563.

74. Donnelly J.J. Preclinical efficacy of a prototype DNA vaccine: enhanced protection against antigenic drift in influenza virus / J.J. Donnelly, A. Friedman, D. Martinez et al. // Nat. Med. - 1995. - V.l. -P.583-587

75. Donnelly J.J., Friedman A., Ulmer J.B., Liu M.A. Further protection against antigenic drift of influenza virus in a ferret model by DNA vaccination / J.J. Donnelly, A. Friedman, J.B. Ulmer, M.A. Liu //Vaccine. - 1997. - V.l 5. - P.865-868

76. Duwe S. A new and rapid genotypic assay for the detection of neuraminidase inhibitor resistant influenza A viruses of subtype H1N1, H3N2, and H5N1 / S. Duwe, B.A. Schweiger//J. Virol. Methods. - 2008. - V.l53. - P. 134-141.

77. Feng Z. Influenza A subtype H3 viruses in feral swine, United States, 2011-2012 / Z. Feng, J.A. Baroch, L.P. Long et al. // Emerg. Infect. Dis. - 2014. - V.20, №5. - P.843-846.

78. Fu T.M. Dose dependence of CTL precursor frequency induced by a DNA vaccine and correlation with protective immunity against influenza virus challenge / T.M. Fu, L. Guan, A. Friedman et al. // J. Immunol. - 1999. - V.162, №7. - P.4163^170.

79. Gambaryan A.S. Comparative safety, immunogenicity, and efficacy of several anti-H5N1 influenza experimental vaccines in a mouse and chicken models (Testing of killed and live H5 vaccine) / A.S. Gambaryan, N.F. Lomakina, E.Y. Boravleva et al. // Influenza Other Respi. Viruses. - 2012. - V.6, №3. - P. 188-195.

80. Gao R. Human infection with a novel avian-origin influenza A(H7N9) virus / R. Gao, B. Cao, Y. Hu et al. //N. Engl. J. Med. - 2013. - V.368, №20. - P. 1888-1897.

81. Ghendon Y.Z. Analysis of genome composition and reactogenicity of recombinants of cold-adapted and virulent virus strain / Y.Z. Ghendon, A.I. Klimov, G.I. Alexndrova, F.I. Polezhaev // J. Gen. Virol. - 1981. - V.53. - P.215-224.

82. Gillim-Ross L. Can immunity induced by the human influenza virus N1 neuraminidase provide some protection from avian influenza H5N1 viruses? / L. Gillim-Ross, K. Subbarao // PLOS Med. - 2007. - V.4, №2. - P.e91.

83. Gimsa U. Two evolutionary strategies of influenza viruses to escape host non-specific inhibitors: alteration of hemagglutinin or neuraminidase specificity / U. Gimsa, I. Grôtzinger, J. Gimsa // Virus Res. - 1996. - V.42, №1-2. - P.127-135.

84. Girard M.P. The 2009 A (H1N1) influenza virus pandemic: A review / M.P. Girard, J. S. Tam, O. M. Assossou, M.P. Kien //Vaccine - 2010. - V.28.- P.4895^1902.

85. Gotlieb T. The experimental production of combination forms of virus. VI. Reactivation of influenza viruses after inactivation by ultraviolet light / T. Gotlieb, G.K. Hirst // Virology. - 1956. - V.2, № 2. - P.235-248.

86. Gouarin S. Study of influenza C virus infection in France / S. Gouarin, A. Vabret, J. Dina et al. // J. Med. Virol. - 2008. - V.80. - P. 1441-1446.

87. Gregory V. Emergence of influenza A H1N2 reassortant viruses in the human population during 2001 / V. Gregory, M. Mennett, M.H. Orklian et al. // J.Virol. - 2002. - V.300, №1 - P. 1-7.

88. Guo J. Evaluation of the immune response to recombinant DNA vaccine and adenoviral vaccine co-expressing the Ml and HA genes of H5N1 influenza virus in mice / J. Guo, L. Yao, A. Chen et al. // Sheng. Wu. Gong. Cheng. Xue. Bao. - 2011. - V.27, №6. - P.876-883.

89. Guo Y.J. Isolation of influenza C virus from pigs and experimental infection of pigs with influenza C virus / Y.J. Guo, F.G. Jin, P. Wang, M. Wang, J.M. Zhu // J. Gen. Virol. -1983. - V.64, №1. - P.177-182.

90. Guo Y.J. Human influenza A (H1N2) viruses isolated from China / Y.J. Guo, X. Xu, N.J. Cox//J. Gen. Virol. - 1992. - V.73. - P.383-388.

91. Gustin K.M. Comparative immunogenicity and cross-clade protective efficacy of mammalian cell-grown inactivated and live-attenuated II5N1 reassortant vaccines in ferrets / K.M. Gustin, T.R. Maines, J.A. Belser et al. // J. Infect. Dis. - 2011. - V.204, №10. - P.1491-1499.

92. Ha S.H. A multiplex RT-PCR method for screening of reassortant live influenza vaccine virus strains / S.H. Ha, H.A. Kim, Y.H. Kim et al. // J. Virol. Methods. - 2006.-V.134 -P. 154-163.

93. Hai R. Influenza viruses expressing chimeric hemagglutinins: globular head and stalk domains derived from different subtypes / R. Hai, F Krammer, G.S. Tan et al. // J. Virol. - 2012. - Vol.86, №10. - P.5774-5781.

94. Halloran M.E. Efficacy of trivalent, cold-adapted, influenza virus vaccine against influenza A (Fujian), a drift variant, during 2003-2004 / M.E. Halloran, P.A. Piedra, I.M.Jr. Longini et al. // Vaccine. - 2007. - V.25, №20 - P.4038-4045.

95. Ilannoun C. The evolving history of influenza viruses and influenza vaccines / C. Hannoun//Expert. Rev. Vaccines. - 2013. - V. 12, №9. - P. 1085-1094.

96. Harder T.C. Influenza virus infections in dogs and cats / T.C. Harder, T.W. Vahlenkamp // Vet. Immunol. Immunopathol. - 2010. - V.134, №1-2. - P.54-60.

97. He J. Rapid multiplex reverse transcription-PCR typing of influenza A and B virus, and subtyping of influenza A virus into HI, 2, 3, 5, 7, 9, N1 human), N1 (animal), N2, and N7, including typing of novel swine origin influenza A (H1N1) virus, during the 2009 outbreak in Milwaukee, Wisconsin / J. He, M.E. Bose, E.T. Beck et al. // J. Clin. Microbiol. - 2009. - V.47. - P.2772-2778.

98. Hirst G.K. Genetic recombination with Newcastle disease virus, polioviruses, and influenza / G.K. Hirst // Cold Spr. Harb. Sym. Quant. Biol. - 1962. - V.27.- P.303-309.

99. Howard W.A. Reassortant pandemic (H1N1) 2009 virus in pigs, United Kingdom / W.A. Howard, S.C. Essen, B.W. Strugnell et al. // Emerg. Infect. Dis. - 2011. - V. 17. - P. 10491052.

100. Jagger B.W. An Overlapping Protein-Coding Region In Influenza A Virus Segment 3 Modulates the Host Response / B.W. Jagger, II.M. Wise, J.C. Kash et al. // Science. -2012. -V.337, №6091. - P. 199-204

101. James J. Safe administration of influenza vaccine to patients with egg allergy / J. James, R. Zeiger, M. Lester//J. Pediatr. - 1998. - V. 133. -P.624-628.

102. Justewicz D.M. Antibody-forming cell response to virus challenge in mice immunized with DNA encoding the influenza virus hemagglutinin / D.M. Justewicz, M.J. Morin, H.L. Robinson, R.G. Webster // J. Virol. - 1995.- V.69. - P.7712-7717

103. Kamali A. Influenza treatment and prophylaxis with neuraminidase inhibitors: a review / A. Kamali, M. Holodniy // Infect. Drug Resist. - 2013. - V.6. - P.187-198.

104. Karron R.A. A live attenuated H9N2 influenza vaccine is well tolerated and immunogenic in healthy adults / R.A. Karron, K. Callahan, C. Luke et al. // J. Infect. Dis.

- 2009. - V.199, №5. - P.711-716.

105. Keawcharoen J. Avian influenza H5N1 in tigers and leopards / J. Keawcharoen, K. Oraveerakul, T. Kuiken et al. // Emerg. Infect. Dis. - 2004. - V.10, №12. - P.2189-2191.

106. Kilbourne E.D. Correlated studies of a recombinant influenza virus vaccine. I. Derivation and characterization of virus and vaccine / E.D Kilbourne, J.L. Schulman, G.C. Schild et al. //J. Infect. Dis. -1971. - V.124, №5. - P.449-462.

107. Kilbourne E.D. Future in influenza vaccines and the use of genetic recombination / E.D. Kilbourne // Bulletin of the WHO. - 1969.- V.41, №3-5. - P.643-645.

108. Kiseleva I. PB2 and PA genes control the expression of the temperature sensitive phenotype of cold-adapted B/USSR/60/69 influenza master donor virus / I. Kiseleva, J.T.M. Voeten, L.C.P. Teley et al. // J. Gen. Virol. - 2010.- V.91. - P.931-937.

109. Kitikoon P. Brief report: molecular characterization of a novel reassorted pandemic H1N1 2009 in Thai pigs / P. Kitikoon, D. Sreta, S. N. Na Ayudhya et al. // Virus Genes. -2011. - V.43, №1. - P.1-5.

110. Klick B. Live attenuated seasonal and pandemic influenza vaccine in school-age children: a randomized controlled trial / B. Klick, S. Durrani, K.H. Chan et al. // Vaccine.

- 2013.-V.31, №15.-P.1937-1943.

111. Klimov A.I. PCR restriction analysis of genome composition and stability of cold-adapted reassortant live influenza vaccines / A.I. Klimov, N.J. Cox // J. Virol. Methods. -1995. - V.52. - P.41^49.

112. Kochs G. Multiple anti-interferon actions of the influenza A virus NS1 protein / G. Kochs, A. Garcia-Sastre, L. Martinez-Sobrido // J. Virol. - 2007. - V.81, №13. - P.7011-7021.

113. Krammer F. Chimeric hemagglutinin influenza virus vaccine constructs elicit broadly protective stalk-specific antibodies / F. Krammer, N. Pica, R. Hai, I. Margine, P. Palese // J. Virol. - 2013. - V.87, №12. - P.6542-6550.

114. Krizanova O. Serum inhibitors of myxoviruses / O. Krizanova, V. Rathova // Curr. Top. Microbiol. Immunol. - 1969. - V. 47. - P. 125-51.

115. Krumbholz A. Current knowledge on PB1-F2 of influenza A viruses / A. Krumbholz, A. Philipps, H. Oehring et al. // Med. Microbiol.Immunol. - 2011. - V.200, №2. - P.69-75

116. Laddy D.J. Ileterosubtypic protection against pathogenic human and avian influenza viruses via in vivo electroporation of synthetic consensus DNA antigens / D.J. Laddy, J. Yan, M. Kutzler et al. // PLoS One. - 2008. - V.3, №6. - P.e2517.

117. Lamb R.A. Sequences of mRNAs derived from genome RNA segment 7 of influenza virus: colinear and interrupted mRNAs code for overlapping proteins / R.A. Lamb, C.J. Lai, P.W. Choppin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1981. - Y.78, №. 7. -P.4170-4174.

118. Larionova N. Live attenuated influenza vaccines against highly pathogenic I-I5Nlavian influenza: development and preclinical characterization / N. Larionova, I. Kiseleva, I. Isakova-Sivak et al. // J. Vaccines Vaccin. - 2013. - V.4, №8. http://dx.d0i.0rg/l 0.4172/2157-7560.1000208.

119. Ledgerwood J.E. DNA priming and influenza vaccine immunogenicity: two phase 1 open label randomised clinical trials / J.E. Ledgerwood, C.J. Wei, Z. Hu et al. // Lancet Infect. Dis. - 2011. - V.l 1, №12. - P. 916-924.

120. Lee E.Y. Genotyping and screening of reassortant live-attenuated influenza B vaccine strain / E.Y. Lee, K.H. Lee, E.J. Jung et al. // J. Virol. Methods - 2010. - V.l65, №2. -P.133-138.

121. Lee Y.T. New vaccines against influenza virus / Y.T. Lee, K.H. Kim, E.J. Ko et al. // Clin. Exp. Vaccine Res. - 2014. - V.3, №1. - P. 12-28.

122. Li Q. Epidemiology of the avian influenza A (H7N9) outbreak in China / Q. Li, L. Zhou, M. Zhou et al. // N. Engl. J. Med.- 2014. - Vol.370. - P.520-532.

123. Li S.L. Origin and evolutionary characteristics of antigenic reassortant influenza A (H1N2) viruses isolated from man in Chine / S.L. Li, C.Y. Zhao, H.M. Gao et al. // J. Gen. Virol. - 1992. - V.73. - P.1329-1337.

124. Lillie P.J. Preliminary assessment of the efficacy of a T-cell-based influenza vaccine, MVA-NP+M1, in humans / P.J. Lillie, T.K. Berthoud, T.J. Powell et al. // Clin. Infect. Dis.-2012. -V.55,№l.-P.19-25.

125. Lind P.E. Further studies of recombination between heat-inactivated virus and active virus / P.E. Lind, F.M. Burnet // Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. - 1957. - V.35, № 6. - P. 531-540.

126. Liu Q. Emergence of novel reassortant H3N2 swine influenza viruses with the 2009 pandemic H1N1 genes in the United States / Q. Liu, J. Ma, H. Liu et al. //J. Arch.Virol.-2012. - V.l57, №3. - P.555-562.

127. Luksic I. Effectiveness of seasonal influenza vaccines in children - a systematic review and meta-analysis /1. Luksic, S. Clay, R. Falconer et al. // Croat. Med. J. - 2013. - V.54, №2. - P. 135-145.

128. Maassab H.F. The development of live attenuated cold-adapted influenza virus vaccine for humans / H.F. Maassab, M.L. Bryant // Rev. Med. Virol. - 1999. - V. 9, №4. - P.237-244.

129. Maassab H.F. Cold-adapted influenza viruses for use as live vaccines for man / H.F. Maassab, C.A. Heilman, M.L. Herlocher// Adv. Biotechnol. Processes. - 1990. - V.14. -P.203-242.

130. Margine I. Hemagglutinin stalk-based universal vaccine constructs protect against group 2 influenza A viruses / I. Margine, F. Krammer, R. Hai et al. // J. Virol. - 2013. - V.87, №19.-P. 10435-10446.

131. Matrosovich M.N. Human and avian influenza viruses target different cell types in cultures of human airway epithelium / M.N. Matrosovich, T.Y. Matrosovich, T. Gray, N.l.A. Roberts, H.D. Klenk // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 2004. - V. 101, № 13. -P.4620-4624.

132. Matrosovich M. Molecular mechanisms of serum resistance of human influenza H3N2 virus and their involvement in virus adaptation in a new host / M. Matrosovich, P. Gao, Y. Kawaoka // J. Virol. - 1998. - V. 72, № 8. - P.6373-6380.

133. Matsuzaki Y. A nationwide epidemic of Influenza C virus infection in Japan in 2004 / Y. Matsuzaki, C. Abiko, K. Mizuta et al. // J. Clin. Microbiol. - 2007. - V.45, №3 - P.783-788.

134. McAuley J.L. Expression of the 1918 influenza A virus PB1-F2 enhances the pathogenesis of viral and secondary bacterial pneumonia / J.L. McAuley, F. Hornung, K.L. Boyd et al. // Cell Host Microbe. - 2007. - V.2, №4. - P.240-249.

135. McCuller J.A. Reassortment and insertion-deletion are strategies for the evolution of influenza B viruses in nature / J.A. McCuller., G.C. Wang, S. He, R.G. Webster // J. Virol. - 1999. - V.73, №9. - P.7343-7348.

136. Moreno A. Novel H1N2 swine influenza reassortant strain in pigs derived from the pandemic H IN 1/2009 virus / A. Moreno, L. Di Trani, S. Faccini et al. // Vet. Microbiol. -2011. - V.149. - P.472—477.

137. Mould J.A. Influenza B virus BM2 protein has ion channel activity that conducts protons across membranes / J.A. Mould, R.G. Paterson, M. Takeda et al. // J. Dev. Cell. - 2003. -V.5, №1. - P. 175-184.

138. Muramoto Y.. Identification of novel influenza A virus proteins translated from PA mRNA / Y. Muramoto, T. Noda, E. Kawakami, R. Akkina, Y. Kawaoka // J. Virol. -2013. - V.87, №5. - P.2455-2462.

139. Nafziger A.N. Seasonal influenza vaccination and technologies / A.N. Nafziger, D.S. Pratt//J. Clin. Pharmacol.-2014. - V.54, №7. - P.719-731.

140. Nayak B. Contributions of the avian influenza virus HA, NA, and M2 surface proteins to the induction of neutralizing antibodies and protective immunity / B. Nayak, S. Kumar, J.M. DiNapoli et al. // J. Virol. - 2010. - V.84, № 5. - P. 2408-2420.

141. Nelson M.I. The evolution of epidemic influenza / M.I. Nelson, E.C. Holmes // Nat. Rev. Genet. -2007. - V.8, №3 - P. 196-205.

142. Neumann G. The first influenza pandemic of the new millennium / G. Neumann, Y. Kawaoka // Influenza Other Respir. Viruses. - 2011. - V.5, №3. - P.157-166.

143. Neumann G. Emergence and pandemic potential of swine-origin H1N1 influenza virus / G. Neumann, T. Noda, Y. Kawaoka // Nature. - 2009. - V.459, №7249. - P. 931-939.

144. Neuzil K.M. Efficacy of inactivated and cold-adapted vaccines against influenza A infection, 1985 to 1990: the pediatric experience / K.M. Neuzil, W.D. Dupont, P.F. Wright, K.M Edwards // Pediatr. Infect. Dis. J. - 2001. - V. 20, №8. - P.733-740.

145. Nguyen H.H. Heterosubtypic immunity to lethal influenza A virus infection is associated with virus-specific CD8(+) cytotoxic T lymphocyte responses induced in mucosa— associated tissues / H.H. Nguyen, Z. Moldoveanu, M.J. Novak et al. // Virology. - 1999. - V.254, №1. - P.50-60.

146. Nishikawa F. Direct isolation of H1N2 recombinant virus from a throat swab of a patient simultaneously infected with II1N1 and H3N2 influenza A viruses / F. Nishikawa, T. Sugiyama//J. Clin. Microbiol. - 1983. - V. 18, №2. - P. 425-427.

147. Noda T. Architecture of ribonucleoprotein complexes in influenza A virus particles / T. Noda, H. Sagara, A Yen et al. // Nature. - 2006. - V.439, №7075 - P.490-492.

148. Odagiri T. Biological characteristics of a cold-adapted influenza A virus mutation residing on a polymerase gene / T. Odagiri, A. Tosaka, N. Ishida, II.F. Maassab // Arch. Virol. - 1986. - V.88, №1-2. - P.91-104.

149. Odagiri T. Cold-adapted recombinants of influenza A virus in MDCK cells. I. Development and characterization of A/Ann Arbor/6/60 X A/Alaska/6/77 recombinant viruses / T. Odagiri, D.C. DeBorde, H.F. Maassab // Virology. - 1982. - V.119, №1. -P.82-95.

150. Offringa D.P. A comprehensive systematic approach to identification of influenza A virus genotype using RT-PCR and RFLP / D.P. Offringa, V. Tyson-Medlock, Z. Ye, R.A. Levandovsky // J. Virol. Methods - 2000. - V.88, №1. - P. 15-24.

151. Osterhaus A.D. Influenza B virus in seals / A.D. Osterhaus, G.F. Rimmelzwaan, B.E. Martina, T.M. Bestebroer, R.A. Fouchier // Science. - 2000. - V.288, №5468. - P. 1051 -1053.

152. Paillot R. Vaccination against equine influenza: quid novi? / R. Paillot, D. Hannant, J.H. Kydd, J.M. Daly // Vaccine. - 2006. - V.24, №19. - P.4047-4061.

153. Palese P. Differences in RNA patterns of influenza A viruses / P. Palese, J.L. Schulman // J. Virol. - 1976. - V. 17, №3 - P.876-884.

154. Palese P. Orthomyxoviridae: the viruses and their replication / P. Palese, M.L. Shaw - In: Fields Virology, 5th ed. / Eds Knipe D. M., Howley P. M. - Wolters Kluwer Health/Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, 2007. - P. 1647-1689.

155. Paterson D. Emerging Roles for the Influenza A Virus Nuclear Export Protein (NEP) / D. Paterson, E. Fodor// PLOS Pathogens.- 2012.-V.8, №12,- P.el003019

156. Pecoraro H.L. Epidemiology and ecology of II3N8 canine influenza viruses in US shelter dogs / H.L. Pecoraro, S. Bennett, K.P. Huyvaert, M.E. Spindel, G.A. Landolt // J. Vet. Intern. Med. - 2014. - V.28, №2. - P.311-318.

157. Plotkin S.A. Vaccines: the fourth century / S.A. Plotkin //Clin. Vaccine Immunol. - 2009. - V.16, №12. - P. 1709-1719.

158. Polezliaev F.I. Attenuated ts recombinants of influenza A/USSR/77 (H1N1) virus obtained by crossing with the cold-adapted donor A/Leningrad/134/57 (H2N2) virus / F.I. Polezhaev, L.M. Garmashova, N.A. Koval et al. // Acta Virol. - 1982. - V.26, №4. -P.221-226.

159. Pons M.W. A reexamination of Influenza single- and double- stranded RNAs by gel electrophoresis / M. W. Pons // Virology. - 1976. - V.69, №2 - P.789-792.

160. Reading P.C. Inhibition of influenza viruses by proteins of the innate immune system / P.C. Reading, E.R. Job, M.D. Tate et al. // Options for the control of influenza VI. Toronto, Ontario, Canada. - 2007. -P.489-491.

161. Reed L. A simple method of estimating fifty per cent endpoints / L. Reed, H. Muench // Amer. J. Hyg. - 1938,- V.27, №.3. - P.493-497.

162. Robb N.C. NS2/NEP protein regulates transcription and replication of the influenza virus RNA genome / N.C. Robb, M. Smith, F.T. Vreede, E. Fodor // J. Gen. Virol. - 2009. -V.90, Pt. №6 - P.1398-1407

163. Robertson J.S. High growth reassortant influenza vaccine viruses: new approaches to their control / J.S. Robertson, C. Nicolson, R. Newman et al. // Biologicals. - 1992. - V. 20, №3. -P.213-220.

164. Rogers G.N. Single amino acid substitutions in influenza haemagglutinin change receptor binding specificity / G.N. Rogers, J.C. Paulson, R.S. Daniels et al. // Nature. - 1983a. -V.304, № 5921. - P.76-78.

165. Rogers G.N. Differential sensitivity of human, avian, and equine influenza A viruses to a glycoprotein inhibitor of infection: selection of receptor specific variants / G.N. Rogers, T.J. Pritchett, J.L. Lane et al. // Virology. - 1983b. - V. 131, №2. - P.394-408.

166. Rogers G.N. Receptor determinants of human and animal influenza virus isolates: differences in receptor specificity of the H3 hemagglutinin based on species of origin / G.N. Rogers, J.C. Paulson // Virology. - 1983c. - V.127, № 2. - P.361-373.

167. Rudenko L. Safety and immunogenicity of live attenuated influenza reassortant H5 vaccine (phase I-II clinical trials) / L. Rudenko, J. Desheva, S. Korovkin et al. // Influenza Other Respir. Viruses. - 2008. - V.2, №6. - P.203-209.

168. Rudenko L. H7N3 live attenuated influenza vaccine has a potential to protect against new II7N9 avian influenza virus / L. Rudenko, I. Isakova-Sivak, S. Donina // Vaccine. - 2013. - V.31,№42.-P.4702-4705.

169. Rudenko L. Assessment of human immune responses to H7 avian influenza virus of pandemic potential: results from a placebo-controlled, randomized double-blind phase I study of live attenuated II7N3 influenza vaccine / L. Rudenko, I. Kiseleva, A.N. Naykhin et al.// PLoS One. - 2014.- V.9, №2. - P.e87962.

170. Rudenko L.G. Clinical and epidemiological evaluation of a live, cold-adapted influenza vaccine for 3-14-year-olds / L.G. Rudenko, N.I. Lonskaya, A.I. Klimov, R.I. Vasilieva, A. Ramirez// Bull. World Health. Organ. - 1996. - V.74, №1. - P.77-84.

171. Rudenko L.G. Immunogenicity and efficacy of Russian live attenuated and US inactivated influenza vaccines used alone and in combination in nursing home residents / L.G. Rudenko, N.H. Arden, E. Grigorieva et al. // Vaccine. - 2001. - V.19, №2-3. - P.308-318.

172. Rudenko L.G. Efficacy of live attenuated and inactivated influenza vaccines in schoolchildren and their unvaccinated contacts in Novgorod, Russia / L.G. Rudenko, A.N. Slepushkin, A.S. Monto et al. //J. Infect. Dis. - 1993. -V. 168, №4. - P.881-887.

173. Rudneva I.A. Effect of gene constellation and post-reassortment amino acid change on the phenotypic features of H5 influenza virus reassortants / I.A. Rudneva, T.A. Timofeeva, A.A. Shilov // Arch. Virol. - 2007. - V.152, №6. - P.l 139-1145.

174. Sakamoto S. Gene analysis of reassortant influenza virus by RT-PCR followed by restriction enzyme digestion / S. Sakamoto, Y. Kino, T. Oka, M.L. Herlocher, F. Maassab Hi. Virol. Methods. - 1996. - V.56, №2. - P. 161-171.

175. Samson M. Influenza virus resistance to neuraminidase inhibitors / M. Samson, A. Pizzorno, Y. Abed, G. Boivin// Antiviral. Res. -2013. - V. 98, №2. - P.174-185.

176. Sanger F. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors / F. Sanger, S. Nicklen, A.R. Coulson // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1977. - V.74, №12. - P.5463-5467.

177. Shaw M.W. Reappearance and global spread of variants of influenza B/Victoria/2/87 lineage viruses in the 2000-2001 and 2001-2002 seasons / M.W. Shaw, X. Xu, Y. Li et al. //J.Virol. -2002. - V.303, №1. - P. 1-8.

178. Shcherbik S.V. Rapid strategy for screening by pyrosequencing of influenza virus reassortants -candidates for live attenuated vaccines / S.V. Shcherbik, N.C. Pearce, M.L. Levine et al. // PLoS One - 2014.- V.9, №3. - P.e92580.

179. Shcherbik S. Application of real time RT-PCR for the genetic homogeneity and stability tests of the seed candidates for live attenuated influenza vaccine production / S. Shcherbik, S.B. Sergent, W.G. Davis et al. // J. Virol. Methods. - 2014.- V.195. - P.18-25.

180. Sheu T.G. Detection of antiviral resistance and genetic lineage markers in influenza B virus neuraminidase using pyrosequencing / T.G. Sheu, V.M. Deyde, R.J. Garten, A.I. Klimov, L.V. Gubareva // J. Antiviral. Res. - 2010. - V.85, №2. - P.354-360.

181. Shinya K. Avian flu: influenza virus receptors in the human airway / K. Shinya, M. Ebina, S.Yamada et al. //Nature. - 2006. - V.440, №7083. - P.435-436.

182. Snyder M.H. Four viral genes independently contribute to attenuation of live influenza A/Ann Arbor/6/60 (II2N2) cold-adapted reassortant virus vaccines / M.H. Snyder, R.F. Betts, D. DeBorde et al. // J. Virol. - 1988. - V.62, №2. - P. 488^195.

183. Song D. A novel reassortant canine II3N1 influenza virus between pandemic I-IINI and canine H3N2 influenza viruses in Korea / D. Song, H.J. Moon, D.J. An et al. // J. Gen. Virol. - 2012. - V.93, Pt.№3. - P.551-554.

184. Starick E. Reasserted pandemic (H1N1) 2009 influenza A virus discovered from pigs in Germany / E. Starick, E. Lange, S. Fereidouni et al. // J. Gen. Virol. - 2011. - V.92, Pt.№5. - P. 1184-1188.

185. Steel J. Influenza virus vaccine based on the conserved hemagglutinin stalk domain / J. Steel, A.C. Lowen, T.T. Wang et al. // MBio. - 2010. - V. 1, № 1. - P.eOOO 18-10.

186. Subbarao K. Evaluation of a genetically modified reassortant H5N1 Influenza A virus vaccine candidate generated by plasmid-based reverse genetics / K. Subbarao, H. Chen, D. Swayne et al. // Virology. - 2003. - V.305, №1. - P.192-200.

187. Subbarao K. Are there alternative avian influenza viruses for generation of stable attenuated avian-human influenza A reassortant viruses? / K. Subbarao, R.G. Webster, Y. Kawaoka, B.R. Murphy // Virus. Res. - 1995. - V.39, №2-3. - P.105-118.

188. Suguitan A.L.Jr. Influenza H5 hemagglutinin DNA primes the antibody response elicited by the live attenuated influenza A/Vietnam/1203/2004 vaccine in ferrets / A.L.Jr. Suguitan, X. Cheng, W. Wang et al. // PLoS One. - 2011. - V.6, №7,- P.e21942.

189. Talaat K.R. An open-label phase I trial of a live attenuated H2N2 influenza virus vaccine in healthy adults / K.R. Talaat, R.A. Karron, P.H. Liang et al. // Influenza Other Respir. Viruses. - 2013. - V.7, №1. - P.66-73.

190. Talaat K.R. An open label Phase I trial of a live attenuated H6N1 influenza virus vaccine in healthy adults / K.R. Talaat, R.A. Karron, C.J. Luke et al. // Vaccine. - 2011. - V.29, №17.-P.3144-3148.

191. Tong S. A distinct lineage of influenza A virus from bats / S. Tong, Y. Li, P. Rivailler et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 2012. - V.109, №11,- P.4269-4274.

192. Tong S. New world bats harbor diverse influenza A viruses / S. Tong, X. Zhu, Y. Li et al. // PLoS Pathog. - 2013. - V.9, №10. - P.e 1003657.

193. Vijaykrishna D.Reassortment of pandemic H1N1/2009 influenza A virus in swine / D. Vijaykrishna, L.L. Poon, II.C. Zhu et al. // Science. - 2010. - V.328, №5985. - P. 1529.

194. Voeten J.T.M. Characterization of high-growth reassortant influenza A viruses generated in MDCK cells cultured in serum-free medium / J.T.M. Voeten, R. Brands, A.M. Palache et al. //Vaccine. - 1999. -V. 17, №15-16. - P. 1942-1950.

195. Wang G. DNA prime and virus-like particle boost from a single H5N1 strain elicits broadly neutralizing antibody responses against head region of H5 hemagglutinin / G. Wang, F. Zhou, P. Buchy et al. //J. Infect. Dis. - 2014.- V.209, №5. - P.676-685.

196. Wanli L. Sequence comparison between the extracellular domain of M2 protein human and avian influenza A virus provides new information for bivalent influenza vaccine design / L. Wanli, Z. Peng, D. Jian, C. Ying-Hua // Microb. Infect. - 2005. - V.7, №2. -P.171-177.

197. Wareing M.D. Preparation and characterization of attenuated cold-adapted influenza A reassortants derived from the A/Leningrad/134/17/57 donor strain / M.D. Wareing, G.A. Marsh, G.A. Tannock // Vaccine. - 2002. - V.20, №16. - P.2082-2090.

198. Webb L. Single-dose influenza vaccination of patients with egg allergy in a multicenter study / L. Webb, M. Petersen, S. Boden et al. // J. Allergy Clin. Immunol. - 2011. -V.128, №1. -P.218-219.

199. Webster R.G. Evolution and ecology of influenza A viruses / R.G. Webster, W.J. Bean, O.T. Gorman, T.M. Chambers, Y. Kawaoka // Microbiol. Rev. - 1992. - V.56, №1. -P.152-179.

200. Wilschut J.C. Influenza, 2nJ ed. / Wilschut J.C., McEIhaney L.E., Palaehe A.M. - Mosby Elsevier, Philadelphia, 2006. - 240p.

201. Wise H.M. A complicated message: Identification of a novel PB1-related protein translated from influenza A virus segment 2 mRNA / H.M. Wise, A. Foeglein, J. Sun // J. Virol. - 2009. - V.83, №16. - P.8021-8031.

202. Wise H.M. Identification of a novel splice variant form of the influenza A virus M2 ion channel with an antigenically distinct ectodomain / H.M. Wise, E.C. Hutchinson, B.W. Jagger et al. // PLoS Pathog. - 2012. - V.8, №11.- P.el002998.

203. Wise H.M. Overlapping signals for translational regulation and packaging of influenza A virus segment 2 / H.M. Wise, C. Barbezange, B.W. Jagger et al. // Nucleic. Acids. Res.-2011. - V.39, №17. - P.7775-7790.

204. Wong S.S. Traditional and new influenza vaccines / S.S. Wong, R.J. Webby // Clin. Microbiol. Rev. - 2013. - V.26, №3. - P.476-492.

205. World Health Organization. Influenza A (H1N2) viruses (update) // Weekly Epidemiol. Rec. - 2002a. - №77. - P.77-80.

206. World Health Organization. News Digest 2012. March. FDA clears first quadrivalent flu vaccine, [электронный ресурс] URL:

http://www.who.int/influenza vaccines plan/news/news digest 2012/en/index9.html (дата обращения 08.10.2014)

207. World Health Organization. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 2002-2003 season // Weekly Epidemiol. Rec. - 2002b. - №77. - P.62-66.

208. World Health Organization. WHO Recommendations on the composition of influenza virus vaccines, [электронный ресурс] URL:

http://www.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/en/index.html (дата обращения 04.06.2014)

209. World Health Organization. WHO Recommendations on the composition of influenza virus vaccines. Recommended composition of influenza virus vaccines for use in the 2013-14 northern hemisphere influenza season, [электронный ресурс] URL: http://wvvw.who.int/influenza/vaccines/virus/recommendations/2013 14 north/en/ind ex.html (дата обращения 08.10.2014)

210. Wu A. Sequential reassortments underlie diverse influenza II7N9 genotypes in China / A. Wu, C. Su, D. Wang et al. // Cell Host Microbe - 2013. - V.14, №4. - P.446-452.

211. Xu Q. Influenza H1N1 A/Solomon Island/3/06 virus receptor binding specificity correlates with virus pathogenicity, antigenicity, and immunogenicity in ferrets / Q. Xu, W. Wang, X. Cheng, J. Zengel, H. Jin // J. Virol. - 2010. - V.84, №10. - P.4936-4945.

212. Xu X. Intercontinental circulation of human influenza A(H1N2) reassortant viruses during the 2001-2002 influenza season / X. Xu, C.B. Smith, B.A. Mungall et al. //J. Infect. Dis. -2002. -V. 186, №10. - P. 1490-1493.

213. Xu X. Reassortment and evolution of current human influenza A and B viruses / X. Xu, S.E. Lindstrom, M.W. Shaw et al. //J. Virus Research - 2004. - V.103, №1-2. - P.55-60.

214. Zamarin D. Influenza A virus PB1-F2 protein contributes to viral pathogenesis in mice / D. Zamarin, M.B. Ortigoza, P. Palese // J Virol. - 2006. - V.80, №16. - P.7976-7983.

215. Zhang L. Optimal designs of an HA-based DNA vaccine against H7 subtype influenza viruses / L. Zhang, N. Jia, J. Li et al. //Hum. Vaccin. Immunother. - 2014. - V.10, №7. -P.1949-1958.

216. Zhang Y. Simultaneous detection of oseltamivir- and amantadine-resistant influenza by oligonucleotide microarray visualization / Y. Zhang, Q. Liu, D. Wang, S. Chen, S. Wang // J. PLoS ONE - 2013. - V.8, №2. - P.e57154.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Перечень таблиц, приведенных в работе:

Таблица 1. Таблица 2. Таблица 3.

Таблица 4.

Таблица 5.

Таблица 6.

Таблица 7.

Таблица 8.

Таблица 9.

Таблица 10. Таблица 11. Таблица 12. Таблица 13. Таблица 14.

Таблица 15.

Функциональная роль белков вирусов гриппа А и В (по данным 12

литературы)

Сравнительный анализ живых и инактивированных гриппозных 28

вакцин

Параметры оценки температурочувствительности (¿у-фенотип) и 37

холодоадаптированности (са-фенотип) вирусов гриппа в опытах на РКЭ

Программы, используемые для ПЦР-анализа состава генома 43

реассортантов, полученных при скрещивании доноров аттенуации и «диких» вирусов

Праймеры, используемые для анализа генома реассортантов, 46

полученных при скрещивании современных эпидемических (сезонных) штаммов вируса гриппа А(НШ1) с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2)

Праймеры, используемые для анализа генома реассортантов, 47

полученных при скрещивании современных эпидемических (сезонных) штаммов вируса гриппа А(НЗК2) с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ш)

Праймеры, используемые для анализа генома реассортантов, 48

полученных при скрещивании современных эпидемических (сезонных) штаммов вируса гриппа В с донором аттенуации В/СССР/60/69

Праймеры, используемые для анализа генома реассортантов, 50

полученных при скрещивании штаммов, подобных пандемическому вирусу А/СаШЪгша/07/09 (НШ1)рс1т, с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2)

Праймеры, используемые для анализа генома реассортантов, 51

полученных при скрещивании штаммов для инактивированной гриппозной вакцины, подготовленных на основе высокопатогенных вирусов гриппа птиц А(Н5Ы1) и вируса гриппа А/РКУ8/34 (НШ1), с донором аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2)

Особенности репликации современных «диких» вирусов гриппа А за 57 верхними и нижними пределами температурного оптимума Пример возможных комбинаций фенотипических свойств вируса 57

гриппа А

Особенности репликации современных «диких» вирусов гриппа В за 58 верхними и нижними пределами температурного оптимума Пример возможных комбинаций фенотипических свойств вируса 58

гриппа В

Анализ чувствительности к неспецифическим ингибиторам 60

нормальной сыворотки крови морской свинки и лошади «диких» вирусов гриппа А и В

Эффективность получения штаммов с вакцинной формулой генома 62 (6:2 и 5:3) путем реассортации «диких» вирусов гриппа различных лет

выделения с донорами аттенуации Таблица 16. Распределение наследования сегментов генома реассортантами, 63

полученными на основе вирусов гриппа А и В, циркулировавших в разные периоды

Таблица 17. Оценка наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» 64

вирусов в зависимости от их холодочувствительпости (ся-фенотипа) Таблица 18. Оценка наследования реассортантами нейраминидазы от «диких» 65

вирусов в зависимости от их температурочувствительности (Ау-фенотипа)

Таблица 19. Состав генома и частота наследования КА реассортантами на основе 67 холодоадаптированного донора аттенуации и циркулирующих вирусов гриппа с различной чувствительностью к неспецифическим термостабильным ингибиторам сыворотки морской свинки Таблица 20. Частота получения реассортантов с различной формулой генома, 68

подготовленных на основе ингибитороустойчивых и ингибиторочувствительных «диких» вирусов Таблица 21. Чувствительность вирусов гриппа к нормальной сыворотке морских 72

свинок в реакции торможения гемагглютинации Таблица 22. Снижение ингибиторочувствительности реассортантов ИЧ-вирусов 73 при включении в геном нейраминидазы от ИУ-вируса: значение I-критерия Стыодента для зависимых переменных при сравнении титров в РТГА с нормальной сывороткой морской свинки «диких» и реассортантных вирусов (статистическая обработка результатов, представленных в таблице 21) Таблица 23. Отличия последовательностей гемагглютинина и нейраминидазы у 74

одногенных реассортантов вирусов гриппа Таблица 24. Принадлежность генов ИА и РВ2 у реассортантов, полученных при 78 скрещивании донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2) с вакцинными штаммами для ИГВ, инактивированными ультрафиолетовым облучением Таблица 25. Состав генома реассортантных штаммов, полученных в результате 79

скрещивания Н5М1-Р118-1Ю реассортантов с донором аттенуации Таблица 26. Состав генома реассортантных штаммов, полученных в результате 80 скрещивания вируса >ПВ11С-23 с донором аттенуации в системе т \ч\ю (в морской свинке) Таблица 27. Принадлежность генов ЫА и РВ2 у реассортантов, полученных при 82 скрещивании донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2) с низкопатогенным вирусом гриппа птиц АМискЛЫзёатЛ 402-6/86 (Н5Ы2)

Таблица 28. Принадлежность генов ИА и РВ2 у реассортантов, полученных при 83 скрещивании вакцинного штамма А/17/Калифорния/09/38 (НШ1) с низкопатогенным вирусом гриппа птиц А/с1иск/Ро15с1ат/1402-6/86 (ГОШ)

Перечень рисунков, приведенных в работе:

Рисунок 1. ПЦР-анализ состава генома реассортантного вакцинного штамма, 45

полученного при скрещивании донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57 (Н2Ы2) с эпидемическим вирусом А/ВпБЬапе/10/2007 (НЗЫ2) Рисунок 2. Микс-ПЦР анализ принадлежности гена, кодирующего 52

©

гемагглютинин, вирусу гриппа A(H1N1), A(H3N2) или A(H2N2) Рисунок 3. Микс-ПЦР анализ принадлежности гена, кодирующего 52

нейраминидазу, вирусу гриппа A(H1N1) или A(H2N2) Рисунок. 4. Изменение признака температурочувствительности «диких» вирусов 87 гриппа A(H3N2)

Рисунок. 5. Изменение признака температурочувствительности «диких» вирусов 88 гриппа A(H1N1)

Рисунок. 6. Изменение признака температурочувствительности «диких» вирусов 88 гриппа В