Определение нелетучих органических соединений методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии в токсикологических исследованиях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.11.11, кандидат химических наук Корягина, Надежда Леонидовна

• Корягина, Надежда Леонидовна
• кандидат химических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат химических наук Корягина, Надежда Леонидовна

1 .Введение

2.0бзор литературы

Газовая Хроматография - Масс-спектрометрия в токсикологических

2.1 .Введение.

2.2.Возможности метода газовой хроматографии-масс- 10 спектрометрии (ГХМС) в аналитической токсикологии.

2.3. Целевые вещества в токсикологических исследованиях.

2.3.1. Фторацетат натрия.

2.3.2.Алкилметилфосфоновые

2.3.3.Тиодигликоль.

2.4.Дериватизация. Характеристика дериватизации как метода. За- 17 дачи дериватизации

2.4.1. Дериватизация фторуксуной кислоты

2.4.2.Дериватизация метилфосфоновой кислоты и ее кислых эфиров.

2.4.3.Дериватизация тиодигликоля.

2.5.Характеристика методов подготовки проб к ГХ анализу. Специ- 30 фические особенности пробоподготовки в токсикологических исследованиях.

2.5.1.Жидкостная экстракция.

2.5.2.Статический парофазный анализ.

2.5.3.Твердофазная экстракция.

2.5.4.Твердофазная микроэкстракция.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение нелетучих органических соединений методом газовой хроматографии-масс-спектрометрии в токсикологических исследованиях»

Газовая хроматография (ГХ) с масс-спектрометрическим (МС) детектированием (ГХМС), часто называемая «золотым сечением» органического анализа, применяется в качестве базового метода в большинстве лабораторий, специализирующихся в области аналитической токсикологии. Круг органических соединений, анализируемых ГХМС, как известно, ограничен веществами, обладающими достаточной летучестью, либо веществами, образующими летучие производные. Анализ нелетучих органических соединений в виде производных методами ГХ и ГХМС в современной практике можно рассматривать как самостоятельную задачу, существенно более сложную, чем хорошо разработанные классические подходы к дериватизации летучих соединений (жирных кислот, фенолов и др.) в целях улучшения их хроматографических характеристик. Нелетучие органические соединения - высокополярпые и часто полифупкциональпые, должны быть дериватизированы с высоким выходом и образованием единственного типа производных, а пс смеси продуктов. В настоящей работе объектом анализа являлись маркеры токсического воздействия - высокотоксичные соединения и продукты их трансформации (фтор - или фосфорсодержащие кислоты, полиолы) - полярные и термолабильные. Некоторые из них способны давать при алкилировании смесь мопо-и диэфиров. Реакции дериватизации таких соединений особенно чувствительны к мешающему влиянию матричных компонентов. Этим обстоятельством, а также высокой песпеци-фичсской сорбционной активностью и низкими степенями извлечения из гидрофильных матриц органическими растворителями этих соединений обусловлены особые требования, предъявляемые к процедурам, предшествующим дериватизации - выделению из матрицы, концентрированию и очистке фракции целевых веществ. Разработка унифицированных процедур подготовки к ГХМС анализу таких соединений в матрицах различной природы в большинстве случаев проблематична. Рациональным подходом является унификация отдельных стадий анализа.

Актуальность темы. Разработка химико-апалитических методов обнаружения, точной структурной идентификации и количественной оценки высокотоксичпых веществ и продуктов их трансформации в объектах окружающей среды и биологических пробах человека и животных при токсикологических исследованиях является чрезвычайно актуальной задачей. Надёжные химико-аналитические методы выявления факта воздействия токсичных веществ, идентификации действующего фактора воздействия и оценки уровня экспозиции необходимы как компонент медицинских и судебно- медицинских мероприятий в случаях возможного применения высокотоксичпых соединений в условиях военных конфликтов и террористических актов, а также при аварийных ситуациях па предприятиях по храпению и уничтожению химического оружия и других вредных веществ. В соответствии с частью 9 (приложение

46,е-17) «Конвенции о запрещении разработки, производства, накопления, применения химического оружия и о его уничтожении» расследования случаев несанкционированного применения отравляющих веществ должны в обязательном порядке включать анализ биологических проб человека и животных (кровь, моча, ткани и др.). В то же время Организацией по запрещению химического оружия (ОЗХО) до настоящего времени не разработано документов, обобщающих и регламентирующих подходы к идентификации и анализу токсичных химикатов и продуктов их метаболизма в биосредах. В ряду токсикологически значимых органических соединений велика доля нелетучих веществ. Разработка методик их ГХМС анализа позволила бы решить ряд актуальных задач в области токсикологической экспертизы.

Цели и задачи исследования. Целью данной работы являлась разработка комплекса методик определения нелетучих высокотоксичных химических соединений и продуктов их превращений в различных средах.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

-Исследовать особенности и подобрать условия для количественной дериватизации нелетучих органических соединений, выделенных из объектов окружающей среды и биологических проб.

-Подобрать условия твердофазной экстракции (ТФЭ) на стадии пробоподготовки в целях создания приемлемых условий для последующей дериватизации 0-алкилметилфосфонатов (О-АМФК).

-Определить возможности и ограничения метода твердофазной микроэкстракции (ТФМЭ) как альтернативы парофазному анализу (ПФА) в случае пробоотбора из равновесного пара и альтернативы ТФЭ в режиме пробоотбора при погружении микроволокна в пробу.

-Разработать эффективные процедуры дериватизации нелетучих органических веществ при использовании метода ТФМЭ в вариантах пробоотбора из равновесного пара и при погружении микроволокна в пробу.

-Оцепить возможности создания унифицированных методик для ГХМС анализа нелетучих органических соединений (галоген-, фосфор-, серусодержащих) в матрицах различной природы в рамках методов ТФЭ и ТФМЭ.

Научная новизна

Продемонстрирована возможность разработки унифицированной ГХМС методики определения нелетучих органических соединений при использовании метода ТФМЭ в режиме отбора летучего производного из равновесного пара. Установлено, что применение метода ТФМЭ позволяет снизить предел обнаружения этилового эфира фторуксуспой кислоты не менее чем в 100 раз в сравнении со статическим ПФА.

Найдены корреляционные зависимости между функцией, отражающей влияние сте-рического эффекта (для неполярных фаз), параметром гидрофобпоети (для полярных фаз) и коэффициентом извлечения О-АМФК, позволяющие рассчитать эффективность извлечения определенным типом микроволокна химического соединения в пределах исследуемого гомологического ряда по структуре заместителя.

Проведен систематический анализ особенностей дериватизации нелетучих токсичных соединений и продуктов их деструкции в различных матрицах. Установлено, что деривати-зация тиодигликоля (ТДГ), как продукта распада сернистого иприта, в стандартных условиях (при 65°С в течение 30 мип в ацетонитриле) протекает с низким выходом в результате си-лилирования по одной гидроксильной группе. Увеличение времени реакции относительно стандартных условий и внесение в реакционную смесь пиридина и солей калия предотвращает образование промежуточных продуктов реакции дериватизации.

Идентифицированы 9 компонентов мочи и плазмы крови: З-гидроксимасляпая кислота, 3-гидроксипропионовая кислота, мочевина, фосфорная кислота, 3-кетовалериановая кислота, 3-гидроксиизовалериановая кислота, пирокатехин, фенилуксусная кислота, пара-крезол, снижающих возможности достоверной идентификации в биожидкостях следовых количеств МФК и О-АМФК, являющихся продуктами метаболизма фосфорорганических отравляющих веществ (ФОВ).

Выбран предпочтительный режим элюирования О-АМФК с патронов с сильным анионообмепником (SAX).

Предложено использование дейтерированпых стандартов О-АМФК для подтверждения первичной идентификации целевых соединений.

Практическая значимость.

Разработана и оптимизирована новая унифицированная высокочувствительная методика определения фторуксусной кислоты и ее натриевой соли (ФАН) в воде, биологических пробах (моче, плазме крови, гомогенатах тканей), а также в водных вытяжках различных объектов, основанная на этилировании фторуксусной кислоты, ТФМЭ этилфторацетата и последующем ГХ или ГХМС анализе. Методика апробирована в опытах in vivo на лабораторных животных и позволила исследовать токсикокипстику и токсикодинамику отравлений ФАН, установить органы-мишепи, в первую очередь кумулирующие этот яд. Методика была использована при разработке средств эффективной терапии отравлений ФАН, выборе оптимального средства терапии (в настоящее время являющегося объектом патентования) и описании механизмов его действия.

Разработана процедура для отбраковки и направления па повторный анализ проб, в которых степень извлечения целевых веществ ниже установленного порогового значения.

Разработан и опробован па практике высокочувствительный способ определения ТДГ в морской воде (предел обнаружения 1 мкг/л). Методика обнаружения ТДГ в морской воде прошла государственную метрологическую экспертизу и была использована при выполнении работ по корректировке трассы Северо - Европейского газопровода Нордстрим по дну Балтийского моря.

Разработаны и опубликованы методические указания «Химико-аналитический и сани-тарно-химический контроль основных продуктов распада ФОВ» (МУК 4.1-04).

Разработаны и находятся па стадии утверждения методические указания по установлению факта воздействия ФОВ на организм человека и животных по результатам анализа биосред.

Методики идентификации высокотоксичпых веществ и продуктов их превращений в биологическом материале рекомендованы Федеральным медико-биологическим агентством (ФМБА России) для применения в токсикологических центрах, находящихся под эгидой ФМБА, при проведении медицинских и судебно-медицинских мероприятий по выявлению факта воздействия отравляющих, токсичных веществ в потенциальных объектах токсикологической экспертизы (вода, почва, биологические пробы).

Методики определения продуктов распада ФОВ методом ГХМС в почве (МВИ № 242/1и воде (МВИ № 242/11-04) прошли метрологическую аттестацию и внесены в Госреестр методик Российской Федерации, рекомендуемых к применению для сапитарно-химического сопровождения программы уничтожения химического оружия (УХО) в России. В настоящее время МВИ № 242/12-04 используется в целях экологического мониторинга са-нитарпо-защитной зоны объектов УХО (Марадыковский, Щучье).

На защиту выносятся:

1. Особенности применения метода ТФМЭ в ГХМС анализе нелетучих органических соединений в токсикологических исследованиях в целях повышения чувствительности, преодоления матричных эффектов и обеспечения более эффективного использования хромато-графической и масс-спектрометрической систем.

2. Особенности дериватизации нелетучих органических соединений - маркеров токсического воздействия, в различных матрицах.

3. Результаты исследования зависимости степени извлечения О-АМФК при проведении ТФЭ от природы элюента.

4. Способы унификации методик в зависимости от характера матрицы, условий про-боотбора и пробоподготовки.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены па конференции «Разделение и концентрирование в аналитической химии» (25-30 сентября 2005 г, г. Краснодар), на I съезде физиологов СНГ«Физиология и здоровье человека» (19-23 сентября, г. Сочи), Annual Meeting of the American Institute of Chemical Engineers (30 октября - 04 ноября, 2005., г.Ципцинпати, США), PITTCON (12-17 марта 2006г., Орландо, Флорида, США), Х-ой Международной конференции «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбция и хроматография» (24-28 апреля 2006 г., г. Клязьма, Московской обл.), 9th Internatonal Chemical Weapons Demilitarisation Conferenc, CWD 2006, (15 - 18 мая 2006 г., Люнебург, Германия), The Sixth International Chemical and Biological Medical Treatment Symposium (30 апреля-5 мая 2006, SPIEZ, Швейцария), Science workshops and seminars «Analysis of toxic substances: method of development and applications» (19-20июпя 2006 г., С-Петербург (Пушкин)), 3-ей Международной научно-практической конференции «Новые технологии создания инновационных лекарств. От достижений «постгеномной эры» к национальным фармацевтическим брендам» (1 декабря 2006г, Московская обл, г.о. Химки, Центр высоких технологий «ХИМРАР»), на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию ФГУП НИИГПЭЧ ФМБА России (15-16 февраля 2007 г., Санкт-Петербург), Международном семинаре по декоптаминации «Очистка зданий и сооружений, загрязненных в результате химического терроризма» (11-13 сентября 2006 г. Москва), 4-м Всемирном конгрессе по химическому, биологическому и радиологическому терроризму (15-19 апреля 2007 г., Дубровник, Хорватия), Международном конгрессе по управлению отходами ВэйсгТэк (31 мая - 3 июня 2007 г., г. Москва), Международном семинаре МНТЦ «Предупреждение и устранение последствий химически опасных чрезвычайных ситуаций, обусловленных терроризмом и промышленными авариями» (18-20 сентября 2007 г., г. Санкт-Петербург), И-ой Всероссийской конференции «Аналитика России» (7-12 октября 2007 г., г. Краснодар).

Публикации. По материалам исследований опубликована 32 научных работы в виде статей, тезисов докладов, методик и методических указаний.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, литературного обзора, экспериментальной части, обсуждения результатов, выводов и списка литературы.

Заключение диссертации по теме «Хроматография и хроматографические приборы», Корягина, Надежда Леонидовна

5. ВЫВОДЫ

1. Показано, что в случае, когда возможна дериватизация нелетучего аналита непосредственно в пробе, а отбор летучего производного производится из равновесного пара (например, этилового эфира ФК) характер матрицы малосущественен, и унификации поддаются все стадии анализа. В остальных случаях унификации подлежат отдельные факторы (режим ГХМС анализа, дериватизации и др.).

2. Изучены варианты дериватизации МФК и О-АМФК различными реагентами; показано, что для дериватизации МФК и О-АМФК предпочтительным является трет-бутилдиметилсилилировапие. Проведен выбор режима силилирования О-АМФК с учетом биогенных компонентов плазмы крови и мочи. Установлено, что определению О-АМФК в плазме крови мешают 2-гидроксимасляная кислота, 3-гидроксипропионовая кислота, мочевина, фосфорная кислота, 3-кетовалериаповая кислота. Установлено также, что определению О-изопропил МФК в моче человека практически не мешают компоненты матрицы, определению МФК мешают «ара-крезол и 3-гидроксимасляпая кислота, определению О-изобутил МФК мешает 3-гидроксиизовалериановая кислота и бутапдиол мопоацетат (идентифицирован предположительно), определению О-пинаколил МФК - пирокатехин и фепилуксусная кислота.

3. Для элюирования О-АМФК с патрона с сильным анионообменником из всех испробованных подходов наилучшие результаты были получены с использованием в качестве элюента смеси 3% метапольного раствора N113 и 25% водного раствора Ь1Нз в соотношении 9:1. Разработанная процедура анализа О-АМФК была положена в основу методики определения продуктов распада фосфорорганических отравляющих веществ в почве.

4. Показано, что маркеры воздействия на организм фосфорорганических отравляющих веществ (О-алкилметилфосфонаты) и сернистого иприта (тиодигликоль) методом ГХМС в режиме ионизации электронным ударом эффективно определяются в виде трет-бутилдиметилсилиловых эфиров. Однако для О-алкилметилфосфонатов предпочтительным является /ире/и-бутилдиметилсилилировапие парами дериватизирующего агента на микрово-локие, а для тиодигликоля - дериватизация в упаренной досуха и перерастворенной в смеси ацетонитрила и пиридина пробе.

5. Экспериментально подтверждено, что при разработке методик па основе ГХМС-ТФМЭ решающее значение имеет подбор таких параметров как тип микроволокпа, температура и время пробоотбора, ионная сила раствора. Влияние указанных факторов в равной мере проявляется как в случае пробоотбора из равновесного пара (этиловый эфир ФК), так и при погружении микроволокна в пробу и дериватизации апалитов непосредственно на нем парами силилирующего агента (определение О-алкилметилфосфонатов в воде и моче). По результатам экспериментальных исследований показано, что наиболее эффективным является микроволокно на основе сополимера полидиметилсилоксана - дивинилбепзола. Найдены корреляционные зависимости между функцией, отражающей влияние стерического эффекта (для неполярных фаз), параметром гидрофобности (для полярных фаз) и коэффициентом извлечения О-АМФК, позволяющие рассчитать эффективность извлечения определенным типом микроволокна химического соединения в пределах исследуемого гомологического ряда по структуре заместителя.

6. Установлено, что при алкилировапии тиодигликоля необходимо контролировать и исключать возможность образования промежуточных продуктов дериватизации. В случае я7/>ет-бутилдиметилсилилирования ТДГ получение диэфира е максимальным выходом достигается путем внесения неорганических солей калия и проведения реакции в смеси растворителей ацетоиитрил : пиридин.

7. Предложено использование дейтерированных (с13) стандартов О-АМФК для подтверждения первичной идентификации в следовом анализе этих соединений.

6.УСЛ0ВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ

ГХ-МС Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией

ГХ-МС-ЭУ Газовая хроматография в сочетании с масс-спектрометрией с ионизацией электронным ударом

ВЭЖХ-МС Высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с масс-спектрометрией

ВЭЖХ-МС-МС Высокоэффективная жидкостная хроматография в сочетании с тандем-масс-спектрометрией

ГХ-МС-МС Газовая хроматография в сочетании с тандем-масс-спектрометрией

ЭИ Ионизация электронным ударом

ХИ Химическая ионизация

СИД Селективное ионное детектирование

ПИТ Регистрация по полному ионному току

ДМФА Диметилформамид

ТБФ Трибутилфосфат мФБК Метафторбензойная кислота

ИК Инфракрасная спектрометрия

КЭФ Капиллярный электрофорез

ЛД5о Среднесмертельная доза г ЛД5о Половина среднесмертельной дозы

МФК Метилфосфоновая кислота

О-АМФК Алкилметилфосфонаты, алкилметилфосфоновые кислоты

ФАН Фторацетат натрия

ФК Фторуксусная кислота

ТДГ Тиодигликоль (бис-2-гидроксиэтилсульфид)

Зоман О-пинаколилметилфторфосфонат

Зарин О-изопропилметилфторфосфонат

RVX 0-изобутил-8-(2-диэтиламиноэтил)метилтиофосфонат

Иприт 2,2'-дихлордиэтилсульфид

03X0 Организация по запрещению химического оружия

УХО Уничтожение химического оружия

ФОВ Фосфорорганические отравляющие вещества

ОВ Отравляющие вещества

ХО Химическое оружие

SAX Сильный анионобменник

DOWEX Катионообменник

БСТФА N, 0-бис(триметилсилил)трифторацетамид

БСА N, 0-бис(триметилсилил)ацетамид

МТБСТФА Л^-метил-Л^/ире/и-бутилдиметилсилилитрифторацетамид

PFBBr Пентафторбензоилбромид

ТМС Триметилсилиловый эфир

ТБДМС Трет-бутилдиметилсилиловый эфир

ТФЭ Твердофазная экстракция

ТФМЭ Твердофазная микроэкстракция

ЖЖЭ Жидкость-жидкостная экстракция

ЖЭ Жидкостная экстракция

ПФА Парофазный анализ

Трилон Б Натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты

2.6. Заключение

Задачи химико-аналитического контроля в рамках судебно-медицинских экспертиз относятся к задачам наивысшей категории сложности, которые кратко можно сформулировать как необходимость структурной идентификации заранее непредсказуемых веществ в составе сложных (иногда неизвестных) матриц в отсутствие образцов сравнения и справочных данных.

Не менее важной задачей является разработка методов анализа биопроб на содержание высокотоксичных соединений и продуктов их превращения в организме. Ретроспективное выявление экспозиции высокотоксичными веществами позволяет надежно установить сам факт воздействия па организм того или иного вещества, оценить его дозу и выбрать схему лечения. Для различных ядов эти схемы также будут различными. Ретроспективный анализ биопроб при его обязательном сочетании с ретроспективным анализом «пебиологиче-ских» объектов должен также проводиться в составе мероприятий по выявлению случаев нарушения Конвенции по запрещению химического оружия. Техническим секретариатом ОЗХО пока не предложены «рекомендуемые рабочие процедуры» (recommended operating procedures) для анализа биопроб, поскольку даже в рамках мирового сообщества пока не па-коплен необходимый экспериментальный материал по этой проблеме. Процедуры анализа биопроб для работы в соответствии с целями и задачами Конвенции должны еще быть разработаны, прежде чем их можно будет применять на практике.

Очень важно отметить, что, несмотря на стремительное развитие жидкостной хроматографии и капиллярного электрофореза, ГХМС остается базовым методом анализа ТХ и их метаболитов пе только в объектах окружающей среды, по и в биологических средах. Основной причиной этого следует считать тот факт, что па сегодняшний день только в рамках метода ГХМС существуют обширные компьютерные базы данных по справочным МС и ГХ характеристикам и алгоритмы обращения к ним. Это обстоятельство дает возможность проводить идентификацию неизвестных соединений при полном или частичном отсутствии априорной информации. Дериватизация нелетучих апалитов пе только делает их пригодными для ГХМС анализа, но предоставляет важную информацию о присутствии тех или иных функциональных групп в молекулах идентифицируемых соединений.

При подготовке к ГХМС анализу в настоящее время отдается предпочтение микрометодам подготовки проб, позволяющим избежать применения органических растворителей, которые не только вносят дополнительные артефакты в пробу за счет имеющихся в их составе примесей, по и сами экологически небезопасны. Одним из таких методов является метод ТФМЭ, находящий все более широкое применение в зарубежной химико-апалитической практике, но пока мало известный в отечественных лабораториях. Метод ТФМЭ существенно расширяет возможности ГХМС в части чувствительности и селективности анализа, а также ввиду уникальных возможностей по преодолению матричного эффекта позволяет разрабатывать универсальные процедуры анализа токсичных соединений в воде, напитках, пищевых продуктах, объектах окружающей среды и биологических пробах (плазма крови, моча, гомогенаты органов и тканей). Последнее очень важно для практической деятельности судебно-медицинских и криминалистических лабораторий.

РОССИЙСКАЯ t ГОСУДАРСТВЕННА«! БИБЛИОТЕКА

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 3.1.Оборудование

Работа выполнена с использованием хромато-масс-спектрометрических приборных комплексов GCMS 5000 Shimadzu (прибор исследовательского класса) и QP 2010 Shimadzu (прибор высокого класса) (Япония), включающих газовый хроматограф, многофункциональный масс-спектрометр с квадрупольно-октапольным детектором и систему обработки данных GCMS Solution. Приборы оборудованы инжектором для ввода проб с делением/без деления потока. Часть работы выполнена на газовом хроматографе IIP 5890 (Hewlett Packard) с ионизациопно-пламеппым детектором.

Установка для твердофазной микроэкстракции (Supelco код по каталогу № 57333

U).

Центрифуга ОС-6М. Пробирки стеклянные центрифужные вместимостью 25 мл с круглым или коническим дном в комплекте (ТУ 5.375-4263-80) Центрифуга «Eppendorf» (США) Вакуумный концентратор фирмы Labconco (США)

Нагревательное устройство "Multi-blok heater" (Supelco, код по каталогу 33318-U) Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ 001 (ТУ СУР 3.836.007).

3.2.Материалы 3.2.1 .Хроматографические материалы Для разделения летучих производных использовали капиллярную кварцевую колонку IIP-5MS(Supelco) 25мх0,2ммх0,33мкм с привитой неподвижной фазой (5% фенил 95% диме-тилполисилоксаи) (Supelco, код по каталогу 24166) и НР-5 (Supelco) 25мх0,2мм><0,33мкм.

Для ТФЭ применяли картриджи Supelclen LC-Sax (Змл/500мг) (Supelco код по каталогу 57017), BOND ELUT (Varian 9100/9010/9050), DOWEX 50WX8-100 (ACROS Lot: A0174472201), ENVI-18, 3ml tubes (Supelko код по каталогу 57063)

Для ТФМЭ использовали микроволокна Carboxen/PDMS 75 цт (Supelco # 57344-U), Polyacrylate Coating 85um (Supelco # 57304-ü), Carboxen/PDMS StableFlex 85 цт (Supelco # 57334-U).

3.2.2.Химические материалы Ацетопитрил «о.с.ч.», метилен хлористый «о.с.ч.», толуол «о.с.ч» («Криохром», С-Петербург).

Этанол (ГОСТ Р 51652-2000). Аммиак водный, 25% ч.д.а. (ГОСТ 3760).

3% раствор аммиака в метаноле (код 34,142-8 по каталогу фирмы Aldrich). Фтористоводородная кислота концентрированная «ч» (ТУ 6-09-2622-77)

Фторид натрия ч.д.а. (ГОСТ 4463-76)

Гидроксид натрия, ч.д.а. (ГОСТ 4328).

Серная кислота, о.с.ч, (ГОСТ 4204-77).

Фторацетат натрия синтезировали по стандартной процедуре в НИИ гигиены, проф-патологии и экологии человека. Содержание основного вещества, по данным ХМС, не менее 98 %.

Метилфосфоиовая кислота (Aldrich, код по каталогу 28,986-8).

О-этил МФК, О-изопропил МФК, О-пинаколил МФК и О-изобутил МФК синтезированы НИИ химии Санкт-Петербургского Госуниверситета:

Меченые d3 О-этил МФК, О-изопропил МФК, О-пинаколил МФК и О-изобутил МФК синтезированы НИИ химии СПб госуниверситета.

Бис(2-гидроксиэтил)сульфид (ТДГ) (Aldrich, Cat №16,678-2).

Трибутилфосфат, 98 % (Aldrich, код по каталогу 15,861-5).

ЧО-бис(триметилсилил)трифторацетамид (Supelco, код по каталогу 33035-U).

А^/ирет-бутил-диметилсилил-Л^-метил-трифторацетамид + 1 % трет-бутилдиметилхлорсилана (Fluka Wa 10814).

Лг,0-бис(триметилсилил)ацетамид (Supelco, код по каталогу 33037-U). jV-нитрозодиметилмочевина (Синтезирована НИИ химии СПб госуниверситета).

Гидроокись триметиланилиния (SERVA 37060).

Йодистый метил (MERK 806064).

3.3.Объекты исследования 3.3.1.Объекты исследования при определении фторацетата натрия Экологические объекты

В качестве объектов исследования использовались вода, в которую вносили ФАН непосредственно перед анализом.

Биомедицинские объекты

Постановка опытов с биопробами, содержащими добавки ФАН.

В качестве биологических проб использовали бланковые пробы плазмы крови и мочи, содержащие добавки ФАН.

В 1 мл бланковой пробы плазмы (мочи) вносили определенное количество водного раствора ФАН известной концентрации. Пробу обрабатывали ультразвуком в течение 5 мин.

Постановка опытов in vivo

В качестве биологических проб использовали пробы, полученные после интоксикации животных (белых крыс Wistar) ФАН в дозе 0,8 мг/кг О/2ЛД50) и 2 мг/кг (ЛД50). Режим введения ФАН - пероральный. В работе были исследованы следующие биологические пробы: плазма крови, гомогенаты органов: мозга, печени, почек, сердца, моча. Плазму крови получали по стандартным процедурам с использованием гепарина в качестве антикоагулянта. Гомогенаты органов готовили растиранием навески биологического материала с равным по массе количеством воды в жидком азоте и хранили до начала анализа в замороженном виде пе более 7 суток. В ходе эксперимента были также проанализированы контрольные пробы, отобранные от животных, пе получавших ФАН. Мочу отбирали у затравленных животных через 6, 24 и 48, 72 и 120 часов после интоксикации.

Вскрытие животных и взятие образцов крови и тканей производились после декапитации.

3.3.2.Объекты исследования при определении метилфосфоновой кислоты и ее кислых эфиров Экологические объекты В качестве экологического объекта исследования использовали почву, отобранную в экологически чистой лесной зоне, в которую перед анализом вносили добавки О-АМФК, а также образцы почвы, отобранные в санитарпо-защитных зонах объектов УХО.

Биомедицинские объекты В качестве биологических объектов использовали плазму крови и мочу с внесенными О-АМФК; плазму крови человека и животных (белых крыс), полученную после экспозиции ФОВ (in vitro)', плазму крови и мочи, полученные в опытах на лабораторных животных (in vivo).

Постановка опытов in vitro Для опытов in vitro кровь отбирали путем декапитации крыс или из локтевой вены добровольцев, используя пробирки, смоченные насыщенным водным раствором Трилона Б. После отбора крови к 0,9 мл крови добавляли 0,1 мл раствора, содержащего ФОВ в физиологическом растворе ФОВ, перемешивали несколько раз, выдерживали 15 (или 30 минут) при 37° С, затем центрифугировали в течение 10 мин при 12000 g. Отбирали плазму в специальные пробирки и замораживали.

Постановка опытов in vivo В опытах in vivo белым крысам внутримышечно вводили растворы ФОВ в дозе '/г ЛД50 (0,075 мг/кг - зарина, 0,045 мг/кг - зомана, 0,0144 мг/кг - RVX) приготовленные путем разведения ФОВ в физиологическом растворе. После введения ОВ через определенное время крысу декапитировали, отбирали кровь, центрифугировали в течение 10 мин при 12000 g. Плазму отбирали в специальные пробирки и замораживали.

Мочу отбирали у затравленных животных через 6, 24 и 48 часов после интоксикации.

З.З.З.Объекты исследования при определении ТДГ Экологические объекты

В качестве объекта исследования на стадии разработки метода применялась морская вода с внесенным ТДГ. Разработанная методика была опробована при анализе глубинных проб морской воды Балтийского моря, отобранных в местах дислокации затопленного химического оружия во время второй мировой войны.

3.4. Методики исследования 3.4.1. Процедуры обнаружения ФАН в различных матрицах Определение ФАН в воде

В хроматографическую виалу для ПФА вместимостью 10 мл (4 мл для ТФМЭ) вносили 1 мл водопроводной воды, упаривали досуха при 60 "С.

Условия проведения дериватизации и отбора пробы при ГХ-ДИП- ПФА.

К сухому остатку добавляли 30 мкл концентрированной серной кислоты и 70 мкл раствора толуола в этаноле с концентрацией 200 мкг/мл в качестве внутреннего стандарта. Виалу с реакционной смесью герметично укупоривали, обрабатывали ультразвуком в течение 5 минут, выдерживали 30 минут в нагревательном устройстве при 60°С и отбирали 1 мл равновесной паровой фазы для ГХ анализа. Газовую пробу объемом 1 см3 вводили с делением потока 1:30.

Условия проведения дериватизации и отбора пробы при ГХ-ДИП- ТФМЭ.

К сухому остатку добавляли 30 мкл концентрированной серной кислоты и 70 мкл раствора толуола в этаноле с концентрацией 2 мкг/мл. Реакционную смесь выдерживали при температуре 60°С при постоянном перемешивании в герметично укупоренной нале в течение 15 мин., после чего через пробку виалы в газовую фазу над реакционной смесью вводили микроволокно СагЬохеп/РОМБ 81аЬ1еПех 85 иш и выдерживали в течение Юмин.

Термодесорбцию аналитов проводили в испарителе газового хроматографа. Ввод пробы без деления потока, время задержки сброса 0,3 мин.

Условия ГХ анализа

ГХ анализ проводили в изотермическом режиме. Температура колонки 50°С, инжектора и детектора - 200°С. Калибровочные определения проводили путем внесения известных количеств ФАН в водопроводную воду. Обработку проб проводили по методу внутреннего стандарта.

Определение ФАН в биомедицинских пробах

Подготовка проб плазмы крови.

К 1 мл плазмы крови добавляли 3 мл ацетонитрила, тщательно перемешивали и центрифугировали 10 мин. при 12000 g. Надосадочную жидкость переносили в хроматографиче-скую виалу объемом 4 мл. Белковый осадок взбалтывали с 1 мл смеси ацетонитрил:вода (3:1) и центрифугировали в том же режиме. Объединенную надосадочную жидкость упаривали досуха.

Подготовка проб гомогенатов органов.

К гомогенатам органов после размораживания добавляли ацетопитрил в количестве 4 мл на 1 г навески органа, взятой на анализ, и центрифугировали 15 мин при 7000 об/мин, надосадочную жидкость сливали в хроматографическую виалу для парофазного анализа, а к осадку добавляли (2x1мл) водно-ацетонитрильпой смеси (3:1) и центрифугировали в том же режиме. Объединенную надосадочную жидкость упаривали досуха.

Подготовка пробы мочи

Аликвоту мочи (1мл) упаривали досуха в хроматографической виале для анализа ТФМЭ, объемом 4 мл.

Дериватизация.

Этилирование ФК в сухом остатке этиловым спиртом в присутствии серной кислоты и определение этилового эфира ФК в равновесной паровой фазе методом ТФМЭ при анализе воды, гомогенатов органов и плазмы крови производили в идентичных условиях: к сухому остатку добавляли 30 мкл концентрированной серной кислоты и 70 мкл этилового спирта, содержащего четыреххлористый углерод и толуол в диапазоне концентраций 2-20 мкг/мл в качестве внутренних стандартов. Далее процедура аналогична определению ФАН в воде.

ГХМС анализ производили с использованием двух внутренних стандартов (толуол, четыреххлористый углерод). Анализ проводили в режиме программирования температуры: от 40°С (1 мин.) со скоростью 5° /мин. до 200°С. Съемку масс-хроматограмм проводили в режиме электронного удара с регистрацией избранных ионов (см. табл. З.1.). Условия ГХМС анализа: температура инжектора и детектора 280НС, ввод пробы без деления потока, время задержки сброса (БрНИезэ) - 0.3 мин.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Корягина, Надежда Леонидовна, 2007 год

1. Витенберг А.Г. Статический парофазный анализ. Физико-химические основы и области применения. Рос.хим.журнал, t.XLVII, №1,2003.с.7-23

2. Денисов Е.Т. Кинетика гомогенных химических реакций. Москва, Высшая школа. -1988. -С. 180-184.

3. Другов Ю.С., Родин A.A. Мониторинг приоритетных органических загрязнителей природной среды. Практическое руководство. С-Петербург, Анатолия, 2003.

4. Другов Ю.С., Родип A.A. Пробоподготовка в экологическом анализе. С-Петербург, Анатолия, 2002.С 283.

5. Ермолаева Е.Е., Радилов A.C., Нагорный C.B., Рембовекий В.Р., Савельева Е.И., Гончаров Н.В., Цибульская Е.А., Тидген В.П., Хлебникова Н.С., Меньшиков Н.М., Глашкина Л.М.,

6. Иванов В.А., Горшков В.И., 70 лет производства ионообменных смол, Сорбционные и хро-матографические процессы.2006.т.6.Вып.1, с.5-31

7. Карасек Ф., Клемент Р. Введение в хромато-масс-спектрометрию, М.: Мир. 1993. Байерман К., Определение следовых количеств органических веществ М.: Мир, 1987.

8. Руденко Б.А., Руденко Г.И., Высокоэффективные хроматографические процессы, Москва, Наука.2003. с.100-125

9. Савельева Е.И., Корягина H.JI., Хлебникова Н.С., Пшеничная Г.В. Методика выполнения измерений массовой концентрации продуктов распада фосфорорганических отравляющих веществ в почве хромато-масс-спектрометрическим методом. // № 242/12-04.2004г.

10. Шаталов И.Ф., Воронин А.В., Пурыгин П.Н. Химико-токсикологический анализ «летучих» и «лекарственных» ядов. // Уч.пособие. Самара: ООО «Содружество Плюс»: ГОУВПО «Сам-ГМУ». 2004.

11. Эммануэль Н.М., Кнорре Д.Г. Курс химической кинетики. Москва, Высшая школа. -1984. С180-182.

12. AllenderW.J. Determination of sodium fluoroacetate (Compound 1080) in biological tissues // J. Anal. Toxicol. 1990. - V.14. - P. 45 - 49.

13. Amijee M., Cheung J., Wells R.J. Direct on-column derivatisation in gas chromatography II. Comparison of various on-column methylation reagents and the development of a new selective methy-lation reagent. // J.Chromatogr. A 1996. - V.738. - P.43-55.

14. Anderson, S. Liquid-phase microextraction combined with capillary electrophoresis, a promising tool for the determination of chiral drugs in biological matrices . // J.Chromatogr.A 2002. -V.963.-P.303-312.

15. Arellano M., Malet-Martino M., Martino R., Gires P. The anti-cancer drug 5-fluorouracil is metabolized by the isolated perfused rat liver and in rats into highly toxic fluoroacetate // Br. J. Cancer. -1998.-V. 77. P.79 - 86.

16. Arthur, C.L.; Pawliszyn, J. Solid phase mieroextraction with thermal desorption using fused silica optical fibers. // J.Anal. Chem. 1990. - V.62. - P.2145-2148.

17. Baltussen, E., Cramers, C.A. Stir bar sorptive extraction (SBSE), a novel extraction technique for aqueous samples: theory and principles. // J.Microcol.Sep. 1999. - V.l 1. - P.737-747.

18. Baltussen,E.; Cramers, C.A. Sorptive sample preparation a review. // Anal.Bioanal.Chem. - 2002. -V.373.-P.3-22

19. Beck N.V., Carrick W.A., Cooper D.B., Muir B. Extraction of thiodiglycol from soil using pressurised liquid extraction. // J.Chromatogr. A 2001. -V.907. - P.221-227.

20. Black R.M., Holden I., Reid M., in: Proceedings of the Seventh International Symposium on Protection Against Chemical and Biological Warfare Agents, Stockholm, June, 2001.

21. Black R.M., Morton I., Riches J. (manuscript in preparation).

22. Black R.M., Muir R.W. Derivatisation reactions in the chromatographic analysis of chemical warfare agents and their degradation products. // J. Chromatogr. A 2003. - V.l000 - P.253-281.

23. Blau K., Halket J. (Eds.), Handbook of Derivatives for Chromatography, Wiley, Chichester, 1993

24. Braverman Y. Experiments on direct and secondary poisoning by fluoroacetamide (1081) in wildlife and domestic carnivores // J. Wildl. Dis. 1979. - V. 15. - No. 2. - P.319 - 325.

25. Campins-Falko P., Herraez-Hernandez R., Sevillano-Cabeza A., Trumpler I. Derivatization of amines in solid-phase extraction supports with 9-fluorenylmethyl chloroformate for liquid chromatography. // Ana.Chim. Acta. 1997,-V.344. -P.125-136.

26. Capacio B.R., Smith J.R., DeLion M.T., Dana R. Monitoring sulfur mustard exposure by gas chro-matography-mass spectrometry analysis of thiodiglycol cleaved from blood proteins. // J. Anal. Toxicol. 2004 - V.28 - P.

27. Chen X.H., Wijsbeek J. A Single-Column Procedure on Bond Elut Certify for Systematic Toxico-logical Analysis of Drugs in Plasma and Urine. // J.Forensic Sci. 1992. - V.37. - P.61-71

28. Creasy W.R., Rodriguez A.A., Stuff J.R., Warren R.W. Atomic emission detection for the quantitation of trimethylsilyl derivatives of chemical-warfare-agent related compounds in environmental samples. // J.Chromatogr. A 1995. - V.709. - P.333-344.

29. Crenshaw M.D., Cummings D.B., in: Proc. ERDEC Sci. Conf. Chem. Biol. Def. Res. 1998, 1999. p.715.

30. Cummins M.D., Wells R.J. Gas chromatographic determination of organic acids from fruit juices by combined resin mediated methylation and extraction in supercritical carbon dioxide. // J. Croma-togr. B 1997. - V. 785. - P.251-261.

31. D Agostino P.A., Provost L.R. Determination of chemical warfare agents, their hydrolysis products and related compounds in soil. //J.Chromatogr. A 1992. - V.589 - P.287-294.

32. Degel F. Comparison of new solid-phase extraction methods for chromatographic identification of drugs in clinical toxicological analysis. // Clin.Biochem. 1996. - V.29. - P. 529-540.

33. Demarchi A.C.C.O, Menezes M.L.,Mercadante A, Vassillief I. Determination of sodium mon-ofluoroacetate in serum by gas chromatography // Chromatographia 2001. - V. 54,- P.402-404.

34. Desmoulin F., Gilard V., Malet-Martino M., Martino R. Metabolism of capecitabine, an oral fluorouracil prodrug: (19)F NMR studies in animal models and human urine // Drug Metab Dispos. -2002,- V. 30.- No. 11.- P.1221-1229.

35. Drasch G., Kretschmer E., Kauret G.and L. von Meyer. Concentrations of mustard gas bis(2-chloroethyl)sulfide. in the tissues of a victim of vesicant exposure. // J. Forensic Science. 1987. -P.1788-1793.

36. Driskell W.J., Shih M., Needham L.L., Barr D.B. Quantitation of Organophosphorus Nerve Agent Metabolites in Human Urine Using Isotope Dilution Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. // J.Anal. Toxicol. 2002. - V.26. - P.6-10.

37. Driskell W.J., Shih M., Needham L.L., Barr D.B. Quantitation of organophosphorus nerve agent metabolites in human urine using isotope dilution gas chromatography-tandem mass spectrometry. // J. Anal. Toxicol. 2002 - V.26 - P.6-10.

38. Dubey D.K., Pardasani D., Gupta A.K. Hollow fiber-mediated liquid-phase microextraction of chemical warfare agents from water. // J.Chromatogr.A 2006. - V.l 107 - P.29-35.

39. Eisert, R.; Pawliszyn, J. Automated In-Tube Solid-Phase Mieroextraetion Coupled to HighPerformance Liquid Chromatography. // J.Anal.Chem. 1997 - V.69. - P.3140-3147.

40. Engvist J., Rautio M. (Eds.) B.2 Identification of Degradation Products of Potetial Organophospho-rus Warfare Agents. An Approach for the Standartisation of Techniques and Referens Data. The Ministry for Foreign Affairs of Finland, Helsinki, 1980.

41. Enggvist J., Rautio M. (Eds), Trace Analysis of Chemical Warfare Agents. 1. An Approach to the Environmental Monitoring of Nerve Agents, The Ministry for Foreign Affairs of Finland, Helsinki,1981.

42. Franke J.P., de Zeeuw R.A. Solid-phase extraction procedures in systematic toxicological analysis. // J.Chromatogr.B 1998. - V.713. - P.51-59.

43. Gershon H., Renwick J.A.A. Gas chromatography of fluorinated fatty acids : II. Separation and identification of the methyl esters of 2-fluorofatty acids to 18 carbons // J. Chromatogr. 1967. - V. 28. - P.399^103.

44. Ho T.S.; Halvorsen, T.G. Liquid-phase microextraction of hydrophilic drugs by carrier-mediated transport. // J.Chromatograph.A 2003. - V. 998. - P.61-72.

45. Huzek P. Chloroformâtes in gas chromatography as general purpose derivatizing agents. // J. Cro-matogr. B 1998. - V.717. - P.57.-91.

46. Kataoka H. Recent Advances in Solid-Phase Microextraction and Related Techniques for Phama-ceutical and Biomedical Analysis. -Current Pharmaceutical Analysis. -2005. -V.l -P.65-84.

47. Kostiainen R., Bruins A.P., Hakkinen V.M.A. Identification of degradation products of some chemical warfare agents by capillary electrophoresis—ionspray mass spectrometry. // J. Chroma-togr. 1993.-V.634-P.113-118.

48. Mercier J.-P., Ph. Morin, M. Dreux, Chimia 53 (1999) 511.

49. McDonald P.D., Bouvier E.S.P. Solid Phase Extraction Applications guide and Bibliography, A Resource for Sample Preparation Methods Development.,Waters, Milford, MA, 1995.

50. Minero C., Vincenti M., Lago S., Pelizzetti E. Determination of Ethylene Glycol in Aqueous Matrix by Direct Derivatization with Hexyl Chloroformate. Ann. Chim. 1993 - V.83 - P.511-520.

51. Minero C., Vincenti M., Lago S. Pelizzetti E. Determination of trace amounts of hightly hydrophilic compounds in water by direct derivatization and gas chromatography-mass spectrometry. // Fresen-ius, J.Anal.Chem. 1994. - V.350. - P.403.

52. Minnaar P.P. et al. A high-performance liquid chromatographic method for the determination of monofluoroacetate // J. Chromatogr. Sci. 2000. - V. 38. - P.36-20.

53. Mori M., Nakajima H., Seto Y. Determination of fluoroacetate in aqueous samples by headspace gas chromatography // J. Chromatogr.A 1996. - V. 736. - P. 229-234.

54. Mullen, W.M.; J.Pawliszyn. Direct Determination of Benzodiazepines in Biological Fluids by Restricted-Access Solid-Phase Microextraction. // J.Anal. Chem. 2002. -V.74. - P. 1081-1087.

55. Munro N. Environmental Health Perspectives //1999. V.107. - №12.

56. Noort D., Benshop H., Black R. Biomonitoring of Exposure to Chemical Warfare Agents: A Review. // Arch.Toxicol. 2002. - V.184. - P. 116-126.

57. Noort D., Benschop H.P., Black R.M. Biomonitoring of Exposure to Chemical Warfare Agents: A Review. // Toxicology and Aplied Pharmacology 2002. - V.184. - P. 116-126

58. Ohie T. et al.Gas Chromatography-mass-spectrometry with tert-butyldimethylsilyl derivatisation: use of the simplitied sample preparation and the automated data system to screen for organic acidemias. J. Chrom. AB. - 2000. -V.746 -P.63-73.

59. Ohsawa I., Kanamori-Kataoka M., Tsuge K., Seto Y.Determination of thiodiglycol, a mustard gas hydrolysis product by gas chromatography-mass spectrometry after tert-butyldimethylsilylation // J. of Chromatogr.A 2004. - V. 1061. - P.235-241.

60. Okuno I., Meeker D.L. Gas-liquid chromatographic determination of sodium fluoroacetate (Compound 1080) // J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1980,- V. 63. - P.49-55.

61. Okuno I., Meeker D.L., Felton R.R. Modified gas-liquid chromatographic, method for determination of compound 1080. Hi. Assoc. Off. Anal. Chem. 1982. - V.65. - P.l 102-1105.

62. Opstad A.M., Tornes J. A. Identification and quantification bygc-ms of sulphur mustard and related compounds after long timestorage in sea water ffi/rapport-2002/03237.

63. Ozawa H., Tsukioka T. Gas chromatographic determination of sodium monofluoroacetate // Anal.Chem. 1987. - V. 59. - P.2914-2917.

64. Pawliszyn J. Solid Phase Microextraction:Theory and Practice.Wiley-VCH. New York.USA.1997.

65. Peterson J.E. A gas chromatographic method for sodium fluoroacetate (compound 1080) in biological materials // Bull. Environ.Contam.Toxicol. 1975. - V. 13. - P. 751 - 757.

66. Polletini A. Systematic toxicological analysis of drugs and poisons in biosamples by hyphenated chromatographic and spectroscopic techniques // J. of Chromatograph. B 1999. - 733 - P.47-63.

67. Psillakis, E.; Kalogerakis, N. Trends Anal.Chem., 2002,21,53.

68. Rautio M. (ed.). Recommended Operating Procedures for Sampling and Analysis in the Verification of Chemical Disarmament, The Ministry for Foreign Affairs of Finland, Helsinki, 1994.

69. Ray A.C., Post L.O., Reagor J.C. A sensitive high pressure liquid chromatographic method was developed for the sodium fluoracetate // J. Assoc. of. Anal. Chem. 1981.-V. 64. -P. 19-24.

70. Rosenfeld J.M. Solid-phase analytical derivatization: enhancement of sensitivity and selectivity of analysis. // J. Cromatogr. A 1999 - V.843 - P. 19-27

71. Saha M., Saha J., Giese R.W. 4-(Trifluoromethyl)-2,3,5,6-tetrafluorobenzyl bromide as a new elec-trophoric derivatizing reagent. // J.Chromatogr.A 1993. - V.641. - P.400-404.

72. Sarrion M.N., Santos F.J., Galseran M.T. In situ derivatisation/solid phase microextraction for the determination of haloacetic acids in water. // Anal. Chem. - 2000. - V. 72. - P.4865- 4873.

73. Sarrion M.N., Santos F.J., Galseran M.T. Solid -phase microextraction coupled with gas chromatography for the analysis of haloacetic acids in water. // J. Chromatogr. A. 1999. - V. 859. -P.159-171.

74. Savelieva E.I., Koryagina N.L, Goncharov N.V., Radilov A.S. New Method for Fluoroacetate Identification and Quantitative Determination in Biologycal Samples // PITTCON, 12-17 марта 2006г., Орландо, Флорида, ClIIA).c.

75. Seheurer J., Moore C.M. Solid Phase Extraction of Drugs from Biological Tissues A Review. // J.Anal.Toxicoh - 1992. - V. 16. - P. 264-269

76. Sega G.A., Tomkins B.A., Griest W.H. Analysis of methylphosphonie acid, ethyl methylphos-phonic acid and isopropyl methylphosphonie acid at low microgram per liter levels in groundwater. // J.Chromatogr. A 1997. - V.790. - P. 143-152.

77. Shih M.L., Smith J.R., McMonagle, J.D, Doizine T.W., Gresham V.C. Detection of metabolites of toxic alkylmethylphosphonates in biological samples. // Biol. Mass Spectrom. 1991. - V.20. -P.717-723.

78. Sng M.T., Ng W.F. In-situ derivatisation of degradation products of chemical warfare agents in water by solid-phase microextraction and gas chromatographic-mass spectrometric analysis. // J.Chromatogr. A 1999 - V.832. - P. 173-182.

79. Sporkert F. Headspace solid-phase microextraction with 1-pyrenyldiazomethane on-fibre derivatisation for analysis of fluoroacetic acid in biological samples // J. Chromatogr.B 2002. - V. 772. -P.45-51.

80. Stahr H.M. Sodium Fluoroacetate. //J. Assoc. Off. Anal. Chem. 1977. - V. 60. - P. 1434-1435.

81. Stashenko, E.E.; Martinez, J.R. Derivatization and solid-phase mieroextraetion. // Trends Anal.Chem. 2004. - V.23 - P.553-561.

82. Stevens H.M., Moffat A.C., Drayton J.V. The recovery and identification of fluoroacetamide and fluoroacetic acid from tissues // Forensic Sci. 1976.- V. 8. - P. 131 -137.

83. Taguchi V.Y., in: R.E.Clement (Ed.), Cas Chromatography: Biochemical, Biomedical and Clinical Applications, Wiley, New York, 1990, p. 129

84. Tannock J. Rhod. High pressure liquid chromatographic determination of sodium -fluoracetate // J Agric. Res. 1975. - V. 13. - P. 67 - 72.

85. Tecle B. and Casida J.E. Enzymatic defluorination and metabolism of fluoroacetate, fluoroacetamide, fluoroethanol, and (-)-erythro-fluorocitrate in rats and mice examined by 19F and 13C NMR. // Chem. Res. Toxicol. 1989. - V. 2. - No.6 - P.429-435.

86. Tienpont, B. Stir bar sorptive extraction-thermal desorption-capillary GC-MS applied to biological fluids. // Anal.Bioanal.Chem. 2002 - V.373 - P.46-55.

87. Tomkins B.A., Sega G.A. Determination of thiodiglycol in groundwater using solid-phase extraction followed by gas chromatography with mass spectrometric detection in the selected-ion mode. // J.Chromatogr. A 2001. - V.911. - P.85-96.

88. Tornes J.Aa., Johnsen B.A. Gas chromatographic determination of methylphosphonic acids by me-thylation with trimethylphenylammonium hydroxide. // J.Chromatogr. A 1989. - V.467. - P. 129138.

89. Vartiainen T., Kauranen P. The determination of traces of fluoroacetic acid by extractive alkyla-tion, pentafluorobenzylation and capillary gas chromatography-mass spectrometry. // Anal. Chim. Acta 1984.-V. 157. - P.91-97.

90. Wells R.J. Recent advances in non-silylation derivatization techniques for gas chromatography. // J.Chromatogr, A 1999. - V.843. - P. 1-18.

91. Wils E.R.J., Hulst A.G., Fresenius J.Anal. Chem. 321 (1985) 471.

92. Worek F., Koller M., Thiemann H., Szinicz L. Diagnostic aspects of organophosphate poisoning. Toxicology -2005. V.214. - P. 182-189.

93. Wu, J.Pawliszyn. Preparation and applications of polypyrrole films in solid-phase microextraction. //J.Chromatogr. A 2001.-V.909.-P.37-52

94. Yeh K.H. and Cheng A.L. Acute confusion induced by a high-dose infusion of 5-fluorouracil and folinic acid. // J. Formos. Med. Assoc. 1994,- V. 93. - No. 8. - P. 721-723.

95. Yuan.H.; Mullen, W.M.; J.Pawliszyn. Biological sample analysis with immunoaffinity solid-phase extraction. // J.Analyst. // 2001 V.126 - P.1456-1470.

96. Yu, J.; Wu, C.; Xing, J. Development of new solid-phase microextraction fibers by sol-gel technology for the determination of organophosphorus pesticide multiresidues in food. // J.Chromatograph. A 2004. - V.1036. - P.101-111323-333.