Оптимизация детекции чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулезным препаратам второго ряда (циклосерину и ПАСК) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Дюжик Елена Сергеевна

• Дюжик Елена Сергеевна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Дюжик Елена Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы исследования

Цель работы

Задачи исследования

Научная новизна исследования

Теоретическая и практическая значимость работы

Методология и методы исследования

Клинические изоляты M.tuberculosis, выделенные от больных во

Владимирской области

Получение чистой культуры M.tuberculosis

Определение лекарственной чувствительности M.tuberculosis

Личный вклад автора в получение результатов

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Степень достоверности и апробация результатов

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1. Эпидемиологическая ситуация по туберкулезу в Российской Федерации

1.2. Основные эпидемиологические показатели по туберкулезу на территории Владимирской области

1.3. Противотуберкулезные препараты

1.3.1. Противотуберкулезные препараты первого ряда

1.3.2. Противотуберкулезные препараты второго ряда

1.4. Методы определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis

1.5. Методология определения критических концентраций

противотуберкулезных препаратов

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 2. Характеристика лекарственной чувствительности штаммов M.tuberculosis, выделенных от больных на территории владимирской области в 2010-2015 г.г

ГЛАВА 3. Определение Минимальных ингибирующих концентраций циклосерина и ПАСК в жидкой среде Middlebrook 7Ш на анализаторе BACTEC MGIT

3.1. Определение минимальных ингибирующих концентраций циклосерина в жидкой среде Middlebrook 7Ш на анализаторе BACTEC MGIT960 штаммов M.tuberculosis, чувствительных к циклосерину по ТЛЧ на плотной среде

3.2. Определение минимальных ингибирующих концентраций циклосерина в жидкой среде на анализаторе BACTEC MGIT 960 штаммов M.tuberculosis, устойчивых к циклосерину по ТЛЧ на плотной среде

3.3. Определение минимальных ингибирующих концентраций ПАСК в жидкой среде Middlebrook 7Ш на анализаторе ВАСТЕС MGIT 960 штаммов M.tuberculosis, чувствительных к ПАСК по ТЛЧ на плотной среде

3.4. Определение минимальных ингибирующих концентраций ПАСК в жидкой среде на анализаторе ВАСТЕС MGIT 960 штаммов M.tuberculosis,

устойчивых к ПАСК по ТЛЧ на плотной среде

ГЛАВА 4. Определение критических концентраций циклосерина и ПАСК для тестирования лекарственной чувствительности M.tuberculosis методом пропорций при культивировании в жидкой среде Middlebrook 7^9 на анализаторе ВАСТЕС MGIT

4.1. Определение критической концентрации циклосерина

4.2. Определение критической концентрации ПАСК

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования

Туберкулез многие годы остается одной из глобальных проблем здравоохранения мирового сообщества и занимает второе место среди причин смерти от инфекционных заболеваний в мире после вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). В большинстве случаев туберкулез, при правильной организации диагностики и лечения, - излечимое заболевание. Однако, несмотря на то, что большинство смертей от туберкулеза можно предотвратить, число погибших от болезни остается недопустимо высоким, и, по данным ВОЗ, нет ни одного региона, свободного от туберкулеза [133].

Необходимо отметить, что туберкулез, вызванный чувствительными к противотуберкулезным препаратам микобактериями, излечивается в большинстве случаев, тогда как вызванный лекарственно-устойчивыми микобактериями требует особого отношения как в плане диагностики, так и по интенсивности, срокам и стоимости лечения. Подсчитано, что в среднем в 15 странах Евросоюза плюс Кипр, Мальта и Словения стоимость лечения лекарственно-чувствительных форм туберкулеза составляет €10282, тогда как затраты на лечение форм туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью составляют €57213 и €170744 соответственно [58].

Проблема устойчивости к лекарственным средствам создает большую угрозу для борьбы с туберкулезом и остается предметом серьезной озабоченности в отношении глобальной безопасности в области здравоохранения. В 2014 г., согласно расчетам ВОЗ, произошло примерно 480 000 новых случаев заболевания туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ, MDR, Multi Drug Resistance), которая определяется как устойчивость, как минимум, к изониазиду и рифампицину (двум основным лекарственным препаратам, применяемым в лечении туберкулеза).

Успешные результаты лечения во всем мире были зарегистрированы у 48% пациентов, которым проводилась терапия. В 92 странах были зарегистрированы случаи туберкулеза с широкой лекарственной устойчивостью (ШЛУ, XDR,

Extensively Drug Resistance), являющейся наиболее тяжелой и приводящей к летальному исходу формой болезни. Широкая лекарственная устойчивость -сочетанная устойчивость M.tuberculosis к изониазиду, рифампицину, любому препарату из группы фторхинолонов и к одному из группы инъекционных препаратов: канамицину и/или амикацину и/или капреомицину, независимо от наличия устойчивости к другим противотуберкулезным препаратам [59, 60, 75, 113, 128, 130, 132].

В последние два десятилетия в Российской Федерации сохраняется напряженная эпидемиологическая ситуация по туберкулезу, а также продолжается рост лекарственно-устойчивого туберкулеза среди впервые выявленных и ранее леченных больных [20, 44, 120].

Определение лекарственной чувствительности микобактерий является узловым фактором при выборе оптимальной химиотерапии туберкулеза, прогноза и своевременной коррекции лечения, а также служит важным показателем эпидемиологической напряженности по туберкулезу в отдельных регионах, в масштабах стран и мира [7, 18, 64, 76, 128].

Адекватный результат лечения лекарственно-устойчивых форм туберкулеза может быть достигнут за счет введения в стандартные режимы химиотерапии антибактериальных препаратов из числа резервных лекарственных средств -циклосерина и пара-аминосалициловой кислоты (ПАСК). При этом исход лечения во многом зависит от уровня и скорости формирования устойчивости к препаратам у микобактерий туберкулеза и от времени начала лечения: эффективность химиотерапии существенно повышается при назначении препаратов, определенных по результатам исследования чувствительности культур M.tuberculosis, в активную фазу химиотерапии [7, 18, 64, 76, 128].

В связи с этим необходимы совершенствование и разработка новых тестов для ускоренного определения полного спектра фенотипической чувствительности возбудителя к противотуберкулезным препаратам для назначения адекватной химиотерапии в активную фазу лечения. К ускоренным методам детекции фенотипической лекарственной чувствительности M.tuberculosis относится

проведение исследований в жидкой питательной среде на автоматизированном анализаторе учета роста микобактерий BACTEC MGIT

В настоящее время ВОЗ рекомендованы критические концентрации почти для всех противотуберкулезных препаратов при определении лекарственной чувствительности на плотных и жидких питательных средах. Однако, чувствительность к циклосерину и ПАСК определяется только традиционным методом абсолютных концентраций на плотных питательных средах, что значительно удлиняет сроки получения клиницистами результатов анализа и коррекции схемы лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью препаратами второго ряда [129].

Необходимость совершенствования метода детекции лекарственной чувствительности к резервным противотуберкулезным препаратам определяет актуальность проведенного исследования. Установление критических концентраций для циклосерина и ПАСК позволит проводить ускоренное определение лекарственной чувствительности методом пропорций в жидкой среде на автоматизированном анализаторе учета роста микобактерий BACTEC MGIT

Степень разработанности темы исследования

Определение чувствительности МЛиЪетси1о$1$ к противотуберкулезным на плотных питательных средах широко применяется в РФ в клинико-диагностических лабораториях фтизиатрического профиля с момента появления первых противотуберкулезных препаратов, а критические концентрации для метода абсолютных концентраций на плотных питательных средах регламентированы в Приказе МЗ РФ №109 от 21 марта 2003 г. Внедрение в лабораторную практику системы BACTEC MGIT 960, позволяющей существенно сократить сроки культуральной диагностики, потребовало разработки адекватных для данной системы критических концентраций для противотуберкулезных препаратов. В результате мультицентровых исследований, проведенных по 3-этапному протоколу, рекомендованному Институтом по клиническим и

лабораторным стандартам, США (Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI) при установлении критических концентраций [93], были отработаны критические концентрации для 5-ти препаратов 1 ряда и 9-ти препаратов 2 ряда [70, 74, 91, 97, 102,108, 129]. Однако, для циклосерина и ПАСК критические концентрации для проведения теста лекарственной чувствительности методом пропорций в системе BACTEC MGIT 960 до сих пор не отработаны, несмотря на предпринятые рядом исследователей попытки [74, 97, 108].

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация детекции чувствительности Mycobacterium tuberculosis к противотуберкулезным препаратам второго ряда (циклосерину и ПАСК)»

Цель работы

Совершенствование ускоренного определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis к противотуберкулезным препаратам второго ряда - циклосерину и ПАСК.

Задачи исследования

1. Изучить чувствительность к противотуберкулезным препаратам методом абсолютных концентраций на плотной среде Левенштейна-Йенсена или методом пропорций в жидкой среде использованных в работе штаммов M.tuberculosis, выделенных от пациентов из Владимирской области в 2010 - 2015 гг.

2. Создать рабочую коллекцию клинических изолятов M.tuberculosis с лекарственной устойчивостью/чувствительностью к циклосерину и ПАСК по результатам тестирования лекарственной чувствительности на плотной среде Левенштейна-Йенсена.

3. Определить минимальные ингибирующие концентрации циклосерина и ПАСК в жидкой среде Middlebrook 7Н9 на анализаторе BACTEC MGIT 960 у штаммов M.tuberculosis с лекарственной устойчивостью/чувствительностью к циклосерину и ПАСК, установленной по результатам теста лекарственной чувствительности на плотной среде Левенштейна-Йенсена.

4. Установить критические концентрации циклосерина и ПАСК для ускоренного тестирования устойчивости/чувствительности штаммов M.tuberculosis методом пропорций в жидкой среде Middlebrook 7Н9 на анализаторе BACTEC MGIT 960.

Научная новизна исследования

На основании проведенного исследования охарактеризован спектр лекарственной устойчивости к противотуберкулезным препаратам популяции современных штаммов М.ШЬвгси1о818, выделенных от больных с хроническим течением туберкулеза и рецидивами во Владимирской области в 2010-2015 гг., который представлен 43 вариантами профилей резистентности. Шесть профилей (МБ, ИЯЕСар, ИЯЕСарКап, НЯЕСарОА, ^ЕСарКапОЙ и HRECapKanOflCsPas) были наиболее распространены и относились к категории множественной или широкой лекарственной устойчивости. При этом циклосерин и ПАСК входили в структуру только одного из этих профилей, представленного 8-ю препаратами, который встречался у 5,22% исследованных штаммов.

Получены данные о степени чувствительности к циклосерину и ПАСК (по определению минимальных ингибирующих концентраций в жидкой среде MiddleЬrook 7Н9) современных штаммов МЛиЬвгси1о818, циркулирующих во Владимирской области. Показано, что диапазон минимальных ингибирующих концентраций для штаммов M.tuЬerculosis, чувствительных к циклосерину, составлял 4-15 мкг/мл, устойчивых к циклосерину - 20-40 мкг/мл, чувствительных к ПАСК - 0,5-2 мкг/мл, устойчивых к ПАСК - от 4 и до более 40 мкг/мл.

Впервые на коллекции региональных штаммов M.tuЬerculosis с множественной или широкой лекарственной устойчивостью проанализировано сочетание чувствительности/устойчивости к препаратам резервного ряда и показано, что 84,48% штаммов были чувствительны к циклосерину и 84,08% штаммов чувствительны к ПАСК, что обосновывывает перспективы применения этих антибиотиков для лечения лекарственно-устойчивого туберкулеза.

Для проведения ускоренного теста лекарственной чувствительности M.tuЬerculosis к различным противотуберкулезным препаратам методом пропорций в жидкой среде Middlebrook 7Н9 на ВАСТЕС MGIT 960 впервые разработаны критические концентрации циклосерина (15,0 мкг/мл) и ПАСК (2,0 мкг/мл), что будет способствовать ускорению получения результатов теста, по

сравнению с традиционным методом абсолютных концентраций на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена.

Показано, что критические концентрации циклосерина и ПАСК, используемые при определении лекарственной чувствительности на плотных и жидких питательных средах, отличаются. Установленные для жидкой среды Middlebrook 7H9 критическая концентрация циклосерина (15 мкг/мл) была в 2 раза ниже и ПАСК (2 мкг/мл) в 2 раза выше, чем концентрации этих препаратов, применяемые при постановке тестов лекарственной чувствительности методом абсолютных концентраций на плотной питательной среде Левенштейна-Йенсена (30 мкг/мл и 1,0 мкг/мл, соответственно). Учитывая, что метод пропорций является более точным для детекции устойчивости, полученные данные свидетельствуют о перспективности и целесообразности применения культивирования M.tuberculosis в жидкой питательной среде в системе BACTEC MGIT 960 в практическом здравоохранении.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные данные о характере резистентности M. tuberculosis формируют подходы к пониманию эволюции возбудителя в развитии резистентности к противотуберкулезным препаратам второго ряда.

Результаты по спектру и уровню резистентности к циклосерину и ПАСК штаммов M.tuberculosis могут быть использованы в рамках эпидемиологического надзора для изучения нарастания резистентности штаммов M.tuberculosis, циркулирующих в регионе, и прогнозирования временных тенденций ее дальнейшего распространения.

Полученные в исследовании данные указывают на накопление в регионе бациллярного ядра хронических форм туберкулеза с широким спектром резистентности, что, в перспективе, может негативно отразиться на эпидемиологической ситуации по туберкулезу.

Разработанные методологические подходы для определения критических концентраций циклосерина и ПАСК для проведения тестов лекарственной

чувствительности штаммов M.tuЬerculosis в системе ВАСТЕС MGIT 960 могут быть применены для определения критических концентраций других противотуберкулезных препаратов.

Разработка критических концентраций циклосерина и ПАСК расширила возможности ускоренного тестирования лекарственной чувствительности одновременно ко всему спектру противотуберкулезных препаратов второго ряда методом пропорций в жидкой среде на анализаторе ВАСТЕС MGIT 960, что значительно повышает эффективность лечения туберкулеза с множественной и широкой лекарственной устойчивостью за счет сокращения сроков тестирования чувствительности и начала адекватной химиотерапии.

Назначение схемы лечения согласно результатам тестов лекарственной чувствительности предотвращает развитие резистентности и распространение штаммов M.tuЬerculosis с множественной и широкой лекарственной устойчивостью, что особенно актуально в настоящее время.

Собрана рабочая коллекция клинических изолятов M.tuЬerculosis с различной чувствительностью к противотуберкулезным препаратам 1 и 2 ряда, в том числе к препаратам резервного ряда - циклосерину и ПАСК, которая может быть использована для изучения механизмов развития резистентности к этим препаратам, создания молекулярно-генетических тест-систем для диагностики устойчивого туберкулеза, а также тестирования противотуберкулезной активности вновь синтезированных лекарственных препаратов.

Данные, полученные в диссертационной работе, используются в курсе лекций по современным методам микробиологической диагностики в Учебном центре Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза", на кафедре фтизиатрии лечебного факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования "Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова" Минздрава России, на межфакультетской кафедре фтизиопульмонологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального

образования "Московский государственный медико-стоматологический университет имени А.И. Евдокимова" Минздрава России. В отделе фтизиатрии и детско-подростковом отделе Федерального государственного бюджетного научного учреждения "Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза" для повышения эффективности лечения туберкулеза с множественной лекарственной устойчивостью за счет ускоренного тестирования лекарственной чувствительности к резервным препаратам.

Методология и методы исследования

Предметом данного исследования стали 230 культур M.tuberculosis, полученные в результате первичного посева патологического материала от больных туберкулезом на плотные и жидкие питательные среды.

Для достижения цели исследования - совершенствования метода ускоренного определения лекарственной чувствительности M.tuberculosis к противотуберкулезным препаратам второго ряда - циклосерину и ПАСК, были сформированы подходы и назначены ориентиры в проведении исследования, выбраны средства и методы, поставлены задачи, определяющие наилучший результат. В процессе работы руководствовались Приказом МЗ РФ № 109 от 21.03.2003 и Приказом МЗ РФ № 951 от 29 декабря 2014 г. [25, 26].

Анализатор ВАСТЕС MGIT 960 в рутинную практику лаборатории Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Владимирской области "Центр специализированной фтизиопульмонологической помощи" введен с 2008 года. При работе с анализатором ВАСТЕС MGIT 960 за основу брали рекомендации производителя [103, 111].

Все взятые в исследование культуры, полученные с плотных и жидких питательных сред (п=230) охарактеризовали по лекарственной чувствительности к циклосерину и ПАСК методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена [25]. После рекультивации архивированных клинических изолятов в жидкой среде, на 3-й день от получения положительного результата, когда микробный пул в пробирке равен 106 КОЕ/мл, культуры сеяли на ВАСТЕС

MGIT 960 для определения минимальных ингибирующих концентраций и критических концентраций к циклосерину и ПАСК.

Для проведения исследований in vitro использовали фармакопейные субстанции циклосерина (Sigma-Aldrich, Китай) и p-аминосалициловой кислоты (Sigma-Aldrich, Китай).

Клинические изоляты M.tuberculosis, выделенные от больных во Владимирской области В 2010-2015 годах все больные, от которых получен материал для исследования, находились на лечении в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Владимирской области "Областной противотуберкулезный диспансер" (г. Владимир) и в двух районных противотуберкулезных стационарах: Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Владимирской области "Ковровский противотуберкулезный диспансер" (г. Ковров, с круглосуточными койками - 30 коек) и Государственном бюджетном учреждении здравоохранения Владимирской области "Муромский противотуберкулезный диспансер" (г. Муром, без круглосуточных коек) - на данный момент единое учреждение Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Владимирской области "Центр специализированной фтизиопульмонологической помощи". Также материал для исследования поступал из противотуберкулезного отделения Государственного казенного учреждения здравоохранения Владимирской области "Областная психиатрическая больница №2" (п. Содышка, на 80 коек), Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Владимирской области "Патакинская областная противотуберкулезная больница" (с. Патакино, на 90 коек) и детского отделения (на 30 коек) на базе Государственного бюджетного учреждения здравоохранения Владимирской области "Городская больница №2 г. Владимира" (г. Владимир).

При планировании схемы исследования сделано заключение, что в работу необходимо взять образцы, преимущественно от больных с подозрением на рецидив или хроническое течение туберкулеза, ранее леченых пациентов, в том

числе исследуемыми препаратами, так как из их числа с большей вероятностью могли быть получены культуры M.tuberculosis, устойчивые к препаратам циклосерину и ПАСК.

На этом основании отобрано 1320 образцов диагностического материала, посеянного на плотные и жидкие питательные среды, из которых было выделено 230 штаммов M.tuberculosis (17.4%), полученных от 230 человек с подозрением на наличие туберкулезной инфекции, с вероятным рецидивом или с хроническим течением туберкулеза органов дыхания и внелегочной локализации. Все полученные штаммы депонировали в пластиковые криопробирки и хранили при -80°С. Для получения точных оценочных критериев было проведено более 3000 исследований с использованием отобранных для исследования 230 клинических штаммов M.tuberculosis.

Получение чистой культуры M. tuberculosis Для получения чистой культуры из диагностического материала использовали два метода - посев на плотные яичные питательные среды Левенштейна-Йенсена (Л-Й) и Финна-II (952 образца диагностического материала, по 952 посева на каждую среду одновременно) и посев в жидкую среду Middlebrook 7H9 c последующей инкубацией в системе для автоматизированного учета роста микобактерий BACTEC MGIT 960 (368 образцов диагностического материала).

Посев на плотные среды Перед посевом диагностический материал (952 образца) подвергали гомогенизации и деконтаминации. Для этого в пробирку к мокроте, экссудату и другому негомогенному материалу добавляли щелочь - 10% раствор трехзамещенного фосфорнокислого натрия, затем встряхивали. Жидкие материалы предварительно центрифугировали и работали с осадком. Все реактивы, используемые при приготовлении растворов для обработки диагностических материалов имели степень очистки "химически чистый". Флакон с материалом инкубировали 18 - 20 часов в термостате при 37 °C. После этого

каждый образец центрифугировали при 3000 g в течение 15 минут. Удаляли супернатант и продолжали работу с осадком. Затем стерильно добавляли несколько капель 6% соляной кислоты до получения нейтрального значения pH. Посев проводили инокуляцией равных объемов материала (примерно по 0,5 - 0,6 мл) в 2 пробирки с яичными средами - Левенштейна-Йенсена и Финна-II с учетом стерильности [25].

Засеянные пробирки закрывали ватно-марлевыми пробками и помещали в наклонном положении в горизонтальные штативы - "диваны", затем в термокомнату при температуре 37 °C. По истечении первых 2 - 3 суток инкубации ватно-марлевые пробки заменяли герметичными резиновыми. После этого засеянные пробирки переводили в вертикальное положение. Инкубацию проводили в течение 12 недель при обязательном еженедельном просмотре.

При выделении культуры кислотоустойчивых микобактерий проводили количественную оценку интенсивности роста и микроскопическое подтверждение кислотоустойчивости выделенного микроорганизма при окраске по Ziehel-Neelsen.

Интенсивность роста оценивали по 3- х балльной системе:

(1+) - 1 - 20 КОЕ - "скудное" бактериовыделение;

(2+) - 21 - 100 КОЕ - "умеренное" бактериовыделение;

(3+) - > 100 КОЕ - "обильное" бактериовыделение.

Регистрировали число КОЕ, выросших на каждой из пробирок с разными питательными средами. Идентификацию проводили с помощью теста на наличие роста на среде с натрием салициловокислым (1 мг/мл) и роста на среде, содержащей 2 мкг/мл гидразида тиофен-2 карбоксиловой кислоты [25].

Посев в жидкую среду Middlebrook 7H9

Все этапы работы проводили в ламинарном боксе II класса защиты. Первичный посев материала (368 образцов) с помощью анализатора BACTEC MGIT 960 проводили согласно стандартному протоколу производителя (Becton Dickinson, США) [72, 111]. Патологический материал подвергали деконтаминации при

помощи раствора, готового к применению BD MycoPrep (Cat. No. 240862, 240863, Becton Dickinson, США). Это стандартный метод предпосевной обработки диагностического материала для технологии MGIT, рекомендованный CDC как наиболее оптимальный метод деконтаминации материала [72].

Одновременно работали максимум с 10-ю образцами. Каждый раз готовили свежий раствор BBL MycoPrep NALC-NaOH для разжижения и деконтаминации мокроты, добавляли в 50 мл пробирку с образцом мокроты в соотношении 1:1 к объему образца. Для предотвращения перекрестной контаминации при работе в шкафу биобезопасности одновременно работали только с одной открытой пробиркой с образцом. Содержимое пробирки перемешивали в течение 15 секунд при помощи «Вортекса», оставляли пробирку со смесью при комнатной температуре на 15 минут. Затем доливали объем образца в пробирке до 50 мл стерильным фосфатным буфером (BBL MycoPrep Phosphate Buffer, Becton Dickinson, США). Перемешивали. Центрифугировали при скорости 3000g в центрифуге с охлаждением в течение 20 минут. В шкафу биобезопасности аккуратно сливали супернатант. Добавляли к осадку 0,8-1 мл стерильного фосфатного буфера и тщательно ресуспендировали осадок с помощью пипетки. Полученный материал использовали для посева в пробирку MGIT (0,5 мл); для посева на плотные питательные среды (по 0,2-0,3 мл); для приготовления мазка (0,1-0,15 мл). Если материал не использовался немедленно, он был заморожен при -20°С [111].

Для максимального выделения микобактерий из диагностического материала параллельно с посевом в жидкую среду осуществляли посев на плотную яичную среду Финн II. После осмотра пробирки MGIT подписывали лабораторными номерами, избегая штрих-кода. Инокулировали 0,5 мл ресуспендированного осадка в подготовленную пробирку MGIT и 0,1- 0,25 мл в пробирку с плотной питательной средой Финн II. Для исключения перекрестной контаминации и поддержания оптимальной концентрации углекислого газа в пробирках, всегда открывали только одну пробирку на минимально возможное время [111]. После инокуляции пробирки MGIT, производили посев 0,1-0,25 мл

осадка в пробирку с плотной яичной средой. Все засеянные пробирки MGIT помещали в прибор согласно рекомендациям производителя. Ежедневно проверяли показания прибора на предмет наличия положительных и отрицательных результатов. Протокол исследования на автоматизированной системе ВАСТЕС MGIT 960 - 42 дня. Для подтверждения положительных результатов и контроля отрицательных результатов с каждой положительной пробирки делали мазок, окрашивали по методу Ziehel-Neelsen [25].

Определение лекарственной чувствительности M. tuberculosis

Определение лекарственной чувствительности на плотной питательной среде

методом абсолютных концентраций Спектр лекарственной устойчивости микобактерий определяли в соответствии со стандартными операционными процедурами, описанными в Приказе МЗ РФ №109 от 23 марта 2003 г.

Всем культурам M.tuberculosis, полученным с плотной среды (198 изолятов) определена ЛЧ методом абсолютных концентраций на среде Л-Й к противотуберкулезным препаратам (ПТП) 1 и 2 ряда. Для культур, полученных с жидкой среды, была определена чувствительность методом абсолютных концентраций на среде Л-Й к циклосерину и ПАСК.

Готовили бактериальную суспензию культуры, содержащую 500 млн. микробных тел в 1 мл, что соответствует оптическому стандарту мутности № 5. Суспензию разводили в 10 раз стерильным физиологическим раствором и проводили посев на среды с лекарственными препаратами (чистые субстанции Sigma-Aldrich, Китай). Инкубировали при 37° C. Результат определения лекарственной устойчивости учитывали на 21 день после посева. При скудном росте в контрольной пробирке все пробирки с препаратами оставляли еще на 1 - 2 недели в термостате до получения выраженного роста в контроле, после чего выдавали окончательный ответ. Культуру считали чувствительной к данной концентрации препарата, если в пробирке со средой, содержащей препарат, выросло менее 20 колоний при обильном росте в контрольной пробирке.

Культуру считали устойчивой к той концентрации препарата, которая содержится в данной пробирке, если в пробирке со средой выросло более 20 колоний при обильном росте в контроле [25].

Препараты и критические концентрации, использованные для определения ЛЧ, приведены в таблице 1 [25].

Таблица 1 - Критические концентрации противотуберкулезных препаратов, использующиеся при определении ЛЧ на среде Левенштейна-Йенсена

Препараты Критическая концентрация, мкг/мл

изониазид 1.0

рифампицин 40.0

этамбутол 2.0

офлоксацин 2.0

капреомицин 50.0

канамицин 30.0

циклосерин 30.0

ПАСК 1.0

Все манипуляции с диагностическим материалом (предпосевная подготовка, посев, приготовление мазков, процедура субкультивирования, тесты на идентификацию, постановка тестов на лекарственную чувствительность) проводились в шкафу биологической безопасности II класса защиты [25, 34].

Определение лекарственной чувствительности в жидкой среде Middlebrook 7Н9

методом пропорций Определение лекарственной чувствительности к первому и второму ряду противотуберкулезных препаратов проводили всем культурам М. tuberculosis, выросшим на анализаторе BACTEC MGIT 960 (32 изолята).

Определение лекарственной чувствительности на анализаторе BACTEC MGIT

960 к основным препаратам первого ряда Для исследования ЛЧ к стрептомицину, изониазиду, рифампицину и этамбутолу проводили разведение лиофилизированных противотуберкулезных

препаратов, входящих в коммерческий набор (Becton Dickinson, США). Для хранения аликвоты растворов препаратов первого ряда разливали в криопробирки по 0,5-1,0 мл и хранили при температуре не выше -20°С. После размораживания каждую порцию препарата использовали однократно, остатки выбрасывали. После подтверждения мазком выросшей культуры, ее проверяли на чистоту, сделав посев каплей культуральной суспензии на чашку с кровяным агаром. Инкубировали и оценивали рост через 48 часов. При отсутствии роста неспецифической микрофлоры на чашке продолжали определение ЛЧ выделенной культуры МБТ. Для определения ЛЧ к первому ПТП с помощью анализатора BACTEC MGIT 960 в асептических условиях вносили в каждую пробирку 0,8 мл обогатительной добавки ВАСТЕС 960 SIRE Supplement (Becton Dickinson, США). Добавляли по 0,1 мл разведенного лекарственного препарата в соответствующую пробирку при помощи автоматической пипетки, пользуясь отдельным стерильным наконечником для каждого препарата. Оценивали возраст культуры, согласно протоколу производителя [72, 111].

Культуры, возрастом до 2-х суток, тщательно встряхивали на вортексе, оставляли на 5-10 минут для осаждения крупных частиц, далее работали с надосадочной жидкостью. Потом добавляли 0.5 мл суспензии микобактерий в каждую пробирку с содержанием препаратов. Далее готовили 1-е разведение -1:10 (0,5 мл первичной суспензии + 4,5мл стерильного физиологического раствора), на следующем этапе готовили 2-е разведение - 1:100 (0,5 мл суспензии 1 разведения+ 4,5мл стерильного физиологического раствора): засевали 0,5 мл в SIRE - контроль.

Культур возрастом от 2 до 5 суток тщательно встряхивали на вортексе, оставляли на 5-10 минут для осаждения крупных частиц, далее работали с надосадочной жидкостью. Затем готовили 1-ое разведение: разводили первичную суспензию 1:5 - (1 мл первичной суспензии + 4 мл стерильного физ. раствора), засевали по 0,5 мл разведения 1 суспензии микобактерий в каждую пробирку, содержащую препараты. Далее готовили 2-ое разведение и из него 3-е разведение

- 1:500 (0,5 мл суспензии 2 разведения + 4,5мл стерильного физиологического раствора): засевали 0,5 мл в SIRE - контроль.

Препараты и критические концентрации, использованные для определения ЛЧ в системе BACTEC MGIT 960, приведены в таблице 2.

Таблица 2 - Критические концентрации противотуберкулезных препаратов 1 ряда, использующиеся при определении лекарственной чувствительности методом пропорций на жидкой среде Middlebrook 7Ш

Препараты КК, мкг/мл

изониазид 0.1

рифампицин 1.0

этамбутол 5.0

Определение лекарственной чувствительности на анализаторе BACTEC MGIT

960 к препаратам второго ряда Определение лекарственной чувствительности в системе ВАСТЕС МШТ 960 базируется на сравнении роста изолята M.tuberculosis в пробирке, содержащей лекарственный препарат, и образца контроля роста - пробирке без лекарственного препарата. Анализатор ВАСТЕС М01Т 960 в регулярном режиме учитывает изменение флюоресценции в пробирках для определения ЛЧ к противотуберкулезным препаратам первого ряда при концентрациях, определенных компанией ББ. По завершении тестирования прибор сообщает о результатах -«чувствительном» или «резистентном».

Ввиду того, что программное обеспечение прибора рассчитано только на тестирование ЛЧ к препаратам первого ряда, другие лекарственные препараты при инокуляции не будут распознаны прибором. Эта задача решается наличием в приборе встроенной функции приема неустановленных лекарственных препаратов. В этом случае прибор осуществляет проведение теста определения ЛЧ, информирует о его завершении, но не трактует результаты. Трактовка результатов осуществляется вручную. Функция «неустановленного вводимого препарата»

позволяет тестировать любые противотуберкулезные препараты второго ряда [38, 111].

Для постановки тестов лекарственной чувствительности к препаратам второго ряда использовали чистые субстанции (Sigma-Aldrich), с учетом активности препаратов расчеты и разведения осуществляли самостоятельно. Точность навески корректировали объемом растворителя. Все действия по приготовлению рабочих растворов противотуберкулезных препаратов отмечали в протоколе. Аликвоты растворов хранили по 0,6 мл при температуре -20°С. Конечное рабочее разведение препаратов второго ряда вносили в количестве 0,1 мл в пробирку М01Т, содержащей 7,8 мл готовой среды. Технология приготовления микобактериальной суспензии и посев для проведения теста ЛЧ к препаратам второго ряда в анализаторе ВАСТЕС М01Т 960 не отличается от принципа подготовки теста лекарственной чувствительности к препаратам первого ряда [244]. Препараты и критические концентрации, использованные для определения лекарственной чувствительности в системе ВАСТЕС М01Т 960, приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Критические концентрации противотуберкулезных препаратов 2 ряда, использующиеся при определении лекарственной чувствительности методом пропорций на жидкой среде Middlebrook 7Ш

Препараты КК, мкг/мл

канамицин 2.5

капреомицин 2.5

офлоксацин 2.0

Личный вклад автора в получение результатов

Все материалы специальной литературы, план исследования, научные результаты, изложенные в диссертации, собирались и анализировались лично автором. Культуральные исследования на всех этапах написания работы, статистическая обработка и систематизация результатов работы также были проведены лично автором. Итогом проделанной работы, в период с 2011 по 2016 гг. стало определение автором критических концентраций противотуберкулезных

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Дюжик Елена Сергеевна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авдеев, Г.С. Современная бактериологическая диагностика туберкулеза / Г.С. Авдеев, О.М. Залуцкая, П.С. Кривонос, Л.К. Суркова, В.В. Пылишев // Методические рекомендации. - Мн.: БГМУ, 2003. - 22 с.

2. Аляпкина, Ю.С. Разработка технологии ПЦР в реальном времени для экспресс-определения лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам резервного ряда: фторхинолонам, амикацину и капреомицину / Ю.С. Аляпкина, Я.И. Алексеев, Д.А. Варламов, Л.В. Домотенко, Л. К. Шипина, М. А. Владимирский // Туберкулез и болезни легких. - 2014. - № 12. -С. 69-75.

3. Аналитический обзор основных статистических показателей по туберкулезу, используемых в Российской Федерации "Туберкулез в Российский Федерации 2006 г.". - Тверь: Триада, 2007. - 129 с.

4. Аналитический обзор статистических показателей, используемых в Российской Федерации и в мире "Туберкулез в Российский Федерации 2011 г.". -Тверь: Триада, 2013. - 280 с.

5. Беспятых, Ю.А. Определение лекарственной устойчивости и генотипирование клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis при помощи экспериментального набора "ТБ-ТЕСТ" / Ю.А. Беспятых, Е.А. Шитиков, Д.В. Зименков, Е.В. Кулагина, Д.А. Грядунов, Е.Ю. Носова, А.А. Букатина, М.В.Шульгина, В.Ю. Журавлев, Е.Н.Ильина // Пульмонология. - 2013. - № 4. - С. 77-81.

6. Васильева, И. А. Эффективность комплексного лечения больных туберкулезом легких с множественной и широкой лекарственной устойчивостью микобактерий // И.А. Васильева, Т.Р. Багдасарян, А.Г.Самойлова, А.Э. Эргешов // Туберкулез и болезни легких. - 2011. - № 4. - С. 81.

7. Васильева, И. А. Современные подходы к химиотерапии туберкулеза легких / И.А. Васильева, А.Г.Самойлова // Пульмонология. - 2011. - № 3. - С. 108-111.

8. Владимирский, М.А. Применение метода ПЦР в реальном времени для определения и контроля за распространением лекарственно-устойчивых штаммов микобактерий туберкулеза / М.А. Владимирский, Ю.С. Аляпкина, Д.А. Варламов, Я.И. Алексеев, Л.К. Шипина, М.В. Шульгина, Л.В. Домотенко, К.Р. Быкадорова, Н.Н. Гащенко, Л.Б. Ендоурова, О.В. Иванова, Е.А. Ильина, О.А. Левкова, Т.В. Маркова, В.П. Наземцева, Е.П. Павлова, А.И. Полозов, Н.В. Шишкина // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2008. - № 4. - С. 38-44.

9. Всемирная Организация Здравоохранения. Лечение туберкулеза: рекомендации для национальных программ. - ВОЗ. - Женева. - 1998. - Перевод с английского. - 77 с.

10. Всемирная Организация Здравоохранения. Рекомендации по лечению резистентных форм туберкулеза легких. - ВОЗ. - Женева. - 1998. - Перевод с английского. - 47 с.

11. Генерозов, Э.В. Молекулярная характеристика полирезистентных клинических штаммов Mycobacterium tuberculosis из России / Э.В. Генерозов, Т.А. Акопян, В.М. Говорун, Л.Н. Черноусова, Е.Е. Ларионова, С.Н. Савинкова, Т.Г. Смирнова, В.И. Голышевская // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. - 2000. - № 1. - С. 11-17.

12. Грядунов, Д.А. Идентификация штаммов Mycobacterium tuberculosis с одновременным определением их лекарственной устойчивости методом гибридизации на олигонуклеотидных микрочипах / Д.А. Грядунов, В.М. Михайлович, С.А. Лапа, Н.И. Рудинский, В.Е. Барский, А.В. Чудинова, А.С. Заседателев, А.Д. Мирзабеков // Молекулярная генетика. - 2003. - № 4. - С. 23-28.

13. Демихова, О.В. Изучение антимикобактериальной активности сухого экстракта бересты на модели экспериментального туберкулеза / О.В. Демихова, В.В. Балакшин, Г.А. Преснова, И.В. Бочарова, Л.Н. Лепеха, Л.Н. Черноусова, Т.Г. Смирнова, Л.Е. Поспелов, А.Н. Чистяков // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2006. - №1. - С. 55-57.

14. Дубилей, С.А. Молекулярно-генетические методы идентификации лекарственной устойчивости M. tuberculosis / С.А. Дубилей, А.Н.Игнатова, И.Г. Шемякин // Молекулярная генетика. - 2005. - № 1. - С. 3-7.

15. Зименков, Д.В. Анализ генетических детерминант множественной и широкой лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза с использованием олигонуклеотидного микрочипа / Д.В. Зименков, Е.В. Кулагина, О.В. Антонова, С.А. Суржиков, Ю.А. Беспятых, Е.А. Шитиков, Е.Н. Ильина, В.М. Михайлович, А.С. Заседателев, Д.А. Грядунов // Молекулярная биология. - 2014. - № 48(2). - С. 1-14.

16. Касаева, Т.Ч. Туберкулез в Российской Федерации 2012/2013/2014 гг. Аналитический обзор статистических показателей, используемых в Российской Федерации и в мире / Т.Ч. Касаева, Л.А. Габбасова, А.А. Москалев, И.А. Васильева, Ю.В. Михайлова, И.М. Сон, О.Б. Нечаева, С.А. Стерликов, А.В. Гордина, О.В. Обухова, Н.С. Марьина, В.А. Аксенова, М.В. Шилова, С.А. Попов, Е.М. Богородская, С.Е. Борисов, Е.М. Белиловский, И.Д. Данилова, С.В. Слогоцкая, В.Е. Одинцов, В.В. Пунга, П.К. Яблонский, Г.С. Баласанянц, В.Б. Галкин, А.Ю. Мушкин, З.М. Загдын, И.И. Ларионова, Т.Ю. Чебагина, И.В. Щукина, Д.Д. Пашкевич, В.Н. Малахов, Н.И. Мезенцева, Е.В. Заикин // М.: Триада, 2015. - 312 с.

17. Материалы к Государственному докладу «О состоянии санитарно -эпидемиологического благополучия населения в Российской Федерации в 2014 году» по Владимирской области. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Управление Роспотребнадзора по Владимирской области. Владимир, 2015.

18. Мишин, В.Ю. Современные режимы химиотерапии туберкулеза легких, вызванного лекарственно-чувствительными и лекарственно-резистентными микобактериями / В.Ю. Мишин // РМЖ. - 2003. - № 21. - С. 1163.

19. Нечаева, О.Б. Ситуация по туберкулезу и работе противотуберкулезной службы Российской Федерации в 2013 году / О.Б. Нечаева // Федеральный Центр мониторинга противодействия распространению туберкулеза. Режим доступа: http://www.mednet.ru/images/stories/files/CMT/Tb_rf_2013_2.pdf.

20. Нечаева, О.Б. Ситуация по туберкулезу в России в 2015 году / О.Б. Нечаева // Федеральный Центр мониторинга противодействия распространению туберкулеза. Режим доступа: http://mednet.ru/ru/czentr-monitoringa-tuberkuleza/o-czentre.html

21. Нечаева, О.Б. Ситуация по туберкулезу и работе противотуберкулезной службы Российской Федерации в 2014 году / О.Б. Нечаева // Федеральный Центр мониторинга противодействия распространению туберкулеза. Режим доступа: http://www.mednet.ru/images/stories/files/CMT/2014tb.pdf

22. Перельман, М.И. О концепции Национальной Российской программы борьбы с туберкулезом / М.И. Перельман // Проблемы туберкулеза. - 2000. - № 3. - С. 51 - 55.

23. Перельман, М.И. Фтизиатрия / М.И. Перельман, В.А. Корякин, И.В.Богадельникова. - М.: Медицина, 2004. - 520 с.

24. Поляков, А.Е. Определение множественной лекарственной устойчивости M. tuberculosis различными методами / А.Е. Поляков, С.Г. Сафронова, О.И. Скотникова // Проблемы туберкулеза. - 2006. - № 6. - С. 40-42.

25. Приказ Минздрава РФ от 21.03.2003 № 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" - М., 2003. - 347 с.

26. Приказ Минздрава РФ от 29.12.2014 № 951 "Об утверждении методических рекомендаций по совершенствованию диагностики и лечения туберкулеза органов дыхания" - М., 2014. - 44 с.

27. Самойлова, А.Г. Эффективность комплексного лечения больных МЛУ/ШЛУ туберкулезом / А.Г. Самойлова, Т.Р. Багдасарян, Е.Е. Ларионова, И.В. Сороковиков, Л.Н. Черноусова, И.А. Васильева // Всероссийская научно-

практическая конференция с международным участием «Туберкулез с множественной и широкой лекарственной устойчивостью возбудителя: ситуация, проблемы и пути решения». М., 2014. Режим доступа: http://roftb.ru/netcat_files/doks/7Samoilova.pdf

28. Скотникова, О.И. Выявление ДНК микобактерий туберкулезного комплекса (Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis) методом полимеразной цепной реакции («Нестед»-ПЦР) в различных биологических пробах. Метод. рекомендации / О.И. Скотникова, Е.Ю. Носова, Е.Л. Исаева - М., 2001. - 15 c.

29. Скотникова, О.И. Характеристика чувствительности Mycobacterium tuberculosis к рифампицину и изониазиду посредством определения мутаций в генах rpoB, katG, inhA, oxyR, kasA различными молекулярнобиологическими методами / О.И. Скотникова, К.Ю. Галкина, Е.Ю. Носова, М.А. Краснова, А.М. Мороз // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2005. - № 8. - С. 42-45.

30. Стерликов, С.А. Результаты лечения пациентов с туберкулёзом / С.А. Стерликов, В.В. Тестов // Съезд фтизиатров России «Актуальные вопросы противотуберкулезной помощи в Российской Федерации». X съезд Российского общества фтизиатров. - Воронеж, 2015. Режим доступа: http://mednet.ru/images/stories/files/CMT/rez_lecheniya.pdf

31. Страчунский, Л.С. Практическое руководство по антиинфекционной химиотерапии / Л.С. Страчунский, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова - М.: НИИАХ СГМА, 2007. - 586 с.

32. Федеральные клинические рекомендации по организации и проведению микробиологической и молекулярно-генетической диагностики туберкулеза / Л.Н. Черноусова, Э.В. Севастьянова, Е.Е. Ларионова, Т.Г. Смирнова, С.Н. Андреевская, С.А. Попов, В.Ю. Журавлев, Пузанов В.А., А.О. Марьяндышев, Д.В. Вахрушева, М.А. Кравченко, С.Г. Сафонова, И.А. Васильева, А.Э. Эргешов. -Тверь: Триада, 2015. - 46 c.

33. Федеральные клинические рекомендации по диагностике и лечению туберкулеза органов дыхания множественной и широкой лекарственной устойчивостью возбудителя / И.А. Васильева, В.А. Аксенова, А.Э. Эргешов, А.О. Марьяндышев, А.Г. Самойлова, Т.Р. Багдасарян, О.Г. Комиссарова, О.В. Ловачева, А.В. Перфильев, Н.Л. Карпина, С.И. Каюкова, В.А. Стаханов, С.Н. Скорняков, Г.С. Баласанянц, Т.И. Морозова, Р.Ш. Валиев, Н.Е. Казимирова, Б.Я. Казенный, Н.И. Клевно, Л.А. Барышникова, В.А. Пузанов, С.А. Попов. - Тверь: Триада, 2014. - 72 с.

34. Федорова, Л.С. Система инфекционного контроля в противотуберкулезных учреждениях / Л.С. Федорова, В.Г. Юзбашев, С.А. Попов, В.А. Пузанов, Э.В. Севастьянова, В.Г. Акимкин, Н.В. Фролова, Е.Б. Мясникова, Г.В. Волченков, В.А. Проньков, А.В. Наголкин. - Тверь: Триада, 2013. - 192 с.

35. Хоменко, А.Г. Химиотерапия туберкулеза легких / А.Г. Хоменко, М. М. Авербах, В. В. Ерохин. - М., 1980. - 279 с.

36. Хоменко, А.Г. Туберкулез. Руководство для врачей / А.Г. Хоменко. - М., 1996. - 493 с.

37. Чернеховская, Н.Е. Туберкулез на рубеже веков / Н.Е. Чернеховская, А.С. Свистунова, Б.Д. Свистунов. - М., 2000. - 371 с.

38. Черноусова, Л.Н. Стандартные операционные процедуры "Определение чувствительности микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам второго ряда в системе BACTEC MGIT 960/320" / Л.Н. Черноусова, Т.Г. Смирнова, Е.Е. Ларионова, А.Е. Панова, Н.Н. Гащенко, С.Н. Андреевская. - М., 2015. - 35 c.

39. Чуканов В.И. Проблема излечения больных туберкулезом органов дыхания / В.И. Чуканов // Русский медицинский журнал. - 2001. - № 21. - С. 954.

40. Abate, G. Evaluation of a colorimetric assay based on 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT) for rapid detection of rifampicin

resistance in Mycobacterium tuberculosis / G. Abate, R.N. Mshana, H. Miorner // Int .J. Tuberc. Lung. Dis. - 1998. - Vol. 2. - P. 1011-1016.

41. Albert, H. Simple, phagebased (FASTPplaque) technology to determine rifampicin resistance of Mycobacterium tuberculosis directly from sputum / H. Albert, A. Trollip, T. Seaman, R.J. Mole // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2004. - Vol. 8. - P. 1114-1119.

42. Alcaide, F. Evaluation of the BACTEC MGIT 960 and the MB/BacT systems for recovery of mycobacteria from clinical specimens and for species identification by DNA AccuProbe / F. Alcaide, M.A. Benitez, J.M. Escriba, M. Rogelio // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38. - P. 398-401.

43. Angeby, K.A. Rapid and inexpensive drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis with a nitrate reductase assay / K.A. Angeby, L. Klintz, S.E. Hoffner // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40. - P. 553-555.

44. Balabanova, Y. Multidrug-resistant tuberculosis in Russia: clinical characteristics, analysis of second-line drug resistance and development of standardized therapy / Y. Balabanova, M. Ruddy, J. Hubb, M. Yates, N. Malomanova, I. Fedorin, F. Drobniewski // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis.- 2005. - Vol. 24. - P. 136-139.

45. Bazira, J. Use of the GenoType®MTBDRplus assay to assess drug resistance of Mycobacterium tuberculosis isolates from patients in rural Uganda / J. Bazira, B.B. Asiimwe, M.L. Joloba, F. Bwanga, M.I. Matee // BMC Clinical Pathology. - 2010. -Vol. 10 (5). - P. 1472-1476.

46. Bemer, P. Multicenter evaluation of fully automated BACTEC Mycobacteria Growth Indicator Tube 960 system for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis / P. Bemer, F. Palicova, S. Rusch-Gerdes, H.B. Drugeon, G.E. Pfyffer // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40. - P. 150-154.

47. Boehme, C.C. Rapid molecular detection of tuberculosis and rifampin resistance / C.C. Boehme, P. Nabeta, D. Hillemann, M.P. Nicol, S. Shenai, F. Krapp, J. Allen, R. Tahirli, R. Blakemore, R. Rustomjee, A. Milovic, M. Jones, S.M. O'Brien, D.H.

Persing, S. Ruesch-Gerdes, E. Gotuzzo, C. Rodrigues, D. Alland, M.D. Perkins // N. Engl. J. Med. - 2010. - Vol. 363. - P. 1005-1015.

48. Brossier, F. Detection by GenoType MTBDRsl test of complex mechanisms of resistance to second-line drugs and ethambutol in multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis complex isolates / F. Brossier, N. Veziris, A. Aubry, V. Jarlier , W. Sougakoff // J. Clin. Microbiol. - 2010. - Vol. 48. - Vol. 5. - P. 1683-1689.

49. Brunello, F. Comparison of the MB/BacT and BACTEC 460 TB systems for recovery of mycobacteria from various clinical specimens / F. Brunello, F. Favari, R. Fontana // J. Clin. Microbiol. - 1999. - Vol. 37. - P. 1206-1209.

50. Cambau, E. Evaluation of the new MB redox system for detection of growth of mycobacteria / E. Cambau, C. Wichlacz, C. Truffot-Pernot, V. Jarlier // J. Clin. Microbiol. - 1999. - Vol. 37. - P. 2013-2015.

51. Campbell, P. Molecular detection of mutations associated with first- and second-line drug resistance compared with conventional drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis / P. Campbell, G. Morlock, D. Sikeas, T.L.Dalton, B. Metchock, A.M. Starks, D.P. Hooks, L.S. Cowan, B.B. Plikaytis, J.E. Posey // Antimicrob. Agents Chemother. - 2011. - Vol. 55(5). - P. 2032-2041.

52. Canetti, G. Mycobacteria: laboratory methods for testing drug sensitivity and resistance / G. Canetti, S. Froman, J. Grosset, P. Hauduroy, M. Langerová, H.T. Mahler, G. Meissner, D.A. Mitchison, L. Sula // Bull World Health Organ. - 1963. - Vol. 29. -P. 565-578.

53. Canetti, G. Advances in techniques of testing mycobacterial drug sensitivity, and the use of sensitivity tests in tuberculosis control programmes / G. Canetti, W. Fox, A. Khomenko, D.A. Mitchison, N. Rist, N.A.Smelev // Bull World Health Organ. - 1969. -Vol. 41. - P. 21-43.

54. Collins, C.H. Drug susceptibility testing, tuberculosis bacteriology: organization and practice, 2nd ed / C.H. Collins, J.M. Grange, M.D. Yates // ButterworthHeinemann, Oxford, United Kingdom. - 1997. - P. 108.

55. Cooksey, R.C. Characterisation of streptomycin resistance mechanisms among Mycobacterium tuberculosis isolates from patients in New York City / R.C. Cooksey, G.P. Morlock, A. McQueen, S.E. Glickman, J.T. Crawford // Antimicrob. Agents. Chemother. - 1996. - Vol. 40. - P. 1186-1188.

56. Dalton, T. Prevalence of and risk factors for resistance to second-line drugs in people with multidrug-resistant tuberculosis in eight countries: a prospective cohort study / T. Dalton, P. Cegielski, S. Akksilp, L. Asencios, J. Campos Caoili, S.N. Cho, V.V. Erokhin, J. Ershova, M. T. Gler, B.Y. Kazennyy, H.J. Kim, K. Kliiman, E. Kurbatova, C. Kvasnovsky, V. Leimane, M. van der Walt, L.E. Via, G.V. Volchenkov, M.A. Yagui, H. Kang // Lancet. - 2012. - Vol. 380. - P. 1406-1417.

57. Deland, F.H. Early detection of bacterial growth with carbon-14 labeled glucose / F.H. Deland, R.N. Wagner Jr. // Radiology. - 1969. - Vol. 92. - P. 154-155.

58. Diel, R. Costs of tuberculosis disease in the European Union: a systematic analysis and cost calculation / R. Diel, J. Vandeputte, G. Vries, J. Stillo, M. Wanlin, A.Nienhaus // Eur. Respir. J. - 2014. - Vol. 43(2). - P. 554 - 565.

59. Dewan, P. High prevalence of drug-resistant tuberculosis, Republic of Lithuania / P. Dewan, A. Sosnovskaja, V. Thomsen, J. Cicenaite, K. Laserson, I. Johansen, E. Davidaviciene, C. Wells // Int. I Tuberc. Lung. Dis. - 2005. - Vol. 9. - P. 170-174.

60. Dye, C. Worldwide incidence of multidrug-resistant tuberculosis / C. Dye, M.A. Espinal, C.J. Watt, C. Mbiaga, B.G. Williams // J. Infect. Dis. - 2002. - Vol. 185. - P. 1197-1202.

61. Falzon, D. Resistance to fluoroquinolones and second-line injectable drugs: impact on multidrug-resistant TB outcomes / D. Falzon, N. Gandhi, G.B. Migliori, G. Sotgiu, H.S. Cox, T.H. Holtz // Eur. Respir. J. - 2013. - Vol. 42. - P. 156-168.

62. Feuerriegel, S. Thr202Ala in thyA is a marker for the Latin American Mediterranean Lineage of the Mycobacterium tuberculosis Complex rather than para-aminosalicylic acid resistance / S. Feuerriegel, C. Köser, L. Trube, J. Archer, S. Rüsch

Gerdes, E. Richter, S.Niemann // Antimicrob. agents chemother. - 2010. - P. 47944798.

63. Goloubeva, V. Evaluation of Mycobacteria Growth Indicator Tube for direct and indirect drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from respiratory specimens in a Siberian prison hospital / V. Goloubeva, M. Lecocq, P. Lassowsky, F. Matthys, F. Portaels, I. Bastian // J. Clin. Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - P. 1501-1505.

64. Guidelines for Clinical and Operational Management of Drug-Resistant Tuberculosis // International Union Against Tuberculosis and Lung Diseases (IUTLD). -Paris, 2013. - 264 p.

65. Hall, L. Evaluation of the Sensititre MycoTB Plate for susceptibility testing of the Mycobacterium tuberculosis complex against first- and second line agents / L. Hall, K.P. Jude, S.L. Clark, K. Dionne, R. Merson, A. Boyer, N.M. Parrish, N.L. Wengenack // J. Clin. Microbiol. - 2012. - Vol. 50. - P. 3732-3734.

66. Hausdorfer, J. E-test for susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis / J. Hausdorfer, E. Sompek, F. Allerberger, M.P. Dierich, S. RuschGerdes // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 1998. - Vol. 2. - P. 751-755.

67. Heifets, L. Mycobacteriology laboratory/ L. Heifets // Clin. Chest. Med. - 1997. -Vol. 18. - P. 35-53.

68. Huang, T. Antimicrobial susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: comparisons of the MGIT 960 and BACTEC 460 systems / T. Huang, H. Tu, S.S. Lee, W.K. Huang, Y.C. Liu // Ann Clin. Lab. Sci. - 2002. - Vol. 32. -P.142-147.

69. Idigoras, P. Comparison of the automated nonradiometric Bactec MGIT 960 system and Lo'wenstein-Jensen, Coletsos, and Middlebrook 7H11 solid media for recovery of mycobacteria / P. Idigoras, X. Beristain, A. Iturzaeta, D. Vicente, E. Perez-Trallero // Eur. J. Clin. Microb. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 19. - P. 350-354.

70. Kam, K.M. Determination of critical concentrations of second-line antituberculosis drugs with clinical and microbiological relevance / K.M. Kam, A.

Sloutsky, C.W. Yip, N. Bulled, K.J. Seung, M. Zignol, M. Espinal, S.J. Kim // J. Tuberc. Lung. Dis. - 2010. - Vol. 14(3). - P. 282-288.

71. Kantos, F. Evaluation of the fully automated BACTEC MGIT 960 system for the susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs: a multicenter study / F. Kantos, M. Maniati, C. Castopoulos, Z. Gitti, S. Nicolaou, E. Petinaki, S. Anagnostou, I. Tselentis, A.N. Maniatis // J. Microbiol. Methods. - 2004. - Vol. 56. - P. 292-294.

72. Kent, P.T. Public health mycobacteriology: a guide for the level III laboratory / P. T. Kent., G. P. Kubica // Publication CDC 86-8230. U.S. Department of Health, Education, and Welfare, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, Ga. -1995. - P. 159-184.

73. Kearns, A.M. A rapid polymerase chain reaction technique for detecting M. tuberculosis in a variety of clinical specimens / A.M. Kearns, R. Freeman, M. Steward, J.G. Magee // J. Clin. Pathol. - 1998. - Vol. 51. - P. 922-924.

74. Kim, H. Evaluation of MGIT 960 System for the Second-Line Drugs Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis / H. Kim, M.Seo, Y.K. Park, J.I. Yoo, Y.S. Lee, G.T. Chung, S. Ryoo // Tuberc Res Treat. - 2013. - Article ID 108401.

75. Kruuner, A. Spread of drugresistant pulmonary tuberculosis in Estonia / A. Kruuner, S.E. Hoffner, H. Sillastu, M. Danilovits, K. Levina, S.B. Svenson, S. Ghebremichael, T. Koivula, G. Kallenius // J. Clin. Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - P. 3339-3345.

76. Lange, C. Management of patients with multidrugresistant/extensively drug-resistant tuberculosis in Europe: a TBNETconsensus statement / C. Lange, I. Abubakar, J.C. Alffenaar, G. Bothamley, J.A. Caminero, A.C.C. Carvalho, K.C. Chang, L. Codecasa, A. Correia, V. Crudu, P. Davies, M. Dedicoat, F. Drobniewski, R. Duarte, C. Ehlers, C. Erkens, D. Goletti, G. Günther, E. Ibraim, B. Kampmann, L. Kuksa, W. de Lange, F. van Leth, J. van Lunzen, A. Matteelli, D. Menzies, I. Monedero, E. Richter, S. Rüsch-Gerdes, A. Sandgren, A. Scardigli, A. Skrahina, E. Tortoli, G. Volchenkov, D.

Wagner, M.J. van der Werf, B.Williams, W.W. Yew, J.P. Zellweger, D.M. Cirillo // Eur. Respir. J. - 2014. - P. 44: 23-63.

77. Lee, J. Sensititre MYCOTB MIC plate for testing Mycobacterium tuberculosis susceptibility to first- and second-line drugs / J. Lee, D.T. Armstrong, W. Ssengooba, J. Park, Y. Yu, F. Mumbowa, C. Namaganda, G. Mboowa, G. Nakayita, S. Armakovitch, G. Chien, S.N. Cho, L.E. Via, C.E. Barry, III, J.J. Ellner, D.Alland, S.E. Dorman, M.L. Joloba // Antimicrob Agents Chemother. - 2014. - Vol. 58(1). - P. 11-18.

78. Martin, A. Resazurin microtiter assay plate testing of Mycobacterium tuberculosis susceptibilities to second-line drugs: rapid, simple, and inexpensive method / A. Martin, M. Camacho, F. Portaels, J.C. Palomino // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2003. - Vol. 47. - P. 3616-3619.

79. Martin, A. Rapid detection of ofloxacin resistance in Mycobacterium tuberculosis by two low-cost colorimetric methods: resazurin and nitrate reductase assays / A. Martin, J.C. Palomino, F. Portaels // J. Clin. Microbiol. - 2005. - Vol. 43. - P. 16121616.

80. McNerney, R. Phage replication technology for diagnosis and susceptibility testing. In: Methods in Molecular Medicine.T. Parish, N.G. Stocker (Eds) // Humana Press. - 2001. - P. 145-154.

81. Mestdagh, M. Relationship between pyrazinamide resistance, loss of pyrazinamidase activity, and mutations in the pncA locus in multidrugresistant clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis / M. Mestdagh, P.A. Fonteyne, L. Realini, R. Rossau, G. Jannes, W. Mijs, K.A.L. De Smet, F. Portaels, E. Van den Eeckhout // Antimicrob. Agents. Chemother. - 1999. - Vol. 43. - P. 2317-2319.

82. Migliori, G.B. TB and MDR/XDR-TB in European Union and European Economic Area countries: managed or mismanaged? / G.B. Migliori, G. Sotgiu, L. D'Ambrosio // Eur. Respir. J. - 2012. - Vol. 39. - P. 619-625.

83. Montoro, E. Comparative evaluation of the nitrate reduction assay, the MTT test, and the resazurin microtitre assay for drug susceptibility testing of clinical isolates of

Mycobacterium tuberculosis / E. Montoro, D. Lemus, M. Echem endia, A. Martin, F. Portaels, J. C. Palomino // J. Antimicrob. Chemother. - 2005. - Vol. 55. - P. 500-505.

84. Morgan, M.A. Comparison of a radiometric method (BACTEC) and conventional culture media for recovery of mycobacteria from smear-negative specimens / M.A. Morgan, C.D. Horstmeier, D.R. De Young, G. D. Roberts // J. Clin. Microbiol. - 1983. -Vol. 18. - P. 384-388.

85. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Susceptibility testing of mycobacteria, nocardia, and other aerobic actinomycetes; approved Standard, M24-A2. Wayne, PA: CLSI, 2011. - 76 p.

86. Orenstein, E.W. Treatment outcomes among patients with multidrug-resistant tuberculosis: systematic review and meta-analysis / E.W. Orenstein, S. Basu, N.S. Shah, J.R. Andrews, G.H. Friedland, A.P. Moll, N.R. Gandhi, A.P. Galvani // Lancet. Infect. Dis. - 2009. - Vol. 9. - P. 153-161.

87. Palomino, J.C. Evaluation of Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) for drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis / J.C. Palomino, H. Traore, K. Fissette, F. Portaels // Int. J. Tuberc. Lung Dis. - 1999. - Vol. 3. - P. 344-348.

88. Palomino, J.C. Resazurin microtiter assay plate: simple and inexpensive method for detection of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis / J.C. Palomino, A. Martin, M. Camacho, H. Guerra, J. Swings, F. Portaels // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2002. - Vol. 46. - P. 2720-2722.

89. Palomino, J.C. Nonconventional and new methods in the diagnosis of tuberculosis: feasibility and applicability in the field / J.C. Palomino // Eur. Respir. J. -2005. - Vol. 26. - P. 339-350.

90. Pfyffer, G.E. Comparison of the Mycobacteria Growth Indicator Tube (MGIT) with radiometric and solid culture for recovery of acid-fast bacilli / G.E. Pfyffer, H.M. Welscher, P. Kissling, C. Cieslak, M.J. Casal, J. Gutierrez, S. Rüsch-Gerdes // J. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35. - P. 364-368.

91. Pfyffer, G.E. Multicenter laboratory validation of susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against classical second-line and newer antimicrobial drugs by using the radiometric BACTEC 460 technique and the proportion method with solid media / G. E. Pfyffer, D. A. Bonato, A. Ebrahimzadeh, W. Gross, J. Hotaling, J. Kornblum, A. Laszlo, G. Roberts, M. Salfinger, F. Wittwer, S. Siddiqi // J. Clin. Microbiol. - 1999. - Vol. 37. - P. 3179-3186.

92. Pfyffer, G.E. Testing of susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide with the nonradiometric BACTEC MGIT 960 system / G.E. Pfyffer, F. Palicova and S. Rusch-Gerdes // J. Clin. Microbiol. - 2002. - Vol. 40. - P. 1670-1674.

93. Pfyffer, G.E. Susceptibility testing of Mycobacteria, Nocardiae and other Aerobic Actinomycetes; Approved standard - Second Edition. M24-A2. / G.E. Pfyffer, J.C. Ridderhof, S.H. Siddiqi, R.J. Wallace, Jr, N.G. Warren, F.G. Witebsky, G.L. Woods, B.A. Brown-Elliott, P.S. Conville, E.P. Desmond, G.S. Hall, G. Lin. Wayne (PA): Clinical and Laboratory Standards Institute, 2011. - 76 p.

94. Piersimoni, C. Comparison of MB/Bact alert 3D system with radiometric BACTEC system and Lowenstein-Jensen medium for recovery and identification of mycobacteria from clinical specimens: a multicenter study / C. Piersimoni, C. Scarparo, A. Callegaro, C.P. Tosi, D. Nista, S. Bornigia, M. Scagnelli, A. Rigon, G. Ruggiero, A. Goglio // J. Clin. Microbiol. - 2001. - Vol. 39. - P. 651-657.

95. Rist, N. Drug resistance in hospitals and sanatoria. A report to the Committee on Laboratory Methods and to the Committee on Antibiotics and Chemotherapy of the International Union Against Tuberculosis / N. Rist, J. Crofton // Bull. Int. Union Tuberc. - 1960. - Vol. 30. - P. 13-27.

96. Roberts, G.D. Evaluation of the BACTEC radiometric method for recovery of mycobacteria and drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis from acidfast smear-positive specimens / G.D. Roberts, N.L. Goodman, L. Heifets, H.W. Larsh, T.H. Lindner, J.K. McClatchy, M.R. McGinnis, S.H. Siddiqi, P. Wright // J. Clin. Microbiol. - 1983. - Vol. 18. - P. 689-696.

97. Rodrigues, C. Drug susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis against second-line drugs using the Bactec MGIT 960 system / C. Rodrigues, J. Jani, P. Shenai, P. Thakkar, S. Siddiqi, A. Mehta // Int. J. Tuberc. Lung Dis. - 2008. - Vol. 12. - P.

1449-1455.

98. Rohner. P. Evaluation of the MB/BacT system and comparison to he BACTEC 460 system and solid media for isolation of mycobacteria from clinical specimens / P. Rohner, B. Ninet, C. Metral, S. Emler, R Auckenthaler // J. Clin. Microbiol. - 1997. -Vol. 35. - P. 3127-3131.

99. Ruiz, M. Direct detection of rifampin- and isoniazidresistant Mycobacterium tuberculosis in auraminerhodamine-positive sputum specimens by real-time PCR / M. Ruiz, M.J. Torres, A.C. Llanos, A. Arroyo, J.C. Palomares, J. Aznar // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42. - P. 1585-1589.

100. Ruiz, P. Comparison of susceptibility testing of Mycobacterium tuberculosis using the ESP Culture System II with that using the BACTEC method / P. Ruiz, F. J. Zerolo, M. J. Casal // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38. - P. 4663-4664.

101. Rusch-Gerdes, S. Multicenter evaluation of the Mycobacterial Growth Indicator Tube for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to first-line drugs / S. Rusch-Gerdes, C. Domehl, G. Nardi, M. Gismondo, H. Welscher, G. Pfyffer // J. Clin. Microbiol. - 1999. - Vol. 37. - P. 45-48.

102. Rusch-Gerdes, S. Multicenter laboratory validation of the BACTEC MGIT 960 technique for testing susceptibilities of Mycobacterium tuberculosis to classical second-lane drugs and newer antimicrobials / S. Rusch-Gerdes, G. Pfyffer, M. Casal, M. Chadwick, S. Siddiqi // J. Clin. Microbiol. - 2006. - Vol. 3. - P. 688-692.

103. Salman, H.S. Guidelines for Second-line Drug Susceptibility Testing in MGIT Based on Published Studies. Critical Concentrations and Procedures. / H.S. Salman. -2014. - 28 p.

104. Sanders, C.A. Validation of the Use of Middlebrook 7H10 Agar, BACTEC MGIT 960, and BACTEC 460 12B Media for Testing the Susceptibility of

Mycobacterium tuberculosis to Levofloxacin / C.A. Sanders, R.R. Nieda, E.P. Desmond // J. Clin. Microbiol. - 2004. - Vol. 42 (11) - Р. 5225-5228.

105. Sandin, R.L. Polymerase chain reaction and other amplification techniques in mycobacteriology / R.L. Sandin // Clin. Lab. Med. - 1996. - Vol. 16. - Р. 617-633.

106. Scarparo, C. Evaluation of the fully automated BACTEC MGIT 960 system for testing susceptibility of Mycobacterium tuberculosis to pyrazinamide, streptomycin, isoniazid, rifampin and ethambutol and comparison with the radiometric BACTEC 460 method / C. Scarparo, P. Ricordi, G. Ruggiero, P. Piccoli // J. Clin. Microbiol. - 2004. -Vol. 42. - Р. 1109-1114.

107. Shamputa, I.C. Molecular genetic methods for diagnosis and antibiotic resistance detection of mycobacteria from clinical specimens / I.C. Shamputa, L. Rigouts, F. Portaels // APMIS. - 2004. - Vol. 112. - Р. 728-752.

108. Sharma, M. Canadian Multi-center Laboratory Study for Standardized Second-line Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium tuberculosis / M. Sharma, L. Thiberts, P. Chedore, C. Shandro, F. Jamieson, G. Tyrell, S. Christianson, H. Soualhines, J. Wolfe // J. Clin. Microbiol. - 2011. - Vol. 49. - Р. 4112-4116.

109. Shin, S.S. Development of extensively drug-resistant tuberculosis during multidrug-resistant tuberculosis treatment / S.S. Shin, S. Keshavjee, I.Y. Gelmanova, S. Atwood, M.F. Franke, S.P. Mishustin, A.K. Strelis, Y.G. Andreev, A.D. Pasechnikov, A. Barnashov, T.P. Tonkel, T. Cohen // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. - 2010. - Vol. 182. - Р. 426-432.

110. Siddiqi, S.H. Bacteriological investigation of unusual mycobacteria isolated from immuno-compromised patients / S.H. Siddiqi, A. Laszlo, W.R. Butler // Diagn. Microbiol. Infect Dis. - 1993. - Vol. 6. - Р. 321-323.

111. Siddiqi S.H., Rusch-Gerdes S. MGIT Procedure Manual for BACTEC MGIT 960TB System. -Руководство по работе с системой BACTEC MGIT 960. - 2006. -89 c.

112. Simboli, N. In-house phage amplification assay is a sound alternative for detecting rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis in lowresource settings / N. Simboli, H. Takiff, R. McNerney, B. Lopez, A. Martin, J.C. Palomino, L. Barrera, V. Ritacco // Antimicrob. Agents. Chemother. - 2005. - Vol. 49. - P. 425-427.

113. Skenders, G. Multidrug-resistant tuberculosis detection, Latvia / G. Skenders // Emerg. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 11. - P. 1461-1463.

114. Sougakoff, W. Use of a high-density DNA probe array for detecting mutations involved in rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis / W. Sougakoff, M. Rodriguez, C. Truffot-Pernot, M. Renard, N. Durin, M. Szpytma, R. Vachon, A. Troesch, V. Jarlier // Clin. Microbiol. Infect. - 2004. - Vol. 10. - P. 289-294.

115. Takiff, H.E. Cloning and nucleotide sequence of Mycobacterium tuberculosis gyrA and gyrB genes and detection of quinolone resistance mutations / H. Takiff, L. Salazar, C. Guerrero, W. Philipp, W. Huang, B. Kreiswirth, S. Cole, W. Jacobs, A. Telenti // Antimicrob. Agents. Chemother. - 1994. - Vol. 38. - P. 773-780.

116. Takiff, H. The molecular mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis / H. Takiff, I. Bastian, F. Portaels // Kluwer. Academic. Publishers. -2000. - P. 77-114.

117. Tenover, F.C. The resurgence of tuberculosis: is your laboratory ready? / F.C. Tenover, J.T. Crawford, R.E. Huebner, L.J. Geiter, C.R. Horsburgh Jr, R.C. Good // J. Clin. Microbiol. - 1993. - Vol. 31. - P. 767-770.

118. Tortoli, E. Use of BACTEC MGIT 960 for recovery of mycobacteria from clinical specimens: multicenter study / E. Tortoli, P. Cichero, C. Piersimoni, M.T. Simonetti, G. Gesu, D. Nista // J. Clin. Microbiol. - 1999. - Vol. 37. - P. 3578-3582.

119. Tortoli, E. Comparison of Mycobacterium tuberculosis susceptibility testing performed with BACTEC 460TB (Becton Dickinson) and MB/BacT (Organon Teknika) systems / E. Tortoli, R. Mattei, A. Savarino, L. Bartolini, J. Beer // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 38. - P. 83-86.

120. Toungoussova, O.S. Resistance of multidrug-resistant strains of Mycobacterium tuberculosis from the Archangel oblast, Russia, to second-line antituberculosis drugs / O.S. Toungoussova, A.O. Mariandyshev, G. Bijune, D.A. Caugant, P. Sandven // Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2005. - Vol. 24.- P.202-206.

121. Udwadia, Z.F. Totally drug-resistant tuberculosis in India / Z.F. Udwadia, R.A. Amale, K.K. Ajbani, C. Rodrigues // Clin. Infect. Dis. - 2012. - Vol. 54. - P. 579-581.

122. van der Werf, M.J. Multidrug resistance after inappropriate tuberculosis reatment: a meta-analysis / M.J. van der Werf, M.W. Langendam, E. Huitric, D. Manissero // Eur. Respir. J. - 2012. - Vol. 39. - P. 1511-1519.

123. Velayati, A.A. Emergence of new forms of totally drug-resistant tuberculosis bacilli: super extensively drug-resistant tuberculosis or totally drug-resistant strains in Iran / A.A. Velayati, M.R. Masjedi, P. Farnia, P. Tabarsi, J. Ghanavi, A.H. Ziazarifi, S.E. Hoffner // Chest. - 2009. - Vol. 136. - P. 420-425.

124. Wanger, A. Testing of Mycobacterium tuberculosis Susceptibility to Ethambutol, Isoniazid, Rifampin, and Streptomycin by Using Etest / A. Wanger, K. Mills // J. Clin. Microb. - 1996. - Vol. 34 (7) - P. 1672-1676.

125. Woods, G.L. Clinical evaluation of difco ESP culture system II for growth and detection of mycobacteria / G.L. Woods, G. Fish, M. Plaunt, T. Murphy // J. Clin. Microbiol. - 1997. - Vol. 35. - P. 121-124.

126. World Health Organization. - Geneva, 1960. - 195 p.

127. World Health Organization. Expert Committee on Antibiotics. - - Geneva, 1961. - 210 p.

128. World Health Organization: Guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. -Geneva, 2008. - 272 p.

129. World Health Organization: Global TB programme WHO, updated interim critical concentrations for first-line and second-line DST.- Geneva, 2012. - 1 p.

130. World Health Organization: Guidelines for the programmatic management of drug-resistant tuberculosis. 2011 update. - Geneva, 2012. - 44 p.

131. World Health Organization: Automated real-time nucleic acid amplification technology for rapid and simultaneous detection of tuberculosis and rifampicin resistance: Xpert MTB/RIF assay for the diagnosis of pulmonary and extrapulmonary TB in adults and children. Policy update. - Geneva, 2013. - 97 p.

132. World Health Organization: Global strategy and targets for tuberculosis prevention, care and control after 2015. - Geneva, 2014. - 2 p.

133. World Health Organization: Global tuberculosis report 2015. WH0/HTM/TB/2015.22. - Geneva, 2015. - 204 p.

134. Yajko, D.M. Colorimetric method for determining MICs of antimicrobial agents for Mycobacterium tuberculosis / D.M. Yajko, J.J. Madej, M.V. Lancaster, C.A. Sanders, V.L. Cawthon, B. Gee, A. Babst, W.K. Hadley // J. Clin. Microbiol. - 1995. -Vol. 33. - P. 2324-2327.

135. Zang, Y. Mechanisms of drug resistance in Mycobacterium tuberculosis / Y.Zang, W.W. Yew // Int. J. Tuberc. Lung. Dis. - 2009. - Vol. 13(11). - P. 1320-1330.

136. Zimenkov, D.V. Detection of second-line drug resistance in Mycobacterium tuberculosis using oligonucleotide microarrays / D.V. Zimenkov, O.V. Antonova, A.V. Kuz'min, Y.D. Isaeva, L.Y. Krylova, S.A. Popov, A.S. Zasedatelev, V.M. Mikhailovich, D.A. Gryadunov // BMC infectious diseases. - 2013. - Vol. 13. - P. 240.