Образование хитин-глюканового комплекса в процессе онтогенеза Aspergillus nigir V. Nieghem тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.24, кандидат биологических наук Немцев, Дмитрий Викторович

• Немцев, Дмитрий Викторович
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Немцев, Дмитрий Викторович

Оглавление

Введение

Глава I. Обзор литературы

1 Структурные полисахариды клеточной стенки грибов

1.1. Строение и состав клеточной стенки мицелиальных грибов

1.2. Хитин грибов: биосинтез и основные отличия в физико-химических свойствах от хитина ракообразных

1.3. Хитозан грибов

1.4. Глюканы грибов

1.5. Хитин- и хитозанглюкановые комплексы грибов

1.6. Использование хитина, хитозана, хитозанглюканового комплекса

и глюканов в практике

2. Изменения в составе липидов в процессе онтогенеза мицелиальных грибов

2.1. Состав липидов грибов: отличия и сходства с прокариотами и высшими эукариотами

2.2. Изменение в составе липидов грибов в процессе их роста и онтогенеза

2.2.1.Изменения в составе липидов в процессе прорастания спор

2.2.2. Изменения в составе липидов в процессе роста мицелия и

при переходе мицелиальной формы в дрожжевую

3. Изменения в углеводном составе цитозоля клеток грибов в

процессе онтогенеза

Экспериментальная часть

Глава II. Материалы и методы исследования

1. Объекты исследования

2. Методы культивирования микроорганизмов

3. Методы исследования

3.1. Методы электронной микроскопии

3.2. Биохимические методы анализа

3.2.1. Исследование липидного состава грибов

3.2.2. Определение углеводного состава цитозоля клеток грибов

3.2.3. Получение ХГК и анализ его химического состава

Глава III. Результаты исследования и их обсуждение

1. Получение из мицелиальных грибов полисахаридных комплексов и определение степени их деацетилирования

1.1. Изучение морфологии поверхности мицелия A. niger и строение его клеточной стенки

1.2. Разработка метода получения ХГК из биомассы A. niger, полученной целевым назначением

1.3. Разработка метода определения степени деацетилирования полиаминосахаридных комплексов

1.3.1. Условия гидролиза ХГК

1.3.2. Определение ацетата в гидролизатах ХГК методом ГЖХ

1.3.3. Определение содержания N-глюкозамина

1.3.4.0пределение степени деацетилирования ХГК

2. Изменения в содержании хитина и глюкана в ХГК в зависимости от состава питательных сред

3. Образование ХГК и изменения в углеводном и липидном

составе клеток A. niger в процессе онтогенеза

3. 1. Прорастание конидий и факторы, влияющие на этот процесс

3.2. Изменения в составе опорных полисахаридов КС и углеводов цитозоля мицелия в динамике роста A.niger

3.3. Изменения в углеводном составе цитозоля клеток в I и II фазе спорогенеза в связи с образованием ХГК

3.4. Углеводный состав цитозоля зрелых спор в связи с образованием ХГК

3.5. Состав липидов клеток A. niger в процессе онтогенеза в связи с образованием ХГК

3.5.1. Липидный состав спорА. niger, находящихся в состоянии экзогенного покоя

3.5.2. Состав липидов мицелия A. niger

3.6. Корреляции между образованием структурных полисахаридов КС и составом липидов клеток и углеводов цитозоля в процессе

онтогенеза А. тдег

4. Разработка способа получения ХГК из мицелия А. тдег, являющегося отходом при производстве лимонной кислоты

5. Обсуждение результатов исследований

ВЫВОДЫ

Список литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Образование хитин-глюканового комплекса в процессе онтогенеза Aspergillus nigir V. Nieghem»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Клеточная стенка грибов(КС) является поверхностной структурой клетки, выполняющей важную роль в ряде общебиологических процессов ( морфогенез , репродукция, межклеточные взаимодействия, трансдукция сигналов , анабиоз и др.). ( Феофилова, 1974; Lezica, Quesada-Allue, 1990 ) Основными соединениями КС грибов являются полисахариды, которые разделяют на две группы : I -структурные компоненты и И- соединения , заполняющие пространство между ними ( Cabib, et. al., 1988 ; Farkas, 1990 ; Gooday, 1990)

Структурные полисахариды (СП) представлены у высших грибов разветвленными глюканами, имеющими ß-(1 3), ß-(1 ->• 6) -связи , и поли-аминосахаридом хитином. В клетке грибов СП образуют хитин-глюкановый комплекс (ХГК). Не так давно этим биополимерам приписывали только опорную функцию. Позже установили, что СП контролируют процессы морфогенеза, в частности форму клеток грибов, участвуют в регуляции осмотического давления, иммунного ответа, устойчивости к лекарственным веществам, гидрофобности мицелия, фототропизме и даже функционировании липидного бислоя (Феофилова, 1983; Farkas, 1990; Ruiz-Herrera, 1991; Gooday, 1994). В КС грибов СП связаны также ионными и ковалентными связями с липидами, участвуют в регуляции синтеза ряда фосфолипидов ( Machida et.al., 1994) и, возможно, влияют на состав углеводов цитозоля, в частности на уровень трегалозы (Borgia et.al., 1996). Поэтому исследование изменений в содержании и составе ХГК может дать необходимую информацию для понимания процессов морфогенеза, липидообразования и состава углеводов цитозоля мицелия при действии стрессовых факторов.

ХГК заинтересовал в последние годы исследователей и с практических позиций , особенно у представителей порядка Eurotiales ( род Aspergillus ). Из этих грибов получают комплексы глюканов с полиаминоса-харидами , которые представляют интерес для медицины, сельского хозяйства , являются адгезивами и высокоактивными сорбентами ионов радиоактивных и тяжелых металлов (Pennesi, 1993; Maeda et.al., 1995).

Несмотря на важное теоретическое и практическое значение исследования структурных полисахаридов КС аскомицетных грибов, очень мало данных об условиях их культивирования, позволяющих интенсифицировать синтез ХГК, динамике образования этого комплекса и о коррелятивных связях с другими клеточными компонентами в процессе онтогенеза микроми-цетов. В этом плане наибольший интерес представляет исследование взаимосвязи между образованием ХГК, липидным и углеводным составом клеток грибов в связи с новыми данными о том, что активность хитинсинта-зы [Е.С.2.4.1.16] регулируется фосфатидилинозитом (Machida et.al., 1994) и некоторыми углеводами цитозоля грибов. Поэтому в настоящем исследовании были поставлены следующие задачи.

Цель и задачи работы. Основной целью работы было получить новые данные об изменении в составе и содержании структурных компонентов КС Aspergillus niger в процессе онтогенеза. Помимо вклада в наши представления о поверхностной структуре клетки грибов, полученные результаты будут также иметь и практическую значимость, так как позволят контролировать состав полисахаридных комплексов аспергиллов и интенсифицировать синтез этих соединений. Для этого необходимо было :

1) разработать способы получения ХГК из A. niger, выращенного целевым назначением , а также способ определения степени деацети-лирования полисахаридных комплексов;

2) изучить влияние условий культивирования , а именно, различных ингредиентов питательных сред на образование и состав ХГК и степень его деацетилирования;

3) исследовать изменения в составе и количестве ХГК в процессе онтогенеза A. niger. Выявить зависимость между накоплением полисахаридных комплексов и углеводным и липидным составом мицелия (составом углеводов цитозоля , мембранных и нейтральных липидов , а так же их жирно-кислотным составом ) в процессе онтогенеза гриба;

4) разработать способ получения ХГК из мицелия А.тдег, получаемого как отход при производстве лимонной кислоты на Белгородском заводе АО "Цитробел".

Научная новизна. Впервые установлено ,что количество ХГК и его состав , т.е. соотношение в нем глюкана и хитина меняются в процессе онтогенеза А. шдег. Наибольшее количество ХГК определяется в спороносцах и погружено растущем мицелии, находящемся в стадии идиофазы. Обнаружены изменения и в составе структурных полисахаридов КС: наиболее богат глюканами мицелий А. гндег, больше хитина определяется в спороносцах и спорах. Получены новые данные, показывающие , что ингредиенты среды определяют количественный выход ХГК и его состав .Так, наибольшее содержание ХГК можно получить на среде с сахарозой и неорганическим азотом; на этой же среде А.шдег образует больше хитина (0.6 г/л). Напротив, ХГК, обогащенный глюканом, образуется на богатой азотом мучной среде ( выход глюкана -1.13 г/л).

Впервые установлено существование определенной зависимости между составом ХГК и морфологией колоний грибов: если в ХГК содержится больше хитина, то образуются более крупные пеллеты, а увеличение доли глюкана приводит к образованию более рыхлых колоний. Впервые показано, что наибольшее количество полисахаридов определяется в КС клеток, имеющих определенный углеводный и липидный состав , т.е. содержащих больше трегалозы, насыщенных и легкоокисляемых фосфолипидов и триа-цилглицеринов. Исследование коррелятивных связей между составом клетки гриба и накоплением ХГК в процессе онтогенеза показывает, таким образом ,что накопление в КС структурных полисахаридов связано не с активно метаболизирующими клетками грибов, а с таковыми, переходящими в покоящуюся стадию.

Практическое значение. Разработаны оригинальные методы выделения ХГК , являющиеся экологически более безопасными, чем существующие. Методы позволяют получать ХГК из мицелия А. тдег, выращенного как целевым назначением , так и непосредственно в условиях завода ,

как отход при получении лимонной кислоты. Разработан также метод определения степени деацетилирования ХГК. Выявлены условия культивирования А. тдег, позволяющие получать наибольшие выходы ХГК и контролировать его состав . Получено решение на выдачу патента "Способ получения ХГК" ( N 95110112/13(01784).

Апробация работы. По материалам диссертации сделаны доклады: 1) на IV Всероссийской конференции "Производство и применение хитина и хитозана"; 2) на заседании лаборатории "Экспериментальной микологии" Института микробиологии РАН; 3) на заседании кафедры микологии и альгологии МГУ им. М. В. Ломоносова; 4) на научной конференции «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии», Москва, 1996 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано четыре работы. Получено решение на выдачу патента 95110112/13(01784).

Заключение диссертации по теме «Микология», Немцев, Дмитрий Викторович

ВЫВОДЫ

Основные структурные полисахариды КС грибов (хитин и глюкан) образуют комплекс , получивший название хитин-глюканового комплекса (ХГК). В настоящей работе впервые прослежены изменения в содержании и составе ХГК в процессе онтогенеза А.шдег в связи с липидным составом клеток и углеводов их цитозоля и в зависимости от состава сред выращивания.

Установлено , что :

1. На синтетических средах, особенно содержащих в качестве источника азота аммонийные соли и сахарозу или относительно трудно метабо-лизируемые источники углерода, в частности, крахмал образуется наибольшее количество ХГК (21,4% от сухой биомассы ). На этих же средах образуется наибольшее количество хитина ( 0.58 и 0,36 г/л соответственно). На естественной, обогащенной азотом, ( кукурузно-соевой среде ) синтезируется большее количество глюкана по сравнению с хитином ( 0,33 и

0.84 г/л ). На всех исследуемых средах содержание глюкана в ХГК всегда выше, чем хитина, и их соотношение изменяется от 1,4:1 до 2,6:1.

2. В процессе роста мицелия А.шдег на среде №3 оптимальной, для образования ХГК, наибольший выход ХГК отмечается при прекращении ростовых процессов (до 3.0 г/л). При этом в мицелии преобладающим компонентом в ХГК является глюкан и соотношение его и хитина в процессе роста меняется незначительно.

3. Содержание и состав ХГК изменяются в процессе онтогенеза А.п1дег (от споры к мицелию ), при этом наиболее богаты ХГК зрелые спо-роносцы и мицелий в стадии идиофазы.

4. Исследование изменений в углеводном и липидном составе А.шдег позволило установить, что наибольшее содержание ХГК коррелирует с определенным химическим составом клеток, а именно: с наличием насыщенных, трудноокисляемых ФЛ (фосфатидилхолина, сфингомиелина), высоким уровнем ТАГ, содержащих более насыщенные жирные кислоты (С 18: ь С 16:

1, С 20: о)- В составе углеводов таких клеток преобладает трегалоза. Таким образом, высокое содержание ХГК свойственно клеткам, с ослабленной способностью к активному метаболизму.

5. В процессе онтогенеза гриба и при изменении состава сред выращивания не обнаружено изменений в степени деацетилирования ХГК, т. е. клетки А.тдег в отличие от видов порядка Мисога1ез не содержат деацети-лаз и не образуют хитозан.

6. Разработан способ получения ХГК из мицелия А. Ыдег, выращенного целевым назначением и в условиях завода, а также методика определения СД полисахаридного комплекса. На способ получения ХГК имеется разрешение на выдачу патента РФ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Немцев, Дмитрий Викторович, 1998 год

Список литературы.

1. Аринушкина Е.В. Руководство по химическому анализу почв. М.: Изд-во МГУ, 1961, С. 111.

2. Беккер М.Е., Дамберг Б.Э., Раппопорт А.И. Анабиоз микроорганизмов. Рига: «Зинанте», 1981, 217 С.

3. Бробст K.M. Газохроматографическая хроматография триметилсислиль-ных производных Сахаров. - В кн. Методы исследования углеводов. Под. ред. А.Я. Хорлина. - М. : Мир, 1975,- 445С.

4. Бирюзова В.И., Боровягин В.А., Гилев В.П., Киселев И.А., Тихоненко A.C., Ченцов Ю.С. Электронномикроскопические методы исследования биологических объектов. М.: Изд-во АН СССР, 1963, 204 С.

5. Быков В.П. Перспективы организации в рыбной отрасли промышленного производства хитина и хитозана// Тезисы 4-й Всероссийской конференции, М.: Изд-во ВНИРО, 1995, С. 3-5.

6. Быков В. П. Производство и применение хитина и хитозана, // Тезисы IV Всероссийской конференции. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. С.3-5.

7. Волков В .Я.,. Сахаров Б.В., Шапкин В.Д., Федюкина Г.Н., Кашуба A.A. О природе устойчивости клеток дрожжей к выслушиванию // Микробиология, 1992, Т. 61, № 2, С. 214-230.

8. Глазунов В. П., Одинаков ИК- спектрометрическое определение степени дезацетилирования хитозана // Биоорганическая химия, 1995, Т. 21, № 11, С. 881-884

9. Горшкова Т.А. Метаболизм полисахаридов растительной клеточной стенки// Автореф. дисс.... докт. биол. наук., Москва 1997, 47с.

10. Гончарова О.В., Конова И.В., Бирюзова В.И. Биохимические и структурные особенности Blakeslea trispora, адаптивные к воздействию среды // Микробиология, 1996, Т. 65, № 1, С. 48-54.

11. Грязнова М.В. Образование липидов и экзогенный покой клеток в цикле развития мукорового гриба С. japónica. //Автореф. дисс....канд. биол. наук, 1988, 24 С.

12. Дедюхина Э.Г. Изучение биосинтеза липидов у каротинообразующего гриба Blakeslea trispora //Дисс......канд. биол. наук, 1969, 243 С.

13. Дубинская, А. Е. Добротворский Применение хитина и его производных в фармацее// Химико-фармац. журнал, 1991, Т. 25, № 8 , С. 623628

14. Зайцева Г.Н. Афанасьева Т.П. Количественное определение углеводов методом нисходящей хроматографии на бумаге. - Биохимия, 1957, т. 22, №6, С. 1037- 1042.

15. Ерошин В. К., Дедюхина Э. Г., Чистякова Т. И., Телифонова В. П. , Бо-таст Р. Дж., Исследование синтеза арахидоновой кислоты грибами рода Mortierella: микробиологический метод селекции продуцентов арахидоновой кислоты // Микробиология, 1996, т. 65, №1. С.31-36.

16. Ильинская Л.Д., Озерецковская О.Л., Биохимические аспекты индуцирования устойчивости и восприятия растений. // Итоги науки и техники, 1991, т. 7, С.4-103.

17. Кайминь И.Ф., Озолиня Г. // Производство и применение хитина и хито-зана. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. С. 55-56.

18. Кайминь И. Ф., Динамантс X. И. Хитозановые бумаги в медицинской практике и в стоматологии // В. сб.: Производство и применение хитина и хитозана , 4-я Всероссийская конференция , 1995, Изд.-во ВНИРО, С. 54-55

19. Конова И. В. Характеристики липидов актином и цетов. 1. Содержание и состав липидных фракций.// Биол. науки, 1983 , №8. С.5-17.

20. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран, Л., 1981, 220 с.

21. Кузнецова Л.С., Полотебнова М.В. Изменения физико-химических свойств липидов в процессе роста Cunninghamella japónica // Биол. Науки, 1987, №2, С. 73-79.

22. Лиепиньш Г.К., Дунце М. Э. Сырье и питательные субстраты для промышленной биотехнологии. Рига : Зинатне, 1986. 156с.

23. Лилли В., Барнет Г. Физиология грибов. М.: Изд-во иностр. литерат., 1953. С.376.

24. Михайлова М. В., Феофилова Е. П., Розанцев Э. Г., Бурлакова Е. Б. Влияние циклогексимида и антимицина А на содержание фосфолипи-дов и нейтральных липидов Cunninghamella japónica // Микробиология, 1986, т. 53, в.6„ С.816-820.

25. Набауллин А. А., Строилова Ф. А., Ванюшкин В. А. Применение хитина и хитозана в сельском хозяйстве // В. сб.: Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования , 3-я Всесоюзная конференция, Москва, 1991, Изд.-во ВНИРО, С.75-77.

26. Накагаки М. Физическая химия мембран, М: «Мир», 1991, 253 С.

27. Панькина О. И., Конова И. В. Жирные кислоты фитофторовых грибов при их росте на различных средах// Микробиология, 1996, т. 65, №2. С.177-181.

28. Терентьева О.Ф. К вопросу установления режима подготовки мелассы для сбраживания в лимонную кислоту II Сб. ст. под ред. Варельджана Г.А., Л.: ЦБТИ, 1959, С. 14-21.

29. Терешина В.М.. Полотебнова М.В. Феофилова Е.П. Активность трега-лазы спор дикого штамма Cunninghamella japónica и мутантов с пониженной способностью к синтезу трегалозы// Микробиол., 1987, Т.56, В.5, С 753-758.

30. Сафронова Т. М., Быков В. П., Быкова В. М., Кривошеина Л. И. Сравнительная оценка требований нормативной документации к хитину и хи-тозану // В. сб.: Производство и применение хитина и хитозана , 4-я Всероссийская конференция , 1995, Изд. -во ВНИРО, С.

31. Сафронова Т.М. Быков В.П. Быкова В.М. Кривошеина Л.И. и др.// Производство и применение хитина и хитозана. М.: ВНИРО, 1995. С. 14-17.

32. Тесленко А.Я., Попов В.Г. // Хитин и его производные в биотехнологии. М.: Изд-во ОНТИ-ТЭИмикробиопром, Обзорная информация. Серия 5, выпуск З.-М., 1982, С. 1-44

33. Тесленко А. Я. Купцова Н. И. Тирфанова Т.Ф. Шестова Н.П. Медведев Ю.В. Оценка флоккулирующей способности хитозанов, полученных из различных видов хитина// Биотехнология, 1986, №2, С. 80-86.

34. Тесленко А. Я., Воеводина И.Н., Николаева C.B., Юрков Н. В., Использование хитинсодержащих сорбентов для решения экологических задач // В. сб.: Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования , 3-я Всесоюзная конференция, Москва, 1991, Изд.-во ВНИРО, С. 99-103

35. Тесленко А.Я., Воеводина И.Н., Николаева C.B. и др.// Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов-криля и пути их использования. М.: Изд-во ВНИРО, 1992. С.99-101.

36. Торланова Б. О., Фунтикова Н. С., Конова И. В., Бабанова Н. К., Синтез мукоровым грибом комплекса липидов, содержащих у- линолевую кислоту и каротиноиды в различных условиях культивирования // Микробиология, 1995, т. 64, №4, С. 492-497.

37. Тютерев С. А., Якубчик М. С., Тарлаковский С. А. Хитозан - биологически активное, экологически безопасное средство защиты растений, повышающее устойчивость сельскохозяйственных культур к заболеваниям // В. сб.: Производство и применение хитина и хитозана , 4-я Всероссийская конференция , 1995, Изд.-во ВНИРО, С. 66-69

38. Тютерев С.Л., Якубчик М.С., Тарлаковский С.А. // Производство и применение хитина и хитозана. М.: Изд-во ВНИРО, 1995. С.55-57.

39. Феофилова Е.П., Казаков Г.А. Способ получения хитина. A.C.№545105. 1976.

40. Феофилова Е. П., Тарасова Р. Е., Казаков Г. А., Иванова Н. И., Цветко-ва Г. Е., Терешина В. М., // Способ получения хитина: A.c. №628700, 1978.

41. Феофилова Е.П. Липиды мицелиальных грибов и перспективы развития микробной биотехнологии. // Биол. Науки, 1983, № 8. С.5-17.

42. Феофилова Е.П. Клеточная стенка грибов. Изд.- во « Наука», 1983, С. 248.

43. Феофилова Е.П. Липиды мицелиальных грибов и перспективы развития микробной биотехнологии. // Биол. Науки, 1983, № 8. С.5-17.

44. Феофилова Е. П. Биологические функции и практическое использование хитина //Прикп. биохимия и микробиология. 1984. Т. 20. №2. С. 147160.

45. Феофилова Е. П., Широкова Е. А. Сравнительное исследование состава липидов конидий и мицелия грибов рода Pénicillium // Микробиология, 1986, № 1, С. 60-65.

46. Феофилова Е. П. Биохимические особенности покоящихся стадий в цикле развития мукоровых грибов// Торможение жизнедеятельности клеток, под редакцией M. Е. Бекера, Рига, «Зинатне», 1987, с. 172-180.

47. Феофилова Е.П., Грязнова М.В., Садовова Н.В. Способность маннита и трегалозы повышать устойчивость мицелиальных грибов к температурным воздействиям // Прикл. биохим. и микробиол., 1989, Т. 25, № 5, С. 699-706.

48. Феофилова Е.П. Липиды мицелиальных грибов и перспективы развития микробной олеобиотехнологии: I. Липиды мицелиальных грибов // Биол. Науки, 1990, № 11, С. 5-26.

49. Феофилова Е.П., Марьин А.П., Шляпников Ю.А. Новый высокоактивный сорбент для очистки воды от ионов тяжелых и радиоактивных элементов //В сб. «Фундаментальные науки - народному хозяйству», 1990, М.: Наука, С. 270-271.

50. Феофилова Е.П., Михайлова М.В., Шуйская Г.Г., Терешина, Гарибова Л.В. Изменения в липидном и углеводородном составе клеток грибов в процессе онтогенеза и использование этих данных в хемотаксономии // Микология и фитопатология, 1991, т. 25, №4, С. 340-359.

51. Феофилова Е. П. Липиды мицелиальных грибов // Биол., науки, 1991, №1, С. 5-21.

52. Феофилова Е.П. Трегалоза, стресс и анабиоз // Микробиология, 1992, Т. 62, № 5, С. 741-755.

53. Феофилова Е.П., Терешина В.М., Горнова И.Б. Изменения в углеводном составе клеток грибов в связи с адаптацией к температурному стрессу//Микробиология, 1994, Т. 63, № 3, С. 792-798.

54. Феофилова Е.П., Марьин А.П., Терешина В.М. Сорбция ионов свинца A. niger. Влияние предварительной обработки мицелия // Прикл. Био-хим. и Микробиология, 1994, Т. 30, № 1, С. 149-155.

55. Феофилова Е.П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование // Прикл. Биохим. и Микробиология , 1994, Т. 30, № 2, С. 187-196.

56. Феофилова Е. П., Терешина В. М., Меморская А. С. Хитин мицелиаль-ных грибов: методы выделения, идентификации и физико-химические свойства // Микробиология . 1995. Т. 64. №1. С.27-31.

57. Adochi Y., Ohno N., Oksawa М., Oikama S., Yadomae Т. // Change of biological Activities of p-(1 -» 3)-D-glucan from Grifóla frondosa upon Molecular weight reduction by heat treatment // Chem. Pharm. Bull., 1990, V. 38, N 2, P. 447-481

58. Aruchami M., Sundara-Rajula G., Gowry N. Destribution of deacetylase in arthropoda // In: Chitin in nature and technology, Eds: Muzzarelli R., Jeu-niaux C., Gooday G.W., Plenum Press, New York, 1986, P. 263-265.

59. Balassa L. L. Wound healing composition // Patent N 1252373, 1971, England

60. Balassa L. L. Use of Chitin for promoting wounds healing// Patent N 3632754, US

61. Bartnicki-Garcia S. Cell Wall chemistry, morphogenesis and taxonomy of fungi//Ann. Rev. Microbiol., 1968, T. 22, P. 87-108

62. Bartnicki-Garcia S., Bracker С. E. Unique properties of chitosan //

63. FEMS Symp. N 27, 1984, Ed. C. Nombela, Microbial cell wall Synthesis and autolysis, Elsevier, P. 328

64. Bartnicki-Garcia S. The biochemical cytology of Chitin and Chitosan synthesis in fungi II Proc. from 4-th Int. Conf. on Chitin and Chitosan, Trondheim,

Noeway, August 22-24 1988, Eds. Skjar-Brack G., Authousea T. Saedfod P., London, N.-Y., 1989. P.23

65. Bartnicki-Garcia S., Bartnicki D.D., Gierz G., Lopez-Fanco R., Bracker C. E., Evidence that Spitzenkorper behavior determines the shape of a fungal Hy-pha : a test of the Hyphoid model // Exp. Mycol., 1995, v. 19, P. 153-159.

66. Bartnicki-Garcia S., Bartnicki D.D., Gierz G. Determination of fungal cell wall morphology: the vesicle supply center/ Can. J. Bot., 1995, Suppl., v.73, 16, P. 373-378.

67. Beever R.E., Laracy E.P. Osmotic adjustment in the filamentous fungus Aspergillus nidulans // J. Bacterid., 1986, V. 168, P. 1358-1365.

68. Bertand W.S., Morice J.M., Russel D.W., Taylor A. The spore surface in Pi-thomyces chartarum // J. Gen. Microbiol., 1963, V. 32, P. 383-395.

69. Bidochka M.J., Low N.H., Khachatourias G.G. // Carbohydrate storage in the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana //Appl. Environ. Microbiol., 1990, V. 56, P. 3186-3190.

70. Boas N.F. Method for determination hexosamines in tissus. - J. Biol. Chem., 1953, V.203, №2, P. 553-563.

71. Borgia P.T., Miso Y.H. Dodge C.Z. The orla gene from Aspergillus nidulans encodes a trehalose-6-phosphate phosphatase necessary fo normal growth and chitin synthesis at elevated temperatures// Molecular Microbiology, 1996, v.20, P. 1287-1296.

72. Braconnot H. Sur la nature des chanpignons //Ann. Chi. Phys., 1811, V. 79,№ 2,P. 365-304.

73. Brossignac P., Chim. Ind. Genie. Chim., 1968, v.99, P.1241-1247.

74. Cabib E. The synthesis and degradation of chitin //Adv. Enzymol, 1987, V. 59, P. 59-100.

75. Cabib E. Bowers B., Sburlati, S.J. Silverman. Fungal cell Wall Synthesis: The construction of a biological structure// Microbiol. Sci 1988, V.5, N 12, P. 370-375.

76. Carpenter J.F, Crowe J.H. Modes of stabilization of a protein by organic solutes during dessication // Cryobiology, 1988, V. 25, P. 459-470.

77. Carver T.L.W., Thomas B.J., Francis S.A. Germination and the production of extracellular material Erysiphe graminis and Erysiphe pisi // Sixth. Int. Fungal spore Conference, 1996, Konstanz, P. 30.

78. Cerda-Olmedo S., Lipson E.D. Phycomycetes, Cold Spring Harbor Laboratory, 1987, P.247-279.

79. Chathopadnyay P., Banerjee S.K., Seen K., Lipid profiles of A. niger and unsaturated fatty acid auxotroph, UFA 2 // Can. J. Microbiol., 1985, V. 31, P.352-355.

80. Chopra A., Khuller G. K. Lipid metabolism in fungi // CRC, Crit. Rev. Microbiol., 1985, v.11, is.3. P.209-271.

81. Chung L. Y. Schmitd R. J. Hamlin P.F., Sagar B. F., Andrews A.M. Turner T. Biocompartability of potential wound management prodacts: fungal mycelial as a sourse of chitin/ chitosan and their effect on the proliferation of human F1000 fibroblast in culture// J. of Biomedical materials Res., 1994, V.28, P.463-469.

82. Clegg J.S., Seitz P., Seitz W., Hazdewood C.F. Cellular responses to extreme water stress: the water-replacement hypothesis // Cryobiology, 1982, V. 19, P. 306-316.

83. Dahlberg K.R. Ethen J. L. van. Physiology and biochemistry of fungal Sporulation//Ann. Rev. Phytopathol., 1982, v.20, P.281-301.

84. Deising H., Haug M., Heiler S. Differentiation and cell wall degrading enzymes in the obligately biotrophic rust fungus Uromyces viciae-fabae // Can. J. Bot., 1995, V. 73 (Suppl. 1), P. 624-631.

85. Demleither S., Krans J., Franz G. Synthesis and antitutor activity of curdlan and licheman branched at C-611 Carbohidr. Res., 1992, V. 226, N2, P. 239245

86. De Vries O. M. H„ Fekkes M. P., Wosten H. A. B., Wessels J. G. H. Insoluble hydrophobin complex in the walls of Schyzophyllum commune and other filamentous fungi//Arch. Microbiology, 1993, V. 159, P. 330-335

87. Domszy J. G., Roberts G. A. F. Evaluation of infrared spectroscopic techniques for analyzing chitosan // Macromol. Chem. 1985. V.185. P. 16711677.

88. Dornenberg H., Knorr D. Strategies for the enprovement of secondary metabolite production in plant cell culture 11 Enz. Microb. Technol., 1955, V. 17, N 8, P. 674-684

89. Dubois M., Gilles K.A., Hamilton J.K., Reber P.A., Smith F. Colorimetric method for the determination of sugars and related substances.-Anaiit.Chem., 1956., V.28, N3, P.350-356.

90. Farkas V. Fungal Cell Wall: Their Structure, Biosynthesis and Biotechno-logical Aspects//Acta Biotechnol., 1990, V. 10, N3, P. 225-238.

91. Fiema J.//J. Basic Microbiol., 1993, V. 33, N 1, P. 1-3.

92. Folch I., Jees M., Stanley G.H.S. A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.- J.Biol. Chem., 1957., V.226, P.497.

93. Fukamizo T., Ohkawa T, Sonoda K., Toyoda H., et al. Chitinous Components of Cell Wall of Fusarium oxysporum // Biosci. Biotech. Biochem. 1992, V. 56, N 10, P. 1632-1633

94. Gooday G. W. Chitin metabolism: a target for antifungal and antiparasitic drugs// Molecular aspect of Chemother. (Ed. E. Borowski, D. Shugar). Pergamon Press, New York., 1990, P. 175-185.

95. Hallsworth J.E., Magun N. Manipulation of intracellular glycerol and erythritol enhances germination of conidia at low water availability // Microbiology, 1995, V. 141, P. 1109-1115.

96. Hardwiger L. A, Fristeusky B., Riggleman R. C. Chitosan, a natural regulator in plant-fungal pathogen interaction, increases crop yields // In: Chitin, Chitosan and related enzymes, Ed. J.P. Zikkakes, Acad. Press, , 1984, P. 291-302.

97. Horst M.N. Lipid-linked intermediate in crustacean chitin synthesis // In: Chitin in nature and technology, Eds: Muzzarelli R, Jeuniaux C, Gooday G.W., Plenum Press, New York, 1986, P. 583.

98. Howard R.J., Ferrari M.A., Bourett T.M. Three distinct extracellular matrices in the development of infection structures by Magnaporthe grisea // Sixth Int. Fungal spore Conference, 1996, Konstanz, P. 45.

99. Johannes H. Beitrage zuz Vitalfarbung von Pilzmyzelium // Arch. Mikrobiol., 1950, V.15, S.13.

100. Kates M. Tecniques of lipidology isolation and Identification of lipids.- Elsevier- N.Y.- Oxford.-1986

101. Kifune K., Yamaguchi Y., Kishimoto S. Wound healing effect of chitin surgical dressing //Trans. Soc. Biomat. 1988, V. 11, P. 216

102. Kollar R., Petrakova E., Ashwell G., Robbins., Cabib E., Architecture of the yeast cell wall, the linkage between Chitin and p-(1 -> 3)-glucan // J. Biol. Chem, 1995, V. 270, N 3, P. 1170-1178

103. Kreger D.B. Observations on cell wall of yeast and other fungi by X-ray di-fractions and solubility tests// Biochim. Biophys. Acta., 1954, V.13, № 1, P. 1-9.

104. Labischinski H., Naumann D. The three-dimensional architecture of Bacterial peptidoglycan: a comparison with the conformational features of Chitin // Chitin and Chitosan. Eds. Hirano S., Fokura S., Sapporo, 1982, P.93-

105. Larriba G., Morales M., Ruiz-Herrera J. Biosynthesis D-glucan microfibriles by cell-free extracts from Saccharomyces cerevisiae // J. Gen. Microbiol., 1981. V. 129, P. 375-385.

106. Leal J.A., Guerrero C., Gomez-Miranda B., Prieto A., Bernabe M. Chemical and structural similarities in wall polysaccharides of some Penicillium, Eu-penicillium and Aspergillus species // FEMS Microbiol. Lett., 1992, V. 90, P. 165-168.

107. Lezica R. P., Quesada-Allue L. Chitin // Methods in plant Biochemistry, 1990, V. 2, P. 443-471.

108. Lopez M.C., Nicaud J.-V., Skinner H.B., Vergnolle C. A phosphatidylinositol / phosphatidylcholine transfer protein is required for differentiation of dimorphic yeast Yarrowia lipolitica from the yeast to the mycelial form // Cell Biology, 1994, V. 124, P. 113-127.

109. Lopez-Franco R., Bartnicki-Garcia S., Bracker C., Pulsed grown of fungal hyphal tips// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, v. 91 P. 22228-32.

110. Machida S., Todoriki S., Hamamatsu S., Saito M. Phospholipid requirement of membrane-bound chitin synthase from Absidia glauca // FEMS Microbiol. Lett., 1994, V. 115, P. 235-240.

111. Maezaki Y., Tsuji K., Nakagava Y., Kawai Y., Akimoto M., Tsugita T., Takekawa W., Terada A, Hara H., Mitsuoka T. Hypocholesterolemic Effect of Chitosan in Adult Males // Biosci. Biotech. Biochem. 1993. V.57. №9. P. 1439-1444.

112. Miya M., Iwamoto R, Yoshikawa S., Mima S. IR-spectroscopic determination of CONH content in highly deacylated chitosan. Int. J. Biol. Macromol., 1980, V.2, P. 323-324.

113. Miyoshi H., Shimura K., Watanabe K., Onodera K. Characterization of some fungal Chitosans//Biosci. Biotech. Biochem., 1992, V.56, N12, P. 1901-1905Namura U. Plant-growth stimulant made *rom chitosan// Jap. Chem. Week, 1988, V. 29, N. 1495, P.1.

114. Muzzarelli R.A.A. Chitin. London; N-Y.: Pergamon Press, 1977, 375 P.

115. Muzzarelli R. Chitosan-Glucan complex und Verfahren zu diesen Herstellung. Patent FRG, COSB 37/08. №293802. 1979.

116. Muzzarelli R., Chitosan-glucan complex, method for its production and uses // US Patent, 1981, N 4.282.351.

117. Muzzarelli R, Chitosan-glucan complex, method for its production and uses // US Patent, 1983, N 4.368.322.

118. Muzzarelli R., Biggini G, Pugnaloni A., Filippini D., Baldassarre V. Reconstruction of tissue with chitosan II Biomaterials, 1989, V. 10, P. 598-603.

119. Muzzarelli R., Tanfani F., Scappini G. Chelating, film-forming and coagulating ability of chitosan-glucan complex ofrom A. niger industrial wastes // Biotech. Bioeng., 1980, V. 22, P. 885.

120. Nakata K., Hasegava J., Onamura K. Analysis of sensitivity to high temperature of Torulaspora gebruckii N 3110// Biosci. Biochem., 1995, v, 59, N6, P.990-994.

121. Neygebauer W. A. Determination of chitin-chitosan with picric acid. Carbo-hyd. Res., 1989, V. 189, P. 363-367.

122. Niyochi H., Shimuda R., Watanabe K., Onodera K. Characterisation of some fungal chitosan // Biosci. Biotech. Biochem., 1992, V. 56, N. 12, P. 19011905.

123. Parks L.W., Weete L.D., Fungal sterols //Phisiology and Biochemistry of Sterols, Eds. Patterson G.W., Nes W.P., American oil chemistry's Society, Champaign, Illinois, 1989, P.,158-170 .

124. Park O., Miyoshi H., Watanabe J., Endo J. Method for preparing Chitosan// European Patent, 1991, № 0531991A2.

125. Peck r.l. The lipid of fungi with special reference to pathogenic fungi // In: Biology of pathogenic fungi, N.Y.: Ronald press, 1874, P. 44-51.

126. Peter M.G. Structural studies on sclerotized insect cuticle // In: Chitin in nature and technology, Eds: Muzzarelli R., Jeuniaux C., Gooday G.W., Plenum Press, New York, 1986, P. 21-28.

127. Pfyffer G.E., Rast D.M. The polyol pattern of some fungi not hitherto investigated for sygar alcohols // Exp. Mycol., 1980, V. 4, P. 160-170.

128. Rajulu G.S., Aruchami M. Gowre N. Natural deacetylation of Chitin to Chitosan in the abdominal cuticle of the Physogastric Queen of Macrotermes es-therae// Proc. from 4-th Int. Conf. On Chitin and Chitosan, Trondeim, Norway, August 22-24 1988, Eds. Sklar-Brack G. Authousea T. Saedfod P., London, N.-Y., 1989. P. 23

129. Radwan S. S., Sources of C2o - polyunsuturated fatty acids for biotechnological use//Appl. Microbiol. Biotechnol., 1991, v., 35, P421-430.

130. Radwan S. S., Solimán A. N. Arachidonic acid from fungi utilizing fatty acids with shorter chains as sole sources of carbon and energy // J. Gen. Microbiol., 1988, v.34, P.387-383.

131. Ratledge C. Microbial oils and fats: an assessment of their commercial potential// Progress Industrial Microbiol., 1983, V16, P. 119-206

132. Reynolds E.S., The use of lead citrate at high on as an electron opaque in electron microscopy//J. Cell. Biol., 1963, V. 17., N. 1., P. 205-212.

133. Rezanko T., Mures P. Unusual and very long-chain fatty acids, produced by Basidiomycetes// J. Chromatography, 1987, v.409, p.390-395.

134. Ruiz-Herrera J. Biosynthesis of p-glucans in fungi//Antoine van Leeuwen-hoeck, 1991, V.60, N 1, P. 73-81.

135. Russel N.J. Cold adaptation of microorganisms // Phyl. Trans. R. Ssoc. Lond., 1990, V. 326, P. 595-611.

136. Sannan T. Kurita K, Fwakura Y. Macromol. Chem. 1976, V.177, P. 35893600.

137. Siestsma J. H., Wessels J. Y. H., Chemical analysis of the hyphal wall of Schizophylum commune // Biochem. et Biophys. Acta, 1977, V. 196, P. 225239.

138. Shimanara K., Takigneki Y, Kobayshi T. Screening of Mucoraceae strains suitable for chitosan production // Proc. from 4-th Int. Conf. on Chitin and Chitosan, Trondheim, Noeway, August 22-24 1988, Eds. Skjar-Brack G., Authousea T. Saedfod P., London, N.-Y., 1989. P.171

139. Show G. The chemistry of sporopollenin// In: Sporopolenin Eds. J. Bruks, P.K Jant, M.D. Muir, J. Shaw, Acad. Press, 1971, P.305-350.

140. Sietsma J. H, Din A. B., Ziv V, Sjoilema K.A, Yarden O, The localization of chitin Synthase in membranous vesicles (Chitosomes) in Neurospora crassa// Microbiology UK, 1996, v. 142, P.1591-1596.

141. Somogyi M, J. Biol. Chem. 1945., V.160, P. 69.

142. Suntari M. Effect of growth temperature on lipid fatty acids of four fungi (A. niger, N. crassa, P. chrysogenum, T. reesei //Arch. Microbiol, 1995, V. 164, P. 212-216.

143. Sussman A. S, Halvorson H.O. Spores. Their dormancy and germination, 1966, N.Y.-London: Harperand How, 215 p.

144. Takegi M. Kadawaki K. Flocculant Production by Paecilomyces sp. Taxo-nomic studies and Culture Conditions for Production // Agr. Biol. Chem, 1985, V. 49, N 11, P. 3151-3157

145. Terayama H. Method of Colloid Titration (a new Titration between Polimer Ions). J. Polymer. Sei. 1952, V.8, N.2, P.243-253.

146. Tsipos S, Martinou A, Christodoulidou A, Kafetzopoulos D, Tzanodaska-laki M, Bouriotis V. Enzymatic deacetylations of Chitin and Chitosan //Ab-

stract Book EUCHIS'95. V.1st Int. Conf. of the European Chitin Soc./ Brest; France; 1995. P.7.

147. Tulloch A.P., Craig B.M., Ledingham G.A. The oil of wheat stem rust uredo-spores: the isolation of cis-9,10-epoxyoctadecanoic acid // Can. J. Microbiol., 1959, V. 5, P. 485-491.

148. Tulloch A.P., Ledingham G.A. The component fatty acids of oils found in spores of plant rust and other fungi // Can. J. Microbiol., 1960, V. 6, P. 425428.

149. Weber D.J., Hess W.M. Diverse spores of fungi// American Soc. for Microbiology, 1975, P.97-108.

150. Weete J. D. Structure and Function of Sterols in fungi// Adv. Lipid Res., 1989, v. 23, P.115-167.

151. Velichkov A. D., Nikolova S.F., Veljanov D.K. Amino acid content in four samples of Chitosan-glucan complex// Доклады Болг. АН, 1990, Т. 43, № 10, С. 69-71

152. Vermeulen С.АА., Wessels J.G.U. Chitin biosynthesis by a fungal membrane preparation. Evidence for a transient non-crystalline state of chitin // Eur. J. Biochem., 1986, V.15558, № 1, P.411-415.

153. Wessels J. G. H. Siestsma J. H. Encyclopedia of Plant Physiology, New series, Eds. Tanner W., Lewus F. A., V.138., Berlin: Springer Verlag, 1981,

P.382-394

154. Yamada M., Miyazaki K. Ultrastructure and chemical analyses of cell wall of Pythium debaryanum// Jap. J. Microbiol., 1976, V. 20, N 2, P. 83-91.

155. Yokoigawa K., Muzakami Y., Kawai H. Trehalase activity and trehalose content in freeze-tolerant yeast Torulaspora delbrueckii // Biosci. Biotech. Biochem., 1995, V. 59, №. 11, P. 2143-2145.

156. Yokyama Т., Murakami E., Hacagawa K. Microbial Production of Polyhexo-samine // Proc. from 4-th Int. Conf. on Chitin and Chitosan, Trondheim, Noeway, August 22-24 1988, Eds. Skjak-Braek G., Anthhousea T. Saedfod P., London, N.-Y., 1989. P. 333-342.

157. Zlotnik H, M. P. Fernander, B. Bowers, E. Cabib Saccharomyces cerevisiae m- mannoproteins form an External Cell Wall Layer that determines wall porosity//J. Bacteriol. 1984. V. 159, N. 3, P. 1018-1026