Определение стимулятора роста-рактопамина в мясе и печени методом иммуноферментного анализа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.05, кандидат наук Лемясева, Светлана Васильевна
Лемясева, Светлана Васильевна
кандидат наук
2014
- Специальность ВАК РФ06.02.05
- Количество страниц 147
Оглавление диссертации кандидат наук Лемясева, Светлана Васильевна
ВВЕДЕНИЕ........................................................................................4
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.....................................................................11
1.1 Характеристика стимуляторов роста животных из группы |3 - агонистов и методы их определения...............................................................................................11
1.2 Препарат рактопамин и его фармако-токсикологическая характеристика.......24
1.3 Применение рактопамина как стимулятора роста в животноводстве...............38
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................................47
2.1 Материалы и методы исследований.......................................................47
2.1.1 Метод иммуноферментного анализа для определения стимулятора роста -рактопамина.......................................................................................50
2.1.2 Методика построения калибровочной кривой по стандартным растворам рактопамина............................................................................................52
2.1.3 Методика определения предела обнаружения рактопамина в мясе и печени..............................................................................................52
2.1.4 Методика расчета предела количественного определения рактопамина в мясе и печени............................................................................................52
2.1.5 Методика определения извлекаемости рактопамина из проб мяса индейки.............................................................................................53
2.1.6 Изучение влияния температурной обработки мяса и печени на содержание рактопамина.......................................................................................53
2.1.7 Статистическая обработка экспериментальных данных..........................54
2.2 Результаты исследований...............................................................55
2.2.1 Совершенствование метода иммуноферментного анализа для определения
рактопамина в мясе..............................................................................55
2.2.1.1 Построение калибровочной кривой по стандартным растворам рактопамина.......................................................................................55
л
2.2.1.2 Определение предела обнаружения и предела количественного определения рактопамина при исследовании свинины.............................................58
2.2.1.3 Определение предела обнаружения и предела количественного определения рактопамина при исследовании говядины и говяжьей печени..........60
2.2.1.4 Определение предела обнаружения и предела количественного определения рактопамина при исследовании мяса индейки.................................63
2.2.2 Определение стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени импортного и отечественного происхождения..........................................................................67
2.2.2.1 Исследование свинины................................................................67
2.2.2.2 Исследование говядины..........................................................................69
2.2.2.3 Исследование говяжьей печени......................................................71
2.2.2.4 Исследование мяса индейки.................................................................72
2.2.3 Изучение влияния температурной обработки мяса и печени на содержание рактопамина.......................................................................................73
2.2.3.1 Влияние процессов замораживания и варки на содержание рактопамина в свинине...........................................................................................................................74
2.2.3.2 Влияние процессов замораживания и варки на содержание рактопамина в говядине и говяжьей печени..................................................................76
2.2.3.3 Влияние процессов замораживания и варки на содержание рактопамина в
мясе индейки..........................................................................................................78
2.3 Обсуждение результатов исследования..............................................80
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.................................................................................89
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ.....................................................90
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................91
ПРИЛОЖЕНИЕ..................................................................................106
Актуальность темы. В промышленном животноводстве нередко прибегают к использованию стимуляторов роста, так как они позволяют добиться значительного повышения эффективности производства продукции животного происхождения. Использование стимуляторов роста (в т.ч. рактопамина) при выращивании животных в странах Евросоюза и РФ запрещено и находится под строгим контролем ветеринарных служб в соответствии с Директивами ЕС 96/22/ЕС, 96/23/ЕС (1996), а также Указанием Россельхознадзора от 21 сентября 2012 г. (http://www.fsvps.ru.), соответственно. Импортное мясо в этих странах проверяется и уничтожается при. обнаружении следов стимуляторов роста.
Однако в ряде стран (США, Канада, Бразилия, Мексика, Австралия, Аргентина, Южная Корея, Япония и другие страны) считают, что стимуляторы роста являются безопасными для животных и человека и продолжают их применять: в частности, рактопамин, кленбутерол, зилпатерол используются для стимуляции мышечной массы у животных и птицы. Так, Управлением по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (1999) и Канадским агентством продовольственной инспекции (2005) был утвержден для применения препарат рактопамин под названием торговой марки Paylean (для свиней), Optaflexx (для крупного рогатого скота) и Томах (для индейки).
Вместе с тем, имеются сообщения, что добавление рактопамина в корм небезопасно для животного. Так, по данным «Европейского управления безопасности пищевых продуктов» (EFSA), препарат приводит к значительным нарушениям здоровья животных, включая сердечно - сосудистый стресс, тремор скелетной мускулатуры, повышенную агрессивность и гиперактивность (http://www.fsvps.ru, 2013). Новое исследование американских ученых, опубликованное в журнале «PLoS ONE» (http://foodcontrol.ru, 2014), показало, что препарат рактопамин неблагоприятно влияет на здоровье крупного рогатого скота (KPC). Животные начинают хромать и, в конечном итоге, просто отказываются
передвигаться из-за боли в мышцах. Так, по их данным журнала, в 2011-2012 гг. более 3800 голов КРС погибло в результате применения рактопамина и зилпатерола. По сообщению B.W. James, M.D. Tokach, R.D. Goodband et al. (2004) и J.N. Marchant Forde, D.C. Lay JR, E.A. Pajor et al. (2003) рактопамин, который скармливается свиньям, выращиваемым в США, вызывает у них стрессовое состояние, увеличивает частоту пульса и оказывает отрицательное воздействие на обмен веществ.
Установлено, что употребление в пищу мяса сельскохозяйственных животных и птицы, содержащих стимуляторы роста, небезопасно для человека (Белоусов В.И., Матрёшин A.B., Мамаев М.А. и др., 2000; Цеденова В.А., 2002; Галимов Б.А., Тухбатуллин Х.Т., 2002; Островская A.B., 2004). Так, по имеющейся информации, употребление человеком продукции содержащие остатки рактопамина, может спровоцировать тахикардию, мышечной тремор, чувство беспокойства, головные боли, усиленную потливость, сонливость, мышечные спазмы, тошноту и повышение артериального давления; воздействие на людей с сердечно - сосудистыми заболеваниями и высоким артериальным давлением вызывает более серьезные последствия (ишемия миокарда, значительная аритмия и др.) (Судникович О, 2011; Barbara Minton, 2010; Kathy Chang, 2008). Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации (при участии ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровья населения» (Зайцева Н.В., Шур П.З., Кирьянов Д.А., Аминова А.И., Камалтдинов М.Р., Хрущева Е.В.), ФГБУ «Научно-исследовательский институт питания» РАМН (Тутельян В.А., Хотимченко С.А., Гмошинский И.В., Багрянцева О.В., Шевелева С.А., Ефимочкина Н.Р.), ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Ракитский В.Н., Силышцкая Т.А.), ГНУ «ВНИИ мясной промышленности им. В.М. Горбатова» Россельхозакадемии» (Лисицин А.Б., 2013), проводя исследования по оценке риска для здоровья населения, установила, что употребление продуктов с наличием рактопамина приводит к повышению уровня функциональных
нарушений сердечно - сосудистой системы, способствующих повышению заболеваемости такими болезнями как гипертония, атеросклероз, ишемическая болезнь сердца.
В связи с поступлением мяса и субпродуктов в Российскую Федерацию из ряда зарубежных стран, в которых используется препарат рактопамин для стимуляции роста сельскохозяйственных животных и птицы, становится ясным необходимость усиления контроля наличия рактопамина в продукции животноводства, в частности, с применением экспресс-методов контроля безопасности пищевых продуктов. Это также обуславливается тем, что при вступлении во Всемирную торговую организацию актуальной становится разработка и внедрение методов для определения стимуляторов роста при ветеринарном надзоре. В этом плане среди скрининговых методов лидирующее положение занимают иммуноферментные методы анализа (ИФА). В ряде Европейских стран (Германия, Австрия и др.) в качестве валидированного метода ИФА применяется при исследовании сухого молока, молока, молочных продуктов, яиц, колбасы, сыра, меда, креветок, мяса и других продуктов (Белоусов В.И., Матрёшин A.B., Мамаев М.А. и др., 2000; Морозова E.H., 2005). Кроме того, ИФА обладает некоторыми преимуществами перед хроматографическими методами, позволяя быстро и достаточно дешево анализировать большое число проб (Нестеренко И.С., Вылегжанина Е.С., Филиппова K.M., Панин А.Н. и др., 2014) и является высокочувствительным и избирательным методом (Буркин М.А., Кононенко Г.П., Буркин A.A., 2011).
Все вышеизложенное легло в основу выбора темы, представленной в исследовательской работе.
Степень разработанности темы. Основанием для проведения настоящих исследований является практическая необходимость разработки экспресс-методов контроля безопасности пищевых продуктов животного происхождения в связи с импортом мяса и субпродуктов в РФ из ряда зарубежных стран (США, Канада, Бразилия и др.).
Нами впервые проведены исследования по разработке и применению методики по определению стимулятора роста - рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки импортного и отечественного происхождения методом иммуноферментного анализа с использованием тест-системы RIDASCREEN® Ractopamin R9901 (производство R-Biopharm AG, Германия).
Предложены рекомендации для практического применения.
Цели и задачи. Целью данной работы являлось изучение возможности применения и совершенствования методики иммуноферментного анализа для обнаружения стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени, с решением следующих задач:
1. Определить предел обнаружения (limit of detection - LOD) рактопамина при исследовании свинины, говядины, говяжьей печени и мяса индейки методом иммуноферментного анализа.
2. Определить предел количественного определения (limit of quantitation -LOQ) рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки методом иммуноферментного анализа.
3. Провести исследования по определению содержания стимулятора роста -рактопамина в мясе и печени импортного и отечественного происхождения методом иммуноферментного анализа.
4. Изучить влияние температурной обработки на содержание рактопамина в мясе и печени.
5. На основании проведенных исследований разработать «Методическое пособие по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени на основе метода иммуноферментного анализа».
Научная новизна. Проведенными исследованиями по усовершенствованию методики определены пределы обнаружения и пределы количественного определения рактопамина при исследовании свинины, говядины, говяжьей печени и мяса индейки с помощью иммуноферментного анализа. Предел обнаружения (LOD) составил для свинины 0,345 мкг/кг, говядины - 0,390 мкг/кг, говяжьей печени - 0,390 мкг/кг и мяса индейки - 0,400 мкг/кг, а предел количественного
определения (LOQ) составил для свинины 0,561 мкг/кг, говядины — 0,708 мкг/кг, говяжьей печени - 0,762 мкг/кг и мяса индейки - 0,688 мкг/кг.
Кроме того, определены в мясе индейки степень извлечения рактопамина, которая составила 91,0% и относительное стандартное отклонение (коэффициент вариации) для определения содержания рактопамина - 14,0%.
Проведен мониторинг свинины, говядины, говяжьей печени и мяса индейки импортного (Аргентина, Белоруссия, Бразилия, Германия, Дания, Испания, Литва, Парагвай, США, Украина, Уругвай, Франция) и отечественного происхождения.
Впервые установлено, что процессы замораживания мяса (при температуре минус 18°С) и его хранения (до 270 суток), а также варки (в течение 30, 60 и 120 минут при температуре 100°С) не снижают уровня содержания рактопамина в пробах мяса в сравнении с его исходной концентрацией (срок наблюдения). Это дает основание считать, что мясо и субпродукты, содержащие рактопамин не должны подлежать реализации на пищевые цели, независимо от вида их обработки (охлаждение, замораживание, варка, длительное хранение).
Теоретическая и практическая значимость работы. Показана высокая эффективность метода конкурентного иммуноферментного анализа при определении рактопамина в мясе и субпродуктах.
Проведенные исследования позволили установить верификацию оборудования (подтверждена эффективность применения имеющегося оборудования в технологическом процессе определения рактопамина) и валидацию метода (определена пригодность метода ИФА для определения рактопамина в мясе и печени различных видов животных).
На основании проведенных исследований разработано «Методическое пособие по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени на основе метода иммуноферментного анализа» (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 08.02.2012 г.), рекомендованное для применения как в научно-исследовательских учреждениях, так и ветеринарных лабораториях для ускоренного скринингового контроля наличия рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки.
«Методическое пособие...» отмечено Серебряной медалью и Дипломом на XIV Российской агропромышленной выставке «Золотая осень» (2012 г.).
Методология и методы исследования. Для определения стимулятора роста - рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки использовали усовершенствованный метод иммуноферментного анализа. Для этого применили методики построения калибровочной кривой по стандартным растворам рактопамина, определения предела обнаружения рактопамина в мясе и печени, расчета предела количественного определения рактопамина в мясе и печени, определения извлекаемости рактопамина из проб мяса индейки.
Учет результатов определения рактопамина проводили с помощью специализированного программного обеспечения RIDA®Soft. Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Результаты исследований по определению методом ИФА:
- предела обнаружения рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки;
- предела количественного определения рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки.
2. Исследование по определению содержания стимулятора роста - рактопамина в свинине, говядине, говяжьей печени и мясе индейки импортного и отечественного происхождения, отобранные из розничной сети в период 2011-2013гг.
3. Изучение влияния температурной обработки на содержание рактопамина в пробах мяса (свинина, говядина, говяжья печень и мясо индейки).
Степень достоверности и апробация результатов. Материалы диссертации доложены и одобрены на: Международной научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Заслуженного деятеля науки, доктора ветеринарных наук, профессора Абуладзе К.И. и доктора ветеринарных наук, профессора Колоболотского Г.В. (ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина», г. Москва 15-16 мая 2012 г.); VIII
международной научно-практической конференции «Обеспечение качества и безопасности продуктов животного происхождения» (ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии Россельхозакадемии, г. Москва 15 мая 2013 г.); Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы товароведения и безопасности товаров», посвященной 20-летию экономического факультета (ГАОУ ВПО «Московский государственный областной социально-гуманитарный институт», г. Коломна 17 мая 2013 г.); X международной научно-практической конференции «Научные проблемы обеспечения ветеринарно-санитарного благополучия животноводства и пути их решения» (ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии, г. Москва 2 апреля 2014 г.); расширенном совещании ГНУ ВНИИ ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (14 октября 2014 г.).
Публикации. Опубликовано 7 научных статей, в том числе 4 - в изданиях, входящих в перечень ВАК Минобрнауки РФ (журналы «Ветеринария Кубани», «Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии»).
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 147 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, изложения результатов собственных исследований, обсуждения, заключения, практических предложений, списка литературы, включающего 141 источников, в том числе 60 зарубежных авторов, приложений - 8. Диссертация содержит 18 таблиц, 27 рисунков, 7 формул.
1.1 Характеристика стимуляторов роста животных из группы Р - агонистов и методы их определения
Стимуляторы роста из группы ß — агонистов. В настоящее время особый интерес представляет класс соединений - агонисты ß - адренорецепторов, называемые более кратко ß - агонистами, ß — адреномиметиками или ß — адреностимуляторами. ß - агонисты относятся к эндогенным кателохаминам и являются фенил — ß — этаноламинами, имеющими различные заместители в ароматическом кольце и конечной аминогруппе, которые влияют на продуктивность животных и птицы, а также на качество мясной продукции, ß — агонисты не являются стероидными гормонами, но по действию их можно сравнить со стероидами. Они обладают сильным антикатаболическим эффектом и способствуют увеличению мышечной массы. Кроме того, эти препараты оказывают значительное жиросжигающее действие, что обеспечивает получение постного мяса, пользующегося большим спросом на рынке. Они являются синтетическими дериватами катехоламинов естественного происхождения -гормонов мозгового вещества надпочечников - адреналина и норадреналина, с которыми они сходны по структурным особенностям и фармакологическим свойствам. Термин «агонисты» (помимо ß существуют и а - агонисты) изначально связан с воздействием этих веществ на находящиеся в контакте с клеточными мембранами рецепторы (также подразделяемые на типы а и ß), одним из результатов такого воздействия является сжатие или, напротив, релаксация волокон гладкой мышечной ткани (Аитова М.Д., Сущенков С.Ф., Кальницкий Б.Д. и др., 1993; Еримбетов К.Т., 2007; Каленюк В.Ф., Матвеев В.А., Комкова Е.Е. и др., 1993; Кальницкий Б.Д., Аитова М.Д., Еримбетов К.Т. и др., 1994; Комаров A.A., Вылегжанина Е.С., Латышев O.E. и др., 2004; Комаров A.A., Крапивкин
Б.А., 2006; Комаров A.A., 2002; 2006; Манухина А.И., Кальницкий Б.Д., 2000; Матвеев В.А., 2000; Фофана Н.В., 1998).
По химическому строению эти типичные адреномиметические средства представляют собой разнообразные производные ароматических аминов, из которых арилалкиламины, или производные ß — фенилэтиламина, составляют наиболее многочисленную группу (рисунок 1). В зависимости от радикалов, расположенных в ядре и боковой цепи арилалкиламина, образуются различные соединения, ß - агонисты разделяются на три основные группы: фенольного (сальбутамол, карбутерол, рактопамин), анилинового (кленбутерол, бромбутерол, мабутерол, мапентерол, цимбутерол) и резорцинового (тербуталин, фенотерол, метапротеренол) типа (таблица 1) (Авакян О.М., 1988; Еримбетов К.Т., 2007; Комаров A.A., 2002; 2006).
Рисунок 1 - Химическое строение (3 - агонистов Таблица 1 - Формулы наиболее важных р - агонистов
Название ß -агониста Заместители
Ri R2 R3 r4 r5
1 2 3 4 5 6
ß -агонисты анилинового типа
Кленбутерол Н С1 nh2 CI C(CH3)3
Бромбутерол Н Вг nh2 Br С(СНз)з
Мабутерол н CF3 nh2 CI С(СНз)з
Мапентерол н CF3 nh2 CI C(CH3)2C2H5
Цимбутерол н CN nh2 H СССНз)з
Кленпентерол н CI nh2 CI С(СН3)2С2Н,
Циматерол н NC nh2 H СН(СН3)2
Кленпроперол н CI nh2 CI СН(СН3)2
1 2 3 4 5 6
Р -агонисты фенольного типа
Салбутамол Н СН2ОН он н С(СНз)з
Карбутерол Н >ЩСО№12 он н С(СНз)з
Пирбутерол н СН2ОН он н С(СНз)з
Тулобутерол С1 н он н С(СНз)з
Рактопамин н н он н СНСЩСНгЬСбНдОН
Р -агонисты резорцинового типа
Тербуталин н он н он С(СНз)з
Фенотерол н ОН н он СНСН2С6Н40Н
Метапротеренол н ОН н он СН(СНз)2
Наличие гидроксильного заместителя у Р - фенилэтиламинов дает возможность иметь соединение в двух различных пространственных конфигурациях: в виде (+) или (-) стереоизомера. Активность стереоизомеров адреномиметиков существенно различается, так (-) - стереоизомеры адреналина, норадреналина и других действуют намного сильнее, чем соответствующие (+) — стереоизомеры. Существенное различие в активности хорошо объясняется гипотезой, выдвинутой еще в 1933 году, согласно которой р - фенилэтиламины взаимодействуют с адренорецепторами тремя связанными с ассемитрическим углеродом группами: основным атомом азота, р — гидроксильной группой и бензольным ядром. Наиболее предпочтительная конфигурация для этих трех групп проявляется только у (-) - изомеров, (+) — изомеры, у которых Р — гидроксильная группа или отсутствует или «неправильно» ориентирована, взаимодействуют с рецепторами не тремя, а двумя группами, поэтому их действие выражено слабее (Авакян О.М., 1988).
Общей характеристикой всех агонистов Р - адренорецепторов является присутствие в их структуре аминной и гидроксильной группы. У агонистов все заместительные группировки являются, как правило, гидрофильными, что свидетельствуют о их взаимодействии с участками, расположенными на поверхности рецепторного белка (Сергеев В.П., Шимановский Н.Л., 1987).
Изучение фармакологических свойств препаратов этой группы привело к обнаружению в организме р - адренорецепторов, подразделяющихся, в свою
очередь, на р1 -, р2 - и р3 - адренорецепторы. р - адренорецепторы находятся во многих внутренних органах. Стимуляция указанных рецепторов приводит к изменению гомеостаза как отдельных органов и систем, так и организма в целом.
Р1 — адренорецепторы локализованы в основном в сердце и ренинсекретирующих клетках юкстагломерулярного аппарата нефронов почек. При их возбуждении происходит усиление и учащение сокращений сердца, облегчение атриовентрикулярной проводимости, повышение автоматизма сердечной мышцы. В почках стимулируется синтез ренина и повышается его секреция в кровь, что приводит к выработке ангиотензина II, повышению тонуса сосудов и артериального давления.
р2 — адренорецепторы находятся преимущественно в бронхах, скелетных мышцах, матке, сердце, сосудах, центральной нервной системе (ЦНС) и других органах. Их стимуляция приводит к расширению бронхов и улучшению бронхиальной проходимости, гликогенолизу (расходу глюкозы) в скелетных мышцах с повышением силы мышечного сокращения (в больших дозах — к тремору). Гликогенолиз в печени увеличивает содержание глюкозы в крови.
Вследствие эффекта расширения бронхов и улучшения бронхиальной проводимости р - агонисты назначают в виде дозированных аэрозолей для снятия приступа удушья у пациентов с бронхиальной астмой.
В сердце возбуждение р2 - адренорецепторов приводит к учащению сокращений и тахикардии. р2 - адренорецепторы ответственны за снижение тонуса сосудов. В первую очередь это те сосуды, которые расширяются при стрессе с естественным выбросом адреналина и обеспечивают адаптацию с перераспределением крови к тканям мозга, сердца, легких, поперечно-полосатой мускулатуры. При стимуляции р2 - адренорецепторов в ЦНС возникает возбуждение.
Рз - адренорецепторы расположены в жировой ткани, их стимуляция приводит к липолизу триглицеридов и повышению уровня свободных жирных кислот в крови.
Адреномиметические препараты по-разному влияют на ßi ß2 - и ß3 — адренорецепторы. Препараты, перечисленные в таблице 1, преимущественно влияют на ß2 - адренорецепторы (Данилевская Н.В., Дельцов A.A., Субботин В.В., 2013; Комаров A.A., 2006; Машковский М.Д., 2004, 2005, 2010; Харкевич Д.А., 2008; Чучалин А.Г., Хамида И., 1992).
ß - агонисты стимулируют ß - адренорецепторы по механизму, аналогичному взаимодействию гормонов с аденилатциклазным компонентом рецепторов клеточной мембраны, ß - агонисты оказывают влияние на активность ферментов и генный аппарат клеток не непосредственно, а с помощью медиаторов (посредников). Одним из таких медиаторов является циклический З1, 51 - аденозинмонофосфат (цАМФ). цАМФ образуется внутри клеток из аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) с участием расположенного на клеточной мембране фермента аденилциклазы. На внутриклеточных мембранах имеется фермент фосфодиэстераза, который превращает цАМФ в менее активное вещество - 51-аденозинмонофосфат. В результате взаимодействия молекулы ß -агонисты со специфическим участком рецептора (доменом), выступающим над наружной поверхностью мембраны клетки-мишени, происходят конформационные изменения рецептора, что, в свою очередь, приводит к активации фермента аденилатциклазы, находящегося на внутренней поверхности мембраны. Таким образом, активная аденилатциклаза катализирует превращение АТФ в циклический цАМФ, который иногда называют «вторым посредником» внутри клетки. В исследованиях многих авторов показано увеличение цАМФ под действием агонистов ß - рецепторов (Еримбетов К.Т., 2007; Журбенко A.M., 1983; Перцева М.Н., 1982; Юдаев H.A., 1976; Santana С., 1988; Stiles C.L., Carón M.G., 1984).
По современным представлениям, связывание ß - агониста с рецептором на наружной поверхности клеточной мембраны инициирует замену гуанозиндифосфата (ГДФ) на гуанозинтрифосфат (ГТФ) в N-белке на внутренней ее поверхности и приводит к активации каталитической субъединицы аденилатциклазы с образованием «вторичного медиатора» - цАМФ в присутствии
ионов Mg и Ca. Сигнал передается через мембрану путем взаимодействия трех встроенных в мембрану белков - рецептора, N-белка и аденилатциклазы. Аденилатциклаза обеспечивает первый этап усиления за счет образования из АТФ большого числа молекул второго посредника - цАМФ на каждую молекулу первого посредника. Второй посредник действует на внутриклеточный эффектор, который обеспечивает второй этап усиления (Еримбетов К.Т., 2007; Сергеев В.П., Шимановский H.JL, 1987; Эккерт Р., Рэндел Д., Огастин Дж., 1991).
ß - агонисты реализуют свой эффект на органы и ткани путем взаимодействия с адренорецепторами и играют существенную роль в регуляции обмена веществ у животных. Результаты взаимодействия с адренорецепторами зависят в значительной степени от количества рецепторов и соотношения между ßi и ß2 — типами, дозы агониста ß - адренорецепторов и длительности его применения.
Известно, что адреналин и норадреналин, наряду с более специфическими для них проявлениями физиологической активности, стимулируют мобилизацию липидов из жировых депо и их окисление; кроме этого, они повышают уровень ретенции азота в организме. Аналогичное влияние на обменные процессы в выраженной форме оказывают и агонисты ß - адренорецепторов, вызывая тем самым снижение массы жировой ткани и гипертрофию мышечных волокон (Cunningham Н.М., Friend D.W., J.W.G. Nicholson, 1963; Gordon R.S., Cherkes A., 1958; White P. D., Engel F.L., 1958).
Побочные эффекты применения ß - агонистов: нарушение сердечного ритма (тахикардия), мышечный тремор, гипокалиемия, тахифилаксия, чувство беспокойства, головные боли, усиленная потливость, сонливость, мышечные спазмы, повышение артериального давления, тошнота. Все это делает особенно опасным потребление мяса животных, получавших ß — агонисты, людьми с сердечно-сосудистыми заболеваниями. При хроническом поступлении ß -агонистов в организм человека могут наблюдаться нарушения обмена веществ.
Использование веществ, оказывающих анаболическое действие, в качестве стимуляторов роста сельскохозяйственных животных запрещено во многих
странах мира, в том числе в Европейском союзе (Директива 88/146/ЕЭС, замененная впоследствии Директивой 96/22/ЕС и Директивой 96/23/ЕС), Российской Федерации (Указание Главного госветинспектора № 12-7-1/900 от 04.10.99 г.). В то же время, злоупотребление применением ß - агонистов в животноводстве является проблемой многих стран. В большинстве случаев это связано с доступностью на рынке препаратов, содержащих ß - агонисты (Комаров A.A., Латышев O.E., 2006; Комаров A.A., 2006; Banned В. Е. М., 2010; Minton В., 2010; Woodward К. N., 1996).
Начиная с 1990 года, в специальной литературе появлялось множество сообщений об отравлении людей говяжьими субпродуктами (особенно печенью), содержащими остаточные количества ß - агониста кленбутерола (Комаров A.A., 2002).
В ряде Европейских стран разработаны и действуют национальные программы контроля остаточного содержания ß - агонистов в продукции животноводства. Эффективность реализации таких программ очевидна. Так, в Нидерландах количество положительных проб продуктов животного происхождения, в которых обнаруживалось остаточное содержание ß - агонистов, уменьшилось с 10% в 1990 году до 0,5% в 1995 году (Kuiper H.A., Noordam M.Y., Van Dooren-Flipsen M.M.H. et al, 1998).
В 1994 году Европейская организация потребителей провела независимые исследования присутствия остаточного содержания ß - агониста кленбутерола в образцах говяжьей печени, купленных в магазинах странах Евросоюза (ЕС). Из 936 проанализированных образцов, кленбутерол был обнаружен в 92 случаях (около 10% проб). Если систематизировать результаты исследования по странам, то наибольшее количество положительных проб выявлено в Испании - 36%, Бельгии - 23%, Франции - 12%, Люксембурге и Нидерландах - по 10%, Италии -8%, Португалии - 7%, Греции - 5%, Германии - 3% и Великобритании - 2% (Remy R., De-beuckelaere W., 1994). В Канаде в 1993-1995 годы в 0,3-0,8% отобранных образцов продуктов животного происхождения обнаружено остаточное содержание ß - агонистов (Neidert Е., Saschenbrecker P.W., 1996).
Серьезной проблемой в последние годы стало применение новых аналогов известных р - агонистов, которые не могут быть обнаружены иммунохимическими методами. Так, в Италии было обнаружено производное кленбутерола — кленметерол, содержащий третбутиловый заместитель в ароматическом кольце. Этот препарат вызывает более сильную тахикардию, по сравнению с кленбутеролом, в более высоких концентрациях накапливается в жировой ткани и токсичнее, чем кленбутерол. Недавно обнаружено еще 6 новых производных кленбутерола (Boatto G., Testa С., Brambilla G., 2000; Brambilla G., Fiori M., Testa C., 2000; Testa C., Boatto G., Brambilla G., 2000).
Рактопамин - p — агонист, зарегистрированный в США в качестве стимулятора при откорме свиней, но запрещенный в ЕС. Зилпатерол (торговое название «Zilmax») - новый р - агонист, зарегистрированный для применения при откорме крупного рогатого скота в Мексике и Южной Африке. Зилпатерол — мощный Р - агонист, более эффективный, чем рактопамин, но в 10 раз слабее, по сравнению с кленбутеролом (Canadian Food Inspection Agency, 2000; Courtheyn D., Le Bizec В., Brambilla G., 2002; Thompson C., Crooks S., Traynor I., 2002).
В США к перспективным биостимуляторам относят Р - андренергические агонисты (кленбутерол, циматерол, рактопамин и др.), которые могут эффективно действовать при даче их животным с кормом. При их использовании наблюдают снижение отложения жира в тушах бычков-кастратов на 20-30% при одновременном увеличении мышечной массы с 11 до 30%. У свиней применение рактопамина по эффективности было равно увеличению протеина в рационе с 12 до 16% (Ricks С. А., 1988).
В Великобритании (1984) было установлено, что некоторые препараты из группы р - агонистов обладают способностью уменьшать содержание жира в тушах животных. В связи с этим проводились опыты по изучению влияния этих соединений на качество мясной туши. Было установлено, что Р - агонисты эффективны в очень низких дозах (порядка 1-20 мг/кг в рационе), их можно включать как добавки непосредственно в рацион, поскольку они не теряют метаболической активности в пищеварительном тракте животных. Согласно
обобщенным многолетним данным, полученным в производственных опытах, ß -агонисты увеличивали массу туши у КРС, ягнят и домашней птицы в 1,06, 1,09 и 1,03 раза соответственно. В целом опыты показали, что ß - агонисты уменьшали относительное содержание жира и увеличивали долю мышц в тушах овец, КРС, свиней и птицы. В опыте со свиньями около 85% общего уменьшения массы жира было получено при дозе рактопамина 10 мг/кг. В другом опыте скорость роста свиней увеличивалась на 13% при введении циматерола в дозе 0,13 мг/кг живой массы/дн. Отмечено, однако, что ß - агонисты неблагоприятно влияют на качество туши после убоя, в частности, уменьшается содержание гликогена в мышцах и количество насыщенных жирных кислот по сравнению с ненасыщенными. В опыте с овцами, получавшими в рационе циматерол, содержание ненасыщенных жирных кислот в туше увеличивалось с 54,0 до 67,3%, а содержание насыщенных кислот уменьшалось с 45,5 до 29,1%. Возможно проявление остаточной активности ß - агонистов в тканях, а затем и в пищевых продуктах (Williams P.E.V., 1988).
В Российской Федерации (РФ) в медицинской практике используют препарат под торговой маркой - Кленбутерол Софарма, в котором в качестве активного вещества использован кленбутерол. Данный препарат применяют при бронхиальной астме, при симптоматическом лечении хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), при бронхообструктивном синдроме (Инструкция по медицинскому применению препарата Кленбутерол Софарма, 2012).
Известно, что использование ß — агонистов в клинической практике приводит к расширению бронхов и улучшению бронхиальной проходимости, гликогенолизу в скелетных мышцах и повышению силы мышечного сокращения, гликогенолизу в печени и увеличению содержания глюкозы в крови, снижению тонуса матки, тахикардии, вазодилатации, нарушению метаболизма, снижению чувствительности ß - адренорецепторов. Данные эффекты фармакологически прогнозируемы (Хартман Э., 1972; Smith D.J., 1998).
Новое исследование американских ученых показало, что число случаев гибели скота, связанных с использованием ß — агонистов в кормах, намного
превышает данные официальной статистики производителей этого препарата. Так, исследователи из Техасского технического университета обнаружили, что в период между 2011 и 2012 годами более 3800 голов крупного рогатого скота, пребывавшего на 10 откормочных площадках, погибло в результате введения рактопамина и зилпатерола в их рацион. Так, исследователи заявляют, что «сама по себе смерть скота редкое явление на фидлотах, поэтому данные, представленные в нашей работе, убедительно свидетельствуют, что рост числа случаев гибели животных в период зернового откорма связан именно с применением стимуляторов роста".
В ответ производители этих препаратов - фармацевтические компании Zilmax и Elanco Animal Health раскритиковали методику исследователей и отметили, что данные кормовые добавки одобрены Управлением по контролю качества пищевых продуктов, медикаментов и косметических средств (FDA).
Методы анализа стимуляторов роста в продуктах животноводства. В настоящее время для определения стимуляторов роста применяют физико-химические и химико-биологические методы.
Физико-химические методы количественного анализа стимуляторов роста основаны на использовании реакций, с помощью которых выявляют и учитывают особенности их химической структуры. Определение содержания стимуляторов роста возможно лишь после их предварительного извлечения и очистки, которые достигаются экстракцией, ультрацентрифугированием, хроматографией и т.д.
К физико-химическому методу относятся метод высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и метод газовой хроматографии - масс-спектрометрии (ГХ-МС). Эти методы имеют ряд недостатков, ограничивающих их широкомасштабное применение, к которым относятся высокая стоимость используемого оборудования, сложность приготовления проб для анализа, необходимость привлечения высококвалифицированных специалистов. Эти методы отнимают много времени, сложны в постановке (Галкин A.B., Комаров В.И., Иванова Е.А., 1998; Комаров A.A., Крапивкин Б.А., 2006; Тарасов И.Е., 2010).
Химико-биологические методы. В качестве биологического метода наибольшее развитие получил радиоиммунологический анализ (РИА), который был предложен в конце 50-х годов. Разработка РИА являлась поворотным моментом в развитии анализа, положившим начало целой серии методов с использованием различных меченых соединений.
Однако, наряду с несомненными достоинствами, РИА имеет и определенные недостатки, к которым можно отнести следующие: 1) ограниченный срок жизни радиоактивной метки, что вызывает необходимость постоянной замены реактивов; 2) относительно дорогое специальное оборудование для регистрации радиоактивности; 3) возможность радиоактивного заражения окружающей среды при осуществлении большого количества анализов, что вызывает необходимость соблюдения специальных мер предосторожности и высокой квалификации обслуживающего персонала.
Экспресс-методы. В последние годы в мировой практике используют скрининговые экспресс-методы контроля безопасности пищевых продуктов. Среди них лидирующее положение занял иммуноферментный метод анализа (ИФА).
Основные принципы ИФА были предсказаны немецким ученым Полем Эрлихом на рубеже XX века. Размышляя о механизме функционирования защитных систем организма, он сформулировал идею «антител», выработанных организмом при проникновении в его ткани чужеродных объектов, названных «антигенами». Конкретный тип чужого объекта и способ защитной реакции на вторжение могут быть установлены организмом в результате сверхспецифического взаимодействия антител и антигенов, точно подходящих друг к другу.
Иммуноферментный анализ (ИФА) является одним из наиболее активно развивающихся направлений иммунохимии, как в нашей стране, так и за рубежом. Это обусловлено тем, что в ИФА уникальная специфичность иммунохимического анализа, сочетается с высокой чувствительностью детекции ферментативной метки. В патентной и научной литературе появляется все больше
сведений о рекордных пределах обнаружения веществ данным методом. Высокие результаты достигаются благодаря использованию способности ферментов — биокатализаторов создавать каскадные системы усиления различных химических сигналов.
Основным достоинством метода ИФА является высокая стабильность реактивов, простота методов регистрации, скорость постановки анализа и дешевизна оборудования. Все это позволяет применять данный метод в медицине, сельском хозяйстве, биологической промышленности, охране окружающей среды, а также в научных исследованиях (Белоусов В.И., Матрёшин A.B., Мамаев М.А., и др., 2000; Галкин A.B., Комаров В.И., Иванова Е.А., 1998; Егоров A.M., 1991; Островская A.B., 2004; Тарасов И.Е., 2010 и др.).
Резюме
Таким образом, проведенный анализ литературных источников по применению препаратов из группы ß - агонистов в качестве стимуляторов роста животных и птицы свидетельствует, с одной стороны, что они стимулируют рост мышечной массы и регулируют соотношение жировой и мышечной тканей при выращивании сельскохозяйственных животных, что обеспечивает получение постного мяса, пользующегося большим спросом на рынке. При их использовании отмечается снижение отложения жира в тушах на 20-30% при одновременном увеличении мышечной массы до 30% у КРС и у свиней до 16%; препараты безопасные для здоровья животных и применяются с целью повышения эффективности животноводства в ряде стран.
С другой стороны, имеются доказательства, что применение ß - агонистов приводят к значительным нарушениям здоровья животных (сердечно -сосудистый стресс и другие отрицательные явления).
У человека при потреблении мяса животных с наличием рактопамина может отмечаться нарушение сердечного ритма (тахикардия), мышечный тремор, гипокалемия, тахифилаксия, чувство беспокойства, головные боли, усиленная потливость, сонливость, мышечные спазмы, повышение артериального давления, тошнота, что особенно опасно для людей с сердечно - сосудистыми
заболеваниями. При хроническом поступлении (3 - агонистов в организм человека могут наблюдаться нарушения обмена веществ, онкологические заболевания.
В Российской Федерации применение стимуляторов роста животных запрещено.
В целях снижения риска для потребителя, необходимо осуществление постоянного ветеринарного контроля импортируемого мяса в Российскую Федерацию на наличие рактопамина в рамках реализации «Плана государственного ветеринарного лабораторного мониторинга остатков запрещенных и вредных веществ в организме животных, продуктах животного происхождения и кормах» (2012), что должно исключать его попадание с продуктами животноводства в организм человека.
В этой связи становится весьма актуальной необходимость проведения исследований по разработке и применению скрининговых экспресс-методов выявления стимуляторов роста (в частности, рактопамина) в продуктах убоя сельскохозяйственных животных, которые на первом этапе контроля позволяли бы исключать поступление в Российскую Федерацию мяса и субпродуктов, содержащих рактопамин.
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», 06.02.05 шифр ВАК
Ветеринарно-санитарная экспертиза и оценка продуктов убоя нутрии при различных температурно-влажностных режимах хранения2019 год, кандидат наук Калюжная Тамара Васильевна
Применение композиции кормовых добавок для производства биологически безопасной продукции индейководства2023 год, кандидат наук Васильченко Василий Дмитриевич
Комплексная оценка продуктивности и качества мяса, полученного от свиней после овариоэктомии2014 год, кандидат наук Егорова, Жанна Геннадьевна
Определение видовой принадлежности мяса домашних и диких животных1999 год, кандидат ветеринарных наук Кабанова, Елена Михайловна
Определение остаточных количеств лекарственных препаратов и бактериальных токсинов в продуктах животного происхождения методами ферментативного ингибирования и иммуноанализа2016 год, кандидат наук Светличкин Владимир Вячеславович
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение стимулятора роста-рактопамина в мясе и печени методом иммуноферментного анализа»
характеристика
Рактопамин - Р - адренергический агонист, принадлежащий к классу фенэтаноламинов. Активным фактором является 1-(4-гидроксифенил)-2-(1-метил-3(4-гидроксифенил) пропиламино) этанол или его физиологически приемлемая соль (рисунок 2).
ОН СНз
НО—">—СНСН -ИН-СН-СН СН —</ \>—ОН
Рисунок 2 — Формула рактопамина гидрохлорида
Рактопамин имеет два ассиметричных атома углерода. Рактопамин гидрохлорид имеет синонимическое наименование бензенеметанол, систематическое наименование 4-гидрокси-альфа-[3-(4-гидроксифенил)-1-метилпропила-мино-метил]-гидрохлорид; CAS 90274-24-1; брутто-формула C18H23NO3 HCI; молекулярная масса 337,85 Да.
Фармакологически классифицируется как фенэтаноламиновый агонист р -адренорецепторов. По своему физиологическому действию он является стимулятором, в первую очередь р2 - адренорецепторов, находящихся в бронхах, скелетных мышцах, сердце, сосудах, ЦНС, матке и других органах.
По своим физическим свойствам рактопамин представляет собой кристаллический порошок грязно-белого или кремового цвета, ограниченно растворимый в воде.
Рактопамин - препарат, который применяется в качестве кормовой добавки, способствующий образованию постного мяса у животных. Рактопамин увеличивает конверсию корма, способствует уменьшению жировой массы и
увеличению мышечной. Он обладает анаболическим и липолитическим эффектом, способен расслаблять гладкую мускулатуру и в силу этого используется в качестве терапевтического средства как антиастматический агент. Однако, было установлено, что при потреблении с пищей у людей он может спровоцировать тахикардию и резкий подъем артериального давления, значительную аритмию или ишемию миокарда. Также рактопамин вызывает синдромы пищевого отравления, такие как рвота, головокружение, летаргия, дрожь. Есть мнение, что долговременное употребление вызывает рак и мутации хромосом. Рактопамин вызывает серьезные побочные эффекты у людей с глаукомой, диабетом, сердечно — сосудистыми заболеваниями, высоким артериальным давлением и гиперплазией простаты.
Рактопамин был разработан фармацевтической компанией Elanco Animal Health, отделом Eli Lilly, продается под названием Paylean для использования свиньям, Optaflexx для использования крупному рогатому скоту и Тотах для использования индейкам.
Рактопамин был утвержден Управлением по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (FDA - Food and Drug Administraion) в 1999 году и Канадским агентством продовольственной инспекции (CFIA -Canadian Food Inspection Agency) под торговой маркой Paylean® в 2005 году для использования в свиноводческой промышленности, а в начале 2003 года - для крупного рогатого скота.
Paylean пользуется большой популярностью у производителей свинины, поскольку улучшает среднесуточный привес на 10%. Среднесуточное же потребление кормов снижается на 6%, что позволяет получать огромную прибыль.
Для крупного рогатого скота использование препарата Optaflexx приносит дополнительное увеличение веса до 15,9 %.
Одновременно, работники животноводческих ферм отмечают негативное влияние Paylean на здоровье и поведение животных. Они становятся агрессивными, теряют способность справляться со стрессами и могут даже упасть
замертво от сердечного приступа во время любой стрессовой ситуации. Так, использование рактопамина в качестве стимуляторов роста для повышения продуктивности животных запрещено в 160 странах, включая страны ЕС, Китай и Тайвань, где наказание за его использование включает в себя штрафы и тюремное заключение. Этот запрет связан с риском негативного воздействия остаточного содержания этих препаратов в продукции животноводства на здоровье потребителей. Импортное мясо в этих странах проверяется и уничтожается при обнаружении следов рактопамина.
В период с 1998 по 2008 годы в Китае более 1700 человек отравилось при употреблении в пищу свинины, контаминированной рактопамином (http://www. epochtimes.ru, 2011; http://www. epochtimes.ru, 2009; http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; Хэнкок Д.Л., 1993; Alemanno A., Capodieci G., 2012; Banned B.E.M., 2010; Bottmiller H., 2012; Brain R., 2006; Marsmann H.J., 1998; Minton В., 2010; The free encyclopedia http://en.wikipedia.org.; The EFSA Journal, 2009; Schinckel A.P., Richert B.T., Herr C.T. et al., 2000; Sinclair P., 2011). В этой связи в последнее время в Китае всё чаще возникают скандалы, связанные с качеством отечественного мяса и продуктов сельского хозяйства: стало известно, что в провинции Хубэй практически на всех овцефермах применяют стимуляторы роста, затем от этих животных продают мясо в разных провинциях страны. Китайское издание «Новая столица» сообщает, что на протяжении многих лет практически во всех овцехозяйствах провинции Хэбэй применяют рактопамин и кленбутерол. Мясо от этих животных потом продаётся в провинциях Цзянсу, Хэнань, Хэбэй, городе Шанхай и др. Примечательно, что рактопамин в Китае официально запрещён к использованию и производство его давно прекращено. Однако, по словам крестьян, существует множество нелегальных заводов, производящих этот стимулятор, а продавцы сами приезжают к ним и предлагают свой товар, причём по очень низкой цене (Иванов И.В., 2011).
Официально использование рактопамина разрешено в 25 странах, в том числе в Бразилии, США, Канаде, Мексике, Австралии, Аргентине, Южной Корее, Японии и других странах.
В США рактопамин разрешено применять в качестве кормовой добавки в дозах от 5 до 20 мг/кг корма для свиней в окончательный стадии откорма до 109 кг. и от 5 до 10 мг/кг - с весом выше 109 кг. Для крупного рогатого скота пределы использования рактопамина в корме ограничены интервалом 10-30 мг/кг сухой массы корма.
В Канаде рактопамин разрешено использовать с кормовой мукой или кормовыми гранулами для боровов на завершающем этапе откорма подсвинков, мясного скота и крупных индеек (http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; Banned В.Е.М., 2010; The free encyclopedia http://en.wikipedia.org.; The Facts about U.S. Beef and Ractopamine, 2012; Thompson C., Crooks S., Traynor I., 2002).
В июле 2007 года сотрудники ветслужб Китая наложили арест на свинину с наличием остаточного количества рактопамина, произведенную в США. Затем, в сентябре, был наложен арест на поставки свинины с наличием рактопамина, хотя на этот раз была свинина канадского происхождения (http://canadianpress.google .com., 2007; http://usatoday.com., 2007; Lin H., 2007).
По закону о пищевых продуктах Малайзии от 1983 года и Правилам (по состоянию на 5 января 2010 г.) содержание рактопамина допускается в мышцах и жире свиней - 10 мкг/кг, печени свиней - 40 мкг/кг и почек свиней - 90 мкг/кг. 30 декабря 2008 года Департамент ветеринарии Малайзии наложил карантин на 10 из 656 свиноводческих ферм, т.к. было обнаружено, что у свиней присутствуют остаточные количества запрещенных препаратов (http://thestar.com., 2006, 2008).
В 2004 году Объединенным Комитетом экспертов ФАО/ВОЗ (Продовольственная и сельскохозяйственная организация ООН (ФАО)/Всемирная организация здравоохранения) были рекомендованы следующие максимально допустимые уровни содержания рактопамина в тканях свиней и крупного рогатого скота: мышечная ткань - 10 мкг/кг, печень - 40 мкг/кг, почки - 90 мкг/кг, жировая ткань 10 мкг/кг. Эти рекомендации были основаны на результатах, полученных при максимальном поступлении рактопамина в организм животных с кормами - 50 мг/кг. В настоящее время в США максимально допустимый уровень содержания рактопамина в мясе составляет
0,05 мг/кг, в Японии - 0,01 мг/кг. В Канаде установлены следующие максимально допустимые уровни содержания рактопамина: в свинине - 0,04 мг/кг, печени свиней - 0,12 мг/кг, почках свиней 0,14 мг/кг, говядине — 0,01 мг/кг, говяжьей печени - 0,04 мг/кг, говяжьих почках - 0,1 мг/кг, мясе индейки - 0,03 мг/кг, печени индейки - 0,2 мг/кг (http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; Joint FAO/WHO, 2004; Health Canada, 2012).
В Риме с 2 по 7 июля 2012 года проходило заседание 35-ой сессии Комиссии «Кодекс Алиментариус», на котором активно обсуждался вопрос определения максимально допустимого уровня (МДУ) содержания рактопамина в мясе. За принятие МДУ рактопамина активно выступали США, Бразилия, Австралия, Новая Зеландия и другие страны. Против принятия МДУ выступали такие страны, как Европейский союз, Китай, Египет, Турция, Кения, Индия, Казахстан, Хорватия, Зимбабве, Российская Федерация и другие. Комиссия Кодекса Алиментариус установила максимально допустимый уровень остатков рактопамина (МДУ) на уровне 0,01 мг/кг (для мяса свиней и КРС), 0,04 мг/кг (для печени свиней и КРС) и 0,09 мг/кг (для почек свиней и КРС).
На Российский продовольственный рынок не допускаются свинина, говядина и мясо индейки с содержанием рактопамина. Это означает, что продукция, в которой обнаружен рактопамин в любой концентрации, подлежит уничтожению. Со стороны Россельхознадзора принимаются меры к определению допустимых норм содержания рактопамина в продукции животного происхождения. С этой целью создана рабочая группа, в работе которой принимают участие представители Евразийского экономического сообщества (ЕврАзЭС), Министерства сельского хозяйства РФ и Министерства здравоохранения РФ (Маслов М., 2012; Ментюкова С., 2012; http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; http://www.fsvps.ru, 2012; http://www.agroru.com., 2012; Codex Alimentarius Commission, 2012).
Метаболизм и фармокинетика препарата. Обмен и накопление рактопамина в организме сельскохозяйственных и лабораторных животных были изучены с применением метода радиоактивных индикаторов. Препарат вводили вместе с
кормом (свиньям) и внутрижелудочно (крупному рогатому скоту) в официально рекомендованной и в 2,5 раза повышенной дозе. При этом было показано, что рактопамин быстро абсорбируется, распределяется и выводится из организма свиней, крупного рогатого скота, подопытных лабораторных животных и приматов. Выводится препарат, главным образом, с мочой и калом в оригинальной форме или в форме его метаболитов. Метаболиты, которые образуются за счет конъюгации гидроксильной группы, идентифицируются как моноглюкурониды рактопамина.
95% введенного количества рактопамина экскретируются в первые 3 дня, около 90% (у свиней) и 55% (у крупного рогатого скота) экскретируется с навозом, 10% и 45%, соответственно, с мочой. В соответствии с другими данными, 88% препарата выводится с мочой и только 9% - с фекалиями. Различие в результатах может быть связано с дозой перорально вводимого рактопамина. При первом обороте метаболитов рактопамина значительное их количество экскретируется с желчью. При многократных повторных введениях стационарный уровень рактопамина достигается у обоих видов на 4-й день.
Наибольшее (пиковое) содержание рактопамина в плазме и цельной крови у лабораторных животных (собаки, обезьяны) и свиней наблюдалось через 0,5-2,0 часа после перорального введения. При введении растворов рактопамина собакам в дозе от 0,5 до 2,0 мг/кг массы тела его содержание в крови самцов и самок было практически на одинаковом уровне. Однако при пероральном введении рактопамина в дозе 20 мг/кг массы тела через 7 часов после введения, уровень его содержания в крови самок был в 2,5 раза выше, чем в крови самцов. Исследование кинетики выведения рактопамина из крови собак, обезьян и свиней показало, что после его введения в дозе 0,125 мг/кг в течение 7 часов выводилось от 70 до 79%, в течение 1-х суток - 85%, в течение 3-х суток - 95%. Было также показано, что в тканях собак и крыс остаточные количества рактопамина были выше, чем в тканях свиней и индеек. Стабилизация уровня рактопамина и его производных в тканях наблюдалась через 4 дня после начала его многократного введения. После прекращения введения рактопамина наибольшая скорость его элиминации
наблюдалась из мышечной и жировой тканей. В печени и почках скорость элиминации препарата была более низкой. Из легких рактопамин практически не выводится.
Было проведено исследование для определения фармакологической реакции людей на рактопамин. Добровольцам давали однократную дозу препарата (40 мг гидрохлорида рактопамина). Рактопамин быстро всасывался, средний период его полураспада составлял примерно 4 часа. Рактопамин не был обнаружен в плазме через 24 часа после приема. Было показано, что меньше 5% от общего количества рактопамина с выделениями представляли исходный препарат, метаболиты в моче представляли собой конъюгаты - моноглюкурониды и моносульфаты, основным из которых был моносульфат (http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; Macneil J.D.,
I '
Soback S., 2004; The free encyclopedia http://en.wikipedia.org.; The EFSA Journal, 2009; Fritz.R. Ungemach, 2004).
w
Ряд авторов исследовали физико-химические свойства рактопамина (Бородулин В.Б., Русецкая Н.Ю., 2013; Васильев C.B., Попова М.В., Фарафонова
' I
О.В. и др., 2014; Шабалина О.В., Скульдицкая З.М., 2013; Бойл Джессика, Фенвик
' „ » , ,
Эшли Эдвард, Гетин Дэвид Моррис и др., патент на изобретение 2419621, дата регистрации 03.10.2007).
Острая токсичность, мутагенность и канцерогенность. Токсикологическая
i
оценка рактопамина в экспериментах на животных включала оценку острой, подострой и субхронической токсичности. В остром эксперименте
, I
среднелетальная доза рактопамина (LD5o) для самцов и самок мышей составила
I . I.
3547 мг/кг и 2545 (мг/кг массы тела соответственно, для самцов крыс - 474 мг/кг массы тела, для самок крыс - 367 мг/кг массы тела.
В эксперименте, на собаках, которым однократно перорально вводили рактопамин в дозах 0, 2, 50 и 125 мкг/кг массы тела, отмечено достоверное дозозависимое увеличение частоты сердечных сокращений (ЧСС) и амплитуды сокращений левого желудочка сердца, снижение как систолического, так и диастолического артериального давления в течение 6 часов после приема препарата. В дозе 50 мкг/кг массы тела и более отмечено покраснение (эритема)
кожи живота. При этом в дозе 2 мкг/кг массы тела ни один из измеряемых параметров не отличался от контроля. На основании этого авторами исследования было предложено считать максимальную недействующую дозу (NOEL - уровень необнаружения эффектов) рактопамина равной 2 мкг/кг массы тела. Данное исследование, однако, было проведено всего на 8 животных и его результаты, поэтому, имеют ограниченную статистическую значимость.
Токсикологическая оценка рактопамина в условиях многократного введения была проведена также на грызунах. Мышам линии B6C3F1 вводили рактопамин перорально в дозах 0, 25, 125 и 1250 мг/кг массы тела в течение 3 месяцев. Отмечено дозозависимое возрастание общего числа эритроцитов, концентрации гемоглобина и парциального объёма эритроцитов у животных обоих полов, абсолютное и относительное увеличение массы сердца. При наибольшей из доз отмечено снижение количества тромбоцитов. Биохимические исследования выявили возрастание уровня азота мочевины и холестерина при наибольшей дозе у самцов и при наибольшей и средней дозах у самок. При наибольшей из доз у самок снижалась концентрация натрия в крови. ЧСС увеличивалась, масса семенников снижалась и наблюдались изменения в размере и гистопатологической картине бурой жировой ткани. Изменений в других органах не выявлено. Перечисленные эффекты наблюдались при высокой дозе рактопамина и, в отдельных случаях, при средней дозе. На основании этих данных NOEL была установлена только для самок в размере 25 мкг/кг массы тела.
Исследование рактопамина было проведено у крыс линии Fisher 344 в дозах 0; 1,3; 13,4 и 152,9 мг/кг массы тела у самцов и 0; 1,4; 15,3 и 156,8 мг/кг массы тела у самок (по 10 животных каждого пола на каждую из доз). В наибольшей из доз отмечали увеличение потребления пищи при снижении прироста массы тела. Изменения в гематологических показателях включали увеличение количества эритроцитов, концентрации гемоглобина и парциального объёма клеток (эритроцитов); среди биохимических показателей отмечено снижение концентрации триглицеридов и общего холестерина, увеличение уровней азота мочевины, калия и щелочной фосфатазы в сыворотке крови. Было отмечено также
уменьшение массы матки, печени, семенников и селезенки. При этом масса почек достоверно возрастала. При гистопатологическом исследовании выявлены изменения в бурой жировой ткани. Все указанные изменения отмечались при высокой дозе препарата, а при средней дозе выявлены только изменения в бурой жировой ткани. Таким образом, в данном исследовании были установлены величины NOEL 1,3 и 1,4 мг/кг массы тела у самцов и самок, соответственно. Исследования на крысах показали снижение среднего размера помета и увеличение общего количества плодов, которые не развиваются.
Исследования по изучению мутации в прокариотах и эукариотах показывают, что рактопамин не является мутагенным. Однако результаты нескольких исследований in vitro, включая тесты по хромосомным аберрациям в лимфоцитах человека, оказались положительными. Положительные генотоксические результаты объясняются, с ограниченными доказательствами, тем, что они возможно являются следствием вторичного механизма спонтанного окисления рактопамина, продуцирующего реактивные промежуточные продукты.
Как считают, рактопамин не является прямым канцерогеном. Он не входит в список International Agency for Research on Cancer (IARC) (Международное агентство по изучению Рака), American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH) (Американская Конференция Правительственных Индустриальных Гигиенистов) или Occupational Safety and Health Administration (OSHA) (Федеральное агентство США, которое регулирует вопросы безопасности труда и здоровья). Индукция доброкачественной лейомиомы (опухоль гладкой мускулатуры) у мышей и крыс может, вероятно, быть следствием общей особенности ß - адренергической активности рактопамина (http://www. rospotrebnadzor.ru, 2012; Joint F AO/WHO, 2004; The free encyclopedia http://en.wikipedia.org.; Fritz.R. Ungemach, 2004).
Влияние препарата на здоровье человека. Рактопамин является стимулятором сердечной деятельности и кровообращения (адреностимулятором), т. к. связывается с ß - рецепторами сердца. Адреностимуляторы вызывают
увеличение частоты сердечных сокращений, системное расширение кровеносных сосудов и дестабилизацию сердечного ритма.
Зависимые от дозы изменения частоты сердечных сокращений и минутного объема сердца наблюдаются в течение первого часа после введения рактопамина при постепенном возвращении к исходным значениям. Систолическое артериальное давление также увеличивается в зависимости от дозы, тогда как диастолическое давление остается неизменным.
Наиболее частый побочный эффект р - агонистов - тремор скелетных мышц и чаще он наблюдается после перорального введения, нежели после ингаляции. Тремор обусловлен дисбалансом между быстрыми и слабыми судорогами групп мышц конечностей, а его тяжесть значительно варьирует у различных людей. Такой эффект не был зарегистрирован при применении рактопамина в NOEL, определяемой в токсикологических исследованиях, проведенных на лабораторных животных, или при обследовании людей с сердечно - сосудистой патологией, принимавших рактопамин.
Рактопамин не обладает избирательностью действия, проявляя тропность к Pi - Р2 - Рз - адренорецепторам. Он первоначально создавался как медицинский препарат для лечения астмы (обеспечивал бронхорасширяющий эффект) - как сальбутамол или фенотерол, селективно возбуждающие р2 - адренорецепторы бронхов, но в настоящее время для применения в медицине не зарегистрирован.
В медицинской практике рактопамин не применяется. Более вероятный путь воздействия рактопамина на человека - потребление мяса животных, которым давали рактопамин с кормом при сохранении остаточных количеств рактопамина.
Если рактопамин поступает в организм человека постоянно, может нарушаться обмен веществ. Рактопамин на некоторое время повышает устойчивость к физическим нагрузкам, поскольку открывает «второе дыхание», «держа» бронхи в расширенном состоянии. Этим нередко пользуются спортсмены, в частности велосипедисты и легкоатлеты. Однако постоянное его использование, как и любых допингов, может значительно навредить здоровью. Развивается привычка, дозу постоянно приходиться увеличивать. Как следствие —
развивается аритмия и появляется риск внезапной остановки сердца (Данилевская Н.В., Дельцов A.A., Субботин В.В., 2013; Тюрдьо Ю., 2012; Chang К., 2008; Ungemach F.R., 2004; The free encyclopedia http://en.wikipedia.org.; Joint FAO/WHO, 2004; Joint FÄO/WHO, 2006; Joint FAO/WHO, 2010).
Резюме
Согласно имеющейся информации, употребление человеком продукции с наличием рактопамина может спровоцировать ряд нарушений его здоровья, а именно тахикардию, мышечной тремор, тахифилаксию, чувство беспокойства, головные боли, усиленную потливость, сонливость, мышечные спазмы, тошноту и повышение артериального давления, а при хроническом его поступлении в организм могут наблюдаться нарушения обмена веществ и другие нежелательные последствия. Поэтому рактопамин запрещен в 160 странах, в том числе в ЕС, РФ, Китае, Тайване и других странах, т.к. не решен вопрос его безвредности. Вместе с тем, в 25 странах (США, Канада, Мексика, Австралия, Новая Зеландия, Бразилия и др.) заявлено, что рактопамин безопасен для человека и животных и его продолжают использовать в практике.
Становится весьма актуальным решение вопросов контроля безопасности продукции в связи с применением рактопамина в животноводстве, а также определения обоснованного максимального допустимого уровня его содержания в мясе и мясопродуктах. В таблице 2 нами приведены данные МДУ ряда стран и международных организаций, которые различаются между собой.
Таблица 2 - Максимальные допустимые уровни рактопамина в различных
странах и организациях
Список Дата Животные Ткани МДУ, м кг/кг
государств и утверяадения (мг/кг)
организации норматива
1 2 3 4 5
Свиньи
США 2012 КРС Мышечная 50 (0,05)
Индейка ткань
1 2 3 4 5
Свиньи
Япония 2012 КРС Мышечная 10(0,01)
Индейка ткань
Мышечная и
Малайзия 2010 Свиньи жировая
ткань 10(0,01)
Печень 40 (0,04)
Почки 90 (0,09)
Свиньи Мышечная
Канада 2012 ткань 40 (0,04)
Печень 120 (0,12)
Почки 140 (0,14)
КРС Мышечная
ткань 10(0,01)
Печень 40 (0,04)
Почки 100 (0,1)
Индейка Мышечная
ткань 30 (0,03)
Печень 200 (0,2)
Объединенный Свиньи Мышечная
комитет 2004 и ткань 10(0,01)
экспертов КРС Печень 40 (0,04)
ФАО/ВОЗ Почки 90 (0,09)
Жировая
ткань 10(0,01)
1 2 3 4 5
Свиньи Мышечная
Комиссия Кодекс 2012 и ткань 10(0,01)
Алиментариус КРС Печень 40 (0,04)
Почки 90 (0,09)
Россельхознадзор Свиньи
Российской 2012 КРС Все органы и 0
Федерации Индейка ткани
Свиньи
Евросоюз 2012 КРС Все органы и 0
Индейка ткани
Так, в 2012 году Комиссия Кодекса Алиментариус (35 сессия, которая была проведена в штаб-квартире (Рим) 2-7 июля) установила максимально допустимый уровень остатков рактопамина (МДУ) на уровне 10 мкг/кг (0,01 мг/кг) для мяса свиней и КРС; 40 мкг/кг (0,04 мг/кг) для печени свиней и КРС; 90 мкг/кг (0,09 мг/кг) для почек свиней и КРС (последнее решение). Несмотря на возражения Российской Федерации, КНР, 27 стран Европейского союза и еще почти 40 государств, на 35-ой сессии Комиссии Кодекс Алиментариус под давлением государств - крупных экспортеров мяса был принят МДУ содержания рактопамина в определенных тканях свиней и крупного рогатого скота. Принятие «безопасного», по мнению ряда стран, МДУ для рактопамина на уровне Комиссии Кодекс Алиментариус призвано заставить государства, запрещающие рактопамин, также внедрить данные МДУ в своих национальных требованиях и фактически разрешить использование данного препарата.
Однако, Россельхознадзор считает, что Комиссия Кодекса Алиментариус не "установила безопасность рактопамина", как указывается в заявлении, а приняла нормы его остаточного содержания в продукции путем простого голосования («за» - 69, «против» - 67), а не консенсуса на основе анализа и обсуждения
научных данных и было проигнорировано мнение научного сообщества и компетентных органов России, стран Евросоюза, Китая, Тайваня и других стран мира, признающих применение рактопамина опасным для потребителя. Кроме того, Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации (при участии ФБУН «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровья населения» (Зайцева Н.В., Шур П.З., Кирьянов Д.А., Аминова А.И., Камалтдинов М.Р., Хрущева Е.В.), ФГБУ «Научно-исследовательский институт питания» РАМН (Тутельян В.А., Хотимченко С.А., Гмошинский И.В., Багрянцева О.В., Шевелева" С.А!.',огЕфимочкина Н.Р.), ФБУН «Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (Ракитский В.Н., Сильницкая Т.А.), ГНУ «ВНИИ мясной промышленности им. В.М. Горбатова» Россельхозакадемии» (Лисицин А.Б.)) провела исследования по оценке риска здоровья населения при поступлении рактопамина с пищевой животноводческой продукцией и определила, что принятая допустимая суточная доза рактопамина недостаточно обоснована и не может быть использована для установления максимально допустимых уровней содержания рактопамина в мясе и субпродуктах. Максимально допустимые уровни содержания рактопамина в пищевых продуктах в настоящее«.время|>не >могут быть приняты в Российской Федерации, и употребление населением пищевых продуктов, содержащих рактопамин на этих уровнях и даже на уровнях предела количественного определения в мясопродуктах, недопустимо из-за неприемлемого риска функциональных нарушений и болезней сердечно — сосудистой системы (Онищенко Г.Г., Попова А.Ю., Тутельян В.А. и др., 2013).
В РФ и Таможенном союзе рактопамин не допускается к использованию. Это означает, что продукция, в которой обнаружен рактопамин в любой концентрации подлежит уничтожению или реэкспорту (если он технически возможен) (Указание Россельхознадзора от 21 сентября 2012г.).
, . т <■,, 1! ^
В настоящее время в ряде стран используют стимулятор роста — рактопамин, способствующий образованию нежирного мяса у животных, а также для увеличения мышечной массы свиней, крупного рогатого скота и индеек. Такие страны, как США, Бразилия, Канада и др. считают, что использование рактопамина безопасно для человека и животных.
Похожие диссертационные работы по специальности «Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза», 06.02.05 шифр ВАК
Разработка методики исследования протеотипических пептидов для полуколичественного анализа мышечных белков в мясной продукции МRМ методом2021 год, кандидат наук Хвостов Даниил Владиславович
Формирование и оценка качества продукции из мяса индейки2021 год, кандидат наук Моисеева Наталья Сергеевна
Влияние ультрадисперсного порошка железа на физиологические показатели, продуктивность свиней и качество продуктов убоя2011 год, кандидат биологических наук Кулаков, Виталий Владиславович
Увеличение ресурсного потенциала мясной отрасли: белково – жировые эмульсии с использованием крови сельскохозяйственных животных и птиц, свойства, применение2017 год, кандидат наук Газданова Рита Юрьевна
Продуктивность и иммунологический статус молодняка индеек при использовании биогенных стимуляторов2018 год, кандидат наук Карданова, Ирина Мухамедовна
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Лемясева, Светлана Васильевна, 2014 год
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авакян, О. М. Фармакологическая регуляция функции адренорецепторов / О. М. Авакян. - М.: Медицина, 1988. - 256 с.
2. Аитова, М. Д. Интенсивность процессов синтеза и катаболизма белков тела и характер азотистого метаболизма у растущих бычков / М. Д. Аитова, С.Ф. Сущенков, Б. Д. Кальницкий, К. Т. Еримбитов, Н. Р. Пьянков // Проблемы физиологии, биохимии, биотехнологии и питания с.-х. животных. — Научные труды ВНИИФБиП с.-х. животных. - Боровск, 1993. - С. 227 - 229.
3. Белоусов, В. И. Определение прогестерона в мясе с использованием ИФА / В. И. Белоусов, A.B. Матрешин, М. А. Мамаев, В. В. Светличкин // Ветеринария. -2000.-№5.-С. 55-56.
4. Бородулин, В.Б. Рактопамин, преднизолон и диацетофенонилселенид: структурное сходство и биологическая активность / В. Б. Бородулин, Н. Ю. Русецкая // Фундаментальные исследования. - Пенза, 2013. - №4-5. - С. 1124 -1127.
5. Буркин, М.А., Методы санитарного контроля животноводческой продукции. Сообщение III. Иммуноферментный анализ гентамицина / М.А. Буркин, Т.П. Кононенко, A.A. Буркин // Сельскохозяйственная биология. — 2011. — №2.-С. 93-98.
6. Васильев, С. В. Формирование рецепторного слоя пьезокварцевого иммуносенсора для определения следовых концентраций рактопамина / С. В. Васильев, М. В. Попова, О. В. Фарафонофа, Н. А. Карасева, Т. Н. Ермолаева // Современные проблемы науки и образования. - Пенза, 2014. - №1. — С. 44.
7. Галимов, Б. А. Ветеринарный контроль за остаточным содержанием гормональных стимуляторов роста териостатиков в мясе и мясопродуктах / Б. А. Галимов, X. К. Тухбатуллин // Информационный бюллетень. - Уфа, 2002. - №1. — С. 34-35.
8. Галкин, А. В. Иммуноферментный метод экспресс-контроля продовольственного сырья и пищевых продуктов на содержание потенциально опасных химических соединений / А. В. Галкин, В. И. Комаров, Е. А. Иванова // Хранение и переработка сельхозсырья. - М., 1998. - №5. - С. 21 - 24.
9. ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия. - М.: Стандартинформ, 2007. - С. 167-178.
10. ГОСТ 7269-79 Мясо. Методы отбора образцов и органолептические методы определения свежести. - М.: Стандартинформ, 2007. - 7 с.
11. ГОСТ Р 51447-99 Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб. - М.: Стандартинформ, 2010. - 6 с.
12. ГОСТ 7702.2.0-95 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям. - М.: Стандартинформ, 2009. - 12 с.
13. ГОСТ 10354-82 Пленка полиэтиленовая. Технические условия. - М.: Стандартинформ, 2007. - 23 с.
14. ГОСТ 29224-91 Посуда лабораторная стеклянная. Термометры жидкостные стеклянные лабораторные. Принципы устройства, конструирования и применения. -М.: Стандартинформ, 2005. - 14 с.
15. ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия. - М.: Стандартинформ, 2006.-22 с.
16. Гуанчжоу продолжает сражаться с «порошком постного мяса» -рактопамином [Электронный ресурс]. Перевод с англ. Судникович О. // Великая Эпоха. - 10.04.2011. - Режим доступа: 1Шр://\у\у\у. epochtimes.ru.
17. Данилевская, Н. В. К вопросу об использовании рактопамина в промышленном животноводстве / Н. В. Данилевская, А. А. Дельцов, В. В. Субботин // Российский ветеринарный журнал. Сельскохозяйственные животные. -2013.-№3.-С. 6-9.
18. Дворкин, В. И. Понятие неопределенности и его использование в лабораторной практике / В. И. Дворкин, И. В. Болдырев // Заводская лаборатория. Диагностика материалов. - 2006. - №4. - Т.72 - С. 55 - 61.
19. Егоров, А. М. Теория и практика иммуноферментного анализа / А. М. Егоров, А. П. Осипов, Б. Б. Дзантиев, Е. М. Гаврилова - М.: Высш. шк., 1991. — 288 с.
20. Еримбетов, К. Т. Метаболизм белков у растущих бычков и свиней и факторы его регуляции: дисс. ... д-ра. биол. наук: 03.00.04, 03.00.13 / Еримбетов Кенес Тагаевич - Боровск, 2007. - 400 с.
21. Журбенко, А. М. Гормоны и продуктивность животных / А. М. Журбенко. - Киев: «Урожай», 1983. - 128 с.
22. Иванов, И. В Китае овец кормят стероидами [Электронный ресурс] / И. Иванов // Великая Эпоха. - 19.08.2011. - Режим доступа: http://www. epochtimes.ru.
23. Инструкция по медицинскому применению препарата Кленбутерол Софарма. Регистрационный номер П №015306/01, 2012.
24. Каленюк, В. Ф. Интенсивность роста, обмен азотистых веществ и энергии у бычков в переходный период выращивания под влиянием кленбутерола / В. Ф. Каленюк, В. А. Матвеев, Е. Е. Комкова, С. Л. Купий, Н. С. Тагиров // Сельскохозяйственная библиотека. - 1993. - №6. - С. 68 - 72.
25. Кальницкий, Б. Д. Метаболизм белков и липидов у откармливаемых бычков при скармливании кленбутерола / Б. Д. Кальницкий, М. Д. Аитова, К. Т. Еримбетов, П. В. Матющенко // Доклады Россельхозакадемии. - 1994. - №4. - С. 36-37.
26. Китайские свиньи сделаны из особых компонентов [Электронный ресурс] / Великая Эпоха. - 19.05.2009. - Режим доступа: http://www. epochtimes.ru.
27. Комаров, А. А. Тест - система ИФА для определения кленбутерола / А. А Комаров, Е. С. Вылегжанина, О. Е. Латышев, Б. А. Крапивкин // Ветеринария. -2004.-№12.-С. 49-51.
28. Комаров, А. А. Использование р-агонистов в животноводстве в качестве стимулятора роста / А. А. Комаров // С. - х. биология. - 2002. - №4. - С.12 - 20.
29. Комаров, А. А. Определение бета-адреномиметиков в органах и тканях животных методом хромато-масс-спектрометрии / А. А. Комаров, Б. А. Крапивкин // Сборник научных трудов ВГНКИ. -М., 2006. -Т.67. - С.122 - 141.
30. Комаров, А. А. Скрининг-метод ИФА для обнаружения кленбутерола в шерсти и сетчатки глаза животных / А. А. Комаров, О. Е. Латышев // Сборник научных трудов ВГНКИ. -М., 2006.-Т 67. - С. 141 - 149.
31. Комаров, А. А. Система обеспечения безопасности продукции животноводства при использовании анаболических стероидов, производных стильбена и р - адреностимуляторов: дисс. ... д-ра. биол. наук: 03.00.23, 16.00.04 / Комаров Александр Анатольевич - М., 2006. - 452 с.
32. Манухина, А. И. Влияние кленбутерола на морфофункциональное состояние эндокринных желез, скелетных мышц и жировых депо бычков / А. И. Манухина, Б. Д. Кальницкий // Доклады Россельхозакадемии. - 2000. - №2. - С. 40-43.
33. Маслов, М. Казахстан поддержал позицию против содержания стимуляторов роста в продуктах животного происхождения [Электронный ресурс] / М. Маслов. - 13.07.2012. - Режим доступа: 1шр:/Лу\у\¥. пе\УБкаг. ги.
34. Матвеев, В. А. Гормональный статус и продуктивность бычков при применении р-агониста кленбутерола / В. А. Матвеев // Ш-я международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». - Тезисы докладов, Боровск. - 2000. - С. 325 - 327.
35. Машковский, М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - 14-е издание. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2004. - Т.1. - С. 230 - 243.
36. Машковский, М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. — 15-е издание. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2005. - С. 239 - 254.
37. Машковский, М. Д. Лекарственные средства / М. Д. Машковский. - 16-е издание. - М.: ООО «Издательство Новая Волна», 2010. - 1216 с.
38. Ментюкова, С. Россия не допустит на внутренний рынок свинину и говядину с остаточным содержанием рактопамина (стимулятор роста) [Электронный ресурс] / С. Ментюкова. - 26.09.2012. - Режим доступа: http://wto.wtcmoscow.ru.
39. Меркел, Р. А. Характеристика качества и состав туш свиней, откормленных рационом с добавлением рактопамина / Р. А. Меркел, P. JI. Буркетт, А. С. Бабикер // 34 Международный конгресс по вопросам науки и технологии мясной промышленности. - М., 1989. - Т.2. - С. 395 - 398.
40. Морозова, Е. Н. Гармонизация критериев и методов оценки качества и безопасности продуктов животного происхождения : автореф. дис. ... канд. биол. наук : 16.00.06 / Морозова Елена Николаевна. - М., 2005. - 24 с.
41. Нестеренко, И.С. Получение иммунореагентов для выявления в ИФА фторхинолонов / И.С. Нестеренко, Е.С. Вылегжанина, K.M. Филиппова, A.B. Сорокин, A.A. Комаров, А.Н. Панин // Ветеринария. - М., 2014. - №4 - С. 58 - 61.
42. Онищенко, Г. Г. К оценке безопасности для здоровья населения рактопамина при его поступлении с пищевыми продуктами / Г. Г. Онищенко, А. Ю. Попова, В. А. Тутельян, Н. В. Зайцева, С. А. Хотимченко, И. В. Гмошинский, С. А. Шевелева, В. Н. Ракитский, П. 3. Шур, А. Б. Лисицын, Д. А. Кирьянов // Вестник Российской академии медицинских наук. - М., 2013. - №6. - С. 4 - 8.
43. Островская, А. В. Содержание гормональных стимуляторов роста в мясе и усовершенствование метода их определения: дисс. ...канд. биол. наук: 16.00.06 / Островская Анна Владимировна - М., 2004 - 97 с.
44. О переговорах с Генеральным директоратом Европейской комиссии по здравоохранению и защите потребителей [Электронный ресурс] / Роспотребнадзор. - 04.09.2012. - Режим доступа: http://www.rospotrebnadzor. ru.
45. Об обеспокоенности Россельхознадзора в связи с выявлением рактопамина в мясосырье, поступающим из Канады [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 04.12.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
46. Об обеспокоенности Россельхознадзора в связи с выявлением рактопамина в мясосырье, поступающим из США [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 05.12.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
47. О введении Россельхознадзором временных ограничений, на поставки американской свинины и говядины [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. -30.01.2013. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
48. О введении Россельхознадзором временных ограничений на поставки мяса индейки из США [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 04.02.2013. -Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
49. О вреде рактопамина [Электронный ресурс] / Роспотребнадзор. - 2014. -Режим доступа: http://www. rospotrebnadzor.ru.
50. О заявлении Национальной Федерации Индейки США и Совет США по Экспорту домашней птицы и яиц (иБРЕЕС) [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. -06.02.2013. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
51. О мерах Россельхознадзора в связи с выявлением запрещенного к применению в России стимулятора продуктивности бета-адреностимулятора рактопамина в мясной продукции из США, Канады и Бразилии [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 09.01.2013. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
52. О наличие остатков рактопамина в мясе, выработанном рядом производителей США и Канады [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. -21.09.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
53. О некоторых откликах в американской прессе на введение временных ограничений на ввоз в Россию мясной продукции из США [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 01.02.2013. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
54. О переговорах Евгения Непоклонова с секретарем по здоровью животных и растений и инспекции Министерства сельского хозяйства, животноводства и продовольствия Бразилии [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 22.11.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
55. О публикациях в мировой прессе относительно применения рактопамина [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 21.09.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
56. Относительно требования Россельхознадзора о недопустимости ввоза мяса животных, откормленных с применением бета-адреностимулятора рактопамина [Электронный ресурс] / Россельхознадзор. - 07.12.2012. - Режим доступа: http://www.fsvps.ru.
57. О недопущении применения ветеринарных препаратов [Электронный ресурс] / Россельхонадзор. - 29.12.2011. - Режим доступа: 11«р:/Л\^\^. fsvps.ru.
58. Пат. №2113222 США, А61К31/135, А61К31/535. Способ обработки самок крупного рогатого скота для улучшения их производительности по молоку и корму [Текст] / Дина Лори Хэнкок; заявитель и патентообладатель Эли Лили энд Комппани. - № 93056592/13; заявл. 17.12.1993; опубл. 20.06.1998. - 8 с.
59. Пат. №2419621 Россия. Гетероциклические соединения, пригодные для использования в качестве анаболических агентов скота [Текст] / Бойл Джессика, Фенвик Эшли Эдвард, Гетин Дэвид Моррис, Маккаскер Кэтрин Фрэнсис; заявитель и патентообладатель Пфайзер Лимитед. - № 2009113556/04; дата регистрации: 03.10.2007 - 8 с.
60. Перцева, М. Н. Мембранный комплекс гормон-рецептор-аденилатциклаза и его функциональное формирование в онтогенезе / М. Н. Перцева // Усп. совр. биологии. - 1982. - Т. 93. - Вып. 3. - С. 382 - 396.
61. Причард, Э. Контроль качества в аналитической химии / Э. Причард, В. Барвик // Пер. с англ. под ред. Болдырева И. В. - СПб.: ЦОП «Профессия», 2012. -320 с.
62. Россельхознадзор может ввести запрет на ввоз свинины из Бразилии [Электронный ресурс] / Российская газета. - 06.10.2011. - Режим доступа: http://www.rg.ru.
63. Россия может запретить поставки мяса из Бразилии, произведенного с помощью рактопамина [Электронный ресурс] / Аграрная торговая система. -06.08.2012. - Режим доступа: http://www.agroru.com.
64. Россия может ввести ограничения на импорт мяса из Северной Америки и Австралии [Электронный ресурс] / Аграрная торговая система. - 30.08.2012. -Режим доступа: http://www.agroru.com.
65. Сергеев, В. П. Рецепторы физиологически активных веществ / В. П. Сергеев, Н. Л. Шимановский. -М.: Медицина, 1987.-400 с.
66. Стимуляторы роста убивают американский скот [Электронный ресурс] / Агенство мониторинга безопасности продуктов питания. - 2014. - Режим доступа: http://foodcontrol.ru.
67. Тарасов, И. Е. Определение ивермектинов в продуктах животного происхождения методом иммуноферментного анализа: дисс. ... канд. биол. наук: 06.02.05 / Тарасов Илья Евгеньевич - М., 2010. - 140 с.
68. Ткачук, В. А. Введение в молекулярную эндокринологию / В. А. Ткачук. -М.-.МГУ, 1983.-256 с.
69. Тюрдьо, Ю. Почему украинцы едят мясопродукты, начиненные стимуляторами? [Электронный ресурс] / Ю. Тюрдьо. - 07.12.2012. — Режим доступа: http://www.odnako.org.
70. Указание Главного государственного ветеринарного инспектора по организации Государственного ветеринарного надзора за содержанием гормональных стимуляторов роста и тиреостатиков в продукции животного происхождения № 13-7-1/900 от 04.10.99г.
71. Федеральное агенство по техничексому регулированию и метрологии / Руководство по использованию оценок повторяемости, воспроизводимости и правильности при оценке неопределенности измерений // Рекомендации по стандартизации Р50.1.060-2006. -М.: Стандартинформ, 2007.
72. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. Российская академия медицинских наук. Российская академия сельскохозяйственных наук. Оценка риска здоровью населения при поступлении рактопамина с пищевой животноводческой продукцией [Электронный ресурс] / Роспотребнадзор. - 2012. - Режим доступа: http://www. rospotrebnadzor.ru.
73. Фофана, Н. В. Влияние кленбутерола на морфофункциональное состояние мышечной и жировой тканей бычков / Н. В. Фофана // Доклады Россельхозакадемии. - 1998. - №3. - С. 33 - 34.
74. Хамиде, 3. Сеньюва & Джон Гилберт. Простое руководство для пользователей по разработке и валидации методов / Перевод с англ. Галкин А. В. -М., 2011. -43 с.
75. Харкевич, Д. А. Фармакология / Д. А. Харкевич. - 10-е издание. - М.: «ГЭОТАР-Медиа», 2008. - 752 с.
76. Хартман, Э. Биохимия стероидов / Э. Хартман. - М.: Мир, 1972. - 307 с.
77. Цеденова, В. А. Ветеринарно-санитарные аспекты применения гормональных стимуляторов роста в животноводстве и рыболоводстве / В. А. Цеденова // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии. - Сборник научных трудов. - М., 2002. - Т.113. - С. 105 - 117.
78. Чучалин, А. Г. Бронхиальная астма. Сальбутамол. / А. Г. Чучалина, И. Хамида. - М.: ФАРМЕДИНФО, 1992. - С. 98 - 117.
79. Шабалина, О. В. Всемирная торговая организация и Россия: применение кормовой добавки - рактопамина для выращивания сельскохозяйственных животных // О. В. Шабалина, 3. М. Скульдицкая // Региональные аспекты экономики, управления и права в современном обществе. - Йошкар-Ола, 2013. -С. 199-202.
80. Эккерт, Р. Физиология животных. Механизмы и адаптация / Р. Эккерт, Д. Рэндел, Дж. Огастин. - М.: Мир, 1991. - 200 с.
81. Юдаев, Н. А. Биохимия гормонов и гормональной регуляции / Н. А. Юдаев. - М., 1976. - 300 с.
82. Aalhus, J. L. The effect of ractopamine on performance, carcass composition and meat quality of finishing pigs / J. L Aalhus, S. D. M Jones, A. L Schaefer // Canad. J. anim. Sc, 1990. - № 3. - T. 70. - P. 943 - 952.
83. Alemanno, A., Capodieci G. Testing the Limits of Global Food Governance: The Case of Ractopamine / A. Alemanno, G. Capodieci //European Journal of Risk Regulation. -2012. - Vol. 3. - 12 p.
84. Apple, J. К. Meta-analysis of the ractopamine response in finishing swine / J. K. Apple, P. J. Rincker, F. K. Mckeith, S. N. Carr, T. A. Armstrong, P. D. Matzat // Prof. Anim. Sci., 2007. - Vol. 23, N 3. - P. 179 - 196.
85. Banned, В. E. M. in 160 Nations... Yet U. S. FDA Regards it as Safe? [Электронный ресурс] / В. E. M Banned. - 14.09.2010. - Режим доступа: http://winnipeganimals.blogspot.com.
86. Beta-agonists hog the limelight [Электронный ресурс]. - 05.10.2006. -Режим доступа: http://thestar.com.
87. Boatto, G. Synthesis and characterization of new beta-agonists of probable illicit use in animal productions / G. Boatto, C. Testa, G. Brambilla et al. // In: Proceedings of the EuroResidue IV Conference on Residues of Veterinary Drugs in Food. - Veldhoven, The Netherlands, 8-10 May 2000. - P. 237 - 241.
88. Bottemiller, Helena. Dispute over drug in feed limiting US meat exports. [Электронный ресурс] / Helena Bottemiller. - 25.01.2012. - Режим доступа: http://www.NBCNEWS.com.
89. Brambilla, G. Identification of new clenbuterol-like substances in urine and hair by hyphenated techniques / G. Brambilla, M. Fiori, C. Testa et al. // In: Proceedings of the EuroResidue IV Conference on Residues of Veterinary Drugs in Food. -Veldhoven, The Netherlands, 8-10 May 2000. - P. 255- 259.
90. Brian, Richert. Feed Additives for Swine-Paylean® / Richert Brian, Allan Schinckel // Purdue University. - 2006 - P. 1 - 5.
91. Chang, Kathy. To eat or not to eat? / Kathy Chang // National Hsinchu Girl s' Senior High School. - 30 March, 2008 - P. 1 - 11.
92. China fights back, goes after U.S. meat [Электронный ресурс] / USA Today. - 14.07.2007. - Режим доступа: http://usatoday.com.
93. China stops imports from Canadian pork plant over banned additive [Электронный ресурс] / Canada Press. - 19.09.2007 - Режим доступа: http://canadianpress.google.com.
94. Codex Alimentarius Commission Maximum Residue Limits for Veterinary Drugs in Foods Updated as at the 35th Session of the Codex Alimentarius Commission . -July 2012,-P. 1-40.
95. Council Directive 96/22/EC of 29 April 1996 concerning the prohibjtion on the use in stockfarming of certain substances having a hormonal or thyrostatie action
. and of p-agonists, and repealing Directives 81/602/EEC, 88/146/EEC and 88/299/EEC // Official Journal of the European Communities. - 23/05/1996. - L 125. - P. 3 - 9.
96. Council Directive 96/23/EC of 29 April 1996 on measures to monitor certain substances and residues there of in live animal products and repealing Directives 85/358/EEC and 86/469/EEC and Decisions 89/187/EEC and 91/664/EEC // Official Journal of the European Communities. - 23/05/1996. - L 125. - P. 10-32.
97. Council Directive 2002/657/EC of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results // Official Journal of the European Communities. - 17.08.2002.
• -L 221. — P. 8 — 36.
98. Courtheyn, D. Recent developments in the use and abuse of growth promoters. / D. Courtheyn, B. Le Bizec, G. Brambilla et al. // Analytica Chimica Acta. -2002. - V.473. — P. 71 — 82.
99. Cunningham, H.M. Effects of epinephrine on nitrogen and fat deposition in pigs / H.M. Cunningham, D.W. Friend, J.W.G. Nicholson // J. Anim Sci. - 1963. — P. 632-636.
100. Determination of beta-agonists in tissue. / Canadian Food Inspection Agency. Centre for Veterinary Drug Residues. Health of Animals Laboratory. - 2000. — Version BAGS-SP01. - 13 p.
101. Elanco Study Nos. T4V200321, T4V080342, T4V160328, T4V480326, T4V080325 & T4V200324. Projection based upon a summary of Optaflexx Post-approval Research in Heifers. - October 2006. - Data on file.
102. Eng, K. p - agonists, somatotropins are this years main topics / K. Eng // Feedstuffs. - 1990. - Vol. 62. -N 39. - 12 p.
103. Evaluation of certain veterinary drug residues in food /Joint FAO/WHO. Expert Committee on Food Additives // WHO technical report series. - N 92. - 2004. -P. 37-49.
104. Evaluation of Certain Veterinary Drug Residues in Animals and Foods (Sixty-sixth report of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives). WHO Technical Report Series. -N. 939. - 2006.
105. Gill, C. Reviewing repartitioning agents /C. Gill // Large Anim. Veter. -1990-T. 45. -N 4. - P. 29-31.
106. Gordon, R. S. Proceeding of the Society for Experimental Biology and Medicine / R. S. Gordon, A. Cherkes. - 1958. - 150 p.
107. Hancock, J. D. New feed additive ractopamine increases feed eficiency and carcass leanness in finishing pigs / J. D. Hancock, E. R. Peo, A. J. Lewis // Extension circular. - Nebraska, College of agriculture. - 1988. - T. 88 - 219. - P. 35 - 36.
108. Health Canada table of Administrative Maximum Residue Limits (AMRLS) and Maximum Residue Limits (MRLS) for veterinary drugs in human food products // Health Canada, 2012.
109. Holden, P. J. Repartitioning agents for swine / P. J. Holden // Agri-Pract, 1990.-T. 11.-N3.-P. 25-28.
110. Irvin, K. M. The effect of various levels of ractopamine hydrochloride on the performance and carcass characteristics of finishing swine / K. M. Irvin, L. E Watkins // Animal science dep. Series 88-1. Ohio agr. research and development center. Dep. of animal science. - 1988. - T. 1. - P. 34 - 36.
111. James, B.W. Effect of dietary L - carnitine and ractopamine - HCE (Paylean) on the metabolic response to handling in growing - finishing pigs / B. W. James, M. D. Tokach, R. D. Goodband, J. L. Nelssen, S. S. Dritz, J. M. DeRouchey, J. C. Woodworth // Journal of Animal Science. - 2004. - P. 158-171.
112. Joint FAO/WHO Food Standandards Programme Codex Alimentarius Commission. Thirty-fifth Session. FAO Headquarters, Rome, Italy, 2-7 July, 2012 - P. 15-21.
113. Kuiper, H. A. Illegal use of p - adrenergic agonists: European Community / H. A. Kuiper, M. Y. Noordam, M. M. H van Dooren - Flipsen, R. Schilt, A. H. Roos // Journal of Animal Science. - 1998. - V.76. - P.195 - 207.
114. Lin, Hermia. Swine farmers get rowdy over ractopamine issue [Электронный ресурс] / Hermia Lin. - 22.08.2007. - Режим доступа: http://www.taiwannews.com.
115. Macneil, J. D. Ractopamine Hydrochloride / J. D. Macneil, S. Soback // Supersedes the monograph prepared by the 40th Meeting of the Committee and published in FAO Food & Nutrition Paper 41/5.- FAO FNP 41/16. - 2004. - P. 75 - 92.
116. Marchant Forde, J.N. The effects of ractopamine on behavior and physiology of finishing pigs / J. N. Marchant Forde, D.C. Lay JR,. E. A. Pajor, B.T. Richert, A.P. Schinckel // Journal of Animal Science. - 2003. - Vol. 81. - P. 416-422.
117. Mersmann, H. J. Overview of the effects of p - adrenergic receptor agonists on animal growth including mechanisms of action / H. J. Mersmann // J. Anim. Sci. -1998. - P. 160-172.
118. Minton, Barbara. Read This Before You Buy a Ham [Электронный ресурс] / Barbara Minton. - 14.11.2010. - Режим доступа: http://www.alignlife.com.
119. Neidert, E. Recent developments in methods for residue control of some growth promoting substances / E. Neidert, P. W. Saschenbrecker // In EuroResidue III Conference on Residues of Veterinary Drugs in Food (by ed. N. Haagsma and A. Ruiter). Veldhoven, The Netherlands. - 1996. - P. 185 - 190.
120. Pearson, K. Mathematical contributions to the theory of evolution. III. Regression, heredity, and panmixia / K. Pearson // Philos. Trans, of the Royal Soc. of London. Ser. A, Containing Papers of a Mathematical or Physical Character. - 1896. -Vol. 187. - P. 253-318.
121. Pereira, F. A. Effects of ractopamine and two lysine levels on performance and carcass traits of gilts in the finishing phase / F. A. Pereira, D. O. Fontes, F. С. O. Silva, W. M. Ferreira, A. M. Q. Lanna, G. S. S. Correa, M. A. Silva, P. С Marinho, C. L. C. Arouca, G. M. Salum // Arq. brasil. Med. veter. Zootecn. - 2008. - Vol. 60. -N 4. -P. 943-952.
122. Pereira, F. A. Effect of ractopamine and methods of diet formulation on performance and carcass characteristics of finishing gilts / F. A. Pereira, D. O. Fontes, С. H. F. Vasconcellos, F. С. O. Silva, M A. Silva, P. C. Marinho, C. L. C. Arouca, G. M. Salum // Arq. brasil. Med. veter. Zootecn. - Vol.63. -N 1. - 2011 - P. 203 - 213.
123. Ractopamine [Электронный ресурс] / The free encyclopedia. - Режим доступа: http://en.wikipedia.org.
124. Remy, R. Residues of growth promoting substances in meat / R. Remy, W. De-beuckelaere // Association des Consommateurs- Test-Achats S.C. Contract No. B5-1050/93/006893 1994.-p. 71.
125. Residue Evaluation of Certain Veterinary Drugs. Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives. FAO JECFA Monographs 9. - 2010.
126. Ricks, C. A. Technological innovations for improved nutrient partitioning in animal production / C. A. Ricks // Proc. - Maryland nutrition conf. for feed manufacturers. - 1988. - P. 67 - 71.
127. Santana, C. The in vivo action of cyclic AMP production by Eithr Forskolin or isoproterenol in the Syrian hamster pineel during the day is not accompanied by an increase in melatonin production / C. Santana // Biochem. and Biophys. Res. Commun. - 1988.-N3.-P. 930-936.
128. Schinckel, A. P. Ractopamine best suited to phase-fed swine diets / A.P. Schinckel, В. T. Richert, С. T. Herr, D. Kendall // Feedstuffs, 2000. - Vol.72. -N 44. -P. 11-14.
129. Scientific Opinion of the Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP) on a request from the European Commission on the safety evaluation of ractopamine//The EFSA Journal. - 2009. - Vol. 1041. - P. 1 - 52.
130. Smith, D.J. The pharmacokinetics, metabolism, and tissue residues of beta-adrenergic agonists in livestock / D.J. Smith // J. Anim. Sci. - 1998. - Vol. 76. - P. 173 -194.
131. Sinclair, Paul. The Ractopamine Crisis [Электронный ресурс] / Paul Sinclair. - 10.03.2011. - Режим доступа: http://agcanada.com.
132. Stiles, C.L. Lefkowitz R.J. p-adrenergic receptors: biochemical mechanism of physiological regulation / C. L. Stiles, M. G. Caron // Physiol. Rewievs. - 1984. - P. 661-743.
133. Ten pig farms under quarantine [Электронный ресурс]. - 30.12 2008. — Режим доступа: http://thestar.com.
134. Testa, С. Evaluation of conventional screening procedures for the detection of new beta-agonists / C. Testa, G. Boatto, G. Brambilla // In. Proceedings of the EuroResidue IV Conference on Residues of Veterinary Drugs in Food. - Veldhoven, The Netherlands, 8-10 May 2000. - P. 255 - 259.
135. The Facts about U.S. Beef and Ractopamine // American Institute in Taiwan - 5 March, 2012.
136. Thompson, C. Detection of ractopamine residues in urine and tissues of medicated pigs by biosensor and mass spectrometry / C. Thompson, S. Crooks, I. Traynor // Proceeding of the Fourth International Symposium on Hormone and Veterinary Drug Residue Analysis, Antwerp, Belgium, 4-7 June 2002.
137. Topel, D.G. Development and status of repartitioning agents for use in the swine industry / D.G. Topel // The repartitioning revolution: impact of somatotropin and beta adrenergic agonists on future pork production. - 1987. - P. 1-11.
138. Fritz R. Ungemach Ractopamine (addendum) / Fritz R. Ungemach // Who Food Additives Series: 53. Institute of Pharmacology, Pharmacy and Toxicology Veterinary Faculty, University of Leipzig, Leipzig, Germany. - 2004.
139. White, P. D. Proceeding of the Society for Experimental Biology and Medicine / P. D.White, F. L. Engel. - 1958. - 375 p.
140. Williams, P. E. V. A short review and recent new data on the effects of treating domestic livestock with beta-agonists / P. E. V. Williams // Control and regulation of animal growth. - Wageningen, 1988. - P. 126 - 140.
141. Woodward, K. N. Clenbuterol / K. N. Woodward // In: The forty-seventh meeting of the joint FAO/WHO expert committee on food additives (JECFA). Toxicological evaluation of certain veterinary drug residues in food. WHO food
' additives series 38, ICPS. WHO, Geneva. - 1996. - P. 3 - 43.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Российская академия сельскохозяйственных наук
Отделение ветеринарной медицины
Утверждаю
Академик — секретарь отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии кадемик РАСХН
<А.М. Смирнов Ш.1 2012 г.
Методическое пособие
по количественному определению стимулятора роста — рактопамина в мясе и печени на основе метода иммуноферментного анализа.
Москва -2012 г.
Методическое пособие разработано ГНУ ВНИИВСГЭ РАСХН (Бутко М. П., Лемясева C.B.) и направлены на определение остаточных количеств рактопамина в мясе и печени сельскохозяйственных животных. Оборудование и тест-система иммуноферментного анализа RIDASCREEN® Ractopamin R9901 (производство R-Biopharm, Германия) для выполнения данной работы были предоставлены фирмой ООО «Компания Стайлаб».
Методическое пособие предназначено для работников научных учреждений, исследовательских лабораторий, практических специалистов, работающих в различных отраслях сельского хозяйства, в том числе на мясоперерабатывающих предприятиях.
Рецензент — Зав. отделом технического регулирования, стандартизации и сертификации продукции животноводства ГНУ ВНИИВСГЭ, доктор биологических наук, профессор Светличкин В.В.
Методическое пособие рассмотрено и одобрено ученым советом ГНУ
ВНИИВСГЭ «_25_»_01._2012г. (протокол № _1J и секцией
«Ветеринарная санитария, гигиена и экология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (протокол № 1 от 27.01._2012 г.)
Ответственная за выпуск: заведующая сектором отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии кандидат биологических наук Л. В. Бабышева.
Рактопамин принадлежит к группе веществ, называемых ß - агонистами. Известно, что ß - агонисты стимулируют рост мышечной массы и регулируют соотношение жировой и мышечной ткани при выращивании сельскохозяйственных животных. В частности рактопамин увеличивает конверсию корма, способствует уменьшению жировой массы и увеличению мышечной. Помимо того, что рактопамин обладает липолитическим и анаболическим эффектом, он способен расслаблять гладкую мускулатуру и в силу этого используется в качестве терапевтического средства как антиастматический агент. Было, однако, показано, что ß - агонисты при их потреблении с пищей могут спровоцировать тахикардию и резкий подъем кровяного давления. При хроническом поступлении ß - агонистов в организм человека могут наблюдаться нарушения обмена веществ. Использование ß - агонистов в животноводстве приводит к их накоплению в продуктах животного происхождения и запрещено как в Российской Федерации, так и в странах Евросоюза.
Для определения ß - агонистов используются инструментальные физико-химические методы анализа, такие как жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) и хромато-масспектрометрия (ГХ - MC). Эти методы, однако, предусматривают использование дорогостоящего оборудования, нуждающегося в высококвалифицированном обслуживании.
В последнее время в рутинной лабораторной практике широко применяется более удобный иммуноферментный метод анализа (ИФА, ELISA), использующийся для скрининга продуктов животного происхождения на остатки лекарственных и других препаратов.
2. Область применения методики
Методика предназначена для количественного определения рактопамина в мясе, печени и других продуктах с помощью тест-системы для иммуноферментного анализа ЯГОАБСИЕЕМ® 11ас1орагшп, 119901.
3. Сущность метода
В основе процедуры анализа лежит взаимодействие антигенов с антителами.
Планшет, входящий в состав набора ИШАЗСЯЕЕЫ® Яа^оратт, сенсибилизирован антителами «захвата», специфическими к антителам к рактопамину. Анализ выполняется следующим образом.
Раствор, содержащий антитела к рактопамину, дозируются в лунки планшета. После инкубации и отмывки в лунки добавляются исследуемые (стандартные) образцы и раствор, содержащий конъюгат рактопамина с ферментом. При очередной инкубации планшета молекулы рактопамина, содержащегося в пробе или в стандартном растворе и молекулы коньюгата рактопамина с ферментом, конкурируя между собой, связываются на поверхности планшета антителами, адсорбированными во время предыдущей инкубации.
На последующей стадии промывки из лунок планшета удаляются свободные молекулы коньюгата рактопамина с ферментом.
После промывки планшета в его лунки дозируется раствор, содержащий субстрат и хромоген. В процессе инкубации, при химическом взаимодействии субстрата с хромогеном, в котором ферментный фрагмент молекулы коньюгата, связанной на поверхности лунки, выступает в качестве катализатора, образуются окрашенные продукты реакции. Через определенное время развития цветной реакции, в результате которой хромоген окрашивается в голубой цвет, в лунки добавляется стоп-реагент, при этом голубой цвет раствора меняется на желтый.
Оптическая плотность в лунках, измеренная на спектрометре (ридере), обратно пропорционально концентрации рактопамина в исследуемых образцах.
3.2 Краткое описание методики. - пробоподготовка:
мясо, печень - гомогенизация, экстракция, центрифугирование, испарение и центрифугирование
- затраты времени:
прободготовка (для 10-ти проб):
мясо, печень
около 1,5 часов
анализ (независимо от количества проб): 1 час 30 минут.
- извлекаемость:
для образцов мяса: для образцов печени:
около 75-90%
около 73 %
- перекрестная
чувствительность:
Яа^оратте ОоЬШатте МаЫйего! ЗДихЫпе
100%
около 4,7 % около 4,4 % около 1,4 %
С1епргорапо1, Слта1его1
С1тЬШего1 С1епрегйго1 Мареп1его1 ТегЬийаНпе
ВготсЫогЬшего!
8а1Ьигато1 С1епЬШ:его1
<0,1 % <0,01 % <0,01 % <0,01 % <0,01 % <0,01 % <0,01 % <0,01 %
- около 0,200 - 0,400 мкг/кг в мясе (200 - 400 нг/кг) *
<0,01 % <0,01 %
- около 0,300 - 0,400 мкг/кг в печени (300 - 400 нг/кг) *
• что зависит от вида пробы мяса и его категоричности (свинина, говядина, печень) и пробоподготовки (тип микроиспарительной системы и др. факторов).
4.Средства измерения, вспомогательные устройства, реактивы и материалы.
4.1 Средства измерения
• Весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104
• Меры массы по ГОСТ 7328
• рН-метр
• Спектрофотометр (ридер), снабженный фильтром на 450нм, например, LEDETECT 96
• Дозаторы на 20 - 100 и 200 - 1000 мкл
• Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью 1,5 и 10 мл по ГОСТ 29227.
4.2. Вспомогательные устройства
• Мясорубка по ГОСТ 4025
• Микроизмельчитель тканей (гомогенизатор) РТ-2 или «Ультратюракс» с частотой 8000 - 24000 об/мин
• Центрифуга с устанавливаемым ускорением 4000 g, например, Velocity 14
• Центрифужные пробирки емкостью 50 мл с завинчивающейся крышкой
• Устройство для испарения экстрактов, например, EVA
• Устройство для перемешивания типа «вортекс»
• Устройство для встряхивания проб
• Микротитровальный планшет на 96 лунок (12 стрипов по 8 лунок), сенсибилизированный антителами «захвата»
•Комплект стандартных растворов рактопамина в воде, со следующими концентрациями (1 рр1=1 нг/л): 0 рр1 (нулевой стандарт), 100 рр1, 300 рр^900 ррг, 2700 ррг, 8100 ррг по 1,3 мл
• Коньюгат рактопамина с пероксидазой, 12 мл (красная крышка)
• Антитела к рактопамину, 12 мл (черная крышка)
• Субстрат/хромоген, подкрашен, 10 мл (коричневая крышка)
• Стоп-реагент, содержит 1 М раствор серной к-ты, 14 мл (желтая крышка)
• Буфер, для разбавления проб, 110 мл (белая крышка)
• Состав для приготовления фосфатного моющего буфера концентрации ЮмМ (рН 7,4), содержит 0,05% твина 20
4.4 Вспомогательные реактивы и материалы:
• Ацетонитрил
• Этилацетат
• н-Гексан (или н-гептан)
• р-глюкоронидаза (81§та-АМпсЬ кат. № 07646): растворите сухую навеску 1 мг/мл в деионезированной воде в соответствии с инструкцией
АЫпсЬ
• 75 мМ буферный раствор фосфата калия, рН 6,8:
буфер А: 10,2г КН2РО4 доведите до объема 1000 мл дистиллированной воды
1 шт 6 х 1 шт
1 шт 1 шт 1 шт 1 шт
1 шт 1 шт
буфер Б: 13,06г КгНРС^доведите до объема 1000 мл дистиллированной воды Подстройте значение рН до 6,8 путем смешивания буфера А и Б (отношение 1:1)
• 25 мМ боратный буфер, рН 9,0:
9,5 г натрий тетраборнокислый 10-ти водный (На2В407 * Ю Н20) доведите до объема 1000 мл дистиллированной водой
• 1N раствор ЫаОН
5. Требования к хранению тест-системы
5.1 Порядок использования и хранения тест-системы ШБАЗСЯЕЕН® ИасЮратш
Не используйте тест-систему с истекшим сроком годности.
Разбавление или замена реагентов может привести к потере
чувствительности определения.
Не заменяйте реагенты в составе одного набора реагентами из другого набора с другим номером партии.
Храните набор при температуре 2 - 8°С. НЕ ЗАМОРАЖИВАЙТЕ НАБОР. Для хранения неиспользованных стрипов (лунок) упакуйте их в фольгированный пакет вместе с силикагелем (осушителем) и плотно закройте пакет.
Поскольку раствор хромогена светочувствителен, избегайте попадания прямых солнечных лучей на флаконы с растворами.
5.2 Признаки порчи реагентов
В случае голубоватого окрашивания раствора хромогена не рекомендуется использовать раствор, поскольку это является признаком его порчи. В случае если величина оптической плотности, измеренной в лунке с нулевым стандартом, не превышает 0,6, это также может быть признаком порчи реагентов.
б.Условия выполнения исследований
При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:
7. Порядок отбора проб и подготовки к проведению исследований
7.1.Отбор проб осуществляют согласно действующей нормативной документации.
Пробы доставляют в лабораторию немедленно после их отбора. 7.2. Анализ необходимо начать в день доставки пробы в лабораторию. При отсутствии такой возможности допускается хранение образцов не более чем 2 суток с момента отбора при температуре 2 - 8°С, либо 2 месяцев при температуре - 20°С.
8. Пробоподготовка 8.1. Пробы мяса и печени
- Пробу без жировой ткани измельчают с помощью мясорубки, «Ультратюракса», либо с помощью другого гомогенизатора.
- Отберите навеску 3 г гомогенизированной пробы в центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой на 50 мл, добавьте 8 мл ацетонитрила, 1 мл этилацетата и перемешайте, например,-на вортексе.
- Встряхивайте в течение 30 минут, путем переворачивания пробирки вверх-вниз.
Температура воздуха Атмосферное давление Влажность воздуха Напряжение в сети Частота переменного тока
20 ± 5 °С;
84,0 - 106,7 кПа (630 - 800 мм. рт. ст.); не более 80% при температуре 25°С;
220 ± 10 В; 50 ± 1 Гц
- Центрифугируйте при ускорении 4000 % при комнатной температуре в течение 10 минут.
- Перенесите 4 мл супернатанта (соответствует 1 г пробы) в другую пробирку и испарите его досуха при температуре 60°С, например, в микроиспарительной системе «Миссис» или с помощью лабораторного микроиспарителя с вакуумным насосом (см. Приложение 1).
- Растворите сухой остаток в 2 мл н-гексана, добавьте 1 мл буфера для разбавления проб из комплекта поставки (п. 4.3) и встряхивайте на вортексе в течение 30 секунд.
- Центрифугируйте при ускорении 4000 g при комнатной температуре в течение 10 минут.
- Осторожно отберите нижнюю фазу в чистую пробирку.
- Для анализа используют 20 мкл нижней фазы на лунку.
9.Порядок проведения измерений
9.1. Учесть предварительные моменты по проведению измерений с помощью тест-системы КГОАБСКЕЕМ® 11ас1орагшп
- Перед использованием тест-системы доведите температуру всех реагентов до комнатной (около 60 минут до температуры 18 - 20°С).
- Немедленно после использования охладите все оставшиеся реагенты до температуры 2 - 8°С.
- В процессе выполнения анализа не допускайте высыхания лунок планшета.
- Воспроизводимость результатов иммуноферментного анализа существенно зависит от тщательности отмывки планшета в процессе анализа. Внимательно следуйте описанной далее процедуре отмывки планшета.
- На всех стадиях инкубации избегайте воздействия прямого солнечного света.
9.2. Подготовка к измерениям
9.2.1. Микротитровальный планшет, сенсибилизированный антителами. Перед выполнением анализа из планшета следует извлечь необходимое количество стрипов. Остальные стрипы следует тщательно упаковать в фольгированный пакет с силикагелем (осушителем), закрыть застежку пакета и поместить на хранение при температуре 2 - 8 °С.
9.2.2. Приготовление моющего буферного раствора.
В мерную колбу на 1000 мл переносят содержимое пакетика с буферным составом из комплекта тест-системы и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой. Раствор тщательно перемешивают. Готовый фосфатный буфер с концентрацией ЮмМ можно использовать при исследовании всех проб.
Срок хранения раствора -4-6 недель при температуре 4°С. Альтернатива: для того, чтобы получить концентрированный моющий буфер, поместите содержимое пакетика в мерную колбу на 100 мл, растворите в дистиллированной воде, доведите объем раствора до метки.
Концентрированный буферный раствор может храниться 8-12 недель при комнатной температуре. Храните концентрированный буферный раствор только при комнатной температуре.
Для того чтобы получить готовый буфер, разбавьте концентрированный буферный раствор в десять раз непосредственно перед использованием (смешайте 1 часть буферного раствора и 9 частей дистиллированной воды)
9.3. Процедура анализа
9.3.1. Вставьте в рамку планшета лунки в количестве, необходимом для выполнения всех запланированных определений в дубле (по 2 раза). Запишите координаты лунок, предназначенных для стандартных растворов и подготовленных исследуемых растворов.
9.3.2. С помощью дозатора внесите в каждую лунки по 100 мкл препарата антител (предпочтительно использование 8-ми канального дозатора, при
этом раствор удобно отбирать из специальной ванночки). Оставьте планшет на инкубацию при комнатной температуре в течение 15-ти минут.
9.3.3. Вылейте жидкость из лунок, переверните рамку планшета и тщательно выбейте капельки жидкости, оставшиеся в лунках, путем троекратного постукивания рамки с лунками по столу, накрытому фильтровальной бумагой. Наполните лунки 250 мкл готового раствора моющего буфера (п. 9.2.2.) и вылейте жидкость. Выбейте капельки раствора как описано выше. Повторите процедуру промывки лунок буфером еще два раза.
9.3.4. С помощью одноканального дозатора добавьте по 20 мкл стандартных и исследуемых растворов в соответствующие пары лунок.
9.3.5. Добавьте по 100 мкл препарата коньюгата в каждую лунку. Тщательно перемешайте (можно осторожно постучать по периметру рамки рукой) и оставьте планшет на инкубацию в течение 60 минут при комнатной температуре.
9.3.6. Промойте лунки планшета, как описано в п. 9.3.3.
9.3.7. Добавьте по 100 мкл субстрат/хромогена в каждую лунку. Тщательно перемешайте (можно осторожно постучать по периметру рамки рукой) и инкубируйте при комнатной температуре в течение 15 минут в темноте.
9.3.8. Добавьте в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента и хорошо перемешайте. В течение 30-ти минут после добавления стоп-реагента измерьте оптическую плотность в каждой лунке при 450 нм.
Ю.Обработка результатов исследований
10.1. Вычисление концентрации рактопамина в исследуемых образцах.
Средние значения оптической плотности, измеренной в лунках со стандартными и исследуемыми растворами, делятся на среднее значение оптической плотности, измеренной в лунках с первым (нулевым) стандартом, результат умножается на 100. Таким образом, результат измерения оптической плотности выражается в процентах от оптической плотности лунки с нулевым стандартом, то есть:
Средняя оптическая плотность лунки со стандартом (пробой)
------------------------------------------------------------------X ЮО = % поглощения
Средняя оптическая плотность лунки с нулевым стандартом
По величинам относительного поглощения, вычисленным для стандартных растворов и соответствующим значениям концентрации рактопамина в нг/кг (ррО строится калибровочная кривая в полулогарифмической системе координат.
Концентрация рактопамина в исследуемых растворах в нг/кг (рр1) считывается по калибровочной кривой соответственно относительному поглощению, измеренному и вычисленному для этих растворов.
Для компьютерной обработки результатов измерений рекомендуется использовать специализированное программное обеспечение, например, 11ГОА®8оЛ. При компьютерной обработке результатов следует руководствоваться инструкцией по использованию программного обеспечения.
10.2.Для того чтобы вычислить концентрацию рактопамина в исследуемой исходной пробе, величину концентрации рактопамина, полученную по калибровочной кривой, следует умножить на соответствующий фактор разбавления. При выполнении пробоподготовки и анализа в полном соответствии с приведенной методикой фактор разбавления принимает следующие значения: мясо и печень -1.
11. Требования безопасности
11.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники
безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007,
»
требования пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.018 и электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, указанные в технической документации на весы, спектрофотометр и вспомогательные устройства.
11.2. Помещение, в котором производится выполнение измерений, должно быть снабжено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу с органическими растворителями необходимо проводить в вытяжном шкафу с использованием резиновых перчаток. Стоп раствор содержит Ш серную кислоту (Ю6/38, Б2-26). Будьте осторожны при работе со стоп-раствором.
12.Требования к квалификации персонала
К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное химическое образование или опыт работы в химической лаборатории, владеющего техникой иммуноферментного анализа и освоившего метод в процессе стажировки.
13.Нормативные ссылки
Использованы ссылки на следующие нормативные документы:
ГОСТ 12.1.007-76 ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие
правила безопасности.
ГОСТ 12.1.018-86 ССБТ. Пожарная безопасность. Электростатическая
I
искробезопасность. Общие требования.
ГОСТ 12.1.019-79 ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура средств защиты.
ГОСТ 1770-74Е. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры,
мензурки, колбы, пробирки. Технические условия.
ГОСТ 4025-83. Мясорубки бытовые. Технические условия.
ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия.
ГОСТ 7269-79. Мясо. Методы отбора образцов. Органолептические методы
определения свежести.
ГОСТ 7328-82Е. Меры массы общего назначения и образцовые. Технические условия.
ГОСТ 7702.0-74. Мясо птицы. Методы отбора образцов. Органолептические методы определения качества.
ГОСТ 24104-88Е. Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия,
ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры.
ГОСТ 29169-91. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой.
ГОСТ 29224-91. Термометры ртутные стеклянные лабораторные. Технические условия.
ГОСТ 29227-91. Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Общие требования.
»4
Протокол № 1
комиссионных испытаний по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени на основе метода иммуноферментного анализа (ИФА)
Мы, нижеподписавшиеся, председатель' комиссии профессор В.В. Светличкин и члены комиссии: младший научный сотрудник ГНУ ВНИИВСГЭ Попов П.А., специалист по качеству фирмы ООО «Компания Стайлаб» Елагина А.А.^ лаборант-исследователь фирмы ООО «Компания Стайлаб» Арсланова, С.С., в присутствии аспиранта ГНУ ВНИИВСГЭ Лемясевой С.В. составили настоящий акт о том, что в период 27 - 28 октября 2011 г. было проведено комиссионное испытание по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе на основе метода ИФА на базе лаборатории ООО «Компании Стайлаб» в период проведения семинара на тему «Содержание антибактериальных и гормональных препаратов в пищевых продуктах».
В лаборатории было проведено исследование трех образцов сырого мяса, взятых из розницы, на остатки бета - агониста рактопамина методом конкурентного иммуноферментного анализа с помощью тест - системы ЯШАБСНЕЕК® ЯасЮратт компании Я - ВюрЬагт Ав (Германия).
Были исследованы 1 «холостая» проба мяса говядины (без рактопамина) и 2 положительные пробы свинины (с содержанием рактопамина).
В результате исследования установлено:
1. Оптическая плотность в лунке с первым стандартом равна 1,088, что соответствует критериям контроля пригодности тест — системы (>0,6);
2. Калибровка имеет характерный вид, соответствующий указанному в сертификате качества тест - системы (Примечание: калибровка - набор операций, которые при определенных условиях позволяют установить отношение между значениями (концентрациями), указанными на измерительных приборах и соответствующими известными значениями [концентрациями] аналита);
3. В соответствии с тест-системой ШОАБСРБЕЫ® Яас^раш'т компании 11-ВюрЬагт АО, стандарты и пробы проставлены в двух параллелях.
4. Результаты анализа приведены в таблице, где концентрация рактопамина указана в мкг/кг:
№ Описание пробы Концентрация,
пробы мкг/кг
1 Говядина <0,18
2 Свинина 2,55±0,173
3 Свинина 0,65±0,031
5. Затраченное время на процедуру проведения анализа методом ИФА составило 1 час 30 минут, и он является менее затратным в сравнении с используемыми для определения бета - агонистами "методы анализа, такие как жидкостная хроматография высокого давления (ВЭЖХ) и хромато-масс-спектрометрия (ГХ-МС). Эти методы достаточно трудоемки, занимают длительное время, сопровождаются сложной - пробоподготовкой и значительным расходом реагентов. Кроме того, они реализуются на дорогостоящем оборудовании и нуждаются в высокрпрофессиональном обслуживании.
Таким образом, на основе проведенных, испытаний определена возможность применения иммуноферментного метода для определения рактопамина в мясе (свинина, говядина и др.) на основе тест-системы RIDASCREEN® Ractopamin компании R-Biopharm AG
Подписи:
Председатель комиссии, Г
профессор j^Äjß^^ B.B. Светличкин
Члены комиссии:
- П.А. Попов, младший научный сотрудник
- A.A. Елагина, специалист по качеству
- С.С. Арсланова, лаборант-исследователь ^йл^^0^
- C.B. Лемясева, аспирант
Протокол № 3
производственных испытаний по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени на основе метода иммуноферментного анализа (ИФА)
Мы, нижеподписавшиеся, председатель комиссии профессор В.В. Светличкин и члены комиссии: младший научный сотрудник ГНУ ВНИИВСГЭ Попов. П.А., специалист по качеству фирмы ООО «Компания Стайлаб» Елагина A.A., лаборант-исследователь фирмы ООО «Компания Стайлаб» Арсланова С.С., в присутствии аспиранта ГНУ ВНИИВСГЭ Лемясевой C.B. составили настоящий акт о том, что в марте 2012 г. было проведено исследование по количественному определению стимулятора роста - рактопамина в мясе и печени методом ИФА.
В лаборатории было исследовано 43 пробы (из них пробы говядины составляют 44%, свинины - 23% и субпродукты - 33%) на остатки бета -агониста рактопамина методом конкурентного иммуноферментного анализа с помощью тест - системы RIDASCREEN® Ractopamin компании R -Biopharm AG (Германия).
В результате исследования были получены следующие результаты:
' * ^
■'•и » .■' -л п , . *
«М * ' V < .
1. Оптическая плотность в лунке с первым стандартом равна 1,185, что
соответствует критерию пригодности тест - системы (>0,6);
I , ,
2. Калибровка имела характерный вид, соответствующий сертификату
качества тест — системы;
3. Результаты определения предела обнаружения в говядине, свинине и в говяжьей печени приведены в таблицах 1,2,3.
Таблица 1
Определение предела обнаружения рактопамина в говядине
Говядина Оптическая плотность раствора в лунке, % Результат определения (мкг/кг)
84,1 0,160
81,8 0,188
71,3 0,334
84,2 0,158
73,4 0,303
76,9 0,254
77,3 0,248
75,6 0,272
76,8 0,255
76,7 0,256 -
75,2 0,278
74,6 0,286
78,2 0,235
79,8 0,214
77,8 0,241
82,0 . 0,185
85,1 0,148
78,6 0,166
75,0 0,203
Среднее (а;) 0,231
Стандартное отклонение (s) 0,053
Предел обнаружения сс + 3xs 0,390
Предел количественного определения ас + 9хб 0,708
и:*
'V
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.