Обоснование и оценка эффективности интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга при хирургическом лечении больных ишемической болезнью сердца. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.26, кандидат медицинских наук Бурнос, Сергей Николаевич

• Бурнос, Сергей Николаевич
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Бурнос, Сергей Николаевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 НОВЫЕ ТЕХНОЛОГИИ В ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ СЕРДЦА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Эпидемиология и патогенетические основы лечения больных ишемической болезнью сердца.

1.2 История развития клеточной терапии ишемической болезни сердца.

1.3 Характеристика мононуклеаров костного мозга.

1.4 Механизмы ангиогенеза и регенерации миокарда.

1.5 Области применения клеточной терапии.

1.6 Методы использующиеся для изоляции и доставки клеток.

1.7 Эффективность клеточной терапии.

1.8 Нерешенные аспекты клеточной терапии.

ГЛАВА 2 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИХ ОБСЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Характеристика групп больных.

2.2 Показания к интракоронарному введению аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга.

2.3 Методика получения клеточной суспензии.

2.4 Методика доставки клеточной суспензии.

2.5 Методы обследования больных.

ГЛАВА 3 ЭФФЕКТИВНОСТЬ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ ПО КЛИНИЧЕСКИМ ДАННЫМ И РЕЗУЛЬТАТАМ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ГЕМОДИНАМИКИ.

3.1 Оценка эффективности клеточной терапии по клиническим данным.

3.2 показатели внутрисердечной гемодинамики после интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга.

ГЛАВА 4 ВЛИЯНИЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ НА ПОКАЗАТЕЛИ ПЕРФУЗИИ И МЕТАБОЛИЗМА МИОКАРДА.

4.1 Изменения показателей перфузии сердца.

4.2 Изменения показателей метаболизма сердца.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Обоснование и оценка эффективности интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга при хирургическом лечении больных ишемической болезнью сердца.»

Распространенность ишеминеской болезни сердца высока и прогрессивно увеличивается: (Бокерия: JI.A., Гудкова P.F., 2008). По сравнению с- 2001 г в Российской Федерации распространенность. ИБС! увеличилась на 25,1%, а число новых случаев — на 23,6%.

Остается на высоком уровне летальность при остром инфаркте миокарда. В 2007 г она составила в Российской Федерации 15,9%.

Увеличение доли лиц старшего возраста, с одной стороны, и. развитие поражений коронарных артерий в более раннем возрасте, с другой, определили' важность повышения эффективности лечения этого заболевания. В последнее время- предпочтение в лечения ИБС отдается хирургическим и интервенционным методам (Чазов Е.Щ 2000; Араблинский А. В., 2001). Причем в; настоящее время« даже при: многососудистом поражении все большее распространение получают эндоваскулярные методы коррекции (Араблинский А-.В., 2007).

Оба метода, аорто-коронарное шунтирование и коронарная; ангиопластика со стентированием имеют свои показания и противопоказания; Общим противопоказанием; для; них является поражение дистального русла коронарных артерий;. поражение, мелких сосудов. Учитывая, что такого рода, поражения имеют примерно 20-25% больных с атеросклерозом коронарных артерий, у которых консервативное лечение-также малоэффективно,, существует довольно большая группа пациентов; которым необходима дополнительная помощь.

В арсенал этой помощи в последнее время включена клеточная терапия:

Boyle A.J., Schulman S.P.,. Hare J.M., 2006). Этот метод основан, на использовании стволовых клеток костного мозга (Galinanes M., 2004; Fuchs

S., 2003; Rúan W., 2005; Schächinger V., 2004; Meyer G.P., 2006; Perin E.C.,

2003; Bartunek. J., 2005). В частности, задача значительного усиления репаративных процессов в миокарде за счет стимуляции неоангиогенеза, и 5 возможно, кардиомиогенеза решается с помощью интракоронарной трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга ^гаиег В.Е., 2002; Аввнпи В., 2002; Wollert К.С., 2004; ТапэзепБ Б, 2005).

Многие вопросы клеточной терапии ИБС до настоящего времени остаются нерешенными или спорными. Необходимо разработать безопасную и эффективную технологию получения и доставки мононуклеарных клеток костного мозга к пораженному миокарду, а также механизмы оценки их лечебного действия, позволяющие получить достоверные данные, подтверждающие эффективность этого метода лечения.

Цель исследования

Улучшить результаты лечения больных ишемической болезнью сердца, используя интракоронарное введение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга.

Задачи исследования

1. Разработать методику забора костного мозга и технологию его обогащения для интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток.

2. Разработать оптимальную технологию доставки аутологичных мононуклеарных клеток и эффективные дозы трансплантата.

3. Изучить влияние клеточной терапии на клиническое течение ишемической болезни сердца и показатели внутрисердечной гемодинамики.

4. Изучить влияние клеточной терапии на показатели метаболизма миокарда у больных ишемической болезнью сердца.

5. Разработать показания и противопоказания к применению клеточной терапии у больных ишемической болезнью сердца.

Научная новизна результатов исследования.

Впервые на протяжении пяти лет изучено влияние интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга на клинические показатели, внутрисердечную гемодинамику, перфузию и метаболизм миокарда у больных ишемической болезнью сердца с дистальным и диффузным поражением коронарного русла. Изучены клинические показатели: функциональный класс стенокардии напряжения, толерантность к физической нагрузке, выживаемость больных в течение пяти лет. Получены данные изменения фракции изгнания, конечного диастолического и конечного систолического размеров левого желудочка, а также перфузии и метаболизма миокарда в течение пяти лет. Разработана технология получения суспензии аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга, которая не является цитотоксичной и минимизирует негативное влияние на получаемые клетки со стороны окружающей среды, позволяющая получить материал для трансплантации, содержащий до 180млн. мононуклеарных клеток, и до 3 млн. клеток с маркером СЭ34+.

На основании полученных данных показано улучшение в основной группе относительно контрольной группы: функционального класса стенокардии напряжения, пятилетней выживаемости, гемодинамических показателей. А также улучшение перфузии и метаболизма миокарда после введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга. Установлены сроки положительного действия клеточного препарата — начиная с 3 месяцев и до 4 лет.

Практическая значимость результатов работы

Полученные результаты позволяют утверждать, что интракоронарное введение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга по разработанной технологии показано больным ишемической болезнью сердца при дистальном и диффузном поражении коронарного русла, невозможности выполнения аорто-коронарного шунтирования и эндоваскулярной ангиопластики со стентированием коронарных артерий.

Этот метод может также использоваться при отсутствии возможности повторной реваскуляризации миокарда у больных с окклюзией шунтов.

Предпочтительным методом доставки суспензии аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга в миокард является интракоронарное введение, отличающееся прецизионностью, безопасностью и эффективностью.

Контроль эффективности клеточной терапии у больных ишемической болезнью сердца следует осуществлять с помощью исследования показателей внутрисердечной гемодинамики, метаболизма миокарда, а также на основании изменения клинического течения заболевания.

Положения, выносимые на защиту

1. Разработанная технология получения суспензии аутологичных мононуклеарных клеток из 120 мл костного мозга позволяет получить материал для трансплантации, содержащий до 180 млн. мононуклеарных клеток, и до 3 млн. клеток с маркером CD34+. В отличие от многих зарубежных аналогов технология не является цитотоксичной и минимизирует негативное влияние на получаемые клетки со стороны окружающей среды.

2. Доставка аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга интракоронарным методом является физиологичным, безопасным и эффективным в лечении больных ишемической болезнью сердца.

3. Применение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга эффективно в лечении ишемической болезни сердца у больных с дистальным поражением венечных артерий и у больных с рецидивом стенокардии после прямой реваскуляризации.

4. На- фоне клеточной терапии ишемической болезни сердца достоверно улучшаются показатели внутрисердечной гемодинамики.

5. Интракоронарное введение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга способствует улучшению перфузии и метаболизма миокарда.

6. Интракоронарное введение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга достоверно уменьшается функциональный класс стенокардии и улучшает показатели выживаемости у больных со сниженной фракцией выброса.

Личный вклад диссертанта в проведенное исследование

Диссертант принимал участие в обследовании всех больных до выполнения интракоронарной трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга, в заборе костного мозга, в изоляции мононуклеарной фракции костного мозга; в интракоронарном введении аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга, в контрольных обследованиях больных после трансплантации, в формировании и обследовании контрольной группы больных.

Внедрение результатов исследования

Полученные результаты являются основополагающими данными для продолжения применения этой методики в лечении описанной категории больных в рамках закрытого исследования с целью установления необходимых доз клеточного препарата, частоты применения методики у одного и того же пациента для достижения наилучшего результата и другие нерешенные вопросы по данной проблеме на кафедре факультетской хирургии СПбГМУ им. акад. И.П. Павлова (197022, Санкт-Петербург, ул. Льва Толстого, д. 6/8). Положения диссертации используются в учебном процессе на кафедре факультетской хирургии СПбГМУ им. акад. И.П. 9

Павлова и курсе последипломного образования «Сердечно-сосудистая хирургия».

Применявшиеся методы статистического анализа

В связи с тем, что тип распределения изучаемых значений отличался от нормального, использовались непараметрические методы статистического анализа. Для оценки количественных показателей рассчитывались медиана и интервал. Сравнение связанных количественных показателей внутри групп осуществлялось с помощью t критерия Вилкоксона, сравнение количественных показателей двух независимых групп осуществлялось с помощью критерия U Манна-Уитни. Достоверность различий оценивалась по таблице критических значений соответствующего критерия при уровне значимости 0,05.

Апробация и реализация результатов работы

Основные результаты, изложенные в работе, представлялись на международном конгрессе «56th Congress of the European Society for

Cardiovascular Surgery» (Венеция, Италия, 17-18 мая 2007 г.); международной конференции «13th Annual Meeting of International Society for Cellular Therapy»

Сидней, Австралия, 23-28 июня 2007 г.); XIII Всероссийском съезде сердечно-сосудистых хирургов (Москва, Россия, 25-28 ноября 2007г.); международном конгрессе «57th Congress of the European Society for

Cardiovascular Surgery» (Барселона, Испания, 24 апреля - 27 апреля 2008 г.); международной конференции «14th Annual Meeting of International Society for

Cellular Therapy» (Майами, США, 17-20 мая 2008 г.); международном tb конгрессе «58 Congress of the European Society for Cardiovascular Surgery» (Варшава, Польша, 30 апреля - 2 мая 2009 г.); международном конгрессе «Congress of European Society of Cardiology «Heart Failure 2009» (Ницца,

Франция, 30 мая - 2 июня 2009 г.). По теме диссертации опубликованы 9 научных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 124 страницах машинописного текста, состоит из списка сокращений, введения, 4 глав, заключения, - выводов, практических рекомендаций и списка литературы, в котором приведены 15 источников на русском языке и 173 источника на иностранных языках. Работа иллюстрирована 27 таблицами и 56 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Сердечно-сосудистая хирургия», Бурнос, Сергей Николаевич

выводы

1. Разработанная технология получения суспензии аутологичных мононуклеарных клеток из 120 мл костного мозга позволяет получить материал для трансплантации, содержащий до 180 млн. мононуклеарных клеток, и до 3 млн. клеток с маркером CD34+.

2. Интракоронарный метод трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга является физиологичным, безопасным и эффективным в лечении больных ишемической болезнью сердца.

3. Клеточная терапия ишемической болезни сердца в виде интракоронарной трансплантации аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга в ближайшие и отдаленные сроки улучшает показатели внутрисердечной гемодинамики.

4. Интракоронарное введение аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга способствует улучшению перфузии и метаболизма миокарда.

5. Интракоронарное введение мононуклеарных клеток костного мозга достоверно уменьшает функциональный класс стенокардии и улучшает показатели выживаемости у больных со сниженной фракцией выброса.

6. Показаниями к выполнению интракоронарного введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга являются диффузное или дистальное поражение коронарных артерий, отсутствие возможности выполнить операцию коронарного шунтирования или эндоваскулярной ангиопластики со стентированием коронарных артерий, а также отсутствие возможности повторной реваскуляризации миокарда у больных с окклюзией шунтов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Интракоронарное введения аутологичных мононуклеарных клеток костного мозга показано больным ишемической болезнью сердца с явлениями сердечной недостаточности при дистальном поражении коронарного русла, невозможности выполнения коронарного шунтирования и эндоваскулярной ангиопластики со стентированием коронарных артерий.

2. Интракоронарное введение аутологичных клеток костного мозга также может использоваться как альтернативный метод лечения при отсутствии возможности повторной реваскуляризации миокарда и у больных с окклюзией шунтов.

3. Предпочтительным методом доставки суспензии аутологичных мононуклеаров костного мозга в миокард является интракоронарное введение, отличающееся прецизионностью, безопасностью и эффективностью.

4. Контроль эффективности клеточной терапии у больных ишемической болезнью сердца следует осуществлять с помощью исследования показателей внутрисердечной гемодинамики, метаболизма миокарда, а также на основании изменения клинического течения заболевания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Бурнос, Сергей Николаевич, 2011 год

1. Араблинский A.B. Транслюминальная баллонная ангиопластика у больных с многососудистым поражением коронарного русла. // Клиническая медицина,- 2001. №1.- С. 14-18.

2. Араблинский А. В., Громов Д. Г., Овесян 3. Р. Коронарное шунтирование или эндоваскулярная ангиопластика у больных ишемической болезнью сердца с многососудистым поражением венечного русла. // Клиническая медицина. 2007. - №3. - С. 15-21.

3. Боксрия JL А., Гудкова Р. Г. Сердечно-сосудистая хирургия — 2007. Болезни и врожденные аномалии системы кровообращения. М.: НЦССХ им. А. Н. Бакулева РАМН. - 2008. - 144 с.

4. Бурлев В.А. Гаснаров А.С., Аванесян Н.С., Волков Н.И., Стыгар Д.А. Факторы роста и их роль в регуляции репродуктивной функции у больных.// Проблемы репродукции.— 1998.-№3 С. 17-25.

5. Румянцев П.П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации. — Л.: Наука. 1982. - 288 с.

6. Толкачёв И.М. Реваскуляризация миокарда у пациентов с хронической сердечной недостаточностью. // Фундаментальные исследования. — 2009. №9 — С. 78-80.

7. Фриденштейн А.Я., Лурия Е.А. Клеточные основы кроветворного микроокружения. М.: Медицина. 1980. - 216 с.

8. Фриденштейн А.Я., Чайлахян Р.К., Лациник Н.В., Панасюк А.Ф., Кейлис-Борок И.В.

9. Стромальные клетки, ответственные за перенос микроокружения в кроветворной и107лимфоидной ткани.// Проблемы гематологии и переливания крови. 1973. - Vol. 18, №10-С. 14-23.

10. Чазов Е.И. Проблемы лечения больных ишемической болезнью сердца. // Терапевтический архив. 2000. - №9. - С. 5-9.

11. Чертков И. Л., Дризе Н. И. Как обеспечивается поддержание кроветворной системы.// Гематология и трансфузиология. 1998. - Vol. 43, №4. - С. 3-8.

12. Шевченко Ю.Л. Медико-биологические и физиологические основы клеточной терапии в сердечно-сосудистой хирургии. Спб.: Наука. - 2006. - 287 с.

13. Ширяева Т., Князев Ю. Гормональные факторы и задержка внутриутробного развития.// Врач, 1998.-№5.-С. 22-24.

14. Aldhous P. "Flawed" stem cell data withdrawn. // New Scientist. 2007. - Vol. 139, № 2591. - P. 12-12.

15. Alison M.R., Poulsom R., Jeffery R., Dhillon A.P., Quaglia A., Jacob J., Novelli M., Prentice G., Williamson J., Wright N.A. Hepatocytes from non-hepatic adult stem cells. // Nature. 2000. -Vol. 406, №6793. - P. 257.

16. Amann В., Liidemann C., Ratci R., Schmidt-Lucke J.A. Autologous bone-marrow stem-cell transplantation for induction of arteriogenesis for limb salvage in critical limb ischaemia. // Zentralblatt fur Chirurgie. 2009. - Vol. 134, №4. - P. 298-304.

17. Arras M., Ito W.D., Scholz D., Winkler В., Schaper J., Schaper W. Monocyte activation in angiogenesis and collateral growth in the rabbit hindlimb. // The Journal of clinical investigation. -1998.-Vol. 101, №1,-P. 40-50.

18. Asahara T., Kawamoto A. Endothelial progenitor cells for postnatal vasculogenesis. // American journal of physiology. Cell physiology. 2004. - Vol. 278, №3. - P. 572-579.

19. Asahara T., Murohara T., Sullivan A., Silver M., van der Zee R., Li T., Witzenbichler В., Schatteman G., Isner J.M. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. // Science. 1997. Vol. 275, №5302 - P. 964-967.

20. Bader A., Al-Dubai H., Weitzer G. Leukemia inhibitory factor modulates cardiogenesis in embryoid bodies in opposite fashions. // Circulation Research. 2000. - Vol. 86, №7. - P. 787-794.

21. Badiavas E.V. Ford D., Liu P., Kouttab N., Morgan J., Richards A., Maizel A. Long-term bone marrow culture and its clinical potential in chronic wound healing. // Wound repair and regeneration. 2007. - Vol. 15, №6. - P. 856-865.

22. Bagutti C., Wobus A.M., Fiissler R., Watt F.M. Differentiation of embryonal stem cells into keratinocytes: comparison of wild-type and beta 1 integrin-deficient cells. // Developmental Biology. -1996.-Vol. 179, №1.-P. 184-196.

23. Bain G., Kitchens D., Yao M., Huettner J. E., Gottlieb D. I. Embryonic stem cells express neuronal properties in vitro. // Developmental Biology. 1995. - Vol. 168, №2. - P. 342-357.

24. Barry F., Boynton R., Murphy M., Haynesworth S., Zaia J. The SI 1-3 and SH-4 antibodies recognize distinct epitopes on CD73 from human mesenchymal stem cells. // Biochemical and biophysical research communications. 2001. - Vol. 289, №2. - P. 519-524.

25. Bianco P., Costantini M., Dearden L.C., Bonucci E. Alkaline phosphatase positive precursors of adipocytes in the human bone marrow. // British journal of haematology. 1988. - Vol. 68, №4. - P. 401-403.

26. Boncoraglio G.B., Bersano A., Candelise L., Reynolds B.A., Parati E.A. Stem cell transplantation for ischemic stroke. // Cochrane database of systematic reviews (Online). 2010.- №9.- P. CD007231.

27. Boyle A.J., Schulman S.P., Hare J.M. Stem cell therapy for cardiac repair: ready for the next step. // Circulation. 2006. - Vol. 114, №4. - P. 339-352

28. Brenner M.K. Haematopoietic stem cell transplantation for autoimmune disease: limits and future potential. // Best practice & research. Clinical haematology. 2004. - Vol. 17, №2. - P. 359-374.

29. Bruder S.P., Horowitz M.C., Mosca J.D., Haynesworth S.E. Monoclonal antibodies reactive with human osteogenic cell surface antigens. // Bone. 1997. - Vol. 21, №3. - P. 225-235.

30. Bruder S.P., Ricalton N.S., Boynton R.E., Connolly T.J., Jaiswal N., Zaia J., Barry F.P.

31. Mesenchymal stem cell surface antigen SB-10 corresponds to activated leukocyte cell adhesion molecule and is involved in osteogenic differentiation. // Journal of bone and mineral research. -1998. Vol. 13, №4. - P. 655-663.

32. Brustle O., Jones K.N., Learish R.D., Karram K., Choudhary K., Wiestler O.D., Duncan I.D., McKay R.D. Embryonic stem cell-derived glial precursors: a source of myelinating transplants. // Science. 1999. - Vol. 285, №5428. - P. 754-756.

33. Buttery L.D., Bourne S., Xynos J.D., Wood H., Hughes F.J., Hughes S.P., Episkopou V., Polak J.M. Differentiation of osteoblasts and in vitro bone formation from murine embryonic stem cells. // Tissue Engineering. 2001. - Vol. 7, №1. - P. 89-99.

34. Cancedda R., Giannoni P., Mastrogiacomo M. A tissue engineering approach to bone repair in large animal models and in clinical practice. // Biomaterials. — 2007.- Vol. 28, №29. P. 4240-4250.

35. Chelluri L.K. Preliminary report on the safety, efficacy and functional recovery of spinal cord injury with cultured autologous bone marrow derived mesenchymal stem cells. // Cytotherapy. 2008. -Vol. 10, Supp. 1. - abstract 54.

36. Chen S.L., Fang W.W., Ye F., Liu Y.H., Qian J., Shan S.J., Zhang J.J., Chunhua R.Z., Liao

37. Cross M.J., Claesson-Welsh L. FGF and VEGF function in angiogenesis: signalling pathways, biological responses and therapeutic inhibition. // Trends in pharmacological sciences. 2001. - Vol. 22, №4.-P. 201-207.

38. Di Campli C., Gasbarrini G., Gasbarrini A. Review article: a medicine based on cell transplantation — is there a future for treating liver diseases? // Alimentary pharmacology & therapeutics. 2003. - Vol: 18, №5. - P. 473-480.

39. Evans M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. // Nature. 1981.-Vol. 292, №5819. - P. 154- 156.

40. Fairchild P.J., Brook F.A., Gardner R.L., Gra?a L., Strong V., Tone Y., Tone M., Nolan K.F., Waldmann H. Directed differentiation of dendritic cells from mouse embryonic stem cells. // Current Biology. 2000. - Vol. 10; №23.-P. 1515-1518.

41. Fernandez Vina R.J., Lima J.F., Saslavsky J., Camozzi L., Andrin O., Vrsalovic F., Ferdenandez Vina F.R. Compared response in type 1 and type 2 diabetes after cell therapy. // Cytotherapy. 2008. - Vol. 10, Supp. 1. - abstract 49.

42. Ferrari G., Cusella-De Angelis G., Coletta M., Paolucci E., Stornaiuolo A., Cossu G., Mavilio F.

43. Muscle regeneration by bone marrow-derived myogenic progenitors.// Science. 1998. - Vol. 279, №5356.-P. 1528-1530.

44. Filova E., Straka F., Mirejovsky T., Masin J., Bacakova L. Tissue-engineered heart valves. // Physiological research. 2009. - Vol. 58, №11.- P. 141-158.

45. Fraichard A., Chassande O., Bilbaut G., Dehay C., Savatier P. and Samarut J. In vitro differentiation of embryonic stem cells into glial cells and functional neurons. // Journal of Cell Science. 1995.-Vol. 108, №10. - P. 3181-3188.

46. Friedenstein A.J., Chailakhyan R.K., Gerasimov U.V. Bone marrow osteogenic stem cells: in vitro cultivation and transplantation in diffusion chambers. // Cell and tissue kinetics. 1987. - Vol. 20, №3,-P. 263-272.

47. Friedenstein A.J., Piatetzky-Shapiro I.I., Petrakova K.V. Osteogenesis in transplants of bone marrow cells. // Journal of embryology and experimental morphology. 1966. - Vol. 16, №3. - P. 381-390.

48. Fujii T., Yau T.M., Weisel R.D., Ohno N., Mickle D.A., Shiono N., Ozawa T., Matsubayashi K.,

49. R.K. Cell transplantation to prevent heart failure: a comparison of cell types. // The Annals of thoracic surgery. 2003. - Vol. 76, №6. - P. 2062-2070.

50. Fukuda K. Development of regenerative cardiomyocytes from mesenchymal)1 stem cells for cardiovascular tissue engineering. // Artificial organs. 2001. - Vol. 25, №3. - P. 187-193.

51. Fukuda K. Molecular characterization of regenerated cardiomyocytes derived from adult4mesenchymal stem cells. // Congenital anomalies. 2002. - Vol. 42, №1. - P. 1-9.

52. Galinanes M., Loubani M., Davies J., Chin D., Pasi J., Bell P.R. Autotransplantation of unmanipulated bone marrow into scarred myocardium is safe and enhances cardiac function in humans. // Cell Transplant. 2004. - Vol. 13, №1. - P. 7-13.

53. Gangji V., Hauzeur J.P., Matos C., De Maertclaer V., Toungouz M., Lambermont M.

54. Treatment of osteonecrosis of the femoral head with implantation of autologous bone-marrow cells. A pilot study. // The Journal of bone and joint surgery. American volume. 2004. - Vol. 86-A, №6. -P. 1153-1160.

55. Geng Y-J. Molecular mechanisms for cardiovascular stem cell apoptosis and growth in the hearts with atherosclerotic coronary disease and ischemic heart failure. // Annals of the New York Academy of Sciences. -2003.- Vol. 1010.-P. 687-697.

56. Gevers W. Protein metabolism of the heart. // Journal of molecular and cellular cardiology. 1984. -Vol. 16, №1,-P. 3-32.

57. Gorge G., Schmidt T., Ito B.R., Pantely G.A., Schaper W. Microvascular and collateral adaptation in swine hearts following progressive coronary artery stenosis. // Basic research in cardiology. 1989. - Vol. 84, №5. - P. 524-535.

58. Gottlieb D.I., Huettner J.E. An in vitro pathway from embryonic stem cells to neurons and glia. // Cells, Tissues, Organs. 1999. - Vol. 165, №3-5. - P. 165-172.

59. Grigolo B., Roseti L., Fiorini M., Fini M., Giavaresi G., Aldini N.N., Giardino R., Facchini A.

60. Transplantation of chondrocytes seeded on a hyaluronan derivative (hyaff-11) into cartilage defects in rabbits. // Biomaterials. 2001. - Vol. 22, №17. - P. 2417-2424.

61. Haynesworth S.E., Baber M.A., Caplan A.I. Cell surface antigens on human marrow-derived mesenchymal cells are detected by monoclonal antibodies. // Bone. 1992. - Vol. 13, №1. - P. 69-80.

62. Haynesworth S.E., Goshima J., Goldberg V.M., Caplan A.I. Characterization of cells with osteogenic potential from human marrow. // Bone. 1992. - Vol. 13, №1. - P. 81-88.

63. Hirashima M., Kataoka H., Nishikawa S., Matsuyoshi N., Nishikawa S. Maturation of embryonic stem cells into endothelial cells in an in vitro model of vasculogenesis.// Blood. 1999. - Vol. 93, №4.-P. 1253-1263.

64. Horslen S.P., McCowan T.C., Goertzen T.C., Warkentin P.I., Cai H.B., Strom S.C., Fox I.J.1.olated hepatocyte transplantation in an infant with a severe urea cycle disorder. // Pediatrics. -2003. Vol. 111, №6, Pt. 1. - P. 1262-1267.

65. Hussain M.A., Theise N.D. Stem-cell therapy for diabetes mellitus.// Lancet. 2004. - Vol. 364, №9429. - P. 203-205.

66. Isacson O. The production and use of cells as therapeutic agents in neurodegenerative diseases. // Lancet neurology. 2003. - Vol. 2, №7. - P. 417-424.

67. Jaiswal N., Haynesworth S.E., Caplan A.I., Bruder S.P. Osteogenic differentiation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro. // Journal of cellular biochemistry. -1997. Vol. 64, №2. - P. 295-312.

68. Johansson B.M., Wiles M.V. Evidence for involvement of activin-A and bone morphogenetic protein 4 in mammalian mesoderm and hematopoietic development. // Molecular and Cellular Biology. 1995.-Vol. 15, №1,-P. 141-151.

69. Johnstone B., Hering T.M., Caplan A.I., Goldberg V.M., Yoo J.U. In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells.// Experimental cell research. 1998.- Vol. 238, №1.-P. 265-272.

70. Kawasaki H., Mizuseki K., Nishikawa S., Kaneko S., Kuwana Y., Nakanishi S., Nishikawa S.I., Sasai Y. Induction of midbrain dopaminergic neurons from ES cells by stromal cell-derived inducing activity. // Neuron. 2000. - Vol. 28, № 1. - P. 31 -40.

71. Kinnaird T., Stabile E., Epstein S.E., Fuchs S. Current perspectives in therapeutic myocardial angiogenesis. //Journal of interventional cardiology. 2003. - Vol. 16, №4. - P. 289-297.

72. Klug M.G., Soonpaa M.H., Koh G.Y., Field L.J. Genetically selected cardiomyocytes from differentiating embronic stem cells form stable intracardiac grafts. // The Journal of Clinical Investigation. 1996. - Vol. 98, №1. - P. 216-224.

73. Korymasov E., Tyumina O., Rossiev V., Kazantscev A., Volchkov S., Toropovskiy A.

74. Randomized double blind placebo-controlled research of efficiency of treatment patients with lower limb arteriosclerosis obliterans by autologous transplantationrof bone marrow progenitor cells.// Cytotherapy. 2008. - Vol. 10, Supp. 1. - abstract 236.

75. Kramer J., Hegert C., Guan K., Wobus A.M., Müller P.K., Rohwedel J. Embryonic stem cell-derived chondrogenic differentiation in vitro: activation by BMP-2 and BMP-4. // Mechanism of Development. 2000. - Vol. 92, №2. - P. 193-205.

76. Kudo M., Wang Y., Wani Mi A., Xu M., Ayub A., Ashraf M. Implantation of bone marrow stem cells reduces the infarction and fibrosis in ischemic mouse heart. // Journal of molecular and cellular cardiology. 2003. - Vol. 35, №9. - P. 1113-1119.

77. Le Blanc K., Rasmusson I., Sundberg B., Gotherstrom C., Hassan M., Uzunel M., Ringden O.

78. Treatment of severe acute graft-versus-host disease with third party haploidentical mesenchymal stem cells. // Lancet. 2004. - Vol. 363, №9419. - P. 1439-1441.

79. Le Blanc K., Tammik C., Rosendahl K., Zetterberg E., Ringden O. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem ceils. // Experimental hematology. 2003. - Vol. 31, №10. - P. 890-896.

80. Lee S.H., Lumelsky N., Studer L., Auerbach J.M., McKay R.D. Efficient generation of midbrain and hindbrain neurons from mouse embryonic stem cells. //Nature Biotechnology. 2000. - Vol. 18, №6. - P. 675-679.

81. Li M., Pevny L., Lovell-Badge R., Smith A. Generation of purified neural precursors from embryonic stem cells by lineage selection. // Current Biology. 1998. - Vol. 8, №17. - P. 971-974.

82. Li T.S., Hamano K., Hirata K., Kobayashi T., Nishida M. The safety and »feasibility of the local implantation<of autologous bone marrow cells for ischemic heart disease.// Journal of cardiac surgery 2003. - Vol. 18, №2. - P. S69-S75.

83. Li Z.Q., Zhang M., Jing Y.Z., Zhang W.W., Liu Y., Cui L.J., Yuan L., Liu X.Z., Yu X., Hu T.S.

84. The clinical study of autologous peripheral blood stem cell transplantation by intracoronary infusion in patients with acute myocardial infarction (AMI). // International journal of cardiology. 2007.1. Vol. 115, №1. P. 52-56.t

85. Lieschke G.J., Dunn A.R. Development of functional macrophages from embryonal stem cells in vitro. // Experimental Hematology. 1995. - Vol. 23, №4. - P. 328-334.

86. Liu S., Qu Y., Stewart T.J., Howard M.J., Chakrabortty S., Holekamp T.F., McDonald J.W.

87. Embryonic stem cells differentiate into oligodendrocytes and myelinate in culture and after spinal cord transplantation. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 2000. - Vol. 97, № 11. - P. 6126-6131.

88. Lobb R., Sasse J., Sullivan R., Shing Y., D'Amore P., Jacobs J., Klagsbrun M. Purification and characterization of heparin-binding endothelial cell growth factors. // The Journal of biological chemistry. 1986. - Vol. 261, №4. - P. 1924-1928.

89. Lumelsky N., Blondel O., Laeng P., Velasco I., Ravin R., McKay R. Differentiation of embryonic stem cells to insulin-secreting structures similar to pancreatic islets. // Science. 2001. - Vol. 292, №5520.-P. 1389-1394.

90. Mackay A.M., Beck S.C., Murphy J.M., Barry F.P., Chichester C.O., Pittenger M.F.

91. Chondrogenic differentiation of cultured human mesenchymal stem cells from marrow. // Tissue engineering. 1998. - Vol. 4, №4. - P. 415-428.

92. Manohar R., Lagasse E. Transdetermination: a new trend in cellular reprogramming. // Molecular therapy. 2009. - Vol. 17, №6. - P! 936-938.

93. Maximow A.A. Der Lymphozyt als gemeinsame Stammzelle der verschiedenen Blutelemente in der embryonalen Entwicklung und im postfetalen Leben der Siiugetiere. // Folia Haematologica. -1909.-Vol. 8.-P. 125-134.

94. Mezey E., Chandross K.J., Harta G., Maki RIA., McKercher S.R. Turning blood into brain: cells bearing' neuronal' antigens generated in vivo from bone marrow. // Science. 2000. - Vol. 290, №5497-P. 1779-1782.

95. Moore K.A., Lemischka I.R. Stem cells and their niches. // Science. 2006. - Vol. 311, №5769. - P. 1880-1885.

96. Muraca M., Gerunda G., Neri D., Vilei M.T., Granato A., Feltracco P., Meroni M., Giron G., Burlina A.B. Hepatocyte transplantation as a treatment for glycogen storage disease type 1 a. // Lancet. 2002. - Vol. 359, №9303. - P. 317-318.

97. Multilineage differentiation of adult human bone marrow progenitor cells transduced with human papilloma virus type 16 E6/E7 genes.// Calcified tissue international. 2002. - Vol. 71, №5. - P. 447-458.

98. Owen M., Friedenstein A.J. Stromal stem cells: marrow-derived osteogenic precursors.// Ciba Foundation symposium. 1988. - Vol. 136. - P. 42-60.

99. Ozbaran M., Omay S.B., Nalbantgil S., Kultursay H., Kumanlioglu K., Nart D., Pektok E.

100. Autologous peripheral stem cell transplantation in patients with congestive heart failure due to ischemic heart disease. // European journal of cardio-thoracic surgery. 2004. - Vol. 25, №3. - P. 342-350.

101. Perkins A.C. Enrichment of blood from embryonic stem cells in vitro. // Reproduction, fertility, and development. 1998. - Vol. 10, №7-8. - P. 563-572.

102. Petersen B.E., Bowen W.C., Patrene K.D., Mars W.M., Sullivan A.K., Murase N., Boggs S.S., Greenberger J.S., Goff J.P. Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells. // Science. -1999. Vol. 284, №5417. - P. 1168-1170.

103. Pompilio G., Cannata A., Peccatori F., Bertolini F., Nascimbene A., Capogrossi M.C., Biglioli

104. P. Autologous peripheral blood stem cell transplantation for myocardial regeneration: a novel strategy for cell collection and surgical injection. // The Annals of thoracic surgery. 2004. - Vol. 78, №5.-P. 1808-1812.

105. Potocnik A.J., Nielsen P.J., Eichmann K. In vitro generation of lymphoid precursors from embryonic stem cells. // The EMBO Journal. 1994. - Vol. 13, №22. - P. 5274-5283.

106. Ml.Riddell S.R., Berger C., Murata M., Randolph S., Warren E.H. The graft versus leukemia response after allogeneic hematopoietic stem cell transplaritation. // Blood reviews. 2003. - Vol. 17, №3. - P. 153-162.

107. Risau W., Sariola H., Zerwes H.G., Sasse J., Ekblom P., Kemler R., Doetschman T.

108. Vasculogenesis and angiogenesis in embryonic-stem-cell-derived embryoid bodies. // Development. 1988. - Vol. 102, №3. - P. 471-478.

109. Risbud M.V., Sittinger M. Tissue engineering: advances in in vitro cartilage generation. // Trends in biotechnology. 2002. - Vol. 20, №8. - P. 351-356.

110. Schachinger V., Erbs S., Elsasser A., Haberbosch W., Hambrecht R., Holschermann H., Yu J., Corti R., Mathey D.G., Hamm C.W., Siiselbeck T., Assmus B., Tonn T., Dimmeler S., Zeiher

111. A.M. Intracoronary bone marrow-derived progenitor cells in acute myocardial infarction. // The New England journal of medicine. 2006. - Vol. 355, №12. - P. 1210-1221.

112. Schachinger V., Erbs S., Elsasser A., Haberbosch W., Hambrecht R., Holschermann H., Yu J.,

113. Corti R., Mathey D.G., Hamm C.W., Siiselbeck T., Werner N., Haase J., Neuzner J., Germing120

114. Schaper W., Ito W.D. Molecular mechanisms of coronary collateral vessel growth. // Circulation Research. 1996. - Vol. 79, №5. - P. 911-919.

115. Selden C., Hodgson H. Cellular therapies for liver replacement. // Transplant immunology. 2004. -Vol. 12, №3-4. - P. 273-288.

116. Siepe M., Akhyari P., Lichtenberg A., Schlensak C., Beyersdorf F. Stem cells used for cardiovascular tissue engineering. // European journal of cardio-thoracic surgery . 2008. - Vol. 34, №2. - P. 242-247.

117. Simmons P.J., Torok-Storb B. Identification of stromal cell precursors in human bone marrow by a novel monoclonal antibody, STRO-L // Blood. 1991. - Vol. 78, №1. - P. 55-62.

118. Slager H.G., Van Inzcn W., Freund E., Van den Eijnden-Van Raaij A.J., Mummery C.L.

119. Transforming growth factor-beta in the early mouse embryo: implications for the regulation of muscle formation and implantation. // Developmental Genetics. 1993. - Vol. 14, №3. - P. 212-224.

120. Smith G.L., Masoudi F.A., Vaccarino V., Radford M.J., Krumholz H.M. Outcomes in heart failure patients with preserved ejection fraction. // Journal of the american college of cardiology. -2003.-Vol. 41, №9.-P. 1510-1518

121. Soria B., Roche E., Berná G., León-Quinto T., Reig J.A., Martín F. Insulin-secreting cells, derived from embryonic stem cells normalize glycemia in streptozotocin-induced diabetic mice. // Diabetes. 2000. - Vol. 49, №2. - P. 157-162.

122. Stamm C., Westphal1 B., Kleine H.D., Petzsch M., Kittner C., Klinge H., Schümichen C., Nienaber C.A., Freund M., Steinhoff G. Autologous bone-marrow stem-cell transplantation for myocardial regeneration. // Lancet. 2003. -.Vol. 361, №9351. - P. 45-46.

123. Strauer B.E., Brehm M., Zeus T., Kostering M., Hernandez A., Sorg R.V., Kogler G., Wernet

124. P. Repair of infarcted myocardium by autologous intracoronary mononuclear bone marrow cell transplantation in humans. // Circulation. 2002. - Vol. 106, №15. - P. 1913-1918.

125. Strom S.C., Fisher R.A., Thompson M.T., Sanyal A.J., Cole P.E., Ham J.M., Posner M.P.

126. Hepatocyte transplantation as a bridge to orthotopic liver transplantation in terminal liver failure. // Transplantation. 1997. - Vol. 63, №4. - P. 559-569.

127. Strübing C., Ahnert-Hilger G., Shan J., Wiedenmann B., Hescheler J., Wobus, A.M.

128. Differentiation of pluripotent embryonic stem cells into the neuronal lineage in vitro gives rise to mature inhibitory and excitatory neurons. // Mechanisms of Development. 1995. - Vol. 53, №2. - P. 275-287.

129. Su L., Xu J., Ji B.X., Wan S.G., Lu C.Y., Dong H.Q., Yu Y.Y., Lu D.P. Autologous peripheral blood stem cell transplantation for severe multiple sclerosis. // International Journal of Hematology. -2006. Vol. 84, №3. - P. 276-281.

130. Teebken O.E., Kofidis T., Akhyari P., Haverich A. Tissue engineering: in vitro creation of tissue substitutes. // Zentralblatt fiir Chirurgie. 2007. - Vol. 132, №3. - P. 236-246.

131. Theise N.D., Badve S., Saxena R., Henegariu O., Sell S., Crawford J.M., Krause D.S. Derivation of hepatocytes from bone marrow cells in mice after radiation-induced myeloablation. // Hepatology. 2000. - Vol. 31, № 1. - P. 235-240.

132. Thomson J. A., Itskovitz-Eldor J., Shapiro S. S., Waknitz M. A., Swiergiel J. J., Marshall V. S., Jones J. M. Embryonic Stem Cell Lines Derived from Human Blastocysts. // Science. 1998. - Vol. 282, №5391.-P. 1145-1147.

133. Triffitt J.T., Oreffo R.O., Virdi A.S., Xia Z. Osteogenic stem-cell characterization and development: potentials for cytotherapy. // Cytotherapy. 2001. - Vol. 3, №5. - P. 413-416.

134. Tse H.F., Kwong Y.L., Chan J.K., Lo G., Ho C.L., Lau C.P. Angiogenesis in ischaemic myocardium by intramyocardial autologous bone marrow mononuclear cell implantation. // Lancet. -2003. Vol. 361, №9351. - P. 47-49.

135. Venkataramana N.K., Kumar S.K., Balaraju S., Radhakrishnan R.C., Bansal A., Dixit A., Rao

136. D.K., Das M., Jan M:, Gupta P.K., Totey S.M. Open-labeled study of unilateral autologous bone-marrow-derived mesenchymal stem cell transplantation in Parkinson's disease. // Translational research. 2010. - Vol. 155, №2. - P. 62-70.

137. Wakitani S., Saito T., Caplan A.I. Myogenic cells derived from rat bone marrow. mesenchymal stem cells exposed to 5-azacytidine. // Muscle and nerve. 1995. - Vol. 18, №12. - P. 1417-1426.

138. Westfall M.V., Pasyk K.A., Yule D.I., Samuelson L.C., Metzger J.M. Ultrastructure and cell-cell coupling of cardiac myocytes differentiating in embryonic stem cell cultures. // Cell Motility and the Cytoskeleton. 1997. - Vol. 36, №1. - P. 43-54.

139. Wiles M.V., Keller G. Multiple hematopoietic lineages develop from embryonic stem (ES) cells in culture. // Development. 1991. - Vol. 111, №2. - P. 259-267.

140. Yamane T., Hayashi S., Mizoguchi M., Yamazaki H., Kunisada T. Derivation of melanocytes from embryonic stem cells in culture. // Developmental Dynamics. 1999. - Vol. 216, №4-5. - P. 450-458.

141. Yamashita J., Itoh H., Hirashima M., Ogawa M., Nishikawa S., Yurugi T., Naito M., Nakao K., Nishikawa S. Flkl-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors. // Nature. 2000. - Vol.- 408, №6808. - P. 92-96.

142. Zhang Y., Li T.S., Lee S.T., Wawrowsky K.A., Cheng K., Galang G., Malliaras K., Abraham M.R., Wang C., Marban E. Dedifferentiation and proliferation of mammalian cardiomyocytes. // PloS one. 2010. - Vol. 5, №9. - P. el2559.

143. Zuba-Surma E.K Kucia M., Ratajczak M., Ratajczak M.Z. "Small * Stem Cells" in Adult Tissues: Veiy Small Embryonic-Like Stem Cells Stand Up! // Cytometry. Part A. 2009. - Vol. 75, № 1.- P. 4-13.