Оптимизация лабораторной диагностики урогенитального трихомониаза на основе методов амплификации нуклеиновых кислот тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат медицинских наук Рыжих, Павел Геннадьевич

• Рыжих, Павел Геннадьевич
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Рыжих, Павел Геннадьевич

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Общая характеристика Trichomonas vaginalis.

Эпидемиология трихомонадной инфекции.

Клинические проявления трихомонадной инфекции.

Методы лабораторной диагностики трихомонадной инфекции.

Микроскопия нативного и окрашенного препаратов.

Культуральный посев.

Методы, основанные на выявлении антигенов.

Серологическая диагностика.

Молекулярно-биологические методы диагностики Т.vaginalis.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Глава 3. РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫЯВЛЕНИЯ ДНК Т.VAGINALIS НА

ОСНОВЕ МЕТОДА ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ.

Глава 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК T.VAGINALIS НА

ОСНОВЕ МЕТОДА НАСБА В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ.

Глава 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

МЕТОДИК НА ОСНОВЕ ПЦР И НАСБА И ИХ СРАВНЕНИЕ С

МИКРОСКОПИЕЙ (НАТИВНОГО И ОКРАШЕННОГО ПРЕПАРАТОВ) И

КУЛЬТУРАЛЬНЫМ ПОСЕВОМ.

Глава 6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧАСТОТЫ ВЫЯВЛЕНИЯ T.VAGINALIS В

ЗАВИСИМОСТИ ОТ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ

МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ТРИХОМОНАДНОЙ ИНФЕКЦИИ.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация лабораторной диагностики урогенитального трихомониаза на основе методов амплификации нуклеиновых кислот»

Урогенитальный трихомониаз (УТ) - широко распространенная инфекция, передаваемая половым путем, возбудителем которой является Trichomonas vaginalis - простейший одноклеточный микроорганизм, приспособившийся в процессе эволюции к паразитированию в органах мочеполовой системы человека. По данным официальной статистики, трихомониаз имеет наибольшую долю в структуре заболеваемости ИППП. В 2008 году его доля составила 38,9% из всех зарегистрированных случаев заболеваний инфекциями, передаваемыми половым путем (Иванова М.А, и соавт., 2009). У женщин в воспалительный процесс могут вовлекаться вульва, влагалище, уретра, парауретральные протоки, шейка матки, матка и ее придатки, большие вестибулярные железы, мочевой пузырь, почечная лоханка; у мужчин - уретра, предстательная железа, семенные пузырьки, мочевой пузырь, почечные лоханки. Доказана роль Т.vaginalis в развитии осложнений при беременности и в её неблагоприятном исходе (Hardy Р.Н., et al., 1984; Cotch M.F., et al., 1997), развитии бесплодия у женщин, в том числе вследствие сальпингитов, начавшихся в детском возрасте (Stefanovic J., 1990). Установлено значение влагалищных трихомонад в увеличении риска заболевания ВИЧ-инфекцией (Wasserheit J.N., 1992; Sorvillo F., et al., 2001). У мужчин трихомонады также могут быть одной из причин бесплодия, в основе которого, как правило, лежит поражение предстательной железы. По данным Дьяченко А.И. при хроническом простатите Т.vaginalis выявляются у 29% больных (Дьяченко А.И., и соавт., 2001). При этом трихомонады обнаруживаются во всех тканях простаты, образуя внутриэпителиальные вакуоли (Gardner W.A., et al., 1986). Для трихомониаза, как и для других ИППП, в большинстве случаев характерно отсутствие специфических признаков заболевания, а у значительного числа пациентов инфекция протекает бессимптомно. Классический для трихомониаза "клубничный" симптом встречается только у 2% пациенток; пенистые выделения, которые можно связать с активным ростом трихомонад, наблюдаются только примерно у 12% инфицированных женщин (Fouts А.С., et al.,

1980). Кроме того, часто трихомониаз сочетается с другими ИППП: гонореей, хламидиозом, микоплазмами, что объясняется общностью путей передачи инфекции (Щербакова Н.И., и соавт., 1982; Делекторский В.В., и соавт., 1985; Межевитинова Е.А., 1999).

В связи с неспецифическими клиническими проявлениями диагноз три-хомонадной инфекции основывается на результатах лабораторных методов исследования, которые включают микроскопические, культуральные, серологические и молекулярно-биологические.

Согласно приказу Минздрава СССР № 1570 от 4 декабря 1986 г регламентированными методами диагностики трихомониаза считались микроскопия (нативного или окрашенного) препаратов и культуральное исследование. Несмотря на то, что приказом Минздрава РФ №398 от 23.12.2003 г приказ № 1570 от 4 декабря 1986 г. был признан не действующим, в нашей стране наиболее часто для диагностики трихомонадной инфекции используется метод микроскопии, что объясняется его относительно низкой стоимостью и быстротой исполнения (Фриго Н.В., и соавт., 2008). Тем не менее, данный метод недостаточно чувствителен и воспроизводим, субъективен и требует высокой квалификации исполнителя.

Культуральный метод долгое время рассматривался в качестве «золотого стандарта» диагностики трихомонадной инфекции. Но его эффективность в значительной степени зависит от качества используемых питательных сред. Ограничивают его применение также большие сроки получения результата анализа, вплоть до 11-17 суток после посева, т.к. длительность цикла развития влагалищных трихомонад в культуре зависит от посевной дозы (Приказ № 1570 от 04.12.86 г.). Кроме того, культуральный метод имеет высокие требования к транспортировке и хранению клинического материала.

В последние годы во всем мире в лабораторной диагностике различных инфекций, в том числе ШИШ, все большее распространение стали получать методы амплификации нуклеиновых кислот (МАНК), направленные на выявление специфических фрагментов ДНК или РНК возбудителей. Одним из наиболее распространенных МАНК является метод ПЦР. Преимуществами данного метода являются высокие аналитические и диагностические показатели чувствительности и специфичности, менее строгие требования к хранению и транспортировке клинического материала, короткие сроки исполнения, относительно невысокая стоимость анализа и его универсальность в отношении других урогенитальных инфекций.

Согласно рекомендациям Центра по контролю и профилактике заболеваемости (CDC - Centers for Disease Control and Prevention) в связи с более высокой аналитической чувствительностью амплификационных методов верификацию их результатов следует проводить на основе альтернативных амплификационных тестов (CDC, 2002). В своей работе A.J. McAdam предложил требования, которым должен соответствовать дополнительный метод для решения вопросов, связанных с дискордантными результатами: аналитическая чувствительность дополнительного метода должна быть сопоставима с исследуемым методом; должна использоваться отличная мишень для амплификации; должен использоваться другой принцип амплификации (McAdam A .J., 2000).

Одним из методов, соответствующих требованиям, предложенным McAdam A.J., является метод определения рибосомальной РНК (рРНК) на основе реакции транскрипционной амплификации (Transcription-Mediated Amplification - ТМА). На основе данного метода за рубежом применяется серийно выпускаемый тест для диагностики инфекции, вызванной Т.vaginalis -APTIMA Trichomonas vaginalis Assay (Gen-Probe Inc., San Diego, CA). Данный тест имеет высокие показатели диагностической чувствительности не только по сравнению с методами микроскопии и микробиологического посева, но и в сравнении с ПЦР (Hardick A., et al., 2006; Nye М.В., et al., 2009; Andrea S.B., et al., 2011). Аналогом ТМА является реакция транскрипционной амплификации НАСБА (Nucleic acid sequence-based amplification - NASBA).

В работе Morre S.A. и соавт. на примере C.trachomatis была показана возможность с помощью метода НАСБА оценивать наличие жизнеспособных микроорганизмов в образце в процессе и после терапии (Morre S.A., et al., 1996).

На сегодняшний день за рубежом предложено множество протоколов выявления ДНК T.vaginalis с помощью метода ПЦР (Riley D.E., et al., 1992; Kengne P., et al., 1994; Shaio M.F., et al., 1997; Madico G., et al., 1998; Mayta H., et al., 2000). Было показано, что диагностическая чувствительность ПЦР выше, чем у традиционных методов выявления T.vaginalis (микроскопия и куль-туральный посев), однако она варьировала в широких пределах (от 60 до 100%), а сами исследования проводили на различном биологическом материале (моча, вагинальное отделяемое, соскобы из уретры и цервикального канала), среди различных групп населения, полученном от мужчин и женщин. При этом аналитическая чувствительность в предложенных протоколах не была установлена. В свою очередь аналитические характеристики (аналитическая чувствительность и специфичность) определяют диагностические чувствительность и специфичность метода. Для повышения аналитической чувствительности метода необходимо выбрать оптимальную мишень, размер амплифицируемого фрагмента, программу амплификации и метод его детекции. Одной из причин, ограничивающих использование ПЦР в клинической лабораторной практике, является отсутствие в методиках образцов, которые бы контролировали проведение всего процесса ПЦР-исследования (от экстракции нуклеиновых кислот, до детекции продуктов амплификации) предотвращающих выдачу лабораторией ложноотрицательных и ложнопо-ложительных результатов исследования.

На сегодняшний день отсутствуют нормативные документы, регламентирующие использование метода ПЦР при лабораторной диагностике конкретных нозологических форм, и нормативно-правовая база диагностики мочеполового трихомониаза, как таковая, отсутствует. Поэтому необходима разработка новых регламентирующих документов, которые, в свою очередь, должны базироваться на объективных данных об аналитических и диагностических характеристиках различных лабораторных методов.

Цель работы

Разработка стандартизованных методик лабораторной диагностики уро-генитального трихомониаза на основе технологий ПЦР и НАСБА в реальном времени и обоснование необходимости их применения.

Задачи исследования

1. Разработать методику для выявления ДНК Т.vaginalis на основе метода ПЦР в реальном времени;

2. Разработать методику для выявления РНК Т.vaginalis на основе метода НАСБА в реальном времени;

3. Определить и сравнить аналитическую чувствительность микроскопии (нативного и окрашенного препаратов), культурального посева, ПЦР и НАСБА;

4. Оценить эффективность лабораторной диагностики трихомониаза на биологическом материале, полученном от пациентов, исходя из значений аналитической чувствительности методов выявления T.vaginalis.

Научная новизна

Впервые проведено сравнение аналитической чувствительности методов амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР и НАСБА) и рутинных методов диагностики трихомонадной инфекции (микроскопия нативного и окрашенного препаратов, микробиологический посев).

Впервые в отечественной лабораторной практике разработана методика для выделения РНК T.vaginalis на основе реакции транскрипционной амплификации NASBA в режиме реального времени.

Использование разработанной методики на основе ПЦР позволяет оптимизировать и повысить качество лабораторной диагностики трихомонадной инфекции.

Практическая значимость работы

Разработаны методики на основе высокочувствительных и специфичных методов амплификации нуклеиновых кислот, которые увеличивают эффективность диагностики трихомонадной инфекции. Методика НАСБА может быть использована для решения вопросов, связанных с получением дискор-дантных результатов получаемых при совместном использовании метода ПЦР и традиционных методов выявления трихомонад (микроскопии и куль-турального посева).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Разработана методика ПЦР для диагностики урогенитального трихомониаза с высокими показателями чувствительности и специфичности.

2. Разработана методика НАСБА для диагностики урогенитального трихомониаза с высокими показателями чувствительности и специфичности.

3. Аналитическая чувствительность разработанных методик на основе технологий ПЦР и НАСБА достоверно выше, чем у методов микроскопии и культурального посева.

Реализация и внедрение результатов исследования.

На основе разработанных методик созданы наборы реагентов: «Ампли-Сенс Trichomonas vaginalis-FL», «АмплиСенс T.vaginalis-PHBOTECT», которые зарегистрированы Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ и внесены в государственный реестр изделий медицинского назначения и медицинской техники.

Материалы проведенных в ходе работы исследований входят в программу сертификационного цикла усовершенствования «ПЦР — диагностика инфекционных заболеваний» на базе ФБУН Центральный НИИ эпидемиологии Роспотребнадзора и НМАПО им. П.Л. Шупика МЗ Украины.

Апробация и публикация материалов исследования.

Основные положения диссертации обсуждены на:

• IX Всероссийском съезде дерматовенерологов, 7-10 июня 2005 (г. Москва)

• Международной конференции «Фундаментальные науки - биотехнологии и медицине», 3-7 сентября 2006 (г. Новосибирск)

• Международной научно-практической конференции «Геномные технологии в медицине и медицинское образование на рубеже веков» 19-20 мая 2006 (г. Алматы, Казахстан)

• 23rd IUSTI-Europe Conference on Sexually Transmitted Infections and HIV/AIDS, 11-14 октября 2007 (г. Дубровники, Хорватия)

• VI Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Генодиагностика инфекционных болезней - 2007» 2830 ноября 2007 (г. Москва)

• 11th IUSTI World Congress, 9-12 ноября, 2009 (г. Кейп-Таун, Южная Африка)

• Научно-практической конференции молодых учёных «Диагностика, профилактика и лечение инфекционных болезней», 24 ноября 2009 (г. Москва)

• Научно-практической конференция «Молекулярная диагностика инфекционных болезней», 26 мая 2010 (г. Москва)

• VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика -2010», 24-26 ноября 2010 (г. Москва)

• 20th EADV Congress, 20-24 ноября 2011, (г. Лиссабон, Португалия)

• Всероссийской научной конференции «Фундаментальная медицина: от науки к технологиям», 15-16 декабря 2011 (г. Санкт-Петербург)

• XII Всероссийском съезде дерматовенерологов и косметологов, 26-26 июня 2012 (г. Москва)

Публикации

По теме диссертации опубликовано 20 печатных работ, в том числе 5 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем

Диссертация представлена на 154 страницах, включая 38 рисунков, 16 таблиц, список литературы и приложения. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 4 главы собственных наблюдений, обсуждения полученных результатов с выводами. Список использованной литературы включает 41 отечественных и 139 зарубежных источников.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Рыжих, Павел Геннадьевич

132 ВЫВОДЫ

1. Разработана стандартизованная методика выявления ДНК T.vaginalis (протокол экстракции нуклеиновых кислот с контролем его эффективности, олигонуклеотидные праймеры и зонды, условия амплификации, контрольные образцы) для диагностики трихомониаза, на основе метода ПЦР в реальном времени.

2. Разработана стандартизованная методика выявления РНК T.vaginalis (протокол экстракции нуклеиновых кислот с контролем его эффективности, олигонуклеотидные праймеры и зонды, условия амплификации, контрольные образцы) для диагностики трихомониаза, на основе метода НАСБА в реальном времени.

3. Установлено, что аналитическая чувствительность методов амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР и НАСБА) достоверно выше (14 кл/мл), чем у метода микроскопии окрашенного и нативного препаратов (105 кл/мл) и у метода культивирования T.vaginalis (104 кл/мл).

4. Установлено, что при использовании разработанных методик на основе МАНК T.vaginalis выявляется дополнительно в 57,1% и 39,5% биологических образцов, в которых концентрация возбудителя достоверно ниже, чем аналитическая чувствительность микроскопического и культурального методов соответственно.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для постановки диагноза урогенитального трихомониаза у мужчин и женщин рекомендуется использование метода ПЦР, обладающего высокой чувствительностью и специфичностью независимо от локализации инфекционного процесса, его длительности, наличия или отсутствия клинических проявлений и их выраженности.

2. Разработанная методика на основе технологии НАСБА может использоваться как независимый метод диагностики урогенитального трихомониаза. Рекомендуется для решения вопросов, связанных с получением дис-кордантных результатов при совместном использовании метода ПЦР и традиционных методов выявления трихомонад (микроскопии и культурального посева) и оценки эффективности проведенной терапии.

134

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Рыжих, Павел Геннадьевич, 2013 год

1. Анчупане И.С. Урогенитальный трихомониаз и смешанные трихомо-надно-гонококко-хламидийные инфекции: Автореф. дис. .канд. мед. наук / И.С. Анчупане М., 1992 - 17 с.

2. Авкобян В.А. Рациональная терапия инфекций, передаваемых половым путем/В.А. Авкобян//Журнал «Consiliummedicum»-2000. -Т.2, №4 — С.161.

3. Ашмарин П.И. Статистические методы в микробиологических исследованиях / П.И. Ашмарин, А.А. Воробьев //. JL: - 1962. - 180 с.

4. Бутов Ю.С. Проблемы лабораторной диагностики мочеполового трихо-мониаза / Ю.С. Бутов, Е.Ю. Горина // Вестник последипломного медицинского образования. -2001.-№ 1.- С.82.

5. Васильев М.М. Особенности клиники мочеполового трихомониаза, совершенствование диагностики и лечения: Автореф. дис. .д-ра. мед. наук / М.М. Васильев.- М., 1990.- 28 с.

6. Воробьева Н.Е Динамика выявления Chlamydia trachomatis в ходе лечения урогенитальной хламидийной инфекции доксициклином (Юнидок-сом Солютаб®) /Н.Е. Воробьева с соавт. // Трудный пациент. 2006 - Т. 4, №5.-С. 31-34.

7. Делекторский В.В. Смешанные трихомонадно-микоплазменные инфекции у женщин/ В.В. Делекторский, Г.Н. Яшкова, Д.Х. Джалилов // Вестн. дерматол 1985.-№ 8.-С. 28-31.

8. Дмитриев Г. А. Мочеполовой трихомониаз (клинико-лабораторное обследование и ведение пациентов) / Г.А. Дмитриев, Н. И. Сюч //.- М.: Медицинская книга, 2005 128 с.

9. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогениталь-ных инфекций / Г.А. Дмитриев II — М.: Медицинская книга, 2007 332 с.

10. Долгов В. В. Лабораторная диагностика мужского бесплодия / В. В. Долгов с соавт. //.- Тверь: Триада, 2006 146 с.

11. Дьяченко А.И. Частота выявления хронического простатита при инфекциях, передаваемых половым путем / А.И. Дьяченко, М.Л. Амозов // Инфекции, передаваемые половым путем 2001 - № 5 — С. 18-19.

12. Ермоленко Д. К. Урогенитальный трихомониаз: Пособие для врачей / Д. К. Ермоленко с соавт. //. -СПб-Великий Новгород, 2007. 96 с.

13. Иванова М.А. Анализ заболеваемости населения Российской Федерации инфекциями, передаваемыми половым путем, за период с 1997 по 2008 гг./ М.А. Иванова с соавт. // Социальные аспекты здоровья населения— 2009.-Т. 11, № 3.

14. Ильин И.И. Негонококковые уретриты у мужчин / И.И. Ильин II М.: Медицина, 1991.-228 с.

15. Клименко Б. В. Трихомониаз мужчин, женщин и детей / Б. В. Клименко с соавт. //.-СПб.: Сюжет, 2001 192 с.

16. Клименко Б.В. Трихомониаз / Б.В. Клименко //.-М.: Медицина, 1987159 с.

17. Козлюк А.С. Цитоморфологическая диагностика урогенитального три-хомониаза / А.С. Козлюк, В.А. Козлюк // Инфекции, передаваемые половым путем-2001-№ 6.-С.26-29.

18. Мавзютов А. Р. Сравнительная оценка информативности методов лабораторной диагностики трихомониаза у мужчин / А.Р. Мавзютов с соавт. // Российский журнал кожных и венерический болезней — 2010 — №5 — С. 51-54.

19. Межевитинова Е. А. Трихомонадный вульвовагинит: диагностика и лечение / Е. А. Межевитинова // Consilium medicum 1999 - Т.7, № 6-С.482-88.

20. Морева Ж.Г. Особенности гетероморфизма Trichomonas vaginalis у больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза при трихомониазе / Ж.Г. Морева с соавт. // Клиническая дерматология и венерология- 2009.- №6 С. 43-49.

21. Мустафина Г.Р. Информативность методов диагностики ургенитального трихомониаза и обоснование показаний к применению ПЦР в реальном времени: Автореф. дис. канд. мед. наук / Г.Р. Мустафина Уфа, 2010 — 24 с.

22. Овчинников Н.М. Ультраструктура возбудителей венерических заболеваний и ее клиническое значение / Н.М. Овчинников, В.В. Делектор-ский//.-М.: Медицина, 1986.-224 с.

23. Приказ Минздрава СССР от 4 декабря 1986 г. №1570 «Об улучшении выявления больных гонореей и трихомониазом в акушерских и гинекологических отделениях (палатах, кабинетах), женских консультациях и урологических кабинетах поликлиник».-М 1986.

24. Приказ Минздрава РФ от 23.12.03 г. №398 «Об утверждении перечня приказов Минздрава СССР, признанных не действующими на территории Российской Федерации, по разделу «Охрана материнства и детства».- М-2003.

25. Рюмин Д. В. Современные аспекты диагностики мочеполового трихомониаза / Д. В. Рюмин // Российский журнал кожных и венерических болезней.- 2009,- №1.- С. 31-39.

26. Савичева А.М. Использование метода прямой микроскопии урогени-тальных мазков на амбулаторном приёме с целью оптимизации диагностики урогенитальных инфекций / A.M. Савичева с соавт. // Трудный пациент.- 2008.- №1.- С. 9-12.

27. Сапожкова Ж.Ю. Диагностическое значение лабораторных мтодов выявления урогентального трихомоноза у мужчин / Ж.Ю. Сапожкова // Вестник последипломного медицинского образования 2009 - №3^1-С. 50-51.

28. Скрипкин Ю.К. Инфекции, передаваемые половым путем: практическое руководство / Ю.К. Скрипкин, Г.Я. Шарапов, Г.Д. Селисский //.-М.: МЕДпрессиоформ, 2001- 368 с.

29. Слюсаренко Т.П. Лабораторный практикум по микробиологии пищевых производств / Т.П. Слюсаренко //.-М.: Легкая и пищевая промышленность, 1984.-208 с.

30. Соколовский Е.В. Клиническая интерпретация результатов микроскопического метода диагностики урогенитальных инфекций. Рекомендации для врачей / Е.В. Соколовский, В.И. Кисина, A.M. Савичева //.- СПб-2010.-88 с.

31. Сосновцева О.П. Паранодулярное введение препаратов при лечении ШИШ "За" и "Против" / О.П. Сосновцева // Материалы 8-го Всероссийского съезда дерматовенерологов - М - 2001- С. 98-99.

32. Теличко И. Н. Особенности диагностики мочеполового трихомониаза / И. Н. Теличко с соавт. // Клиническая дерматология и венерология — 2006 -№3.-С. 17-20.

33. Теличко И.Н. Перспективы серологической диагностики трихомониаза / И.Н. Теличко с соавт. // Медицинская иммунология 2007 - № 2-3- С. 249-250.

34. Тиктинский О.Л. Андрология / О.Л. Тиктинский, В.В. Михайлиниченко //. М.: Медиа Пресс, 1999. - 431 с.

35. Фриго Н.В. Лабораторная диагностика ИППП в Российской Федерации. Результаты национального исследования / Н.В. Фриго с соавт. // Вестник дерматологии и венерологии. 2008. - 5. - С. 33-41.

36. Чураков А.А. Трихомониаз актуальные вопросы лабораторной диагностики / А.А. Чураков с соавт. // Современные проблемы науки и образования.- 2012,- № 2,- С. 83-92

37. Шипицына Е.В. Оценка методов амплификации нуклеиновых кислот для диагностики трихомониаза / Е.В. Шипицына, Е.А. Золотоверхая, А.Н. Григорьев // Журнал акушерства и женских болезней. 2011. - Т. 60, №2. - С. 73-9.

38. Щербакова Н.И. Моделирование смешанной хламидийно-трихомонадной инфекции "in vitro" / Н.И. Щербакова, Е.Е. Брагина //. -М.-1982.-С. 19-22.

39. Ярыгин В.Н. Биология / В.Н. Ярыгин //. М.: Высш. шк., 2000. - Т2.

40. Abd-Elsalam Kamel A. Bioinformatic tools and guideline for PCR primer design / A. Abd-Elsalam Kamel // African Journal of Biotechnology. 2003. -Vol.2, №5.-P. 91-95.

41. Abonyi A. Examination of nonflagellate and flagellate round forms of Trichomonas vaginalis by transmission electron microscopy / A. Abonyi // Appl Parasitol. -1995. Vol.36, №4 - P. 303-10.

42. Ackers J. P. Immunologic aspects of human trichomoniasis/ J. P. Ackers-Trichomonads parasitic in humans / Edited by В. M. Honigberg. N.Y.: Springer-Verlag, 1990.

43. Arnold L.JJr. Assay formats involving acridinium-ester-labeled DNA probes / L.J.Jr. Arnold et al. // Clin Chem. 1989. - Vol.35, №8. - P. 1588-94.

44. Arroyo R. Signalling of Trichomonas vaginalis for amoeboid transformation and adhesion synthesis follows cytoadherence / R. Arroyo et al. // Mol. Microbiol. -1993. -Vol.7, №2. P. 299-309.

45. Bachmann L.H. Duration of persistence of gonococcal DNA detected by ligase chain reaction in men and women following recommended therapy for uncomplicated gonorrhea / L.H. Bachmann et al. // J. Clin. Microbiol. -2002. Vol.40, №10. - P. 3596-601.

46. Bianchi A. Kinetics of Chlamydia trachomatis clearance in patients with azithromycin, as assessed by first void urine testing by PCR and transcription-mediated amplification / A. Bianchi et al. // Sex. Transm. Dis. -1998. -Vol.25, №7.-P. 366-7.

47. Bignell C. 2009 European (IUSTI/WHO) Guideline on the Diagnosis and Treatment of Gonorrhoea in Adults / C.Bignell // Int. J. STD AIDS 2009 .Vol.20, №7.-P. 453-57.

48. Birch D. E. Simplified hot start PCR / D. E. Birch // Nature. -1996. -Vol.381, №6581. -P. 445-6.

49. Birch L. A comparison of nucleic acid amplification techniques for the assessment of bacterial viability / L. Birch et al. // Lett. Appl. Microbiol. -2001.-Vol.33, №4.-P. 296-301.

50. Bonnet G. Thermodynamic basis of the enhanced specificity of structured DNA probes. / G. Bonnet et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1999. -Vol.96, №11.-P. 6171-6.

51. Boom R. Rapid and simple method for purification of nucleic acids / R. Boom et al. // JCM. 1990. - Vol.28, №3. - P. 495-503.

52. Borchardt K. A. A comparison of the sensitivity of the InPouch TV, Diamond's and Trichosel media for detection of Trichomonas vaginalis / K. A. Borchardt et al. // Genitourin Med. -1997. -Vol.73, №4. P. 297-8.

53. Caliendo A.M. Real-time PCR improves detection of Trichomonas vaginalis infection compared with culture using self-collected vaginal swabs / A.M. Caliendo et al. // Infect. Dis. Obstet. Gynecol. -2005. -Vol.13, №3. P. 14550.

54. Cangelosi G.A. Detection of rifampin- and ciprofloxacin-resistant Mycobacterium tuberculosis by using species-specific assays for precursor rRNA / G.A. Cangelosi et al. // Antimicrob. Agents. Chemother. -1996. -Vol.40, №8. -P. 1790-5.

55. Carlton J.M. Draft genome sequence of the sexually transmitted pathogen Trichomonas vaginalis / J.M. Carlton et al. // Science. -2007. -Vol.315, №5809.-P. 207-12.

56. Cassol S. Quantification of human immunodeficiency virus type 1 RNA from dried plasma spots collected on filter paper / S. Cassol et al. // JCM. -1997. -Vol.35, №11.-P. 2795-801.

57. CDC Screening Tests To Detect Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae Infections — 2002 // Morbidity and Mortality Weekly Report. -2002. RR-15 : Vol.51.

58. Chan A.B. NASBA and other transcription-based amplification methods for research and diagnostic microbiology / A.B. Chan, J.D. Fox // Reviews in Medical Microbiology. 1999. - №10. - P. 185-196.

59. Chou Q. Prevention of pre-PCR mis-priming and primer dimerization improves low-copy-number amplifications / Q.Chou et al. // Nucleic Acids Res. -1992. Vol.20, №7. - P. 1717-23.

60. Coombs O.K. An analysis of the proteinases of Trichomonas vaginalis by PAAG electrophoresis / O.K. Coombs, M.I. North // Parasitology. 1983. -№86.-P. 1-6.

61. Cotch M.F. Trichomonas vaginalis associated with low birth weight and preterm delivery. The Vaginal Infections and Prematurity Study Group. / M.F. Cotch et al. // Sex Transm. Dis.- 1997.- Vol.24, №6.- P. 353-60.

62. Crucitti T. Comparison of culture and different PCR assays for detection of Trichomonas vaginalis in self-collected vaginal swab specimens / T. Crucitti et al. // Sex Transm Infect. -2003. -Vol.79, №5. P. 393-8.

63. Cuschieri K.S. Human papillomavirus type specific DNA and RNA persistence-implications for cervical disease progression and monitoring /K.S. Cuschieri, M.J. Whitley, H.A. Cubie // J. Med. Virol. -2004. -Vol.73, №1. -P. 65-70.

64. Deiman B. Characteristics and applications of nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) / B. Deiman, P. van Aarle, P. Sillekens // Mol Bio-technol. 2002. -Vol.20, №2. - P. 163-79.

65. Diamond L S. In vitro cultivation of the Trichomonadidae: a state of the art review / L S. Diamond // Acta Univ Carol-Biol. 1986. - №30. - P. 221228.

66. Dieffenbach C.W. General concepts for PCR primer design / C.W. Dieffen-bach, T.M. Lowe, G.S. Dveksler // PCR Methods Appl. -1993. -Vol.3, №3. -P. S30-7.

67. Donovan B. Sexually transmissible infections other than HIV / B. Donovan // Lancet.- 2004.- № 363.- P. 545-56.

68. Fiori P.L. The flagellated parasite Trichomonas vaginalis: new insights into cytopathogenicity mechanisms (Review) / P.L. Fiori, P. Rapelli, M.F. Addis // Microbes Infect. -1999. -Vol.1, №2. P. 149-56.

69. Fouts A.C. Trichomonas vaginalis: réévaluation of its clinical presentation and laboratory diagnosis / A.C. Fouts, S.J. Kraus // J Infect Dis. -1980. -Vol.141, №2.-P. 137-143.

70. Garber G.E. Immunogenic proteins of Trichomonas vaginalis as demonstrated by the immunoblot technique / G.E. Garber, E.M. Proctor, W.R. Bowie // Infect Immun. -1986. -Vol.51, №1. -P. 250-3.

71. Garber G.E. Cell culture compared with broth for detection of Trichomonas vaginalis / G.E. Garber, L. Subau, M. Roy // J Clin Microbiol. -1987. -Vol.25, №7. p. 1275-9.

72. Gardner W.A. Trichomonas vaginalis in the prostate gland / W.A. Gardner, D.E. Culberson, B.D. Bennett // Arch. Pathol. Lab. Med.- 1986.- Vol.110, №5.-P. 430-2.

73. Gentry G.A. Isolation and differentiation of herpes simplex virus and Trichomonas vaginalis in cell culture / G.A. Gentry, N. Lawrence, W. Lushbaugh // J Clin Microbiol. -1985. -Vol.22, №2. P. 199-204.

74. Greijer A.E. Multiplex real-time NASBA for monitoring expression dynamics of human cytomegalovirus encoded IE1 and pp67 RNA / A.E. Greijer et al. // J Clin Virol. -2002. Vol.24, №1-2. - P. 57-66.

75. Guatelli J.C. Isothermal, in vitro amplification of nucleic acids by a multienzyme reaction modeled after retroviral replication / J.C. Guatelli et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. -1990. -Vol.87, №5. P. 1874-8.

76. Hale A.D. Comparison of four RNA extraction methods for the detection of small round structured viruses in faecal specimens / A.D. Hale, J. Green, D.W. Brown // J Virol Methods. -1996. -Vol.57, №2. P. 195-201.

77. Happich D. Application of the TaqMan-PCR for genotyping of the prothrombin G20210A mutation and of the thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase mutation / D. Happich et al. // Thromb Haemost. 2000. - Vol.84, №1. - P. 144-5.

78. Hardy P.H. Prevalence of six sexually transmitted disease agents among pregnant inner-city adolescents and pregnancy outcome / P.H. Hardy et al. // Lancet.- 1984.-№ 2(8398).-P. 333-7.

79. Heath J.P. Behaviour and pathogenicity of Trichomonas vaginalis in epithelial cell cultures: a study by light and scanning electron microscopy / J.P. Heath // Br J Vener Dis. -1981. -Vol.57, №2. P. 106-17.

80. Heine P. Trichomonas vaginalis: a reemerging pathogen / P. Heine, J.A. McGregor // Clin Obstet Gynecol. -1993. Vol.36,№1. - P. 137-44.

81. Higuchi R. Kinetic PCR analysis: real-time monitoring of DNA amplification reactions / R. Higuchi et al. II Biotechnology (N.Y.). -1993. Vol.11, №9. -P. 1026-30.

82. Hobbs M.M. Methods for detection of Trichomonas vaginalis in the male partners of infected women: implications for control of trichomoniasis / M.M. Hobbs et al. // J Clin Microbiol. -2006. -Vol.44, №11.- P. 3994-9.

83. Hobbs M.M. Trichomonas vaginalis as a cause of urethritis in Malawian men / M.M. Hobbs et al. // Sex Transm Dis. -1999. -Vol.26, №7. P. 381-7.

84. Holland P.M. Detection of specific polymerase chain reaction product by utilizing the 5'-3' exonuclease activity of Thermus aquaticus DNA polymerase / P.M. Holland et al. // Proc Natl Acad Sei U S A. -1991. -Vol.88, №16. -P. 7276-80.

85. Honigberg B. M. Structure / B.M. Honigberg // Trichomonads Parasitic In Humans.-N.Y.: Springer-Verlag, 1990.

86. Honinberg B.M. Structure of Trichomonas vaginalis Donn'e / B.M. Honin-berg, V.M. King // J Parasitol. -1964. №50. - P. 345-64.

87. Horton R.M. AmpliGrease: "hot start" PCR using petroleum jelly / R.M. Horton, B.L. Hoppe, B.M. Conti-Tronconi // Biotechniques. 1994. -Vol.l6,№l. - P. 42-3.

88. Huggins G.R. Vaginal odors and secretions / G.R. Huggins, G. Preti // Clin Obstet Gynecol. -1981. -Vol.24, №2. P. 355-77.

89. Huppert J.S. Rapid antigen testing compares favorably with transcription-mediated amplification assay for the detection of Trichomonas vaginalis in young women / J.S. Huppert et al. // Clin Infect Dis. -2007. -Vol.45, №2. -P. 194-8.

90. James J.A. Is trichomoniasis often associated with bacterial vaginosis in pregnant adolescents? / J.A. James et al. // Am J Obstet Gynecol. 1992. -Vol.166, №3.-P. 859-63.

91. Jordan J.A. TaqMan-based detection of Trichomonas vaginalis DNA from female genital specimens / J.A. Jordan, D. Lowery, M. Trucco // J Clin Microbiol. -2001. -Vol.39, №11. P. 3819-22.

92. Kaydos-Daniels S.C. The use of specimens from various genitourinary sites in men, to detect Trichomonas vaginalis infection / S.C. Kaydos-Daniels et al. // J Infect Dis. -2004. -Vol.189, №10. P. 1926-31.

93. Kaydos-Daniels S.C. Validation of a urine-based PCR-enzyme-linked immunosorbent assay for use in clinical research settings to detect Trichomonas vaginalis in men / S.C. Kaydos-Daniels et al. // J Clin Microbiol. -2003. -Vol.41, №1.-P. 318-23.

94. Keer J.T. Molecular methods for the assessment of bacterial viability / J.T. Keer, L. Birch // J Microbiol Methods. -2003. -Vol.53, №2. P. 175-83.

95. Kengne P. Trichomonas vaginalis: repeated DNA target for highly sensitive and specific polymerase chain reaction diagnosis / P. Kengne et al. // Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). -1994. -Vol.40, №6. -P. 819-31.

96. Kievits T. NASBA isothermal enzymatic in vitro nucleic acid amplification optimized for the diagnosis of HIV-1 infection / T. Kievits et al. // J Virol Methods. -1991. -Vol.35, №3. P. 273-86.

97. Kingston M.A. 'Shelf life' of Trichomonas vaginalis / M.A. Kingston, D. Bansal, E.M. Carlin // Int J STD AIDS. -2003. -Vol.14, №1. P. 28-9.

98. Krieger J.N. Natural history of urogenital trichomoniasis in men / Krieger J.N. et al. / J.N. Krieger et al. // J Urol. -1993. -Vol.149, №6. P. 1455-8.

99. Lawing L.F. Detection of trichomonosis in vaginal and urine specimens from women by culture and PCR / L.F. Lawing, S.R. Hedges, J.R. Schwebke // J Clin Microbiol. -2000. -Vol.38, №10. P. 3585-8.

100. Leone G. Molecular beacon probes combined with amplification by NASBA enable homogeneous, real-time detection of RNA / G. Leone et al. // Nucleic Acids Res. -1998. -Vol.26, №9. P. 2150-5.

101. Lewin B. Genes VI./ B.Lewin //. Dallas : Oxford University Press, 1997. -P. 1260.

102. Lindmark D.G. Carbohydrate, energy and hydrogenosomal metabolism of Tritrichomonas foetus and Trichomonas vaginalis / D.G. Lindmark et al. // J Protozool. -1989. -Vol.36, №2. P. 214-6.

103. Lirosi G. Effects of hormonal changes in the vaginal environment in the treatment of vaginitis especially due to Trichomonas / G. Lirosi, A. Guarascio // Minerva Ginecol. -1972. -Vol.24, №1. P. 23-7.

104. Lisi P.J. Monoclonal-antibody-based enzyme-linked immunosorbent assay for Trichomonas vaginalis / P.J. Lisi et al. // J Clin Microbiol.- 1988 Vol.26, №9.-P. 1684-6

105. Livak K. J. SNP genotyping by the 5'-nuclease reaction / K.J. Livak // Methods Mol Biol. 2003. - №212. - P. 129-47.

106. Livak K. Guidelines for designing TaqMan fluorogenic probes for 5' nuclease assays / K. Livak, J. Marmaro, S. Flood // ABI PRISM Sequence. Detection Systems Users Bulletin. 1995.

107. Lossick J.G. Epidemiology of urogenital trichomoniasis / J.G. Lossick / Trichomonads parasitic in humans / Edited by Honigberg B. M. N.Y.: Springer-Verlag, 1989.

108. Madico G. Diagnosis of Trichomonas vaginalis infection by PCR using vaginal swab samples / G. Madico et al. // J Clin Microbiol. -1998. -Vol.36, №11. -P. 3205-10.

109. Mason P.R. Serodiagnosis of Trichomonas vaginalis infection by the indirect fluorescent antibody test / P.R. Mason // J Clin Pathol. -1979. -Vol.32, №12. -P. 1211-5.

110. Mathews H.M. Evaluation of two serological tests for Trichomonas vaginalis infection / H.M. Mathews, G.R. Healy // J Clin Microbio. -1983. -Vol.17, №5.-P. 840-3.

111. Mayta H. 18S ribosomal DNA-based PCR for diagnosis of Trichomonas vaginalis / H. Mayta et al. // J Clin Microbiol. -2000. -Vol.38, №7. P. 2683-7.

112. McAdam A J. Discrepant analysis: how can we test a test? / A.J. McAdam // J Clin Microbiol. -2000. -Vol.38, №6. P. 2027-9.

113. McKillip J.L. rRNA stability in heat-killed and UV-irradiated enterotoxigenic Staphylococcus aureus and Escherichia coli 0157:H7 / J.L. McKillip, L.A. Jaykus, M. Drake // Appl Environ Microbiol. -1998. -Vol.64, №11. P. 4264-8.

114. Meade J.C. Molecular characterization of a sarcoplasmic-endoplasmic reticulum Ca+2 ATPase gene from Trichomonas vaginalis / J.C. Meade et al. // J Eukaryot Microbiol. -1997. -Vol.44, №5. P. 480-6.

115. Mhlanga M.M. Using molecular beacons to detect single-nucleotide polymorphisms with real-time PCR / M.M. Mhlanga, L. Malmberg // Methods. -2001. -Vol.25, №4. P. 463-71.

116. Miller W.C. Bias in discrepant analysis: when two wrongs don't make a right / W.C. Miller//J Clin Epidemiol. -1998. -Vol.51, №3. -P. 219-31.

117. Moore D.F. Amplification of rRNA for assessment of treatment response of pulmonary tuberculosis patients during antimicrobial therapy / D.F. Moore et al. // J Clin Microbiol. -1996. -Vol.34, №7. P. 1745-9.

118. Morre S.A. Determination of Chlamydia trachomatis prevalence in an asymptomatic screening population: performances of the LCx and COBAS Amplicor tests with urine specimens. / S.A. Morre et al. // J Clin Microbiol. -1999. -Vol.37, №10. P. 3092-6.

119. Muller M. Biochemistry of Trichomonas vaginalis / M. Muller / Trichomon-ads Parasitic In Humans / Edited by Honigberg B.M. N.Y. : SpringerVerlag, 1990.

120. Muller M. Energy metabolism of protozoa without mitochondria / M. Muller // Annu Rev Microbiol. 1988. - №42. - P. 465-88.

121. Ovyn C. Typing of Mycoplasma pneumoniae by nucleic acid sequence-based amplification, NASBA / C. Ovyn et al. // Mol Cell Probes. -1996. -Vol.10, №5.-P. 319-24.

122. Paces J. Cloning and characterization of a repetitive DNA sequence specific . for Trichomonas vaginalis / J. Paces, V. Urbankovä, P. Urbanek // Mol Biochem Parasitol. -1992. -Vol.54, №2. P. 247-55.

123. Patel S.R. Systematic review of diagnostic tests for vaginal trichomoniasis / S.R. Patel et al. // Infect Dis Obstet Gynecol. 2000. -Vol.8, №5-6. - P. 24857.

124. Paterson B.A. The tampon test for trichomoniasis: a comparison between conventional methods and a polymerase chain reaction for Trichomonas vaginalis in women / B.A. Paterson et al. // Sex Transm Inf. —1998. -Vol.74, №2.-P. 136-9.

125. Petrin D. Clinical and microbiological aspects of Trichomonas vaginalis / D. Petrin et al. // Clin Microbiol Rev. -1998. -Vol.11, №2. P. 300-17.

126. Philip A. An agar culture technique to quantitative Trichomonas vaginalis from women / A. Philip, P. Carter-Scott, C. Rogers // J Infect Dis. -1987. -Vol.155, №2.-P. 304-8.

127. Pillay A. Comparison of a TaqMan-based real-time polymerase chain reaction with conventional tests for the detection of Trichomonas vaginalis / A. Pillay et al. // Sex Transm Infect. -2007. -Vol.83, №2. P. 126-9.

128. Riley D.E. Development of a polymerase chain reaction-based diagnosis of Trichomonas vaginalis / D.E. Riley et al. // J Clin Microbiol. -1992. -Vol.30, №2.-P. 465-72.

129. Roche Diagnostic Systems Amplicor HIV-lMonitor test. Version 1.5. Instructions for users Книга.-N.Y., 1997.

130. Rodrigo A.G. Quantitation of target molecules from polymerase chain reaction-based limiting dilution assays / A.G. Rodrigo et al. // AIDS Res Hum Retroviruses. -1997. -Vol.13, №9. P. 737-42.

131. Roth A.M. Changing sexually transmitted infection screening protocol will result in improved case finding for trichomonas vaginalis among high-risk female populations / A.M. Roth et al. // Sex Transm Dis. -2011. -Vol.38, №5. P. 398-400.

132. Ryu J.S. Diagnosis of trichomoniasis by polymerase chain reaction / J.S. Ryu et al. // Yonsei Med J. -1999. -Vol.40, №1. P. 56-60.

133. Sambrook J. Molecular Cloning: A Laboratory Manual / J. Sambrook, D.W. Russell //. -N.Y.: CSHL Press, 2001.

134. Samuelson A. Development and application of a new method for amplification and detection of human rhinovirus RNA / A. Samuelson et al. // J Virol Methods. -1998. -Vol.71, №2. P. 197-209.

135. SantaLucia J. Jr. A unified view of polymer, dumbbell, and oligonucleotide DNA nearest-neighbor thermodynamics. / J. Jr. SantaLucia // Proc Natl Acad Sei USA.- 1998. -Vol.95, №4. P. 1460-5.

136. Schirm J. Trichomonas vaginalis detection using real-time TaqMan PCR / J. Schirm et al. // J Microbiol Methods. -2007. -Vol.68, №2. P. 243-7.

137. Schmid G. P. Evaluation of six media for the growth of Trichomonas vaginalis from vaginal secretions / G. P. Schmid et al. // J Clin Microbiol. -1989. -Vol.27, №6.-P. 1230-3.

138. Schwebke J.R. Improved detection by DNA amplification of Trichomonas vaginalis in males / J.R. Schwebke, L.F. Lawing // J Clin Microbiol. -2002. -Vol.40, №10.-P. 3681-3.

139. Shaio M.F. Colorimetric one-tube nested PCR for detection of Trichomonas vaginalis in vaginal discharge / M.F. Shaio, P.R. Lin, J.Y. Liu // J Clin Microbiol. -1997. -Vol.35, №1. P. 132-8.

140. Shepard R.N. Quantitation of human immunodeficiency virus type 1 RNA in different biological compartments / R.N. Shepard et al. // J Clin Microbiol. -2000. -Vol.38, №4. P. 1414-8.

141. Sheridan G.E. Detection of mRNA by reverse transcription-PCR as an indicator of viability in Escherichia coli cells / G.E. Sheridan et al. // Appl Environ Microbiol. -1998. -Vol.64, №4. P. 1313-8.

142. Sibau L. Enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of trichomoniasis in women / L. Sibau et al. // Sex Transm Dis. -1987. -Vol.14, №4. P. 216-20.

143. Smith A. TV or not TV / A. Smith et al. // Sex Transm Infect. -2002. -Vol.78, №3. -P. 185-6.

144. Sorvillo F. Trichomonas vaginalis, HIV, and African-Americans / F. Sorvillo et al. // Emerg Infect Dis.- 2001.- Vol.7, №6.- P. 927-32.

145. Spence M.R. The clinical and laboratory diagnosis of Trichomonas vaginalis infection / M.R. Spence et al. // Sex Transm Dis. . -1980. -Vol.7, №4. P. 168-71.

146. Stefanovic J. Trichomonas in girls during the period of hormonal inactivity / J. Stefanovic // Bratisl Lek Listy.- 1990.- Vol.91, №10.- P. 780-2.

147. Steinbüchel A. Anaerobic pyruvate metabolism of Tritrichomonas foetus and Trichomonas vaginalis hydrogenosomes / A. Steinbüchel, M. Müller // Mol Biochem Parasitol. -1986. -Vol.20, №1. P. 57-65.

148. Steinbüchel A. Glycerol, a metabolic end product of Trichomonas vaginalis and Tritrichomonas foetus / A. Steinbüchel, M. Müller // Mol Biochem Parasitol. -1986. -Vol.20, №1. P. 45-55.

149. Thomason J.L. Comparison of four methods to detect Trichomonas vaginalis / J.L. Thomason et al. //J Clin Microbiol. -1988. -Vol.26, №9. P. 1869-70.

150. Torian B.E. Specific and common antigens of Trichomonas vaginalis detected by monoclonal antibodies / B.E. Torian et al. // Infect Immun.- 1984-Vol.43, №1.-P. 270-5.

151. Tsourkas A. Hybridization kinetics and thermodynamics of molecular beacons / A. Tsourkas et al. // Nucleic Acids Res. -2003. -Vol.31, №4. P. 1319-30.

152. Tyagi S. Molecular beacons: probes that fluoresce upon hybridization / S. Tyagi, F.R. Kramer // Nat Biotechnol. -1996. -Vol.14, №3. P. 303-8.

153. Warton A. Structure of trichomonads as revealed by scanning electron microscopy / A. Warton, B.M. Honigberg // J Protozool. -1979. -Vol.26, №1. -P. 56-62.

154. Wasserheit J.N. Epidemiological synergy. Interrelationships between human immunodeficiency virus infection and other sexually transmitted diseases / J.N. Wasserheit // Sex Transm Dis.- 1992 Vol.19, №2.- P. 61-77.

155. Wendel K.A. Use of urine polymerase chain reaction to define the prevalence and clinical presentation of Trichomonas vaginalis in men attending an STD clinic / K.A. Wendel et al. // Sex Transm Infect. -2003. -Vol.79, №2. P. 151-3.

156. Widjojoatmodjo M.N. Nucleic acid sequence-based amplification (NASBA) detection of medically important Candida species / M.N. Widjojoatmodjo et al. // J Microbiol Methods. -1999. -Vol.38, №1-2. P. 81-90.

157. Wolner-Hanssen P. Clinical manifestations of vaginal trichomoniasis / P. Wolner-Hanssen et al. // JAMA. -1989. -Vol.261, №4. P. 571-6.

158. Workowski K.A. Long-term eradication of Chlamydia trachomatis genital infection after antimicrobial therapy. Evidence against persistent infection / K.A. Workowski et al. // JAMA. 1993. -Vol.270, №17. - P. 2071-5.

159. Wu D.Y. The effect of temperature and oligonucleotide primer length on the specificity and efficiency of amplification by the polymerase chain reaction / D.Y. Wu et al. // DNA Cell Biol. -1991. -Vol.10, №3. P. 233-8.

160. Zuker M. Mfold web server for nucleic acid folding and hybridization prediction / M. Zuker // Nucleic Acids Res. 2003. -Vol.31, №13. - P. 3406-15.