Новый споровый пробиотик Ирилис и его использование в ветеринарной практике тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Мефед, Кирилл Михайлович

• Мефед, Кирилл Михайлович
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мефед, Кирилл Михайлович

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. МИКРОФЛОРА ОРГАНИЗМА КРОЛИКОВ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИ

1.1. Состав нормальной микрофлоры и его динамика

1.2. Значение микрофлоры кишечника и ее роль в поддержании гомеостаза

1.3. Этиологические факторы и последствия дисбаланса нормальной микрофлоры организма

ГЛАВА 2. АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ТЕРАПИИ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КРОЛИКОВ

2.1. Проблемы антибиотикотерапии

2.2. Применение пробиотиков в ветеринарии

2.3. К вопросу о безопасности применения споровых пробиотиков ЧАСТЬ II. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

ГЛАВА 1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1.1. Материалы

1.2. Методы

1.2.1. Исследование культурально-биохимических свойств бактерий р .Bacillus

1.2.2. Исследование культурально-биохимических свойств микроорганизмов

1.2.3. Определение устойчивости бактерий к действию биологических жидкостей

1.2.4. Методы изучения безопасности

1.2.4.1. Изучение безвредности

1.2.4.1.1. Изучение вирулентности

1.2.4.1.2. Изучение токсичности

1.2.4.1.3. Изучение токсигенности

1.2.4.2. Изучение острой и хронической токсичности

1.2.5. Определение антагонистической активности

1.2.6. Метод определения адгезии микробов к эпителиальным клеткам кишечника крыс или мышей

1.2.7. Оценка персистирования штаммов рода Bacillus в желудочно-кишечном тракте мышей

1.2.8. Изучение влияния препарата Ирилис на физиологические показатели периферической крови животных

1.2.9. Методы статистической обработки результатов исследований

ГЛАВА 2. ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРЕПАРАТА ИРИЛИС

2.1 Изучение культуральных, биохимических и морфологических свойств бактерий рода Bacillus

2.2 Изучение безопасности штаммов

2.3 Изучение биологических свойств штаммов пробиотиков в опытах in vitro

ГЛАВА 3. КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРЕПАРАТА ИРИЛИС

3.1. Изучение лечебной эффективности Ирилиса при миксоматозе кроликов

3.2. Исследования влияния Ирилиса на рост и сохранность молодняка кроликов

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новый споровый пробиотик Ирилис и его использование в ветеринарной практике»

Актуальность темы

Согласно данным Департамента ветеринарии РФ, патология ЖКТ инфекционной этиологии, в общей структуре заболеваний молодняка животных составляет до 75% (26; 29).

Особенности этиологии и патогенеза инфекционных желудочно-кишечных заболеваний молодняка неонатального возраста связаны со структурными, количественными и качественными нарушениями в микробиоценозе кишечника, снижением активности колострального иммунитета, низкой естественной резистентностью, повышенной восприимчивостью новорожденных к бактерийным и вирусным антигенам, поступающим пероральным путем (27; 28; 60).

Особенно остро эта проблема стоит в одной из приоритетных областей пушного животноводства - кролиководческой отрасли. По данным НИИ Пушного звероводства и кролиководства, до 50% новорожденных крольчат подвержены различным инфекционным заболеваниям. Падеж молодняка наблюдается в первые 20 дней жизни, в основном, от острых кишечных инфекций и пневмонии различной этиологии (45; 47; 55).

Использование антибиотиков для профилактики желудочно-кишечных болезней, ассоциированных с дисбиотическими явлениями в микробиоценозе кишечника животных, проблему усугубило. Негативные последствия фармакологического прессинга выразились в нарастании быстрыми темпами множественной лекарственной резистентности условно патогенных микроорганизмов, адаптации бактерий к несвойственным им экологическим нишам, появлении и циркуляции в хозяйствах высоко вирулентных штаммов эшерихий, сальмонелл, стафилококков, иерсиний, кампилобактерий и др. микроорганизмов (9; 28; 70; 76).

С 2007 г в странах Евросоюза вводится полный запрет на использование пищевых антибиотиков ветеринарного назначения (89). Вышеизложенное заставляет исследователей пересмотреть многие методологические подходы к вопросам оптимизации контроля над эпизоотическим процессом болезней, возбудителями, которых являются условно патогенная бактериальная микрофлора.

Недостаточная эффективность традиционных мероприятий, направленная на повышение сохранности молодняка, обусловливает необходимость применения принципиально новых эффективных препаратов (5; 18; 64).

Наиболее полно этим требованиям отвечают пробиотики - препараты, содержащие живые микроорганизмы. Аспекты использования пробиотиков в ветеринарии затрагивают широкий круг проблем, который включает коррекцию кишечного биоценоза, иммунной, гормональной и ферментной систем животных (4; 12; 15; 77; 79; 84; 102).

В последние годы в ветеринарной практике в качестве препаратов-пробиотиков для терапии и профилактики желудочно-кишечных и других инфекций находят широкое применение бактерии рода Bacillus (32; 34; 35; 37; 38; 40; 44; 52; 83). В странах Евросоюза активно используются препараты Paciflor® СЮ, основу которого составляет штамм В. cereus АТСС 1489; Toyocerin (В. сег-eus var toyoi NCIMB-40112/CNCM-1012)-, BioPlus 2B (Я subtilis DSM 5750 и В. licheniformis DSM 5749) и некоторые другие (61; 62; 83; 89; 115). Следует отметить, что только японский препарат Toyocerin с успехом применяется при лечении заболеваний кроликов (89,122).

В ветеринарную практику Российской Федерации внедрены несколько бациллярных пробиотических препаратов: Споровит, Ветом-4, CJI-бактерин, Спо-ролакт, Ветбактерин, Субтилис, Биоплюс 2Б (1; 15; 35; 37; 38; 39; 40). Но ни один из перечисленных пробиотиков не применяется в кролиководстве. В последнее время российскими учеными разработан новый ветеринарный препарат Ирилис, включающий штаммы В. subtilis ВКПМ 2335 и В. licheniformis ВКПМ 2336 и обладающий рядом преимуществ перед отечественными и зарубежными аналогами (32). Однако этот препарат также не испытывался в кролиководстве.

Использование бациллярных препаратов в ветеринарии делает необходимым тщательное изучение безопасности применяемых культур. В тоже время, практически отсутствуют данные об изучении патогенности используемых штаммов пробиотиков (31).

Кроме того, также требуют совершенствования методы и критерии оценки биологических свойств штаммов, обеспечивающих лечебную эффективность препаратов (82; 83; 91).

Цели и задачи исследований

Целью исследования явилось изучение биологических свойств перспективного ветеринарного пробиотика Ирилис (В. subtilis ВКПМ 2335 и В. licheniformis ВКПМ 2336) in vitro и in vivo и внедрение его в систему лечебно-профилактических мероприятий при выращивании кроликов.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Сравнительное исследование пробиотических культур, входящих в перспективный ветеринарный препарат Ирилис и коммерческий пробиотик Paciflor® СЮ, по физиолого-биологическим характеристикам.

2. Изучение безопасности штаммов исследуемых пробиотиков.

3. Сравнительное исследование колонизационной активности (антагонизма, адгезивных свойств и персистирования в желудочно-кишечном тракте) штаммов, входящих в Ирилис и Paciflor® СЮ.

4. Проведение клинических испытаний и оценка лечебной и профилактической эффективности ветеринарного пробиотика Ирилис.

Научная новизна

Впервые при сравнительном изучении биологических свойств перспективного ветеринарного пробиотика Ирилис выявлено его преимущество перед коммерческим ветеринарным препаратом Paciflor® СЮ и доказана его безопасность для использования в ветеринарной практике.

Впервые продемонстрировано преимущество пробиотического препарата Ирилис перед коммерческим ветеринарным препаратом Paciflor® СЮ по антагонистической активности в отношении клинических штаммов УПБ, выделенных от больных кроликов.

Впервые доказана терапевтическая эффективность перспективного пробиотика Ирилис на фоне эпизоотии миксоматоза кроликов, позволившая значительно снизить падеж животных в различных возрастных группах, а также увеличить привес животных.

Практическая значимость

Показана высокая лечебно-профилактическая эффективность перспективного препарата Ирилис на поголовье кроликов в хозяйстве, длительно неблагополучном по многим инфекционным и инвазионным заболеваниям.

Изучено влияние пробиотика на рост, развитие и сохранность молодняка кроликов. Полученные данные подтверждены актами, утвержденными руководителями хозяйств. Разработаны наставления по применению ветеринарного пробиотического препарата Ирилис в кролиководческих хозяйствах.

Положения, выносимые на защиту

1. При разработке новых пробиотических препаратов ветеринарного назначения на основе спорообразующих бактерий необходимо проведение доклинических испытаний штаммов, входящих в пробиотики для ветеринарной практики.

2. Сравнительные исследования нового ветеринарного пробиотика Ирилис с коммерческим препаратом РаЫАог® СЮ выявили преимущество первого по показателю безопасности и специфической активности.

3. Экспериментально-клиническое изучение перспективного пробиотика Ирилис свидетельствует об его высоком лечебно-профилактическом потенциале.

Апробация результатов диссертации

Основные результаты диссертационной работы доложены и представлены в материалах научной конференции «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний» (Н. Новгород 2006 г.) и Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (Москва 2006 г.), на заседании кафедры микробиологии РУДН (2006,2007).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 5 печатных работ, в том числе в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК России, и в материалах всероссийских конференций.

Объем и структура работы

Диссертация построена по традиционному плану и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 2 глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 92 страницах текста компьютерной верстки и иллюстрирована 24 таблицами и 12 рисунками. Список литературы представлен 126 источниками (59 отечественными и 67 зарубежными).

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Мефед, Кирилл Михайлович

ВЫВОДЫ

1. Всестороннее изучение пробиотических культур В. subtilis ВКПМ 2335 и В. licheniformis ВКПМ 2336, входящих в состав препарата Ирилис, показало их безопасность, так как они не вызывали никаких патологических состояний у животных, не проявляли вирулентных, токсичных и токсигенных свойств.

2. Сравнительные исследования пробиотических культур, входящих в новый ветеринарный препарат Ирилис, показали их преимущества перед штаммом -основой коммерческого пробиотика Paciflor® СЮ по физиолого-биологическим характеристикам (по отсутствию гемолитической активности и ферментов, обусловливающих патогенные свойства, а также устойчивости к биологическим жидкостям).

3. Штаммы В. subtilis ВКПМ 2335 и В. licheniformis ВКПМ 2336 проявляют низкий уровень адгезивной активности и кратковременное персистирование в желудочно-кишечном тракте, что исключает условия для оказания неблагоприятного физиологического воздействия на организм животного при терапевтическом применении препарата.

4. Новый ветеринарный пробиотик Ирилис обладает выраженным антагонистическим воздействием на патогенные и условно патогенные штаммы.

5. Схема применения препарата Ирилис, апробированная в условиях кролиководческого хозяйства, показала высокую лечебно-профилактическую эффективность в рекомендуемых дозах при применении пробиотика в течение 7 суток.

6. Препарат Ирилис способствует увеличению прироста живой массы новорожденных крольчат в среднем на 150 г к концу откорма.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мефед, Кирилл Михайлович, 2007 год

1. Ананьина Ю. Г., Астраханцев В. И. Микробиологические и биохимические характеристики пищеварительных процессов у кроликов // Научные труды. Т. 17. «Содержание пушных зверей и кроликов». М.; 1978. С. 143-147.

2. Бакунина Л.Ф., Тимофеев И.В., Перминова Н.Т. Пробиотики на основе спорообра-зующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии //Биотехнология.-2001. № 2.-С. 48.

3. Бондаренко В.М., Воробьев A.A. Дисбиозы и препараты с пробиотической функци-ей.//Журн.микробиол.- 2004. -№1. С.84-92.

4. Войчишина Л.Г., Чаплинский В.Я., Вьюницкая В.А Применение спорообразующих бактерий в лечении больных дисбактериозом // Врачебное дело. 1991.-№ 6. - С. 73 -75.

5. Воробьев A.A., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: биологические свойства и защитные функции // Ж. микробиол., эпидемиол., иммунол. — 1999. — № 6. — С. 102-105.

6. Гончарова Г.И., Дорофейчук В.Г., Смолянская А.З., Соколова К.Я. Микробная экология кишечника в норме и при патологии // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - 34, № 6. - С. 462-466.

7. Горская Е.М., Манохина И.М., Горелов A.B., Поспелова В.В., Рахимова Н.Г. Методические рекомендации по определению адгезии бактерий кишечного происхождения к эпителиальным клеткам тонкого и толстого кишечника// М.- 1989.- 7 С.

8. Гриценко В.А., Брудастов Ю.А., Кудря Е.В., Васильева Л.И. Сравнительный анализ чувствительности к желчи энтеробактерий // Журн.микробиол.- — 2002. — № 3. — С. 65-67.

9. Девришов Д.А., Печникова Г.Н., Бедоева З.М. Биоспорин как терапевтическое средство против желудочно-кишечных заболеваний поросят//Новое в диагностике, лечении и профилактике болезней животных: Межвуз.сб. науч. тр.-М.:МГАВМиБ, 1996.-С. 15-19.

10. Н.Жданов П.И. Применение споробактерина жидкого поросятам // Ветеринария. -1994.-№7.- С. 41-44.

11. Емельяненко П. А., Козловский Ю. Е., Бурмистрова О. Е. Пробиотики как кормовые добавки для песцов // Тезисы докладов 3 Международной конференции «Актуальные проблемы биологии в животноводстве». С.398-399

12. Кириллов А. К. Миксоматоз кроликов// Кролиководство и звероводство. 2001 . N 1. С. 23-25.

13. Кругликов В.Д., Цураева Р.И., Рыжков И.В. и др. Возможность приживления Lactobacillus acidophilus в кишечнике белых мышей на фоне бактериальной терапии // Ж. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - № 1. - С. 67-69

14. Круглова Н. М. Терапия желудочно-кишечных заболеваний кроликов // Научные труды. Т.26. «Биология и ветеринария пушных зверей и кроликов». М.; 1981. С. 35-39.

15. Круглова Н. М. Незаразные желудочно-кишечные заболевания кроликов // Кролиководство и звероводство. №2. М.; 1980. С. 32-33.

16. Круглова Н. М. Предупреждение желудочно-кишечных заболеваний. // Кролиководство и звероводство, №1. М.; 1985. С. 26.

17. Круглова Н. М. Микрофлора желудочно-кишечного тракта кроликов в норме и при энтеритах // Научные труды. Т. 21. «Вопросы ветеринарии и биологии клеточных пушных зверей и кроликов». М.; 1980. С. 77-79.

18. Круглова Н. М. К вопросу бактериальной обсеменённости кормов для пушных зверей // Сборник научных трудов. Т. 36. «Биологически активные вещества в звероводстве и кролиководстве и пантовом оленеводстве». М.; 1989. С. 189-195.

19. Круглова Н. М. Выделение молочно-кислой микрофлоры // Научные труды. Т. 24. «Проблемы ветеринарии в пушном звероводстве и кролиководстве». М.; 1980. С. 64-67.

20. Круглова H. M. Бифидобактерии в ЖКТ кроликов // Научные труды. Т. 29. «Клеточное содержание норок, лисиц, соболей, песцов, нутрий и кроликов». M.; 1983. С. 223-227.

21. Литвин В.П., Резник С.Р., Вьюницкая В.А. Бактерин-CJI при острых желудочно-кишечных болезнях // Проблемы диагностики, терапии и профилактики незаразных болезней с.-х. животных: Сб. науч. тр. Воронеж: ВЗВИ, 1986.-С. 76-78.

22. Малик Н. И., Панин А.Н, Вершинина И.Ю. Пробиотики: теоретические и практические аспекты// Био №3(18), март 2002

23. Наташкина М.Ю. Профилактика миксоматоза кроликов // Журнал кролиководство и животноводство. 2006.2 с 19-22

24. Ноздрин Г.Л., Крачковская В.А., Наумкин И.В. и др. // Акт. вопр. ветеринарии / Тез. докл. науч.-практ. конф. факультета вет. мед. Новосибирск: НГАУ, 1997. - С. 20-21.

25. Осипова И.Г., Сорокулова И.Б., Васильева Е.А., Буданова Е.В. Доклинические испытания новых споровых пробиотиков//Вестн.РАМН №12,2005., с.36-39.

26. Пат. РФ 2264453 Биопрепарат «Ирилис» ветеринарного назначения» С 12 N 1/20, С12R, 2003

27. Пат. 5372810 США, МКИ5 А61К 37/00, C12N 1/00. Composition for the prévention and treatment of diarrhea in livestock / Onishi N., Yamashiro A., Ajinomoto C., Inc. (Япония) -№ 973572; Заявл. 09.11.92; Опубл. 13.12.94, № 1-229653; НКИ 424/93.4

28. Пат. 63-209580 Япония, МКИ6 C12N 1/20. Bacillus subtilis С-3102./ Япония. Опубл. 31.08.88

29. Патент РФ 2035186. Профилактический биопрепарат споролакт. А 61К 35/66, БИ №14,1995.

30. Патент РФ 1563699. Способ профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных животных. А 61 КЗ 5/74, БИ№ 18,1990.

31. Патент РФ 2129432. Биопрепарат субтикол для профилактики и лечения инфекционных болезней. А 61К 35/74, БИ №12,1999.

32. Патент РФ 2130316. Лечебно-профилактический биопрепарат бак-тиспорин. А61К35/74, БИ№14,1999.

33. Патент СССР 1710575. Штамм бактерий Bacillus sp компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергий, С 12 N1/20, БИ №5, 1992.

34. Патент СССР 1723117. Штамм бактерий Bacillus pulvifaciens, ис пользуемый для изготовления лечебно-профилактического препарата против бактериальных инфекций у животных. С 12 N 1/20, БИ №12,1992.

35. Патент РФ № 2188001 способ лечения миксоматоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

36. Плугина И. В. Молекулярно-генетический анализ распространения токсигенной микрофлоры// Автореферат на соискание учёной степени кандидата биологических наук. Пос. Родники МО.; 2004.18 с.

37. Пшеничнов В.А., Малинкин Ю.Н. Антивирусная активность интерферонов в экспериментах на животных //Вопр. вирусологии 1988.- 33, № 3. - С. 261-267

38. Резник С.Р., Вьюницкая В.А., Сорокулова И.Б. Биологические свойства споровых аэробных бактерий, выделенных из организма человека и животных./ Фитонциды. -Киев: Наукова думка, 1981. С. 35-40.

39. Рютова В. П., Несцепляева Л. И., Есипилан В. А. Роль бактериальной и вирусной инфекции в этиологии респираторных заболеваний кроликов // Научные труды. Т. 27. Разведение и содержание пушных зверей и кроликов. М.; 1982. С. 153-158.

40. Рютова В. П., Гришина Л. Е. Кормовые антибиотики в промышленном кролиководстве // Сборник научных трудов. Т. 34. «Биология и ветеринария в клеточном пушном звероводстве и промышленном кролиководстве». М.; 1986. С. 54-59.

41. Самгородская Н.В., Сорокулова И.Б., Ралко Н.М. Изучение действия HeicoTopix биопрепаратов на бактерии рода Yersinia // Микробиол. журн. 1994. - 56, № 4. - С. 8182

42. Смирнов В.В., Резник СР., Вьюницкая В.О. Современные предста ления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журн. 1993. - № 4. - С. 92-112.

43. Смирнов В.В., Резник СР., Василевская И.А. Спорообразующие аэробные бактерии продуценты биологически активных веществ. - Киев: Наукова Думка, 1982.

44. Самгородская Н.В., Сорокулова И.Б., Ралко Н.М. Изучение действия некотор1х биопрепаратов на бактерии рода Yersinia // Микробиол. журн. 1994. - 56, № 4. - С. 8182

45. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов//Антибиотики и химиотерапия, 1998,43:2 С.20-23

46. Сорокулова И.Б. Теоретическое обоснование и практика применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых пробиотиков/Дис.док.биол.наук., Киев., 1999., 180 с.

47. Сорокулова И.Б., Осипова И.Г., Терешкина Н.В., Васильева Е.А., Буданова Е.В. Изучение безопасности бацилл-пробиотиков// Вестн.РАМН №1,2006., с. 50-54

48. Стрижаков A.A. Проявление миксоматоза в 2005 г. на примере кролиководческих хозяйств из разных Регионов//Журнал кролиководство и животноводство. 2006. 1с 1922

49. Тараканов П. В., Эрнст JI. К. Перспективы создания новых пробиотиков на основе рекомбинантных штаммов бактерий, экспрессирующих эукариотические гены.//М.; 2002.

50. Тинаев H. Н. Эффективность применения пробиотиков нового поколения в кролиководстве // Кролиководство и звероводство, №4,2006. С. 5-7

51. Шевченко A.A., Шевченко JI.B. "Вирусные болезни кроликов", "АКВАРИУМ ЛТД", 2000. 80 с.

52. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Том I: Микрофлора человека и животных и ее функции. М., 1998. - 287 с.

53. Alvarez-Olmos M. I., Oberhelman R.A. Probiotic Agents and Infectious Diseases: A Modern Perspective on a Traditional Therapy//CID 2001:32 (1 June) • 1567-1576

54. Behrent G. Aufzuchtleistung abgesetzter Ferkel mit dem Probiotikum PACIFLOR // Schweinewelt. 1994. - 19, N 6. - P.219

55. Benedettini G., Delibero G., Pierotti R. et al Immunomodulation by Bacillus subtilis spores II Boll. Ist. Sieroter. Milan. 1983. -62, N 6. - P. 509-516.

56. Bengmark S. Ecological control of the gastrointestinal tract: the role of probiotic flora. Gut 1998; 42:2-7.

57. Bergey,s Manual of Systematic Bacteriology: Vol.1., 3 /Ed. N. R. Krieg, H. G. Holte- Baltimore etc.: Williams & Wilkins. 1986. -P. 965-1600.

58. Bonomi A. Probiotics in swine feeding: The use of Bacillus subtilis and Bacillus licheni-formis (experimental contribution) // Riv. della Soc. Italiana di Scienza Dell'Alimentazione. -1992.-21, N4.-P. 481-499

59. Brankova R., Gyosheva B., Michailova M., Georgiev G. Antimicrobial activity of lactic acid bacteria against intestinal and food-borne pathogens // Biotechnol. and Biotechnol. Equip.- 1994.-8,N4.-P. 13-18.

60. Cartman S.T. and La Ragione R.M. Spore probiotics as animal feed supplements //In: Bacterial SPORE Formers: Probiotics and Emerging Application (Ricca, E., Henrigues, A.O. and Cutting, S.M., Eds).- 2004. -p.155-161

61. Casula G, Cutting SM. Bacillus probiotics: spore germination in the gastrointestinal tract. Appl Environ Microbiol 2002;68:2344-52.

62. Corazza G.R., Sorge M., Strocchi A. et al. Non-absorbable antibiotics and small bowel bacterial overgrowth // Ital. J. Gastroenterol. 1992. - 24, N 9. - P. 4-9.

63. Davidson J.N., Hirsch D.C. Bacterial competion as a means of preventing diarrhea in pigs. Infect. Immunol. -1976:13:17773-1774.

64. Due L. H., Hong H. A., Barbosa T.M. et al. Characterization of Bacillus Probiotics available for human use,//App. and Environmental. Macrobiol., Apr. 2004, V.70, № 4 p.2161-2171

65. Ducluzeau R., Dubos F., Rainbaud P., Abrams G. Production of an antibiotic substance by Bacillus licheniformis within the digestive tract of gnotobiotic mice //Antimicrob.Agents Chemother. 1978. - 13, N 2. - P. 97-103

66. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores // Boll. 1st. Sieroter. Milan. -1987. -66,N5.-P. 391-394.

67. Fiorini G., Cimminello C., Chianese R. et al. Bacillus subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA // Chimioterapia. 1985. - 4. - P. 310-315.

68. Fuller R. A review: probiotics in man and animals // J. Appl. Bacterid.- 1989.- 66, N 5.-P.365-378.

69. Fuller R. History and development of probiotics // Probiotics. The scientific basis. London: Chapman & Hall, 1992. - P. 1-9.

70. Fuller R., Gibson G.R. Modification of the intestinal microflora using probiotics and pre-biotics // Scand. J. Gastroenterol. 1997. - 32, Suppl. n 222. - P. 28-31.

71. Green D.H., Wakeley P.R., Page A., et al. Characterization of two Bacillus probiotics. Appl Environ Microbiol 1999;65:4288-91.

72. Haenal H., Bendig J. Intestinal flora in health and disease // Progr. Food and Nutr. Sci. -1975.-N 1.-P. 21-64.

73. Hatch R.C., Thomas R.O., Thayne W.V. Effect of adding Bacillus acidophilus to milk fed baby calves// J.Dairy Sci. 1973. - 56, N 4. - P.682-687

74. Havenaar R., Ten Brink B., Huis in't Veld JHJ. Selection of strains for probiotic use//Probiotics. The scientific basis. London: Chapman & Hall, 1992. - P. 209-224.

75. Henry R., Mielle F., Morh H. Le Bacillus subtilis en therapeutique intestinale // Gaz. Med. France. 1950. - 57, N 10. - P. 537-541

76. Hoa NT, Baccigalupi L, Huxham A, et al. Characterization of Bacillus species used for oral bacteriotherapy and bacterioprophylaxis of gastrointestinal disorders. Appl Environ Microbiol 2000; 60:5241-7.

77. Hoffman T., Troup B., Szabo A., et al. The anaerobic life of Bacillus subtilis: Cloning of the genes encoding the respiratory nitrate reductase system // FEMS Microbiol. Lett. 1995. -131, N2.-P. 219-225.

78. Holzapfel W.H., Schillinger U. Introduction to pre- and probiotics.//Food Research International 35(2002).- p. 109-116

79. Hooper LV, Bry L, Falk PG, et al. Host-microbial symbiosis in the mammalian intestine: exploring an internal ecosystem. BioEssays 1998; 20:336-43.

80. Hosoi T, Amenati A, Kiuchi K, Kaminogawa S. Changes in fecal microflora induced by intubation of mice with Bacillus subtilis (natto) spores are dependent upon dietary components. Can J Microbiol 1999;45:59-66.

81. Hong H.A., Due Le Hong, Cutting Simon M. The use of bacterial spore formers as probi-otics//FEMS Microbiology Reviews 29 (2005).- c.813-835

82. Impey C.S., Mead G.C., George S.M. Competitive exclusion of Salmonellas from the chicken caecum using a defined mixture of bacterial isolates from the caecal microflora of the adult bird//J. Hygiene (Camb.). 1982. - 89, N 2. - 479-490

83. Ishibashi N., Yamazaki S. Probiotics and safety/Mm J Clin Nutr 2001;73(suppl):465S-470S.

84. Jenny B.F., Vandijk H.J., Collins J.A. Performance and fecal flora of calves fed a B.subtilis concentrate// J.Dairy Sci. 1991. - 74, N 6. - 1968-1973

85. Jiraphocakul S. Influence of dried B.subtilis culture and antibiotics on performance and intestinal microflora in turkeys//Poultry Science. 1990. - 69, N 11. - P. 1966-1973

86. Jorgensen J.H. Probiotika till svin. En litteraturoversigt og en afprovning at 2 probiotikas effekt under forskellige produktionsformer // Dansk Vet. Tidskr. 1988. - 71. - P.1211-1221

87. Katz E., Demain A.L. The peptide antibiotics of Bacillus: chemistry, biogenesis and possible function // Bacteriol. Rev. 1977. - 41, N 2. - P. 449-474.

88. Kornegay E.T., Thomas H.R. Bacterial and yeast preparations for starter and grower rations // Virginia polytechnic Institute and State University, Research Division Report, N 151. Blacksburg, Virginia, USA, 1973.

89. Lammers K. M., Helwig U., Swennen E., et al. Effect of Probiotic Strains on Interleukin 8 Production by HT29/19A Cells//The Americ. of Gastroent. 2002- V.97. №5. -S.l 182-1186

90. Landsudvalget for svin. Bioplus 2B till smagrise //Den rullende Afprofning af staid- og produktionssystemer. Copenhagen, Meddelse, 1989. - 162 p

91. Lawrence C., Nauciel C. Production of interleukin-12 by murine macrophages in response to bacterial peptidoglycan// Infect. Immun. 1998. - 66, N 10. - P. 4947-4949.

92. Lebbadi M., Galvez A., Valdivia E. et al. Biological activity of Amoebicin m4-A from Bacillus licheniformis M-4 // Antimicr. Agents and Chemother.- 1994. 38, N 8. - P. 18201823.

93. Lee M.-L.T., Ross R.A., Onderdonk A.B. Application of in vitro and in vivo to the study of microflora//Microb. Ecol. Health and Bisease. -1995. -8 №1. -P.31.

94. Lyons T.P., Fallon R.J. The probiotic concept: comming of age// World Biotech. Rept., 1986. prot. Conf., San Francisco, nov. 1986. Vol.2., Pt.7., New York, London. 1986. -P.69-80.

95. Marteau P., Seksik P. Jian R. Probiotics and intestinal health effects: a clinical perspective // British Journal of Nutrition (2002), 88, Suppl. 1, S51-S57

96. Maruta Kiyoshi, Miyazaki Hiroshi, Tadano Yukie et al. Effect of Bacillus subtilis C-3102 intake on fecal flora of sows and on diarrhea and mortality rate of their piglets. // Anim. Sci. and Technol. 1996. - 67, N 5. - P. 403-409

97. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as an antidiarrhoeal microorganism // Boll. Chem. Farm. 1994. - 133, N 1. - P. 3-18

98. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: boon or bane? //Microbiol. Ecol. Health and Disease. 1994. - 7, N 1. - P. 585-586

99. Michel M., Gutman L. Methicillin-resistant Staphylococcus aureus and vancomycin-resistant enterococci: Therapeutic realities and possibilities// Lancet. 1997. - 349, N 9069. -P. 1901-1906

100. Muscettola M, Grasso G, Blach-Olszewska Z, et al. Effects of Bacillus subtilis spores on interferon production. Pharmacol Res 1992;26:176-7.

101. Muscettola M., Grasso G., Migliaccio P., Gallo V.C. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores // J. Chemother. -1991. 3, Suppl. 3.-P. 130-132.

102. Onda T., Yanagida F. Tsuji M., et al. Time series analysis of aerobic bacterial flora during Miso fermentation// Letters in Applied Microbiology 2003,37,162-168

103. Ozawa K., Yokota H., Kimura M., Mitsuoka T. Effect of administration of Bacillus subtilis strain BN on intestinal flora of weanling piglets// Japan. J. Vet. Sci. 1981. - 43, N 5. - P. 771-775

104. Pelug W., Lingens F. Vitamin B6 biosynthese in Bacillus subtilis II Hoppe-Seyler's Z. Phisiol. Chem. 1978. - 359, N 5. - P. 559-570.

105. Penna F.J., Filho L.A.P, Cal9ado A. C. et al. Up-to-date clinical and experimental basis for the use of probiotics/ Jornal de Pediatria Vol. 76, Supl.2,2000. S.209-217

106. Pollman D.S. Probiotics in pig diets. // Recent Advances in Animal Nutrition. -Butterworth, London, 1986. P. 193-205

107. Pollman D.S., Danielson D.M., Peo E.F. Effects of microbial feed additives on performance of starter and growing-finishing pigs// J.Anim.Sci. 1980. - 51,N 3. - 577-581

108. Prokesova L., Novakova M., Mara M. Effect of Bacillus firmus and other sporulating aerobic microorganisms on in vitro stimulation of human lymphocytis // Folia Microbiol. -1994. 39. - P. 501-504.

109. Roth F.X., Kirchgessner M. Nutritive Wirksamkeit von Toyocerin. 1. Mitteilung: Ferkelaufzucht.// Landwirtsch. Forsch. 1988. - 41, N1. - P. 58-62

110. Simon GL, Gorbach SL. Normal alimentary tract microflora. In:Blaser MJ, Smith PD, Ravdin JI, Greenberg HB, Guerrant RL, eds. Infections of the gastroenterology tract. New York: Raven Press, 1995 P:53-68.

111. Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi, Wang Xiaomin. Влияние нового живого препарата Bacillus на микрофлору кишечника животных и функции иммунитета // J.Wuhan. Univ. Natur. Sei. Ed. 1996. - 42, N 4. - P. 516-518

112. Tachikawa T; Seo G; Nakazawa M; Sueyoshi M; Ohishi T; Joh К Estimation ofpro-biotics by infection model of infant rabbit with enterohemorrhagic Escherichia coli 0157-.H7. KansenshogakuZasshi, 72(12):1300-5 1998 Dec

113. Tannock G.W. Probiotics. A Critical Review. Horizon Sei. Press, Norfolk, England. 1999

114. Tannock G.W. Molecular assessment of intestinal microflora. Am.J.Clin.Nutr. 2001,73 (suppl):410-414

115. Thach P.N., Vu T.C., Nguen Т.Н. Le Bacillus subtilis en therapeutique et dans la prophilaxie // Rev. Immunol. 1968. - 72, N S. - P. 53-58

116. Tihole F. Fizioloski pomen bacteriemije z jejunalno mikrofloro// Zdrav. vestn. 1982. -51.-P.3-56