Определение аминокислот и их оптических изомеров в виде o-фталевых и дансильных производных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Чернобровкин, Михаил Геннадьевич

• Чернобровкин, Михаил Геннадьевич
• кандидат химических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат химических наук Чернобровкин, Михаил Геннадьевич

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Определение модифицированных аминокислот методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией. Обзор реагентов для предколоночной дериватизации аминокислот

1.1 Определение аминокислот со спектрофотометрическим и флуориметрическим детекторами

1.2 Определение аминокислот с электрохимическим детектором

1.3 Дансилхлорид, как модифицирующий реагент для аминокислот

1.4 Использование о-фталевого реагента для предколоночной дериватизации аминокислот в обращенно-фазовой ВЭЖХ

1.5 Детектирование о-фталевых производных аминокислот

1.6 Определение энантиомеров аминокислот после дериватизации с о-фталевым альдегидом

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Исходные вещества, аппаратура, методика эксперимента

2.1 Исходные реактивы и растворы

2.2 Получение производных аминокислот с о-фталевым альдегидом

2.3 Получение дансильных производных аминокислот

2.4 Аппаратура, сорбенты и подвижные фазы

2.5 Методика хроматографического эксперимента

Глава 3. Предколоночная дериватизация аминокислот с о-фталевым альдегидом в обращенно-фазовой ВЭЖХ

3.1 Исследование устойчивости ОФА/2-МЭ производных аминокислот в процессе разделения на колонке с гидрофобизированным силикагелем

3.2 Оптимизация условий разделения ОФА/НАЦ производных аминокислот 67 3.2.1 Влияние природы органического растворителя подвижной фазы на селективность разделения ОФА/НАЦ производных аминокислот

3.2.2 Влияние рН и ионной силы подвижной фазы на разделение ОФА/НАЦ производных аминокислот

3.2.3 Разделение ОФА/НАЦ производных сложной смеси аминокислот 73 3.3 Изучение свойств нового хирального модификатора

Ц11)-манделил-(8)-цистеина

3.3.1 Чувствительность детектирования ОФА/НАЦ и ОФА/НМЦ производных аминокислот

3.4. Электрохимическое детектирование ОФА/НАЦ производных аминокислот

Глава 4. Определение аминокислот после дериватизации дансилхлоридом методом обращенно-фазовой ВЭЖХ

4.1 Оптимизация условий получения дансильных производных аминокислот

4.2 Амперометрическое детектирование дансильных производных аминокислот в обращенно-фазовой ВЭЖХ

Глава 5. Определение аминокислот и их оптических изомеров в пиве и фармацевтических препаратах методом обращенно-фазовой ВЭЖХ

5.1 Определение аминокислот и их энантиомеров в виде о-фталевых 113 производных в пиве

5.2 Определение аминокислот и их энантиомеров в виде о-фталевых производных в фармацевтических препаратах

5.3 Определение аминокислот в виде дансильных производных в фармацевтических препаратах

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Определение аминокислот и их оптических изомеров в виде o-фталевых и дансильных производных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии»

Актуальность темы. Аминокислотный анализ является хорошо изученным и в то же время развивающимся разделом современной аналитической химии. Определение аминокислот в продуктах питания, напитках и лекарственных препаратах имеет большое значение для контроля технологии производства, оценки качества сырья и готовой продукции, выявления фальсификатов. В последнее время актуально определение D-изомеров аминокислот в пищевых продуктах и медицинских препаратах. Это связано с тем, что влияние на здоровье человека D-изомеров аминокислот изучено мало, но их небольшие количества могут появляться в пищевых продуктах при термической обработке, а в медицинских препаратах при использовании синтетических аминокислот. Наиболее успешно поставленные задачи позволяет решать обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с предколоночным переводом аминокислот в гидрофобные производные.

Для предколоночной дериватизации аминокислот предложено несколько десятков реагентов, из них наибольшими преимуществами обладают о-фталевый альдегид (ОФА) и 5-диметиламинонафталин-1-сульфонилхлорид (дансилхлорид). о-Фталевый альдегид в присутствии серосодержащего нуклеофила быстро и количественно взаимодействует с аминокислотами при комнатной температуре. Актуальным является изучение устойчивости ОФА производных в процессе хроматографического разделения и выбор условий, в которых разложение производных минимально. Хиральные нуклеофилы образуют с аминокислотами диастереомерные производные, что позволяет определять оптические изомеры аминокислот. Известно несколько хиральных модификаторов аминокислот, но каждый из них проявляет энантиоселективность к ограниченной группе аминокислот. В связи с этим необходим поиск и изучение свойств новых, универсальных хиральных нуклеофилов для дериватизации аминокислот.

В отличие от ОФА дансилхлорид легко реагирует с вторичными и первичными аминогруппами, дансильные производные аминокислот устойчивы в условиях ВЭЖХ. Недостаток дансилхлорида - длительность процесса дериватизации, поэтому важно изучение факторов, влияющих на скорость и выход реакции дериватизации, особый интерес представляет исследование воздействия температуры и микроволнового поля. о-Фталевые и дансильные производные аминокислот обладают высокой флуоресценцией и светопоглощением. Селективность и чувствительность определения аминокислот в реальных объектах, что особенно важно при определении низких концентраций D-аминокислот, может повысить амперометрическое детектирование. Для его использования нужны дополнительные исследования, так как мало изучена электрохимическая активность аминокислот, модифицированных ОФА и хиральными нуклеофилами. Электрохимическое детектирование дансильных производных аминокислот до сих пор не применялось, между тем наличие электроактивных групп в структуре дансильных производных делает возможным их окисление и последующее амперометрическое детектирование.

Цель работы состояла в изучении условий предколоночной дериватизации аминокислот о-фталевым альдегидом и дансилхлоридом, выборе оптимальных условий разделения и детектирования аминокислот и их энантиомеров в виде производных и определении L- и D- аминокислот в фармацевтических препаратах и пиве. Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи: изучить устойчивость производных аминокислот с реагентом о-фталевый альдегид/2-меркаптоэтанол (ОФА/2-МЭ) в процессе хроматографирования и провести оптимизацию условий их разделения; изучить влияние состава подвижной фазы на селективность и эффективность разделения аминокислот и их оптических изомеров, модифицированных о-фталевым альдегидом в присутствии N-ацетил-Ь-цистеина (НАЦ); исследовать энантиоселективность двух новых мультихиральных модификаторов аминокислот Ы-(К)-манделил-(8)-цистеина (НМД) и Ы-фенилацетил-(11)-фенилглицил-(8)-цистеина (НФФЦ); выбрать оптимальные условия для разделения и детектирования двадцати аминокислот в виде ОФА/НАЦ и ОФА/НМЦ производных; показать возможность амперометрического детектирования ОФА/НАЦ производных аминокислот; исследовать влияние температуры и микроволнового поля на дериватизацию аминокислот дансилхлоридом; оптимизировать условия разделения и электрохимического детектирования дансильных производных аминокислот;

Научная новизна. Исследована устойчивость ОФА/2-МЭ производных аминокислот в процессе разделения на колонке с гидрофобизированным силикагелем. Показано, что степень разложения производных не превышает 10% и уменьшается при повышении скорости потока подвижной фазы. Предложены новые мультихиральные модификаторы аминокислот - М-(К)-манделил-(8)-цистеин и Ы-фенилацетил-(Я)-фенилглицил-(8)-цистеин. Проведено систематическое исследование влияния природы нуклеофильного реагента и состава подвижной фазы на разделение аминокислот и их оптических изомеров в виде ОФА производных. Показано, что М-(11)-манделил-(8)-цистеин обладает большей энантиоселективностыо по сравнению с ранее изученными аналогами. Использование НМЦ для предколоночной дериватизации позволяет методом обращенно-фазовой ВЭЖХ разделить с высоким разрешением энантиомеры всех аминокислот, входящих в состав белков, кроме аргинина (Rs=0.7). Найдены условия электрохимического детектирования дансильных и ОФА/НАЦ производных аминокислот. Сопоставлены метрологические характеристики определения дансильных и ОФА/НАЦ производных аминокислот с использованием амперометрического, флуориметрического и спектрофотометрического детекторов.

Практическая значимость работы. Выбраны условия разделения о-фталевых производных энантиомеров двадцати аминокислот, содержащихся в пиве и являющихся активными компонентами лекарственных препаратов. После предколоночной дериватизации с ОФА/НАЦ и ОФА/НМЦ реагентами определен энантиомерный аминокислотный состав нескольких образцов пива и лекарственного препарата «Полиамин». Проведенные исследования показали, что D-аланин можно использовать в качестве маркера заражения пива молочнокислыми бактериями. Разработана методика определения аминокислот в виде дансильных производных методом ВЭЖХ с амперометрическим детектированием. Содержание аминокислот определено в препарате «Долголет».

На защиту выносятся следующие положения:

1. Результаты исследования устойчивости ОФА/2-МЭ производных аминокислот в процессе хроматограф ичес ко го разделения.

2. Результаты изучения энантиоселективности М-(Л)-манделил-(8)-цистеина и ее сравнения с уже известными хиральными модификаторами.

3. Совокупность данных о влиянии состава подвижной фазы на разделение ОФА/НАЦ и ОФА/НМЦ производных аминокислот.

4. Совокупность данных по определению оптимальных условий дериватизации аминокислот дансилхлоридом.

5. Данные по исследованию условий амперометрического детектирования ОФА/НАЦ и дансильных производных аминокислот.

6. Условия и результаты определения аминокислотного состава пива и некоторых лекарственных препаратов.

Апробация работы. Основное содержание работы изложено в 10 публикациях. Результаты исследований доложены на VIII Всероссийском симпозиуме по жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу (Москва, 2001 г.), Международной конференции студентов и аспирантов «Ломоносов-2003» (Москва, 2003 г.), Всероссийском симпозиуме «Хроматография и хроматографическое оборудование» (Москва, 2004 г.), II Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» (Краснодар, 2005 г.), International Congress on Analytical Sciences «ICAS-2006» (Moscow, 2006).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 5 статей и 5 тезисов докладов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Чернобровкин, Михаил Геннадьевич

выводы

1. Предложен подход, позволяющий оценить устойчивость о-фталевых/2-меркаптоэтанольных производных аминокислот в процессе хроматографического разделения. Показано, что частично разлагаются при разделении в хроматографической колонке о-фталевые/2-меркаптоэтанольные производные валина и лейцина, степень их разложения увеличивается с уменьшением скорости потока.

2. Систематически исследовано влияние состава и рН элюента на удерживание и селективность разделения производных аминокислот с о-фталевым альдегидом/N-ацетил-Ь-цистеином. Установлено, что метанол в качестве компонента подвижной фазы обеспечивает большую селективность разделения диастереомеров аминокислот, чем ацетонитрил. Выбран оптимальный состав подвижной фазы и условия градиентного элюирования для разделения смеси двадцати производных аминокислот.

3. Для дериватизации аминокислот предложен новый мультихиральный реагент - N-(R)-манделил-(8)-цистеин, позволяющий с высокой селективностью разделять энантиомеры 20 изученных аминокислот.

4. Изучено электрохимическое детектирование аминокислот после дериватизации с о-фталевым альдегидом/М-ацетил-Ь-цистеином, выбран оптимальный потенциал и материал рабочего электрода. Показано, что чувствительность амперометрического детектирования сопоставима с флуориметрическим и выше, чем спектрофотометрического детектирования.

5. Исследовано влияние температуры и микроволнового излучения на образование дансильных производных аминокислот. Установлено, что нагревание реакционной смеси до 40 °С и действие микроволнового поля ускоряет реакцию дансилирования аминокислот, но уменьшает её выход.

6. Показана возможность амперометрического детектирования дансильных производных аминокислот после разделения методом обращенно-фазовой ВЭЖХ. Определены условия хроматографического разделения и амперометрического детектирования дансильных производных исследованных аминокислот.

7. Определено содержание аминокислот и их энантиомеров в ряде образцов пива и лекарственных препаратов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Чернобровкин, Михаил Геннадьевич, 2006 год

1. Ермолаева Г.А. Основные процессы пивоварения. Брожение пивного сусла. // Пиво и напитки. 2001. №4. С. 20-21.

2. Friedman М. Chemistry, nutrition and microbiology of D-amino acids. // J. Agric. Food Chem. 1999. V. 47. №9. P. 3457-3479.

3. Кастер Т. А., Нидервизер А. Аминокислоты и олигопептиды. Хроматография. Практическое приложение метода. Ч. 1. М.: Мир, 1986. 37 с.

4. AAA-Direct and AminoPac PA 10 Product Manual, Dionex Corporation, 2003.63 p.

5. Toyoka Т., Ishibashi M., Terao T. Sensitive determination of N-terminal prolyl peptides by high-performance liquid chromatography with laser-induced fluorescence detection. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 661. №1-2. P. 105-112.

6. Molnar-Perl I. Derivatization and chromatographic behavior of the o-phtaldialdehyde amino acid derivatives obtained with various SH-group-containing additives. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 913. №1-2. P. 283-302.

7. Koller M., Eckert H. Derivatization of peptides for their determination by chromatographic methods. //Anal. Chim. Acta. 1997. V. 352. №1-3. P. 31-59.

8. Fermo I., Diomede L., Paroni R. Serum amino acid analysis with pre-column derivatization: comparison of the o-phthaldialdehyde and N,N-diethyl-2,4-dinitro-5-fluoroaniline methods. // J. Chromatogr. 1990. V. 534. №1. P. 23-32.

9. Gifford L.A., Owusu-Daaku F.T.K., Stevens A.J. Acenaphthene fluorescence derivatisation reagents for use in high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 715. №2. P. 201-212.

10. Krause I., Bockhardt A., Neckermann H., Henle Т., Klostermeyer H. Simultaneous determination of amino acid and biogenic amines by reversed-phase high-performance liquid chromatography. //J. Chromatogr. A. 1995. V. 715. №1. P. 67-79.

11. Molnar-Perl I. Quantitation of amino acids and amines in the same matrix by high-performance liquid chromatography, either simultaneously or separately. // J. Chromatogr. A. 2003. V. 987. №1-2. P. 291-309.

12. Drnevich D., Vary T. Analysis of physiological amino acids using dabsyl derivatization and reversed-phase liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1993. V. 613. №1. P. 137-144.

13. Roturier J.M., Bars D.Le., Gribon J.C. Separation and identification of hydrophilic peptides in dairy products using FMOC derivatization. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 696. №2. P. 209-217.

14. Gustavsson В., Betner I. Fully automated amino acid analysis for protein and peptide hydrolysates by precolumn derivatization with 9-fluorenyl methylchloroformate and 1-aminoadamantane.//J. Chromatogr. 1990. V. 507. P. 67-77.

15. Molnar-Perl I. Role of chromatography in the analysis of sugars, carboxylic acids and amino acids in food. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 891. №1. P. 1-32.

16. Liu H.J. Determination of amino acids by precolumn derivatization with 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate and high-performance liquid chromatography with ultraviolet detection. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 670. №1-2. P. 59-66.

17. Antonis K.D., Brown P.R., Cohen S.A. High-performance liquid chromatographic analysis of synthetic peptides using derivatization with 6-Aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate. //Anal. Biochem. 1994. V 223. №2. P. 191-197.

18. Caudill W.L., Wightman R.M. Trinitrobenzenesulfonic acid: a chromophore, electrophore and pre-column derivatizing agent for high-performance liquid chromatography of alkylamines. //Anal. Chim. Acta. 1982. V. 141. P. 269-278.

19. Краснова И.Н., Карцова Jl.A., Черкас Ю.В. Определение аминокислот в сыворотке крови человека методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии в режиме изократического элюирования. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 55. № 1.С. 66-74.

20. Yu J., Li J., Krull I.S., Gohen S.A. Polymeric 6-aminoquinoline, an activated carbamate reagent for derivatization of amines and amino acids by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1994. V. 658. №2. P. 249-260.

21. Sanz M.A., Gastillo G., Hernandez A. Isocratic high-performance liquid chromatographic method for quantitative determination of lysine, histidine and tyrosine in foods. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 719. P. 195-201.

22. Gros G., Labouesse B. Study of dansylation reaction of amino acids, peptides and proteins. // European J. Biochem. 1969. V. 7. №4. P. 463-470.

23. Zhou J., Lunte S.M. Membrane-based on-column mixer for capillary electrophoresis/electrochemistry.//Anal. Chem. 1995. V. 67. №1. P. 13-18.

24. Jong C., Hunges G.J., Wilson К J. Amino Acid analyses by high-performance liquid chromatography. An evaluation of the usefulness of pre-column Dns derivatization. // J. Chromatogr. 1982. V. 241. №2. P. 345-359.

25. Bayer E., Grom E., Kaltenegger B. Separation of amino acids by high-performance liquid chromatography. // Anal. Chem. 1976. V. 48. №8. P. 1106-1109.

26. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. 536 с.

27. Faist V., Drusch S., Kiesner С. Determination of lysinoalanine in foods containing milk protein by high-performance liquid chromatography after derivatization with dansyl chloride. // Int. Dairy J. 2000. V. 10. №5-6. P. 339-346.

28. Краснова И.Н., Карцова Л.А., Колмакова И.В. Анализ нейромедиаторных аминокислот и биогенных аминов в спинномозговой жидкости методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. аналит. химии. 1997. Т. 52. №7. С. 767-772.

29. Sternson L.A., Stobaugh J.F., Repta A.J. Rational design and evaluation of improved o-phthalaldehyde-like fluorogenic reagents. // Anal. Biochem. 1985. V. 144. №1. P. 233-246.

30. Barnett R., Jencks W.P. Diffusion-controlled and concerted base catalysis in the decomposition of hemithioacetals. // J. Am. Chem. Soc. 1969. V. 91. №24. P. 6758-6765.

31. Barnett R., Jencks W.P. Base-catalyzed hemithioacetal decomposition at a diffusion-controlled rate. // J. Am. Chem. Soc. 1967. V. 89. №23. P. 5963-5964.

32. Veber D.F., Luowski W. 1-Arylisoindoles. // J. Am. Chem. Soc. 1964. V. 86. №19. P. 41524158.

33. Duchateau A.L.L., Knuts H., Boesten J.M.M., Guns J.J. Enantioseparation of amino compounds by derivatization with o-phthalaldehyde and d-3-mercapto-2-methylpropionic acid. // J. Chromatogr. 1992. V. 623. №2. P. 237-245.

34. Einarsson S., Folestad S., Josefsson B. Separation of amino acid enantiomers using precolumn derivatization with o-phthalaldehyde and 2,3,4,6-tetra-O-acetyl-l-thio-P-glucopyranoside. Hi. Liq. Chromatogr., 1987. V. 10. № 8-9. P. 1589-1601.

35. Buck R.H., Krummen K. High-performance liquid chromatographic determination of enantiomeric amino acids and amino alcohols after derivatization with o-phthaldialdehyde and various chiral mercaptans. // J. Chromatogr., 1987. V. 387 P. 255-265.

36. Dorresteijn R.C., Berwald L.G., Zomer G., Wieten G., Beuvery E.C. Determination of amino acids using o-phthalaldehyde-2-mercaptoethanol derivatization. Effect of reaction conditions. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 724 P. 159-167.

37. Simons S.S, Johnson D.F. Reaction of o-phthalaldehyde and thiols with primary amines: formation of l-alkyl(and aryl)thio-2-alkylisoindoles. // J. Org. Chem. 1978. V.43. №14. P. 2886-2891.

38. Бекетов В.И., Воронина Р.Д., Филатова Д.Г., Зоров Н.Б. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 55. №12. С. 1277-1280.

39. Stobaugh J.F., Repta A.J. Autoxidation of l-(tert-butylthio)-2-(n-propyl)isoindole. // J. Org. Chem. 1984. V.49. №22. P. 4306-4309.

40. Stobaugh J.F., Repta A.J., Sternson L.A., Garren K.W. // Anal. Biochem. 1983. V. 135. №2. P. 495-504.

41. Jacobs W.A., Leburg M.W., Madaj E.J. Stability of o-phthalaldehyde-derived isoindoles. // Anal. Biochem. 1986. V. 156. №2. P. 334-340.

42. Allison L.A., Mayer G.S., Shoup R o-Phthalaldehyde derivatives of amines for high-speed liquid chromatography/electrochemistry. // Anal. Chem. 1984. У. 56. №7. P. 1089-1096.

43. Donzanti B.A., Yamamoto B.K. An improved and rapid HPLC-EC method for the isocratic separation of amino acid neurotransmitters from brain tissue and microdialysis perfusates. // Life Sciences. 1988. V. 43. №11. P. 913-922.

44. Kucera P., Umgat H. Design of a post-column fluorescence derivatization system for use with microbore columns. // J. Chromatogr. 1983. V. 255 P. 563-579.

45. Godel H., Graser Т., Foldi P., Pfaender P., Furst P. Measurement of free amino acids in human biological fluids by high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1984. V. 297. №1. P. 49-61.

46. Svedas V.K., Galaev I.J., Borisov I.L., Berezin I.V. The interaction of amino acids with o-phthaldialdehyde: A kinetic study and spectrophotometric assay of the reaction product. // Anal. Biochem. 1980. V. 101. P. 188-195.

47. Wong O.S., Sternson L.A., Schowen R.L. Reaction of o-phthalaldehyde with alanine and thiols: kinetics and mechanism. // J. Amer. Chem. Soc. 1985. V. 107. №22. P. 6421-6422.

48. Nakamura H., Matsumoto A., Tamura Z. On the stability of isoindole-type fluorophores derived from o-phthalaldehyde, primary amino compounds and thiols. // Anal. Lett. 1982. V. 15. №A17. P. 1393-1410.

49. Cronin J.D.H., Pizzarello S., Gandy W.E. Amino acid analysis with o-phthalaldehyde detection: Effects of reaction temperature and thiol on fluorescence yields. // Anal. Biochem. 1979. V. 93. №1. P. 174-179.

50. Jacobs W.A. O-Phthalaldehyde-sulfite derivatization of primary amines for liquid chromatography-electrochemistry. //J. Chromatogr. 1987. V. 392. P. 435-441.

51. Turiak G., Volicer L. Stability of o-Phthalaldehyde-sulfite derivatives of amino acids and their methyl esters: electrochemical and chromatographic properties. // J. Chromatogr. 1994. V. 668. P. 323-329.

52. Oates M.D., Cooper B.R., Jorgenson J.W. Quantitative amino acid analysis of individual snail neurons by open tubular liquid chromatography. // Anal. Chem. 1990. V. 62. №15. P. 1573-1577.

53. Smith S., Sharp T. Measurement of GABA in rat brain microdialysates using o-phthalaldehyde-sulfite derivatization and high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. //J. Chromatogr. B. 1994. V. 652. P. 228-233.

54. Agilent Zorbax column selection guide for analytical HPLC. Agilent Technologies Inc. USA, 2001.30 р.

55. Сакодынский К.И., Бражников B.B., Волков С.А., Зельвенский В.Ю., Ганкина Э.С., Шатц В.Д. Аналитическая хроматография. Москва.: Химия, 1993. С. 312.

56. Стыскин E.JI., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М.: Химия, 1986.242 с.

57. Энгельгард X. Жидкостная хроматография при высоких давлениях. М.: Мир, 1980. 245 с.

58. Schuster R. Determination of amino acids in biological, pharmaceutical, plant and food samples by automated precolumn derivatization and high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1988. V. 431. P. 271-284.

59. Aswad D.W. Determination of D- and L-aspartate in amino acid mixtures by high-performance liquid chromatography after derivatization with a chiral adduct of o-phthaldialdehyde. //Anal. Biochem. 1984. V. 137. №2. P. 405-409.

60. Thompson J.A., Holtzmann J.L., Tzuru M., Lerman C.R Procedure for the chiral derivatization and chromatographic resolution of R-(+) and S-(-) propranolol. // J. Chromatogr. 1982. V. 238. №2. P. 470-475.

61. Сычев C.H. Методы совершенствования хроматографических систем и механизмы удерживания в ВЭЖХ. Орел.: Орел ГТУ, 2000. С. 38.

62. Barkholt V., Jensen A.L. Amino acid analysis: Determination of cysteine plus half-cystine in proteins after hydrochloric acid hydrolysis with a disulfide compound as additive. // Anal. Biochem. 1989. V. 177. №2. P. 318-322.

63. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. Основы биохимии. М.: Мир, 1981. 879 с.

64. Gorog S., Gazdag М. Enantiomeric derivatization for biomedical chromatography. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. P. 51-84.

65. Bovingdon M.E., Webster R.A. Derivatization reactions for neurotransmitters and their automation.//J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. P. 157-183.

66. Scaloni A., Simmaco M., Bossa F. D-amino acid analysis. // Methods in molecular biology. 2003.V. 211. P. 169-180.

67. Amelung W., Zhang X. Determination of amino acid enantiomers in soil. // Soil Biology & Biochemistry. 2001. V. 33. №4-5. P. 553-562.

68. Gulyaeva N., Zaslavsky A., Lechner P., Chait A., Zaslavsky B. Relative hydrophobicity of organic compounds measured by partitioning in aqueous two phase systems. // J. Chromatogr. B. 2000. V. 743. P. 187-194.

69. Joseph H., Davies P. Electrochemical activity of o-phthaldialdehyde mercaptoethanol derivatives of amino acids. //J. Chromatogr. 1983. V. 277. №1. P. 125-130.

70. Oates M.D., Jorgenson J.W. Determination of naphthalene-2,3-dicarboxaldehyde-labeled amino acids by open tubular liquid chromatography with electrochemical detection. //Anal. Chem. 1989. V. 61. №5. P. 432-435.

71. Яшин А.Я., Яшин Я.И Аналитические возможности жидкостного хроматографа «Цвет Яуза» с электрохимическими детекторами. // Журн. Рос.хим.общества им. Д.И. Менделеева. 2002. Т. 66. №4. С. 109-115.

72. Евгеньев М.И., Будников Г.К. Электрохимическое детектирование в высокоэффективной жидкостной хроматографии. // Журн. аналит. химии. 2000. Т. 55. №11. С. 1206.

73. Fekkes D. State-of-the-art of high-performance liquid chromatographic analysis of amino acids in physiological samples. // J. Chromatogr. B. 1996. V. 682. №1. P. 3-22.

74. Teerlink T. Derivatization of posttranslationally modified amino acids. // J. Chromatogr. B. 1994. V. 659. №1-2. P. 185-207.

75. Simmaco M., Biase D., Barra D., Bossa F. Automated amino acid analysis using precolumn derivatization with dansylchloride and reversed-phase high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1990. V. 504. №1. P. 129-138.

76. Microwave-enhanced chemistry. Fundamentals, sample preparation and applications. / Ed.by H.M. Kingston, S.J.Haswell. Washington: ACS, 1997. 25 p.

77. Тихомиров В.Г. Технология пивоваренного и безалкогольного производств. М.: Колос, 1998.447 с.

78. Мальцев П.М. Технология бродильных производств. М.: Пищевая промышленность, 1980. с. 560.

79. Главачек Ф., Лхотский А. Пивоварение. М,: Пищевая промышленность, 1978.623 с.

80. Ермолаева Г.А. Основные процессы пивоварения. Брожение пивного сусла. // Пиво и напитки. 2001. №2. С. 20-22.

81. Ермолаева Г.А. Основные процессы пивоварения. Брожение пивного сусла. // Пиво и напитки. 2001. №3. С. 14-16.

82. Ермолаева Г.А. Основные процессы пивоварения. Брожение пивного сусла. // Пиво и напитки. 2001. №5. С. 14-15.

83. Хорунжина С.И. Биохимические и физико-химические основы технологии солода и пива. М.: Колос, 1999.186 с.

84. Меледина Т.В. Роль штаммовых характеристик дрожжей в формировании вкуса и аромата пива. // Brauwelt. Мир пива. 1997. №1. С. 35-37.

85. Фараджева Е.Д., Ерошкина Е.В. Значение расы дрожжей в формировании вкуса и аромата пива. // Пиво и напитки. 1999. №1. С. 24-26.

86. Методы анализа в пивоварении. Сборник методов Среднеевропейской технической аналитической комиссии по пивоварению (МЕБАК). / Под. ред. Г. Пфеннингера. -Цюрих. 1996. С. 83-87.

87. Hausch М., Bruckner Н. Occurrence of D-amino acids in fermented foods. // Food Biotechnology. 1990. V. 4. №1. P. 604-607.

88. Bruckner H., Hausch M., Wittner R., Godel H. Chiral amino acid analysis in fermented foods using o-phthaldialdehyde and novel N-acyl-L-cysteines. // Fresenius J. Anal. Chem. 1989. V. 333. №7. P. 775-776.

89. Bruckner H., Westhauser T. Chromatographic determination of D-amino acids as native constituents of vegetables and fruits. // Chromatographia. 1994. V. 39. №7-8. P. 419-426.

90. Liardon R., Hurrell R.F. Amino acid racemization in heated and alkali-treated proteins. // J. Agric. Food Chem. 1983. V. 31. P. 432-437.

91. Bruckner H., Hausch M. Gas chromatographic detection of D-amino acids as common constituents of fermented foods. // Chromatographia. 1989. V. 28. №9-10. P. 487-493.

92. Izquierdo-Pulido M., Marine-Font A., Carmen Vidal-Carou M. Effect of tyrosine on tyramine formation during beer fermentation. // Food Chemistry. 2000. V. 70. №3. P. 329332.

93. Bruckner H., Erbe T. Chromatographic determination of amino acid enantiomers in beers and raw materials used for their manufacture. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 881. №1. P. 8191.

94. Armstrong D.W., Ekborg-Ott K.H. Evaluation of the concentration and enantiomeric purity of selected three amino acids in fermented malt beverages (beers). // Chirality. 1996. V. 8. P. 49-57.

95. Фармакопейная статья предприятия 42-0090173101. Раствор для инфузий «Полиамин». 2001. 11 с.

96. Зеленков В.Н., Заксас Н.П. Химический и микроэлементный состав биологически активной добавки «Долголет» и ее модификаций по макро- и микроэлементному составу. // Микроэлементы в медицине. 2001. Т. 2. №1. С. 52-54.