Обоснование и разработка технологии комплексной переработки Cucumaria frondosa Баренцева моря тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.18.04, кандидат технических наук Толкачева, Виктория Федоровна

• Толкачева, Виктория Федоровна
• кандидат технических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат технических наук Толкачева, Виктория Федоровна

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Особенности биологии, состояние запасов, морфология 10 Cucumaría frondosa Баренцева моря

1.2. Характеристика биологически активных веществ 17 голотурий

1.3. Состояние исследований в области переработки 31 голотурий

II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Объекты и методы исследования

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Размерно-массовый и химический состав частей тела Cucumaría frondosa (общий химический состав, фракционный, жирнокислотный состав липидов, аминокислотный состав белка, содержание жирорастворимых витаминов, фосфора, активность ферментов)

2.2.2. Определение допустимых сроков хранения сырья

2.2.3. Токсиколого-гигиенические сследования сырья и 46 продукции.

2.2.4. Методы выделения биологически активных веществ

из Cucumaría frondosa

2.2.5. Выявление дозового интервала иммуномодулирующей и противоопухолевой активности комплекса гликозидов

2.2.6. Разработка НТД на сырец, кулинарную и консервированную продукцию, комплекс каротиноидов и

комплекс фосфолипидов с сапонинами

Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Характеристика размерно-массового, химического состава, пищевой ценности Cucumaria frondosa

Баренцева моря

3.2. Медико-биологические исследования Cucumaria frondosa для решения вопроса об ее использования на пищевые

цели, в лечебном и профилактическом питании

3.3. Изучение допустимых сроков хранения мороженого полуфабриката из Cucumaria frondosa

3.4. Обоснование и разработка технологии комплексной переработки Cucumaria frondosa

3.4.1. Совершенствование технологии кулинарной продукции

из кожно-мышечного мешка кукумарии

3.4.2. Разработка технологии изготовления "Масла икорного из кукумарии" и установление сроков хранения

данного вида продукции

3.4.3. Обоснование рецептуры приготовления стерилизованных консервов из Cucumaria frondosa

3.4.4. Оценка противоопухолевой и иммуномодулирующей активности сапонинов из Cucumaria frondosa

3.4.5. Медико-биологические исследования комплекса фосфолипидов с сапонинами и комплекса каротиноидов

для решения вопроса использования их на пищевые цели

3.4.6. Разработка технологии получения комплекса фосфолипидов с сапонинами, комплекса каротиноидов

и белкового концентрата из морского огурца

3.4.7. Исследованиие физико-химических свойств комплекса фосфолипидов с сапонинами

3.4.8. Исследования физико-химических свойств комплекса каротиноидов

3.4.9. Характеристика белкового концентрата из

Cucumaria frondosa

3.4.10. Обоснование использования пищевой продукции из Cucumaria frondosa Баренцева моря в качестве добавок в лечебном и профилактическом питании

4. ВЫВОДЫ

5. Список использованной литературы 115 в. Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Обоснование и разработка технологии комплексной переработки Cucumaria frondosa Баренцева моря»

ВВЕДЕНИЕ

Современный уровень развития науки и техники определил более углубленное изучение сырьевых ресурсов, в том числе рыбы и других гидробионтов. До недавнего времени гидробионты рассматривались только как сырье для производства традиционных видов пищевой, кормовой и технической продукции (Кизеветтер, 1953; 1962; 1976; Стукалова, 1984; Акулин, Леванидов, 1985). Однако, результаты многочисленных исследований показали, что они являются уникальными источниками разнообразных биологически активных веществ (БАВ) (Nigrelli, 1952; Yamanouchi, 1955; Matsuno, Ito, 1971; Анисимов др., 1980; Слуцкая, 1975; Ажгихин и др., 1978; Ржавская, 1978; Kitagava et al, 1978; Эпштейн и др., 1980; Левин, 1982; Стукалова, 1984; Сафронова и др., 1985; Еляков, Стоник, 1986; Андреева др., 1987; Савватеева, 1987; Калинин и др., 1994; Семенов, Одинцов, 1994; Fenical, 1994; Skyak-Brak, 1994; Ohizume, 1996 ; Lineo, Hayakawa, 1996; Odukoya et al, 1996).

Многие из них могут служить сырьем для получения ценного лечебно-профилактического питания, фармацевтической и косметической продукции, стимуляторов продуктивности при выращивании сельскохозяйственных животных, птиц, объектов аквакультуры, повышения урожайности сельскохозяйственных культур и др. При этом, сырьем для их получения являются, главным образом, гидробионты, не используемые пока в народном хозяйстве, а так же отходы при их переработке.

С другой стороны, в связи с существующими ограничениями районов российского промысла, обусловленных современными правилами Международного рыболовства, изыскание дополнительных источников морских ресурсов приобретает особую актуальность.

В решении вопросов, связанных с использованием в пищу новых

промысловых обитателей гидросферы, ведущая роль отводится изучению выхода пищевого и непищевого сырья, содержанию основных питательных веществ, определению количества и природы биологически активных веществ (липидов, витаминов и др.), исследованию концентрации и локализации тяжелых металлов и хлорорганических соединений. При условии экологической чистоты нового вида сырья проводятся гигиенические исследования, позволяющие исключить возможную опасность нового объекта для организма человека (Левинтон и др., 1981, 1982; Доулл, 1986; Покровский, 1989; FAO\WHO, 1991).

Проблема создания лечебного и профилактического питания для человека в условиях ухудшения экологической ситуации и, как следствие, увеличение заболеваемости сердечно-сосудистой системы, онкологическими заболеваниями, иммунодефицитом, приобретает все большую остроту и требует скорейшего решения. Приоритет при таких разработках отдается натуральному сырью.

С давних времен известны лечебные свойства некоторых морских организмов. Один из них - голотурия или морской огурец, основной промысел которого сосредоточен в Приморье, в водах Индо-Малай-ского архипелага, островов тихого океана, на Филиппинах, у берегов Китая и Японии.

В Баренцевом море массовым видом голотурий является Cucumaria frondosa. Результаты морских экспедиций ПИНРО, Севрыб-промразведки, ММБИ свидетельствуют о значительных скоплениях кукумарии в различных районах российской зоны Баренцева моря. Промышленное освоение этого вида не требует разработок специализированных орудий лова.

Cucumaria frondosa является родственным видом Cucumaria japónica, которая широко применяется как пищевой и лечебно-профилактический продукт на Дальнем Востоке. Голотурии Баренцева моря привлекали внимание ученых как источники биологически актив-

ных соединений: тритерпеновых гликозидов, фосфолипидов, полие-новых жирных кислот. В работах Л. А. Андреевой с соавторами (Андреева и др., 1984, 1987, 1988), Ажгихина с соавторами (Ажгихин и др., 1978) освещены вопросы комплексной переработки голотурий, описаны способы выделения и идентификации биологически активных соединений, обсуждаются перспективы ее использования для создания продуктов лечебного и профилактического назначения. Однако, в литературе отсутствует систематизированный материал, позволяющий оценить рациональное использование этого вида сырья в зависимости от сезонной изменчивости химического состава, содержания биологически активных веществ и соотношения различных частей тела. Кроме того, вопрос о пищевом использовании голотурий Баренцева моря до настоящего времени не был решен положительно, что также было обусловлено фрагментарными сведениями об этом объекте.

Не менее важной проблемой является разработка новых малоотходных технологий комплексной переработки голотурий с учетом особенностей химического состава и содержания биологически активных веществ в различные сезоны года. В этом аспекте важно прогнозировать наиболее рациональное использование сырья в пищу, создания новых пищевых добавок для лечебного и профилактического питания.

Цель настоящей работы - обоснование и разработка комплексной технологии переработки Cucumaria frondosa для получения пищевой, лечебно-профилактической, кормовой продукции, пищевых добавок на основе биологически активных веществ этого животного.

Для достижения указанной цели поставлены и решены следующие задачи:

- изучение соотношения отдельных частей тела Cucumaria frondosa, их химического состава, содержания и локализации биологически активных веществ в различные периоды жизненного цикла;

- обоснование и изучение возможности использования Cucumaria frondosa на пищевые цели;

- разработка малоотходной технологии переработки морского огурца с целью получения пищевой продукции, выделения и очистки комплекса биологически активных пищевых добавок и кормовых продуктов;

- исследование иммуномодулирующщей и противоопухолевой активности гликозидов Cucumaria frondosa;

- изучение физико-химических свойств всех видов получаемой из Cucumfria frondosa продукции и разработка на них НТД;

- оценка безвредности концентрата каротиноидов и комплекса сапонинов для теплокровных животных;

разработка рекомендаций по использованию комплекса биологически активных пищевых добавок из кукумарии в лечебном и профилактическом питании.

Научная новизна. Впервые получены данные о пищевой ценности и содержанию биологически активных веществ в различных органах Cucumaria frondosa Баренцева моря в период годового жизненного цикла. Обоснована и доказана возможность пищевого использования ранее не вылавливаемого вида голотурий Баренцева моря - Cucumaria frondosa. Разработана малоотходная технология получения из кукумарии, позволяющая по единой технологической цепи получать продукцию для пищевого использования, комплекс биологически активных пищевых добавок и кормовое сырье.

Разработаны технологии получения следующих пищевых продуктов:

1. Консервы - " Мускул кукумарии натуральный"

"Икра кукумарии натуральная (стерилизованная)";

2. Кулинария -"Масло икорное из гонад кукумарии";

3. Биологически активные добавки: "Концентрат каротиноидов"; "Концентрат фосфолипидов с сапонинами"; "Кормовой белковый концентрат ".

Выявлены иммуномодулирующие и противоопухолевые свойства гликозидов из Cucumaria frondosa Баренцева моря. Впервые установлены сроки и условия хранения всех видов разработанной продукции.

Технология получения комплекса биологически активных пищевых добавок - каротиноидов и сапонинов, а также масла икорного не имеет аналогов; оформлена заявка на изобретение и патент, получена приоритетная справка.

На защиту выносятся следующие положения: - материалы по пищевой ценности и содержанию биологически активных веществ в различных частях тела одного из массовых видов голотурий Баренцева моря - Cucumaria frondosa;

- обоснование и доказательство возможности использования мускула и гонад кукумарии на пищевые цели;

- малоотходная технология переработки морского огурца для получения пищевой продукции, выделения и очистки комплекса биологически активных пищевых добавок;

данные о дозовом интервале иммуномодулирующей и противоопухолевой активности гликозидов морского огурца Баренцева моря;

- доказательство безвредности каротиноидов и сапонинов, и рекомендации по применению их в лечебном и профилактическом питании;

- сроки и условиям хранения мороженного полуфабриката, всех видов пищевой продукции и пищевых добавок;

разработанная и утвержденная научно-техническая документация.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л. Особенности биологии, состояние запасов, морфология Cucumaria frondosa Баренцева моря.

Голотурии или морские кубышки известны с древних времен. Название "морские огурцы" было дано Плинием, а первое описание нескольких видов принадлежит Аристотелю. Издавна иглокожие морские кубышки привлекали внимание людей своим внешним видом и своеобразным образом жизни. Свыше 40 видов и разновидностей голотурий используется человеком в пищу.

Cucumaria относится к типу Иглокожие - Echinodermata, классу Голотурии Holothuiioidea, к отряду древовиднощупальцевых голотурий -Dendroshirota, объединяющего наиболее примитивных представителей данного класса, обладающих ярко выраженной пятилучевой симметрией, древовидными щупальцами и органами передвижения -амбулакральными ножками, способными втягиваться (рис. 1.1). Представители рода Cucumaria имеют крупные размеры (до 40 см в длину) и по форме напоминают огурец, на одном конце которого располагается ротовое отверстие, окруженное венчиком щупалец (Дьяконов, 1933; Иванов, 1955; Иванов, Полянский и др. 1985; Догель /ред. Полянского/, 1981; Гудимова, Денисенко, 1995).

Кожа животных очень мясистая, гладкая, толстая (0,5 см и больше), светло-фиолетового или темно-бурого цвета. В коже нет правильного известкового скелета, как у других иглокожих. Вместо него она содержит микроскопические известковые тельца разнообразной формы ( Дьяконов, 1933; Иванов, 1955; Догель /ред. Полянского/, 1981; Иванов, Полянский и др. 1985; Гудимова, Денисенко, 1995). Под эпителием находится мощный слой соединительной ткани, окрашенный темным пигментом. Стенки тела, включающие покровный

эпителий, соединительную ткань, слой кольцевых мышц и целомический эпителий, образуют кожно-мышечный мешок, заключающий обширную вторичную полость тела (Штшй-от Л., Яиш^гот Б., 1918-1919; Иванов, 1955; Гудимова, Денисенко, 1995) (рис. 1.1).

Вторичная полость тела содержит жидкость по составу весьма близкую к морской воде. В жидкости распределены многочисленные клетки-целомоциты, принимающие участие в процессах пищеварения, свертывания крови, дыхания, выделения. Целом расчленяется на обширную полость тела и несколько сложных систем -амбулакральную, кровеносную и систему каналов, сопровождающих гипоневральные стволы нервной системы (Левин, 1982; Калинин, Стоник и др., 1990; Калинин, Левин и др. 1994; Гудимова, Денисенко, 1995).

Пищеварительная система голотурий открывается ртом, окруженным пищедобывательными структурами - щупальцами, пищеварительной трубкой. Для кукумарий характерен длинный трубчатый кишечник, обычно в 2-3 раза превышающей длину тела (рис. 1.1). Каких-либо специальных пищеварительных желез у голотурий нет, отсутствут и какие-либо железистые придатки. Имеются данные, что в транспорте нутриентов через стенку кишечника активно участвуют целомоциты. Помимо внеклеточного у голотурий показано и внутриклеточное пищеварение. Допускается также и возможность поглощения питательных веществ через покровы тела (Левин, 1982; Калинин, Стоник, Авилов, 1990; Калинин, Левин, Стоник, 1994; Гудимова, Денисенко, 1995).

Рис. 1.1. ВНУТРЕННЕЕ СТРОЕНИЕ Cucumaria frondosa (Догель, 1981) 1. Кожно-мышечный мешок; 2. Продольные мышцы; 3. Полиев пузырь; 4. Гонады; 5. Поперечная мускулатура; 6. Водные легкие; 7. Ампулы околоротовых щупалец; 8. Кишечник.

Кровеносная или гемальная система представлена кольцевым окологлоточным сосудом, залегающим в аборальной стенке кольцевого амбулакрального канала, и двумя крупными сосудами, сопровождающими кишечник.

Многочисленные разветвления и анастомозы сосудов средней части кишечника могут образовывать мощное сплетение, называемое "чудесной сетью". Кровь голотурий представляет собой бесцветную жидкость, содержащую целомоциты. Функция кровеносной системы голотурий остается во многом неясной. Тесная связь ее с кишечником указывает на возможность участия крови в процессе пищеварения. Кровеносная система играет определенную роль в процессе дыхания. Возможно стенки кровеносных сосудов являются местом образования целомоцитов (Левин, 1982; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Половая система представлена половой железой, состоящей из двух пучков отдельных трубочек красновато-коричневого цвета у самок и светло-фиолетового у самцов. Внешний половой диморфизм не выражен. Соотношение полов в популяциях близко 1:1 (Низовская , 1973). Возраст, в котором кукумарии достигают половой зрелости, пока не установлен. ( Арбузова, Яковлев, 1982; Левин, 1982; Гудимова, Денисенко, 1995).

Сроки и продолжительность нереста кукумарий в различных участках ареала варьируют весьма значительно. В общем нерестовый период охватывает 7-8 месяцев: с февраля-марта по август. В бореальной области кукумарии половозрелы в феврале, при температуре воды 4 °С. В прибрежье Кольского полуострова находили экземпляры, близкие к половой зрелости в начале гидрологической весны, при температуре +1,5 °С (Гудимова, Денисенко, 1995; Биологические ресурсы..., 1995).

Главные промыслы морских огурцов (рис. 1.2) сосредоточены преимущественно в тропических районах: в водах Индо-малайского

архипелага, островов Тихого океана, на Филиппинах, у берегов Китая и Японии (Jordan A.J., 1972). В Китае голотурий окрестили "морским женьшенем" ( Зенкевич, 1968; Самойлов, Гиршович, 1980). В России, в Приморье добывается два вида съедобных голотурий: Stichopus japónicas и Cucumaria japónica. В Баренцевом море массовым видом голотурий, очень похожий на японский морской огурец, является Cucumaria frondosa (Gunnerus). Эти два вида отличаются ареалами обитания и некоторыми морфологическими признаками, однако, образ жизни и окраска у них совпадают.

Ареал обитания Cucumaria frondosa - от Северной Атлантики и Баренцева моря до Восточного побережья Северной Америки (штат Массачусетс) (рис.1. 2). Ее можно определить, как арктически-бореальный вид (Дьяконов, 1933; Гудимова, Денисенко, 1995) (рис. 1.2).

Анализ результатов исследований морских экспедиций Севрыбпромразведки, ПИНРО, ММБИ позволяет сделать вывод о наличии больших скоплений кукумарий в Баренцевом море. Северная граница обитания Cucumaria frondosa проходит у островов архипеллага Земля Франца-Иосифа, крайняя восточная точка - пролив Карские ворота, обширные поселения расположены на Медвежинско-Шпицбергенском мелководье, на побережье Мурмана и Мурманском мелководье (Анисимова, 1984; Гудимова, 1988; Гудимова, Денисенко 1995).

Количественное распределение кукумарии в прибрежье Мурмана неоднородно. В губах и заливах количество голотурий на дне сравнительно невелико. Биомасса колеблется от 14 до 192 г\см3

(Пропп, 1971). Расчеты показали, что площади поселений кукумарий значительно отличаются друг от друга и составляют от 600 до 2000 км2. Средняя биомасса в поселениях отличается незначительно и находится в пределах 9-16 г/м2, тогда как внутри самих поселений

Рис. 1.2. Ареал обитания Cucumaria frondosa.

отдельных точках биомасса достигает 200-300 г/м2. Ресурсы в обозначенных районах оцениваются предварительно в пределах 100±30 тыс. тонн (Дерюгин, 1915; Гудимова, 1988; Гудимова, Денисенко, 1995).

На распределение Cucumaria frondosa оказывает влияние комплекс факторов: гидрологические характеристики, глубина, рельеф дна, свойства грунта и др. Минимальная глубина, на которой встречается кукумария в Кольском заливе и в губах Мурмана достигает 3-6 м, максимальная - 297 м, молодь обнаружена и на меньших глубинах, вплоть до литорали. Однако массовые скопления кукумарии приурочены к глубинам около 100 м. Вертикальное распределение кукумарии во всем ареале ее обитания остается неизвестным (Дерюгин, 1915; Шорыгин 1928; Пропп, 1971; Гудимова, 1988; Гудимова, Денисенко, 1995; Биологические ресурсы..., 1995).

Кукумария - эвритермный вид , переносит температуру от -2 до +6 °С . В областях с постоянными отрицательными температурами, не встречается. Основная часть поселений в прибрежье Баренцева моря омывается водами с температурой от -1 до +(4-5) °С (Гудимова, 1988).

Cucumaria frondosa, как и другие иглокожие, очень чувствительна к изменению солености, поэтому она обитает в тех районах прибрежья, где соленость изменяется незначительно. Наиболее благоприятна для этого вида нормальная океаническая соленость - 33-35 °/оо-

Трофическая принадлежность голотурий обуславливает приуроченность их поселений к зонам скоплений крупных прикрепленных животных, например, моллюсков, фильтрационная активность которых, способствует обогащению прилегающих вод растворенными и взвешенными органическими соединениями, биогенами, витаминами, стимулирующими развитие многих донных животных. Для питания кукумарии выбирают рыхлые грунты, частицы которых богаты детритом и микроорганизмами. Пищевым материалом для кукумарий служат диатомеи, инфузории, ракообразные, медузы,

личинки креветок и детрит. Вблизи поселений моллюсков голотурии питаются их экскрементами. По имеющимся данным за час кукумария поедает примерно 2-5 см2 грунта. По характеру питания кукумарии относятся к подвижным сестонофагам жестких грунтов. (Иванов, 1955; Пропп, 1971; Сергеев, 1992; Гудимова, Денисенко, 1995; Биологические ресурсы ..., 1995).

1.2. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ

КУКУМАРИИ

Исследованиям химического состава и содержанию биологически активных соединений в голотуриях посвящено много работ, что связано с широким использованием этого животного для пищевых целей и ценностью как источника для получения соединений для лечебно-профилактического питания и субстанции лекарственных препаратов. Наиболее полно исследованы химические соединения, относящиеся к группам тритерпеновых гликозидов и липидов.

Тритерпеновые гликозиды североатлантической голотурии Cucumaria frondosa сходны по своей структуре с гликозидами Cucumaria japónica , морфологически близкому виду. Однако, если основные компоненты гликозидной фракции из Cucumaria japónica содержат глюкозу в качестве третьего моносахаридного остатка в углеводной цепи, 16-кетогруппу в агликоне, то гликозиды Cucumaria frondosa -фрондозит Ф(163) (Авилов и др., 1984, 1993) - имеет пять моносахаридных звеньев. Отмечено полное совпадение структур основного компонента гликозидной фракции Cucumaria frondosa, собранной у атлантического побережья Баренцева моря с аналогичным компонентом Cucumaria japónica (Авилов др., 1993).

Ихтиотоксическое и гемолитическое действия тритерпеновых гликозидов (сапонинов) впервые исследовали японские ученые

Нигрелли (Nigrelly, 1952) и Яманучи (Jamanouchi, 1955). Ими были выделены эти соединения в кристаллическом виде и описаны их свойства. Гемолитический индекс "голотурина" (гликозидных фракций голотурий) в 6-7 раз превышает соответствующий индекс растительных сапонинов. В. И. Калининым с соавторами (Kalinin et. al., 1996) показано, что тритерпеновые глкозиды из голотурий Dendrochirotida проявляют гемолитическую активность.

Резистентность клеточных мембран голотурий к действию эндотоксинов связана с химической природой мембранных стероидных компонентов (Анисимов, Чирва, 1980; Анисимов, Иванов, 1981; Анисимов, 1987).

В организме голотурий отмечены значительные колебания в содержании тритерпеновых гликозидов. Показано, например, что наиболее высокая концентрация гликозидов выявлена в яйцеклетках. По мере созревания последних уровень содержания гликозидов увеличивается. Изменение в содержании тритерпеновых гликозидов в различных тканях голотурий в зависимости как от сезона, так и от возраста животного вызвало предположение об участии гликозидов в процессе размножения. Японские исследователи (Matsuno, Ishida, 1969) оценивали содержание гликозидов по гемолитическому индексу и пришли к выводу, что в стенках тела их содержание практически не меняется, а в гонадах меняется в зависимости от сезона года. Количество гликозидов в начальный период роста голотурий до достижения половозрелости увеличивается, а при дальнейшем росте почти постоянно (Левин, 1982; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Тритерпеновые гликозиды представляют собой низкомолеку лярные соединения, содержащие углеводы, водород гликозидного гид-роксила которых замещен на тритерпеновый радикал. По характеру агликона они могут относиться к альфа- или бэта-амириновому, лупа-новому, гопановому, даммарановому, ланостановому и голостановому

ряду. В составе углеводной части найдены следующие моносахариды: Д-глюкоза, Д-галактоза, Д-ксилоза, Д-хиновоза, Д-арабиноза, Ь-рибоза, Д-фруктоза, Д-рамноза, Д-глюкуроновая кислота. Они образуют одну или две углеводных цепи линейной или разветвленной структуры (Еляков, Стоник, 1986).

Тритерпеновые гликозиды, выделенные из различных видов голотурий отличаются по своим свойствам, что обусловлено особенностями их химического состава. Строение тритерпеновых глико-зидов голотурий специфично для родов и подсемейств. Они представляют собой сложные смеси веществ, которые близки по своей структуре. В литературе эти соединения имеют несколько названий: голо-турины, сапонины, гликозиды.

Тритерпеновые гликозиды до недавнего времени считались типичными метаболитами растений (Еляков Г.Б., 1967).

В животном мире тритерпеновые гликозиды обнаружены только у голотурий. От растительных тритерпеновых гликозидов они отличаются весьма существенно: типом тритерпенового агликона, моносахаридным составом и наличием сульфатных групп. В зависимости от физиологического состояния организма содержание и скорость биосинтеза гликозидов изменяются в достаточно больших пределах. Это указывает на то, что соединения этого класса не балластные вещества. Можно предположить, что они включаются в метаболизм в процессе роста и развития организма и играют немаловажную роль для организмов-продуцентов (Еляков Г.Б., 1967; Турин, Ажгихин, 1981; Аминин, Анисимов, 1987; Левин и др., 1985).

В последнее время исследователи уделяют большое внимание изучению связи между химическим строением и антифунгальными свойствами тритерпеновых гликозидов.

Антифунгальные свойства тритерпеновых гликозидов, также как и полиеновых антибиотиков, связаны в основном с присутствием

стеринов в клеточных мембранах (Schimada., 1969). Стероидные и тритерпеновые гликозиды являются природными антимикробными соединениями и обладают активностью in vivo и in vitro (Самойлов, Гиршович, 1980; Левин, 1982).

Тритерпеновые гликозиды, взаимодействуя со стеринами клеточной поверхности, вызывают в ней переориентацию липидных компонентов. Это в свою очередь приводит к изменению нормального функционирования биомембран, в результате наблюдается выход из клеток низкомолекулярных компонентов - аминокислот, рибо-нуклеотидов, пентозофосфатов, пентоз; одновалентных ионов К, Na, Li. Двухвалентные ионы Са, Mg, Fe, Мп снижают мембранотропную активность тритерпеновых гликозидов и оказывают стабилизирующее действие на клеточные мембраны, так как способны образовывать комплексы с белками, в результате чего мембраны становятся менее проницаемыми (Корепанова, Попов, Анисимов и др., 1980; Анисимов, Иванов, Попов и др., 1981; Еляков, Стоник, 1986; Еляков, Стоник, 1988; Аминин, Анисимов, Попов и др., 1990).

Тритерпеновые гликозиды ингибируют размножение грибковой и дрожжевой микрофлоры подобно полиеновым антибиотикам. (Щеглов, Анисимов и др., 1979; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Метанольные вытяжки и экстракт липидов из Holothuria atra, Holothuria scabra и Bochadshia argus не проявляли антибактеральной активности. В то же время, экстракты Holothuria atra, Bochadshia argus в физиологическом растворе тормозили рост грамм-положительных грамм - отрицательных бактерий (Ridswan et al, 1995).

При сравнении антигрибкового действия тритерпеновых гликозидов голотурий и растительных сапонинов, можно отметить, что они имеют общий механизм действия, подобно полиеновым антибиотикам. Свойство тритерпеновых гликозидов стимулировать выход из клеток дрожжей в культуральную среду аминокслот, позволяет

использовать сапонины в качестве специфических реактивов для изучения транспорта аминокислот через биологические мембраны (Щеглов, Анисимов, 1979; Орлов, Гелашвили, 1985; Аминин, Анисимов, Попов и др., 1990; Калинин, Левин, Стоник, 1994). Гликозиды содержатся во всех тканях голотурий. В работах японских исследователей (Matsuno et. al., 1973) описываются сезонные изменения содержания сапонинов в рганизме голотурий. Содержание гликозидов в стенках тела ниже, чем в кишечнике, самое высокое - в гонадах. Разница в количестве гликозидов у особей разных размеров обнаружена не была (Matsuno, Sakushima, Ishida, 1973).

Наличие токсичных гликозидов помогает морским огурцам защитить покровы тела и внутренние органы от заселения микроорганизмами, снижает возможность выедания голотурий хищниками. По мнению некоторых авторов гликозиды используются голотуриями для выживания в межвидовой борьбе. С их помощью они подавляют размножение морских ежей и погибшие эмбрионы могут составлять основу питания голотурий (Nigrelli, 1952; Yamanouchi, 1955; Nigrelli, Stempien, 1967; Rüssel, Bogert, 1981; Турин, Ажгихин, 1981; Левин, 1982). По эффективности воздействия на нервную систему голотурины сравнимы с такими блокирующими агентами, как прокаин, физостигмин, кокаин. Однако, в отличие от последних эффект их водействия необратим. При действии на различные периферические нейромышечные рецепторы голотурины вызывают необратимую инактивацию возбуждения in vitro и in vivo; голотурин А, вводимый мышам, вызывает судороги, паралич; голотурин В - медленное, но стойкое повышение тонуса поперечных мышц. Ихтиотоксичность связана с повреждениями жаберных капилляров рыб, что приводит к нарушению дыхания, регуляции солевого обмена и осмотического давления. (Yamanouchi, 1955; Nigrelli, Stempien, 1967; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Возможность биосинтеза тритерпеновых гликозидов голотуриями de novo впервые была показана сотрудниками Тихоокеанского института биоорганической химии на основании включения радио-активного ацетата в агликонные части тритерпеновых гликозидов Astichopus japonicus (Elyakov et al., 1975). В дальнейшем эти результаты были подтверждены бельгийскими и американскими исследователями (Калинин и др., 1994).

Вместе с тем, некоторые данные указывают на существование другого пути образования гликозидов - трансформация тритерпеноидов пищи. Это предположение было подтверждено в эксперментах на S. californicus (Sheikh, Djerassi, 1977 ; цитировано по В.С.Левину, 1982). Однако, в известной нам литературе пока нет сведений, содержатся ли возможные предшественники гликозидов, например, ланостерины или циклоартенол, в органических соединениях, входящих в рацион голотурий.

Клеточные мембраны голотурий устойчивы к действию как собственных тритерпеновых гликозидов, так и гликозидов растительного происхождения.

Цитостатическое действие тритерпеновых гликозидов голотурий исследовали на ранних стадиях эмбриогенеза морских ежей (Ruggieri, Nigrelli, 1960). Интенсивность воздействия зависит от длины углеводной цепи в молекуле гликозида. Незначительные концентрации гликозидов в морской воде блокируют дробление оплодотворенных яйцеклеток, лизируют бластомеры и тормозят биосинтез макромолекул в эмбрионах морских ежей. При этом нарушается нормальное функционирование биомембран, изменяется их микровязкость, замедляется транспорт из среды в клетку аминокислот и нуклеотидов. Эти факты дают возможность предположить, что гликозиды те вещества, с помощью которых голотурии подавляют размножение морских ежей как конкурентов в межвидовой борьбе еще на ранних стадиях эмбриогенеза

(Nigrelli, Stempien, Ruggieri, Liguori, Cecil, 1967; Анисимов, Чирва, 1980).

Ихтиотоксическое действие сапонинов также связано с образованием гликозидстериновых комплексов. Помимо защитного действия тритерпеновые гликозиды голотурий принимают участие в процессах, связанных с размножением, поскольку максимумы в содержании этих веществ совпадают с периодом, предшествующим нересту голотурий (Анисимов, Чирва, 1980; Анисимов и др., 1981; Еляков, Стоник, 1988; Апрышко, Нехорошев, 1989).

Противоопухолевое действие гликозидов голотурий было обнаружено Нигрелли (Nigrelli, 1952). Он установил,что подкожные инъекции раствора голотурина в зону опухолевого роста Sarcoma-180 ингибируют рост опухоли. Голотурин, по данным Нигрелли, при концентрации 5 мкг/мл ингибирует рост опухолевых клеток эпидермальной карциномы KB in vitro (Nigrelli et al, 1967). Исследовалось также противоопухолевое действие гликозидов на жизнеспособность клеток опухоли Эрлиха (Анисимов др., 1983), активность в отношении клеток L 1210 и KB гликозидов из С. echinata и их производных (Miamoto et al., 1990). Предполагают, что в основе механизма цитотоксического действия гликозидов голотурий лежит ингибирование биосинтеза нуклеиновых кислот и белка (Анисимов и др., 1971; Elyakov et al., 1972). В то же время некоторые авторы наблюдали отсутствие ингибирования биосинтеза белка при воздействии сапонинов на опухолевые клетки (Прокофьева др., 1981). А. М. Седов и соавторы (1984) установили, что в дозах 0,4-40 мкг/мышь при внутрибрюшинном введении сырой кукумариозид из Cucumaria japónica повышает устойчивость мышей к инфекции, вызываемой Salmonella typhimurium, причем после введения кукумариозида фагоцитарная активность клеток перитонеального экссудата мыши возрастает. Кукумариозиды из Cucumaria japónica оказывают выраженное

адъювантное действие, вызывая увеличение количества антител при действии корпускулярной коклюшной вакцины, а также усиливают защитное действие вакцины (Седов, 1984). Этими же исследователями установлено, что гликозиды оказы- вают неспецифическое протек-тивное антибактериальное действие по отношению к целому ряду грамотрицательных микроорганизмов - как типичных представителей энтеробактерий родов Escherichia, Proteus, Salmonella, так и грамотрицательных кокков . Кукумариозид обладает лечебным действием на мышей в случае приобретенного иммунодефицита, вызванного радиационным облучением (Седов, 1984; Турищев и др., 1991).

Кукумариозиды из Cucumaria japónica также обладают противовирусным действием. Даннный эффект кукумариозида обуславливается двумя механизмами. Во-первых, усиливается взаимодействие Т- и В-лимфоцитов и гуморальный иммунный ответ у животных, стимулируется пролиферация стволовых клеток. Другой возможный механизм - противовирусная защита на стадии взаимодействия вирус-клетка. Реализация такого способа защиты подтверждается опытами по ингибированию кукумариозидами цитопатического эффекта, вызываемого вирусами везикулярного стоматита, полиомиелита и другими в культуре клеток. Сумма кукумариозидов С. japónica не обладает мутагенной активностью и разрешена к практическому применению в ветеринарии (Щеглов, Анисимов и др., 1979; Щеглов, Баранов, Анисимов и др., 1979; Седов, 1984; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Голотурины проявляют и другие виды биологической активности. При высоких концентрациях голотурины вызывают проницаемость липосомальных мембран, сформированных из фосфолипидов, за счет воздействия на липидную фазу. Гликозиды голотурий ингибируют Иа,К-АТФазу и Mg-АТФазу мозга крыс in vitro.

В опытах на крысах показано, что голотоксины обладают контрацептивным действием при подкожном введении в дозах 0,1 и 1 мг/кг (Корепанова, Попов, Анисимов, 1980; Анисимов и др, 1981; Аминин и др., 1990; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

Тритерпеновые гликозиды имеют некоторое преимущество даже перед полиеновыми антибиотиками, также являющимися мем-бранотропными веществами: они хорошо растворяются в воде, термостойкие и сохраняют активность при длительном хранении. В отличие от сапонинов животного происхождения, гликозиды голотурий оказывают мембранотропное действие при температуре 0 °С (Самойлов, Гиршович, 1980).

С. Фрис с соавторами провели сравнительные исследования нейротропного действия голотурина А и его дисульфатированного прозводного (Friess et al, 1967; 1968: 1970: цитировано по Калинину с соавт., 1994). При действии на различные периферические нейро-мышечные рецепторы оба соединения вызывают необратимую инак-тивацю возбуждения in vitro и in vivo.

При действии голотурина в концентрации 2x10 М на внешнюю сторону интактного гигантского аксона кальмара наблюдалась необратимая деполяризация мембраны. На этом основании было выдвинуто предположение, что в основе деполяризации мембран глико-зидами может лежать увеличение проницаемости биомембран для ионов Na (De Groof, Narachashi, 1976; цит. по Калинину и др., 1994).

Предполагают, что спиртовые экстракты, содержаще сапонины и олигосахариды, добавленные в пищу, могут вызвать морфоло- гические изменения в дистальном отделе кишечника атлантического лосося (Van Den\ ngh, et al, 1996).

Добавление 0,1 мг сапонинов в воду при подращивании личинок креветок Peraeus yaponicus сопровождалось повышением скорости их роста. Однако, выдерживане этих личинок в воде с более высокими

концентрациями сапонинов, а также кратковременные экспозиции с более низкими их концентрациями, снижали потребление пищи, скорость роста и частоту линьки (Chen, Jiann-Chu, et al, 1996)

Из кукумарии Holoturia atra И. Дарахом с соавторами (Darah et al, 1995) были выделены атратоксины А и В, которые проявляли активность против грибов дерматофита.

Из БАВ в кукумарии выделены фосфолипиды. Фракция фосфолипидов представлена фосфатидилхолином, фосфатидил-этаноламинами и фосфатидилсерином (Svetachev et al., 1991). Значительная часть фосфатидилэтаноламина в дальневосточных голотуриях, как у некоторых других видов иглокожих, находятся в так называемой, плазмалогенной форме (Дембицкий, Васьковский, 1976; Дембицкий, 1979; Костецкий, Сергеюк, 1985). Голотурии также характеризуются высоким содержанием гликолипидов (Vaskovsky et al., 1970). Цереброзиды представляют один из основных классов в иглокожих, где их содержание настолько высоко, что может быть сравнимо только с уровнем этих веществ в нервных тканях млекопитающих (Батраков и др., 1983).

Доказано, что фосфатидилхолин, которым богаты липиды голотурий, является веществом, способным встраиваться непосредственно в фосфолипидный слой мембран и защищать печень и другие органы от повреждения продуктами перекисного окисления липидов (Венгеровский, Саратников, 1988; Лескова, Удовиченко, 1991;

Гуревич и др., 1992). Внутривенное введение фосфатидилхолина улучшает липидный сосстав мембран эритроцитов у пациентов с циррозом печени (Cantafora, Hasella, Angélico et. al. 1992). Гепа-топротекторное действие фосфолипидов проявляется в том, что они эффективно предупреждают дистрофические изменения в печени, восстанавливают белоксинтезирующую систему клетки, синтез альбумина и митохондриальной ДНК, активизируют синтез, секрецию

макрофагами ФИО. Все эти качества указывают на перспективность применения их в клинике при различных патологиях печени для регенерации клеточных мембран и восстановления их функций (Shibajama, 1989). Под действием липидов голотурий значительно увеличивается время свертывания крови, что имеет большое значение при профилактике и лечении атеросклероза (Манасова, 1978; Левин, 1982; Савватеева, 1987).

В последнее время при лечении ряда заболеваний с успехом используют пищевые продукты, обогащенные полиненасыщенными жирными кислотами (ПНЖК) семейства омега три, которые в значительных количествах присутствуют в липидах кукумарии. Их гиполипидемическая и гипотензивная активность показана больным с различными типами гиперлипопротеидемии, ишемической болезни сердца, гипертонией, диабетом и другими заболеваниями (Дудаев и др., 1987; Карагодина и др., 1992; Самсонов и др., 1992; Сдвигова и др., 1993). Диета, обогащенная ПНЖК, оказывает положительное влияние на липидный состав крови: уменьшает содержание общего холестерина, триглицеридов, липопротеинов (Дудаев и др., 1987). Применение ПНЖК оказывает благоприятное влияние на функциональное состояние тромбоцитов при ишемической болезни сердца. Вместе с тем, использование диеты, обогащенной ПНЖК, сопровождается увеличением уровня липоперекисей в печени и сыворотке крови у экспериментальных животных (Kobatake et. al., 1983, цитировано по Сдвигову и др., 1993). ПНЖК являются эффективным субстратом перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Владимиров, Арчаков, 1972). Показано, что ПОЛ активизируется при многих патологиях (Slater, 1972; Воскресенский, 1981; Вольнова и др., 1988; 1990). Существует гипотеза, согласно которой появление в крови липопротеинов, модифицированных в результате ПОЛ, является фактором риска возникновения атеросклероза, поскольку это приводит к нарушению

липид-транспортной функции липо- протеинов и аккумуляции холестерина в клетках сосудистой стенки (Вольнова и др., 1988; 1990). Механизм появления окисленных ЯП в крови остается пока не выясненным (Сдвигова и др., 1993). Поло- жительный терапевтический эффект ПНЖК семейства омега три на процессы транспорта, синтеза и деградации липидов связан с его влиянием на жирнокислотный состав клеточных мембран и гемокоагуляцию. Показано, что курс диетотерапии ПНЖК (с кислотами семейства омега три, шесть) способствует увеличению показателя соотношения ПНЖК/НЖК в мембранах эритроцитов, повышает ненасыщенность клеточных мембран и снижает их микровязкость. Это сопровождается выраженным гипохолестерине мическим эффектом (Самсонов и др., 1992). Использование источников ПНЖК семейства омега три в составе диеты проявляет заметный иммуностимулирующий эффект, что обуславливает целесообразность применения такой диеты в комплексной терапии больных, подвергшихся воздействию ионизирующего излучения.

Одна из особенностей протекания биохимических реакций в голотуриях и других иглокожих вцелом связана с интенсвностью и глубиной сульфатирования самых различных субстратов. Перечень сульфатирования метаболитов голотурий включает мукополисахари- ды типа хондроитинсульфата, полифукансульфаты, сульфатиро- ванные алифатические спирты и сульфатсодержащие гликозиды (Ташкачуа, 1955; Еляков, Стоник, 1988).

Часть белков соединительной ткани представлена гликопротеинами и различными конъюгатами с полисахаридами. Предполагают, что важнейшими из этих соединений являются хондроитинсульфаты и полифукан-сульфат-белковые комплексы (Калинин и др., 1994). Наиболее изучены к настоящему времени полисахариды дальневосточного трепанга АяНскориз уаротсиъ и НоШкипа йтеа. Эти голотурии являются основными промысловыми видами и

изучению их химического состава традиционно уделяется много внимания в Японии.

Исследованиями Я. Карио (Kariya et al., 1990) показано, что в тканях Cucumaria japónica имеется, возможно, два структурных типа хондроитинсульфатов. Сведений о содержании этих соединений в Cucumaria frondosa в доступной нам литературе не обнаружено.

Показано, что в голотуриях особенно велико содержание таурина, глутаминовой кислоты и глицина (Калинин и др., 1994).

Среди всех беспозвоночных ганглиозиды были найдены только в Echinodermata (Vaskovsky et al., 1970). К настоящему времени эти соединения голотурий изучены в меньшей степени, чем у других иглокожих.

Пигменты голотурий представлены в основном двумя группами: каротиноидами и меланинами. Выяснено, что пигменты этих животных представляют собой, главным образом, окисленные каротиноидные соединения - астаксантин, кантаксантин и соответствующие эфиры (Bullock, Dawson, 1970; цит. по Калинин и др., 1994). В то же время с пищей голотурии получают в основном малоокисленные каротиноиды, что предполагает существование в этих беспозвоночных систем окислительного метаболизма каротиноидных пигментов (Калинин и др., 1994).Каротиноиды представляют наиболее многочисленную и широко распространенную группу пигментов, которые привлекают внимание ученых с начала 19 века (Сергеев и др., 1992). В настоящее время идентифицировано около 600 представителей каротиноидов, среди которых менее 10 % обладают A-витаминной активностью. Длительное время функция каротиноидов в клетках животных своди- лась к их способности служить предшественником витамина А. И только в последнее время, благодаря многочисленным исследованиям, расширилось понимание роли и важности каротиноидов для организма животных и человека.

Накапливаются данные о том, что каротиноиды в биологических системах выполняют защитные функции от вредного воздействия экзогенных и эндогенных факторов (Карнаухов, 1978; Liaaen-Jensen, 1990; Буюклинская и др., 1992; Шеленова и др., 1992; Шлянкевич и др., 1992; Лукьянова, Шмидт, 1993; Феофилова, 1994). Так показаны антимутагенная, иммуномодулирующая, антиканцерогенная активности препаратов, содержащих ß-каротин, а также эффективность их использования в составе лечебно-профилактических средств (Di Mascio P., 1990, цит. по Сергеев и др., 1992). Препараты, содержащие каротиноиды и такой интерполированный усиливающий агент, как триглицерин, способствующий однородному распределению кароти-ноидов и липидов в липидной частице носителя, ингибируют рост раковых клеток ( Lopez-Berestein et al, 1993). Некоторые каротиноиды в чистом виде проявляют цитотоксический эффект (Kitamura et al., 1996).

В гонадах голотурий были определены пять пигментов группы ксантинов. Причем, для семенников было характерно более высокое содержание каутоксантина, а для яичников - астаксантина (Matsuno, Ito, 1970). Пигменты этой группы определяют яркую окраску гонад морских огурцов. На основе каротинодов, выделенных из растительного сырья и микроорганизмов, созданы продукты обладающие антимутагенными, антиканцерогенными свойствами, иммуномодулирующей активностью (Heiwood, Palmer, Gregson, 1985; Сергеев, Вакулов и др., 1992; Kitamura et al., 1996).

Из морского огурца Cucumaria japónica были выделены три новых каротиноида - кукумарияксантины А, В, и С, изучены их структура и стереохимическая организация (Tsushima et al., 1996). Авторами этих исследований установлено, что кукумарияксантин С ингибирует активность вируса Epstein-Barr in vitro при кратко- временной обработке.

Таким образом, голотурии содержат целый набор биологически активных соединений, которые действуя раздельно или в комплексе обуславливают высокую фармакологическую ценность продуктов, получаемых из этого объекта.

1.3. СОСТОЯНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ В ОБЛАСТИ ТЕХНОЛОГИИ

ПЕРЕРАБОТКИ КУКУМАРИИ

В Приморье, из различных видов промысловых голотурий издавна изготавливают широкий ассортимент продукции в виде свежей, свежемороженной, варено-мороженной, варено-сушеной, солено-сушеной, также консервы, кулинарию, гидролизат.

Одно из наиболее ранних описаний приготовления пищевой продукции из голотурий принадлежит С. Семперу (Semper, 1968; цит. по Брэм, 1992, С. 512-513). "Первая их варка производится в морской воде, вторая в пресной, а затем поочередное паренье и сушение... Промыв его (трепанга) несколько раз и тщательно удалив внутренности, посторонние частички песка, разбухшую кожу разрезают на мелкие кусочки, которые и едят в сильно приправленных пряностями супах или с различными другими кушаньями. Европейцы едят лишь ради их удобоваримости, а жители Китая - ради приписываемых им возбуждающих свойств".

Методы приготовления голотурий в разных районах чрезвычайно разнообразны. Так, на некоторых островах Полинезии голотурий после лова потрошат, выжимают воду, натирают снаружи и изнутри сухой известью и сушат на солнце или на плетенках, под которыми поддерживается слабый огонь. В Шри-Ланка, например, после двухкратной варки голотурий помещают в ямы, вырытые во влажном песке, покрывают джутом и засыпают. За 12-18 часов поверхностный слой тела разрушается и легко удаляется промывкой в морской воде.

В Китае и на Филиппинах голотурий варят в кипящей воде, после варки высушвают на солнце и коптят. В Японии дальневосточный трепанг употребляется в сыром, вареном, копченом и вяленом виде.

В России для приготовления пищевой продукции используется кожно-мышечный мешок голотурий.

Активность соединений, содержащихся в тканях кукумарии не снижается в процессе технологической обработки: не меняется фосфо-липидный состав тканей, не разрушаются гликозиды, сохраня- ется весь набор минеральных элементов (Савватеева, 1984). По литературным данным перевариваемость (по пепсину) белков мяса кукумарии составляет 55 %, в то время как щупалец осьминога - 97 %, мантии кальмара - 98 %. Длительное термическое воздействие на мясо кукумарии способствует размягчению тканей, частично переводит коллаген в растворимую форму - глютин - и улучшает усвояемость получаемого продукта (Кизеветтер, 1962; Слуцкая, 1972; Слуцкая, 1975).

Свежие мышцы имеют прекрасный вкус при их обработке по любому рецепту, используемому для приготовления мяса моллюсков.

Варено-мороженая, варено-сушеная, солено-сушеная кукумария является прекрасной добавкой к мясным, рыбным и овощным блюдам.

При технологической обработке морских огурцов основным условием является правильное хранение и транспортировка сырца. Наиболее распространен способ хранения и транспортировки в емкостях с проточной или часто сменяемой морской водой. При температуре воздуха свыше 10 °С кукумарию хранят в охлаждаемых помещениях или пересыпают льдом (Селюк, 1951; Кизеветтер, 1962).

Перед обработкой кукумарию разделывают, чтобы удалить внутренности и зачистить полость тела. Причем, эти операции производятся очень тщательно иначе не исключена гнилостная порча продукта при сушке (Кизеветтер, 1962). Разделывают кукумарию либо производя разрез на 1/3 всей длины тела, либо рассекая тушку на две

половинки. Второй способ позволяет тщательнее промыть и зачис-тить стенки тела, но продукт имеет менее красивый вид. При раз- делке в условиях промысла потери веса сырья могут составить 25 - 50 %. К ним можно отнести венчик со щупальцами, прианальный учас- ток и внутренности. Отходы и потери не имеют зависимости от веса кукумарии, т. к. содержание, например, полостной жидкости и слизи непостоянно (Селюк, 1951; Эртель, 1951; Кизеветтер, 1962).

После разделки производится варка кукумарии, в результате которой уплотняются ткани оболочки за счет коагуляции белка и частичного удаления влаги; объем тканей уменьшается; тело кукумарии съеживается и приобретает округлую форму, а амбулакральные ножки - форму выпуклых бугорков. Варку кукумарии обычно осуществляют в открытых котлах. Мойка и вымачивание сырца перед варкой в пресной или морской воде влияют на содержание соли в готовом продукте и при необходимости это можно регулировать. При изготовлении пресно-сушеной продукции варка производится в пресной воде, а солено-сушеной - в морской. Для того, чтобы ткани излишне не обводнялись при варке, на 100 весовых частей кукумарии берется 180-200 частей воды и время закипания должно быть как можно короче. Варка кукумарии осуществляется от 20 до 40 минут в зависимости от размера животного. Правильно сваренная голотурия имеет упруго-плотную ткань (тело пружинит при сжатии в руке) без разрывов поверхности. (Селюк, 1951; Кизеветтер, 1962).

Высушивание осуществляется в естественных условиях, в сушилках и смешанным способом. Высушенная кукумария имеет твердые деревоподобные ткани с низким содержанием влаги (8-12 %). Выход составляет от 5 до 8,9 % к весу неразделанного сырца или от 10 до 16 % - к весу разделанного (Селюк, 1951; Кизеветтер, 1962).

Наиболее ценна пресно-сушеная продукция. При отмочке и варке солено сушеной продукции наблюдаются значительные потери мине-

ральных веществ и белка, чему способствует переходящий в раствор хлорид натрия (Кизеветтер, 1962; Леванидов, Мельников, 1973).

Консервированная кукумария используется в диетическом питании. Ее добавляют в блюда в протертом или нарезанном виде, а также делают фарш, рулеты. Исследования показали, что у больных, получающих кукумарию улучшается аппетит, показатели крови, повышается иммунный статус организма (Савватеева, 1987). При консервировании сохраняются все физиологически активные вещества. В настоящее время в Приморье консервы из кукумарии выпускают в различных вариантах: с овощами, в томатном соусе. Сырьем служит сырая или предварительно сваренная в течение 30 минут свежая, а так же мороженная кукумария (Савватеева, 1987).

Из дальневосточной кукумарии недавно начали выпускать ценный продукт для лечебно-профилактического питания - ферментный гидро-лизат. Приготавливают его в виде непрозрачной темной жидкости со вкусом и запахом морепродуктов, порошка и таблеток. В качестве про-теиназы используется препарат из отходов крабового производства, обладающий коллагеназной активностью. Ферментный препарат состоит из суммы ферментов: коллагеназы, трипсина, химотрипсина и сери-новых протеиназ. Гидролизат из морских огурцов используется в качестве лечебно-профилактического средства при ожогах и хирургическом вмешательстве. Применяется, в ка- честве полуфабриката, при производстве различных сублимированных продуктов, биологически активной добавки к различным молочным, мясным и рыбным блюдам. Щупальца, внутренности и прочие отходы от разделки кукумарии могут быть использованы для производства ферментированных соусов, как приправы к рыбным, овощным и мясным блюдам. Вторичные продукты переработки можно использовать также для получения спиртовых настоев, обогащенных биологически активными веществами, которые рекомендуется использовать в производстве

конфет, печенья, лимонадов, хлебобулочных изделий. Эти растворы обладают бактерицидным, фунгицидным, противомикозным эффектами. После выпаривания растворителя остается ярко-желтый водорастворимый порошок, который при добавке в тесто придает ему цвет, напоминающий цвет яичных желтков, стимулирует процесс брожения. Учитывая, что настои из внутренностей кукумарии содержат фосфолипиды, тритерпеновые гликозиды, обладающие пенообразущей способностью, их рекомендуют использовать в химической промышленности при производстве мыла, шампуней, моющих средств (Самойлов, Гиршович, 1980; Савватеева, 1987).

Отходы от переработки кукумарии используют для получения пищевой добавки в корм животным, в производстве ветеринарных биореактивов, а также - кормовой муки. В процессе изготовления кормовой муки предварительно экстрагируют сапонины и из дето-ксицированной массы получают муку (Андреева и др., 1987). Схема изготовления кормовой муки включает в себя следующие технологические операции: варку, измельчение, сушку, дробление и прессование готового продукта. Мука имеет коричневую окраску и практически лишена запаха. При замачивании в воде увеличивается в объеме на 180-190 %. В отличие от рыбной муки содержит больше белков и минеральных веществ (Селюк, 1951; Иванов, 1955; Кизе-веттер, 1962). При добавлении муки из кукумарии в корм различным животным (норкам, крысам) отмечается высокий стимулирующий эффект. У животных активизируется процесс переваривания пищи, улучшаются показатели крови и выживаемость потомства (Савватеева, 1984; Самойлов, Гиршович, 1987; Савватеева, 1987).

На основании данных о содержании биологически активных соединений в голотурии разработаны технологии выделения комплекса или индивидуальных групп физиологически активных продуктов.

Так показано, что экстракты из дальневосточного трепанга обладают выраженной биологической активностью, проявляющейся в увеличении индекса радиочувствительности у животных (Брехман др., 1968).

Сравнение препаратов из трепанга с экстрактами растений семейства аралиевых - женьшенем, заманихой, элеутерококом, аралией манчжурской показало, что они обладают сходным анти- окси-дантным действием (Иванов и др., 1965; Брехман, Голенко, 1969).

Наибольший интерес, вследствие высокой биологической активности вызывают тритерпеновые гликозиды - сапонины. Токсичность этих соединений была показана на рыбах еще в прошлом веке. Однако, продукты из трепанга не приводят к отравлению человека, что объясняется, по всей вероятности, небольшим дозами поступающего в организм токсина и ослаблением его действия в кислой среде кишечника (1атапоисЫ, 1955).

Фунгицидное, антимикробное действия сапонинов, способность стимулировать фагоцитоз, снижать артериальное давление и проявлять иммуностимулирующие свойства были выявлены в многочисленных исследованиях различных авторов (1атапоисЫ, 1955; Kitagawa е1;. а1., 1976; Самойлов, Гиршович, 1980; Манасова, 1985; Андреева и др., 1987; Андреева, Ревина и др., 1987; Савватеева, 1987). В связи с этим разработано несколько технологий выделения комплекса или индивидуальных тритерпеновых гликозидов (ЗЫтаёа, 1969; Ке1есот е1:. а1., 1976; Стоник и др., 1979; Ермолин и др., 1980; Рос81<Зю, 1983 и др.).

В основе этих технологий лежит экстракция гликозидов из исходного или лиофильно высушенного сырья различными органическими растворителями: абсолютным метанолом (БЫшаёа, 1969), 68-72 % этиловым спиртом (Стоник и др., 1979), безводным пиридином (Ермолин др., 1980). Концентрирование экстракта с последующим

осаждением и перекристаллизацией целевого продукта из Н-бутанола, этилацетата из смеси метанола-изопропанола.

Препаративное разделение гликозидов от веществ, с которыми они связываются в комплексы (фосфолипиды, белки) и очистку получаемых смесей обычно проводят методом хроматографии, используя различные системы растворителей (Nigrelli, 1952; Yasumoto, Nakamura, Hashimoto, 1967; Shimada, 1969; Turner, Smith, 1971; Kitagava, et. al., 1978; Еляков, 1967; Кузнецова, 1972; Аминин, Анисимов, 1981; Аминин, Шенцова и др., 1981; Турин, Ажгихин, 1981; Деканосидзе, Чирва и др., 1982; Андреева, Аразашвили, Ревина, 1984; Орлов, Гелашвили, 1985; Савватеева, 1987; Андреева, Ревина, Аразашвили, 1987; Аминин, Анисимов, 1987; Калинин, Левин, Стоник, 1994).

В зависимости от вида первичного экстрагирующего растворителя и последующих этапов перекристаллизации и выделеня, целевой продукт - тритерпеновые гликозиды - могут быть представлены различными соединениями. Так данные, полученные С. Шимада относятся к веществу, представляющему собой смесь голотоксинов А, В и С (Shimada, 1969). А. Келеком с соавторами из Telenota ananas jaeger выделен комплекс тритерпеновых гликозидов, состоящий из голотуринов А и В (Kelekom et. al., 1973).

Другой группой исследователей из Astichopus multifidus был получен тритерпеновый гликозид - астихин, отличающийся от ранее известных голотуринов отсутствием сульфатной группы (Стоник и др., 1979). Г. Ермолин с соавторами получили комплекс сапонинов - кукума-риозидов из Cucumaria japónica, состоящий, по данным тонкослойной хроматографии, из семи компонентов с доминирующим содержанием одного из них - 65 % от общей массы комплекса (Ермолин и др., 1980). Показано, что в зависимости от вида голотурии сезона ее вылова, содержание тритерпеновых гликозидов обнаруживает значительную изменчивость. Это, как отмечено многими исследователями,

определяется, во-первых, строгой видовой принадлежностью сапонинов, и, во-вторых, зависимостью их концентрации от стадии зрелости половых продуктов (Ма18ипо, Миёа, 1969; Росз1с1о, 1983).

Высокое содержание полиненасыщенных жирных кислот и наличие фосфатидилхолина позволили П. А. Манасовой предположить и, в последствии, доказать антисклеротическое действие этих соединений (Манасова, 1974, 1978). Исследования показали благоприятное воздействие продуктов на коагуляционные свойства крови, что имеет большое значение для лечения и профилактики атеросклероза, а также положительного изменения белкового спектра крови.

Специалистами ВНИРО разработан способ получения концентрата эфиров полиненасыщенных жирных кислот с преобладающим содержанием эфира биологически активной эйкозапентаеновой кислоты из голотурии и морского ежа. Липиды извлекали из целой кукума-рии и отдельно из внутренностей по методу Блайя-Дайера, препаративно разделяли на аргентированном силикагеле. Показано, что смесь этиловых эфиров из целой голотурии содержит 13,3 % этилового эфира эйкозапентаеновой кислоты, а из внутренностей - 4,63 %. Эйкоза-пентаеновую кислоту и ее эфиры рекомендуется применять для изготовления лекарственных препаратов (Андреева и др., 1987; Савва-теева, 1987).

Анализируя вышеизложенные материалы, можно сделать вывод, что существующие технологии позволяют выделять из различных видов голотурий комплексы или индивидуальные тритерпеновые гликозиды и использовать их в качестве биологически активных субстанций для фармацевтических, ветеринарных продуктов и кормовых добавок.

Существенным недостатком изложенных выше разработок является, на наш взгляд, отсутствие комплексной технологи переработки голотурий, позволяющей получать не только сапонины, но кароти-ноиды, хондроитинсульфат, коллаген и другие продукты.

Таким образом, к настоящему времени достаточно хорошо исследованы аспекты биологии и технологии получения биологически активных веществ, пищевой и кормовой продукции из дальневосточных голотурий. Исследования голотурий Баренцева моря носили фрагментарный характер и только в последние годы этому объекту было уделено значительное внимание. Обусловлено это необходимостью поиска новых объектов промысла. С другой стороны, интерес был определен знаниями о содержании в этих животных набора уникальных биологически активных соединений и перспективой использования кукумарии Баренцева моря для производства лечебной, профилактической продукции, пищевых и кормовых добавок.

II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Толкачева, Виктория Федоровна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авилов С. А., Тищенко JI. Я., Стоник В. А. Строение кукумариозида А-2-тритерпенового гликозида из Cucumaria japónica ¡I Химия природных соединений,- 1984,- № в.- С. 9-80.

2. Авилов С. А., Калинин В. И., Дроздова О. А., Калиновский А. И. Стоник В. А., Гудимова Е. Н. Тритерпеновые гликозиды голотурии Cucumaria frondosa // Химия природных соединений.- 1993.- № 2,- С. 49-52.

3. Ажгихин И. С., Гандель Б. Г., Печенников В. М., Серебрянников Н. В., Финкель В. В., Замуреенко В. А. Перспективы использования гидробионтов непищевого значения в народном хозяйстве // Тр. ВНИРО.- 1978,- Т. 120.- С. 113-122.

4. Акулин В. Н., Леванидов И. П. Развитие исследований в области технологии использования рыб и нерыбных объектов Дальнего Востока. Проблемы дальневосточной рыбохозяйственной науки // М.: Агропромиздат. - 1985. - С. 101-115.

5. Алексеенко Л. П. Определение активности протеиназ по расщеплению белковых субстратов // Современные методы биохимии.- М.: Медицина. - 1968,- Т. 2.- С. 112.

6. Аминин Д. Л., Шенцова Е. Б., Анисимов М. М., Кузнецова Т. А. Спектрофотометрическое определение стихопозида А из голотурии Stichopus japonicus //Антибиотики,-1981.- № 8.- С. 585-588.

7. Аминин Д. Л., Анисимов М. М. Содержание голотоксинов в тканях голотурии Stichopus japonicus в разные сезоны года и их влияние на созревание ооцитов // Журнал эволюционной биохимии и физиологии,- 1987.- № 4.- С. 545-547.

8. Аминин Д. Л., Анисимов М. М., Попов А. М. и др. Влияние тритерпеновых гликозидов голотоксина А и кукумариозида G на

липидные бислои, содержащие стерины // Известия АН СССР. Сер. биол,- 1990,- № 5,- С. 630-632.

9. Андреева Л. А., Аразашвили А. И., Ревина Т. А. Особенности изолирования и идентификации гликозидов морского огурца Cucumaria frondosa // Тезисы докладов конференции "Современное направление научного и народнохозяйственного использования ядовитых малоценных гидробионтов": Тез. докл.- М.- 1984.- С. 13-15.

10. Андреева Л. А., Ревина Т. А., Аразашвили А. И. Комплексный подход к утилизации голотурии Баренцева моря // Рыбное хозяйство.-1987,- №. 1,- С. 44-46.

11. Андреева JI. А., Покровская А. Я., Аразашвили А. И. и др. Эфиры полиненасыщенных жирных кислот из иглокожих Баренцева моря // Рыбное хозяйство.- 1987,- № 7,- С. 74-75.

12. Андреева J1. А., Ажгихин И. С., Гандель Б. Г., Покровская А. Я. Cucumaria frondosa и Asterias rubens - новые источники эйкоза-пентаеновой кислоты и гликозидов // Фармация.- 1988.- № 2.- С. 2225.

13. Анисимов М. М., Прокофьева Н. Г., Кузнецова Т. А., Перетолчин Н. В. Вляние некоторых тритерпеновых гликозидов на синтез белка в культуре клеток костного мозга крыс // Изв. АН СССР. Сер. биол.- 1971.- Т. 1,- С. 137.

14. Анисимов М. М., Щеглов В. В., Стоник В. А., Кульга А. Л., Левина Э. В., Еляков Г. Б. Сравнительное изучение антигрибковой активности тритерпеновых гликозидов тихоокеанской голотурий // Доклады АН СССР,- 1972,- Т. 207,- Вып. 3,- С. 711-713.

15. Анисимов М. М., Чирва В. Я. О биологической роли тритерпеновых гликозидов // Успехи современной биологии.- 1980.- Т. 90.- Вып. 3 (6).- С. 80-88.

16. Анисимов М. М., Иванов А. С., Попов А. М. и др. Влияние некоторых тритерпеновых гликозидов и полиеновых антибиотиков на

проницаемость клеточных мембран для ионов К+ и УФ-поглощающих веществ // Прикладная биохимия и микробиология,- 1981,- Т. 17,- С. 890-895.

17. Анисимов М. М. Тритерпеновые гликозиды и структурно-функциональные свойства мембран // НДВШ. Биологические науки.-1987,- № 10,- С. 49-63.

18. Анисимова Н. А. К фауне и количественному распределению иглокожих Баренцева моря // Бентос Баренцева моря. Распределение, экология и структура популяций.- Апатиты.- 1984.- С. 32-44.

19. Апрышко Г. Н., Нехорошев М. В. Противоопухолевые препараты из морских организмов // Серия фармакология и фармация: О/И.- М. : 1989,- N 2,- 60 с.

20. Арбузова JT. Л., Яковлев Ю. М. Сезонные изменения в половых железах японской кукумарии // Биология шельфовых зон Мирового океана. Тез.докл. Второй всес. конф. по морской биологии, ч.2. Владивосток: ДВНЦ АН СССР,- 1982.- С. 132-133.

21. Батраков С.Г. Муратов В.Б., Саканделидзе О.Г., Сулима A.B., Розынов Б.В. Цереброзиды дальневосточной голотурии Cucumaria yaponica. // Биоорганическая химия.- 1983.- Т. 9.- № 4.-С. 539-552.

22. Биологические ресурсы прибрежья Кольского полуострова: Современное состояние и рациональное использование // ММБИ.-Апатиты: Кольский научный центр РАН.- 1995.- 157 с.

23. Борисочкина Л. И. Новые тенденции в производстве рыбопродукции // Информационный пакет. Обработка рыбы и морепродуктов. 1(1). -М.- 1997.- С. 1-7.

24. Брехман И. И., Климашевская А. В., Гоненко В. А. Влияние некоторых биологически активных веществ на "индекс индивидуальной радиочувствительности" // Рук.деп. в ВИНИТИ № 1220 - 69. - Владивосток. - 1968.- 9 с.

25. Брехман И. И., Гоненко В. Л. Антирадиомиметическое действие некоторых природных соединений // Биологические науки. - 1969. - Вып. 7. - С. 51 - 53.

26. Брэм А .Э. Жизнь животных/ Под ред. К. К.Сент-Илера. -Спб. - 1898. - Т. 10. Низшие животные. - 767 с.

27. Буюклинская О. В., Коростелев С. А., Потапова А. А., Сергеев С. А., Утешев Б. С. Влияние (З-каротина на продукцию интерлейкина-2 и мутагениндуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов.// Вопросы медицинской химии.- 1992.- № 6.- С. 29-31.

28. Венгеровский А. И., Саратиков А. С. // Фармакология и токсикология,- 1988,- № 1.- С. 88-89.

29. Владимиров Ю. А., Арчаков А. А., Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. // М..- 1972,- С. 55-57.

30. Вольнова Т. В., Панасенко О. М., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. // Биологичексие мембраны.- 1988,- № 11.- С. 1186-1191.

31. Вольнова Т. В., Панасенко О. М., Заречнева Н. В. и др. // Биологические мембраны.- 1990,- № 7.- С. 141-148.

32. Воскресенский О. Н. // Кардиология,- 1981,- № 6.- С. 118-123.

33. Гончаренко Е. Н., Деев М. И., Кудряшов Ю. Б., Пархоменко И. М. Мидийный кислотный гидролизат (препарат МИГИ-К) и его биологическое действие // Успехи современной биологии.- 1995.- Т. 115.- Вып. 2.- С. 213-224.

34. Гудимова Е. Н. Распространение Cucumaria frondosa (Gunnerus) в Баренцевом море в связи с абиотическими факторами среды // Особенности биологии и условия обитания гидробионтов гидробионтов Баренцева моря.- Апатиты.- 1988,- С. 125-139 (Рук. деп. в ВИНИТИ 23. 03. 88 N 2246 -В 88).

35. Гудимова Е. Н., Денисенко С. Г. Биология, экология и ресурсы промысловой голотурии кукумарии. // Мурманск: ММБИ.- 1995.- 43 с.

36. Гуревич В. С., Елисеев В. В., Шаталина JI. В., Крылова И. Б. Влияние эссенциальных фосфолипидов на интенсивность липоперокси-дации в миокарде при экспериментальной постгипоксической реоксигенации // Вопросы медицинской химии.- 1992,- Т. 38.- № 2,- С. 55-57.

37. Турин И. С., Ажгихин И. С. Биологически активные вещества гидробионтов - источник новых лекарств и препаратов. // М. : 1981.134 с.

38. Деканосидзе Г. Е., Чирва В. Я., Сергиенко Т. В., Уварова Н. И. Исследование тритерпеновых гликозидов (установление строения и синтез). // Тбилиси: Мецниереба,- 1982.- 150 с.

39. Дембицкий В. М., Васьковский В. У. Распределение плазмалогенов в различных классах фосфолипидов морских беспозвоночных // Биология моря.- 1976.- № 1.- С. 68-72.

40. Дембицкий В. М. Плазмалогены в липидах морских беспозвоночных.// Биология моря.- 1979.- № 5.

41. Дерюгин К. М. Фауна Кольского залива и условия ее существования // Игр., 1915,- 930 с.

42. Джус В. Е., Зензеров. В. С. К вопросу хозяйственного использования массовых видов иглокожих Баренцева моря // Географические проблемы изучения и освоения Арктических морей: Тез. докл. 2-ой Всесоюзн. конф.- Л.- 1985.- С. 139-140.

43. Догель В. А. Зоология беспозвоночных / Ред. Ю. И. Полянского." М. : Высшая школа. // 1981.- С. 522-523; 543-547.

44. Доулл Дж. Безопасность питания и токсикология. Безвредность пищевых продуктов // М,- 1986.- С. 270-284.

45. Дудаев В. А., Аббуд А., Иванов А. С. Влияние полиненасыщенных жирных кислот на функциональные свойства тромбоцитов и перекисное окисление липидов у больных ишеми-ческой болезнью сердца // Кардиология.- 1987.- Т. XXVII, № 6.

46. Дьяконов А. М. Иглокожие Северных морей. // Л. : Изд- во АН СССР.- 1933,- 166 с.

47. Еляков Г. Б. Химическое исследование тритерпеновых гли-козидов из корней женьшеня (PANAX GINSENG С. A. MEYER) // Автореф. дис. . . д-ра хим. наук,- Новосибирск, 1967,- 39 с.

48. Еляков Г. Б., Стоник В. А. Терпеноиды морских организмов // М. : Наука, 1986,- 270 с.

49. Еляков Г. Б., Стоник В. А. Стероиды морских организмов // М. : Наука-1988.- 208 с.

50. Ермолин Г. А., Батраков С. Г., Внуков В. А., Гиршович Е. С. Способ получения комплекса сапонинов. Авторское свидетельство А 61 К 35/56 // С 07 J19/00 (19) SU (II) 938444 А,(22) 28. 11. 80.

51. Жизнь животных. Т. 2 / Под ред. Л. А. Зенкевича.// М. : Просвещение.- 1968,- С. 197-247.

52. Зайцев В. П., Ажгихин И. С., Гандель В. Г. Комплексное использование морских организмов и других животных.// М.: Пищевая промышленность,- 1980,- 279 с.

53. Зайцев В. П., Кизеветтер И. В., Лагунов Л. Л., Макарова Т. И., Миндер Л. П., Подсевалов В. Н. Технология рыбных продуктов.// М.: Пищевая промышленность.- 1965.- С. 667-673.

54. Иванов А. В. Промысловые водные беспозвоночные.// М. : Советская наука.- 1955.- С. 210-213.

55. Иванов А. В., Полянский Ю. И., Стрелков А. А. Большой практикум по зоологии беспозвоночных,- М. : Высшая школа,- 1985.-С. 339-348.

56. Калинин В. И., Стоник В. А., Авилов С. А. Гомологическая изменчивость и направленность в эволюции тритерпеновых гликозидов голотурий (Holothurioidea, Echinodermata). // Журнал общей бологии.-1990,- Т. 51- № 2- С. 247 -254.

57. Калинин В. И. Морфологические закономерности в эволюции тритерпеновых гликоздов голотурий (Holothurioidea, Echinodermata) // Журнал общей биологии,- 1992,- Т. 53, № 5,- С. 672 -684.

58. Калинин В. И., Левин В. С., Стоник В. А. Химическая морфология: Тритерпеновые гликозиды голотурий (Holothurioidea, Echinodermata).// Владивосток: Дальнаука, 1994.- 274 с.

59. Карагодина 3. В., Корф И. И., Львович Н. А., Аббакумов А. С., Погожева А. В., Левачев М. М. Перекисное окисление липидов при использовании в лечении гипертонии и ишемической болезни сердца полиненасыщенных жирных кислот семейства омега три // Вопросы медицинской химии.- 1992.- Т. 38,- № 3.- С. 20-21.

60. Карнаухов В. Н. Роль моллюсков с высоким содержанием каротиноидов в охране водной среды от загрязнения. // Пущино. -Препринт НЦ Биологических исследований АН СССР. Ин-т биологической физики АН СССР,- 1978,- С. 45-73.

61. Карнаухов В. Н., Федоров Г. Г. Методы определения содержания каротиноидов и витамина А в тканях животных. // Ме-тодическе рекомендации. Пущино: Центр биологических исследований АН СССР в Пущине. - 1982. - 28 с.

62. Карнаухов В. Н. Биологические функции каротиноидов //М.: Мир, 1988. - 242 с.

63. Кейтс М. Техника липидологии. Выделение, анализ и идентификация липидов. // М. : Мир, 1975.- 322 е.. Кизеветтер И. В. Жиры морских млекопитающих.// Владивосток.- 1953.- 103 с.

64. Кизеветтер И. В. Лов и обработка промысловых беспозвоночных дальневосточных морей. // Владивосток, 1962.- С. 152165.

65. Кизеветтер И. В., Макарова Т. И., Зайцев В. П., Миндер Л. П., Подсевалов В. Н., Лагунов Л. Л. Технология обработки водного сырья. // М.: Пищевая промышленность.- 1976.- С. 626-663.

66. Костецкий Э. Я. , Герасименко Н. И. Фосфолипидный состав и филогения иглокожих // Биология моря. - 1984. - № 1. - С. 39-46.

67. Костецкий Э. Я., Сергеюк Н. Н. Фосфолипиды и их плазмалогены в мышечной ткани морских беспозвоночных // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. - 1985. - Т. 21.- С. 235 - 241.

68. Корепанова Е. А., Попов А. М., Анисимов М. М. др. // Действие тритерпеновых гликозидов на ионную проницаемость холестеринсодержащих бислойных липидных мембран // Доклады АН СССР - 1980,- Т. 252,- № 5.- С. 1261.

69. Коростелев С. А., Буюклинская О. В., Привалов Э. Г. // Всесоюзная конференция по клинической витаминологии: Тезисы.- М., 1991.- С. 107-108.

70. Кузнецова Т. А. Химическое исследование тритерпеновых гликозидов дальневосточной голотурии Зйскорш уаротсш Зекпка.-Автореф. дисс. . канд. химич. наук.- Владивосток, 1972.- 24 с.

71. Леванидов. И. П., Мельникова О. М. Тепловая денатурация солерастворимых белков мышечных тканей мороженных рыб и промысло вых беспозвоночных // Исследования по технологии рыбных продуктов.- Владивосток, 1973,- С. 8-12.

72. Левин В. С. Дальневосточный трепанг. Владивосток: Дальневосточное книжное изд- во, 1982.- 191 с.

73. Левин В. С. О биологической роли и происхождении токсичных гликозидов иглокожих // Журнал общей биологии.- 1989.- Т. Ь 2.- С. 207.

74. Левин В. С., Калинин В. И., Мальцев И. И., Стоник В. А. Строение тритерпеновых гликозидов и систематика щитовидно-щупальцевых голотурий // Биология моря,- 1985,- № 2.- С. 3-11.

75. Левинтон Ж. Б. Гигиенические аспекты рационального использования в питании населения океанических рыб и других гидробионтов.- Рациональное питание.-Киев.-1982- вып. 17.- С.58-61.

76. Левйнтон Ж. Б.,Роговая А. Б.,Полищук Л. Р., Звенигородская И. Д. Методическая схема гигиенической оценки пищевой значимости новых объектов океанического промысла.- Биологические ресурсы больших глубин и пелагиали открытых районов Мирового океана: Тез. докл. научно-практич. конф.- Мурманск.- 1981.- С. 164-166.

77. Левйнтон Ж. Б., Роговая А. Б. Медико-социальные аспекты использования в питании ресурсов Мирового океана и внутренних водоемов // Эколого-гигиенические проблемы питания населения: Материалы республиканской научной конференции.- Киев, 1992,- С. 103.

78. Лескова Г. Ф., Удовиченко В. И. // Пат. физиология,- 1991.-№ 6,- С. 46-47.

79. Лукьянова О. Н., Шмидт Т. Я. Концентрация каротиноидов у морских беспозвоночных в условиях загрязнения // Биология моря.-1993,- № 2,- С. 92-101.

80. Манасова Т. А. Липиды дальневосточного трепанга, их гликолипидемическое действие в эксперименте,- Автореферат дисс. к. б. н. Манасовой П. А.- 1978.- 40 с.

81. Меньшикова Е. Б., Зенков Н. К. Окислительный стресс при воспалении // Успехи современной биологии.- 1994.- Вып. 2.-Т. 117.-С. 155-171.

82. Методы биохимических исследований(липидный и энергетический обмен).// Учеб.пособиепод ред. М.И. Прохоровой - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та.- 1982.- 272 с.

83. Наседкина Е. А., Касьяненко Ю. И., Слуцкая Т. Н. Особенности химического состава мяса иглокожих // Рыбное хозяйство.- 1973,- № 7.- С. 81- 82.

84. Никитин A.B. Иммуномодуляторы природного просхождения и их синтетические аналоги.// В кн.: Итоги науки и техники. Сер.

Иммунология. Актуальные проблемы молекулярной иммунологии.- М.-ВИНИТИ,-1986.- С. 62-86.

85. Низовская Л. В. Морфология и сезонные изменения гонад у трепанга // В кн.: Биологические и медицинские исследования на Дальнем Востоке // Владивосток.- 1971,- С. 149-153.

86. Новикова Н. В. Разработка способов рационального использования кукумарии японской // Автореферат дисс...к.т.н. - М. - 1985. -24 с.

87. Орлов Б. Н., Гелашвили Д. Б. Зоотоксинология (ядовитые животные и их яды).- М. : Высшая школа, 1985.- 280 с.

88 . Парамонова Э. Г., Коробкина Г. С. Сычева А. А., Чумакова Е. Н. Лечебное действие диеты с включением продуктов моря при коронарном атеросклерозе // Сов. медицина..- 1966.- № 2,- С. 11-15.

89. Подобед О. В., Федорова Л. М., Якушева И. В. Абакумова О. Ю., Цветкова Т. А., Ковалева Г. Г., Гаврильчак А. В., Шехтер А. Б. Влияние фосфатидилхолина на репарационные процессы в клетках печени при ее остром повреждении // Вопросы медицинской химии.-1995,- Т. 41.- № 1.- С. 13-16.

90. Покровский В. И. О развитии научных исследований в области охраны здоровья человека и окружающей среды. - Вестник АМН СССР,- 1989.- № 9.- С. 4-5.

91. Принципы и методы токсикологической оценки химических веществ. Гигиенические критерии состояния окружающей среды.-Женева: ВОЗ, 1991.- 158 с.

92. Прокофьева Н. Г., Лоенко Ю. Н., Анисимов M. М. Влияние некоторых тритерпеновых гликозидов на включение С-аланина в клетки костного мозга крыс.- Изв. АН СССР,- Сер. биол.- 1981.- № 5.-С. 794-797.

93. Прокофьева Н. Г., Агафонова И. Г., Киселева М. И., Кузнецова Т. А, Анисимов M. М. Противоопухолевые свойства

голотоксина А 1, выделенного из дальневосточной голотурии.// Медико-социальные аспекты проблемы "человек-океан". Тез. докл. научно-практ. конф., посвящ. 30-летию ВГМИ(1958-1988). Владивосток. - 1988,- С. 272-273.

94. Пропп М. В. Экология прибрежных донных сообществ Мурманского побережья Баренцева моря,- Л. : Наука,- 1971.- 119 с.

95. Рамбеза Е. Ф., Байдалинова Л. С. Новое направление в обогащении рыбных жиров // Новые направления исследований в области традиционных технологий переработки рыбы: Сб. науч. тр.- Т. 2,- Калининград. - 1996,- С. 47-54.

96. Ржавская Ф.М. Жиры рыб и морских млекопитающих. - М. : Пищевая промышленность.- 1976.- 470 с.

97. Ржехина В. П., Сергеева А. Г. Руководство по методам исследования, технохимическому контролю и учету производства в масложировой промышленности,- Т. 1.- Ленинград,- 420 с.

98. Самойлов А. В., Гиршович Е. С. Антибиотические свойства морских животных класса ЕоЫкиго1йеа // Антибиотики.- 1980.- № 7,-С. 307-313.

99. Савватеева Л. Ю. Консервированная кукумария - ценный продукт питания // Рыбное хозяйство.- 1984 .- № 1.- С. 76-77.

100. Савватеева Л. Ю. Перспективы комплексного использования голотурий дальневосточных морей // Рыбное хозяйство.- 1987.- № 1.-С. 72-74.

101. Самсонов М. А., Левачев М. М., погожева А. В., Корф И., Аббакумов А. С. Влияние диеты, содержащей полиненасыщенные жирные кислоты семейства омега три на биохимические показатели и жирнокислотный состав клеточных мембран больных ишемической болезнью сердца и семейной гиперлипидемией // Вопросы медицинской химии.- 1992.- Т. 38.- № 3.- С. 22-24.

102. Сафронова T.M., Ткаченко T.A., Чураков В.г., Шнейдерман С.И. Оценка промысловых беспозвоночных по уровню моносахаров // Изв. ТИНРО,- 1976,- Т. 99.- С.16 - 18.

103. Седов А. М. Характеристика иммуномодулирующих свойств тритерпеновых гликозидов голотурий.- Автореферат дисс. . . на соиск. уч. степ. к. б. н.- М., 1984,- 23 с.

104. Селюк О. Д. Опыт приготовления сушеной кукумарии // Известия ТИНРО,- 1951,- Т. XXXIV,- С. 237-247.

105. Семенов Б.Н., Одинцов А.Б. Производство биологически активных веществ из отходов промпереработки гидробионтов .Калининград.- 1994.- 280 с.

106. Сергеев А. В. Иммунофармакология и механизм действия неспецифических противоопухолевых иммуномодуляторов.- Дисс. д-ра мед.наук.- М,- 1987,- 325 с.

107. Сергеев А. В., Вакулова Л. А., Шашкина М. Я., Жидкова Т. А. Медико-биологические аспекты каротиноидов // Вопросы медицинской химии,- 1992,- № 6,- С. 8-11.

108. Сергеев Б. Ф. Морской огурец - он же трепанг // Химия и жизнь,- 1992,- № 8,- С. 59-61.

109. Сдвигова А. Г., Панасенко О. М., Лукьященко И. В., Сергиенко В. И., Лопухин Ю. М. Коррекция полиненасыщенными жирными кисло тами в комплексе с антиоксидантами перекисного окисления липопротеинов при экспериментальном атеросклерозе // Вопросы медицинской химии.- 1993.- Т. 39.- № 2.- С. 12-16.

110. Скурихин В.Н., Шабаев C.B. Методы анализа витаминов А, Е, Д и каротина в кормах и биологических объектах и продуктах животноводства. Справ, изд. - М.: Химия., 1996 - 96 с.

111. Слуцкая Т. Н., Леванидов И. П. Гексозаминсодержащие вещества голотурий и количественные изменения их в процессе

производства пищевых продуктов. // Исследования по технологии рыбных продуктов.- Владивосток.- 1977,- С. 32-36.

112. Слуцкая Т. Н. Исследования по химии и технологии трепанга и кукумарии.- Автореферат диссертации к. т. н.- М.- 1975.- 23 с.

113. Слуцкая Т. Н. О химическом составе и строении мяса беспозвоночных. //Известия ТИНРО.- 1971,- Т. 15.- С. 204-208.

114. Слуцкая Т. Н. Сравнительная характеристика сушеных трепанга и кукумарии // Исследования по технологии рыбных продуктов.- Владивосток, 1972,- С. 139- 145.

115.Сотникова E.H., Дракина JI.B., Исаев В.А. Роль питания в профилактике и коррекции предопухолевых состояний в группах риска,- Вопросы питания.-1993.- № 4,- С.41-44.

116. Стоник В. А., Кузнецова Т. А., Еляков Г. В., Баранова С. И., Кармен Кондэ. Способ получения тритерпенового гликозида, обладающего цитостатическим действием.- Авторское свидетельство 3(51)А61 К35/56(19) SU (11)902356 А,(22)05. 12. 79.

117. Стукалова С.П. Проблемы и перспективы использования морепродуктов.// Экономические и научно-технические проблемы развития рыбной промышленности.-Сб.науч.тр.ТИНРО. - 1984. - С. 8289.

118. Таникава И. Продукты морского промысла Японии. Под ред. В.П.Быкова // М.: Пищевая промышленностью - 1975. - 352 с.

119. Толкачева В. Ф., Лебская Т. К., Бариляк И. Р. К вопросу об иммуномодулирующих свойствах каротиноидов и комплекса сапонинов из морского огурца // International journal of Immunorehabilitation.- 1997,- № 4.- P. 192.

120. Турищев С. Н., Большакова Г. Б., Саканделидзе О. Г. Влияние комплексов тритерпеновых гликозидов из голотурий на репарацию печени. // Известия АН СССР. Сер. биологическая.- 1991.-№ 2,- С. 306-308.

121. Феофилова Е. П. Каротиноиды грибов: биологические функции и практическое использование (обзор) // Прикладная биохимия и микробиология,- 1994,- Т. 30, Вып. 2,- С. 181-195.

122. Филимонова Г.Ф. Функциональная морфология пищеварительной системы иглокожих.// Л.: Наука. - 1979.- 120 с.

123. Хотимченко C.B., Васьковский В.Е. Полярные липиды морскх макрофитов.// Владивосток: деп.в ВИНИТИ 01.07.86. - 1986,- № 5134-В 86.

124. Цыганов Э. Г. Метод прямого метилирования липидов после тонкослойной хроматографии без элюирования с силикагеля // Лабораторное дело,- 1971,- № 8.- С. 490-493.

125. Чефранова Н. И., Гофельд А. М., Богадельников И. В., Лебская Т. К., Никитина Н. В., Шалтышова Н. И. Использование пищевых биоактивных добавок в реабилитации детей из экологически неблагоприятных зон // International journal of Immunorehabilitation. -1997,- №. 4,- P. 69.

126. Шахман Е.В., Даценко З.М., Шумейко В.Н. Антиоксидантное действие фосфолипидного комплекса, выделеного из морских организмов.// Укр. биохим. журнал. - 1994. - № 4. - С. 87-95.

127. Шашкина М. Я., Мкртчян Т. В., Сергеев А. В., Соколова И. А., Бабак В. Г., Раманаускайте Р. Ю., Жидкова Т. А., Суюнчев О. А. Разработка оригинальной пищевой формы каротиноидов и медико-биологическая оценка ее в качестве лечебно-профилактического средства в онкологии // Каротиноиды в онкологии: Материалы симпозиума. - M ., 1992,- С. 144-146.

128. Шелекова В. М., Шашкин П. Н., Шашкина М. Я., Скурихин В. Н., Двинская Л. М. К вопросу о биологи-ческой доступности В -каротина. // Вопросы медицинской химии. - 1992 - № 6. - С.25-27.

129. Шлянкевич М. А., Дризе О. Б., Хабибулина В. М., Сергеев A.B., Привалова Э. Г., Никитюк В. Г. Антимутагенные свойства

препаратов, содержащих p-каротин. // Вопросы медицинской химии.-1992,- № 6,- С. 23-25.

130. Шорыгин А. А. Иглокожие Баренцева моря,- Тр. ГОИН, 1928,- Т. 3, Вып. 4.

131. Щеглов В. В., Анисимов M. М., Попов А. М., Себко И. Г. Влияние некоторых гликозидов на пронцаемость плазматических мембран для УФ-поглощающих веществ в дрожжевых клетках Saccharomyces carlsbergensis // Антибиотики.- 1979.- № 1,- С. 49-54.

132. Щеглов В. В., Баранова С. И., Анисимов M. М. и др. Изучение антимикробного спектра действия некоторых тритерпеновых и стероидных гликозидов // Антибиотики. - 1979. - № 3. - С. 270-272.

133. Эмануэль H. М., Кнорре Д. Г. Курс химической кинетики .// М.: Высшая школа.- 1969.- 431 с.

134. Эртель JT. Я. Кормовая мука из кукумарии // Известия ТИНРО,- 1951,- Т. 34,- С. 249-256.

135. Эпштейн JI.M., Силкин В. А., Гонтарева О. Ю. Изменение холинэстеразной активности лиофилизированных ганглиев кальмара при хранении // Исследования по технологии новых объектов промысла. - Сборник научных трудов ТИНРО. - Владивосток. - 1980. -С. 18-25.

136. Эпштейн JI. М., Акулин В.Н., Ковалев М.Н. Современные принципы безотходной технологии переработки рыб и беспозвоночных - Тезисный доклад. Всесоюзная конференция : Исследование и рациональное использование биоресурсов дальневосточных и северных морей СССР , и перспективы создания технических средств для освоения неиспользуемых биоресурсов открытого океана,- Владивосток. - 1985. - С. 186-187.

137. Ackman R. G., Moleod С. Total lipid and mitritionally important fatty acids of some Nova Schotia fish and shellfish food products // J. Tood Sci. Technol. - 1988.- V. 21.- № 4 - P. 390-398.

138. Bartlet J. С., Iverson J. L. Estimation of fatty acid composition by gas chromatography usig peak heights and retention time // J. Assoc. Offic. Analyt. Chemsts.- 1966,- V. 49.- № 1,- P. 21-27.

139. Bendich A. // Ibid.- 1989.- V. 119.- P. 112-115 ( Цит. no: Сергеев A.B., Вакулова Л.А.ю Шашкина М.Я., Жидкова Т.А. Медико-биологические аспекты каротиноидов.// Вопросы мед. химиию- 1992.-№ 6,- С.8-12.

140. Bendish A., Shapiro S. S. // J. Nutr. - 1986,- V. 116. - P. 22542262,- (Цитировано по Сергеев и др.; 1992).

141. Boas М., Mourao Р., Vieira R., Baretto-Bergter Е. Identification of a glicisylceramide fron the sea cucumber Luwigothurea grísea // Cient. Cult. - 1995.-V. 46,- № 4,- P. 280-282.

142. Bullock E., Dawson C.J Carotenoid Pigments of the Holothurian Psolus faricii Duben et Koren ( the Skarlet Psolus) // Сотр. Biochem. Phisiol. - 1970,- V. 34,- P. 799-804.

143. Cantafora A., Hasella R., Angeliko M., et. al. // Europ. J. clin. Invest.- 1992,- V. 22,- P. 777-782.

144. Chanley J. D. and Green G. Toxicity in sponges and holothurians: a geographical pattern // Science.- 1974,- P. 951-953.

145. Chen, Jiann-Chu; Chen, Kou-Wel; Chen, Jiann-Ming . Effects of saponin on survival, growth, molting and feeding of Penaeus japonicus juveniles. //Aquaculture.- 1996,- V.144, № 1-P. 165-175.

146. Darah I., Satheesh N., Ibrahim C. Growth inhibition of dermatiphytes by atratoxins of Holothuria atra (Jaegar) // J. Biosci. (Penang).- 1995.- V. 6,- № 1.- P. 40-48.

147. Elyakov G. В., Stonic V. A., Levina E. V., Slanke V. P., Kuznetsova and Levin V. S. Glycosides of marine invertebrates - 1. A comparative study of the glycoside fractions of Pacific sea cucumber // Сотр. Biochem. Physiol.- 1973,- 44 В.- P. 325-336.

148. FAO/WHO conference on food standarts, chemicals in food traide.- V. 1.- Rome.- 1991.- 490 p.

149. Fenical W. Marine fermentation as a source of industrial chemi,cals. 3 rd International Marine Biotechnology conference. Tromso,Norway.- 1994.-P.43.

150. Findlay J.A., Daljet J.Frondogenin, a New Aglycone from the Sea Cucumber Cucumaria frondosa // J. Nat. prod.- 1984 a. -V. 47.-P. 320-324.

151. Findlay J.A., Daljet J. Matsuokas J., Moharir E.A. Constituents of the Sea Cucumer Cucumaria frondosa // J. Nat. prod.- 1984 b.-V. 47.-P.560.

152. Friess S.L., Durant R.C., Chanley J.D., Fash F.J. Role of the Sulphate Charge Center in Irreversible interaction of Holothurin A with Chemoreceptors // Biochem. Pharmacol.- 1967.- V.16.- P. 1617-1625.

153. Friess S.L., Durant R.C., Chanley J.D. Further Studies on Biological Actions of Steroidal Saponins Produced by Poisonous Echinoderms // Toxicon .- 1968.- V.6.- p.81-84.

154. Friess S.L., Chanley J.D., Hudak W.V., Weems H.B. Interactions of echinoderm Toxins Hoothurin A and Its Desulfatet Derivative with the Cat Superiocervical Ganglion Preparation // Toxicon.- 1970.- V.8.- P.211-219.

155. Girard M., Belanger J., ApSimon J. W., Garneau F.-X.,Harvey C., Brisson J.-R. Frondoside A. A Novel Triterpene Glycoside from the Holothurian Cucumaria frondosa. Can.J.Chem.- 1990.-V. 68.- № 1.- P. 1118.

156. Gorshkov B.A., Gorshkova I.A., Stonik V.A., Elyakov G.B. Effect of Marine Glycosides on Adenosinetriphosphatase activity // Toxicon.-1982.- V. 20.- № 3,- P. 655-658.

157. Gorshkova I.A., Gorshkov B.A., Stonik V.A. Inhibition of Rat Brian Na - K - ATPase by Triterpene Glycosides from Holothurians // Noxicon.- 1989.- V. 27,- № 8,- P. 927-936.

158. Gorshkova I.A., Kalinovsky A.I., Ilyin S.G,, Gorshkov B.A., Stonik V.A. Physicchemical Characteristics of Interaction of toxic Triterpene Glycosides from Holothurians with Rat Brian Na - K - ATPase // Toxicon.-1989b.- V. 27,- № 8.- P 937- 945.

159. De Groof R.C., Narahashi T. The Effects of Holothurin A on the Resting Membrane Potential and Conductance of Sguid Axon // Europ. J. Parmacol.- 1976,- V.36.- P. 337-346.

160. Heywood R., Palmer A., Gregson R., Hummler H. // Toxikology.-1985,- V. 36,- P. 91-100.

161. Jamieson G. R., Reid E. N. The analysis of oils and fatts by gas chromatorgaphy. Correlation of retention data with polarity of stationary phase // J. Gromatogr.- 1969.- V. 42,- P. 304-310.

162. Jordan A.J. On the ecology and bechaviour of Cucumaria frondosa (Echinodermata: Holothuroidea) at Lamoine Beach, Meine // Dissertation of Doctor Philosophy (in Oceanography). - 1972.- 75 p.

163. Kalinin V., Prokofieva N., Likhatskaya G., Schentsova E., Agafonova I., Avilov S., Drozdova O. Hemolytic activities of triterpene glycosides from the holothurian order Dendrochirotida: Some trends in the evolution of this group of toxins // Toxicon.- 1996.- V. 34,- № 4,- P.475-483.

164. ICariya Y., Watabe S., Ochiai Y., Hashimoto K., Murata K. Glycosamino-Glycan from the Body Wall of the sea Cucumber Stichopus japonicus // Comp. Biochem. Physiol. - 1990,- V.95 B.- N 2.- P. 387- 392.

165. Kariya Y., Watabe S., Ochiai Y., Hashimoto K., Murata K. Glycosamino-Glycan from the Body Wall of the sea Cucumber Stichopus japonicus // Comp. Biochem. Physiol. - 1990,- V.95 B.- N 2,- P. 387- 392.

166. Kelecom A., Dalose D. and Firsch B. Chemical studies of marine insertebrates. XX. The Structures of the genuine aglicones of thelothurins A and B, defensise saponin of the indo-pacific sea cucumber Telenota ananas Jaeger (eshinodermata) // Tetrahedron.- 1976,- № 32,- P. 2313-2319.

i 167. Kensll С., Soltysik S. Methods for enhancing drug delivery with

modified saponins. // Пат. N PCT / US 93 / 06348 WO 94/01118 МКИ. A 61 К 31 / 70 31 / 705. 39 / 00 .Заявл. 02.07.92. N 906870; Опубл. 01.07.93.

168. Kitagava I., Nishino Т., Matsuno Т., Anutsu H., Koygoku Y. Structure of holothurin В - a pharmacologically active triterpen-oligoglycoside from the sea cucumber Holothuria leucospilota Brandt // Experientia.-1978.- № 11,- P. 987-988

169. Kitamura A., Tanaka J., Higa T. New cytotoxic carotenoids from the sponge Phalcellia stelliderma // J. Nat. Toxins.- 1996,- V. 5- № 2,- P. 219-224.

170. Kobatake Y., Hirahara F., Innami S., Nishide E. // J. Nutr. Sci. Vitaminol.- 1983,- V. 29.- № 1,- P. 11-21.

171. Lebskaya Т., Tolkacheva V., Filatov A., Kravchenko L., Filatova N., Kozucherova I., Pleskach V.// Immunoactive and antitumor preparations from Cucumaria frondosa. - International conference "Biotechnology ST. Peteraburg - 94",- St.Petersburg.- Russia.- 1994,- P.30-31.

172. Lewis R. W. Fatty acid composition of some marine animals from various depth // Fish. Res. Bd. Canada.- 1967,- V. 24,- P. 1101-1115.

173. Liaaen-Jensen S. Marine carotenoids // In Scheuer P.(Ed). "Marine Natural Products. Chemical and Biological Perspectives".- New York: Academic Press.- 1978,- V. 2 - P. 2-73.

174. Linko Y-Y.,Hayakawa K. Docosahexaenoic acid: A valuable nutraceutical? // Trends food sci.technol.- 1996.-P. 63.

175. Lopez-Berestein G., Lenk P., Hayman A. Formulation and use of carotenoids in treatment of cancer: Пат. 93/13751 WO, МКИ5 A 61 К 9/127, 31/20.- Заявл. 13.01.93; N РСТ/ U S 93/ 00232; Опубл. 22.07.93.

176. Di Mascio, Murphy M.E., Sies H. // Ibid. - 1991. - V.53 - N 1. -P. 194 - 200 .

177. Matsuno T. and Ishida T. Distribution and seasonal variation of toxic principles of sea cucumber (Holothurici leucospilota Brandt) // Experientia.- 1969.-V. 25- 1261 p.

178. Matsuno T., Shimada T. Distribution and seasonal variations of toxic principles of sea cucumer (Holothuria Leucospilota Brandt) // Expiental.- 1969.- V. 25,- 1267 p.

179. Matsuno T., Sakushima A., Ishida T. Seasonal variations of saponin and its distribution in the body of sea cucumber, Stichopus yaponicus // Bull. Japan. Soc. Sci. Fich.- 1973,- V. 39.- № 3,- P. 307-310.

180. Matsuno T., Ito T. Gonadal pigments of sea cucumber Stichopus japonicus Selenca (Echinodermata) // Experimentia.- 1971.- V. 27.- F. 5,- 509 P-

181. Miamoto T., Togawa K., Higuhi R., Komori T. Constituents of Holothurioidea.I. Isolation and Structures of Three Triterpenoid Aglycones, Cucumechinol , A,B, and C, from the Sea Cucumer Cucumaria echinata// Liebigs Ann.Chem. - 1989- P.39-42.

182. Miamoto T., Togawa K., Higuhi R., Komori T ., Sasaki T. Constituents of Holothurioidea. II. Six Newly Identified biologically Active Triterpenoid Glyciside Sulfates from Sea Cucumers Cucumaria echinata // Liebigs Ann.Chem. - 1990- P.453-46.

183. Nigrelli R. F. The effects of holothurin on fish and mice with Sarcoma 180 // Zoologica (New York).- 1952,- V. 37,- P. 89-90.

184. Nigrelli R. F., Stempien M. F., Ruggieri G. D., Liguori V. R., Cecil J. T. Substances of potencial biomedical importance from marine organisms // Fed. Prog.- 1967,- V. 26,- P. 1197-1205.

185. Nisikavwa M., kimura S., Maruyama K. Brain function améliorant composition, learning capacity enhancer, mnemonic agent, dementia preventive, dementia curative or functional food with brain function améliorant effect. // Пат. N PCT / JP92101626, WO 94/05319. Заявл. 02.09.92; N PCT / J P92101626; Опубл. 15.12.92.

186. Odukoya O., Houghton P., Adelusi A., Omogbai E., sanderson L., Whitfield P. MolluscicidaJ triterpenoid glycosides of Dialium guineense. // Pharmacognosy Res. Lab., Dep.Pharm., King's Coll.- London.- J. Nat. Prod.

- V.59.- № 6,- P. 632-634.

187. Ohizumi Y. Pharmacological studies of physiologically active substances isolated from marine organisms.// J.Toxicol.:Toxin Rev.-1996.-V.15.- № 2,- P.109-128.

188. Pocsidio N. G. Holothurin of some Philippine holothurians and its hemolitic actinsity // The Philippine Journal of Science.- 1983,- V. 1-2,- P. 13-28.

189. Pocsidio N. G. The mutagenicity potential of holothurin of some Philippine holothurians // The philippine journal of science.- 1983.- V. 1-2.-P. 1-11.

190. Ridzwan B., Kaswandi M., Azman M., Fuad M. Screening for antibacterial agents in three species of sea cucumbers from coastal areas of Sabah // Gen.Pharmacol.- 1995,- V. 26,- № 7.-P.1539-1543.

191. Romashina N. A. Marine invertebrates as a source of eicosapentaenoic and other polyenoic acids // Biol. Morya (Vladivostok).-1983,- № 1,- P. 66-68.

192. Rose W.C., Reed F.C., Silinoff P.,Dradner W.T. Immunotherapy of madison Lung Carcinoma and other murinetumors using lentian.// Canser Research.- 1984,- V. 44,- № 4,- P. 1368-1373

193. Rudi A., Goldberg I., Stein Z., Kashman Y., Benayahu Y., Schleuer M . Sodwanones G, H, and I, new citotoxic triterpenes from a marine sponge // J. Nat. Prod. - 1995.-V. 58,- № 11.- P. 1702-1712.

194. Russell F., Bogert C. M. Gila monstr: its biologi, venoms and bite

- a review // Toxicon.- 1981.- V. 19.- P. 341-359.

195. Runnstrom J., Runnstrom S. Ueer die Entwicklung von Cucumaria frondosa und Psolus phantapus // ergens Mus.Aarbok (1918-1919).1972 - № 5,- P. 1-99.

196. Santamaría L., Bianchi A. // Prev. Med.- 1989.- V. 18,- № 5.- P. 603-623.

195. Sedov A.M., Apollonin A.V., Sevastyanova E.K. Cucumarioside a new immunomodulator from Far Eastern Holothuria.// Proceedings of AllUnion Conference .- 1988,- Vladivostok.- P. 70-71.

197. Semper C. Holothurien. - In: Reisen im Archipel der Philippinen. - Wiesbaden. - 1868. - 288 c.

198. Sharova L.V., Sedov A.M., Vinogradov I.V., Volobueva E.E. A possibility of application of cucumarioside and other immunomodulators as adaptiogenes under condotions of prolonged immobilization stress in mice.// These of papers of the Ail-Union Conference "Biologically active compounds of hydrobionts - new medicinal, medical-prophylactic and technical preparations".- 1991.- P. 97.

199. Sheikh Y.M., Djerassi C. Biosynthesis Sterols in the Sea Cucumber Stichopus californicus // Tetrahedron Lett. - 1977.- N 36.- P.3111-3114.

200. Shcheglov V.V., Baranova S.I., Anisimov M.M. Studi of antimicrobic spectrum of some triterpen and steroid glycosids.// Antibiotics.-1979.- № 1,- P. 270-272.

201. Shibayama J. // Exp. molec. Patch.- 1989.- V. 51,- P. 48-55.

202. Shimada S. Antifungal steroid glicoside from sea cucmber // Science.- 1969.- V. 163,- P. 1462.

203. Shimada S. Antifungal steroid glicoside from sea cucumber // Science.- 1969.- P. 1462.

204. Slater T. Free radical mechanismus in tissue injury.- London, 1972,- 218 p.

205. Slavina E.G. Lymphocites - natural killers (NK cells) - effector cells of natural antitumorigenic resistence.// In: Science and technics results. Series Oncology, Immunology of tumors. Moscow.- VINITI.- 1984.- № 13.-P. 98-141.

206. Svetashev V.I., Levin V.S., Cham Ngok Lam, Do Tuet Nga. Lipid and Fatty Acid Composition of Holothurians from Tropical and Temperate Waters // Comp. Biochem/Phisiol. - 1991.- V.98 b.- P.489-494.

207. Tanaka Y. Seasonal changes occurig in the gonad of Stichopus japonicus // Bull.Fac.Fish. Hokkaido Univ. - 1958 b. - V.9. - N 1. - P. 2936.

208. Tanikawa E. Studies on the proteins of the meat of sea cucumber Stichopus japonicus Selenca .- Mem. Fac. Fish.Hokkaido Univ. - 1955 a.-V.3.- P. 1- 91.

209. Tolkacheva V., Lebskaya T., Filatov A., Kravchenko L., Filatova N., Pleskach V. Immunoactive and antitumorigenic properties of saponins complex from Cucumaria frondosa.// 3 International Marine Biotechnology Conference.- Tromso.- Norvay.- 1994.-P. 99.

210. Tsushima M., Fujiwara Y., Matsuno T. Novel marine di-Z-carotenoids: Cucumariaxanthins A, B b C from the sea cucumber Cucumaria japonica.// J.Nat.Prod..- 1996,-V.59.- № 1,- P. 30-34.

211. Turner A., Smith D. Characterisation of the principle steroidal saponins of the starfish Marthasterias glacialis: structures of the aglicones // Nature.- 1971,- V. 233,- P. 210.

212. Vaskovsky V.E., Kostetsky E.Y., Svetashev V.I., Zhukova I.G., Smirnova G.P. Glycolipids of Marine Invertebrates // Comp.Biochem.Physiol. - 1970,- V.34. - P.163.

213. Vaskovsky V.E., Khotimchenko S.V. HPTLC of polar lipids of all and other plants. // J. High Resol. Chromatogr.-1982.- V.5.- № 11,- P. 634636.

214. Vasendin G.M. A universal reagent for phospholipid analisis. // J. Chromatogr.- 1975,-V.114.- P. 129-141.

215. Vray B., Hoebeke J., Saint-Guillain M., Leloup R., Strosberg F. A new guantitative fluorimetric assay for phagocytosis of bacteria (Proceedings). // Arc. Int. Phisiol. Biochim.- 1979.- № 87,- P. 864-866.

\ 216. Vray B., Saint-Gullian M., Leloup R., Hoebeke J. Kenetic and

morphologic studies of rat macrophage phagocytosis. // J. Reticuloendothel Sog.- 1081,- № 29.- P.307-319.

217. Welsh R.M., Karre K., Hamsson M., Kumkel L., Kisleng R.V. Interferon-mediated protein of tumor target cells against lysis by mouse natural killer cells. / J. Immunology.- 1981.-V. 126.-№ l.-P. 219-225.

218. Yamanouchi T. On The poisonous substance contained in j Holothurians // Publ. Seto Marine Biol..- 1955,- V. 4,- P. 183-203.

219. Yamamura Y., Ogura T., Lab Sakatani M., Hirao F., Kishimoto S., Fukuoka M., Takado M., Kawahava M., Furuse K., Kawahara 0., Ykegami H., Ogava N.// Randomized controlled study of adjuvant immunotherapy with Nocardia rubra cell wall skeleton for inoperable lung cancer. Canser Research.- 1983.-V.43.-№ 11.- P. 5575-5579.

220. Yasumoto T., Nakamura K., Hashimoto Y. A new saponin Holothurin B, isolated from sea cucumber holothuria vagabunda and Holothuria lubrica // Experientia.- 1967,- V. 31.- P. 7-10.