Определение состава смесей среднелетучих органических соединений в водном конденсате выдыхаемого воздуха человека методом ГХ/МС тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Родионов, Алексей Александрович

• Родионов, Алексей Александрович
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Родионов, Алексей Александрович

Содержание.

Список сокращений и условных обозначений.

Введение.

ГЛАВА 1. Литературный обзор.

Состав выдыхаемого воздуха.

О применении анализа выдыхаемого воздуха в медицинской • t . 'I диагностике.

Окислительный (оксидативный) стресс.

Используемые для анализа выдыхаемого воздуха методы.

Подробности по проведению ГХ/МС анализа выдыхаемого воздуха.

Перенос вещества в хроматограф.

Концентрирование из выдыхаемого воздуха.

Пробоотбор.

Конденсат выдыхаемого воздуха.

Методы ввода больших проб в капиллярный газовый хроматограф.

Выводы из литературного обзора.

ГЛАВА 2. Оборудование и материалы, методика эксперимента.

Оборудование.

Исходные вещества и материалы.

Модельные смеси.

Методика проведения эксперимента.

Выбор условий хроматографического разделения и массспектрометрического детектирования.

Эксперимент по изучению сорбции и термодесорбции модельных соединений.

Эксперимент по вводу больших проб.

ГЛАВА 3. Исследование условий ГХ/МС определения следовых количеств модельных соединений.

Газохроматографическое разделение веществ, входящих в состав модельных смесей.

Масс-спектры модельных соединений, полученные методом электронной ионизации.

Определение пределов обнаружения веществ, входящих в состав модельных смесей.

Отношение сигнал/шум.

Вычисление пределов обнаружения.

Экспериментальные значения пределов обнаружения.

Масс-спектрометрическое определение альдегидов и кетонов в режиме химической ионизации.

ГЛАВА 4. Исследование возможности снижения пределов обнаружения исследуемых модельных соединений за счёт ввода больших по объёму проб off-line с предварительным удалением растворителя в присутствии сорбента вне аналитической системы.:.

Изучение влияния сорбента на процессы сорбции и термодесорбции модельных соединений.

Изучение и оптимизация условий термодесорбции веществ из модельной смеси.

Разработка способа определения ультраследовых количеств среднелетучих органических соединений различной полярности в органических растворах, основанного на вводе больших проб offline и ГХ/МС анализе всего концентрата аналитов.

Экстракция веществ модельной смеси из водного раствора.

Ввод больших проб экстрактов из водных растворов модельной смеси.

Анализ 1 мкл экстракта конденсата выдыхаемого воздуха.

Анализ 100 мкл экстракта из конденсата выдыхаемого воздуха с использованием разработанного способа анализа водных растворов.

ГХ/МС анализ образцов экстракта из конденсата выдыхаемого воздуха с детектированием в режиме химической ионизации.

ГЛАВА 5. Исследование состава среднелетучих примесей, присутствующих в образцах конденсата выдыхаемого воздуха здоровых людей, больных астмой и хронической обструктивной болезнью лё'гких.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение состава смесей среднелетучих органических соединений в водном конденсате выдыхаемого воздуха человека методом ГХ/МС»

Работа посвящена определению среднелетучих органических веществ в водном конденсате выдыхаемого воздуха человека (КВВ). КВВ — биологический объект, интерес к изучению которого возник в начале 80-х годов XX века. Это было связано с необходимостью разработки новых способов диагностики заболеваний лёгких на ранней стадии (причём, желательно неинвазивных способов диагностики). Привлекательность данного способа заключается в простоте схемы сбора конденсата, возможности проводить эту процедуру многократно без нанесения вреда человеческому организму.

Применение метода хромато-масс-спектрометрии для определения среднелетучих органических соединений в различных объектах (в том числе водных) широко распространено. Существует определённый ряд трудностей для использования*данного метода при анализе КВВ, таких как чрезвычайно низкое содержание определяемых компонентов, большое число компонентов^ для разделения и идентификации, возможная нестабильность ряда компонентов. В данной работе было уделено особое внимание возможности, определения среднелетучих термостабильных органических соединений различной полярности на ультраследовом уровне в водных растворах и КВВ.

Для уменьшения пределов обнаружения газохроматографического определения веществ в органических растворах применяют различные способы ввода больших по объёму проб органических растворов (экстрактов), в инжектор газового хроматографа. Увеличение объёма вводимой пробы с 1 до 100 мкл позволяет в некоторых случаях уменьшить значения пределов обнаружения в соответствующее число раз.

КВВ рассматривался в этой работе как самостоятельный объект для анализа. Для сбора КВВ не существует общепринятой методики, однако довольно распространён способ, основанный на использовании установки, производимой серийно. Используемый при этом порядок действий при сборе

KB В основан на последних представлениях о динамике образования конденсата и данных о стабильности различных определяемых компонентов в данной матрице. Объём пробы конденсата, как правило, не превышает3 мл.

Актуальность темы.

Исследованию химического состава выдыхаемого воздуха, с целью изучения возможности' диагностики различных лёгочных заболеваний посвящено большое число - работ. Это связано* с: тем, что* применяемые в медицине инструментальные: методы диагностики не: обеспечивают высокой степени достоверности на ранних; стадиях заболеваний, что приводит к неправильному лечению- и связанным;, с ним негативным последствиям. Подавляющее большинство*публикаций;по выдыхаемому воздуху посвящено исследованию состава, газообразных, легколетучих и, в меньшей- степени; среднелетучих органических соединений, которые концентрируют с: использованием адсорбции и, реже, абсорбции с последующим анализом.! малой части абсорбата. Наиболее эффективный метод анализа, используемый в данной, области; основан; на газохроматографическом разделении' в? комбинации!; с. различными- методами; детектирования; Масс-спектрометрическое; детектирование позволяет производить одновременное определение веществ; разных: классов; Однако; анализ газообразной! части выдыхаемого воздуха неадекватноjотражает состав выдыхаемых эндогенных: соединений: в связи с тем, что» многие летучие и среднелетучие соединения могут поступать в лёгкие из; окружающей среды.

Отдельно; выделяют такой объект, как водный конденсат выдыхаемого^ воздуха, получаемый- путём охлаждения? выдыхаемого воздуха» до-температуры, -10°С. В настоящее время; существует множество^ (сотни)? публикаций; по анализу КВВ. В подавляющем большинстве из них речь идёт об; определении нелетучих, органических соединений различными; методами. В литературе известны лишь единичные публикации по исследованию состава среднелетучих примесей в КВВ; Концентрации: присутствующих в

КВВ летучих и среднелетучих органических соединений очень низкие (10"7% по массе и ниже), и состав их практически неизвестен.

Изучение состава смеси этих примесей в КВВ представляет несомненный интерес в связи с возможностью использования полученных данных в целях диагностики лёгочных заболеваний. Анализ среднелетучих примесей, сконцентрированных в КВВ, может лучше отражать состав выдыхаемых органических соединений, по сравнению с анализом адсорбата или абсорбата выдыхаемого воздуха. Продукты жизнедеятельности организма попадают из различных органов в кровь, из крови в межклеточную жидкость лёгких, а оттуда на поверхность слизистой и в аэрозоль, который затем'собирают в конденсоре. Для исследования состава смесей соединений, содержащихся в КВВ, актуальна разработка способа их одновременного определения на ультраследовом уровне, так как существующие способы не обеспечивают такой возможности.

В связи с этим, целью настоящей работы являлась разработка способа определения среднелетучих органических соединений,различной, полярности на ультраследовом уровне в КВВ методом ГХ/МС и изучение состава смесей зарегистрированных этим способом соединений, выделенных из образцов КВВ, собранных у здоровых, больных бронхиальной астмой и хронической обструктивной болезнью лёгких (ХОБЛ) людей.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: изучить литературные данные о составе смесей среднелетучих органических соединений в выдыхаемом воздухе-и КВВ и, составить на основе этих данных модельные смеси; выбрать оптимальные условия хроматографического разделения, модельных смесей среднелетучих органических соединений, которые могут присутствовать в выдыхаемом воздухе, согласно литературным данным; изучить масс-спектры электронной и химической ионизации ряда выбранных модельных соединений и определить пределы детектирования в обоих режимах ионизации; разработать способ сорбционного концентрированиях одновременным удалением растворителя из больших проб органических растворов модельных среднелетучих органических соединений различной полярности и перевода всего концентрата аналитов в хромато-масс-спектрометр; изучить жидкостную экстракцию модельных соединений различной полярности из водных растворов с использованием высаливания при их содержании в растворе на уровне 10"8 - 10~6%; разработать способ определения ультрамалых содержаний среднелетучих органических соединений различной полярности в водных растворах, основанный на жидкостной экстракции с предварительным высаливанием, удалении растворителя в присутствии сорбента из пробы экстракта и ГХ/МС анализе всего концентрата; и использовать его для изучения состава смесейг среднелетучих примесей в КВВ; с использованием разработанного способа провести анализ 3-х серий образцов КВВ, собранных у здоровых, больных ХОБЛ и больных бронхиальной астмой (не менее 10-ти образцов в каждой серии); сравнить результаты анализа 3-х серий образцов КВВ, с целью выявления возможности использования разработанного способа анализа КВВ и полученных данных для диагностики лёгочных заболеваний.

Научная новизна.

Исследовано сорбционное концентрирование из органических растворов ультраследовых количеств модельных соединений различной полярности и летучести с удалением растворителя в процессе концентрирования вне аналитической системы и перевод концентрата термодесорбцией в хромато-масс-спектрометр:

Разработан способ определения среднелетучих органических соединений различной полярности в органических растворах, основанный на удалении растворителя из пробы большого объёма (100 мкл) раствора в присутствии сорбента, термодесорбции концентрата и его ГХ/МС анализе. Пределы обнаружения— 10"8 - 10"б%.

Изучена жидкостная экстракция' ультрамалых количеств модельных соединений с предварительным высаливанием из водных растворов:

Разработан, способ определения среднелетучих органических соединений различной полярности в водных растворах, основанный на жидкостной экстракции с предварительным высаливанием, отборе пробы экстракта и её концентрировании с удалением, органического растворителя' вне аналитической системы, в. присутствии сорбента, термодесорбции и ГХ/МС анализе концентрата анализируемой пробы. Пределы, обнаружения-составили величины порядка15x10"9 - 5х10"7%.

С использованием, разработанного* способа, анализа водных растворов; изучен состав смесей, среднелетучих "органических соединений,, присутствующих в- образцах КВВ здоровых людей, больных бронхиальной астмой' и ХОБЛ, и обнаружено присутствие в КВВ' большого числа органических соединений, относящихся к различным классам, содержащихся-' на уровне Ю"8 Ю"6%, из которых идентифицировано 33'соединения.

Проведено сопоставление результатов анализа для трёх групп образцов. КВВ (собранных у 30-ти здоровых людей, 20-ти больных бронхиальной астмой и 20-ти больных ХОБЛ) по 40-ка обнаруженным компонентам. С использованием алгоритма, основанного на линейных методах теории-распознавания образов, показано, что здоровых и больных бронхиальной астмой, можно различить с надёжностью 75%, здоровых и*больных ХОБЛ— с надёжностью 85%, больных бронхиальной астмой и ХОБЛ — с надёжностью 83%.

Выявлена группа веществ, которые могут рассматриваться как потенциальные маркеры бронхиальной астмы и ХОБЛ.

Практическая значимость работы.

Разработанные способы определения среднелетучих органических соединений различной полярности в органических и водных растворах нашли применение при изучении состава проб КВВ здоровых, больных бронхиальной астмой и больных ХОБЛ.

В результате их применения показана возможность дифференциации здоровых, больных бронхиальной астмой и больных ХОБЛ с высокой' достоверностью. Разработанные способы могут найти применение при изучении возможности неинвазивной диагностики заболеваний путём исследования состава КВВ.

На защиту выносятся:

Способ определения ультраследовых содержаний среднелетучих органических соединений различной полярности в органических растворах, основанный на сорбционном концентрировании аналитов с удалением, растворителя в процессе концентрирования вне аналитической системы, термодесорбции и ГХ/МС анализе концентратам '

Способ определения ультраследовых содержаний среднелетучих органических соединений различной полярности в водных растворах и конденсате выдыхаемого воздуха, основанный на жидкостной экстракции с высаливанием, сорбционном концентрировании аналитов из экстракта с удалением растворителя в процессе концентрирования вне аналитической* системы, термодесорбции и ГХ/МС анализе концентрата.

Перечень среднелетучих органических веществ обнаруженных в образцах КВВ, с использованием разработанного способа.

Результаты определения состава смесей среднелетучих органических соединений, обнаруженных в 70-ти образцах проб-КВВ (30 - для здоровых, 20 - для больных бронхиальной астмой и 20 — для больных ХОБЛ).

Результаты сравнения состава образцов КВВ, собранных у здоровых, больных ХОБЛ и больных бронхиальной астмой, показывающие возможность различия между собой здоровых, больных астмой и больных ХОБЛ.

Группа обнаруженных в КВВ веществ, которые можно рассматривать как потенциальные маркеры заболеваний: ХОБЛ и бронхиальной астмы.

Апробация работы.

Основные результаты работы были представлены на всероссийском симпозиуме «Хроматография в химическом анализе и физико-химических исследованиях» (23-27 апреля 2007 г., Москва) и на всероссийской конференции с международным участием «Масс-спектрометрия и её прикладные проблемы» (12-16 сентября 2005 г., Москва).

Публикации.

Результаты работы представлены в 5 публикациях (2 статьи и 3 тезиса докладов).

Структура и объём работы.

Диссертация состоит из введения, в котором отражены цель и основные задачи, актуальность, научная новизна, практическая значимость и, апробация работы, пяти глав, заключения, выводов, списка литературы и трёх приложений.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Родионов, Алексей Александрович

Выводы

1. Выбраны оптимальные условия разделения сложных смесей модельных среднелетучих органических соединений различной полярности, изучены масс-спектры модельных соединений и определены их пределы детектирования при ГХ/МС определении.

2. С использованием многокомпонентных смесей- среднелетучих органических соединений различной полярности исследовано сорбционное концентрирование из органических растворов ультраследовых количеств таких веществ с удалением растворителя в процессе концентрирования вне аналитической системы и перевод концентрата термодесорбцией в хромато-масс-спектрометр. Разработан способ определения таких соединений в органических растворах с q zпределами обнаружения, составляющими величины, порядка si 0' - 10" % по массе. 1

3. Определены значения степеней извлечения при жидкостной экстракции среднелетучих модельных соединений различной полярности из водных растворов метилтретбутиловым эфиром с предварительным высаливанием:

4. Разработан способ определения ультраследовых содержаний среднелетучих органических соединений различной полярности в водных растворах, основанный на жидкостной экстракции, сорбционном1 концентрировании аналитов из большой пробы экстракта с удалением растворителя в процессе концентрирования вне аналитической системы, термодесорбции и ГХ/МС анализе концентрата из пробы экстракта. Пределы обнаружения составили величины порядка 5x10"9 - 5x10"7 % при объёме вводимой в хроматограф пробы органического экстракта, равном 100 мкл.

5. Изучен состав смесей среднелетучих органических соединений, присутствующих в образцах КВВ здоровых людей и больных бронхиальной астмой и ХОБЛ. Обнаружено присутствие в КВВ большого числа органических соединений, относящихся к различным классам и содержащихся на ультраследовом уровне.

6. Проведено сопоставление результатов анализа для трёх групп образцов КВВ (собранных у 30-ти здоровых людей, 20-ти больных бронхиальной астмой и 20-ти больных ХОБЛ) по 40-ка обнаруженным компонентам.

7. В результате изучения полученного массива данных с использованием алгоритма, основанного на использовании линейных методов теории распознавания образов, было установлено, что на основании данных, полученных в ходе предварительного исследования, здоровых и больных бронхиальной астмой можно дифференцировать с надёжностью 75%, здоровых и больных ХОБЛ — с надёжностью 85%, больных бронхиальной астмой и ХОБЛ — с надёжностью 83%.

8. Выявлена группа веществ, которые могут рассматриваться как маркеры бронхиальной астмы и ХОБЛ. ;

Заключение

С использованием многокомпонентных смесей модельных органических соединений различной полярности проведено исследование возможности выделения в присутствии сорбента из больших проб растворов ультраследовых количеств (нг-пг) соединений, кипящих в широком диапазоне температур, принадлежащих к различным классам, которые могли присутствовать в выдыхаемом воздухе, и перевода полученного концентрата в инжектор хроматографа, за счёт термодесорбции, и последующего ГХ/МС анализа всего концентрата.

На основании этого исследования разработан способ определения ультраследовых содержаний среднелетучих органических соединений, принадлежащих к различным классам, в органических растворах, основанный на выделении этих соединений в присутствии сорбента из больших проб растворов (100 мкл); переводе адсорбата за счёт термодесорбции в инжектор хроматографа и ГХ/МС анализе всего концентрата.

Проведено исследование жидкостной экстракции изученных модельных соединений с предварительным высаливанием хлоридом натрия, и показано, что для большинства модельных соединений степени извлечения превышают 80%.

Разработан способ определения среднелетучих соединений различной полярности в водных растворах, основанный на жидкостной экстракции с высаливанием, сорбционном выделении примесей из большой части экстракта, переводе их за счёт термодесорбции в инжектор и ГХ/МС анализе всего концентрата.

С использованием этого способа проведено исследование состава органических соединений в 70-ти пробах КВВ, собранных у больных ХОБЛ, бронхиальной астмой и здоровых людей. В результате математической обработки полученных данных удалось установить возможность разграничить данные, относящиеся к здоровым, больным ХОБЛ и больным бронхиальной астмой, с высокой достоверностью (75-85%). Полученные результаты открывают широкие перспективы для дальнейших исследований.

Разработанные способы анализа органических и водных растворов могут быть использованы для анализа различных вод и твёрдых матриц на содержание среднелетучих органических соединений различной полярности на ультраследовом уровне, особенно в тех случаях, когда концентрирование анализируемого раствора выпариванием недопустимо.

Благодарности

Автор выражает благодарность сотрудникам ФГУ Научно-исследовательского института пульмонологии РОСЗДРАВа Т.Н. Анохиной и Э.Х. Анаеву за проделанную работу по сбору образцов КВВ здоровых, больных ХОБЛ и бронхиальной астмой, а также сотрудникам кафедры математической теории интеллектуальных систем механико-математического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова Д.В. Алексееву, М.В. Носову, В.Н. Козлову, В.Б. Кудрявцеву за разработку алгоритма обработки результатов эксперимента и проведение расчётов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Родионов, Алексей Александрович, 2008 год

1. Pauling L., Robinson А. В., Teranishi R., Сагу P. Quantitative analysis of urine vapor and breath by gas-liquid partition chromatography. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1971. V. 68. № 10. P. 2374-2376.

2. Phillips M., Herrera J., Krishnan S., Zain M., Greenberg J., Cataneo R. N. Variation in volatile organic compounds in the breath of normal humans. // J. Chromatogr. B. 1999. V. 729. P. 75-88.

3. Phillips M. Method for collection and assay of volatile organic compounds in breath. // Anal. Biochem. 1997. V. 247. P. 272-278.

4. Mukhopadhyay R. Don't waste your breath. Researchers are developing breath tests for diagnosing diseases, but how well do they work? // Analytical Chemistry. 2004. V 1. P. 273A-276A.

5. Скрупский В. А. Ты — моё дыхание. // Химия и жизнь. 1997. №2. С. 42-45.

6. Скрупский В. А. В здоровом теле — здоровый выдох! // Химия и жизнь. 2000. №4. С. 24-27.

7. Phillips М., Cataneo R.N., Cummin A.R.C., Gagliardi A J., Gleeson К., Greenberg J., Maxfield R.A., Rom W.N. Detection of lung cancer with volatile markers in the breath. // Chest. 2003. V. 123. P. 2115-2123.

8. Phillips M., Cataneo R.N., Ditkoff B.A., Fisher P., Greenberg J., Gunawardena R., Kwon C.S., Rahbari-Oskoui F., Wong C. Volatile markers of breast cancer in the breath. // The Breast Journal. 2003. V. 9. № 3. P. 184-191.

9. Конов В.И., Осико B.B., Щербаков И.А. Фундаментальные достижения оптики и лазерной физики для медицины. // Вестник Российской Академии Наук. 2004. Т. 74. № 2. С. 99-113.

10. Степанов Е.В., Миляев В. А., Селиванов Ю.Г. Лазерная ортомолекулярная медицинская диагностика. // УФН. 2000. Т. 170. № 4. С. 458-462.

11. Basum G., Dahnke H., Halmer D., Hering P., Murtz M. Online recording of ethane traces in human breath via infrared laser spectroscopy. // J. Appl. Physiol. 2003. V. 95. P. 2583-2590.

12. Ebeler S. E., Clifford A. J., Shibamoto T. Quantitative analysis by gas chromatography of volatile carbonyl compounds in expired air from mice and human. // J. Chromatogr. B. 1997. V. 702. P. 211-215.

13. Proton-transfer-reaction mass spectrometry (PTR-MS): on-line monitoring of volatile organic compounds at pptv levels. // Chemicalr Society Reviews. 1998. V. 27. P. 347-354.

14. Hewitt C.N., Hayward S.,jlTani A. The application of proton transfer reaction-mass spectrometry (PTR-MS) to the monitoring and' analysis of volatile organic compounds in the atmosphere. // J. Environ. Monit. 2003. V. 5. P. 1-7.

15. Sodergren E. Lipid peroxidation in vivo. Evaluation and application of methods for measurement. Acta Universitatis Upsaliensis. Comprehensive Summaries of Uppsala Dissertations from the1 Faculty of Medicine. Uppsala. 2000. 78 P.

16. Esterbauer H., Schaur R.J., Zollner H. Chemistry and Biochemistry of 4-Hydroxynonenal, Malonaldehyde and Related Aldehydes. // Free Radical Biology & Medicine. 1991. V. 11. P. 81-128.

17. Wood L.G., Gibson P.G., Garg M.L. Biomarkers of lipid peroxidation, airway inflammation and asthma. // Eur. Respir. J. 2003. V. 21. P. 177186.

18. Phillips M., Cataneo R. N., Greenberg J:, Grodman R., Gunawardena R., Naidu A. Effect of oxygen on breath markers of;oxidative stress. // Eur. Respir: J. 2003. V. 21. P. 48-51.

19. Spinhirne J. PKoziel J. A., Chirase N. K. Sampling and analysis of volatile organic compounds in; bovine breath by solid-phase microextraction and gas chromatography — mass spectrometry. // Ji Chromatogr. A. 2004. V. 1025. P. 63-69.

20. Pleil J: D.y Lindstrom A. B. Measurement of volatile organic compounds in exhaled breath as collected in evacuated electropolished canisters. // J. Chromatogr. B. 1995. V. 665. P. 271-279.

21. Pleil J. D., Lindstrom A. B. Exhaled human breath- measurement method for assessing exposure to halogenated: volatile organic* compounds. // Clin. Chem. 1997. V. 43. P. 723-730.

22. Grote A. A., Kennedy E. R. Workplace monitoring for volatile, organic compounds using thermal; desorption — gas chromatography mass spectrometry. //J. Environ. Monit. 2002. V. 4. P. 679-684.

23. Daughtray E. H., Oiver K. D., Adams J. R., ICronmiller K. G., Lonneman W. A., McClenny W. A. A comparison of sampling and analysis methods for low-ppbC levels of volatile organic compounds in ambient air. // J. Environ. Monit. 2001. V. 3. P. 166-174.

24. Peng C.Y., Batterman S. Performance evaluation of a sorbent tube sampling method using short path desorption for volatile organic compounds. // J. Environ. Monit. 2000. V. 2. P. 313-324.

25. Hassoun S., Pilling M. S., Bartle K. D. A catalogue of urban hydrocarbons for the city of Leeds: atmospheric monitoring of volatile organic compounds by thermal desorption gas chromatography. // J. Environ. Monit. 1999. V. 1. P. 453-458.

26. Hallama R. A., Rosenberg E., Grasserbauer M. Development and application of thermal desorption method for the analysis of polar volatile organic compounds in workplace air. // J. Chromatogr. A. 1998. V. 809. P. 47-63.

27. Chen T.Y., Li M.J., Wang J.L. Sub-second thermal desorption of a micro-sorbent trap for the analysis of ambient volatile organic compounds. // J. Chromatogr. A. 2002. V. 976. P. 39-45.

28. Wang J.L., Chen S.W., Chew C. Automated gas chromatography with cryogenic/sorbent trap for the measurement of volatile organic compounds in the atmosphere. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 863. P. 183-193.

29. Dewulf J., Langenhove H.V. Analysis of volatile organic compounds using gas chromatography. // Trends in analytical chemistry. 2002. V. 21. P. 637-646.

30. Matisova E., Skrabakova S. Carbon sorbents and their utilization for the preconcentration of organic pollutants in environmental samples. Review. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 707. P. 145-179.

31. Harper M. Sorbent trapping of volatile organic compounds from air. Review. //J. Chromatogr. A. 2000. V. 885. P. 129-151.

32. Dettner K., Engewald W. Adsorbent materials commonly used in air analysis for adsorptive enrichment and thermal desorption of volatile organic compounds. Review. // Anal. Biomol. Chem. 2002. V. 373. P. 490-500.

33. Tolnai В., Gelencser A:, Barko G., Hlavay J. Evaluation of Carbopack В adsorbent'for the tube-type diffusive sampling of volatile organic compounds at ambient concentration. // Analyst. 1999. V. 124. P. 18591863.

34. Prado C., Marin P., Periago S.F. Application of solid-phase microextraction and gas chromatography mass spectrometry to the determination of volatile organic compounds in end-exhaled breath samples. // J. Chromatogr. A. 2003. V. 1011. P. 125-134.

35. Riter L. S., Meurer E. C., Cotte-Rodriguez I., Eberlin M. N., Cooks R. G. Solid phase micro-extraction in a miniature ion trap mass spectrometer. // Analyst. 2003. V. 128. P. 1119-1122.

36. Khaled A., Pawliszyn J. Time-weighted average sampling of volatile and semi-volatile airborne organic compounds by the solid-phase microextraction device. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 892. P. 455-467.

37. Namiesnik J., Zygmunt В., Jastrzebska A. Application of solid-phase microextraction for determination of organic vapours in gaseous matrices. //J. Chromatogr. A. 2000. V. 885. P. 405-418.

38. Koziel J., Jia M., Khaled A., Noah J., Pawliszyn J. Field air analysis with SPME device. // Analytica Chimica Acta. 1999. V. 400. P. 153162.

39. Lord H., Pawliszyn J. Evolution of solid-phase microextraction technology. Review. //J. Chromatogr. A. 2000. V. 885. P. 153-193.

40. Tuduri L., Desauziers V., Fanlo J. L. Dynamic versus static sampling for the quantitative analysis of volatile organic compounds in air with polydimethylsiloxane Carboxen solid phase microextraction fibers. // J. Chromatogr. A. 2002. V. 963. P. 49-56.

41. Giardina M., Olesik S. V. Application of low-temperature glassy carbon-coated macrofibers for solid-phase microextraction analysis of simulated breath volatiles. // Anal. Chem. 2003. V. 75. P. 1604-1614.

42. Batterman S.A., Zhang G.Z., Baumann M. Analysis and stability of aldehydes and terpenes in electropolished canisters. // Atmos. Environ. 1998. V. 32. P. 1647-1655.

43. Gordon S. M., Wallace L. A., Brinkman M. C., Callahan P. J., Kenny D. V. Volatile Organic Compounds as Breath Biomarkers for Active and Passive Smoking. // Environmental Health Perspectives. 2002. V. 110. №7. P. 689-698.

44. Gordon S. M., Wallace L. A., Pellizzari E. D., O'Neill H. J. Human breath measurements in a clean-air chamber to determine half-lives for volatile organic compounds. // Atmos. Environ. 1988. V.22. № 10. P.' 2165-2170.

45. Gawlowski J., Gierczak Т., Jezo A., Niedzielski J. Adsorption of water vapor in the solid sorbents used for the sampling of volatile organic compounds.//Analyst. 1999. V. 124, P. 1553-1558.

46. Karbiwnyk С. M., Mills C. S., Helmig D., Birks J. W. Minimization of water vapour interference in the analysis of nonmethane organic compounds by solid adsorbent sampling. // J. Chromatogr. A. 2002. V. 958. P. 219-229.

47. Fastyn P., Kornacki W., Kardas M., Gawlowski J., Niedzielski J. Adsorption of water vapour from humid air in carbon molecular sieves:

48. Carbosieve S-III and Carboxenes 569, 1000 and 1001. //Analyst. 2003. V. 128. P. 198-203.

49. Gawlowski J., Gierczak Т., Pietruszynska E., Gawrys M., Niedzielski J. Dry purge for the removal of water from the solid sorbents used to sample volatile organic compounds from the atmospheric air. // Analyst. 2000. V. 125. P. 2112-2117.

50. Nishikawa H., Sakai T. Derivatization and chromatographic determination of aldehydes in gaseous and air samples. Review. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 710. P. 159-165.

51. Corradi M., Pignatti P., Manini P., Andreoli R., Goldoni M., Poppa M., Moscato G., Balbiz В., Mutti A. Comparison between exhaled and sputum oxidative stress biomarkers in chronic airway inflammation. // Eur. Respir. J. 2004. V. 24. P. 1011-1017.

52. Анаев Э. X., Чучалин А. Г. Исследование конденсата выдыхаемого воздуха в пульмонологии (обзор зарубежной литературы). // Пульмонология : Научно-практический журнал. 2002. № 2 . С. 57-66.

53. Effros R. М., Dunning М. В., Biller J., Shaker R. The promise and perils of exhaled breath condensates. // Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2004. V. 287. P. 1073-1080.

54. Mutlu G.M., Garey K.W., Robins R.A., Danziger L.H., Rubinstein I. Collection and Analysis of Exhaled Breath Condensate in Humans. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 2001. V. 164. P 731-737.

55. Moeller A., Kielbasa B. Exhaled Breath Condensate and Other Markers in Exhaled Air. // Paediatric Pulmonary Function Testing. Prog. Respir. Res. 2005. V. 33. P. 190-202.

56. McCafferty J.B., Bradshaw T.A., Tate S., Greening A.P., Innes J.A. Effects of breathing pattern and inspired air conditions on breath condensate volume, pH, nitrite, and protein concentrations. // Thorax. 2004. V. 59. P. 694-698.

57. Kharitonov S.A., Barnes P.J. Exhaled Markers of Pulmonary Disease. // American journal of respiratory and critical care medicine. 2001. V. 163. P.1693-1722.

58. Green L.C., Wagner D.A., Giogowski J., Skipper P.L. Wishnok J.S. Tannenbaum S.R. Analysis of nitrate, nitrite and 15N. in biological fluids. //Anal. Biochem. 1982. V. 126. P. 131-138.

59. Antczak A., Nowak D., Shariati В., Krol M., Piasecka G., Kurmanowska Z. Increased hydrogen peroxide breath and thiobarbituric acid-reactive products in expired breath condensate of asthmatic patients. //Eur. Respir. J. 1997. V. 10. P. 1235-1241.

60. Horvath I., Donnelly L.E., Kiss A., Kharitonov S.A., Lim S., Chung K.F., Barnes P.J. Combined use of exhaled hydrogen peroxide and nitric oxide in monitoring asthma. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 1998. V. 158. P. 1042-1046.

61. Dohlman A. W., Black H. R., Royall J'. A. Expired breath hydrogen peroxide is a marker of acute airway inflammation in pediatric patients with asthma. // Am. Rev. Respir. Dis. 1993. V. 148. P. 955-960.

62. Jobsis Q., Raatgeep H.C., Schellekens S.L., Hop W.C.J., Hermans P.W.M., de Jongste J.C. Hydrogen peroxide in exhaled air of healthy children: reference values. // Eur. Respir. J. 1998. V. 12. P. 483-485.

63. Nowak D., Antczak A., Krol M., Pietras Т., Shariati В., Bialasiewicz P., Jeczkowski K., Kula P. Increased content of hydrogen peroxide in the expired breath of cigarette smokers. // Eur. Respir. J. 1996. V. 9. P. 652-657.

64. Nowak D., Kasielski M., Pietras Т., Bialasiewicz P., Antczak A. Cigarette smoking does not increase hydrogen peroxide levels in expired breath condensate of patients with stable COPD. // Monaldi Arch. Chest. Dis. 1998. V. 53. P. 268-273.

65. Montuschi P., Barnes P.J., Jackson Roberts L. Isoprostanes: markers and mediators of oxidative stress. Review. // The FASEB J. 2004. V. 18. 1791-1800.

66. Montuschi P., Corradi M., Ciabattoni G., Nightingale J., Kharitonov S.A., Barnes P.J. Increased 8-isoprostane, a marker of oxidative stress, in exhaled condencate of asthma patients. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1999. V. 160. P. 216-220.

67. Kharitonov S.A., Donnelly L.E., Montuschi P., Corradi M., Collins J.V., Barnes P.J. Dose-dependent onset and cessation of action of inhaled budesonide on exhaled nitric oxide and symptoms in mild asthma. // Thorax. 2002. V. 57. P. 889-896.

68. Van Hoydonck P.G.A., Wuyts W.A., Vanaudenaerde B.M., Schouten E.G., Dupon L.J., Temme Quantitative analysis of '8-isoprostane and hydrogen peroxide in exhaled breath condensate. // Eur. Respir. J. 2004. V. 23. P. 189-192.

69. Montuschi P., Kharitonov S. A., Giabattoni G., Corradi M., van Rensen L., Geddes D. M., Hodson M. E., Barnes P.J. Exhaled 8-isoprostane as a new non-invasive biomarker of oxidative stress in cystic fibrosis. // Thorax. 2000. V. 55. P. 205-209.

70. Montuschi P., Kharitonov S.A., Ciabattoni G., Barnes P.J. Exhaled leukotrienes and prostaglandins in COPD. // Thorax. 2003. V. 58. P. 585-588.

71. Becher G., Winsel K., Beck E., Neubauer G., Stresemann E. Breath condensate as a method of noninvasive assessment of inflammation mediators from the lower airways. // Pneumologie. 1997. V. 51. Suppl. 2. P. 456-459.

72. Kharitonov S.A., Barnes P.J. Effects of corticosteroids on noninvasive biomarkers of inflammation in asthma and chronic obstructive pulmonary disease. //Proc. Am. Thorac. Soc. 2004. V. 1. P. 191-199.

73. MontuschiP., Martello S., Felli M., Mondino C., Barnes P.J., Chiarotti M. Liquid chromatography/mass spectrometry analysis of exhaled leukotriene B4 in asthmatic children. // Respiratory Research. 2005. V. 6. P. 119.

74. Cap P., Chladek J., Pehal F., Maly M., Petru V., Barnes.P.J., Montuschi P. Gas chromatography/mass spectrometry analysis of exhaled leukotrienes in asthmatic patients. // Thorax. 2004. V. 59. P. 465-470.

75. Vukomanovic D.V., Hussain A., Zoutman D.E., Marks G.S., Brien J.F., Nakatsu K. Analysis of nanomolar S-nitrosothiol concentrations in physiological media. // J. Pharmacol. Toxicol. Method. 1998. V. 39. P. 235-240.

76. Corradi M., Montuschi P., Donnelly L.E., Pesci A., Kharitonov S.A., Barnes P.J. Increased nitrosothiols in exhaled breath condensate in inflammatory airway diseases. // Am. J. Respir. Crit Care Med. 2001. V. 163. P. 854-858.

77. Balint В., Kharitonov S.A., Hanazawa Т., Donnely L.E., Shah P.L., Hodson M.E., Barnes P.J. Increased nitrotyrosine in exhaled breathcondensate in cystic fibrosis. // Eur. Respir. J. 2001. V. 17. P. 12011207.

78. Stamler J.S., Loscalzo J. Capillary zone electrophoretic detection of biological thiols and their S-nitrosated derivates. // Anal. Chem. 1992. V. 64. P. 779-785.

79. Garey K.W., Neuhauser M.M., Robbins R.A., Danziger L.H., Rubinstein I. Markers of Inflammation in Exhaled Breath Condensate of Young Healthy Smokers. // Chest. 2004. V. 125. P. 22-26.

80. Larstada M., Ljungkvista G., Olina A., Toren K. Determination of malondialdehyde in breath condensate by highperformance liquid chromatography with fluorescence detection. // Journal of Chromatography В. V. 766. 2001. P. 107-114.

81. Corradi M., Rubinstein I., Andreoli R., Manini P., Caglieri A., Poli D., Alinovi R., Mutti A. Aldehydes in Exhaled Breath Condensate of Patients with Chronic Obstructive Pulmonary Disease. // Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 2003. V. 167. P. 1380-1386.

82. Grob K., Biedermann M. Vaporizing systems for large volume injection or on-line transfer into gas chromatography: classification, critical remarks and suggestions. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 750. P. 11-23.

83. Grob К. Efficiency through combining high-performance liquid chromatography and high resolution gas chromatography: progress 1995-1999. Review. // J. Chromatography A. 2000. V. 892. P. 407-420.

84. Grob K. Development of the transfer techniques for on-line high-performance liquid'chromatography capillary gas chromatography. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 703. P. 265-276.

85. Mol H.G.J., Janssen H.G., Cramers C.A., Brinkman U.A.Th. Large-volume injection in gas chromatographic trace analysis using temperature-programmable (PTV) injectors. // Trends Anal. Chem. 1996. V. 15. P. 206-214.

86. Hankemeier Т., Кок S.J., Vreuls R.J.J., Brinkman U.A.Th. Optimization of large-volume on-column injection conditions in gaschromatography by monitoring the actual carrier gas flow. // J. Cromatogr. A. 1999. V. 841, P. 75-94.

87. Koning S., Kurano M., Janssen H.G., Brinkman U.A.T. AT-column, a novel concentrating technique for large-volume injection in gas chromatography. // J. Chromatogr. A. 2004. V. 1023. P. 165-174.

88. Ревельский А.И., Ларионов О.Г., Глазков И.Н., Ревельский И.А. Способ ввода больших по объёму проб органических растворов с удалением растворителя вне аналитической системы, // Завод, лаб. Диагностика материалов. 2002. 10, Р. 11-15:

89. Stein S.E., Scott D.R. Optimization and testing of mass spectral library search algorithms for compound identification. // J. Am: Soc. Mass: Spectrom. 1994. V. 5. P. 859-866.

90. Stein S.E. Estimating probabilities of correct identification-from results of mass spectral library searches. // J. Am. Soc. Mass Spectrom. 1994. V. 5. P. 316-323.