Особенности некоторых биохимических и биомеханических свойств тканей животных и человека при различных структурно-функциональных состояниях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Королева, Ольга Александровна

• Королева, Ольга Александровна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Королева, Ольга Александровна

Введение

Обзор литературы.

Глава 1. Биохимические и биомеханические свойства тканей животных и

человека при различных структурно-функциональных состояниях

1.1. Основные принципы строения соединительной и мышечной тканей животных и человека

1.2. Деформационные свойства тканей млекопитающих

1.3. Взаимосвязь между биохимическим составом, содержанием воды и механическими свойствами в биологических тканях

1.4. Биохимические и биомеханические свойства некоторых биологических тканей в зависимости от возраста и патологии

1.5. Влияние длительности посмертного периода на биохимические и биомеханические свойства соединительной и мышечной тканей животных и человека

1.6. Влияние фиксирующих и консервирующих растворов, факторов искусственного старения (температура, УФ, световое и у - облучение)

на физико-химические свойства биологических тканей

Экспериментальная часть.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Биохимические методы исследования

2.2.2. Акваметрическое и калориметрическое определение общего влагосодержания и фракций свободной и связанной воды

2.2.3. Измерение деформационных свойств при одноосном растяжении и

тангенциальном сжатии в статическом и динамическом режимах нагружения

2.2.4. Определение параметров гидротермического сокращения

2.2.5. Оценка количества поперечных сшивок в соединительной ткани

2.2.6. Электронномикроскопические исследования

2.2.7. Метод ускоренного старения

Результаты собственных исследований и их обсуждение.

Глава 3. Особенности биохимического состава, содержания воды, механических свойств и структурной организации соединительной и мышечной тканей животных и человека

3.1. Взаимосвязь между биохимическим составом, механическими свойствами и морфологической структурой кожи, ахиллового сухожилия, хряща и мышцы

3.2. Топографические и возрастные особенности композитного состава и реологии биологических тканей

3.3. Влияние воды и гликозаминогликанов на деформационные

свойства соединительной ткани

Глава 4. Влияние длительности посмертного периода на биохимические и физико-химические свойства тканей животных и человека

4.1. Биомеханические особенности тканей в посмертном периоде

4.2. Изменение структурных превращений белков, гликозаминогликанов и состояния воды в посмертном периоде

Глава 5. Влияние растворов формальдегида и консервирующих растворов на биохимические и физико-химические свойства биологических тканей

5.1. Изменение биохимических, деформационных и гидротермических параметров биологических тканей под влиянием фиксации формальдегидом

5.2. Влияние консервирующих растворов на физико-химические свойства

биологических тканей

Глава 6. Экспериментальное старение как метод прогнозирования

степени сохранности биологических тканей

6.1. Влияние температуры, УФ и светового облучения на физико-химические свойства консервированной кожи человека

6.2. Влияние ионизирующей радиации на биохимические и реологические свойства соединительной и мышечной тканей

Выводы

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности некоторых биохимических и биомеханических свойств тканей животных и человека при различных структурно-функциональных состояниях»

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы. В настоящее время в связи с возрастающим интересом к различным биологическим системам на стыке механики, биологических и медицинских наук возникло и развивается новое научное направление - биомеханика. Ее основная задача состоит в изучении закономерностей движения и деформирования биологических систем и тканей в различных условиях функционирования организма. Биологические ткани являются композитной системой, свойства которой определяются каждым структурным компонентом, в частности его химическим составом, и их взаимодействием между собой. Механические нагрузки, старение, адсорбция влаги и ряд других факторов внешней среды также в значительной степени влияют на реологические характеристики композитных материалов [170,207,269,288,291]. С точки зрения медико-биологических наук изучение механических свойств живых тканей и явлений биомеханического характера, происходящих в них в процессе жизнедеятельности, дает возможность оценить процессы функционирования в биологических структурах, создать эффективные методы диагностики, а также отработать новые подходы к лечению различных заболеваний.

Хотя последние десятилетия характеризуются интенсивным и разносторонним исследованием реологических свойств различных, особенно твердых тканей, лишь немногочисленные работы посвящены изучению возрастных, топографических и посмертных аутолитических особенностей биомеханических свойств тканей животных и человека [203,257,296]. При этом недостаточно внимания уделялось изучению участия в деформационных процессах воды и отдельных структурных биополимеров (белков, протеогликанов, липидов и др.), количество и структурная конформация которых может меняться при различных заболеваниях, в посмертном периоде, а также при химических и физических воздействиях.

Остаются по-прежнему мало изученными и вопросы влияния факторов ускоренного старения, ионизирующего излучения, различных условий и видов консервации на биомеханические свойства твердых и мягких биологических тканей. Очевидно, что такой аспект и оценка биомеханических и биохимических свойств тканей (кожи, сухожилия, хряща, мышечной ткани и др.) при их различных структурно-

функциональных состояниях представляет несомненный интерес и научно-практическую значимость для проблем консервирования и длительного хранения консервированного биоматериала, трансплантологии, дерматологии и косметологии.

Изучение механических свойств биологических тканей связано с большими экспериментальными трудностями. Отмечающийся в литературе значительный разброс данных [305,272,238] объясняется различиями применяемых методик, а также влиянием биологических (возраст, пол, болезни, причина смерти) и небиологических факторов (влажность образца и способ нагружения, величина нагрузки, вид консервации и т.д.). Поскольку при медицинских обследованиях применяются небольшие нагрузки, далеко отстоящие от разрушающих, актуальной проблемой является разработка и дальнейшее совершенствование методов исследования биомеханических свойств тканей животных и человека в области неразрушающего контроля.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось изучение биохимических и биомеханических свойств соединительной и мышечной тканей животных и человека при различных структурно-функциональных состояниях. В связи с этим были поставлены для решения следующие задачи:

• разработать научно-методические подходы для комплексного структурно-механического анализа тканей опорно-двигательного аппарата и кожи;

• изучить взаимосвязь некоторых биохимических и биомеханических свойств со структурной организацией кожи, ахиллова сухожилия, хряща и мышцы;

• оценить биомеханические свойства тканей животных и человека в зависимости от топографии, возраста и посмертных аутолитических изменений;

• исследовать влияние структурной модификации коллагена и степени дезорганизации углеводно-белковых комплексов на физико-химические свойства соединительной ткани;

• оценить влияние фиксирующих и консервирующих растворов на биохимические и биомеханические свойства биологических тканей;

• установить характер влияния факторов искусственного старения и ионизирующего излучения на физико-химические свойства исследуемых консервированных тканей.

Научная новизна. Создана научно-методическая основа изучения особенностей биохимических и биомеханических свойств тканей. Разработаны новые оригинальные методы исследования механических свойств биологических тканей при одноосном растяжении и тангенциальном сжатии в области неразрушающего контроля.

Получена комплексная структурно-механическая характеристика соединительной и мышечной тканей животных и человека, включающая анализ данных биохимических, биомеханических, акваметрических и электронномикроскопических методов исследования. Показано, что упругая (обратимая) и пластическая (остаточная) компоненты деформации тканей (кожа, ахиллово сухожилие, хрящ, мышца) в сочетании с данными их биохимического состава (белки, гликозаминогликаны, вода) являются высоко информативными характеристиками, определяющими закономерности биомеханических свойств биологических тканей при различных видах нагружения.

Проведенные исследования позволили впервые дать сравнительную количественную оценку биохимических и биомеханических свойств разных тканей при различных структурно-функциональных состояниях: в норме, в онтогенезе, при посмертном аутолизе, при структурных нарушениях, связанных с денатурацией коллагена и дезорганизацией белково-полисахаридного комплекса, при формальдегидной фиксации и специальной консервации, в условиях "ускоренного старения" и действия ионизирующей радиации.

Получены принципиально новые данные о взаимосвязи между структурной организацией, биохимическим составом, влажностными параметрами и биомеханическими характеристиками биологических тканей животных и человека, имеющие значение для расшифровки механизмов посмертных и патологических изменений органов и тканей, оценки их стабильности при консервации и разных условиях старения.

Научно-практическая значимость. В результате использования комплекса биохимических, реологических, физико-химических методов исследования и метода электронной микроскопии разработаны научно-методические принципы, позволяющие проводить объективную количественную оценку структурно-функционального состояния тканей животных и человека и контролировать их сохранность при посмертном аутолизе, в онтогенезе, разных патологиях, химических и физических воз-

действиях. Для этой цели разработаны оригинальные приборы (термоэластодинамометр, прибор контроля деформируемости тканей (КДТ - 1) и эла-стограф), позволяющие изучать биомеханические свойства микрообразцов тканей в жидкой и воздушной среде в области неразрушающего контроля.

Экспериментальные данные, характеризующие структуру, физико-химические и реологические свойства коллагенового комплекса сухожилий и волокнистого каркаса хряща представляют существенный интерес для интерпретации функциональных нарушений сердечно-сосудистой деятельности и опорно-двигательного аппарата при системных заболеваниях соединительной ткани.

Определенную практическую значимость для решения проблем длительного сохранения и восстановления внешнего вида мумий и биообъектов, сточки зрения биотехнологических задач в археологии и палеобиохимии имеют результаты исследования механизма возникновения пергаментации при сушке и разработка специального метода реставрации древних рукописей и пергаментированных тканей посредством ее регидратации.

Результаты исследования влияния посмертного аутолиза на изменение характера связывания и содержания воды в биологических тканях, биохимического состава и физико-химических свойств имеют важное значение для теории и практики реаниматологии, трансплантации органов и тканей, их консервации и в различных судебно-медицинских исследованиях.

Сведения о влиянии фиксации и содержания воды на механические свойства кожи, дермы и коллагена могут быть использованы в технологических процессах переработки и хранения кожи и меха.

Выводы работы по изучению биологической консервации и механических свойств тканей человека, фиксированных формальдегидом и обработанных консервирующими растворами, могут быть использованы при разработке искусственных трансплантантов тканей с заранее заданными свойствами.

Ценную практическую значимость для решения проблем длительного сохранения и восстановления внешнего вида древних рукописей имеют результаты реологи-

ческих исследований и выявления действия ионизирующей радиации на структуру коллагеновых волокон подобных объектов.

Результаты изменения структуры и свойств биологических тканей в условиях, моделирующих "ускоренное старение" (повышенная температура, УФ, световое и у - облучение), использованы для прогнозирования состояния консервированных тканей при их длительном хранении.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Разработаны физико-химические принципы и научно-методические подходы изучения биологических тканей в зависимости от их биохимического состава, содержания воды, морфологической структуры и механических свойств.

2. Изучены особенности биохимических свойств, состояния воды и реологических показателей тканей животных и человека.

3. Исследован механизм возникновения пергаментации кожи и разработан метод ее восстановления.

4. Впервые показано влияние дезорганизации углеводно-белковых комплексов основного вещества на структуру и физико-химические свойства соединительной ткани.

5. Исследована динамика биохимического состава, влагообмена и структурной устойчивости тканей животных и человека в посмертном периоде.

6. Изучено влияние растворов формальдегида, консервирующих растворов и искусственного старения на биохимические и физико-химические свойства соединительной и мышечной тканей человека.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 13 работ. Основные результаты диссертации доложены: на XI Всесоюзном симпозиуме по реологии, г. Суздаль, 1980 г.; на Всесоюзном симпозиуме "Механизмы действия ионизирующего излучения на структуру и функцию белков", г. Львов, 1986 г., АН СССР; на Всесоюзной научно-технической конференции "Реология и оптимизация процессов переработки полимеров", г. Ижевск, 1989 г.; на VIII Всесоюзной школе по биологии опорно-двигательного аппарата, г. Киев, 1990 г.; на Всесоюзном научном симпозиуме "Структурно-энергетическое обеспечение механической работы мышц",

г. Москва, 1990 г.; на Международном симпозиуме "Биологическая подвижность: Современные методы исследования", г. Пущино, 1998 г.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 135 страницах, содержит 19 таблиц, 43 рисунка. Работа состоит из введения, обзора литературы (1гл.), экспериментальной части (4 гл.), выводов и списка литературы, включающего 309 источников (из них 119 на русском языке и 190 на иностранных языках).

Список сокращений, используемых в работе. АТФ - аденозинтрифосфат ГАГ - гликозаминогликаны КР - консервирующий раствор СЭМ - сканирующая электронная микроскопия

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Биохимические и биомеханические свойства тканей животных и человека при различных структурно-функциональных состояниях.

1.1. Основные принципы строения соединительной и мышечной тканей

животных и человека.

Кожа представляет собой многокомпонентную систему, образованную эпидермисом, дермой и подкожножировой клетчаткой, которые находятся в морфофункцио-нальном единстве. В ней содержатся все виды органических и неорганических веществ, встречающихся в организме: белки, липиды, вода, углеводы, аминокислоты, пигменты, нуклеиновые кислоты, микро- и макроэлементы и другие. [61,217,262].

Дерма занимает основной объем кожи, отделена от эпидермиса базальной мембраной и без резкой границы переходит в подкожно-жировую клетчатку. Дерма построена преимущественно из коллагеновых, а также из эластических и ретикулиновых волокон и основного вещества. В ее состав входят также альбумины, глобулины, липиды и различные неорганические ионы [61]. Коллаген составляет до 70 % сухой массы дермы и является ее главным структурным компонентом [139,166]. В формировании волокон кроме коллагена принимают участие компоненты основного вещества соединительной ткани - гликозаминогликаны, протеогликаны, гликопротеиды.

Коллаген является одним из наиболее важных элементов соединительной ткани и составляет 25-30 % всех белков организма млекопитающих. Несмотря на то, что роль воды в функционировании этого биополимера была объектом исследования на протяжении ряда десятилетий, интерес к этой проблеме не иссякает до сих пор.

Основные результаты исследования структуры коллагена сводятся к следую-

0

щему. Молекула коллагена имеет форму жесткого стержня длиной 2900 А и диамет-

0

ром 12,5 А с молекулярной массой 300000 Да [230,252,254,260,283]. В этом стержне содержится три спиральные полипептидные цепи с тремя параллельными осями на

о

расстоянии 4,5 А друг от друга. Каждая последовательность их 3-х аминокислотных

остатков всегда содержит один остаток глицина, а также остаток пролина или окси-пролина и имеет молекулярную массу около 270 кДа. Это сочетание трех цепей стабилизировано поперечными водородными связями [214,253]. Были предложены ряд моделей, включающие образование одной или двух водородных связей на каждые 3 остатка.

Модель Рамачандрана предполагает наличие по крайней мере 2-х молекул воды на каждые 3 аминокислотные остатка. Обе молекулы включаются в межцепочечную связь в тройной спирали. Одна служит мостиком между NH- и СО- связями по типу (>C0-H-0---NH=), другая образует мостик между двумя карбонильными группами. Это согласуется с результатами Есиповой с соавторами [1,25], которые с помощью рентгеноструктурных исследований показали, что молекулы воды располагаются на

о

расстоянии 3 А от центральной оси спирали, что делает возможным образование

водного мостика между соседними кислородными атомами.

В дальнейшем это вывод был подтвержден на основании расчета энергии связи спиральной молекулы и атом-атомных потенциалов [13,99]. Вместе с тем имеются сторонники модели Рича и Крика, согласно которой между атомами кислорода соседних цепочек включается одна молекула воды. ОН- группы оксипролина могут образовывать межмолекулярные водородные связи с соответствующими группировками боковых цепей соседних молекул [140,286].

В большом числе работ показано, что температура денатурации растворимого коллагена возрастает с повышением количества аминокислот в молекуле [12,55]. В то же время, как показали калориметрические исследования, энтальпия и энтропия денатурации коллагена повышается с ростом его термостабильности [108].

Понижение температуры денатурации коллагена в присутствии алифатических спиртов свидетельствует и о существенной роли гидрофобных взаимодействий в стабилизации его молекулы [81]. Продукты денатурации коллагена являются важнейшими объектами исследования структур коллагена. В зависимости от условий денатурации они могут различаться по молекулярному весу, химическому составу. При этом

конформация макромолекул может меняться от спирали до беспорядочно свернутого клубка [109]. Оба вида конформации лабильны и способны к взаимному превращению спираль <=> клубок. Эти превращения происходят под влиянием изменений температуры, pH среды, ионной силы раствора, природы растворителя и др. [9]. Спираль и клубок - это два крайних случая, однако при соответствующих условиях могут существовать конформации промежуточного типа. В результате денатурации снижается величина удельного оптического вращения, а также меняется рентгенограмма, типичная для нативного коллагена [11].

При объединении коллагеновых фибрилл в первичные, а затем и во вторичные волокна они не сливаются друг с другом и даже полностью не сближаются. Наличие промежутков между фибриллами объясняются тем, что они окружены водно-гликозаминогликановым (ГАГ) слоем [275]. В нативной дерме ГАГ входит в состав белково-полисахаридных комплексов - протеогликанов, белковый компонент которых резко отличается по аминокислотному составу от коллагена.

Хрящевая ткань является одной из разновидностей соединительной ткани. Хрящ состоит из клеток (хондроцитов) и межклеточного вещества (матрикса), содержащего волокна и основное вещество [26,129,]. В зависимости от преобладания коллагеновых или эластических волокон и степени их маскировки основным веществом, различают гиалиновый, эластический и волокнистые хрящи [76,91,264].

Матрикс хряща человека состоит из: волокнистого коллагенового каркаса; агрегированных макромолекул протеогликанов, заполняющих петли волокнистого каркаса; интерстициальной воды, несущей лабильные ионы и свободно перемещающейся в пространствах, заполненных протеогликанами.

Соотношение коллагена, протеогликанов и воды в хряще составляет (20-25 %) : (5-10 %) : (65-85 %) [129]. Структура матрикса в настоящее время подробно и полно изучена на молекулярном, надмолекулярном и тканевом уровнях [163,228].

Коллагеновый каркас хряща наряду с известным коллагеном а (I) содержит а (II) [144]. Основное различие между этими типами коллагена заключается в том, что в а (1)-цепи содержится 5 остатков гидроксилизина, а (И)-23. Столь высокая концентрация гидроксилизина сопровождается увеличением количества связанных с ним уг-

леводов [129]. В гиалиновом хряще практически весь коллаген представлен этим типом, показано, существование и других типов коллагена [56,157].

Волокна коллагена типа II в матриксе хряща разнообразны по диаметру, но, как правило, они тоньше, чем волокна коллагена типа I в сухожилиях или дерме и не образуют плотных пучков. Такая надмолекулярная организация способствует связыванию воды и тем самым поддержанию гипергидратации ткани. Кроме того, коллаген матрикса хрящевой ткани отличается и необычным полиморфизмом коллагеновых белков [91,94]. Поскольку концентрация их в ткани мала (»10 %) их называют минорными коллагенами [145,151,173]. Коллагеновый каркас матрикса выполняет структурную, опорную, стабилизирующую роль по отношению к протеогликанам и воде, находящимся в состоянии геля в петлях волокнистого каркаса. Кроме того, коллаге-новые волокна матрикса расположены по принципу трехмерной сети и обладают большой упругостью по отношению к силам растяжения и играют роль в ограничении степени набухания [221]. Густая сеть тонких коллагеновых волокон ( в эластическом хряще к ним добавляются эластические волокна) располагается в очень концентрированном водном растворе протеогликанов. Концентрация этого раствора столь велика, что его можно с полным основанием именовать гелем [245,287]. Разделить этот вязкий гель на компоненты удается с большим трудом, что свидетельствует о прочной связи коллагеновых фибрилл и агрегатов протегликанов, которая с возрастом увеличивается [251].

Количественные соотношения главных компонентов матрикса хряща зависят от биологического вида, типа хряща, возраста. Концентрация компонентов колеблется в зависимости от зоны хряща [198]. В суставном хряще выделяют несколько зон: поверхностную, промежуточную (основную) и базальную [76].

Поверхностная зона, обращенная в суставную полость поверхности хряща, покрыта тонкой бесклеточной пластинкой. В ней выявляются гликопротеинговые микрофибриллы и немногочисленные волокна с характерной для коллагена периодичностью. Строго ориентированные, тангенциально расположенные коллагеновые волокна поверхностного слоя обеспечивают равномерное распределение внешнего давления по поверхности суставного хряща.

Промежуточная (основная) зона формируется коллагеновым каркасом и основным веществом [94]. Архитектоника промежуточной зоны определяется расположением мощных пучков коллагеновых волокон и их переплетением, образующих околоклеточные "корзины" [144]. Характерная для промежуточной зоны разнонаправлен-ность коллагеновых волокон обеспечивает смягчение силы давления в базальной мембране. Клетки основной зоны - это типичные хондроциты II и Ш-го типов, продуценты коллагена, гликопротеинов и протеогликанов [123].

Матрикс базальной зоны представлен радиальными пучками коллагеновых волокон. Колонки хондроцитов располагаются между радиальными пучками межтерриториального матрикса, функцию этих клеток связывают с процессом кальцификации.

В последние годы появились основания полагать, что в связывании протеогликанов и коллагена принимают участие также гликопротеины - фибронектин, хондро-нектин и анкорин [208].

Скелетная мышца человека состоит из пучков волокон, которые представляют собой сильно вытянутую многоядерную клетку [20,170]. Архитектура оболочки мышечного волокна скелетной мышцы характеризуется наличием своеобразного каркаса, который состоит из взаимно пересекающихся элементов, образующих армирующую решетку [105,107]. Волокна соединительной ткани образуют активную трехмерную сеть, окружающую мионы и их пучки [194,213,297]. Гистохимическими исследованиями установлено наличие коллагена I, II и V типов в мышечно-сухожильном соединении [187]. Общее количество соединительной ткани в мышце довольно значительно и колеблется в зависимости от типа от 3 % до 30 % [243].

В цитоплазме или саркоплазме мышечной клетки от одного конца мышечного волокна до другого тянутся миофибриллы, которые представляют собой упорядоченную систему толстых и тонких белковых нитей, называемых миофиламентами. В настоящее время утвердилось представление о жидкокристаллической природе сарко-мера, что обеспечивает доступность ионов и АТФ к белковым нитям [92,127].

Решетку толстых нитей, длиной 1,6 мкм можно отнести к жидкому кристаллу в гексагональной упаковке, устойчивость которой обусловлена балансом ван-дер-ваальсовых сил притяжения, электростатических сил отталкивания и осмотических

сил, действующих через клеточную мембрану [18,181,303]. Толстые и тонкие нити расположены по сечению саркомера строго упорядоченным образом, в узлах гексагональной решетки. Основными мышечными белками являются актин и миозин [79]. Количественно преобладает миозин, на который приходится 54 % всех белков мио-фибриллы [79,259]. Вторым по количеству компонентом саркомера является актин («20 %) [166]. Кроме того, в мышце обнаружены белки тропомиозин («7 %) и тропо-нин («2 %) [249]. В последнее десятилетие появились данные о наличии в мышечном волокне своеобразного внутреннего цитоскелета, который представляет собой систему так называемых промежуточных нитей, состоящих из специфического белка дес-мина и вементина [80,285]. Установлено, что мышечная клетка имеет настоящий мембранный цитоскелет, содержащий два белка, связывающих актин - винкулин и спек-трин [21,121,164].

Несмотря на то, что последние десятилетия характеризуются интенсивным и разносторонним изучением биологических тканей, лишь немногочисленные работы посвящены сравнительным исследованиям биохимических, биомеханических и фихи-ко-химических свойств тканей животных и человека.

1.2. Деформационные свойства тканей млекопитающих.

Биомеханическим исследованиям биологических тканей в настоящее время уделяется особое внимание, как со стороны медиков и биологов, так и со стороны инженеров. Исследование процессов деформирования различных биологических тканей позволяют понять фундаментальные принципы взаимосвязи их структуры и механических свойств в различных условиях нагружения. Особый интерес представляют ткани опорно-двигательного аппарата, которые отличаются от традиционных конструкционных материалов своеобразным поведением, а так же особенностями строения и функционирования [6,33,36,180,284].

Как было показано в предыдущем разделе, изучаемые биологические объекты бесконечно многообразны. Они различаются уровнем организации (субклеточные структуры, клетка, ткань, орган и т. д.) и имеют существенные различия в устройстве и механических характеристиках. В месте с тем все изучаемые биообъекты являются многофазными, композитными материалами [2,36,70,86,169,182]. Каждый компонент

вносит существенный вклад в механические, биологические и другие свойства ткани. В связи с этим исследования механических свойств биологических материалов необходимо проводить параллельно с изучением таких свойств, как биохимические, диффузионные, тепловые и др. [143,185,192,223,279]

Разделение деформируемых тканей биологической природы на мягкие и твердые весьма условно [70,85]. В основу разделения положен принцип, совмещающий в себе и механические и биологические аспекты. К мягким тканям относят те, для которых характерны большие величины упругих (восстановимых) деформаций. С этой точки зрения к мягким тканям относятся кожа и мышечная ткань. Хрящ и сухожилие занимают промежуточное положение, тем не менее их относят к мягким тканям.

Изучение биомеханических параметров осуществляется с помощью модельных методов, при этом размеры образцов должны во много раз превышать размеры клеток [106]. Кроме того, чтобы извлеченный из ткани образец не лишился своих свойств, необходимо поддерживать влажность, температуру, солевой состав окружающей среды, иначе произойдут неконтролируемые изменения механических свойств образца [85]. Чаще всего механические свойства биологических тканей при растяжении и сжатии в статическом и динамическом режимах нагружения оцениваются по следующим параметрам: упругость (эластичность) - стремление деформированного материала вернуться к исходному состоянию; пластичность - невозможность деформированного материала вернуться в исходное состояние; предел прочности -величина максимального напряжения, необходимая для полного разрыва образца; относительное удлинение; отношение напряжения к удлинению, то есть модуль Юнга [31,71,85].

Коллаген - основной элемент соединительных тканей, имеет различные структурные формы. Особенность коллагена - это формирование спирали на всех уровнях организации, от спиральной полипептидной цепи до спиральных волокон в коллаге-новом пучке, что в значительной мере может влиять на механические свойства соединительной ткани [184]. Такая организация ограничивает скольжение элементов относительно друг друга при растяжении и необходима для опорной функции соединительной ткани, испытывающей большие механические нагрузки [89]. Связь между на-

пряжением и деформацией имеет нелинейный характер. Максимальное напряжение ахиллового сухожилия при 4 % удлинении составляет 310 кг/см [122]. Коллагеновые волокна обладают относительно высокой прочностью при растяжении (50-100 МПа) и высоким модулем упругости - 1000 МПа [170].

Эластин обладает гидрофобной природой подобной эластомерам и состоит из цепей аминокислот, соединенных через определенные интервалы жесткими химическими связями. При растяжении он проявляет линейные свойства [120]. Эластиновые волокна в основном ответственны за механизм восстановления формы образца ткани после приложения нагрузки или деформации [242].

Поведение суставного хряща, как механической системы в первую очередь зависит от состояния экстрацеллюлярной матрицы, которая в основном состоит из кол-лагеновых волокон, расположенных в геле протеогликанов и воды [183].

Изучению взаимосвязи между механическими свойствами хряща и его биохимическим составом посвящено сравнительно небольшое количество работ. Так, выявлена взаимосвязь между жесткостью суставного хряща и содержанием ГАГ и коллагена [205]. Установлено, что содержание кератансульфата лучше коррелирует с модулем упругости, чем содержание хондроитинсульфата. Между тем не найдено связи между жесткостью хряща и концентрацией коллагена. В дегенеративно измененном суставном хряще вымывание ГАГ приводит к уменьшению жесткости и увеличению контактных напряжений, что в свою очередь может вызвать повреждение коллагено-вых волокон поверхностной зоны.

При исследовании релаксации напряжений суставного хряща выявлено, что скорость ее выше для тех образцов, их которых удалены протеогликаны [234]. При этом наблюдалось также снижение модуля упругости. Механические свойства хряща зависят не только от количественного содержания биохимических компонентов, но и от их качественного состояния. Показано, что матрица суставного хряща в концентрированных растворах солей становится мягкой. Сделан вывод о том, что в этих растворах заряды хондроитинсульфата в значительной степени нейтрализуются, что приводит к размягчению хряща [45].

Мышечная ткань представляет собой многофазную, многокомпонентную, анизотропную систему, которая обладающую упруго-вязкими свойствами [7,101,155,158].

Экстракция актина нарушает целостность миофибрилл, происходит распад на отдельные саркомеры, в результате чего снижается механическая прочность мышечных волокон, теряется способность развивать механическое напряжение при сохранении способности к изотоническому укорочению [115]. Сократительный компонент мышцы в покое обладает небольшим сопротивлением к растяжению, поэтому сила пассивной мышцы создается в основном ее параллельным упругим компонентом [6].

При малых длинах мышцы напряжение покоя обусловлено активными структурами, а при больших длинах основной вклад дает сарколемма и миоплазма. Полагают, что вклад мостиков в пассивное напряжение зависит от 2-х факторов: степени перекрытия нитей и расстояния между толстыми и тонкими нитями [186].

При разрушении мембраны и саркоплазматического ретикулума мышца не теряет эластических свойств [255]. Жесткость миокарда связана с наличием в нем соединительнотканного каркаса и в меньшей степени сосудистой сети, а релаксация напряжения, гистерезис, зависимость модуля упругости от скорости деформирования обусловлены фильтрацией жидкости в межклеточном пространстве [57]. Механическое сопротивление мышечного волокна растягиванию с постоянной скоростью возрастает с увеличением скорости и снижением ионной силы раствора [143]. Исследования растяжении образцов перикарда во взаимно перпендикулярных направлениях -продольном и поперечном показали, что поперечные полосы прочнее продольных на ~ 50 % [31].

Разрушение различных мышц при растяжении происходит при значениях напряжения от 0,01 до 0,03 кг/ мм . Среднеквадратичное отклонение свойств образцов составляет ~ 7 % [305].

Зависимость деформационно-нагрузочных характеристик при сжатии мышечной ткани имеет вид петли гистерезиса [90,101]. Такие параметры петли гистерезиса как: площадь, наклон, остаточная деформация - изменяются ( до 700 %) в зависимости от степени напряжения мышц людей, их утомления, режима работы и так далее [38]. Изучение мягких тканей здоровых людей методом циклического нагружения при ежа-

тии показало, что петля гистерезиса хорошо воспроизводится начиная со 2-го или 3-го циклов нагружения. При патологии воспроизводимость достигается после десятков циклов нагружения [4]. Модуль упругости двуглавой мышцы плеча и остаточная деформация при сжатии составляют 0,37 ±0,15 х 105 Па и 0,62 ± 0,12 мм соответственно [29]. Авторы считают, что упругость ткани связана с наличием эластических элементов, а релаксация обусловлена перераспределением межклеточной жидкости [4,8,57].

Таким образом, несмотря на многочисленные исследования биомеханических свойств биологических тканей до сих пор не решены многочисленные проблемы, возникающие при интерпретации результатов. В частности, отмечающийся в литературе значительный разброс данных объясняется различиями применяемых методик, а также влиянием биологических (пол, возраст, причина смерти) и небиологичесикх факторов (влажность образца, способ нагружения, величина нагрузки и т. д.). В связи с этим возникает необходимость разработки и дальнейшего совершенствования методов исследования биомеханических свойств тканей человека и животных. 1.3. Взаимосвязь между биохимическим составом, содержанием воды и механическими свойствами в биологических тканях.

Вследствие высокой чувствительности кожи, как гидрофильного материала, к воздействию влаги воздуха и непосредственно водным обработкам, существенно изменяются такие ее свойства, как механические характеристики, геометрические размеры, форма, цвет и др., что так или иначе может повлиять на внешний вид тканей.

Увлажнение дермы аналогично введению в синтетические полимеры пластификаторов, то есть веществ снижающих температуру фазовых переходов при нагревании и облегчающих их деформируемость. Подтверждением является тот факт, что температура перехода коллагена в высокоэластическое состояние для влажной дермы составляет 58-62 °С, а для абсолютно сухой дермы 180-200 °С. При высыхании дермы, когда происходит удаление воды из межструктурных пространств, капилляры и поры структуры коллагена сжимаются. Расположенные в этих зонах активные центры структуры коллагена, ранее связанные с молекулами воды, начинают взаимодейство-

вать между собой. В результате этого в дерме возникают значительные усадочные напряжения, достигающие 360 кгс/см [72,73].

Высушенная дерма и кожа становятся прозрачными и механически прочными. Регидратировать такую дерму или кожу обычным погружением в воду не удается. Для разрушения вновь образованных при высушивании межструктурных связей между биополимерами дермы требуются специальные обработки. Набухание дермы в воде в значительной степени определяется количеством поперечных связей между молекулами коллагена [12,59].

Как уже было показано, коллаген является важнейшим конструкционным элементом соединительной ткани. При этом он вносит значительный вклад в способность тканей поглощать воду, что существенно влияет на механические свойства биологических тканей [207,269].

Установлено, что температура плавления коллагена в воздушно сухом состоянии выше на « 120 °С по сравнению с коллагеном, нагретым в воде. В последнем случае вода оказывает роль пластификатора, ослабляющего при высокой температуре водородные связи между молекулами коллагена. Подтверждением того, что вода является необходимым структурным элементом коллагена является тот факт, что при замещении воды другими растворителями температурная устойчивость коллагена и желатины снижается [110].

Исследования коллагена с помощью рентгеноструктурного анализа, ядерного магнитного резонанса, инфракрасной спектроскопии, калориметрии выявили существенную роль воды в стабилизации типичной конформации коллагена [286]. Предложено несколько моделей гидратации коллагена, в которых рассмотрены различные типы сеток воды, связанной водородными связями с молекулой коллагена [ 3,10.49,100,134,219].

Калориметрические исследования показали, что на 1 г коллагена приходится примерно 0,46 г гидратной воды. О существенном вкладе молекул воды в стабилизацию тройной спирали свидетельствует также анализ термодинамических величин, характеризующих процесс перехода спираль клубок [200]. Нужно отметить, что строение реальной молекулы коллагена несомненно сложнее представленного моде-

лями [102]. В настоящее время считают, что процесс денатурации охватывает сложную кооперативную систему из молекул коллагена, связанных с прилегающей к ним структурной водой. Очевидно в образовании водородных связей со структурированной водой могут вовлекаться ОН-группы оксипролина, которые не способны образовывать внутримолекулярные водородные связи.

Способность кожи связывать и удерживать воду ассоциируется с так называемым основным веществом дермы, главным компонентом которой являются кислые гликозаминогликаны (ГАГ) такие как: гиалуроновая кислота, хондроитинсерная кислота (хондроитинсульфат), гепарин, кератансульфат и др. В настоящее время из соединительной ткани выделено 8 разновидностей ГАГ. Наиболее вариабельным показателем структуры ГАГ является степень их сульфатирования. Подсчитано, что около 45 % воды в коже связано с протеином и ГАГ основного вещества дермы [138].

Согласно современным данным пограничная линия суставного хряща взрослого человека содержит сложный набор таких компонентов, как белки, фосфолипиды, ГАГ и ферменты. Пограничная линия [232,247] осуществляет селективное отношение к транспорту воды, электролитов и продуктов метаболизма. Путями проникновения являются прослойки основного вещества между коллагеновыми пучками, а в самом основном веществе - четко ориентированные белки и агрегаты протеогликанов [149]. Четкая ориентация коллагеновых волокон и макромолекул основного вещества, а также высокая гидратированность матрикса, обусловливают постоянный обмен между межклеточной жидкостью хряща и синовиальной жидкостью в процессе обратимой деформации [123].

В участках, прилежащих к поверхностной зоне матрикса, обнаруживаются преимущественно хондроитин-6-сульфат и кератансульфат. Благодаря полианионной природе ГАГ, их насыщенности свободными кислотными карбоксильными и сульфатными группами, несущими одноименный отрицательный заряд, цепочки ГАГ с макромолекулами протеогликана [133,199] распрямлены и отталкиваются друг от друга. В связи с этим, они ориентируются перпендикулярно к стержневому белку, в результате чего строение макромолекулы протеогликана приобретают вид, который в литературе принято сравнивать со "щеткой" [45,150]. Десятки таких "щеток", торча-

щих во все стороны, скреплены в агрегате воедино с помощью одной цепочки гиалу-роновой кислоты. Благодаря такой конструкции, протеогликаны и их агрегаты приобретают свойства "диффузных макромолекул",которые способны пропускать через занимаемый ими объем мелкие молекулы и воду. Очевидно, внутри такой молекулы имеются пустоты.

В результате феномена переплетения, агрегаты протеогликанов образуют в матриксе прочную трехмерную сеть, которая в свою очередь переплетена с трехмерной сетью тонких волокон коллагена П-типа, или, что более точно, механически "захвачена" коллагеновой сетью [151,157].

Интерстициальная вода составляет в хряще 65-85 %, ее количество определяется балансом между силой притяжения воды протеогликанами (набухание) и упругостью коллагенового каркаса. При этом она проявляет свойства свободной воды, так как содержит в растворах электролиты и низкомолекулярные протеины и обладает способностью перемещения, то есть удаления ее за пределы хряща и возвращение в него [222]. Считается, что именно вода, как несжимаемая жидкость, обеспечивает достаточную жесткость хряща. Однако, протеогликаны удерживают воду непрочно. Основная ее часть подвижна и может вместе с растворенными в ней мелкими молекулами передвигаться по матриксу, а при сжатии - диффундировать за пределы хряща, в том числе в синовиальную жидкость. При этом, чем большее значение имеет отношение протеогликан/вода, тем меньше удаляется воды из хряща в условиях компрессионного сжатия. Лишь небольшое количество воды в матриксе связано с коллагеновы-ми молекулами прочно и эта фракция воды практически неподвижна.

В настоящее время получила широкое распространение, в качестве теоретической основы для понимания биомеханики хряща, так называемая бифазная модель, согласно которой хрящевой матрикс состоит из двух фаз - жидкой (воды) и твердой (протеогликаны и коллаген) [199]. Разрабатывается и более сложная биомеханическая модель хряща - трифазная, в которой протеогликаны и коллаген рассматриваются как две отдельные фазы: протеогликаны удерживают воду, коллагеновые волокна ограничивают подвижность протеогликанов [159,163].

Величины рассчитанных коэффициентов диффузии, характеризующие проницаемость хрящевого матрикса для молекул различных классов соединений практически не отличаются от единицы, что говорит о том, что вся или практически вся вода в матриксе независимо от того, располагается она внутри или вне коллагеновых волокон, находится в свободном состоянии и доступна для проникновения небольших заряженных молекул [209].

Четкая ориентация коллагеновых волокон и макромолекул основного вещества, а также высокая гидратированность матрикса, обуславливают постоянный обмен между межклеточной жидкостью хряща и синовиальной жидкостью в процессе обратимой деформации [151]. В ответ на действие силы давления интерстициальная вода, содержащая электролиты и низкомолекулярные белки, выжимается из хрящевой пластинки в суставную щель, а затем возвращается в хрящ, восстанавливая его гидрати-рованное состояние. Хрящ "набухает", деформация преодолевается, становится обратимой. Гиалуронат синовии (имеющий большую молекулярную массу) не проникает в хрящ. В результате на суставной поверхности образуется жидкостная протекторная пленка. В специальных исследованиях предложены и другие модели смазочного аппарата сустава [216,235], по которым суставной хрящ, покрывающий сочленяющиеся кости, смазывается в результате взаимодействия двух комплементарных механизмов: образования на поверхности хряща пограничной пленки синовии и поступления в суставную полость интерстициальной воды из матрикса.

Морфологические и биохимические данные позволяют рассматривать мышечную ткань также как композитный материал, в структурной организации которого немаловажную роль играет перераспределение воды и растворенных в ней веществ между внутри- и внеклеточными структурами [162,237].

В ряде работ делается вывод о том, что дегидратация мышечной ткани приводит к необратимым изменениям ее нативной структуры [230,266,267]. Структурные изменения в актомиозиновом комплексе мышечной ткани сопровождается высвобождением части связанной воды. Обобщая различные модели разделения воды в мышце, предлагающиеся авторами объяснения полученных результатов, можно выделить следующие основные фракции: внеклеточная вода, медленно диффундирующая внутрь

мышечных волокон сквозь мембрану; миоплазматическая фракция воды, заполняющая пространство между миофибриллами; фракция структурированной воды, ассоциированная с макромолекулами внутри гексагональной саркоплазматической структуры.

Анализ данных литературы за последние десятилетия по исследованию реологических свойств различных тканей показывает, что при этом недостаточно уделяется внимания вкладу и участию в деформационных процессах тканей воды и отдельных структурных биополимеров - белков, протеогликанов, липидов, количество и структурная конформация которых может меняться при различных условиях функционирования и состояния организма.

1.4. Биохимические и биомеханические свойства некоторых биологических тканей в зависимости от возраста и патологии.

Феномены возрастных изменений функциональных свойств биологических тканей в значительной степени определяются структурной эволюцией белков и биополимеров в онтогенезе. При этом наиболее важным возрастным эффектом является изменение их механических свойств, которые гетерогенны и не вполне однотипны [257,291,296].

Довольно подробно исследованы разные типы сухожилий человека и позвоночных. Показано, что прочность и модуль упругости хвостовых сухожилий крыс значительно повышается на протяжении всего онтогенеза, а растяжимость снижается [291].

Возрастные изменения механических свойств кожи подобны таковым в сухожилиях [239,294]. Начальная часть кривых, описывающая неупругую деформацию, уменьшается, что указывает на повышение удельного вклада упругой составляющей в процессе деформации кожи. Эти результаты свидетельствуют также об ориентацион-ном упорядочении сети коллагеновых волокон в коже с возрастом.

Упорядочение связано с тем, что при ориентации молекул относительно продольной оси параллельно к ней происходит концентрирование наиболее прочных элементов - пептидных связей главной цепи валентностей. Существенной причиной повышения прочности и уменьшения растяжимости коллагеновых волокон с возрас-

том является увеличение степени поперечного ковалентного связывания коллагена. Искусственное введение поперечных сшивок в коллагеновые структуры вызывает изменение их свойств качественно аналогичные возрастным [224].

В ряде работ рассмотрено влияние возрастных изменений биохимического состава стенок различных кровеносных сосудов человека на их механические свойства. Степень корреляции между механическими параметрами и содержанием каждого из компонентов значительно изменяется в онтогенезе. По мнению авторов такая изменчивость представляет собой один из механизмов развития и старения сосудистой стенки [19,112]. Следует однако подчеркнуть, что к настоящему времени мало известно влияние на механические свойства таких факторов, как: содержание свободной и связанной воды, ГАГ и других компонентов, меняющихся в онтогенезе [295].

Исследования гидротермических параметров и химического сокращения колла-генсодержащих мягких тканей показали, что температурный интервал сокращения кожи, коллагеновых волокон, сухожилий, фасций мышцы, твердой мозговой оболочки человека и животных смещается с возрастом в сторону более высоких температур [141,289]. Наряду с увеличением температуры сокращения нарастает линейная величина сокращения и механическое напряжение, развиваемое коллагеновыми волокнами в изометрических условиях при нагревании или под действием химических агентов. При этом скорость релаксации (обратимости сокращения) с возрастом понижается [188].

Среди исследователей не существует единого мнения относительно влияния возраста на механические свойства суставного хряща. Следует отметить, что этому вопросу посвящено относительно малое количество работ [189]. В ряде работ показано, что с возрастом деформируемость хряща уменьшается, степень неоднородности распределения механических свойств по суставной поверхности повышается [233]. Однако в других работах не было найдено достоверных корреляций механических свойств с возрастом [300,302]. Вместе с тем установлено статистически достоверная корреляция между возрастом человека и максимальным растягивающим напряжением при циклических нагружениях. Пока не выяснено, зависят ли механические свойства хряща при динамических нагрузках от предыстории нагружения. Рассчитано, что если

в среднем человек за год проделывает около 1 млн циклов нагружения, то усталостное разрушение хряща данного человека может наступить лишь в возрасте 200 лет [37].

Ряд авторов считает, что при старении происходит дегидратация тканей [196,250]. Другие полагают, что содержание воды в коже человека от его рождения до стадии созревания (20-25 лет) снижается, а затем увеличивается [137,240,263]. Имеется и противоположная точка зрения, согласно которой содержание воды в кожном покрове с возрастом увеличивается [130]. До сих пор остается не решенным вопрос, как изменяется в онтогенезе фракционный состав воды и, в частности, содержание в коже связанной воды. На примере сухожилия крысиных хвостов было показано, что фракция связанной воды с возрастом уменьшается [126]. При этом снижается способность коллагена адсорбировать воду из паровой фазы [250], что объясняется, по-видимому, уменьшением в молекуле коллагена количества реакционных групп, способных связывать воду [273]

Количество протеогликанов с возрастом уменьшается, при этом изменяется их качественный состав, способность к образованию агрегатов и взаимодействию с коллагеном, что отражается на механических свойствах тканей [64]. От пространственной структуры протеин-полисахаридных комплексов, а также способность их взаимосвязи с волокнами в значительной степени зависит прочность и упругость соединительной ткани [271].

С возрастом снижается также способность коллагена связывать и некоторые другие вещества, в частности, кальций [167].

При старении в суставах наблюдаются очаговые деструктивные повреждения, которые получили название "фибрилляция" [56,197,211]. В ранней стадии развития типичными местами ее обнаружения является периферия суставной поверхности, а на поздних стадиях патологии в этот процесс может вовлекаться вся поверхность суставного хряща [225].

В матриксе хряща с поверхностной фибрилляцией отмечается уменьшение ГАГ, часть хондроцитов подвергается некрозу. При этом выявлено уменьшение клеточной плотности в поверхностной зоне и некоторое увеличение в глубокой зоне

хряща. С возрастом синтез протеогликанов [177,229] снижается, в то время как синтез коллагена повышается [24,75,135,236].

Совокупность таких биохимических изменений приводит к уменьшению содержания воды в хряще. Так, МагоисЫ показал, что содержание воды в суставном хряще человека снижается к 60-90 годам от 75,0 % до 69,6 % [221]. Такие данные можно рассматривать как доказательство того, что гидрофильные свойства протеогликанов с возрастом понижаются [128,150,244]. Этому также может способствовать то, что с возрастом становятся более прочными связи между протеогликанами и коллагеновыми волокнами, что приводит к уменьшению полостей, содержащих воду [63,246].

Резкое обеднение матрикса суставного хряща протеогликанами при остеоартро-зе сочетается со значительным повышением содержания воды. Так, например, в хрящах тазобедренного сустава человека наиболее заметное повышение содержания воды наблюдается в средней зоне, в то время, как в наиболее гидратированной в норме поверхностной зоне хряща содержание воды повышается незначительно [220]. Сочетание процессов увеличения степени гидратации и обеднения хрящевого матрикса протеогликанами, очевидно можно объяснить тем, что при остеоартрозе, особенно в участках выраженного разволокнения хряща, коллагеновые волокна подвергаются фрагментации [290]. Очевидно, в результате этого коллагеновый каркас становится механически неполноценным. Снимается его ограничивающее действие на расправление макромолекул протеогликанов [241]. В результате чего последние могут связывать большее количество воды. Высказано предположение, что увеличение гидратации остеоартрически измененных хрящей может способствовать также увеличению гидрофильности самих коллагеновых волокон [218]. Несмотря на то, что содержание коллагена в патогенезе остеоартроза практически не меняется, существуют большие противоречия в том, что касается качественных характеристик коллагена [175,231]. Доказано, что культивируемые хондроциты из пораженного остеоартрозом хряща синтезируют вместо коллагена II типа коллагены I типа, III типа и так называемый тример I типа. Существуют, однако и другие данные, согласно которым, весь вновь синтезируемый коллаген относится ко II типу, однако этот коллаген отличается

меньшей степенью гликознровання гидрокснлизина [163]. Установлено также увеличение количества фибронектина и общего содержания неколлагеновых белков [304].

В очагах деструкции суставного хряща при остеоартрозе обнаружено также существенное повышение активности одной из лизосомальных протеиназ - катепсина, который расщепляет стержневой белок протеогликанов и вызывает таким образом освобождение и выведение из матрикса ГАГ [159].

При биохимических и электронно-микроскопических исследованиях установлен аномальный механизм кальцификации при остеоартрозе [160,212]. Увеличение концентрации кальция в суставном хряще приводит к изменениям таких физико-химических свойств ткани, как способность связывать воду, эластичность, плотность коллагена и его устойчивость к механическим нагрузкам. Методом микротестирования показано, что при остеоартрозе наибольшей деформации подвергается промежуточная зона суставного хряща, в которой обнаружены увеличение содержания воды и микроразрывы коллагеновых волокон [50,172].

Возрастные изменения коллагена в значительной степени определяются структурной эволюцией коллагена в онтогенезе. Общие закономерности этого процесса заключаются в увеличении общей массы коллагена, а также в изменении его структуры, заключающейся в развитии сети поперечных внутри- и межмолекулярных ковалент-ных связей. Поперечное сшивание коллагена является многоступенчатым процессом, на каждом этапе которого вступает в действие особая ферментативная система [161,178,190,278,293]. С возрастом в соединительной ткани увеличивается количество поперечных сшивок между молекулами коллагена [195,302]. До наступления половой зрелости концентрация коллагена в волокнах сухожилий крыс нарастает быстрее, чем его поперечное связывание, что приводит к одновременному повышению их прочности и растяжимости. В дальнейшем прочность волокон продолжает расти, а растяжимость уменьшается, что определяется повышением интенсивности поперечного связывания коллагена и уменьшением скорости его накопления [78]. С возрастом также снижается способность коллагена связывать кальций [167].

Исследования показали, что ни одна наследственная болезнь, не затрагивает сократительная систему мышцы как таковую, хотя, возможно, существуют мягкие по-

вреждения актина и миозина, не распознаваемые как болезнь. При наследственных болезнях мышц человека основной дефект пока не известен [191].

Предполагают, что постепенный распад актин-миозиновых мостиков с возрастом приводит к увеличению времени релаксации изометрического сокращения скелетных мышц крыс [165]. При этом функциональные показатели (кинетика транспорта Са2+, содержания АТФазы в миофибриллах, способность к быстрым сокращениям и выдерживанию больших нагрузок, степень мышечного утомления) не изменяются. Биохимические оценки абсолютного содержания коллагена мышц показали прогрессивное увеличение его количества с возрастом как в эндомизии, так и в перимизии, что сопровождается увеличением размеров мышечного волокна, повышением жесткости и снижением натяжения мышцы [124]. Однако, было выявлено и уменьшение диаметра мышечных волокон у женщин и мужчин в возрасте 70 лет [162]. В процессе развития организма происходит увеличение толщины коллагеновых волокон скелетной мышцы при неизменности их ультраструктуры [104].

Созревание фибрилл коннектина из скелетной мышцы происходит подобно механизму стабилизации коллагена и также сопровождается увеличением количества поперечных сшивок [171].

Снижение внутриклеточной концентрации К+ происходит при наблюдаемом возрастном увеличении объема внеклеточного пространства [248].

Анализ литературных данных показывает, что наиболее полную информацию о реакции организма об изменениях составляющих его биосистем, тканей, органов и биоструктур при различных заболеваниях и старении можно получить только при комплексном подходе, то есть при одновременном изучении их биохимических, биомеханических и физико-химических свойств. Однако, комплексные исследования старения биоструктур и тканей человека чрезвычайно малочисленны.

1.5 Влияние длительности посмертного периода на биохимические и биомеханические свойства соединительной и мышечной тканей животных и человека.

Исследование процессов, происходящих в биологических тканях в посмертном периоде представляет определенный интерес при оценке состояния тканей при подго-

товке органов и тканей к трансплантации и консервированию, а также необходимо в судебно-медицинской практике [51,52,117].

Процесс деструкции клеток и тканей , наступающий после прекращения жизнедеятельности организма, принято считать посмертным аутолизом. В его основе лежит гидролитическое, ферментативное расщепление белков, нуклеиновых кислот, углеводов, жиров [115,117]. К этому процессу впоследствии присоединяется гнилостное разложение при котором происходят изменения тканей, морфологически тождественные аутолитическим [53,77].

В первые часы после смерти в большинстве клеток и тканей отмечается снижение рН до 5-6 [154,280], что вызвано накоплением молочной кислоты в процессе анаэробного гликолиза [95]. Если начальные аутолитические изменения наступают под действием клеточных ферментов, то позднее они активизируются продуктами распада - жирными кислотами [277]. При этом рН среды возвращается к исходной величине, а затем смещается в щелочную сторону [53]. Скорость и интенсивность развития посмертных изменений зависят от вида и степени дифференцировки органа и ткани, их функционального состояния, причины смерти и так далее [51,65]. На аутолиз оказывают влияние колебания температуры и влажности окружающей среды [202]. Оптимум для развития посмертных реакций лежит при 37 °С и относительной влажности воздуха от 40 % до 60 %. Сдвиг температуры и относительной влажности в ту или иную сторону тормозит протекание посмертного аутолиза [66].

Известно, что соединительная ткань относительно устойчива к действию ауто-литических процессов вследствие низкой концентрации в ней протеолитических ферментов и наличия в ее составе таких компонентов, как фибриллярные белки и проте-огликаны, которые мало доступны для ферментативного расщепления [65]. Несмотря на относительно длительную сохранность соединительной ткани в посмертном периоде, начальные изменения обнаруживаются в ней сравнительно быстро [62,142]. Микроскопические и гистохимические исследования кожного покрова человека при аутолизе позволили выделить три стадии посмертных изменений. Первая стадия - латентная, характеризуется частичной деструкцией клеточных элементов и размножением микроорганизмов. Ее продолжительность при 37 °С составляет 24 часа, снижение

температуры до 4 °С удлиняет латентный период до 120 часов. Вторая стадия характеризуется появлением и развитием деструктивных изменений коллагенового и эластического каркаса, а также основного вещества дермы. Продолжительность этой стадии составляет 24-72 часа при 37 °С. В третьей стадии наблюдается накопление и дальнейшее распространение уже имеющихся качественных изменений. Высказывалось предположение [142], что наблюдаемые гистологами при посмертном аутолизе-изменения коллагена (набухание, гомогенизация, метахромазия и др.) являются следствием изменения не коллагена, а белково-углеводных комплексов основного вещества волокон. По данным ряда авторов частичное разрушение основного вещества дермы человека наступает уже через 48 часов после смерти. Имеются отдельные сведения об изменении физико-химических свойств и влагосодержании соединительной ткани в посмертном периоде. Показано увеличение жесткости соединительной ткани при увеличении срока посмертного аутолиза, что объяснялось дегидратацией ткани [98]. При изучении кусочков дермы млекопитающих, которые находились в течение 9 месяцев в стерильной влажной камере при комнатной температуре, было обнаружено снижение содержания воды в образцах и увеличение их прочности.

Хрящевая ткань в процессе аутолиза изменяется незначительно. Хрящевые клетки сохраняются долгое время после смерти неизменными и в течение 48 часов не претерпевают необратимых изменений. Показано, что в хрящевых клетках не найдено заметного снижения гликогена в течение 6 часов после смерти при температуре от 4 °С до 20 °С [125].

Хрящ также очень устойчив к трупному гниению. По данным некоторых исследователей [53] полное разрушение хряща в захороненном трупе происходит в среднем через 5 лет после смерти.

В процессе развития аутолиза в скелетных мышцах наблюдается несколько периодов [5,53,95]. Непосредственно после смерти мышцы имеют мягко-эластическую консистенцию, за счет высокой способности к гидратации, о чем свидетельствует набухание клеток, видимое микроскопически. Очевидно, это можно объяснить тем, что в это период происходит распад гликогена с образованием молочной ки-

слоты и смещение рН в кислую сторону [203]. Наряду с этим выявлено высокое содержание АТФ, которая оказывает на мышцы пластифицирующее действие [148].

Постепенно в мышцах развивается посмертное окоченение, мышцы уплотняются, объем их уменьшается, выявляются изменения, характеризующие распад структур клеток.

Показано, что в процессе аутолиза уменьшается выход миофибриллярной фракции [206] за счет снижения растворимости миозина [165]. Необходимо подчеркнуть, что до разрешения посмертного окоченения все собственно аутолитические процессы в мышечной ткани замедлены. Их замедление обусловлено пониженной проницаемостью саркоплазматической сети из-за резкого сокращения миофибрилл, образованием нерастворимого актомиозинового комплекса и выраженной дегидратацией структур мышечного волокна [264]. Предполагают, что по мере разрешения окоченения мембраны ультраструктур клетки становятся более проницаемыми для внутриклеточных ферментов [210]. Непосредственно после разрешения посмертного окоченения интенсивность протеолиза мышц возрастает в 2-3 раза [211]. Об этом свидетельствует разрыв пептидных связей в белках фракции миозина с образованием и накоплением в них свободных 1\Г-концевых групп лейцина и дикарбоновых кислот [265].

Разрешение посмертного окоченения характеризуется также изменением консистенции мышц - они становятся мягкими. Разрушение волокон происходит неравномерно, число распадающихся участков постепенно возрастает. Распад белков саркоплазмы несколько опережает диссоциацию миофибриллярных белков. Последняя начинается с разрушения актомиозинового комплекса и заканчивается при 2 °С через 5-6 суток. Повышается лабильность соединительнотканных элементов, в частности, коллагена [274,302].

При гистологическом исследовании было выявлено, что в этот период цитоплазма мышечных клеток становится мелкозернистой или гомогенной. Из всех органоидов клетки наиболее лабильными оказываются митохондрии [306]. Заметные изменения миофибрилл появляются лишь к концу 2-х суток. В более поздние сроки (4872 часа) происходит фрагментация миофибрилл и наконец к 20-30 суткам наступает их полная деструкция [66].

Большое внимание уделялось изучению количества свободных и связанных с белками мышцы катионов [179]. Установлено, что сразу после смерти в мышцах животных содержится очень мало диссоциированных Са2+ и степень диссоциации достигает 60 %. В последующие 2-4 суток значительная часть Са2+, М^2+ и Ъа + переходит из связанного состояния в диссоциированное или слабосвязанное. В течение последующих 5-10 суток аутолиза количество диссоциированных Са и № продолжает увеличиваться. Установлено, что через 1-2 суток аутолиза содержание Са2+ и других щелочноземельных элементов в актине является минимальным. По мере увеличения времени аутолиза содержание этих катионов в актине вновь увеличивается. По мнению некоторых авторов [265], адсорбция анионов и катионов белками мышцы, особенно актомиозином ведет к уменьшению сил притяжения между противоположно заряженными группами белков. В связи с этим в процессе аутолиза наблюдается увеличение гидратации мышцы.

Таким образом, исследования посмертных изменений тканей животных и человека малочисленны и выполнялись, в основном на морфологическом уровне с помощью световой и электронной микроскопии. Опыты по изучению изменений некоторых физико-химических свойств тканей в посмертном периоде проводились в несопоставимых условиях и практически не связывались с данными биохимического состава, характера связанной воды и биомеханических свойств тканей.

1.6. Влияние фиксирующих и консервирующих растворов, факторов искусственного старения (температура, УФ, световое и у - облучение) на физико-химические свойства биологических тканей.

В многочисленных исследованиях было показано, что обработка коллагеновых структур фиксирующими и консервирующими веществами (глицеральдегид, акролеин, ацетальдегид, формальдегид, кротональдегид, глутаральдегид) повышает резистентность коллагена к действию коллагенолитических ферментов, уменьшает его растворимость, а также повышает температуру гидротермического сокращения [87,268,281,301,309].

Считают, что поперечное сшивание коллагена альдегидными мостиками осуществляется за счет взаимодействия 6-аминогрупп лизина и оксилизина, а также гуа-

нидиновых групп аргинина с высокореактивными СНО группами альдегидов. Эти взаимодействия приводят к возникновению шиффовых оснований [131]. Представления о дублении коллагена альдегидами in vivo возникли в связи с тем, что эти соединения являются продуктами углеводного, жирового и аминокислотного обменов.

Реакционная способность функциональных групп биополимеров тканей в значительной степени определяется значениями рН, концентрацией и температурой фиксирующего раствора, в результате модифицирующего действия консервирующих веществ, способных к образованию поперечных связей. При этом происходят нарушения молекулярной структуры и композиционного состава биологических тканей, что может привести к изменению их биомеханических показателей [298,307].

Среди многочисленных фиксирующих веществ наиболее широкое применение в биологии и медицине имеет формальдегид [60,84,87,307]. Реакции формальдегида с различными биополимерами многочисленны и разнообразны. Первой стадией такого взаимодействия обычно является образование метилольных производных. Возникающая при этом гидроксильная группа, обладает значительной реакционной способностью и может конденсироваться с какой-либо атомной группировкой, содержащей активный кислород. В результате этой реакции появляется метиленовый мостик между аминокислотами.

Консервирование биологических тканей - метод, позволяющий устранить их разложение [34,215]. Показана хорошая сохранность основных групп коллагеновых волокон кожи мумии (200-150 гг. до нашей эры) [227]. Скелетно-мышечные ткани (связки, сухожилия, хрящ), сохраняемые замораживанием с предварительной обработкой гликозаминогликанами сохраняют свои биомеханические свойства и после размораживания [204]. При обработке кожных трансплантантов раствором, содержащим 0,25-0,5 % формалина и 15-20 % глицерина, подавляется рост стафилококка, си-негнойной и кишечной палочки, не происходит реакции ускоренного отторжения ткани [103]. При обработке мышцы глицерином также проявляется его защитное действие. При этом сохраняется 90 % исходной активности Са2+ АТФазы миозина при 20 циклах замораживания - оттаивания [276]. Кроме того, стабилизирующее действие на

термическую стабильность структуры коллагена и мышечных белков оказывает обработка растворами спиртов и Сахаров [174,193].

Под старением полимерных материалов понимают изменения их молекулярной и надмолекулярной структуры, физических и химических свойств под влиянием различных факторов внешней среды, и прежде всего таких, как: температура, Уф и у -облучение [74,288]. В связи с этим изучение характера возможного влияния перечисленных выше факторов на биологические ткани является актуальным применительно к научно-практическим задачам трансплантологии. В некоторых видах синтетических полимеров, в сухих белках, покоящихся семенах, свободные радикалы, возникающие при действии радиации, сохраняются в течение нескольких месяцев и лет [88,111,118] и исчезают под воздействием дополнительных факторов (тепла, кислорода, химических агентов). В результате УФ облучения увеличивается содержание эластина, тогда как уровень коллагена не меняется [152]. Кроме того, замедляется синтез белков и ли-пидов, синтез ДНК с начала замедляется на несколько часов, а затем ускоряется [201].

Высокая упорядоченность и структурированность вещества в клетке, которые имеют место в тканях человека в результате обработки консервирующими растворами, создают благоприятные условия для миграции поглощенной энергии, увеличивая вероятность повреждения электронно-акцепторных участков [47,118]. Ионы железа сенсибилизируют радиационно-химические процессы [74,119].

Высокие дозы у - облучения (5-45 кГр) гибельны для микроорганизмов, спор, грибов [47] и широко используются для консервации пищевых продуктов [47], консервации и дубления кожевенного сырья [96,113].

Отсутствие процессов биохимической репарации, восстановления повреждений и метаболического выведения радиотоксинов, свойственное живому организму [42,43,46], делает возможным накопление в изолированных тканях радиационных дефектов.

В то же время, компоненты консервирующих растворов оказывают защитное действие на биополимеры тканей человека и способствуют образованию радиационных сшивок, стабилизирующих структуру макромолекул [40,41].

Приведенные литературные данные показывают, что защита биологических материалов с помощью фиксирующих и консервирующих растворов, а также стерилизующего действия ионизирующей радиации необходимо в трансплантологии, пластической хирургии, а также для решения биотехнологических задач в археологии и па-леобиохимии, связанных с восстановлением внешнего вида мумий. Несмотря на большой интерес к этой проблеме, ряд вопросов остается не изученным. Так, до сих пор дискутируется вопрос о состоянии воды и изменении деформационных свойств тканей после их обработки консервирующими растворами.

Кроме того, в литературе недостаточно данных о влиянии радиации на соединительную и мышечную ткани человека. Остаются мало изученными и вопросы влияния факторов ускоренного старения ( повышенная температура, кислород, УФ - облучение) на биохимические и физико-химические свойства биологических структур. Между тем, такие исследования необходимы для прогнозирования сохранности биологических структур в течение длительного времени.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Королева, Ольга Александровна

ВЫВОДЫ.

1. Разработаны физико-химические принципы и научно-методические подходы изучения биологических тканей в зависимости от их биохимического состава, содержания воды, морфологической структуры и механических свойств.

2. Впервые предложена система оценки изменений биохимического состава, реологических свойств и морфологической структуры разных тканей животных и человека (кожа, ахиллово сухожилие, хрящ, мышца) в норме, онтогенезе, посмертном ауто-лизе, фиксации, консервации и искусственном старении.

3. Разработанная нами методика восстановления пергаментированных тканей опирается на впервые установленные факты: сближение структурных элементов тканей при удалении воды в процессе высыхания, возникновение усадочных напряжений, разрушение гликозаминогликанов, повышение модуля упругости и температуры гидротермического сокращения.

4. Выявленные нарушения органоспецифической архитектоники элементов соединительнотканного каркаса тканей вследствие дезорганизации углеводно-белковых комплексов при ферментативном удалении гликозаминогликанов приводит к снижению содержания гидратносвязанной воды и создает возможность для проникновения в межструктурные пространства тканей свободной воды, что сопровождается уменьшением модуля упругости и эластичности тканей.

5. В процессе посмертных изменений соединительной ткани установлено уменьшение гликозаминогликанов, деструкция и денатурация коллагена по типу спираль => клубок и перераспределение фракций связанной и свободной воды в пользу последней. При этом отмечается повышение модуля упругости и температуры гидротермического сокращения. Из всех изученных тканей хрящ является наиболее устойчивым в посмертном периоде.

6. Ткани, обработанные раствором формальдегида и консервирующими растворами представляют собой композитный материал, структурные элементы которого армированы метиленовыми мостиками, а межструктурные пространства заполнены консервирующим раствором, который, экранируя активные группы биополимеров, придает тканям эластичность и предохраняет их от возникновения изометрического напряжения при подсыхании, что впервые позволило дать научное обоснование механизма изученного процесса консервации.

7. В условиях, моделирующих "ускоренное старение" (повышенная температура, УФ, световое и у - облучение), в тканях протекают сложные кооперативные процессы, обусловленные деструкцией белков и образованием дополнительных межструктурных поперечных связей. Полученные данные использованы для прогнозирования состояния консервированных тканей при их длительном хранении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Королева, Ольга Александровна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Айзенхабер Ф., Аджубей A.A., Айзенменгер Ф., Есипова Н.Г. Гидратация левой спирали типа поли-Ь-пролин. II Исследование методом Монте-Карло. // Биофизика, 1992, 37(1), С. 68-73.

2. Александер Р. Биомеханика. М., Мир, 1970, 325 с.

3. Андреева Н.С., Есипова Н.Г., Миллионова М.Н. Изучение формирования трех-цепочечной спирали типа коллагена в полипептидах с заданным чередованием аминокислот. // Молекулярная биология, 1967, 1 (5), С. 657-664.

4. Белая Е.В. Общая характеристика реологических свойств мягких тканей человека по данным измерений методом локального циклического нагружения и простейшая феноменологическая модель этих свойств. // Механика композитных материалов, 1979, 4, С. 737-741.

5. Белоусов A.A. Ультраструктура поперечнополосатых мышц при аутолизе и в условиях протеолиза. // автореф. канд. дис. М., 1969, 142 с.

6. Богданов В.А. Элементы биомеханики тела человека. // Кн. Физиология движения, Ленинград, Наука, 1976, С. 5-37.

7. Бранков Г. Основы биомеханики. М., Мир, 1981, 254 с.

8. Буевич Ю.А., Ясников Г.П., Изаков В .Я. Механическое поведение вязкоупругого биологического материала. // Тез. докл. 3-й Всес. конф. по проблемам биомеханики, Рига, 1983, С. 88-89.

9. Бурджанадзе Т.В., Бежитадзе М.О. Термодинамическая и структурная характеристика частично денатурированного коллагена. // Биофизика, 1988, 33 (2), С. 220-225.

10. Бурджанадзе Т.В., Бежитадзе М.О. Калориметрическое исследование механизма развертывания молекулы коллагена в присутствии ионов. // Биофизика, 1988, 33 (1), С. 50-54.

11. Бурджанадзе Т.В., Ломая М.А., Бежитадзе М.О. О наличие термостабильного домена в спиральной части молекулы коллагена. // Биофизика, 1989, 34 (3), С. 377-383.

12. Бурджанадзе Т.В., Бежитадзе М.О. Денатурация коллагена при наличие и отсутствии концевых неспиральных участков. // Биофизика, 1989, 34 (3), С. 517.

13. Бурджанадзе Т.В. Термодинамическое обоснование водно-мостиковой структуры коллагена. // Биофизика, 1992, 37 (2), С. 231-237.

14. Бычков С.М., Николаева С.С., Харламова В.Н. Зависимость плотности и структурно-механических свойств коллагенового комплекса сухожилия от кислых гликозаминогликанов. // Докл. АН СССР, 1968, 182 (6), С. 1428.

15. Виноградов Г.В., Малкин А .Я. Реология полимеров. М., Химия, 1977, 436 с.

16. Виноградова Е.В., Михайло И.Н. Региональные особенности архитектоники волокнистого каркаса дермы кожи человека. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1978, 75 (9), С. 91-97.

17. Виноградова Е.В., Михайлов И.Н. Региональные и возрастные свойства дермы кожи человека в зависимости от толщины коллагеновых пучков. // Механика композитных материалов, 1979, 6, С. 1100-1104.

18. Волькенштейн М.В. Общая биофизика. М., Наука, 1978, С. 9-50.

19. Годлевска М.А., Слуцкий Л.И., Пуриня Б.А. Сопоставление механических и биохимических характеристик артериальных сосудов головного мозга человека. //Механика полимеров, 1974, 6, С. 1096-1106.

20. Гурфинкель B.C., Левик Ю.С. Скелетная мышца. Структура и функции. М., Наука, 1985, 140 с.

21. Гурфинкель B.C., Иваненко Ю.П., Левик Ю.С. Диссипативные процессы в пассивной скелетной мышце человека. // Биофизика, 1989, 34 (3), С. 499-503.

22. Гульдич С.М., Михайлов А.Н. Определение связанной воды. // Кож. обув, пром., 1977, 5, С. 46-47.

23. Дубинская В.А., Николаева С.С., Хорошков Ю.А., Королева O.A. Структура и физико-химические свойства гиалинового хряща человека при дезорганизации углеводно-белковых комплексов основного вещества. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины., 1991, CXI (3), С. 267-269.

24. Дуляпин B.A. Ультраструктурные признаки микроциркуляции суставного хряща при ревматоидном артрите. // Бюлл. эксперим, биологии и медицины, 1992, 113(4), С. 428-230.

25. Есипова Н.Г., Туманян В.Г. О локализации воды в коллагене. // ДАН, 1973, 211(1), С. 234-237.

26. Жаденов И.И., Пастель В.Б. Обменные процессы в суставном хряще в норме и при патологии. // Ортопедия, травматология и протезирование. 1982, 4, С. 65-70.

27. Жестяников В.Д. Репарация ДНК и ее биологическое значение. Л., Наука, 1979, 284с.

28. Зайдес А.Л., Михайлов А.Н., Пушенко О.И. Модифицированный метод определения оксипролина. //Биохимия, 1964, 29 (1), С. 57.

29. Зильберглейт A.C., Златина И.Н., Синяков B.C., Хайкова М.И. Способ измерения модуля упругости мышечной ткани человека. // Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1983, 12, С. 101-105.

30. Икада И., Сузуки М., Ивата X. Вода в мукополисахаридах. // в кн. Вода в полимерах. Под ред. Роуленд С.М., Мир, 1984, С. 288.

31. Иоффе И.Л., Черномашенцев А.Н., Ярцев Ю.А. Учение о сопротивлении биологических материалов как перспективная глава хирургической и функциональной анатомии. // Вопросы морфологии и оперативной хирургии, Саратов, Тр. Саратовский Госуд. мед. ин-т, 1971, LXXV (92), С. 383-404.

32. Калантаевская К.А. Морфология и физиология кожи человека. Киев, Здоровье, 1965, 270 с.

33. Касьянов В.А., Мунгалов Д.Д. Модель деформирования гибридного композитного материала, мягкой биологической ткани при больших деформациях. // Механика композит. материалов, 1984, 6, С. 1065-1071.

34. Клен Р. Заготовка и консервироавние тканей. Прага, Государственное изд. мед. литературы, 1962, 319 с.

35. Климова В.А. Основные микрометоды анализа органических соединений, М., Химия, 1967, С. 166-190.

36. Кнетс И.В. Механика биологических тканей. // Механика полимеров, 1977, 3, С. 510-518.

37. Кнетс И.В., Пфафрод Г.О., Саулгозис Ю.Ш. Деформирование и разрушение твердых биологических тканей. Рига, Зинанте, 1980, 318 с.

38. Кожевникова М.И., Синяков B.C. Гистерезисные явления в скелетных мышцах человека при поперечной их деформации в режиме изометрического напряжения. // Мед. биомеханика, Рига, Тез. докл. межд. конф. Достижения биомеханики в медицине, 12-15 сентября 1986, 1, С. 194-199.

39. Коллагенопластика в медицине. Под ред. Кованов В.В., Сыченников И.А., М., Медицина, 1978, 252 с.

40. Кондакова Н.В., Ромаков Ю.А. Влияние глицерина на радиационную деградацию ДНК в растворах. // Радиобиология, 1980, 20 (3), С. 429-432.

41. Кондакова Н.В. Сб. Лучевое поражение и его модификация. М., Наука, 1985, С. 40-52.

42. Кондакова Н.В., Лисаковский C.B., Сахарова В.В., Королева O.A., Дубинская

B.А., Николаева С.С. Влияние ионизирующей радиации на мышечную ткань человека. // Вопросы. Мед. химии, 1994, 40 (4), С. 46-50.

43. Корогодин В.И. Проблемы пострадиационного восстановления. М., Атомиздат, 1966, 391 с.

44. Косягин Д.В. Протеогликаны суставного хряща в норме и при возрастных дегенеративных изменениях. // Вопр. мед. химии, 1982, 4, С. 68-71.

45. Косягин Д.В. Концентрация ГАГ в неизмененном и дегенеративно измененном суставном хряще людей разного возраста. // Вопросы мед. химии, 1986, 32 (3),

C. 73-75.

46. Кузин A.M. Структурно-метаболическая гипотеза в радиобиологии. М., Наука, 1970, 131 с.

47. Кузин A.M., Каушанский Д.А. Прикладная радиобиология. М., Энергоиздат, 1981, 97 с.

48. Лакин Г.Ф. Биометрия. М., Высшая школа, 1980, 190 с.

49. Лим В.И., Грико Н.Б. Модель структуры коллагена с льдоподобной упаковкой молекул воды между полипептидными цепями в тройной спирали. // ДАН, 1981, 3, С. 743-746.

50. Липшиц Г. Образование эксудата при сжатии суставного хряща. // в кн. Вода в полимерах. М., Мир, 1984, С. 386-411.

51. Лопухин Ю.М., Коган Э.М. Критерии жизнедеятельности органов и тканей перед трансплантацией. М., Медицина, 1975, 176 с.

52. Лопухин Ю.М., Коган Э.М., Караганов Я.Л. Ультраструктурные основы жизнеспособности печени, почек и сердца. М., Медицина, 1977, 254 с.

53. Лушников Е.В., Шапиро H.A. Аутолиз. М., Медицина, 1974, 198 с.

54. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Некроз. Аутолиз. М., Медицина, 1981, 136 с.

55. Львов K.M., Бекмурзаев Б.М., Андреева А.П. Вторичная структура коллагена I из кожи хладнокровных животных.//Биофизика, 1991, 36 (5), С. 774-777.

56. Малышкина C.B. Особенности макромолекулярной организации матрикса суставного хряща человека на этапах пер- и постнатального онтогенеза. // Ортопедия, травматология и протезирование. 1994,4, С. 90-91.

57. Мархасин B.C., Цатурян А.К., Быков Б.Л., Изаков В .Я., Ясников Г.П., Желам-ский C.B. Исследование реологических свойств миокардиальной ткани. // Механика композит. материалов, 1982, 1, С. 108-112.

58. Михайлов А.Н. Коллаген кожного покрова и основы его переработки. М., Легкая индустрия, 1971, 528 с.

59. Михайлов А.Н., Николаева С.С., Ромаков Ю.А. Взаимодействие глицеринового альдегида с коллагеном как одна из элементарных реакций замшевого дубления. //Кожевенно- обувная промышленность, 1974, 9, С. 40-43.

60. Михайлов А.Н. Химия и физика кожного покрова. М., Легкая индустрия, 1980, 232 с.

61. Михайлов И.Н., Виноградова Е.В. Строение кожи. // в кн. Кожа. Под ред. Чернуха A.M., Фролов Е.П., М., Медицина, 1982, 210 с.

62. Михалев А.П., Денисов-Никольский Ю.И. Посмертные изменения рельефа эн-дотелиальной поверхности крупных артерий человека. // Арх. Патологии, 1976, 38 (2), С. 56-60.

63. Модяев В.П. О наличии гликозаминогликанов в местах минерализации скелетных тканей. // в кн. Физиология и патология соединительной ткани. Новосибирск, 1980, т. 1, С. 150-151.

64. Никитин В.Н., Перский Е.Э., Утевская JI.A. Возрастная и эволюционная биохимия коллагеновых структур. Киев, Наукова Думка, 1977, 242 с.

65. Никитина З.К., Шишкин С.С., Дебов С.С. Деградация транспортных РНК из скелетных мышц крыс в процессе аутолиза. // Вопросы мед. химии, 1976, 22 (6), С. 819-825.

66. Никитина З.К., Ребров Л.Б. Структурные и функциональные изменения миозина скелетных мышц крыс в процессе посмертного аутолиза. // Вопросы мед. химии, 1988, С. 75-81.

67. Николаева С.С., Дубинская В.А. Калориметрическое исследование гидратации коллагена. //Бюлл. эксперим. биол. и медицины, 1981, 11, С. 634-635.

68. Николаева С.С., Хорошков Ю.А., Дубинская В.А. Структура и свойства колла-генового комплекса сухожилия при дезорганизации основного вещества соединительной ткани. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины, 1981, 8, С. 98-100.

69. Николаева С.С., Дубинская В.А., Хорошков Ю.А., Омельяненко А.П. Реологические особенности соединительной ткани. // Механика композит, материалов, 1985, 3, С. 525-528.

70. Образцов И.Ф. Проблемы прочности в биомеханике. М., Высшая школа, 1988, 310 с.

71. Обысов A.C. Надежность биологических тканей. М., Медицина, 1971, 103 с.

72. Остриков М.С. Конденсационные структуры и капиллярно-пористые явления. Новосибирск, 1973, С. 23-28.

73. Остриков М.С. Проблемы физико-химической механики волокнистых и пористых дисперсных структур и материалов. // в сб. Конденсационные структуры и капиллярно-пористые явления. Новочеркасск, 1973, С. 23-28.

74. Павлов H.H. Старение пластмасс в естественных и искусственных условиях. М., Химия, 1982,219 с.

75. Павлова В.Н. Закономерности организации компонентов внутренней среды суставов в анализе их деструкции при старении и заболевании. // 16-й симпозиум TSOA "Деструкция суставов", Тезисы, 1987, С. 123.

76. Павлова В.Н., Копьева Т.Н., Слуцкий Л.И., Павлов Г.Г. Хрящ. М., Медицина, 1988, 320 с.

77. Пезацки В. Посмертные изменения животного сырья. М., Пищевая пром., 1964, 120 с.

78. Перский Е.Э., Гамова A.B., Васильева Л.В., Егоров Б.Н. Возрастные особенности связи между механическими свойствами и структурой коллагеновых волокон сухожилий крыс в норме и при периодическом сдерживающем рост питании. // Механизмы онтогенеза и их регуляция, Киев, 1987, С. 218-224.

79. Пирцхалава М.К., Есипова Н.Г., Туманян В.Г. Заилишвили М.М. Переходы типа левая спираль поли-Ь-пролин II-правая а-спираль в участках субфрагмента S 2 миозина поперечнополосатой мышцы как возможная конформационная основа механо-химического акта. //Биофизика, 1991, 36 (6), С. 1083-1093.

80. Подлубная З.А., Лацабидзе И.Л., Леднев В.В. Структура толстых нитей на продольных срезах поясничной мышцы кролика. // Биофизика, 1989, 34(1), С. 91-96.

81. Привалов П.Л. Стабильность белков и гидрофобные взаимодействия. // Биофизика, 1987, 32, С. 742-760.

82. Пчелин В.А., Николаева С.С. О старении коллагена. // Высокомолек. соед., 1966, 8 (11), С. 136-140.

83. Ребров Л.Б., Козельцев В.Л., Шишкин С.С., Дебов С.С. Некоторые энзиматиче-ские аспекты посмертного аутолиза. // Вестник Академии мед. наук СССР. М., Медицина, 1983, 10, С. 82-89.

84. Реброва Г.А., Денисов-Никольский Ю.И., Ромаков Ю.А. Особенности модифицирующего действия формальдегида на различные фракции коллагена. // Вопр. мед. химии, 1984, 6, С. 101-106.

85. Регирер С.А. Лекции по биологической механике. М., МГУ, 1980, 142 с.

86. Регирер С.А., Штейн A.A. Методы механики сплошной среды в применении к задачам роста и развития биологических тканей. // Современные проблемы биомеханики. Зинанте, 1985, С. 5.

87. Ротт Г.М., Семин Ю.А., Поверенный A.M. Кинетическое исследование взаимодействия формальдегида с белками. // Молекулярная биология, 1981, 15 (4), С. 790-797.

88. Рыльцев В.В., Вирник Р.Б., Довбий Е.В., Филатов В.Н. Превращение свободных радикалов в у - облученных ферментах при длительном хранении. // Радиология, 1988,28 (5), С. 584-587.

89. Серов В.В., ШехтерА.Б. Соединительная ткань. М., Медицина, 1981,312 с.

90. Синяков B.C., Хайкова М.И. К вопросу о гистерезисных свойствах скелетных мышц человека. //Механика композит, материалов, 1985, 4, С. 743-746.

91. Скворцов A.M., Павлушков И.В., Прокудина Т.И., Блинов Н.П. Описание структуры хрящевой ткани в растворе методом среднего поля. // Биофизика, 1989, 34(5) С. 776-780.

92. Слуцкер А.И. Рентгенография полимеров. // в кн. Современные методы исследования полимеров, под ред. Слонимского Г.Л., Химия, 1982. С. 92-105.

93. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. Л., Медицина, 1969, 374 с.

94. Слуцкий Л.И. Современные представления о коллагеновых компонентах хрящевой ткани. //Вопросы мед. химии, 1985. 31 (3), С. 10-17.

95. Соловьев В.И. Созревание мяса. М., Пищевая промышленность, 1966, 337 с.

96. Страхов И.П., Левенко П.И., Шифрин И.Г. Ионизирующая радиация в кожевенной промышленности. М., Легкая индустрия, 1973, 189 с.

97. Тагер A.A. Физикохимия полимеров. М., Химия, 1978, 543 с.

98. Тиманин Е.М. О возможностях измерения реологических характеристик мягких тканей человека на основе регистрации их поперечной жесткости. // Биофизика, 1989, 34 (3), С. 512-516.

99. Туманян В.Г. Расчет структуры фибриллярного белка коллагена. // Молекулярная биология, 1971, 5 (4), С. 499.

100. Туманян В.Г., Рогуленкова В.Н., Есипова Н.Г., Айзехабер Ф. Конформация тройной спирали коллагена, как функция первичной структуры. // Биофизика, 1992, 37(1), С. 5-9.

101. Фанг Я.Ч. Математические модели зависимости напряжение-деформация для живых мягких тканей. // Механика полимеров, 1985, 5, С. 850-867.

102. Федорченко Е.Я., Володин Т.В., Печенова Т.Н., Найденова И.Ю. Назаревская Н.М., Гулый М.Ф. Гетерогенность кислоторастворимого коллагена кожи крыс при дисбалансе аминокислот. // ДАН, 1980, 5 (9), С. 86-89.

103. Фейгельман С.С. Способ получения стерильных кожных трансплантантов с бактерицидными свойствами: ПАТ. 2035138 Россия, МКИ6 A01N 1/00 №92013578/14; Заявл. 22.12.92; Опубл. 20.05.95, Бюл. № 14.

104. Хорошков Ю.А., Одинцова H.A. Возрастные особенности структуры волокнистого каркаса скелетных мышц человека. // Тез. докл. межд конф."Достижения биомеханики в медицине", Мед. биомеханика, Рига, 1986, 1, С. 406-412.

105. Хорошков Ю.А., Одинцова H.A. Соединительнотканные структуры скелетной мышцы человека и их значение в биомеханике этого органа. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1988, 95 (12), С. 648-653.

106. Цатурян А.К., Изаков В.Я., Желамский C.B. Механические свойства пассивной сердечной мышцы. // Современные проблемы биомеханики, Рига, вып. 2. Механика биологических тканей, под ред. Малмейстер А.К., 1985, (2), С. 151-178.

107. Цатурян А.К. Кинетическая механохимическая модель мышцы с шестиста-дийным циклом поперечных мостиков. //Биофизика, 1991, 36 (4), С. 660-669.

108. Церетели Г.И., Смирнова О.И. Калориметрическое исследование стеклования денатурированного коллагена. //Биофизика, 1990, 35 (2), С. 217-221.

109. Церетели Г.И., Белопольская Т.В., Мельник Т.Н. Тепловые свойства коллаген-вода. II. Конформация и конформационная подвижность макромолекул в натив-ном и денатурированном состоянии. // Биофизика, 1997, 42 (3), С. 584-590.

110. Чабан И.А., Родникова М.Н., Жакова В.В. Концентрационный интервал разрушения сетки водородных связей воды в водных растворах неэлектролитов. // Биофизика, 1996, 41 (2), С. 293-298.

111. Чарлзби А. Ядерные излучения и полимеры. М., И.Л., 1962, 140 с.

112. Чедерс Э.Э., Слуцкий Л.И., Пуриня Б.А. Связь между механическими характеристиками брюшной аорты человека и ее биохимическим составом. // Механика полимеров, 1975, 4, С. 722-729.

113. Шифрин И.Г. Радиационно-химическая модификация коллагена дермы в присутствии влаги. // Радиобиология, 1976, XVI (4), С. 508-511.

114. Шишкин С.С., Никитина З.К. Изучение посмертного распада РНК скелетных мышц. // Вопр. мед химии. 1977, 3, С. 346-351.

115. Шишкин С.С., Китавцев Б.А., Дебов С.С. Изучение посмертного распада по-лисмом скелетных мышц крыс. // Биохимия, 1975, 40 (5), С. 1053-1059.

116. Штранкфельд И.Г., Филатова Л.Г., Каламкарова М.Б. Оптические и механические свойства глициринизированных мышечных волокон при избирательной экстракции миозина и актина. // Биофизика мышечного сокращения, под ред. Франка Г.М., М., Наука, 1966, С. 180-184.

117. Шумаков В.И., Штенгольд Е.Ш., Онищенко Н.А. Консервация органов. М., Медицина, 1975, 200 с.

118. Эйдус Л.Х. Физико-химические основы радиобиологических процессов и защиты от излучений. М., Атомиздат, 1979, 193 с.

119. Эммануэль Н.М. Некоторые проблемы химической физики старения и стабилизации полимеров. // Усп. Химии, 1979, 48 (2), С. 2113-2163.

120. Aaron В.В., Gosline J.M. Elastin as a Random-Network Elastomer: A Mechanical and Optical Analysis of Single Elastin. // J. Biopolymers, 1981, 20 (6), P. 1247-1260.

121. Abd-El-Basset E.M., Ahmed I., Fedorov S. Actin and actin-binding proteins in dif-ferentianting astroglia in tissue culture. // J. Neurisci Res., 1991, 30 (1), P. 1-17.

122. Abrahams M. Mechanical behaviour of tendon in vitro. // Med. And biol. Enging, 1967, 5, P. 433-443.

123. Allenspach A.L., Maynard H., Tsonis P.A. Visualization of proteoglycans and link protein in embrionic chick limb cartilage via cryofication, freezesubstitution and immunochemical tecniques. // J. Microscop., 1996, 182 (2), P. 84-94.

124. Alnaqeeb M.A., A1 ZaidN.S., Goldspink G. Connective tissue changes and physical properties of developing and ageing skeletal muscle. // J. Anat., 1984, 139 (4), P. 677-689.

125. Andersen H. Post- mortem aytolysis in human fetuses its influence on some histo-chemical reactions. // Acta Path. Microbiol. Scand., 1960, 50, P. 25-27.

126. Angel G., Gheorghe V., Costea M. Assesment of collagen age changes by termal analysis. // An Univ. Bucuresti Fiz., 1979, 28, P. 97-103.

127. April E.W. The liquid-cristallene contractile apparatus of striated muscle. // Amer. Chem. Soc. Polymer. Prep., 1977, 18 (12), P. 39-44.

128. Bayliss M.T., Ridgway G.D., Ali S.Y. Differences in the rates of aggregation of proteoglycans from human articular cartilage and chondrosarcoma. // Biochem. J., 1983,215 (3), P. 705-708.

129. Bairati A., Conazzi M., Gioria M.A. A comparative study of periochondrial tissue in mammalian cartilage. // Tissue cell, 1966,28 (4), P. 255-268.

130. Barber B.J., Babbit, Ruth A., Parameswaran S., Dutta Sandeep, Ser A. Agerelated in rat interestial matrix hydration and serum proteins. // J. Gerontol., 1995, 50A (5), P. 282-287.

131. Barnard K., Light N.D., Sinis I.J., Bailey A.J. Chemistry of the collagen crosslinks. //Biochem. J., 1987, 244, P. 303-309.

132. Bartos F. Aging of collagen in vitro. // Gerontologia, (Basel), 1967, 13, P. 81.

133. Bayliss M.T., Ridgway G.D., Ali S.Y. Differences in the rates of aggregation of proteoglycans from human articular cartilage and chondrosarcoma. // Biochem. J., 1983, 215 (3), P. 705-708.

134. Belton P.S., Jacson R.R., Packer K.J. Pulsed NMR studies of water in striated muscle. I Transverse nuclear spin relaxation times and freezing effects. // Biochim. Bio-phys. Acta., 1972, 286, P. 16-20.

135. Benjamin M., Qin S., Ralphs J.R. Fibrocartilage associated with human tendous and their pulleys. // J. Anat., 1995, 187, P. 625-633.

136. Berenson M.C., Blevins F.T., Plaas A.H.K., Vogel K.G. Proteoglycans of human rotator cuff tendons. // J. Orthop. Res., 1996, 14 (4), P. 518-525.

137. Bert J.L., Reed R.K. Flow conductivity of rat dermis in determinated by hydration. 11 Biorheology, 1995, 32 (1), P. 17-27.

138. Bettelheim F.A., Brady E. Hydration and proteoglycan content of rat skin. // in "Glycoconjygates", Proc. 5-th Int. Symp., Kiel, 1979, Stuttgard, P. 662-664.

139. Birk D.E., Hahn R.A., Linsenmayer C.Y., Zycband E.I. Characterization of collagen fibril segments from chicken embryo cornea, dermis and tendon. // Matrix. Biol., 1996, 15(2), P. 111-118.

140. Bouteille M., Pease D.C. The tridimensional structure of native collagenous fibrils, their protein aclous filaments. // J. Ultrastruct. Res., 1971, 35, P. 314-338.

141. Bradley K.H., Mc Connell S.D., Crystal R.G. Lung collagen composition and synthesis characterization and changes with age. // J. Biol. Chem., 1974, 249, 9, P. 26742683.

142. Braun-Falko O., Winter W. Untersuchungen ube die Autolyse der Haut. // Arch. Clin. Exp. Dermatol., 1964, 220, S. 344-365.

143. Brenner B., Chalovich J.M., Greene L.E., Eisenberg E., Schoenberg M. Stiffness of skinned rabbit psoas fibers in Mg ATP and Mg PPt solusion. // Biophys. J., 1986, 50 (4), P. 685-691.

144. Broom N.D. The collagenous architecture of articular cartilage. A synthesis of ultrastructure and mechanical function. //J. Reumatol., 1986, 13 (1), P. 142-152.

145. Burgeson R.E., Hollisten D.W. Collagen heterogeneity in human cartilage. // Bio-chem. Biophys. Res. Comm., 1979, 87 (4), P. 1124-1131.

146. Cavallaro J.F., Kemp P.D., Kraus K.H. Collagen fabrics as biomaterials. // Biotech-nol. Bioeng., 1994, 43 (8), P. 781-791.

147. Chakrabarti B., Park J.W. Qlycosaminoqlicans: structure and interaction. // C.R.C. Critical rew. Biochemistry N.Y., 1980, 8 (3), P. 225-313.

148. Chang D.C., Hazlewood., Woesner D.E. The spin-lattice relaxation times of water associated with early host-mortem changes in skeletal muscle. // Biochim. Biophys. Acta, 1976, 437, P. 253-258.

149. Chopra R.K., Bowness J.M. The association of intercellular structural glycoproteins with lipid in canin cartilage.//Canad. J. Biochem., 1981, 59 (3), P. 191-201.

150. Christensen S.B., Reinmann I. Differential histochemical staining of glycosamino-glycans in the matrix of osteoarthritic cartilage. // Acta Path. Microbiol. Scand Sect. A., 1980 88(1), P. 61-68.

151. Clark J.M. The organisation of collagen fibrile in the superficial zone od articular cartilage. // J. Anat., 1990, 174, P. 117-130.

152. Daniels F. Biochemical and structural effects of light on the skin. // 6. Int. Cong. Photobiol. Bochum., 1972, P. 43.

153. Davis N.R., Risen I.M., Pringle C.A. Stable, nonreducible cross-links of nature collagen. //Biochemistry, 1975, 14 (9), P. 2031-2036.

154. Decker R.S., Pool A.R., Dingle J.T. Windental K. Lisosomal alterations in outolising rabbit heart. // J. Mol. And Cell Cardiol., 1979, 11, P. 189-197.

155. Decraemer W.F., Maes M.A., Vanhuyse V.J. An elastic stress-strain relation for soft biological tissues based on a structural model. // J. Biomech., 1983, 13, P. 463-468.

156. Dell' Orbo C., Gioglio L., Quacci D., Soldi C. Evidence of rat tail tendon hroteogly-can at emission field scanning electron microscopy. // Eur. J. Aistochem., 1996, 40 (2), P. 125-128.

157. Diab M., Wu T.T., Eyre D.R. Collagen type IX from human cartilage: a structural profile of intermolecular cross-linking sites. //Biochem. J., 1996, 314 (1), P. 327-332.

158. Dorrington K.L. The theory of viscoelasticity in biomaterials. // Mech. Prop. Biol. Mater. Symp. Leeds, 1979, Cambridge, 1980, P. 289-314.

159. Durrant L.A., Ratphs J.R., Archer C.W., Benjamin M. Heterogenius distribution of citoskeletal proteins in articular cartilage an immunofluorescence and confocal microscope study. // Brit. Connect. Tissue Soc. Meet., Cardiff, 1994, Int. J. Exp. Phatol., 1994, 76 (6), P. 77.

160. Egan M.S., Goldenberg D.L., Cohen A.S., Segal D. The association of amiloid deposits and osteoarthtitis. // Arhr. Rheum., 1982, 25 (2), P. 204-208.

161. Elsden D.F., Light N.D., Bailey A.J. Aninvestigation of pyridinoline, a putative collagen cross-link. //Biochem. J., 1980, 185, P. 531-534.

162. Essen-Gustavson B., Borges C. Histochemieal and metabolic characteristics of human skeletal muscle in relation of age. // Acta Physiol. Scand., 1986, 126 (1), P. 107-114.

163. Eyre D.r., Wu J.J. Collagen of fibrocartilage. // FEBS Lett., 1983, 158 (2), P. 265-270.

164. Feher G., Fazecas S. The comparative morfology of the muscle tissues and changes of constituents in the pig types. // Anat. Hystol. Embriol., 1990, 19 (3), P. 193-207.

165. Fitts R.H., Troup I.P., Witzmann F.A., Holloszy L.O. The effect of ageing and exercise on skeletal muscle function. // Mech. Ageing and Dev., 1984, 27 (2), P. 161-172.

166. Fleischmaler R., Mac Donald E.D. Dermal collagen fibrills are hybrids of type I and type III collagen molecules. // J. Struct. Biol., 1990, 105 (1-3), P. 2799-2815.

167. Fortune F., Chantal B., Danial H. A differential scaning calorimetry analusis of the age-related changes in the thermal stability of rat skin collagen. // Biohim. Biophys. Acta, 1984, 791, P. 205-211.

168. Freed L.E., Marquis J.C. Vunjak-Novakovic G. Emmanual J., Langer R. Composition of cell-polymer cartilage implants. // Biotechnol. Bioeng., 1994, 43 (7), P. 605-614.

169. Fung Y.C.B. Elasticity of soft tissues in simpl elongation. // Amer. J. Of Physiol, 1967,213 (6), P. 315-321.

170. Fung Y.C. Mechanical properties of living tissues. // in "Biomechanics". N.-Y., 1981,433 p.

171. Fujii K., Kurosu H., Age-related changes in the reducible cross-links of connectin from human skeletal muscle. // Biochem. Biophys. Res. Communications, 1979, 89 (3), P. 1026-1032.

172. Gardner D.L. The nature and causes of osteoarthrosis. // Brit. Med. J., 1983, 286, p. 418-424.

173. Gay I., Miller E.J. Pathophysiologic der Biosynthese von Knorpelkollagen. // Thora-pie Woche, 1979, 29(41), P. 6756-6774.

174. Gekko K., Koga S. Increased Thermal Stability of collagen in the Presence of Sugers and Polyos. // J. Biochem., 1983, 94, P. 199-205.

175. Goldwasser M., Astlay T., RestM., Van der Glorieux F.H. Analysis of the type of collagen present in osteoarthritic human cartilage. // Clin. Orthop., 1982, 167, P. 296-302.

176. Hahn M., Härtung P., Dunkel R. New areas of applications of Karl Fischer's titration. // Chem. Labor. Biotech., 1996, 47 (9), P. 388-392.

177. Hall B.K. Earliest evidence of cartilage and bone development in embrionic life. // Clin. Ontrop. Relat Res., 1987, 225, P. 255-271.

178. Hamlin C.R., Lusehin G.H., Kohn R.R. Aging of collagen: comparative rates in four mammalian species. // Exp. Gerontol., 1980, 15, P. 393-398.

179. Hamm R. Die postmortal Änderung der Binding von Magnesium, Calcium, Zink.

// Zeitchr. Fur Lebensmitteluntersuchung und forschung, 1962, 2, P. 132-138.

th

180. Hattert H. Biorheology and the practice of medicine. // 5 int'l: Biorheology congress abstracts, 1983, 20 (4), P. 366-367.

181. Harridge S.D.R., Bottinelli R., Canepari M., Pelegrino M.A., Reggiani C., Esbjorns-son M., Saltin B. Whole- muscle and single- fibre contractile properties and myosin heavy chane isoforms in humans. // Pfluger Arch., 1996, 432 (5), P. 913-920.

182. HattaL, Sugi H., Tamura Y. Stifness changes in frog skeletal muscle during contraction recjrded using ultrasonic waves.//J. Physiol, 1988, 403, P. 193-209.

183. Hayes W.C., Bodine A.E. Flow - independent viscoelastic properties of articular cartilage matrix. // J. Biomech. 1978, 11 (8/9), P.407-419.

184. Heiner W, Rainer S. Structual influences of the collagen fiber matrix of animal hides on physical testing results. // Leder, 1996, 47 (9), P. 196-203.

185. Higuchi H., Unazume Y. Role of the elastic component in skinned muscle fibers. // Huxon caöpnraKy ¿paccH, J. Physiol. Soc. Jap., 1984, 46 (8-9), P.466.

186. Hill D.K. Tension due to interaction betweenthe sliding filaments in resting striated muscle. // J. Physiol., G. Brit, 1968, 199, P. 637-684.

187. Hironori S, Iwao S, Torn S. An anatomical study of the muscle-tendon junction of the human lateral pterygoid muscl. Immunohistochemical and scanning electron microscopical analysis. // Shigaku, 1996, 84 (2), P. 199-209.

188. Hofecker G., Moser P., Verzar F. Chemische Spannugsanderungen von kollagen fasern. // Gerontología, 1972, 18 (1), P. 28-35.

189. Hori R.J., Mockros L.F. Indentation test of human articular cartilage. // J. Biomech., 1976, 9 (4), P. 259-268.

190. Housley T., Tanzer M.L. Collagen cross-linking: of hydroxyaldolhistidin a naturally-occuring cross-link. // Biochem. Biophys. Res. Comm., 1975, 67 (2), P. 824-830.

191. Huxley S.A. The samuel pruzansky memorial lecture: understanding muscle. // Amer. J. Med. Genet, 1986, 25 (4), P. 617-621.

192. Hvidt Soren, Chang Taihyun, Yu Hyuk. Rigidity of myosin and myosin rod by electric birefringence. // Biopolymers, 1984, 23 (7), P. 1283-1294.

193. Ishii Y, Ohnishi S.T, Rubin E. Action of ADP and Ethanol on muscle proteins in vitro. // Biochem. Pharmacol, 1985, 35 (2), P. 203-210.

194. Ichikawa H. Fine structure of skeletal muscle. // in "Cell and muscle mobility." Plenum Press, 1983, 4, P. 1-84.

195. Ichiro H, Kozo A. Determination of the number of crosslinks in collagens from mechanical properties of swollen fibers. // J. Appl. Polym. Sci, 1996, 62 (10), P. 1577-1586.

196. Idson B. In vitro measurment of transepidermal water loss. // J. Soc. Cosmet. Chem, 1978, P. 573-580.

197. Inerot B.S, Heinegard, Audell L. Articular cartilage proteoglycans in aging and osteoarthritis. //Biochem. J, 1978, 168 (1) P. 143-156.

198. Ioshiba K, Azuma H. Contents and composition of glycosaminoglycans in different sitse of the human hip joint cartilage. // Ann. Rheum. Dis, 1982, 41 (5), P. 512-519.

199. Ji Xiafeng, Jiang Hongzhi, Baiginen Yike. Proteoglycans and glycosaminoglycans in articular cartilage of human femur. // Daxue Xuebao, 1996, 22 (3), P. 259-264.

200. Jizben Z, Zhenglian Z, Wending Z. Hydration and thermotransition of collagen fiber. // in "Water and ions in biological systems", L, 1985, P. 197-214.

201. Johuston K. J., Oikorinen A. J, Lowe N. J, Clark J. G, Uitto J. Ultraviolet radiation-induced connective tissue changes in the skin of hairless mice. // J. Invest. Dermatol, 1984, 82, (6), P. 587-590.

202. Kavanau J.L. Water and solute water interaction. // Federat. Proceed, 1966, 25, P. 977-982.

203. Kawashima K, Yamanaka H. Effects of chloraphenicol on post-mortem biochemical cyanges in scallop adductor muscle. // Fish. Sci, 1994, 60 (4), P. 461-465.

204. Kelvin G.M, Method for cryopreserving musculoskeletal tissnes: Пат. 5131850 США, МКИ5 A 01 N 1/02 / Brockbank, Marietta; Gryolife, Inc. - № 431153; Заявл. 03.11.89; Опубл. 21.07.92; НКИ 435/1.

205. Kempson G.E, Muiz H, Swanson S.A.V, Freeman M.A.R. Correlation between stiffness and the chemical constituent of cartilage on the human femoral head. // Biochim. Biophys. Acta, 1970, 215, P. 70-77.

206. Khan A.W, Van der Berg L. Some protein changes during post-mortem ton-derization in poultry meat. // J. Food Sci, 1964, 29 (5), P. 597-601.

207. Klein N, Levy-Carciente M, Cohn D, Maron G, Uretzky G, Peleg H. Fila-ment-woud composite soft tissue prosthesis: Controlling compliance and strength by water absorption and degradation. // J. Mater. Sci.: Mater. Med, 1993,4(3), P. 285-291.

208. Kleyne Т.О. Biosynthesis of proteoglycans. // Int. Connect. Tissue Res, 1981, 9, P. 27-28.

209. Koepf M, Corinth C, Haferkamp O, Lonnermacher Т.Е. Anomalous diffusion of water in biological tissue. // Biophys. J, 1996, 70 (6), P. 2950-2958.

210. Kronman M.I., Winterbottom R.I. Meat aging and freezing. Post-mortem changes in the water-soluble proteins of bovine skeletal muscle during aging and freezing. // J. of Agricult. and Food Chem., 1960, 8 (1), P. 67-72.

211. Ladefogen C., Christensen M.E. Congophilic substance with grown dichroism in hip joints in autopsy material. // Acta Path. Microbiol. Scand., 1980, 88 (1), P. 55-58.

212. Lafeber Floris P.G., Roy Hanneke van. Human osteoarthritic cartilage in the sinthetically more active but in culture less vital than normal cartilage. // Rheumatol., 1992, 19 (1), P. 123-129.

213. Lee Shui-Mei, Lin Shan-Yang, Liang Run-Chu. Secondary conformational structure of type IV collagen in different conditions determined by fouriertransform infrared microscopic spectroscopy. // Artif. Cells Blood Substit. and Im-mobilizat. Biotechnol., 1995, 23 (2), P. 193-205.

214. Lettlechild J.A. Current trends in protein research. // Amino-Acids Proteins, 1995, 26, P. 283-329.

215. Lipkin R. Tissue Engineering Replacing damaged organs with new Tissues. // Sci. News, 1995, 148 (2), P. 24-26.

216. Ma P.X, Schloo B, Mooney D, Langer R. Development of biomechanical properties and morphogenesis of "in vitro" tissue engineered cartilage. // J. Biomed. Mater. Res, 1995, 29 (12), P. 1587-1595.

217. Maiorano G. Collagen characteristies of skin, fell and epimysium from rams, wethers and zeranol-implanted ram lamb. // J. Anim. Sci, 1995, 72 (2), P. 393-398.

218. Mankin H.I. Speculations regarding the biochemical pathogenesis of generalized asteoarthritis. // J. Rheum, 1983, 10 (9), P. 7-8.

219. Manzatu J, Frandafir V, Christof R. Reorganisation of collagen in the presence of structured (activated) water. // World Meet Pharm, Biopharm. Pharm. Technol. 1-st, 1995, P. 26-27.

220. Maroudus A. Balans between awelling pressure and collagen tension in normal and degenerate cartilage. //Nature, 1976, 260, 5554, P. 808-809.

221. Maroudus A. Physicochemical properties of articular cartilage. // Adult articular cartilage. Ed. Freman M.A, L, 1979, P. 215-290.

222. Maroudus A, Bayliss M, Brocklerhurst B. Bioschemishe und phusiko-chemische Untersushungen der Osteoarthrose mit klinschem Bezug. // Der Orthopade, 1983, 12 (2), P. 109-118.

223. Masahiko S, Limbach G, Schwarz W.H, Pollard T.D. Mechanical properties of actin. //J. Biol. Chem, 1985, 260 (14), P. 8585-8592.

224. Mason p, Unsworth J. Viscoelasticity and structure of fibrous proteins. III. Lou-frequency dynamic behaviour of native and crosslinked tendon. // Kolloid. Z. U. Z. Holym, 1971, 249 (1-2), S. 1101-1106.

225. Mc Kibbin B, Maroudas A. Nutrition and metabolism. // in "Adult articular cartilage", ed. M.A.R. Freeman, L, 1979, P. 461-468.

226. Miya K, Koji H, Kumihiko K, Takeshi H. Shinobu A. Glycosaminoglycan and collagen fibrillar inter actions in mouse corneal stroma. // Matrix Biol, 1994, 14 (4), P. 283-286.

227. Monies G.S, Krisztan R.M. Junqueira L.C.U. Preservation of elastic system fibers and of collagen molecular arrangement and stainability in an Egyptian mummy. // Histochemistry, 1985, 83 (2), P. 117-119.

228. Morrison E.N, Ferguson M.W.J, Bayliss M.T, Archer C.W. The development of articular cartilage. I The spatial and temporal patterns of collagen types. //J. Anat, 1996, 189(1), P. 9-22.

229. Mort J.S, Poole A.R, Roughley P.J. Age-related changes in the structure of proteoglycan link protein present in normal human articular cartilage. // Bio-chem. J, 1983, 214 (1), P. 269-272.

230. Moser E, Holzmuller P, Kressak M. Improved estimation of tissue hydration and bound water fraction in rat liver tissue. // Magn. Reson. Mater. Phys. Biol. Med, 1996,4(1), P. 55-59.

231. Moskowitz R.W, Howell D.S, Goldberg V.M. Cartilage proteoglycans alterations in an experimentally induced model of rabbit osteoarthtitis. // Arthr. Rheum, 1979, 22 (1), P. 155-163.

232. Mow V.C, Lai W.M, Redler I. Some surface characteristics of articular cartilage. // J. Biomech, 1974, 7 (3), P. 449-456.

233. Mow V.C, Lai W.M, Elisenfeld J, Redler J. Some surface characteristics of articular cartilage on the stability of articular surface and possible diomechani-cal factor in etiology of chondrodegeneration. // J. Biomech, 1974, 7 (5), P. 457-468.

234. Mow V.C, Lipshitz H, Glimcher M.J. Mechanisms for stress relaxation in articular cartilage. // In: Trans. 23rd Ann. Meeting Orthopeed Res. Soc, 1977, 2, P. 71.

235. Mow V.C, Lai W.M, Mak A.F. Viscoelastic properties of proteoglycan subunits and aggregates in varuing solution concentrations. // J. Biomech, 1984, 17(5), P. 325-338.

236. Muir H. Proteoglycans as organizers of the intercellular matrix. // Biochem. Soc. Trans, 1983, 13 (6), P. 613-622.

237. Narayanan N, Jones D.L, Xu A, Yu J.C. Effects of aging on sarcoplasmic reticulum function and contraction duration in skeletal muscles of rat. // Am. J. Physiol, 1966, 271 (4, Pt 1), P. 1032-1040.

238.Netti P, D ' Amore D, Ronca D, Ambrosio L, Nicolais L. Structure-mechanical properties relationship of natural tendons and ligaments. // J. Mater. Sci.: Mater. Med. 1996, 7 (9), P. 525-530.

239. Nimni M.E, Guia E.de, Bavetta L.A. Collagen, hexosamine and tensile strength of rabbit skin during aging. // J. Investig. Dermatol, 1966, 47 (2), P. 156-158.

240. Olde Damink L.H. Changes in the mechanical properties of dermal sheep collagen during in vitro degradation. // J Biomed. Mater. Res, 1995, 29 (2), P. 139-147.

241. Osei D, Revtl P. Collagen and proteoglycans of the scoliotic human intervertebral disc. // J. Pathol, 1992, 167, P. 161-162.

242. Oxlund H, Manschot J, Viidik A. The role of elastin in the mechanical properties of skin. // J/ Biomech. 1988, 21 (3), P. 213-218.

243. Pereira J.A.A, Saht A, Wessel S.A. Charactirisation of single human skeletal muscle fibres co-expressing different myosin heavy chan isoform. // J. Physiol, 1994, 475, P. 33.

244. Perricone E, Palmoski M.J, Brandt K.D. Failure of proteoglycans to form aggregates in morphologically normal aged huvan cartilage. // Archt. Rheum, 1977, 20 (7) P. 1372-1380.

245. Pfeiffer H, Mornstad H, Teivens A. Estimation of chronologic age using the aspartic acid recemization method. I On Human rib cartilage. // Int. J. Legel Med, 1995, 108(1), P. 19-23.

246. Plaas A.H.K, Sanday J.D. Age-related decrease in the link stability of proteoglycans aggregates formed by articular cartilage. // Biochem. J, 1984, 220 (2), P. 337-340.

247. Poole G.A, Flint M.H, Beaumont B.W. Morphological and functional interrelationships of articular cartilage matrixes. // J. Anat, 1984, 138 (1), P. 113-138.

248. Pyoji N, Satoru Y, Norio A. Reconsidiration of the indirect measurementsof intracellular Na+ and K+ cjncentrations in the rat skeletal muscles. // Comp. Biochem. And Physiol, 1984, A79 (4), P. 551-554.

249. Pyzalska D, Gleaser M, Rao S.T, Sundaralingam M. Structure of chicken skeletal muscle troponin C at 1,78 A resolution. / Acta Crystallogr, Sect D: Biol. Crystallogr., 1994, D 50 (1), P. 40-49.

250. Quaglino D.Jr., Bergamini G, Boraldi F, Pasquali Ronchetti I. Ultrastructural and morphometrical evaluation on normal human dermal connective tissue -the influence of age, sex, and body region. // Br. J. Dermatol, 1996, 134 (6), P. 1013-1022.

251. Quintarelli G, Ippolito E, Roden L. Age- dependent chahges in the state of aggregation of cartilage matrix. // Lab. Invest, 1975, 32 (1), P. 111-123.

252. Ramachadran G.N. Structure of collagen on the molecular level. // in "Treatise on collagen" Ed. G.N. Ramachandran, 1967, 1 (1), P. 103-183.

253. Ramachandran G.N, Bausal M, Bhatnagar R.S. A hypothesis on the role of hydroxyproline in stabilizing collagen structure. // Biochem. Biophys. Acta, 1973,322(1), P. 166-171.

254. Ramachandran G.N, Sasisekharam V. Structure of collagen. // Nature, 1961, 190 (4780), P. 1004-1005.

255. Rapoport S.J. Mechanical properties of the sarcolemma myoplasm in frog muscle as a function of sarcomere length. // J. Gen. Physiol, 1972,59, P. 559-585.

256. Reddi A.H, Symbiosis of biotechnology and biomaterials: applications in tissue engineering of bone and cartilage. // J. Cell. Biochem, 1994, 56 (2), P. 192-251.

257. Reihner R, Menzel E J. Mechanical changes in rat tail tendons induced bydi-basic amin acids as afunction of age. // Biorheology, 1994, 31 (1), P. 37-55.

258. Riley G.P, Harrall R.L, Constant C.R, Chard M.D, cawston T.E, Yazleman B.L. Glycosaminoglycans of human rotator cuff tendons: changes with age and in chronic rotator cuff tendinitis. // Ann. Rheum. Dis, 1994, 53 (6) P. 367-376.

259. River G.L.L, Diz A, Toledo M, Aguera E. Enzyme-histochemical profiles of fiber typec in mature canine appendicular muscles. // Anat. Histol. Embryol, 1994, 2(4), P. 330-336.

260. Robert C.H, Ho P, Shum G. Significance of bound water to local chane conformation in protein crystals. // Proc. Natur. Acad. Sei. USA, 1995, 92 (16), P. 7600-7614.

261. Rucklidge G.J, Milne G, Robins S.P. Collagen type X: a component of the surface of normal human, pig and rat articular cartilage. // Biochem, Biophys. Res. Commun, 1996, 224 (2), P. 297-302.

262. Sage H, Woodbury G.R, Borstein P. Structural studies on human type collagen. // J. Biol. Chem, 1979, 254 (10), P. 9893-9900.

263. Schutte B, Zubell K, Zerbest B, Bock P.R, Bittmann S, Mongold D, Linder J. Untersuchungen von Gewichten und Wasser gehalt sowie von DNAsynthese und Gehalt beindewebider und parenchymatöser organe der Ratt pro-und postratal. // Actuella Gerontol, 1980, 10 (1), P. 37-43.

264. Serafini-Fracassini A, Smith I.W. The structure and biochemistry of cartilage. // Churchill Lwingtone, Edinburgh, 1974, 300 p.

265. Shap J. Aceptic autolysis in rabbit and bovine muscle during storage at 37 °C. // J. Sei. Food. Agric, 1963, 14, P. 468.

266. Sherman P. The water binding capacity of fresh pork. // Food Technol, 1961, 15(2), P. 79-87.

267. Simatos D, Faure M. Water relations of food. L, 1974, P. 193-209. Smith C.W, Kearney J.N. The effects ofirradiation and hydration upon the mechanical properties of tendon. // J. Mater. Sei.: Mater. Med. 1996, 7 (11), P. 645-650.

268. Simmona D.M., Kearney J.N. Glutaraldehyde crosslinking of human dermis: A factorial assessment of the crosslinking protocol. // Clin. Mater, 1993, 14 (1), P. 29-33.

269. Smith C.W., Kearney J.N. The effects of irradiation and hydration upon the mechanical properties of tendon. // J. Mater. Sci.: Mater. Med. 1996, 7 (11), P. 645-650.

270. Snowden John Mck, Swann David A. Effects of glycosaminoglycan and proteoglycan on the "in vitro" assembly and terminal stability of collagen fibrils. //Biopolymers, 1980, 19 (4), P. 767-780.

271. Sanren Y.M.H.F, Mieremet R.H.P, Lafeber F.P.J.G, Huber-Bruning O, Groot Cornelis G, Seherft J.D. Changes in proteoglycans of aging and os-teoarthtibic human articular cartilage: an electron microscopic study with poly-ethyleneimine. // Anat. Rec, 1994, 240 (2), P. 208-216.

272. Steinmeyer J, Torzilli P.A, Burton-Wurster N, Lust G. A new pressure chamber to study the biosynthetic response of articular cartilage to mechanical loading. //Res. Exp. Med, 1993 (3), P. 137-142.

273. Stewart K.J. A quantitative ultrastructural study of collagen fibrills in human skin. // Clin. Anat, 1995, 8 (5), P. 334-338.

274. Suzuki A, Hoshipo K, Sasaki E, Sano N, Nakane M, Ikeushi I, Sarro M. Post-mortem changes of native connectin in rabbit skeletal muscle. // Agric. Biol. Chem, 1988, 52 (6), P. 1439-1444.

275. Tajima S, Sakuraoka K. A case of atrophoderma of Pasini and Pierini analysis of glycosaminoglycan of the lesional skin.//J. Dermatol, 1995,22 (10), P. 767-769.

276. Takahiro W, Naofumi K, Etsushiro D. Protective effects of non ionic surfactants against denaturation of rabbit skeletal veosin by freezing and thawing. // Agr. and Biol. Chem, 1988, 52 (10), P. 2517-2523.

277. Tancous J. Changes in streerhide composition resulting from autolusis. Part I. An aqueous system. // J. ALCA, 1970, 65, P. 176-185.

278. Tanser M.L, Waite J.H. Collagen cross-linking. // Collagen Rel. Res, 1982, 2, P. 177-180.

279. Teizo T. Changes in mechanical properties in osmotically compressed skinned muscle fibers of frog. // Contractile Mech. Muscle. Proc. 2nd Inst. Symp. Cross-Bridge. Mech. Muscle Contract. Seattle, wash., June, 1982, New York: London, 1984, P. 731-733.

280. Thomas P., Kawanata A. Neutral factors underlying in electrical resistance of apparently nonsweating skin. // J. Appl. Physiol, 1962, 17, P. 999.

281. Tomihata T, BurczakK, Shiraki K, Ikada Y. Croslinking and biodégradation of native and denatured collagen. // ACS Symp. Ser, 1994, 540, P. 275-286.

282. Tranzblau C, Kang A.M., Faris B. In vitro formation of intermolecular crosslinks in chick skin collagen. // Kinetics. - Biochim. a. Biophys. Res. Comm., 1970, 46 (2), P. 437-444.

283. Traub W, Piez K.A. The chemistry and structure of collagen. // Adv. Protein Chem, 1971, 25, P. 243-352.

284. Truong X.T. Viscoelastice wave propagation and rhéologie properties of skeletal muscle. // Amer. J. Physiol, 1974, 226 (2), P. 256-263.

285. Uhrik R. Electron microscopy study of muscle cell structure cell structure. // Eurem 88: 9 th Eur. Congr. Electron Microsc, York, 1988, 3, P. 119-124.

286. Van der Res Michel. Structure and molecular assambly of fibril associated collagen. // Eur. J. Histochem, 1992, 36, P. 7-8.

287. Venn M.F. Chemical composition of human femoral head cartilage. // Ann. Rheum. Diss, 1979, 38 (1), P. 57-62.

288. Verdu Jacques Effect of on the mechanical properties of polymeric materials. //J. Macromol. Sci, Pure Appl. Chem, 1994, A 31 (10), P. 1383-1398.

289. Verzar F, Patnaik B.K. Ageing-like changes of collagen fibers during storage in vitro. // Gerontologia, 1970, 16 (2), P.83-95.

290. Vignon E, Hartmann J.D, Vignon G. Cartilage destruction in experimentally induce asteoarthritis. // J. Rheum, 1984, 11 (2), P. 202-217.

291. Viidik A, Nielsen H.M, Skalicky M. Influence of physical exercise on aging rats: II. Life - long exercise delays aging of tail tendon collagen. // Mech. Ageing. Dev. 1996, 88 (3), P. 139-148.

292. Viidik A. Functional properties of collagen tissues. // Int. Rev. Connective Tissue Res, 1973, 6, P. 127-215.

293. Viidik A. Connective tissue - possible implications of the temporal changes for the aging process. // Mech. Aging Develop, 1979, 9, P. 267-285.

294. Vlasblom D.C. Skin elasticity. Rotterdam, Bronder-Offset, 1967, 135 p.

295. Vogel H.G. Influence of mafuration and age on mechanical and biochemical parameters of connective tissue of varions organs in the rat. // Connect. Tissue Res, 1978,6(3), P. 161-166.

296. Vogel H.G. Age dependence of mechanical properties of rat tail tendons (Hysteresis experiments). //Aktuel. Gerontol, 1983, 13 (1), P. 22-27.

297. Wang K. Membrane skeleton of skeletal muscle. // Nature, 1983, 304, P. 485-486.

298. Warren G.R, Spero L, Metzger J.F. Factor controlling the cross-linking of proteins by formaldehyde. // J. Cell. Biol, 1972, 55, P. 274.

299. Weightman B, Freeman M.A, Swamson S.A.V. Fatigue of articular cartilage. //Nature, 1973, 224, P. 303-305.

300. Weightman B. Tensile fatigue of human articular cartilage. // J. Biomech, 1976,9(4), P. 193-200.

301. Wess T.J, Wess L, Miller A. The in vitro binding of acetaldehyde to collagen studied by nentron diffraction. // Alcohol, 1994, 29 (4), P. 403-409.

302. Wolman M, Funcloianu-Dayan D, Perlmutter M. Blue autofluorescence of human Achills tendon collagen in relation to ageing. // Acta histochem. Et cyto-chem, 1985, 18 (4), P. 439-443.

303. Woodhead J.L, Lowey S. An in vitro study of interactions of skeletal muscle-M-proteins and creatine kinase with myosin and its subfragments. // J. Molecular Biol, 1983, 168 (4), P. 831-846.

304. Wurster N.B, Lust G. Fibronectin in the osteoarthrotic canine articular cartilage. // Biochem. Biophys. Res. Commun, 1982, 109 (4), P. 1094-1102.

305. Yamada H.M.D. Strength of Biological Materials, N.-Y, 1973, 297 p.

306. Yoshihide I. Biochemical and physiochemical analysis on post-mortem changes of myofibrillar proteins. // Huorama Gauraky, 1988, 25, P. 127-162.

307. Zachariassen K.E, Olsen A J, Aunoas T. The effect of formaldehyde exposure the transmembrance distribution of free amino acids in muscles of Mytilus edulis. //J. Exp. Biol, 1996 199 (6), P. 1287-1294.

308. Zhu W, Mow V.C, Koob T.J, Eyre D.R. Viscoelastic shear properties of articular cartilage and the effecys of glycosidase treatment. // J. Orthop.Res, 1993, 11 (6), P. 771-781.

309. Zioupos P, Barbenel J.C, Fisher J. // Anisotropic elasticity and strength of glutaraldehyde fixed bovine pericardium for use in pericardial bioprosthetic valves. // J. biomed. Mater. Res, 1994, 28 (1), P. 49-57.