Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат биологических наук Любицкий, Олег Борисович

• Любицкий, Олег Борисович
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Любицкий, Олег Борисович

Сокращения и условные обозначения

Общая характеристика работы----------------------------------.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей хемилюминесцентным методом»

Цель и задачи исследования.8

Научная новизна.— 8

Практическая значимость.-.-.9

Глава 1. Обзор литературы------------------------------—-----------------------------------------------10

1.1. Свободнорадикальное повреждение при заболеваниях человека и современное состояние антиоксидантной терапии------------------------------------------------------10

1.2. Антиоксиданты биологических жидкостей организма человека — 19

1.3. Модельные системы для определения антиоксидантной активности биологических жидкостей.-.-.27

Глава 2. Материалы и методы исследования----------------------------------------34

2.1. Материалы.—.——.— 34

2.2. Препаративные методы-----------------------------------------------------------------------35

2.2.1. Получение плазмы крови.-.-.35

2.2.2. Получение гемолизата эритроцитов.— 35

2.2.3. Приготовление образцов плазмы крови с различной степенью гемолиза.---------------------------------------------------------------------------------35

2.2.4. Получение биологических жидкостей-------------------------------------------36

2.3. Биохимические методы.-------------------------------------------------------------36

2.3.1. Фракционирование плазмы крови.36

2.3.2. Определение концентрации мочевой кислоты в плазме крови — 36

2.3.3. Получение общей фракции фосфолипидов из желтков куриных яиц.-.-.-.-.-.37

2.3.4. Приготовление многослойных фосфолипидных липосом.— 38

2.4. Биофизические методы.-.-.- 38

2.4.1. Измерение хемилюминесценции.-.38

2.4.2. Модельная система гемоглобин-пероксид водорода-люминол — 39

2.4.3. Модельная система окисления суспензии фосфолипидных липосом, индуцированного ионами двухвалентного железа-------------- 39

2.4.4. Измерение спектров флуоресценции люминола.-. 39

2.5. Клиническая характеристика больных острым деструктивным панкреатитом.-.------------------------------- 40

2.6. Статистическая обработка результатов —.-. 40

Глава 3. Результаты и их обсуждение.-. 41

3.1. Модельная система гемоглобин-пероксид водорода-люминол------ 41

3.1.1. Кинетики хемилюминесценции и предполагаемая схема химических реакций в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол.-. 41

3.1.2. Подбор оптимального соотношения компонентов системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол------------------------------.- 49

3.2. Изучение антиоксидантных свойств веществ с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол -. 55

3.2.1. Влияние ингибиторов свободнорадикального окисления на параметры хемилюминесценции системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол. 55

3.2.2. Влияние ингибиторов свободнорадикального окисления на интенсивность флуоресценции люминола.- 62

3.2.3. Определение антиоксидантной активности веществ с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол. 69

3.3. Изучение антиоксидантных свойств биологических жидкостей с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол . 72

3.3.1. Влияние плазмы крови на параметры хемилюминесценции системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол.-— 72

3.3.2. Влияние гемолиза на антиоксидантные свойства плазмы крови в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол. 79

3.3.3. Определение антиоксидантной активности плазмы крови с помощью системы гемоглобин-пероксид водорода-люминол.- 82

3.3.4. Исследование изменения антиоксидантной активности плазмы крови человека в системе гемоглобин-пероксид врдорода-люминол при остром деструктивном панкреатите----------------------------------------- 85

3.3.5. Изучение вклада мочевой кислоты в антиоксидантную активность плазмы крови в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол.-.-. 88

3.3.6. Исследование изменения антиоксидантной активности плазмы крови человека и кроликов в системе гемоглобин-пероксид водорода-люминол после однократного перорального приёма аскорбиновой кислоты.-------------------- 97

3.3.7. Определение антиоксидантной активности биологических жидкостей с помощью системы гемоглобин-пероксид водородалюминол.-.— 100

3.4. Преимущества и недостатки способа определения антиоксидантной активности веществ и биологических жидкостей с помощью модельной системы гемоглобин-пероксид водородалюминол.-. 106

Выводы. 116

Список использованной литературы. 118

СОКРАЩЕНИЯ И УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

АБАП - 2, 2л-азобис (2-амидинопропан) гидрохлорид

АБТС - 2,2"-азиноди(3-этилбензотиазолин)6-сульфоновая кислота

АК - аскорбиновая кислота

АО - антиоксидант

АОА - антиоксидантная активность

АФК - активные формы кислорода

КМБ - а-кето-у-метиобутировая кислота

ЛМ - люминол

ЛНП - липопротеины низкой плотности

МК - мочевая кислота

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

ТБК - 2-тиобарбитуровая кислота

ХЛ - хемилюминесценция

ЭДТА - этилендиаминтетраацетат натрия

АР2- - 3-аминофталат дианион

С-525 - 2,3,5,6-1Н,4Н-тетрагидро-9-(2,-бензоимидазолил) хинолизино-(9,9а,1^11) кумарин

Нв - гемоглобин

Н2О2 - пероксид водорода

Юг - синглетный кислород

О2* - супероксидный анион-радикал

ОН* - гидроксильный радикал

TRAP - total peroxyl radical-trapping antioxidant potential

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Известно, что в организме человека и животных свободнорадикальное окисление (СРО) биомолекул является нормальным метаболическим процессом. Основными механизмами активации СРО при этом являются: значительное увеличение выработки активных форм кислорода (АФК) и высвобождение каталитически активных ионов железа из вне- и внутриклеточных депо [4, 16]. Однако, несмотря на то, что СРО непрерывно протекает во всех органах и тканях, оно не приводит к развитию их радикального повреждения, поскольку для каждой ткани характерно поддержание указанного процесса на определённом стационарном уровне. Эта стационарность в определённой степени достигается за счёт функционирования согласованной системы ингибирования СРО, состоящей из системы контроля за содержанием АФК и системы связывания ионов железа. Однако, при многих патологических состояниях происходит нарушение этой стационарности за счёт усиления СРО биомолекул и/или ослабления системы его ингибирования, что приводит к усилению перекисного окисления липидов клеточных мембран и липопротеинов, денатурации белков и повреждению нуклеиновых кислот [100]. Это послужило патогенетическим обоснованием применения для лечения многих заболеваний различных экзогенных природных и синтетических ингибиторов СРО. В настоящее время в клинике широко используются такие ингибиторы как аскорбиновая кислота, а-токоферол, каротиноиды, различные флавоноиды, железосвязывающие агенты, такие как десферал, тиол-содержащие соединения [144]. Предлагается много других веществ для их клинического использования, однако, в подавляющем большинстве случаев их применение и подбор доз препарата основывается на эмпирическом подходе, что связано с тем, что не используются или затруднены способы оценки активности и механизма действия данного препарата.

В настоящее время в качестве одного из таких способов используется определение антиоксидантной активности (АОА) веществ, которая показывает способность данного вещества, называемого в этом случае антиоксидантом (АО), тормозить СРО в какой-либо модельной системе [101]. Указанный подход применяется для оценки эффективности антиоксидантного действия какого-либо вещества или для контроля за состоянием эндогенных АО, которое изучается посредством определения АОА биологических жидкостей.

Известны различные модельные системы для определения АОА веществ и биологических жидкостей, но в целом все они состоят по-крайней мере из двух компонентов: инициатора окисления и субстрата окисления. Торможение антиоксидантами СРО в модельных системах оценивается путём определения промежуточных или конечных продуктов окисления с помощью хроматографических, спектрофотометрических, хемилюминесцентных и других методов. Среди этих методов наибольшей информативностью обладают хемилюминесцентные методы, которые используют хемилюминесценцию (ХЛ), сопровождающую окисление определенных субстратов, для непосредственного слежения за кинетикой окисления [123, 138, 177]. Это позволяет исследовать временные параметры процесса окисления, что в некоторых случаях помогает определять механизм антиоксидантного действия тестируемых веществ. Однако, при использовании хемилюминесцентных модельных систем возникает ряд трудностей, связанных с нестабильностью компонентов модельных систем, низкой интенсивностью свечения, значительной продолжительностью процедуры определения во времени и трудностью интерпретации полученных данных. Поэтому, дальнейшее развитие и совершенствование хемилюминесцентных способов оценки антиокислительных свойств веществ и биологических жидкостей будет, несомненно, содействовать более широкому их внедрению в практику медицинских исследований и более полному пониманию механизмов процесса СРО биомолекул.

Цель и задачи исследования.

Цель работы: разработка хемилюминесцентных способов изучения АОА и механизма антиоксидантного действия веществ и биологических жидкостей. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи исследования:

1. Разработать хемилюминесцентные способы определения АОА индивидуальных веществ и биологических жидкостей.

2. С помощью разработанных способов изучить АОА и механизм антиоксидантного действия различных ингибиторов СРО.

3. С помощью разработанных способов изучить АОА и механизм антиоксидантного действия плазмы крови и других биологических жидкостей.

4. Исследовать изменения АОА плазмы крови при некоторых патологических процессах.

Научная новизна. Разработана хемилюминесцентная модельная система свободнорадикального окисления люминола (JIM), индуцированного смесью гемоглобина (Нв) и пероксида водорода (Н2О2) (система НВ-Н2О2-ЛМ). Хемилюминесценция в системе Нв-НгОг-ЛМ отличается высокой интенсивностью, поэтому для измерения не требуется чувствительных хемилюминометров. Радикалы-инициаторы, образующиеся в данной модельной системе, в качестве которых рассматривают феррил-радикалы Нв и гидроксильные радикалы, составляют один из путей инициирования СРО in vivo.

На основе системы НВ-Н2О2-ЛМ разработаны способы определения АОА индивидуальных веществ и биологических жидкостей. Данные способы отличаются простотой и воспроизводимостью, для анализа необходимо малое количество биологической жидкости.

Измерена АОА плазмы крови, мочи, влаги передней камеры глаза, синовиальной и церебро-спинальной жидкости человека в системе НВ-Н2О2-ЛМ. Оценён вклад мочевой кислоты в АОА плазмы крови человека, определяемую в системе НВ-Н2О2-ЛМ.

Исследована динамика АОА плазмы крови человека в системе Нв-ШСЬ-ЛМ в процессе развития острого деструктивного панкреатита.

Исследовано изменение АОА плазмы крови человека (здоровые доноры) и кроликов (интактные животные) в системе нв-Н2О2-ЛМ после однократного перорального приёма аскорбиновой кислоты.

Практическая значимость. Предлагаемые способы оценки АОА веществ и биологических жидкостей могут быть использованы при проведении медико-биологических и клинических исследований для динамического наблюдения за состоянием антиокислительного потенциала биологических жидкостей при различных патологических процессах, оценки эффективности и механизма антиоксидантного действия различных фармакологических препаратов и адекватности проводимой ими антиоксидантной терапии.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Любицкий, Олег Борисович

выводы

1. Разработана хемилюминесцентная модельная система свободнорадикального окисления ЛМ, индуцированного радикалами-инициаторами, образующимися при взаимодействии Нв и Н2О2 (система гемоглобин-пероксид водорода-люминол).

2. Исследовано влияние некоторых известных природных и синтетических ингибиторов СРО на параметры ХЛ системы Нв-НгОг-ЛМ. Показано, что их действие заключается в уменьшении амплитуды ХЛ и в ряде случаев увеличении латентного периода ХЛ. Обнаружено, что увеличение латентного периода ХЛ происходит только в случае некоторых низкомолекулярных водорастворимых веществ (аскорбиновой и мочевой кислоты, восстановленного глутатиона, флавоноидов рутина и дигидрокверцетина) и практически не наблюдается при добавлении белков (каталазы, супероксиддисмутазы, церулоплазмина, трансферрина, альбумина). Увеличение латентного периода ХЛ системы Нв-НгОг-ЛМ в присутствии перечисленных выше веществ связано, по-видимому, с их взаимодействием с радикалами-инициаторами СРО люминола, а уменьшение амплитуды ХЛ с взаимодействием с промежуточными продуктами образующимися при окислении ЛМ.

3. С помощью системы нв-Н2О2-ЛМ были разработаны способы определения АОА индивидуальных веществ и биологических жидкостей. Данные способы основаны на измерении латентного периода ХЛ модельной системы под действием тестируемого вещества или биологической жидкости и выражении полученных значений в эквивалентной концентрации стандартного АО (аскорбиновой кислоты).

4. С помощью разработанного способа была определена АОА некоторых биологических жидкостей организма человека. По степени увеличения АОА их можно расположить в следующем порядке: церебро-спинальная жидкость, влага передней камеры глаза, синовиальная жидкость, плазма крови, моча.

5. Исследована динамика АОА плазмы крови в системе Нв-ШОг-ЛМ и концентрации мочевой кислоты в плазме крови у больных острым деструктивным панкреатитом. Показано увеличение АОА плазмы крови у группы больных на 1 и 14 сутки заболевания в 1.8 и 1.6 раза соответственно по сравнению с группой здоровых доноров. Обнаружено, что концентрация мочевой кислоты также повышается на 1 и 14 сутки заболевания в 2.2 и 2.9 раза соответственно по сравнению с группой здоровых доноров.

6. Разработан методический подход для оценки вклада мочевой кислоты в АОА плазмы крови, измеряемую в модельной системе Нв-ШОг-ЛМ. Он заключался в определении АОА плазмы крови в которой мочевая кислота была предварительно разрушена уриказой и сравнении полученных значений с исходной АОА плазмы крови. С помощью данного подхода был рассчитан вклад мочевой кислоты в АОА плазмы крови группы здоровых доноров и группы больных острым деструктивным панкреатитом. Показано, что в обоих случаях он составляет приблизительно 90%.

7. Исследовано изменение АОА плазмы крови человека (здоровые доноры) и кроликов (интактные животные) в системе Нв-ШОг-ЛМ после однократного приёма аскорбиновой кислоты. Показано, что у здоровых доноров через 1 ч после приёма аскорбиновой кислоты величина АОА плазмы повышалась в среднем на 77%, постепенно уменьшаясь до исходных значений к четвёртому часу. У кроликов АОА плазмы крови также увеличивалась, достигая максимальных значений через 2 ч после его приема и оставалась неизменной в последующие 5 часов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Любицкий, Олег Борисович, 1999 год

1. Арутюнян, В.М., Григорян, P.A. Диагностика и патогенетические основы лечения панкреатита. Ереван: Айастан, 1995. - 284с.

2. Асейчев A.B., Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. Магнум С радикальное средство // Натуральная медицина - 1998. - Вып. 1.

3. Большакова И.В., Лозовская Е.Л., Сапежинский И.И. Антиоксидантные свойства группы экстрактов лекарственных растений // Биофизика 1998. -Т. 43,№2.-С. 186 - 188.

4. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. // Итоги науки и техники. Биофизика. Т. 29. М.: ВИНИТИ, 1991. - 249с.

5. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252с.

6. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: Наука, 1980. - 320с.

7. Воробьева Т.П., Козлов Ю.Н., Колтыпин Ю.В. Процессы окисления люминола, сопровождающиеся хемилюминесценцией: I. Механизм окисления гипохлоритом // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1976. - №10. - С. 2187-2193.

8. Воробьева Т.П., Козлов Ю.Н., Колтыпин Ю.В. Процессы окисления люминола, сопровождающиеся хемилюминесценцией: III. Феноменологические закономерности хемилюминесценции в системе ЬШ-NaOCl // Изв. АН СССР. Сер. хим. 1978. - №3. - С. 552 - 555.

9. Дрёмина Е.С., Шаров B.C., Владимиров Ю.А. Использование кинетики Ее2+-индуцированной хемилюминесценции в трис-буферной суспензии липосом для исследования антиоксидантной активности плазмы крови // Биофизика 1993. - Т. 38, № 6. - С. 1047 - 1051.

10. Жуков H.A., Жукова E.H., Климова С.К. Механизмы активации и роль перекисного окисления липидов при обострении хронического панкреатита//Тер. Архив 1989. - Т. 61, № 2. - С. 15 - 18.

11. Каган В.Е., Орлов О.Н., Прилипко JI.JI. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов // Итоги науки и техники. Биофизика. Т. 18. М.: ВИНИТИ, 1986. - 136с.

12. Кейтс, М. Техника липидологии. 1975. - 322с.

13. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Комаров О.С., Владимиров Ю.А. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лаб. Дело 1988. - Т. 5. - С. 59 -62.

14. Клебанов Г.И., Теселкин Ю.О., Владимиров Ю.А. Ингибирование антиокислительной активности плазмы крови азидом натрия // Биофизика 1988.-Т. 33,№3. -С. 512-516.

15. Лобода Д.И., Бобров O.E., Земскова М.В., Лигоненко А.Н. Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы при остром панкреатите и желчекаменной болезни // Врач. Дело 1991. - Т. 11. - С. 59 -60.

16. Осипов А.Н., Азизова O.A., Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биологической химии. Т. 31. -М.: Наука, 1990. С. 180 - 208.

17. Погосбекова М.Р. Анализ крови и мочи. Как его интерпретировать? М.: Мир, 1992. - 80с.

18. Русин Б.А. Хемилюминесценция фталгидразидов // Биохемилюминес-ценция. Труды московского общества испытателей природы. Т. 58. М.: Наука, 1983.-С. 69-117.

19. Теселкин Ю.О. Влияние церулоплазмина на способность плазмы крови ингибировать перекисное окисление липидов // Перекисное окисление липидов и антиоксидантная терапия при ишемической болезни сердца.

20. Горький: Горьковский государственный медицинский институт им. С.М. Кирова, 1988. С. 55 - 64.

21. Ames B.N., Cathcard R., Schwiers E. and Hochstein P. Uric acid provides an antioxidant defence in human against oxidant- and radical-caused aging and cancer: a hypothesis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1981. - V. 78, № 11. - P. 6855 - 6862.

22. Anderson M.E. and Meister A. Dynamic state of glutathione in blood plasma // J. Biol. Chem. 1980. - V.255. - P. 9530 - 9533.

23. Arad I.D., Forman H J. and Fisher A.B. Ascorbate efflux from guinea pig and rat lungs. Effect of starvation and O2 exposure // J: Lab. Clin. Med. 1980. - V. 96.-P. 673 -681.

24. Aruoma O.I., Halliwell В., Laughton M.J. and Quinlan G.J. The mechanism of initiation of lipid peroxidation. Evidence against a requirement for an iron(II)-iron(III) complex // Biochem. J. 1989. - V. 258. - P. 617 - 620.

25. Bangham A.D., deGier J. and Greville G.D. Osmotic properties and water permeability of phospholipid liquid crystals // Chem. Phys. Lipids 1967. - V. 1.-P. 225-246.

26. Beck M.T. and Joo F. Mechanism of the reaction between luminol and molecular oxygen // Photochem. Photobiol. 1972. - V. 16, № 6. - P. 491 - 494.

27. Biemond P., Swaak A.J.G. and Koster J. Iron mobilization from ferritin by superoxide derived from stimulated polymorpho-nuclear leukocytes // J. Clin. Invest. 1980. - V. 73. - P. 1536 - 1582.

28. Biemond P., Swaak A.J.G., Van Eijk H.G. and Koster J. Superoxide-dependent iron release from ferritin in inflamatory diseases // Free Radic. Biol. Med. 1988. - V. 4. - P. 185- 198.

29. Blake D.R., Allen R. and Lunec J. Free radicals in biological systems a review orientated to inflammatory processes // Br. Med. Bull. - 1987. - V. 43. - P. 371 -385.

30. Blake D.R., Hall N.D., Treby D.A., Halliwell B. and Gutteridge J.M.C. Protection against superoxide and hydrogen peroxide in synovial fluid from rheumatoid patients // Clin. Sci 1981. - V. 61. - P. 483 - 486.

31. Bolli J., Jeroudi M.O., Patel B.S., et al. Marked reduction of free radical generation and contractile dysfunction by antioxidant therapy begun at the time of reperfusion // Circ. Res. 1989. - V. 65. - P. 607 - 622.

32. Bors W., Michel C. and Saran M. Inhibition of the bleaching of the carotenoid crocin. A rapid test for quantifying antioxidant activity // Biochim. Biophys. Acta 1984. - V. 796, № 3. - P. 312 - 319.

33. Breimer L.H. Ionizing radiation-induced mutagenesis // Brit. J. Cancer 1988. -V. 57. - P. 6- 18.

34. Britigan B.E., Rosen G.M., Thompson B.Y., Chai Y. and Cohen M.S. Stimulated human neutrophils limit iron-catalyzed hydroxyl radical formation as detected by spin-trapping techniques // J. BioL.Chem. 1986. - V. 261. - P. 17026 - 17032.

35. Brown M.S. and Goldstein J.L. A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis // Science. 1986. - V. 232. - P. 34 - 47.

36. Calabrese R. and Carbonaro M. An e.p.r. study of the non-equivalence of the copper sites of caeruloplasmin // Biochem. J. 1986. - V. 238. - P. 291 - 295.

37. Cao G., Alessio H.M. and Cutler R.G. Oxygen-radical absorbance capacity assay for antioxidants // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 14, № 3. - P. 303 -311.

38. Cao G. and Cutler R.G. Reply to A.Ghiselli et al // Free Radic. Biol. Med. -1994.-V. 16, № 1.-P. 136-137.

39. Cao G. and Cutler R.G. Reply to B.Halliwell and Gutteridge J.M.C // Free Radic. Biol. Med. 1995. - V.18, №1. - P. 126.

40. Cao G. and Prior R.L. Comparison of differennt analytical methods for assessing total antioxidant capacity of human serum // Clin. Chem. 1998. - V. 44.-P. 1309- 1315.

41. Chow C.K., Changchit C., Bridges R., Rehn S., Humble J. and Turbek J. Lower levels of vitamin C and carotene in plasma of cigarette smokers // J. Am. Coll. Nutr. 1986. - V. 5. - P. 305 - 312.

42. Cooper M.J. and Engel R.R. Carbon monooxide production from L-3,4-dihydroxyphenylalanine. A method for assessing the oxydant/antioxidant properties of drug // Clin. Chim. Acta 1991. - V. 202, № 1-2. - P. 105 - 110.

43. Davies K.J.A., Sevanian A., Muakkassah-Kelly S.F. and Hochstein P. Uric acid-iron ion complexes. A new aspect of the antioxidant function of uric acid // Biochem. J. 1986. - V. 235, № 3. - P. 747 - 757.

44. DiMascio P., Kaiser P. and Sies H. Lycopene as the most efficient biological carotenoid singlet oxygen quencher // Arch. Biochem. Biophys. 1989. - V. 274. - P. 532 - 538.

45. Doly M., Bonhomme B. and Vennat J.C. Experimental study of the retinal toxicity of haemoglobin iron // Opthalmic Res. 1986. - V. 18. - P. 21 - 22.

46. Downey J. Free radicals and their involvement during longterm myocardial ischemia and reperfusion //Ann. Rev. Phisiol. 1990. - V. 52. - P. 487 - 504.

47. Drexel H., Dwrozak E., Kirchmair W., Milz M., Puschendorf B. and Dienstl F. Myoglobinaemia in the early phase of acute myocardial infarction // Am. Heart J. 1983.-V. 105.-P. 641 -651.

48. Driomina E.S., Sharov V.S. and Vladimirov Yu.A. Fe2+-induced lipid peroxidation kinetics in liposomes: the role of surface Fe2+ concentration in switching the reaction from acceleration to decay // Free Radic. Biol. Med. -1993.-V. 15,№3.-P. 239-247.

49. Esterbauer H., Gebicki J. and Puhl H. The role of lipid peroxidation and antioxidants in the oxydative modification of LDL // Free Radic. Biol. Med. -1992.-V. 13.-P. 341 390.

50. Esterbauer H., Streigl G., Puhl H. and Rotheneder M. Continuous monitoring of in vitro oxidation of human low density lipoprotein // Free Radic. Res. Comm. 1989. - V. 6. - P. 67 - 75.

51. Esterbauer H., Dieber-Rotheneder M., Waeg G., Striegl G., Jürgens G. Biochemical structural and functional properties of oxidised low density lipoproteins // Chem. Res. Toxicol. 1990. - V. 3. - P. 77 - 91.

52. Everse J. and Hsia N. The toxities of native and modified hemoglobins // Free Radic. Biol. Med. 1997. - V. 22, № 6. - P. 1075 - 1099.

53. Faulkner K. and Fridovich I. Luminol and lucigenin as detectors for O2* // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 15, № 4. - P. 447 - 451.

54. Ferrari R., Curello S., Cargnoni A., et al. Oxygen free radicals and myocardial damage: Protective role of thiol-containing agents //Am. J. Med. 1991. - V. 91 (Suppl. C). - P. 95S - 105S.

55. Ferrari R., Visioli O., Guanieri C. and Caldarera C.M. Vitamin E and the heart, possible role as an antioxidant // Acta Vitaminol. Enzymol. 1983. - V. 5. - P. 11 - 22.

56. Flecha B.G., Llesuy S. and Boveris A. Hydroperoxide-initiated chemiluminescence: An assay for oxidative stress in biopsies of heart, liver and muscle// Free Radic. Biol. Med. 1991. - V. 10. - P. 93 - 100.

57. Folch J., Lees M. and Steanly G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipides from animal tissues // J. Biol. Chem. 1957. - V. 226. - P. 497 - 509.

58. Frei B., England L. and Ames B.N. Ascorbate is an outstanding antioxidant in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989. - V. 86, № 16. - P. 6377-6381.

59. Frei B., Stocker R. and Ames B.N. Antioxidant defences and lipid peroxidation in human blood plasma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988. - V. 85. - P. 9748 -9752.

60. Galaris D., Mira D., Sevanian A., Cadenas E. and Hochstein P. Co-oxidation of salicylate and cholesterol during the oxidation of metmyoglobin by H2O2 // Arch. Biochem. Biophys. 1988. - V. 262. - P. 221 - 231.

61. Galdston M., Feldman J.G., Levytska V. and Magnusson B. Antioxidant activity of serum ceruloplasmin and transferrin available iron-binding capacity in smokers and nonsmokers // Am. Rev. Respir. Dis. 1987. - V. 135. - P. 783 -787.

62. Gaziano J., Manson J., Ridker J., Burling J. and Hennekens C.H. Dietary antioxidants and cardiovascular disease // Biochim. Biophys. Acta 1992. - V. 669. - P. 249 - 258.

63. Gey K.F., Puska P., Jordan P. and Moser U.K. Inverse correlation between plasma vitamin E and mortality from ischaemic heart disease in cross-cultural epidemiology //Am. J. Clin. Nutr. -1991. V. 53. - P. 3265 - 3345.

64. Ghiselli A. and Ferro-Luzzi A. A fluorescence-based method for measuring total plasma antioxidant capability // Free Radic. Biol. Med. 1995. - V. 18, № l.-P. 29-36.

65. Ghiselli A., Serafini M., Maiani G., Azzini E. and Ferro-Luzzi A. New approaches for measuring plasma or serum antioxidant capacity: a methodological note // Free Radic. Biol. Med. 1994. - V. 16, № 1. - P. 135 -136.

66. Giulivi C. and Cadenas E. Heme protein radicals: formation, fate and biological consequences // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 24, № 2. - P. 269 -279.

67. Glazer A.N. Phycoerythrin fluorescence-based assay for reactive oxygen species // Method. Enzymol. 1990. - V. 186. - P. 161 - 167.

68. Goldstein S., Meyerstein D. and Czapski G. The Fenton reagents // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 15, № 4. - P. 435 - 445.

69. Gopinathan V., Miller N.J., Milner A.D. and Rice-Evans C.A. Billirubin and ascorbate antioxidant activity in neonatal plasma // FEBS Letters 1994. - V. 349, №2. - P. 197-200.

70. Gorsuch J.D. and Hercules D.M. Studies on the cfiemiluminescence of luminol in dimethyl sulfoxide and dimethylsulfoxide-water mixtures // Photochem. Photobiol. 1972. - V. 151, № 6. - P. 567 - 583.

71. Greenwald R.A. Superoxide dismutase and catalase as therapeutic agents for human diseases // Free Radic. Biol. Med. 1990. - V. 8, № 2. - P. 201 - 209.

72. Grootveld M. and Halliwell B. Measurement of allantoin and uric acid in human body fluids. A potential index of free-radical reaction in vivo? // Biochem. J. 1987. - V. 243, № 3. - P. 803 - 808.

73. Guanieri C., Ferrari R., Visioli O., Caldarera C.M. and Nayler W.G. Effect of alpha-tocopherol on hypoxic perfused and reoxygenated rabbit heart muscle // J. Mol. Cell. Cardiol. 1978. - V. 10. - P. 893 - 906.'

74. Gutteridge J.M. Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron- and copper-dependent oxygen radical formation // FEBS Lett. 1983. - V. 157. - P. 37 - 40.

75. Gutteridge J.M.C. Copper-phenanthroline-induced site-specific oxygen-radical damage to DNA. Detection of loosely bound trace copper in biological fluids // Biochem. J. 1984. - V. 218. - P. 983 - 985.

76. Gutteridge J.M.C. Inhibition of the Fenton reaction by the protein caeruloplasmin and other copper complexes. Assessment of ferroxidase and radical scavenging activities // Chem. -Biol. Interact. 1985. - V. 56, - P. 113 -120.

77. Gutteridge J.M. Antioxidant properties of the proteins caeruloplasmin, albumin and transferrin. A study of their activity in serum and synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis // Biochim. Biophys. Acta 1986. - V. 869.-P. 119 - 127.

78. Gutteridge J.M.C. Iron promoters of the Fenton reaction and lipid peroxidation can be released from haemoglobin by peroxides // FEBS Letters -1986. V. 201, № 2. - P. 291 - 295.

79. Gutteridge J.M. Bleomycin-detectable iron in knee-joint synovial fluid from arthritic patients and its relationship to the extracellular antioxidant activities of caeruloplasmin, transferrin and lactoferrin // Biochem. J. 1987. - V. 245. -P. 415-421.

80. Gutteridge J.M.C. The antioxidant activity of haptoglobin towards hemoglobin-stimulated lipid peroxidation // Biochim. Biophys. Acta 1987. -V. 917, №2. - P. 219-223.

81. Gutteridge J.M.C., Hill C. and Blacke D.L. Copper stimulated phospholipid membrane peroxidation: antioxidant activity of serum and synovial fluid from patients with rheumatoid arthritis // Clin. Chim. Acta 1984. - V. 139. - P. 85 -90.

82. Gutteridge J.M.C. and Xaio-Chang F. Enchancement of bleomicin-iron free radical damage to DNA by antioxidants and their inhibition of lipid peroxidation // FEBS Lett. 1981. - V. 123. - P. 71 - 74.

83. Gutteridge J.M.C., Paterson S.K., Segal A.W. and Halliwell B. Inhibition of lipid peroxidation by the iron-binding protein lactoferrin // Biochem. J. 1981. -V. 199.-P. 259-261.

84. Gutteridge J.M.C. and Wilkins S. Copper salt-dependent hydroxyl radical formation. Damage to proteins acting as antioxidants // Biochim. Biophys. Acta 1983. - V. 759. - P. 38-41.

85. Guyan P.M., Uden S. and Braganza J.M. Heightened free radical activity in pancreatitis // Free Radic. Biol. Med. 1990. - V. 8, № 4. - P. 347 - 354.

86. Halliwell B. Superoxide-dependent formation of hydroxyl radicals in the presence of iron salts. Its role in degradation of hyaluronic acid by a superoxide-generating system // FEBS Lett. 1978. - V. 96. - P. 238 - 242.

87. Halliwell B. Ascorbic acid, iron overload, and desferrioxamine // Brit. Med. J. -1982.-V. 285.-P. 296.

88. Halliwell B. Oxidants and human disease: some new concepts // FASEB J. -1987.-V. l.-P. 358 -364.

89. Halliwell B. Albumin an important extracellular antioxidant? // Biochem. Pharmacol. - 1988. - V. 37, № 4. - P. 569 - 571.

90. Halliwell B. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism // Biochem. Pharmacol. 1995. - V. 49, № 10. - P. 1341 - 1348.

91. Halliwell B. and Gutteridge J.M.C. Oxygen free radicals and iron in relation to biology and medicine: some problems and concepts // Arch. Biochem. Biophys. 1986.-V. 246.-P. 501-514.

92. Halliwell, B. and Gutteridge, J.M.C. Free radicals in biology and medicine. -Oxford: Clarendon press, 1986. 346p.

93. Halliwell B. and Gutteridge J.M.C. The antioxidants of human extracellular fluids //Arch. Biochem. Biophys. 1990. - V. 280, № 1. - P. 1 - 8.

94. Halliwell B. and Gutteridge J.M.C. The difinition and measurement of antioxidants in biological systems // Free Radic. Biol. Med. 1995. - V. 18, № l.-P. 125- 126.

95. Hirayama O., Takagi M., Hukumoto K. and Katoh S. Evaluation of antioxidant activity by chemiluminescence // Anal. Biochem. 1997. - V. 247. -P. 237-241.

96. Hochstein P., Sree Kumar K. and Forman S.J. Lipid peroxidation and the cytotoxicity of copper // Ann. NY Acad. Sci. 1980. - V. 355. - P. 240 - 248.

97. Hodson E.K. and Fridovich I. The role of C>2r in the chemiluminescence of luminol: A mechanistic study // Photochem. Photobiol. 1973. - V. 18, № 6. - P. 451 - 455.

98. Isacsson U. and Wettermark G. Chemiluminescence in analitical chemistry // Anal. Chim. Acta 1974. - V. 68, № 2. - P. 339 - 362.

99. Janero D.R. Therapeutic potential of vitamin E in the pathogenesis of spontaneous aterosclerosis // Free Radic. Biol. Med. 1991. - V. 11. - P. 129 -144.

100. Jessup W., Rankin S.M., DeWhalley C.V., Hoult J.R.S., Scott J. and Leake D.S. Alpha-tocopherol consumption during low-density-lipoprotein oxidation // Biochem. J. 1990. - V. 265. - P. 399 - 405.

101. Jialal I., Norkus E.P., Cristol L., Grundy S.M. (3-Carotene inhibits the oxidative modification of low density lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta -1991.-V. 1086.-P. 134- 138.

102. Kanner J. and Harel S. Initiation of membranal lipid peroxidation by activated metmyoglobin and methemoglobin // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - V. 237, № 2.-P. 314-321.

103. Karlsson K. and Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase in the vascular system of mammals // Biochem. J. 1988. - V. 255. - P. 223 - 228.

104. Keberle H. The biochemistry of desferrioxamine and its relation to iron metabolism//Ann. NY Acad. Sei. 1964. - V. 119. - P. 758 - 768.

105. Kita T., Nagano Y., Yokode M., et al. Probucol prevents the progression of atherosclerosis in Watanable heritable hyperlipidaemic rabbits, an animal model of familian hypercholesterolaemia // Proc. Natl. Acad. Sei. USA 1987. -V. 84.-P. 5928-5931.

106. Kittridge K.J. and Willson R.L. Uric acid substantially enchances the free radical-induced inactivation of alcohol dehydrogenase // FEBS Letters 1984. -V. 170,№ l.-P. 162- 164.

107. Klein H.H., Pich S., Lindert S., Nebendahl K., Niedmann P. and Kreuzer H. Combined treatment with vitamin E and C in experimental myocardial infarction in pigs // Am. Heart J. 1989. - V. 118. - P. 667 - 673.

108. Kramer J.H., Arroyo C.M., Dickens B.F. and Weiglicki W.B. Spin-trapping evidence that graded myocardial ischemia alters post-ischemic superoxide production // Free Radic. Biol. Med. 1987. - V. 3. - P. 153 - 159.

109. Kukreja R.C., Weaver A.B. and Hess M.L. Stimulated human neutrophils damage cardiac sarcoplasmic reticulum function by generation of oxidants // Biomed. Biochim. Acta 1989. - V. 990. - P. 198 - 205.

110. Lee J. and Seliger H.H. Spectral characteristics of the excited states of the product of the chemiluminescence of luminol // Photochem. Photobiol. 1970. -V. 11,№4.-P. 247-258.

111. Lee J. and Seliger H.H. Quantum yields of the luminol chemiluminescence reaction in aqueous and aprotonic solvents // Ibid 1972. - V. 15, № 2. - P. 227 -237.

112. Liochev S.I. and Fridovich I. The role of.C>2* in the production of OH*: in vitro and in vivo // Free Radic. Biol. Med. 1994. - V. 16, № 1. - P. 29 - 33.

113. Lissi E., Salim-Hanna M., Pascual C. and del Castillo M. Evaluation of total antioxidant potential (TRAP) and total antioxidant reactivity from luminol-enchanced chemiluminescence measurements // Free Radic. Biol. Med. 1995. -V. 18,№2.-P. 153- 158.

114. Lucchesi B. Modulation of leukocyte-mediated myocardial reperfusion injury // Ann. Rev. Phisiol. 1990. - V. 52. - P. 561 - 576.

115. Maddipati K.R. and Marnett L.J. Characterization of the major hydroperoxide-reducing activity of human plasma. Purification and properties of a selenium-dependent glutathione peroxidase // J. Biol. Chem. 1987. - V. 262.-P. 17398 - 17403.

116. Maples K.R. and Mason R.P. Free radical metabolite of uric acid // J. Biol. Chem. 1988. - V. 263, № 4. - P. 1709 - 1712.

117. Marcillat O., Zhang Y., Lin S.W. and Davies K.J.A. Mitochondria contain a proteolytic system which can recognize and degrade oxidatively-denatured proteins // Biochem. J. 1988. - V. 254. - P. 677 - 683.

118. Marklund S.L. Ceruloplasmin, extracellular-superoxide dismutase, and scavenging of superoxide anion radicals // J. Free Radic. Biol. Med. 1986. -V. 2. - P. 255 - 260.

119. Matteis F.D., Dawson S.J. and Gibbs A.H. Two pathways of iron-catalyzed oxidation of billirubin: effects of desferrioxamine and trolox, and comparison with microsomal oxidation // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 15, № 3. - P. 301 - 309.

120. Miller D.M., Buettner G.R. and Aust S.D. Transition metals as catalysts of "autoxidation" reactions // Free Radic. Biol. Med. 1990. - V. 8, № 1. - P. 95 -108.

121. Mills G.C. Glutathione peroxidase and the destruction of hydrogen peroxide in animal tissues //Arch. Biochem. Biophys. 1960. - V. 86. - P. 1 - 5.

122. Nienhuis A.W. Vitamin C and iron // New Engl. J. Med. 1981. - V. 304. - P. 170-171.

123. Pacht E.R. and Davis W.B. Role of transferrin and ceruloplasmin in antioxidant activity of lung epithelial lining fluid // J. Appl. Physiol. 1988. - V. 64. - P. 2092 - 2099.

124. Panter S.S., Sadrzadeh S.M., Hallaway P.E., Haines J.L., Anderson V.E. and Eaton J.W. Hypohaptoglobinaemia associated with familian epilepsy // J. Exp. Med. 1985. - V. 161. - P. 748 - 751.

125. Parthasarathy S., Young S.G., Witztum J.L., Pittmann R.G. and Steinberg D. Probucol inhibits oxidative modification of low density lipoprotein // J. Clin. Invest. 1986. - V. 7. - P. 641 - 644.

126. Popov I.N. and Lewin G. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. II. Testing of nonenzymic water-soluble antioxidants // Free Radic. Biol. Med. 1994. - V. 17, № 3. - P. 267 - 271.

127. Popov I.N., Lewin G. and Bayehr R.V. Photochemiluminescent detection of antiradical activity. I. Assay of superoxide dismutase // Biomed. Biochim. Acta 1987. - V. 46, № 11. - P. 775 - 779.

128. Pryor W.A., Cornicelli J.A., Devall L.J., et al. A rapid screening test to determine the antioxidant potencies of natural and synthetic antioxidants // J. Org. Chem. 1998. - V. 58, № 13. - P. 3521 - 3532.

129. Puppo A. and Halliwell B. Formation of hydroxyl radicals from hydrogen peroxide in the presence of iron. Is hemoglobin a biological Fenton reagent? // Biochem. J. 1988. - V. 249. - P. 185 - 190.

130. Reddy B.R., Kloner R.A. and Przyklenk K. Early treatment with desferrioxamine limits myocardial ischemia/reperfusion injury // Free Radic. Biol. Med. 1989. - V. 7. - P. 45 - 52.

131. Rice-Evans C.A. and Diplock A.T. Current status of antioxidant therapy // Free Radic. Biol. Med. 1993. - V. 15, № 1. - P. 77 - 96.

132. Rice-Evans C.A. and Miller D.M. Total antioxidant status in plasma and body fluids // Method. Enzymol. 1994. - V. 234. - P. 279 - 293.

133. Rice-Evans C.A., Okunade G. and Khan R. The supression of iron release from activated myoglobin by physiological electron donors and desferrioxamine // Free Radic. Res. Comm. 1989. - V. 7. - P. 45 - 54.

134. Riemersma R. Risk of angina pectoris and plasma concentration of vitamin A, C and E and carotene // Lancet -1991. V. 337, - P. 1 - 5.

135. Ross R., Glomset J. and Kariya B. A platelled-dependent serum factor that stimulates the prolifiration of arterial muscle cells in vitro // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1974. - V. 71. - P. 1207 - 1210.

136. Roswell D.F. and White E.H. The chemiluminescence of luminol and related hydrazides // Method. Enzymol. 1978. - V. 57.

137. Rowlew D.A. and Halliwell B. Superoxide-dependent and ascorbate-dependent formation of hydroxyl radicals in the presence of copper salts: a physiologically significant reaction?//Arch. Biochem. Biophys. 1983. - V. 225. - P. 279 - 284.

138. Schoenberg M.H., Buchler M. and Beger H.G. The role of oxygen radicals in experimental acute pancreatitis // Free Radic. Biol. Med. 1992. - V. 12, № 6. -P. 515-522.

139. Seitz W.R. and Neary M.P. Chemiluminescence and bioluminescence in chemical analysis // Anal. Chem. 1974. - V. 46, № 2. - P. 188 - 202.

140. Shevlin P.B. and Neufeld H.A. Mechanism of the ferricyanide-catalysed chemiluminescence of luminol // J. Org. Chem. 1970. - V. 35, № 7. - P. 2178 -2182.

141. Slater T.F. Free radical mechanisms in tissue injury // Biochem. J. 1984. - V. 222.-P. 1 - 15.

142. Smith R.C. and Lawing L. Antioxidant activity of uric acid and 3-N-ribosiluric acid with unsaturated fatty acids and erythrocyte membranes // Arch. Biochem. Biophys. 1983. - V. 223, № 1. - P. 166 - 172.

143. Smith R.C. and Nunn V. Prevention by 3-N-ribosyluric acid of the oxydation of bovine hemoglobin by sodium nitrite // Arch. Biochem. Biophys. 1984. - V. 232, №1.-P. 348 - 353.

144. Stocker R., Glazer A.N. and Ames B.N. Antioxidant activity of albumin-bound bilirubin // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1987. - V. 84. - P. 5918 - 5922.

145. Stocker R. and Peterhans E. Antioxidant properties of conjugated bilirubin and biliverdin: biologically relevant scavenging of hypochlorous acid // Free Radic. Res. Comm. 1989. - V. 6. - P. 57 - 66.

146. Stocker R., Yamamoto Y., McDonagh A.F., Glazer A.N. and Ames B.N. Billirubin is an antioxidant of possible physiological importance // Science. -1998.-V. 235.-P. 1043- 1046.

147. Stocks J., Gutteridge J.M.C., Sharp R.J. and Dormandy T.L. Assay using brain homogenate for measuring the antioxidant activity of biological fluids // Clin. Sci. Mol. Med. 1974. - V. 47, № 3. - P. 215 - 222.

148. Stocks J., Gutteridge J.M.C., Sharp R.J. and Dormandy T.L. The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and alpha-tocopherol // Clin. Sci. Mol. Med. 1974. - V. 47, № 3. - P. 223 - 233.

149. Szebeni J., Winterbourn C.C. and Carrell R.W. Oxidative interactions between haemoglobin and membrane lipid. A liposome model // Biochem. J. 1984. - V. 220, № 3. - P. 685 - 692.

150. Thomson C.D. Selenium-dependent and non-selenium-dependent glutathione peroxidase in human tissues of New Zealand residents // Biochem. Int. 1985. -V. 10. - P. 673 - 679.

151. Totter J.R. and Philbrook G.E. Chemical changes leading to chemiluminescent oxidation of certain phthalazinediones by potassium peroxydisulfate // J. Phys. Chem. 1964. - V. 68, № 4. - P. 752 - 757.

152. Ursini F. and Bindoli A. The role of selenium peroxidases in the protection against oxidative damage of membranes // Chem. Phys. Lipids 1987. - V. 44. -P. 255 - 276.

153. Ursini F., Maiorino M., Hochstein P. and Ernster L. Microsomal lipid peroxidation: mechanisms of initiation. The role of iron and iron chelators // Free Radic. Biol. Med. 1989. - V. 6. - P. 31 - 36.

154. Videla L.A., Caceres T. and Lissi E.A. Antioxidant capacity of desferrioxamine and ferrioxamine in the chemically-initiated lipid peroxidation of rat erythrocyte ghost membranes // Biochem. Int. 1988. - V. 16. - P. 799 - 807.

155. Videla L.A., Villena M.I., Salgado C., Canales P. and Lissi E.A. Antioxidant capacity of desferrioxamine in biological systems // Biochem. Int. 1987. - V. 15.-P. 205-214.

156. Wayner D.D.M., Burton G.W. and Ingolg K.U. The antioxidant efficiency of vitamin C is concentration-dependent // Biochim. Biophys. Acta 1986. - V. 884.-P. 119-123.

157. White E.H. and Bursey M.M. Chemiluminescence of luminol and related hydrazides: the light emission step // J. Am. Chem. Soc. 1964. - V. 86, № 5. -P. 941 - 942.

158. White E.H., Zafiriou O. and Kagi H.H. Chemiluminescence of luminol: the chemical reaction // Ibid 1964. - V. 86, № 5. - P. 940 - 941.

159. Whitehead T.P., Thrope G.H.G. and Maxwell S.R.J. Enchanced chemiluminescent assay for antioxidant capacity in biological fluids // Anal. Chim. Acta 1992. - V. 266, № 2. - P. 265 - 277.

160. Winston G.W., Regoli F., Dugas A.J., Fong J.H. and Blanchard K.A. A rapid gas chromatographic assay for determining oxyradical scavenging capacity of antioxidants and biological fluids // Free Radic. Biol. Med. 1998. - V. 24, № 3. - P. 480 - 493.

161. Yamada T., Volkmer C. and Grisham M.B. The effect of sulfasalasine metabolites on hemoglobin-catalyzed lipid peroxidation // Free Radic. Biol. Med. 1991.-V. 10, № 1,-P. 41 -49.

162. Ziegler R.G. A review of epidemiologic evidence that carotenoids reduce the risk of cancer // J. Nutr. 1989. - V. 119. - P. 116 - 122.