Особенности экспрессии гена аполипопротеина A-l человека после его переноса в организм млекопитающего тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Акифьев, Борис Николаевич

• Акифьев, Борис Николаевич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Акифьев, Борис Николаевич

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Аполипопротеин A-I человека: структурно-функциональная ганизация и свойства.

2.2. Структурно-функциональная организация гена аро A-I человека

2.3. Методы доставки генов в клетки млекопитающих.

2.3.1. Перенос ДНК in vitro (перенос в культуру клеток).

2.3.1.1 Кальций-фосфатная преципитация.

2.3.1.2 Липофекция.

2.3.1.3 Электропорация.

2.3.1.4 Применение молекулярных конъюгатов.

2.3.1.5 Перенос генов с помощью рекомбинантных вирусов.

2.3.2. Перенос ex vivo.

2.3.3. Перенос генов in vivo.

2.3.3.1 Перенос с помощью рекомбинантных вирусов.

2.3.3.2 Использование для доставки генов in vivo липофекции.

3.5. Трансфекция культивированных клеток и анализ экспрессии бактериальных генов-маркеров в трансформированных клетках.

3.6. Измерения активности люциферазы.

3.7. Конкурентное вытеснение адсорбированных на клеточной поверхности меченых комплексов ДНК - роьу(Ь-Ьуз)Оаь избытками немеченого конъюгата.

3.8. Внутривенные инъекции комплексов ДНК - роьу(Ь-Ьуз)Оаь в хвостовую вену крысам.

3.9. Внутривенные инъекции плазмидной ДНК в хвостовую вену мышам

3.10. Выделение ДНК из тканей животного и анализ чужеродных нуклеотидных последовательностей в составе ДНК крыс и мышей, ПЦРанализ.

3.11. выделение РНК и ретро-ПЦР.

3. 12.«Спасение» плазмидных ДНК из ядер клеток печени мышей.

3.13. определение в сыворотке крови мышей и крыс человеческого аро A-I и антител, специфичных к аро A-I человека.

3.14. Статистическая обработка полученных результатов.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Использование роьу(Ь-Ьу8)Оаь для доставки ДНК в клетки гепатоцитарного ряда

4.1.1. Поиск оптимальной величины соотношения конъюгат/ДНК; формирование комплексов для трансфекции клеток и инъецирования.

4.1.2. Трансфекция культивируемых гепатомных клеток комплексами ДНК - галактозилированный поли-Ь-лизин.

4.1.3. Определение оптимальной величины ионной силы в реакционной среде при образовании комплексов ро1у(Ь-1уя)Оа1/ ДНК.

4.1.4. Анализ специфичности связывания комплексов ро1у(Ь-Ьу,ч)СаУДНК асиалогликопротеиновыми рецепторами клеток НерС2.

4.1.5. Доставка гена аролипопротеина А-1 человека в комплексе с галактозилированным поли Ь-лизином в печень крыс.

4.1.6. Вектор экспрессии гена аро А-1 человека сохраняется в ядрах клеток печени в виде эписомы.

4.2. Использование лизин-богатых и аргинин-богатых пептидов для доставки ДНК в клетки млекопитающих.

4.3. Экспрессия гена аро A-I человека в печени после доставки его мышам методом внутривенных гидродинамических инъекций.

4.3.1. Влияние комплексообразованш ДНК с катионными пептидами на эффективность гидродинамического переноса.

4.3.2. Сравнение характера экспрессии гена аро A-I в зависимости от интронно-экзонной структуры.

4.3.3. Оценка эффективности экспрессии гена люциферазы под контролем гепацитарного энхансера аро A-I в переживающих клетках печени мышей.

4.3.4. Анализ присутствия гена аро A-I в ядерной низкомолекулярной ДНК клеток печени мышей.

4.3.5. Оценка гуморального иммунного ответа у мышей на введение плазмиды pAlg.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности экспрессии гена аполипопротеина A-l человека после его переноса в организм млекопитающего»

Актуальность проблемы

Сердечно-сосудистые заболевания, в частности ишемическая болезнь сердца (ИБС), в настоящее время широко распространены в развитых странах Европы и Америки и являются наиболее частой причиной смерти людей пожилого возраста. Атеросклероз - одна из главных причин ИБС - и его развитие, в свою очередь, обусловливается различными факторами риска. Характерным показателем развития атеросклероза является снижение содержания в крови больных липопротеидов высокой плотности (ЛПВП) - «антиатерогенных» липопротеидов, и повышение содержания липопротеидов низкой плотности (ЛПНП) - «атерогенных» липопротеидов. В работах А. Н. Климова с сотрудниками (см. монографию (Климов А. Н. и др., 1995)) впервые было уделено внимание антиатерогенным свойствам ЛПВП и рассмотрена возможность использования ЛПВП и их главной белковой составляющей - аролипопротеина A-I (аро A-I) в лечебных целях.

Антиатерогенные свойства человеческого ароА-1 были убедительным образом продемонстрированы в экспериментах с трансгенными животными, которые приобретали устойчивость к атерогенным нарушениям стенок сосудов после трансплантации в геном человеческого гена аро A-I (Rubin Е. М. et al., 1991а; Rubin Е. М. et al., 1991b; Shemer R. et al., 1990; Swanson M. E. et al., 1992; Thompson L., 1992). Создание экспериментальной базы генотерапии ряда наследственных заболеваний человека и клиническая апробация этих подходов в ведущих мировых медико-биологических центрах позволили вплотную подойти к разработке аналогичных методов и для лечения других тяжёлых заболеваний, включая приобретаемые с возрастом сердечно-сосудистые болезни.

В круг проблем, общих для решения вопросов генотерапии, входит повышение эффективности и длительности работы в организме больного генетических конструкций, содержащих «лечащий» ген, а также устранение токсичности, иммуногенности, и иных побочных действий средств переноса «лечащих» генов пациенту (Culver К. W., 1994). По сути дела, решение этих проблем сводится к оптимизации используемых векторов экспрессии «лечащих» генов и к разработке эффективных средств доставки, лишенных указанных недостатков.

Эффективность генотерапевтического подхода к лечению атеросклероза путем доставки в организм млекопитающего гена аро A-I показана в исследованиях по переносу гена аро A-I человека лабораторным животным с атеросклеротическими повреждениями сосудов, индуцированными холестериновой диетой (Luoma P. V.,

1997; Tsukamoto К. et al., 1997; De Geest В. et al., 2000a; Benoit P. et al., 1999; Tangirala R. К. et al., 1999; Belalcazar L. M. et al., 2003). На основании полученных результатов разрабатываются схемы лечения больных атеросклерозом, находящиеся на стадии предклинических испытаний (Belalcazar L. M. et al., 2003).

Вместе с тем, следует отметить, что хотя широко используемые в настоящее время вирусные способы переноса «лечащих» генов (в рекомбинантных аденовирусах) наиболее эффективны, они не лишены побочных эффектов, главными из которых являются токсичность и иммуногенность рекомбинантных вирусов, ограничивающих их повторное использование для целей лечения. Невирусные средства доставки, несмотря на их низкую эффективность, лишены указанных недостатков и могут использоваться неоднократно, что весьма важно для лечения длительно текущих заболеваний, к которым относится и атеросклероз.

Таким образом, весьма актуальным является разработка таких подходов к генотерапии атеросклероза, при которых однократное воздействие имело бы оптимальный и продолжительный эффект и одновременно не исключало бы возможность повторения генотерапевтической процедуры. Подобный подход должен сочетать использование оптимизированных генетических конструкций и невирусных способов их доставки в организм больного.

Цель работы — сравнить различные невирусные способы переноса гена аролипопротеина A-I человека в клетки млекопитающих in vitro и in vivo и изучить особенности экспрессии гена аро A-I человека в чужеродном окружении в зависимости от его структурно-функциональной организации.

Для достижения поставленной цели следовало решить следующие задачи:

1) исследовать возможности использования галактозилированного поли-L-лизина, а также катионных пептидов для переноса экспрессирующегося гена аро A-I человека в печень млекопитающих (крыс) и оценить эффективность работы этих носителей в сравнении с использовавшимися ранее;

2) применить для доставки плазмидных векторов экспрессии гена человеческого аро A-I в организм млекопитающих (мышей) метод гидродинамических инъекций «голой» ДНК и сравнить эффективность этого способа с доставкой ДНК в виде комплексов с молекулярными конъюгатами и катионными пептидами;

3) сравнить эффективность и длительность экспрессии гена человеческого аро A-I в печени мышей в зависимости от структурно-функциональной организации этого гена (наличия экзонно-интронной структуры и участков регуляции транскрипции).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Перенос плазмидной ДНК в полиэлектролитном комплексе с галактозилированным поли-Ь-лизином — poly(L-lys)Gal в культивируемые клетки гепатомы человека HepG2 происходит рецептор-опосредованным эндоцитозом. Эффективность доставки плазмидных векторов экспрессии в комплексе с poly(L-lys)Gal в культивируемые клетки гепатомы человека HepG2 сравнима с эффективностью доставки плазмидных ДНК методом кальций-фосфатной копреципитации и зависит от молярного соотношения ДНК : poly(L-lys)Gal в комплексе.

2. Плазмидный вектор экспрессии кДНК аро A-I человека, инъецированный в комплексе с poly(L-lys)Gal в хвостовую вену крыс, доставляется в клетки печени и сохраняется в ядрах клеток в виде эписомы по меньшей мере в течение недели. Уровень аро A-I человека в крови крыс может быть повышен путём повторных внутривенных инъекций указанных комплексов.

3. Доставка векторов экспрессии гена аро A-I человека в печень мышей С57В1/6 путём гидродинамических внутривенных инъекций соответствующих плазмидных ДНК обеспечивает высокое содержание человеческого аро A-I в сыворотке крови животных. Уровень аро A-I человека в крови мышей может быть повышен повторными внутривенными инъекциями плазмидной ДНК.

4. Гидродинамическое введение комплексов ДНК с катионным пептидом Tat приводит к резкому падению эффективности переноса по сравнению с введением «голой» ДНК.

5. Человеческий белок аро A-I спустя 2 недели после инъекций гена мышам не стимулировал появления специфичных антител в крови животных.

6. Динамика экспрессии гена аро A-I человека в печени мышей не зависит от типа промотора, а определяется организацией структурной части гена. Сохранение экзонно-интронной структуры гена аро A-I обеспечивает эффективную и более продолжительную (до б месяцев) в сравнении с его кДНК-копией экспрессию гена.

Научно-практическая значимость работы Полученные результаты указывают на возможность использования различных катионных носителей как основы для эффективной доставки ДНК в клетки млекопитающих. Вместе с тем, отрицательные данные, полученные по доставке генов-маркеров и гена аро A-I человека в комплексе с ^модифицированными пептидами в организм путём внутривенных инъекций комплексов, указывают на существование определённых факторов, ограничивающих использование этого способа для практических задач генотерапии атеросклероза. Более перспективным является способ гидродинамических инъекций «голой» ДНК, который может быть адаптирован для целей генотерапии атеросклероза в дальнейшем. Весьма важно в каждом конкретном случае учитывать также структурно-функциональную организацию доставляемого в организм гена. В нашем случае важным для продолжительной и эффективной экспрессии оказалось сохранение экзонно-интронной структуры гена аро A-I человека.

Результаты настоящего исследования могут быть использованы при разработке и реализации проекта, направленного на лечение атеросклероза путем генетической коррекции соотношения антиатерогенных и атерогенных липопротеидов в крови больного за счёт доставки вектора экспрессии гена аро А-1в печень больного.

Материалы диссертации используются в курсах лекций для бакалавров и магистров кафедр эмбриологии и биохимии Санкт-Петербургского государственного университета.

Научная новизна работы

Впервые была показана возможность доставки векторов экспрессии гена аро A-I человека в организм млекопитающего путём внутривенных инъекций комплексов плазмидной ДНК с poly(L-lys)Gal, причем было установлен факт продолжительного сохранения доставленной ДНК в клетках печени в виде эписомы. В результате гидродинамических внутривенных инъекций плазмидных векторов экспрессии гена аро A-I человека мышам С57В1/6 оказалось возможным получить длительную и эффективную экспрессию перенесённого гена в клетках печени, а за счёт повторных инъекций добиться повышения уровня аро A-I человека в крови животных.

Продолжительность и уровень экспрессии гена аро A-I человека в клетках печени мышей (в чужеродном окружении) в значительной мере определяется не видом промотора (вирусоспецифический или собственный), а экзонно-интронной структурой кодирующей части гена, что является абсолютно новым фактом, имеющим приоритетное значение.

Апробация работы

По теме диссертации опубликовано 4 статьи и 17 тезисов докладов и сообщений на институтских, всероссийских и международных конференциях, симпозиумах и съездах. Результаты работы докладывались на международной конференции «Human Genome» (Australia, 1999), ежегодных итоговых конференциях ПП «Геном Человека» ГНТП РФ, съездах биохимического общества России (1997, 2002 гг.), международных конференциях «СПИД, рак и родственные проблемы», на 10-й международной студенческой конференции в Берлине, на конференциях молодых учёных России, Санкт-Петербурга и других конференциях. Структура и объём диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования и их обсуждения, выводов и списка литературы. Диссертация изложена на 105 страницах текста, иллюстративный материал содержит 20 рисунков и 1 таблицу. Список литературы содержит 222 наименования, из них 210 на иностранном языке.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Акифьев, Борис Николаевич

6. выводы

1. Перенос плазмидной ДНК в полиэлектролитном комплексе с галактозилированным поли-Ь-лизином - poly(L-lys)Gal, в культивируемые клетки гепатомы человека HepG2 происходит рецептор-опосредованным эндоцитозом.

2. Эффективность доставки плазмидных векторов экспрессии генов в комплексе с poly(L-lys)Gal в клетки HepG2 зависит от молярного соотношения конъюгата и ДНК в комплексе.

3. Плазмидный вектор экспрессии кДНК ароА-1 человека в комплексе с poly(L-lys)Gal, инъецированный в хвостовую вену крыс, переносится в клетки печени и сохраняется в ядрах этих клеток в виде эписомы по меньшей мере в течение недели.

4. Доставка «голых» плазмидных векторов экспрессии гена аро A-I человека в печень мышей С57В1/6 с помощью гидродинамических инъекций плазмидных ДНК в хвостовую вену мышей приводит к наиболее высокому содержанию человеческого аро A-I в сыворотке крови животных. Уровень аро A-I человека в сыворотке мышей после первноначальпой инъекции также может быть повышен повторными гидродинамическими инъекциями плазмидных векторов экспрессии этого гена.

5. Перенос плазмидных векторов экспрессии гена аро A-I в комплексе с катионным пептидом - копией катионного фрагмента белка Tat вируса иммунодефицита человека (Tat-пептида) путем инъекций комплексов в хвостовую вену мышей С57В1/6, выполненных гидродинамическим методом, ведет к более низким значениям аро A-I человека в сыворотке в сравнении с тем, что достигается при гидродинамических инъекциях аналогичных «голых» плазмид, в то время как инъекция указанных комплексов, выполненная обычным способом, дает отрицательный результат.

6. Продолжительная экспрессия гена аро A-I человека в клетках печени мыши (до 6 месяцев) обусловливается сохранением экзонно-интронной структуры этого гена, но не типом промотора (клеточный или вирусоспецифический), контролирующего его экспрессию.

7. Человеческий белок аро A-I спустя 2 недели после инъекций плазмидного вектора экспрессии гена мышам С57В1/6 не стимулировал появления специфичных к нему антител в крови животных.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использование невирусных средств доставки гена аролипопротеина A-I человека в клетки млекопитающих, таких как компактный молекулярный конъюгат галактозилированный poly(L-lys) и катионные пептиды (Ks и Tat) позволяет прийти к выводу, что если in vitro они имеют сравнимый эффект в доставке генов, то in vivo эффективным оказывается лишь галактозилированный poly(L-lys)Gal, обеспечивающий поглощение комплексов poly(L-lys)Gal-flHK клетками печени рецептор-опосредованным эндоцитозом.

В сравнении с использованным в ранних работах молекулярным конъюгатом poly(L-lys)ASOR, галактозилированный poly(L-lys)Gal обусловливает продолжительное сохранение в ядрах гепатоцитов генетических конструкций, хотя в наших условиях уровень человеческого аролипопротеина A-I был выше в случае применения poly(L-lys)ASOR, чем в случае применения poly(L-lys)Gal.

Дальнейшая оптимизация этого способа доставки может привести к более значимым результатам, что даст возможность использовать его для генетической коррекции атеросклероза.

Более перспективным для этих целей может оказаться способ гидродинамических инъекций «голой» ДНК, представляющей собой плазмидный вектор экспрессии аро A-I, поскольку существуют модификации этого метода, использующие инъекции генов при локальном повышении давления. Однократная инъекция плазмидБ рAlg приводила к появлению аро A-I человека в сыворотке крови мышей в концентрации 5-20 мкг/мл. Мы установили, что повторные инъекции повышают уровень аро A-I в крови вследствие продолжительной работы генетической конструкции в клетках печени. Полученные в нашей работе результаты указывают на важность экзонно-интронной структуры гена аро A-I для эффективной и продолжительной экспрессии этого гена. Нельзя исключить роли в этих процессах также и участков 5'-регуляторной последовательности гена аро A-I, хотя вариант этой 5'-регуляторной последовательности включающий гепатоцитарный энхансер, сцепленный с кДНК гена-маркера, не в состоянии обеспечить продолжительную экспрессию этого гена в печени мышей. Полученные результаты поднимают вопрос о роли пост-транскрипционного созревания в экспрессии генов эукариот и в частности его роли в формировании полноценного продукта экспрессии гена аро A-I.

Результаты доставки векторов экспрессии гена человеческого аролипопротеина A-I лабораторным животным методом гидродинамических внутривенных инъекций дают в руки исследователя новый инструмент для исследования in vivo условий эффективной и продолжительной экспрессии гена в чужеродном окружении, определяемой свойствами самой генетической конструкции. Свободные от каких бы то ни было средств доставки, плазмидные векторы экспрессии работают в клетках без помех, создаваемых в результате реакции клеток на носители этих конструкций.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Акифьев, Борис Николаевич, 2004 год

1. Браун, Э. М. К., М. Р. Д. Скотт. 1989. Ретровирусные векторы, в книге Новое в клонировании ДНК. Методы, под ред. Д. Гловер, Мир, Москва. С. 272-307.

2. Гормап, К. 1988. Высокоэффективный перенос генов в клетки млекопитающих, в книге Клонирование ДНК. Методы под ред. К. Гловер, Мир, Москва С. 409-463.

3. Игнатьева Е. В., Меркулова Е. И., Вишневский О. В., Кель А. Е. 1997. Регуляция транскрипции генов липидного метаболизма: описание в базе данных TRRD. Молекулярная биология 31:684-700.

4. Климов А. Н., Никульчева Н. Г. 1995. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. Питер Пресс, СПб.

5. Климов А. Н., Никульчева Н. Г. 1999. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения. Питер, СПб.

6. Маниатис, Т., Э. Фрич, Дж. Сембрук. 1984. Молекулярное клонирование. Методы генетической инженерии. Мир, Москва.

7. Щелкунов С. Н. 1988. Клониаование генов. Наука, Новосибирск.

8. Abdallah В., Hassan A., Benoist С., Goula D., Behr J. P., and Demeneix B. A. 1996. A powerful nonviral vector for in vivo gene transfer into the adult mammalian brain: polyethylenimine. Hum Gene Ther 7:1947-1954.

9. Andrianaivo F., Lecocq M., Wattiaux-De Coninck S., Wattiaux R., and Jadot M. 2004. Hydrodynamics-based transfection of the liver: entrance into hepatocytes of DNA that causes expression takes place very early after injection. J Gene Med 6:877-883.

10. Berg K., Selbo P. K., Prasmickaite L., and Hogset A. 2004. Photochemical drug and gene delivery. Curr Opin Mol Ther 6:279-287.

11. Blumberg B. and Evans R. M. 1998. Orphan nuclear receptors—new ligands and new possibilities. Genes Dev 12:3149-3155.

12. Boussif O., Lezoualc'h F., Zanta M. A., Mergny M. D., Scherman D., Demeneix B., and Behr J. P. 1995. A versatile vector for gene and oligonucleotide transfer into cells in culture and in vivo: polyethylenimine. Proc Natl Acad Sci U S A 92:7297-7301.

13. Boussif O., Zanta M. A., and Behr J. P. 1996. Optimized galenics improve in vitro gene transfer with cationic molecules up to 1000-fold. Gene Ther 3:10741080.

14. Budker V., Budker T., Zhang G., Subbotin V., Loomis A., and Wolff J. A.2000. Hypothesis: naked plasmid DNA is taken up by cells in vivo by a receptor-mediated process. J Gene Med 2:76-88.

15. Byrnes L., Luo C. C., Li W. H., Yang C. Y., and Chan L. 1987. Chicken apolipoprotein A-I: cDNA sequence, tissue expression and evolution. Biochem Biophys Res Commun 148 :485-492.

16. Cao B. and Huard J. 2004. Gene transfer to skeletal muscle using herpes simplex virus- based vectors. Methods Mol Biol 246:301-308.

17. Chan L. 1989. The apolipoprotein multigene family: structure, expression, evolution, and molecular genetics. Klin Wochenschr 67:225-237.

18. Chen H. Y., Zhu H. Z., Lu B., Xu X., Yao J. H., Shen Q., and Xue J. L. 2004. Enhancement of naked FIX minigene expression by chloroquine in mice. Acta Pharmacol Sin 25:570-575.

19. Coffin R. S., MacLean A. R., Latchman D. S., and Brown S. M. 1996. Gene delivery to the central and peripheral nervous systems of mice using HSV1 ICP34.5 deletion mutant vectors. Gene Ther 3:886-891.

20. Coutelle C. and Williamson R. 1996. Liposomes and viruses for gene therapy of cystic fibrosis. J Aerosol Med 9:79-88.

21. Cristiano R. J. 2002. Protein/DNA polyplexes for gene therapy. Surg Oncol Clin NAm 11:697-716, viii.

22. Cristiano R. J. and Roth J. A. 1995. Molecular conjugates: a targeted gene delivery vector for molecular medicine. J Mol Med 73:479-486.

23. Culver K. W. 1994. Gene Therapy, Handbook for Phisicians. M.-A. Liebert Publ.

24. Culver K. W., Anderson W. F., and Blaese R. M. 1991a. Lymphocyte gene therapy. Hum Gene Ther 2:107-109.

25. Culver K. W., Osborne W. R., Miller A. D., Fleisher T. A., Berger M., Anderson W. F., and Blaese R. M. 1991b. Correction of ADA deficiency in human T lymphocytes using retroviral-mediated gene transfer. Transplant Proc 23:170-171.

26. Curiel D. T., Agarwal S., Wagner E., and Cotten M. 1991. Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-mediated gene delivery. Proc Natl Acad Sci USA 88:8850-8854.

27. Davies J. C. 2002. New therapeutic approaches for cystic fibrosis lung disease. J R Soc Med 95:58-67.

28. De Geest B., Van Linthout S., and Collen D. 2001. Sustained expression of human apo A-I following adenoviral gene transfer in mice. Gene Ther. 8:121-127.

29. Demeneix B., Behr J., Boussif O., Zanta M. A., Abdallah B., and Remy J. 1998. Gene transfer with lipospermines and polyethylenimines. Adv Drug Deliv Rev 30:1-3.

30. Denefle P. P., Hughes S., and Desurmont C. 1995. Towards gene therapy targeting HDL, p. 501-505. In F.P. Woodford, J. Davignon, and A. Sniderman (ed.), Atherosclerosis X. Elseiver Science,

31. Dini L., Falasca L., Ruzzittu M. T., Mossa G., FinazziAgro A., and DiGiulio A. 1998. Interaction between isolated and purified liver cells and small unilamellar liposomes. Liver 18:229-238.

32. Duzgunes N., De I. C., Simoes S., Zhdanov R. I., Konopka K., and Pedroso de Lima M. C. 2003. Cationic liposomes for gene delivery: novel cationic lipids and enhancement by proteins and peptides. Curr Med Chem 10:1213-1220.

33. Dworetzky S. I. and Feldherr C. M. 1988. Translocation of RNA-coated gold particles through the nuclear pores of oocytes. J Cell Biol 106:575-584.

34. Erbacher P., Bousser M. T., Raimond J., Monsigny M., Midoux P., and Roche A. C. 1996b. Gene transfer by DNA/glycosylated polylysine complexes into human blood monocyte-derived macrophages. Hum Gene Ther 7:721-729.

35. Erbacher P., Roche A. C., Monsigny M., and Midoux P. 1996a. Putative role of chloroquine in gene transfer into a human hepatoma cell line by DNA/lactosylated polylysine complexes. Exp Cell Res 225:186-194.

36. Farhood H., Gao X., Son K., Yang Y. Y., Lazo J. S., Huang L., Barsoum J., Bottega R., and Epand R. M. 1994. Cationic liposomes for direct gene transfer in therapy of cancer and other diseases. Ann N Y Acad Sci 716:23-34.

37. Feldherr C. M. and Akin D. 1993. Regulation of nuclear transport in proliferating and quiescent cells. Exp Cell Res 205:179-186.

38. Feigner P. L., Gadek T. R., Holm M., Roman R., Chan H. W., Wenz M., Northrop J. P., Ringold G. M., and Danielsen M. 1987. Lipofection: a highly efficient, lipid-mediated DNA-transfection procedure. Proc Natl Acad Sci U S A 84:7413-7417.

39. Fisher K. J., Choi H., Burda J., Chen S. J., and Wilson J. M. 1996. Recombinant adenovirus deleted of all viral genes for gene therapy of cystic fibrosis. Virology 217:11-22.

40. Flotte T. R. 2004. Gene therapy progress and prospects: recombinant adeno-associated virus (rAAV) vectors. Gene Ther 11:805-810.

41. Friedmann T. 1989. Progress toward human gene therapy. Science 244:12751281.

42. Friend D. S., Papahadjopoulos D., and Debs R. J. 1996. Endocytosis and intracellular processing accompanying transfection mediated by cationic liposomes. Biochim Biophys Acta 1278:41-50.

43. Furth P. A., Shamay A., and Hennighausen L. 1995. Gene transfer into mammalian cells by jet injection. Hybridoma 14:149-152.

44. Gewirtz A. M., Stein C. A., and Glazer P. M. 1996. Facilitating oligonucleotide delivery: helping antisense deliver on its promise. Proc Natl Acad Sci U S A 93:3161-3163.

45. Glasspool-Malone J., Steenland P. R., McDonald R. J., Sanchez R. A., Watts T. L., Zabner J., and Malone R. W. 2002. DNA transfection of macaque and murine respiratory tissue is greatly enhanced by use of a nuclease inhibitor. J Gene Med 4:323-322.

46. Goins W. F., Wolfe D., Krisky D. M., Bai Q., Burton E. A., Fink D. J., and Glorioso J. C. 2004. Delivery using herpes simplex virus: an overview. Methods Mol Biol 246:257-299.

47. Goncalves C., Pichon C., Guerin B., and Midoux P. 2002. Intracellular processing and stability of DNA complexed with histidylated polylysine conjugates. J Gene Med 4:271-281.

48. Goncalves M. A., van der Velde I., Knaan-Shanzer S., Valerio D., and de Vries V. A. 2004. Stable transduction of large DNA by high-capacity adeno- associated virus/adenovirus hybrid vectors. Virology 321:287-296.

49. Goss J. R., Natsume A., Wolfe D., Mata M., Glorioso J. C., and Fink D. J. 2004. Delivery of herpes simplex virus-based vectors to the nervous system. Methods Mol Biol 246:309-322.

50. Gottschalk S., Sparrow J. T., Hauer J., Mims M. P., Leland F. E., Woo S. L., and Smith L. C. 1996. A novel DNA-peptide complex for efficient gene transfer and expression in mammalian cells. Gene Ther 3:48-57.

51. Graham F. L., Smiley J., Russell W. C., and Nairn R. 1977. Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5. J Gen Virol 36:59-74.

52. Gregorevic P., Blankinship M. J., Allen J. M., Crawford R. W., Meuse L., Miller D. G., Russell D. W., and Chamberlain J. S. 2004. Systemic delivery of genes to striated muscles using adeno- associated viral vectors. Nat Med 10:828834.

53. Griesenbach U., Ferrari S., Geddes D. M., and Alton E. W. 2002. Gene therapy progress and prospects: cystic fibrosis. Gene Ther 9:1344-1350.

54. Guo Z. S. and Bartlett D. L. 2004. Vaccinia as a vector for gene delivery. Expert Opin Biol Ther 4:901-917.

55. Haddad I. A., Ordovas J. M., Fitzpatrick T., and Karathanasis S. K. 1986. Linkage, evolution, and expression of the rat apolipoprotein A-I, C-III, and A-IV genes. J Biol Chem 261:13268-13277.

56. Harnish D. C., Malik S., Kilbourne E., Costa R., and Karathanasis S. K. 1996. Control of apolipoprotein AI gene expression through synergistic interactions between hepatocyte nuclear factors 3 and 4. J Biol Chem 271:13621-13628.

57. Helium M., Hogset A., Engesaeter B. O., Prasmickaite L., Stokke T., Wheeler C., and Berg K. 2003. Photochemically enhanced gene delivery with cationic lipid formulations. Photochem Photobiol Sci 2:407-411.

58. Herbomel P., Bourachot B., and Yaniv M. 1984. Two distinct enhancers with different cell specificities coexist in the regulatory region of polyoma. Cell 39:653662.

59. Hertz R., Magenheim J., Berman I., and BarTana J. 1998. Fatty acyl-CoA thioesters are ligands of hepatic nuclear factor- 4alpha. Nature 392:512-516.

60. Herweijcr H., Zhang G., Subbotin V. M., Budker V., Williams P., and Wolff J.

61. A. 2001. Time course of gene expression after plasmid DNA gene transfer to the liver. J Gene Med 3:280-291.

62. Higuchi K., Law S. W., Hoeg J. M., Schumacher U. K., Meglin N., and Brewer H. B. 1988. Tissue-specific expression of apolipoprotein A-I (ApoA-I) is regulated by the 5'-flanking region of the human ApoA-I gene. J Biol Chem 263:1853018536.

63. Hirko A., Tang F., and Hughes J. A. 2003. Cationic lipid vectors for plasmid DNA delivery. Curr Med Chem 10:1185-1193.

64. Hogset A., Ovstebo E. B., Prasmickaite L., Berg K., Fodstad O., and Maelandsmo G. M. 2002. Light-induced adenovirus gene transfer, an efficient and specific gene delivery technology for cancer gene therapy. Cancer Gene Ther 9:365-371.

65. Hogset A., Prasmickaite L., Selbo P. K., Helium M., Engesaeter B. O., Bonsted A., and Berg K. 2004. Photochemical internalisation in drug and gene delivery. Adv Drug Deliv Rev 56:95-115.

66. Hogset A., Prasmickaite L., Tjelle T. E., and Berg K. 2000. Photochemical transfection: a new technology for light-induced, site-directed gene delivery. Hum Gene Ther 11:869-880.

67. Holmen S. L., Vanbrocklin M. W., Eversole R. R., Stapleton S. R., and Ginsberg L. C. 1995. Efficient lipid-mediated transfection of DNA into primary rat hepatocytes. In Vitro Cell Dev Biol Anim 31:347-351.

68. Hottiger M. O., Dam T. N., Nickoloff B. J., Johnson T. M., and Nabel G. J. 1999. Liposome-mediated gene transfer into human basal cell carcinoma. Gene Ther 6:1929-1935.

69. Huong T. M., Harashima H., and Kiwada H. 1998. Complement dependent and independent liposome uptake by peritoneal macrophages: cholesterol content dependency. Biol Pharm Bull 21:969-973.

70. Jeschke M. G. and Klein D. 2004. Liposomal gene transfer of multiple genes is more effective than gene transfer of a single gene. Gene Ther 11:847-855.

71. Karathanasis S. K. 1985. Apolipoprotein multigene family: tandem organization of human apolipoprotein AI, CIII, and AIV genes. Proc Natl Acad Sci U S A 82:63746378.

72. Kichler A., Leborgne C., Coeytaux E., and Danos O. 2001. Polyethylenimine-mediated gene delivery: a mechanistic study. J Gene Med 3:135-144.

73. Koch S., Pohl P., Cobet U., and Rainov N. G. 2000. Ultrasound enhancement of liposome-mediated cell transfection is caused by cavitation effects. Ultrasound Med Biol 26:897-903.

74. Kollen W., Erbacher P., Midoux P., Roche A. C., Monsigny M., Glick M. C., and Scanlin T. F. 1997. Glycosylated polylysines. Nonviral vectors for gene transfer into cystic fibrosis airway epithelial cells. Chest 111:95S-96S-95S-96S.

75. Kozarsky K., Grossman M., and Wilson J. M. 1993. Adenovirus-mediated correction of the genetic defect in hepatocytes from patients with familial hypercholesterolemia. Somat Cell Mol Genet 19:449-458.

76. Kozarsky K. F., Jooss K., Donahee M., Strauss J. F., and Wilson J. M. 1996. Effective treatment of familial hypercholesterolemia in the mouse model using adenovirus-mediated transfer of the VLDL receptor gene. Nat Genet 13:54-62.

77. Kwakye-Berko F. and Meshnick S. R. 1989. Binding of chloroquine to DNA. Mol Biochem Parasitol 35:51-55.

78. Kwong Y. L., Chen S. H., Kosai K., Finegold M., and Woo S. L. 1997. Combination therapy with suicide and cytokine genes for hepatic metastases of lung cancer. Chest 112:1332-1337.

79. Kwong Y. L., Chen S. H., Kosai K., Finegold M. J., and Woo S. L. 1996. Adenoviral-mediated suicide gene therapy for hepatic metastases of breast cancer. Cancer Gene Ther 3:339-344.

80. Ladias J. A. and Karathanasis S. K. 1991. Regulation of the apolipoprotein AI gene by ARP-1, a novel member of the steroid receptor superfamily. Science 251:561-565.

81. Lecocq M., Andrianaivo F., Warnier M. T., Wattiaux-De Coninck S., Wattiaux R., and Jadot M. 2003. Uptake by mouse liver and intracellular fate of plasmid DNA after a rapid tail vein injection of a small or a large volume. J Gene Med 5:142-156.

82. Lerondel S., Vecellio N. L., Faure L., Sizaret P. Y., Sene C., Pavirani A., Diot

83. P., and Le P. A. 2001. Gene therapy for cystic fibrosis with aerosolized adenovirus-CFTR: characterization of the aerosol and scintigraphic determination of lung deposition in baboons. J Aerosol Med 14:95-105.

84. Leventis R. and Silvius J. R. 1990. Interactions of mammalian cells with lipid dispersions containing novel metabolizable cationic amphiphiles. Biochim Biophys Acta 1023:124-132.

85. Liu F., Song Y., and Liu D. 1999. Hydrodynamics-based transfection in animals by systemic administration of plasmid DNA. Gene Ther 6:1258-1266.

86. Lukacs G. L., Haggie P., Seksek O., Lechardeur D., Freedman N., and Verkman A. S. 2000. Size-dependent DNA mobility in cytoplasm and nucleus. J Biol Chem 275:1625-1629.

87. Luoma P. V. 1997. Gene activation, apolipoprotein A-I/high density lipoprotein, atherosclerosis prevention and longevity. Pharmacol.Toxicol. 81:57-64.

88. Matsui H., Johnson L. G., Randell S. H., and Boucher R. C. 1997. Loss of binding and entry of liposome-DNA complexes decreases transfection efficiency in differentiated airway epithelial cells. J Biol Chem 272:1117-1126.

89. McCreery T. P., Sweitzer R. H., Ungcr E. C., and Sullivan S. 2004. DNA delivery to cells in vivo by ultrasound. Methods Mol Biol 245:293-298.

90. Miao C. H., Thompson A. R., Loeb K., and Ye X. 2001. Long-term and therapeutic-level hepatic gene expression of human factor IX after naked plasmid transfer in vivo. Mol Ther 3:947-957.

91. Miller A. D. 1990. Retrovirus packaging cells. Hum Gene Ther 1:5-14.

92. Miller A. D. 2003. The problem with cationic liposome/micelle-based non-viral vector systems for gene therapy. Curr Med Chem 10:1195-1211.

93. Missol E., Sochanik A., and Szala S. 1995. Introduction of murine 11-4 gene into B16(F10) melanoma tumors by direct gene transfer with DNA-liposome complexes. Cancer Lett 97:189-193.

94. Molas M., GomezValades A. G., VidalAIabro A., MiguelTuru M., Bermudez J., Bartrons R., and Perales J. C. 2003. Receptor-mediated gene transfer vectors: progress towards genetic pharmaceuticals. Curr Gene Ther 3:468485.

95. Nakanishi M. 2003. New strategy in gene transfection by cationic transfection lipids with a cationic cholesterol. Curr Med Chem 10:1289-1296.

96. Nanda D., Vogels R., Havenga ML, Avezaat C. J., Bout A., and Smitt P. S. 2001. Treatment of malignant gliomas with a replicating adenoviral vector expressing herpes simplex virus-thymidine kinase. Cancer Res 61:8743-8750.

97. Niidome T. and Huang L. 2002. Gene therapy progress and prospects: nonviral vectors. Gene Ther 9:1647-1652.

98. Niranjan A., Wolfe D., Fellows W., Goins W. F., Glorioso J. C., Kondziolka D., and Lunsford L. D. 2004. Gene transfer to glial tumors using herpes simplex virus. Methods Mol Biol 246:323-337.

99. Nott A., Meislin S. H., and Moore M. J. 2003. A quantitative analysis of intron effects on mammalian gene expression. RNA 9:607-617.

100. Oberle V., de J. G., Drayer J. I., and Hoekstra D. 2004. Efficient transfer of chromosome-based DNA constructs into mammalian cells. Biochim Biophys Acta 1676:223-230.

101. Pedroso de Lima M. C., Neves S., Filipe A., Duzgunes N., and Simoes S. 2003. Cationic liposomes for gene delivery: from biophysics to biological applications. CurrMed Chem 10:1221-1231.

102. Perales J. C., Ferkol T., Beegen H., Ratnoff O. D., and Hanson R. W. 1994. Gene transfer in vivo: sustained expression and regulation of genes introduced into the liver by receptor-targeted uptake. Proc Natl Acad Sci U S A 91:4086-4090.

103. Pichon C., Guerin B., Refregiers M., Goncalves C., Vigny P., and Midoux P. 2002. Zinc improves gene transfer mediated by DNA/cationic polymer complexes. J Gene Med 4:548-559.

104. Pichon C., LeCam E., Guerin B., Coulaud D., Delain E., and Midoux P. 2002. PolyLys-(AEDTP).: a cationic polymer that allows dissociation of pDNA/cationic polymer complexes in a reductive medium and enhances polyfection. Bioconjug Chem 13:76-82.

105. Plump A. S., Scott C. J., and Breslow J. L. 1994. Human apolipoprotein A-I gene expression increases high density lipoprotein and suppresses atherosclerosis in the apolipoprotein E-deficient mouse. Proc Natl Acad Sci USA 91:9607-9611.

106. Poncet P., Panczak A., Goupy C., Gustafsson K., Blanpied C., Chavanel G., Hirsch R., and Hirsch F. 1996. Antifection: an antibody-mediated method to introduce genes into lymphoid cells in vitro and in vivo. Gene Ther 3:731-738.

107. Prasmickaite L., Hogset A., Selbo P. K., Engesaeter B. O., Helium M., and Berg K. 2002. Photochemical disruption of endocytic vesicles before delivery of drugs: a new strategy for cancer therapy. Br J Cancer 86:652-657.

108. Prasmickaite L., Hogset A., Tjelle T. E., Olsen V. M., and Berg K. 2000. Role of endosomes in gene transfection mediated by photochemical internalisation (PCI). J Gene Med 2:477-488.

109. Qiao J., Doubrovin M., Sauter B. V., Huang Y., Guo Z. S., Balatoni J., Akhurst T., Blasberg R. G., Tjuvajev J. G., Chen S. H., and Woo S. L. 2002. Tumor-specific transcriptional targeting of suicide gene therapy. Gene Ther 9:168-175.

110. Rittner K., Benavente A., Bompard Sorlet A., Heitz F., Divita G., Brasseur R., and Jacobs E. 2002. New basic membrane-destabilizing peptides for plasmid-based gene delivery in vitro and in vivo. Mol Ther 5:104-114.

111. Romero E. L., Morilla M. J., Regts J., Koning G. A., and Scherphof G. L. 1999. On the mechanism of hepatic transendothelial passage of large liposomes. FEBS Lett 448:193-196.

112. Rose J. K., Buonocore L., and Whitt M. A. 1991. A new cationic liposome reagent mediating nearly quantitative transfection of animal cells. Biotechniques 10:520-525.

113. Rossmanith W., Chabicovsky M., Herkner K., and Schulte-Hermann R. 2002. Cellular gene dose and kinetics of gene expression in mouse livers transfected by high-volume tail-vein injection of naked DNA. DNA Cell Biol 21:847-853.

114. Rottman J. N., Widom R. L., NadalGinard B., Mahdavi V., and Karathanasis S. K. 1991. A retinoic acid-responsive element in the apolipoprotein AI gene distinguishes between two different retinoic acid response pathways. Mol Cell Biol 11:3814-3820.

115. Rubin E. M., Krauss R. M., Spangler E. A., Verstuyft J. G., and Clift S. M. 1991b. Inhibition of early atherogenesis in transgenic mice by human apolipoprotein AI. Nature 353:265-267.

116. Schaffcr D. V. and Lauffenburger D. A. 1998. Optimization of cell surface binding enhances efficiency and specificity of molecular conjugate gene delivery. J Biol Chem 273:28004-28009.

117. Selbo P. K., Hogset A., Prasmickaite L., and Berg K. 2002. Photochemical internalisation: a novel drug delivery system. Tumour Biol 23:103-112.

118. Shemer R., Walsh A., Eisenberg S., Breslow J. L., and Razin A. 1990. Tissue-specific methylation patterns and expression of the human apolipoprotein AI gene. J.Biol.Chem. 265:1010-1015.

119. Shi W. K., Hopkins B., Thompson S., Heath J. K., Luke B. M., and Graham C. F. 1985. Synthesis of apolipoproteins, alphafoetoprotein, albumin, and transferrin by the human foetal yolk sack and other foetal organs. J Embryol Exp Morphol 85:191-206.

120. Shichiri M., Tanaka A., and Hirata Y. 2003. Intravenous gene therapy for familial hypercholesterolemia using ligand-facilitated transfer of a liposome:LDL receptor gene complex. Gene Ther 10:827-831.

121. Sobolev A. S., Rosenkranz A. A., Smirnova O. A., Nikitin V. A., Neugodova G. L., Naroditsky B. S., Shilov I. N., Shatski I. N., and Ernst L. K. 1998. Receptor-mediated transfection of murine and ovine mammary glands in vivo. J Biol Chem 273:7928-7933.

122. Somiari S., GIasspoolMalone J., Drabick J. J., Gilbert R. A., Heller R., Jaroszeski M. J., and Malone R. W. 2000. Theory and in vivo application of electroporative gene delivery. Mol Ther 2:178-187.

123. Stecenko A., King G., Torii K., Gao X., Persmark M., Shih K., Brigham K., and Raja-Walia R. 2000. Enhancement of liposome-mediated gene transfer to human airway epithelial cells by replication-deficient adenovirus. Exp Lung Res 26:179-201.

124. Sugaya S., Fujita K., Kikuchi A., Ueda H., Takakuwa K., Kodama S., and Tanaka K. 1996. Inhibition of tumor growth by direct intratumoral gene transfer of herpes simplex virus thymidine kinase gene with DNA-liposome complexes. Hum Gene Ther 7:223-230.

125. Szala S., Missol E., Sochanik A., and Strozyk M. 1996. The use of cationic liposomes DC-CHOL/DOPE and DDAB/DOPE for direct transfer of Escherichia coli cytosine deaminase gene into growing melanoma tumors. Gene Ther 3:10261031.

126. Tangirala R. K., Tsukamoto K., Chun S. H., Usher D., Pure E., and Rader D. J.1999. Regression of atherosclerosis induced by liver-directed gene transfer of apolipoprotein A-I in mice. Circulation 100:1816-1822.

127. Temin H. M. 1990. Safety considerations in somatic gene therapy of human disease with retrovirus vectors. Hum Gene Ther 1:111-123.

128. Thompson L. 1992. At age 2, gene therapy enters a growth phase. Science 258:744-746.

129. Tietge U. J., Cichon G., Buttner C., Genschel J., Heeren J., Gielow P., Grewe N., Dogar M., Beisiegel U., Manns M. P., Lochs H., Burchert W., and Schmidt

130. H. H. 2004. A sensitive noninvasive method for monitoring successful liver-directed gene transfer of the low-density lipoprotein receptor in Watanabe hyperlipidemic rabbits in vivo. Gene Ther 11:574-580.

131. Trivedi R. A. and Dickson G. 1995. Liposome-mediated gene transfer into normal and dystrophin- deficient mouse myoblasts. J Neurochem 64:2230-2238.

132. Tsukamoto K., Hiester K. G., Smith P., Usher D. C., Glick J. M., and Rader D. J. 1997. Comparison of human apoA-I expression in mouse models of atherosclerosis after gene transfer using a second generation adenovirus. J.Lipid Res. 38:1869-1876.

133. Tzameli I. and Zannis V. I. 1996. Binding specificity and modulation of the ApoA-I promoter activity by homo- and heterodimers of nuclear receptors. J Biol Chem 271:8402-8415.

134. Van Linthout S., CoIIen D., and De Geest B. 2002. Effect of promoters and enhancers on expression, transgene DNA persistence, and hepatotoxicity after adenoviral gene transfer of human apolipoprotein A-I. Hum.Gene.Ther. 13:829840.

135. Vandenbrouck Y., Janvier B., Loriette C., Bereziat G., and MangeneyAndreani M. 1995. Thyroid hormone modulates apolipoprotein-AI gene expression at the post-transcriptional level in Hep G2 cells. Eur J Biochem 231:126-132.

136. Vassaux G. and Martin-Duque P. 2004. Use of suicide genes for cancer gene therapy: study of the different approaches. Expert Opin Biol Ther 4:519-530.

137. Wagner E., Zenke M., Cotten M., Beug H., and Birnstiel M. L. 1990. Transferrin-polycation conjugates as carriers for DNA uptake into cells. Proc Natl Acad Sci U S A 87 :3410-3414.

138. Walters R. and Welsh M. 1999. Mechanism by which calcium phosphate coprecipitation enhances adenovirus-mediated gene transfer. Gene Ther 6:18451850.

139. Walther W. and Stein U. 2000. Viral vectors for gene transfer: a review of their use in the treatment of human diseases. Drugs 60:249-271.

140. Warden C. H., Hedrick C. C., Qiao J. H., Castellani L. W., and Lusis A. J. 1993. Atherosclerosis in transgenic mice overexpressing apolipoprotein A-II. Science 261:469-472.

141. Wasan E. K., Reimer D. L., and Bally M. B. 1996. Plasmid DNA is protected against ultrasonic cavitation-induced damage when complexed to cationic liposomes. J Pharm Sci 85:427-433.

142. Weir J. P., Dacquel E. J., and Aronovitz J. 1996. Herpesvirus vector-mediated gene delivery to human monocytes. Hum Gene Ther 7:1331-1338.

143. Widom R. L., Ladias J. A., Kouidou S., and Karathanasis S. K. 1991. Synergistic interactions between transcription factors control expression of the apolipoprotein AI gene in liver cells. Mol Cell Biol 11:677-687.

144. Wildner O. 2003. Comparison of replication-selective, oncolytic viruses for the treatment of human cancers. Curr Opin Mol Ther 5:351-361.

145. Williamson R., Lee D., Hagaman J., and Maeda N. 1992. Marked reduction of high density lipoprotein cholesterol in mice genetically modified to lack apolipoprotein A-I. Proc Natl Acad Sci U S A 89:7134-7138.

146. Wiseman J. W., Goddard C. A., McLelland D., and Colledge W. H. 2003. A comparison of linear and branched polyethylenimine (PEI) with DCChol/DOPE liposomes for gene delivery to epithelial cells in vitro and in vivo. Gene Ther 10:1654-1662.

147. Wolfe D., Wechuck J. B., Krisky D. M., Goff J. P., Goins W. F., Ozuer A., Epperly M. E., Greenberger J. S., Fink D. J., and Glorioso J. C. 2004. Delivery of herpes simplex virus-based vectors to stem cells. Methods Mol Biol 246:339352.

148. Wrobcl I. and Collins D. 1995. Fusion of cationic liposomes with mammalian cells occurs after endocytosis. Biochim Biophys Acta 1235:296-304.

149. Wu C. H., Wilson J. M., and Wu G. Y. 1989. Targeting genes: delivery and persistent expression of a foreign gene driven by mammalian regulatory elements in vivo. J Biol Chem 264:16985-16987.

150. Wu G. Y. and Wu C. H. 1987. Receptor-mediated in vitro gene transformation by a soluble DNA carrier system. J Biol Chem 262:4429-4432.

151. Yamamoto S., Suzuki S., Hoshino A., Akimoto M., and Shimada T. 1997. Herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir-mediated killing of tumor cell induces tumor-specific cytotoxic T cells in mice. Cancer Gene Ther 4:91-96.

152. Zabner J., Couture L. A., Gregory R. J., Graham S. M., Smith A. E., and Welsh M. J. 1993. Adenovirus-mediated gene transfer transiently corrects the chloride transport defect in nasal epithelia of patients with cystic fibrosis. Cell 75:207-216.

153. Zabner J., Fasbender A. J., Moninger T., Poellinger K. A., and Welsh M. J.1995. Cellular and molecular barriers to gene transfer by a cationic lipid. J Biol Chem 270:18997-19007.

154. Zanta M. A., Boussif O., Adib A., and Behr J. P. 1997. In vitro gene delivery to hepatocytes with galactosylated polyethylenimine. Bioconjug Chem 8:839-844.

155. Zenke M., Steinlein P., Wagner E., Cotten M., Beug H., and Birnstiel M. L.1990. Receptor-mediated endocytosis of transferrin-polycation conjugates: an efficient way to introduce DNA into hematopoietic cells. Proc Natl Acad Sci USA 87:3655-3659.

156. Zhang G., Budker V., Williams P., Subbotin V., and Wolff J. A. 2001. Efficient expression of naked dna delivered intraarterially to limb muscles of nonhuman primates. Hum Gene Ther 12:427-438.

157. Zhang G., Budker V., and Wolff J. A. 1999. High levels of foreign gene expression in hepatocytes after tail vein injections of naked plasmid DNA. Hum Gene Ther 10:1735-1737.

158. Zhang G., Gao X., Song Y. K., Yollmer R., Stolz D. B., Gasiorowski J. Z., Dean D. A., and Liu D. 2004. Hydroporation as the mechanism of hydrodynamic delivery. Gene Ther 11:675-682.

159. Zhang S. H., Reddick R. L., Piedrahita J. A., and Maeda N. 1992. Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E. Science 258:468-471.

160. Zuhorn I. S., Kalicharan R., and Hoekstra D. 2002. Lipoplex-mediated transfection of mammalian cells occurs through the cholesterol-dependent clathrin-mediated pathway of endocytosis. J Biol Chem 277:18021-18028.