Оптимизация методов оценки фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови с помощью лазерной проточной цитометрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Олиферук, Наталья Сергеевна

• Олиферук, Наталья Сергеевна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Олиферук, Наталья Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Нейтрофилы.

Рецепторный аппарат нейтрофилов.

FcR рецепторы.

CR рецепторы.

Взаимодействие FcR и CR в процессе фагоцитоза.

Этапы фагоцитоза. Киллинг микроорганизмов фагоцитами.

Существующие методы оценки этапов фагоцитоза.

Методы оценки хемотаксиса и адгезии фагоцитов.

Методы оценки поглотительной активности фагоцитов.

Методы оценки дегрануляции лейкоцитов периферической крови.

Методы оценки бактерицидного потенцила фагоцитов.

Косвенные методы оценки микробицидного потенциала фагоцитов.

Методы оценки переваривающей способности фагоцитариых клеток.

Оценка некоторых функциональных характеристик фагоцитов с помощью проточной цитометрии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Характеристика обследованных групп населения.

Реактивы и оборудование.

Реактивы.

Оборудование.

Выделение лейкоцитов на желатине.

Методика мечеиия микроорганизмов ФИТЦ для оценки поглотительной активности и ФЧ фагоцитов.

Методика определения поглотительной активности лейкоцитов периферической крови с помощью ПЛЦ.

Микроскопический метод оценки поглотительной активности и ФЧ лейкоцитов периферической крови.

Определение фагоцитарного числа лейкоцитов периферической крови по отношению к St. aureus с помощью проточной цитометрии.

Методика мечеиия микроорганизмов ФИТЦ для оценки бактерицидной активности лейкоцитов.

Методика оценки бактерицидной функции фагоцитов периферической крови человека внутриклеточный киллинг).

Методика оцеки фенотипа нейтрофилов с помощью ПЛЦ.

Анализ хемилюминесценции лейкоцитов.

Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Оценка фенотипа нейтрофилов с помощью ПЛЦ.

Оценка фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови с помощью проточнолазерной цитофлюориметрии.

Корреляция между цитометричеекпм и микроскопическим методами оценки фагоцитарной активности фагоцитов.

Определение фагоцитарной активности лейкоцитов по отношению к St. aureus у пациентов с различными патологиями.

Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови у пациентов с ХГБ по отношению к St. aureus.

Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови у пациентов с хроническим рецидивирующим фурункулезом и хроническим гематогенным остеомиелитом в стадии обострения по отношению к St. aureus.

Определение фагоцитарного числа лейкоцитов периферической крови по отношению к St. aureus с помощью проточной цитометрии.

Зависимость Geo Mean фагоцитировавших клеток от количества поглощенных бактерий.

Корреляционный анализ метода проточной лазерной цитометрии с бактериологическим методом оценки фагоцитарного числа.

Дифференциальный анализ поглощения и адгезии бактерий к лейкоцитам периферической крови методом гашения внеклеточной люминесценции.

Применение цитометрического метода оценки фагоцитарного числа лейкоцитов при различных патологиях.

Фагоцитарное число у пациентов с ХГБ.

Фагоцитарное число у пациентов с хроническим рецидивирующим фурункулёзом (ХРФ).

Фагоцитарное число у пациентов с хроническим гематогенным остеомиелитом ст. обострения.

Оценка бактерицидной функции фагоцитов периферической крови человека (внутриклеточного киллинга бактерий) с помощью проточнолазерной цитометрии.

Показатели бактерицидной активности (внутриклеточный киллинг) лейкоцитов периферической крови при различных патологиях.

Показатели киллинга St. aureus лейкоцитами периферической крови у пациентов с ХГБ.

Бактерицидная активность фагоцитов периферической крови пациентов с ХРФ.

Бактерицидная активность фагоцитов периферической крови пациентов с хроническим гематогенным остеомиелитом в стадии обострения.

Определение индекса переваривающей способности лейкоцитов периферической крови по отношению к St. aureus с помощью проточной цитометрии.

Применение метода оценки переваривающей способности фагоцитарных клеток (ИПС) у пациентов с различной патологией.

ИПС у пациентов с ХГБ.

Индекс переваривающей способности у пациентов с ХРФ и хроническим гематогенным остеомиелитом.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация методов оценки фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови с помощью лазерной проточной цитометрии»

Актуальность темы диссертацииСистему фагоцитоза можно определить как совокупность клеток и гуморальных факторов, обеспечивающих базальный уровень структурного гомеостаза. [Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993] Центром системы фагоцитоза служат фагоциты. В этом термине отражается один из самых ярких функциональных признаков данных клеток — способность к поглощению и уничтожению чужеродного материала. Как сейчас установлено, фагоциты участвуют в клеточном взаимодействии, антигеном распознавании, процессинге и презентации антигенов. Конечным вариантом любого иммунного ответа является разрушение патогена или дефектных структур и их элиминация. Основные механизмы разрушения при гуморальном и клеточном вариантах иммунного ответа связаны с фагоцитозом. Дефекты функции фагоцитов могут существенно ухудшить эффективность и адекватность любого вариантов иммунного ответов. Как высокочувствительный индикатор нормы и патологии, фагоциты служат полезным инструментом не только иммунологической, но общеклинической диагностки. В организме человека фагоцитирующую функцию выполняют несколько типов клеток. Прежде всего, это те клетки, которые осуществляют защиту при каких-либо инфекциях и инвазиях - макрофаги, моноциты и нейтрофилы. В меньшей степени она представлена у эозинофилов и базофилов.

Одной из важных задач клинической иммунологии является всесторонняя оценка иммунного статуса. Она включает в себя следующий комплекс основных тестов: оценка фагоцитоза, гуморального иммунитета и системы комплемента, иммунофенотипированця лимфоцитов, функциональная активность лимфоцитов и оценка интерферонового статуса [Хаитов P.M., Игнатьева Г.А., 1992]. Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе диагностики как первичных таких как хронической гранулематозной болезни, синдрома Чедиака-Хигаси, дефицита миелопероксидазы, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, синдроме «ленивых лейкоцитов», нарушение опсонизирующей активности сыворотки крови (дефицит компонента комплемента, гипогаммаглобулинемии) [Вельтищев Ю.Е., 1996, Йегер Л., 1990], так и вторичных иммуподефицитных состояний: часто рецидивирующие гнойные воспалительные процессы, длительно не заживающие раны, склонность к послеоперационным осложнениям [Хаитов P.M., Пинегин Б.В., 1995, Маянский А.Н., Пикуза О.И., 1993]. Но вместе с этим, методические подходы к оценке фагоцитоза являются довольнотрудоемкими и длительными, что не позволяет их широко использовать в клинической лабораторной практике. Современным подходом в изучении структуры и функции клеток является проточная цитометрия, её возможности позволяют также изучать и этапы фагоцитоза. Существующие методы оценки функциональной активности фагоцитов с использованием проточной цитометрии обобщены в ряде обзоров [Van Eeden S.F. et al., 1999, Bjerknes R., Bassoe C.F., 1989, Bassoe C.F., 1984]. Высокая точность, объективность скорость анализа, простота постановки реакции характеризуют изучение фагоцитоза с помощью автоматической проточной цитофлюориметрии.

Цель работыОптимизация существующих методов и создание новых подходов к оценке функциональной активности фагоцитов периферической крови с помощью проточной лазерной цитометрииЗадачи исследования:1. Оценить значение исследования фенотипа нептрофилов CD16, CD1 lb/18, CD32, CD35 в норме и при некоторых патологиях.

2. Разработать цитометрические методы определения фагоцитарного числа и индекса переваривающей способности лейкоцитов периферической крови в отношении St. aureus.

3. Отработать методики и оценить корреляцию определения фагоцитарного числа и индекса переваривающей способности фагоцитов по сравнению с классическими микроскопическими методами.

4. Исследовать фагоцитарное число и индекс переваривающей способности лейкоцитов периферической крови в отношении St. aureus у здоровых доноров in vitro для определения интервалов нормальных значений показателей.

5. Определить фагоцитарное число и индекс переваривающей способности у пациентов с наследственными и вторичными нарушениями фагоцитарного звена.

6. Оптимизировать метод оценки бактерицидной активности (внутриклеточный киллипг) фагоцитов с помощью проточной лазерной цитометрии, определить интервалы нормальных значений, оценить бактерицидную активность при наследственных и вторичных нарушениях фагоцитарного звенаНаучная новизнаВпервые предложена и внедрена в клиническую практику модифицированная цитометрическая методика для оценки фагоцитарного числа лейкоцитов периферической крови в отношении St. aureus - ФИТЦ+Впервые предложена и внедрена в клиническую практику модифицированная цитометрическая методика для оценки определения индекса завершенности фагоцитоза лейкоцитов периферической крови в отношении St. aureus - ФИТЦ+С помощью предложенных новых методов исследовано фагоцитарное число лейкоцитов периферической крови в отношении St. aureus - ФИТЦ+, а также индекса переваривающей способности фагоцитов в норме и при патологиях, а так же проведена корреляция между предложенными методами и классическим микробиологическим методом.

С помощью созданных методов было выявлено резкое снижение фагоцитарного числа лейкоцитов периферической крови пациентов с ХГБ в отношении St. aureus - ФИТЦ+, при нормальном уровне поглотительной активности (% фагоцитировавших клеток) и индексе переваривающей способности. Цитометрические методы оценки фагоцитарного числа и индекса переваривающей способности фагоцитов позволили выявить, что у пациентов, страдающих хроническим рецидивирующим фурункулезом, фагоцитарное число ниже нормы и у некоторых из них значительно снижен индекс завершенности фагоцитоза. При обследовании пациентов с хроническим гематогенным остеомиелитом обнаружено резкое снижение фагоцитарного числа лейкоцитов при крайне тяжелом течении заболевания, а ИПС был снижен у большинства пациентов.

Установлена важность определения внутриклеточного киллинга в динамике, через 1 и 3 часа инкубации, что в ряде случаев позволяет выявить наличие дефекта в фагоцитарном процессе.

Практическая значимость работыЦитометрические методы оценки ФЧ и ИПС разработаны в «микроварианте», пригодном для использования в рутинных исследованиях. Получены нормативные значения исследуемых показателей. Высокая степень корреляции (г=0,8) с классическими микроскопическими методами оценки данных показателей свидетельствует обинформативности предложенной методики. Данные методы возможно использовать для поточных исследованиях в лабораториях оснащенных проточным цитофлюориметром или флюоресцентным микроскопом. Предлагаемые цитометрические методы позволяют оценить степень нарушения в функционировании фагоцитарного звена у пациентов с наследственными (первичными) и вторичными иммунодефицитами.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Олиферук, Наталья Сергеевна

выводы

1. При обследовании группы доноров определены нормативные значения экспрессии поверхностных маркеров нейтрофилов СБ 16 = 977,5± 177,1, СЭ11Ь/18 = 220,8±64,9/47,4±17,5, СВ32 = 153,3±30,7, СЭ35 = 46,3±10,7. У некоторых пациентов, страдающих хроническим рецидивирующим фурункулезом, было обнаружено снижение экспрессии СБ11Ь/СП18, что может быть одной из причин рецидивирования и хронического течения заболевания.

2. Разработан метод определения фагоцитарного числа с помощью проточной лазерной цитометрии. При обследовании группы здоровых доноров, определены нормативные значения фагоцитарного числа и показана значимость его определения на разных стадиях заболевания и при различных нозологиях; в частности у пациентов ХГБ, а так же с ХРФ фагоцитарное число снижено, у большинства пациентов с хроническим гематогенным остеомиелитом в стадии обострения ФЧ повышено, резкое снижение ФЧ наблюдается у больных с остеомиелитом, находящихся в крайне тяжёлом состоянии

3. Разработан метод определения индекса переваривающей способности фагоцитов с помощью проточной лазерной цитометрии, установлены нормативные параметры, они составили 78,1%±7,6 и показано, что ИПС снижен у части пациентов с ХРФ, а также у пациентов хроническим гематогенным остеомиелитом, у пациентов с ХГБ индекс переваривающей способности фагоцитов соответствует нормативным значениям.

4. Установлена высокая корреляция разработанных методов по определению ФЧ и ИПС с классическими микроскопическими методами: индекс корреляции г составил 0,85 при р<0,005 и 0,816 при р<0,05 соответственно.

5. Оптимизирован метод оценки внутриклеточного киллинга лейкоцитами периферической крови. Установлена важность определения внутриклеточного киллинга в динамике, через 1 и 3 часа инкубации, что в ряде случаев позволяет выявить наличие дефекта в фагоцитарном процессе. Установлено достоверное снижение бактерицидной активности фагоцитов у части пациентов с ХРФ после 3-х часовой инкубации она составила 52,8%±5,3.

6. Изменения во внутриклеточном киллинге не всегда влекут за собой изменения в переваривающей способности лейкоцитов периферической крови. Так у пациентов с ХГБ при резком снижении внутриклеточного киллинга 1 час 10,3***±1,7, 3 часа 12.9***±1,6, индекс переваривающей способности фагоцитов соответствует нормативным значениям и составляет 72,4±8,5.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Олиферук, Наталья Сергеевна, 2008 год

1. Берман В.М., Славская Е.М. Завершенный фагоцитоз. Новый, методический принцип изучения завершенной фагоцитарной реакции. ЖМЭИ 1958, №3, с.8-13.

2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. М., "Практика", 1999.

3. Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология. М., "Медицина", 1990.

4. Мазуров Д.В. Разработка методов оценки поглотительной и бактерицидной функций фагоцитов периферической крови человека с использованием проточной цитофлюорометрии. Диссертация . канд. мед. наук. М., 2000.

5. Мазуров Д.В., Дамбаева C.B., Пинегин Б.В. Оценка внутриклеточного киллинга стафилококка фагоцитами периферической крови с помощью проточной цитометрии. Иммунология, 2000, №2, с.57-59.

6. Мазуров Д.В., Хамидуллина К.Ф., Пинегин Б.В. Оценка поглощения гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии. Иммунология, 2000, №1, с.57-61.

7. Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань, "Магариф", 1993.

8. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. М., "Мир", 2000.

9. Ю.Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Вторичные иммунодефициты: диагностика и иммунотерапия. Лечащий врач, 1999, № 2-3, с.63-69.

10. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Вторичные иммунодефициты: клиника, диагностика, лечение. Иммунология, 1999, № 1, с. 14-17.

11. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Основные задачи клинической иммунологии по изучению функциональной активности фагоцитирующих клеток. Иммунология, 1995, № 3, с.14-17.

12. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса. Иммунология, 1995, № 4, с. 1-8.

13. Хаитов P.M., Игнатьева Г.А. СПИД. М., Народная академия культуры и общечеловеческих ценностей, 1992, 352с.

14. Ярилин А. А. Основы иммунологии: Учебник. М., " Медицина ", 1999.

15. Ярцев М. Н., Яковлева К. П. Регистр первичных иммунодефицитных состояний института иммунологии МЗ РФ. Физиология и патология иммунной системы, 2004, №2, с.11-19.

16. Ярцев М.Н., Яковлева К.П. Иммунная недостаточность: клинико-лабораторная оценка. Иммунология, 2005, № 1, с.36-44.

17. Aratani Y, Koyama Н, Nyui S et al. Severe impairment in early host defense against Candida albicans in mice deficient in myeloperoxidase. Infect.Immunol. 1999. 67.1828-1836.

18. Arias-Salgado EG et al. Sic kinase activation by direct interaction with the integrin p cytoplasmic domain. Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 2003, v. 100, p. 13298-13302.

19. Babior B.M. Oxygen-depend microbial killing by phagocytes. (2 parts) 1978, v.298, p.659-721.

20. Babior BM, Takeuchi C, Reudi J et al. Investigation of antibody-catalyzed ozone generation by human neutrophils. Proc.Natl.Acad.Sci. 2003. 100. 3031-3034.

21. Bajt ML, Goodman TG, McGuire SL. B2 (CD 18) mutations abolish ligand recognition by I domain integrins LFA-1 (аьРг, CDlla/CD18) and MAC-1 (амРг, CD1 lb/CD18). J.Biol.Chem. 1995, v.270, p.94-98.

22. Bassoe C.F., Flow cytometric studies on phagocyte function in bacterial infections. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand. 1984, v.92(3), p. 167-71

23. Berken A, Benacerraf B. Properties of antibodies cytophilic for macrophages. J.Exp.Med. 1966? V. 123, p. 119-144.

24. Berton G, Lowell CA. Integrin signaling in neutrophils and macrophages. Cell Signal. 1999, v.ll, p.621-635.

25. Berton G, Mocsai A, Lowell CA. Src and Syk kinases: key regulators of phagocytic cell activation. Trends in Immunol. 2005 v.26, p.208-214.

26. Bjerknes R. Flow cytometric fssay for combined measurement of phagocytosis and intracellular killing of C. albicans J. Immunol. Meth.1984, Vol. 72, N1.p. 229-241.

27. Bjerknes R., Bassoe C.F., Sjursen H., Laerum O.D., Solberg C.O. Flow cytometry for the study of phagocyte function. Rev Infect Dis. 1989, v. 11(1), p. 16-33

28. Bolland S. Ravetch JV. Spontaneous autoimmune disease in FcyRII deficient mice results from strain-specific epistasis. Immunity. 2000, v.13, p.277-285.

29. Borregaard N., Kjeldscn L., Lollike K., Sengelov H. Granules and secretory vesicles of the human neutrophil. J.Clin. Exp.Immunol., 1995, v.101, p.6-9.

30. Boyden S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leukocytes. J. Exp.Med., 1962, v.115, p.453-465.

31. Boyden S.V. Natural antibodes and the response. Adv. Immunol., 1966, v.5, p. 1-28

32. Bushmann H., Winter M. Assesment of phagocytic activity of granulocytes using laser flow cytometry. J Immunol Methods, 1989, v. 124, p.231-234.

33. Cai TQ. Wright SD. Energetic of leucocyte integrin activation. J.Biol.Chem. 195. 270, p.14358-14365.

34. Coates T.D. et al. Relationship of F-actin distribution to development of polar shape in human polymorphonuclear neutrophils. J.Cell Biol. 1992, v.l 17, p.765.

35. Cunnion KM, Zang HM, Frank MM. Availability of complement bound to Staphylococcus aureus to interact with membrane complement receptors influences efficiency of phagocytosis. Inf.Immun. 2003, v.71, p.656-662.

36. Daeron M. Fc receptor biology. Ann Rev. Immunol., 1997, v.15, p.203-34.

37. Deo YM, Graciano RF, Repp R, van de Winkel JG. Clinical significance of IgG Fc receptors and Fc gamma R-directed therapy. Immunol.Today, 1997, v.18, p. 127-135.

38. Diamond MS, Garcia-Aguilar J, Bickford JK et al. The I domain a major recognition site on the leukocyte integrin MAC-1 (CDllb/CD18) for four distinct adhesion ligands. J.Cell Biol.1993, v.120, p.1032-1043.

39. Drevets D.A., Elliot A.M. Fluorescence labeling of bacteria for studies of intracellular pathogenesis J. Immunol. Meth., 1995, Vol. 187, p. 69-79.

40. Drevets D.A., Campbell P.A. Macrophage Phagocytosis. J Immunol Methods., 1991, v.l42, p.31-38.

41. Edith M., Sucharit Bhakdi Flow Cytometric Assay for Quantifying Opsonophagocytosis

42. Fernandes MJ, Rollet-Labelle E, Pare G et al. CDllb associates with high-density, detergent resistant mem branes in human neutrophils. Biochem.J. 2006, v.393, p.351-359.

43. Ferrante P. A flow cytometric method for the analysis of phagocytosis and killing by polymorphonuclear leukocytes. Ann. N.Y. Acad. Sei., 1997, v. 832, p.53-61

44. Fitzer-Attas CJ et al. Fey receptor-mediated phagocytosis in macrophages lacking the Src family tyrosine kinases Hck, Fgr and Lyn. J.Exp.Med. 2000, v. 191, p.669-682.

45. Fossati G, Moots RJ. Bucknall RC, Edwards SW. Differential role of neutrophil Fcgamma receptor IIIB (CD 16) in phagocytosis, bacterial killing, and responses to immune complexes.Arthritis Rheum. 2002, v.46(5), p.1351-61.

46. Gakidis MA et al. Vav GEFs are required for ß2 integrin-dependent functions of a. J.Cell Biol. 2004, v. 166, p.273-282.

47. Gasque P. Complemnt: a unique innate immune sensor for danger signals. Mol.Immunol. 2004, v.41, p.1089-1098.

48. Giamis J., Lombard Y., Poindron P., Muller C.D. Flow cytometry distinction between adherent and phagocytized yeast particles. Cytometry, 1994, v. 117:2, p. 173-8.

49. Giinbrone M.A., Buchanan M.R., Interactions of platelets and leukocytes with vascular endothelium: in vitro studies.Ann N Y Acad Sei., 1982, v.401, p. 171-83.

50. Hampton MB, Krttle AJ, Winterbourn CC. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. Blood. 1998. 92. 3007-3017.

51. Harris H. Chemotaxis of granulocytes. .T. Pathol. Bacteriol., 1953, v.66.

52. Haugland R.P., Handbook of fluorescent Probes and Research Chemicals, Six Edition, Molecular Probes, 1996, p. 491.

53. Haynes A.P., Fletcher J., Garnett M., Robins A. A novel flow cytometric method for measuring protein digestion within the phagocytic vacuole of polymorphonuclear neutrophils. J Immunol Methods, 1990, v.135, p.155-61.

54. Hofman P, Piche M, Far DE et al. Increased Escherichia coli phagocytosis in neutrophils that have transmigrated across a cultered intestinal epithelium. Infect.Immunol. 2000, v.68, p.449-455

55. Holmes B, Page AR, Good RA. Studies of the metabolic activity of leukocytes from patients with a genetic abnormalityof phagocytic function. J.Clin.Invest. 1967, v. 46? p. 1422-1432.

56. Hughes PE, Pfaff M. Integrin affinity modulation. Trends in cell biol. 1998, v. 12, p. 359-364.

57. Hunter S, Huang M-M, Indik ZK, Schreiber AD. FcyRII-A-mediated phagocytosis and receptor phosphorylation in cells deficient in protein kinase Src. Exp.Hematol.1993, v.21, p.1492-1495.

58. Indik ZK, Kelly C, Chien P et al. Human FcyRII, in the absence of other Fey receptors, mediates a phagocytic signal. J.Clin.Invest. 1991, v.88, p.1766-1769.

59. Indik ZK, Pan XQ, Huang M-M et al. Insertion of cytoplasmic tyrosine sequences into the nonphagocytic receptors FcyRIIB establishes phagocytic function. Blood.1994, v.83, p.2072-2074.

60. Indik ZK, Park J-G, Hunter S, Schreiber AD. The molecular dissection of Fey receptor mediated phagocytosis. 1995, v.86, p.4389-4399.

61. Janeway CA, Travers P, Walport M, Schlomchik M. Immunobiology. The immune system in health and disease. 6th edition. 2005. Garland Science Publisching.

62. Janoff EN, Fasching, Orenstein JM et al. Killing of Streptococcus pneumoniae by capsular polysaccharide-specific polymeric IgA, complement, and phagocytes. J.Clin.Invest. 1999, v.104, p.l 139-1147

63. Jongstra-Bilen J, Harrison R, Grinstein S. Fcgamma-receptors induce Mac-1 (CDllb/CD18) mobilization and accumulation in the phagocytic cup for optimal phagocytosis. J.Biol.Chem. 2003, v.278, p.45720-45729.

64. Kim CH, Lee KH, Lee CT et al. Aggregation of beta2 integrins activates human neutrophils through the IkappaB/NF-kappaB pathway. J.Leukoc.Biol. 2004, v.75, p.286-292.

65. Kimberly RP, Ahlstrom JW, Click ME, Edberg JC. The glycosyl phosphotidyl linked FcyRIIIB mediates transmembrane signaling events distinct from FcyRII. J.Exp.Med. 1990, v.171, p.1239-1242.

66. Klebanoff SJ. Myeloperoxidase: friend and foe. J.Leuk.Biol. 2005. 77. 598- 625.

67. Kohsaka T., Abe J. The killing activity methods in neutrophils. Nippon Rinsho, 1997, Suppl. 1, p. 204-09.

68. Krauss JC, Poo H, Xue W et al. Reconstitution of antibody-depepdent phagocytosis in fibroblasts expressing Fey receptor IIIB and complement receptor type 3. J.Immunol. 1994, v.153, p.1994-1996.

69. Lang ML, Chen YW, ShenL et al. IgA Fc receptor (FcaR) cross-linking recruits tyrosine kinases, phosphoinositide kinases and serine/threonine kinases to glycolipid rafts. BiochemJ. 2002, v.364, p.517-525.

70. Lang ML, Glennie MJ, Kerr MA. Human neutrophil FcaR and FcyRIIa but not FcyRIIIb generate intracellular calcium signals which trigger the respiratory burst. Biochem.Soc.Trans. 1997, v.25, p.S333.

71. Lawrence DA, Weigle WO, Spiegelberg HL. Immunoglobulins cytophilic for human lymphocytes, monocytes and neutrophils. J.Clin.Invest. 1975, v.55, p.368-372.

72. Lehrer RI, Hanifin J, Cline MJ. Defective bactericidal activity in myeloperoxidase-deficient human neutrophils. Nature. 1969. 223. 78-79.79. leukocyte chemotaxis. Scince 1981, v.213, p.830-837.

73. Li R, Arnaout MA. Functional analysis of the 02 integrins. Meth.Mol.Biol. 1998, v.129, p. 105-124.

74. Lowell CA, Fumagalli G, Berton G. Deficiency of Src family kinases p59/61hck and p58c-fgr results in defective adhesion-dependent neutrophil functions. . J.Cell Biol. 1996, v.133, p.895-910.

75. Lowell CA. Src-family kinases: rheostats of immune cell signalling. Mol.Immunol. 2004, v.41,p.631-643.

76. Lymar SV, Hurst JK. Role of compartmentation in promoting toxicity of leukocyte-generated strong oxidants. Chem.Res.Toxicol. 1995. 8. 833-840.

77. Martin E, Bhakdi S. Flow cytometric assay for quantifying opsonophagocytosis and killing of Staphylococcus aureus by peripheral blood leukocytes. J Clin Microbiol., 1992 v. 30(9), p.2246-55.

78. Mitchell MA, Huang M-M, Chien P et al. Substitutions and deletions in the cytoplasmic domain of phagocytic receptors FcyRII-A: effect on receptor tyrosine phosphorylation and phagocytosis. Blood. 1994, v.84, p.1753-1756.

79. Miyabe K, Sakamoto N, Wu YH et al. Effects of platelet products on neutrophilic phagocytosis and complement receptors. Thromb Res. 2004, v.l 14, p.29-36.

80. Mobberley-Shuman PS, Weiss AA. Influence of CR3 (CDlib/CD 18) expression on phagocytosis of Bordetella pertussis by human neutrophils. Infect.Immunol. 2005, v.73,p.7317-7325.

81. Monteiro RC, van de Winkel JGJ. IgA receptor. Annu.Rev.Immunol. 2003, v,21, p. 177-204.

82. Nauseef WM. Myeloperoxidase deficiency. Hematol.Oncol.Clin.N.Am. 1988, v.2, p.135-158.

83. Nelson R. D., Paul G. Quie P. G, Simmons R.L. Chemotaxis Under Agarose: A New and Simple Method for Measuring Chemotaxis and Spontaneous Migration of Human

84. Polymorphonuclear Leukocytes and Monocytes

85. J. Immunol., 1975, v.115, p.1650- 1656.

86. Nelson R.D., Quie P.G. Chemotaxis under agarose: a new and simple method for measuring chemotaxis and spontaneous migration of human polymorphonuclear leukocytes and monocytes.J Immunol., 1975, v.l 15(6), p.1650-6.

87. Nilsson M, Weineisen M, Andcrsson T et al. Critical role for complement receptor 3 (CDllb/CD18), but not for Fc receptors, in killing Streptococcus pyogenes by neutrophils in human immune serum. Eur.J.Immunol. 2005, v.35, p.1472-1481.

88. Nimmerjahn F, Bruhns P, Horiuchi K, Ravetch JV. FcylV: A novel FcR with distinct IgG subclass specificity. Immunity, 2005, v. 23, p. 41-51.

89. Nimmerjahn F, Bruhns P, Horiuchi K, Ravetch JV. FcylV: A novel FcR with distinct IgG subclass specificity. Immunity. 2005, v.23, p.41-51.

90. Oda T., Maeda H., A new simple fluorometric assay for phagocytosis. J. Immunol. Meth., 1986, v. 88:2, p. 175-83.

91. Pereira S, Lowell CA. The Lyn tyrosine kinase negatively regulates neutrophil integrin signaling. J.Immunol. 2003, v.171, p.1319-1327.

92. Perticarari S., Presani G., Banfi E. A new flow cytometric assay for the evalution of phagocytosis and the oxidative burst in whole blood. J Immunol Methods, 1994, v. 170, p. 117-24.

93. Raichvarg D., Hatat D. Determination of a new phagocytic index: influence of the bacteria strain and leukocyte species, Biomedicine. 1980, v.33, p.52-5.

94. Rakita RM, Vanek NN, Jacques-Palaz K et al. Enterococcus faecalis bearing aggregation substance is resistant to killing by human neutrophils despite phagocytosis and neutrophil activation. Infect.Immunol. 1999, v.67, p.6067-6065.

95. Ravetch JV, Bolland B. IgG Fc receptors. Annu.Rev.Immunol. 2001, v. 19, p.275-290.

96. Ravetch JV, Glynes RA. Divergent roles for Fc receptors and complement in vivo. Annu.Rev.Immunol. 1998, v.16, p. 421-432.

97. Ravetch JV. Fc receptors. Curr.Opin.Immunol. 1997, v. 9, p.121-125.

98. Rodriguez MF, Hellwig SM, Horbor DE et al. Fc receptor-mediated immunity against Bordetella pertussis. J.Immunol. 2001, v.167, p.6545-6551.

99. Roos D., Van Brüggen R. Genetic analysis of patients with chronic granulomatous disease: insights in a clinical situation// Centr Eur J Immunol. — 2000. V25. - N.3. -p.106-112.

100. Rosen H, Crowley JR, Heinccke JW. Human neutrophils use the myeloperoxidase-hydrogen peroxidase-chloride system to chlorinate but not nitrate bacterial proteins during phagocytosis. J.Biol.Chem. 2002, v.277, p. 30463-30468.

101. Salmon J.E., Kimberly R.P. Phagocytosis of concanavalin A-treated erythrocytes is mediated by the Fc gamma receptor, J Immunol. 1986, v. 15, p.456-62.

102. Saresella M., Roda K., Speciale L. et al., A flow cytometric method for the analysis of phagocytosis and killing by polymorphonuclear leukocytes. Ann. NY Acad. Sei., 1997, v.832, p.53-61.

103. Saresella M., Roda K., Speciale L., Taramelli D., Mendozzi E., Guerini F., Ferrante P. A rapid evaluation of phagocytosis and killing of Candida albicans by CD13+leukocytes. J Immunol Methods, 1997, v.210, p.227-34.

104. Selvaraj P, Fifadara N, Nagarajan S, Cimino A, Wang G. Functional regulation of human neutrophil Fc gamma receptors Immunol Res. 2004, v.29(l-3), p.219-30.

105. Shapiro H.M. Practical Flow Cytometry. Third Edition. New York. Wiley Liss, 1995, p.316-319, 345-347.

106. Sligh J.E., Hurwitz MY, Zhu C.M., Anderson D.C., Beaudet A.L. An initiation codon mutation in CD 18 in association with the moderate phenotype of leukocyte adhesion deficiency. J. Biol. Chem., 1992, v.267, p.714 718.

107. Steinbeck MJ, Khan AU, Karnovsky MJ. Intracellular singlet oxygen generation by phagocytosing neutrophils in response to particle coated with chemical trap. J.Biol.Chem. 1992. 267. 13425-13433

108. Stivens A., Lowe J. Histology. England, Mosby-Year Book Europe, 1993.

109. Ugarova TP, Yakubenko VP. Recognition of fibrinogen by leukocyte integrins. Ann. N.Y. Sei. 2001, v.936, p.368-385.

110. Unkeless JC, Jin J. Inhibitory receptors, ITIM sequences and phosphatases. Curr.Opin.Immunol. 1997, v.9, p.338-343.

111. Van der Pol W, Vidarsson G, Vile HA et al. Pneumococcal capsular polysaccharide-specific IgA triggers efficient neutrophil effector functions via FcaRI (CD89). J.Infect. Dis. 2000, v. 182, p.l 139-1145.

112. Van Eeden S.F. et al. The use of flow cytometry to measure neutrophil function. J Immunol Methods. 1999, V.232, p.23-43.

113. Verhoef J., Peterson P Kinetics of staphylococcal opsonization, attachment, ingestion and killing by human polymorphonuclear leukocytes: a quantitative assay using 3H.thymidine labeled bacteria., J Immunol Methods, 1977, v.14, p.303-11

114. Verhoef J., Peterson P, Kim Y, Opsonic requirements for staphylococcal phagocytosis. Heterogeneity among strains, Immunology, 1977, v.33, p.191-7.

115. Wagner C, Iking-Konert C, Hug F et al. Cellular inflammatory response to persistent localized Staphylococcus aureus infection: phenotypical and functional characterization of polymorphonuclear neutrophils (PMN). Clin.Exp.Immunol. 2006, v.143, p.70-77

116. Wiedemann A, Patel JC, Lim J et al. Two distinct cytoplasmic regions of p2 integri chain regulate RhoA function during phagocytosis. J.Cell Biol. 2006, v. 172, p.1069-1079.

117. Willeke T, Schymeinsky J, Prange P et al. A role for Syk-kinase in the control of binding cycle of the p2 integrins (CDllb/CD18) in human polymorphonuclear neutrophils. J.Leuk.Biol. 2003, v.74, p.260- 269.

118. Wright SD, Silverstein SC. Tumor-promoting phorbol esters stimulate C3b and C3b, receptor-mediated phagocytosis in culture human monocytes. J.Exp.Med. 1982, v.152, p.l 149-1164.