Новые свойства Su(Hw) инсулятора: влияние на Flp зависимую рекомбинацию, транспозиции P-элемента и промотор гена yellow у Drosophila melanogaster тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.26, кандидат биологических наук Каракозова, Марина Викторовна

• Каракозова, Марина Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Каракозова, Марина Викторовна

Список сокращений.

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Определение и общие свойства инсуляторов.

2.2. Структура и функции инсуляторов.

2.2.1. Su(Hw)-HHcyjMTop.

2.2.2. Инсуляторы локуса теплового шока hsp70 - ses и scs\

2.2.3. Инсуляторы регуляторной области Abd-B гена.

2.2.4. Куриный р-глобиновый инсулятор.

2.3. Модели действия инсуляторов.

2.3.1. Структурные модели.

2.3.2. Транскрипционные модели.

3. Материалы и методы.

3.1. Генетические методы.

3.1.1. Линии и мутации Drosophila melanogaster, использованные в данной работе.

3.1.2. Трансформация эмбрионов Drosophila melanogaster и получение трансгенных линий.

3.1.3. Фенотипический анализ экспрессии генов yellow и miniwhite в трансгенных линиях.

3.1.4. Генетические скрещивания.

3.2. Биохимические методы.

3.2.1. Выделение ДНК из дрозофилы.

3.2.2. Саузерн-блот-анализ.

3.2.3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3.2.4. Секвенирование плазмид и ПЦР-продуктов.

3.2.5. Молекулярное клонирование.

3.2.6. Трансформация бактериальных клеток плазмидами.

3.2.7. Выделение ДНК плазмид методом щелочного лизиса.

3.2.8. Создание конструкций.

3.3. Статистическая обработка полученных результатов.

3.4. Фотографирование результатов.

4. Результаты.

4.1. Изучение механизма репрессии транскрипции гена yellow Su(Hw) инсулятором в отсутствии белка Mod(mdg4).

4.1.1. Создание модельной системы для исследования факторов, влияющих на степень , репрессии тень yellow Su(Hw) инсулятором в отсутствии белка Mod(mdg4).

4.1.2. Степень репрессии зависит от локализации Su(Hw) инсулятора относительно промотора гена yellow.

• 4.1.3. В отличие от других известных репрессоров, два Su(Hw) инсулятора только незначительно увеличивают степень репрессии гена yellow.

4.1.4. Дополнительные промоторы тена yellow приводят к значительному уменьшению репрессии транскрипции тема, yellow,

4.2. Выяснение влияния Su(Hw) на транспозицию Р-элемента.

4.2.1. Разработка генетической модели для исследования влияния Su(Hw) инсулятора на взаимодействия между белковыми комплексами, обеспечивающих транспозиции Р-элемента.

4.2.2. Su(Hw) инсулятор супрессирует транспозиции Р-элемента.

4.2.3. Белок Mod(mdg4) является ключевым в супрессии транспозиций Р-элемента Su(Hw) инсулятором.

4.2.4. Взаимодействие между двумя копиями Su(Hw) инсулятора не приводят к нейтрализации блокирования транспозиций Р-транспозона.

4.3. Анализ роли взаимодействия между 8и(Нду) инсуляторами в регуляции рекомбинации между сайтами для Б1р рекомбиназы дрожжей.

4.3.1. Создание модельной системы для изучения роли взаимодействия между 8и(Н\у) инсулятором в модулировании частоты рекомбинации между РИ.Т сайтами.

4.3.2. Взаимодействие между 8и(Нлу) инсуляторами блокирует неравную рекомбинацию между БИТ сайтами на сестринских хроматидах.

4.3.3. Взаимодействие между 8и(Н\у) инсуляторами регулирует рекомбинацию между БЯТ сайтами внутри хроматиды.

4.3.4 Роль белка Мос1(тс^4) в регуляции рекомбинации между РЫТ сайтами 8и(Н\у) инсулятором.

5. Обсуждение результатов.

5.1. Возможные механизмы превращения 8и(Ь^)-инсулятора в сайленсер в отсутствии функционального белка Моё(тс

§4).

5.2. 8и(Н\у)-инсулятор модулирует взаимодействие между белками, участвующими в процессе транспозиции Р-элемента.

5.3. Взаимодействие между 8и(1^)-инсуляторами регулирует рекомбинацию между БЯТ-сайтами в половых и соматических клетках.

6. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые свойства Su(Hw) инсулятора: влияние на Flp зависимую рекомбинацию, транспозиции P-элемента и промотор гена yellow у Drosophila melanogaster»

Одной из особенностей регуляции транскрипции высших эукариот является способность энхансеров активировать промотор на расстоянии, достигающем нескольких сотен тысяч пар нуклеотидов. Несмотря на огромное количество информации о различных уровнях регуляции транскрипции, механизм взаимодействия между энхансером и I промотором на больших дистанциях остается открытым.

Большая часть существующих экспериментальных данных согласуется с тем, что белки, связанные с энхансером, непосредственно взаимодействуют с белками основного транскрипционного комплекса или вспомогательными белками, собранными на промоторе, при этом ДНК между ними образует петлю. Возникает вопрос, каким образом энхансер может взаимодействовать с промотором на больших дистанциях и при этом правильно узнавать свой промотор. Хотя к настоящему моменту описано огромное количество энхансеров и промоторов, изучено множество факторов транскрипции, вопрос о механизме взаимодействия между энхансером и промотором остается открытым.

В понимании механизмов дальних взаимодействий между регуляторными элементами большую роль могут сыграть инсуляторы. Инсуляторами называются регуляторные элементы, которые блокируют взаимодействие между энхансером и промотором, если находятся между ними. При этом инсуляторы не влияют непосредственно на активность энхансера и промотора, т.е. промотор может быть активирован любым другим энхансером, а энхансер может активировать любой другой промотор.

В 1991 году были открыты первые два инсулятора дрозофилы, ses и ses', которые окружают ген теплового шока hsp70 дрозофилы. Почти одновременно в регуляторной области ретротранспозона дрозофилы МДГ4 был обнаружен 8и(Н\у) инсулятор.' В настоящее время открыто большое число инсуляторов у разных организмов от дрозофилы до человека, показана универсальность и кооперативность их действия.

Изучение действия инсуляторов представляет интерес как в научном плане — для выяснения принципов организации генома и регуляции экспрессии генов, так и в прикладном плане - для создания векторов, которые способны поддерживать стабильную экспрессию генов вне зависимости от места инсерции в геноме. Важным доказательством необходимости инсуляторов в поддержании транскрипционной автономии служит то, что врожденная форма миотонической дистрофии вызвана потерей функционального ДМ1 инсулятора (БШрроуа е1, а1. 2001), ответственного за предупреждение чрезмерной активации энхансером ДМРК гена. Появление связи между инсуляторами и болезнями людей демонстрирует важность для понимания механизмов инсуляторного взаимодействия.

В настоящем исследовании продолжено изучение свойств 8и(Нш) инсулятора. В результате было показано, что 8и(Нлу) инсулятор может регулировать взаимодействия между белковыми комплексами, участвующими в транспозиции мобильных элементов, а также оказывать влияние на рекомбинацию. Получены экспериментальные данные подтверждающие модель, по которой 8и(Нлу) инсулятор способен непосредственно ингибировать некоторые промоторы в отсутствии белка Мос1(тс1§4).

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ИНСУЛЯТОРЫ - НОВЫЕ РЕГУЛЯТОРНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ ВЫСШИХ

ЭУКАРИОТ

Энхансерами принято называть последовательности ДНК, которые способны активировать транскрипцию независимо от ориентации и расстояния до точки начала транскрипции. Ярким примером может служить энхансер wing margin локуса cut дрозофилы, который активирует транскрипцию находясь на расстоянии 85 т.п.н. от промотора (Jack et al. 1991) . Несмотря на то, что к настоящему времени описано большое количество энхансеров и промоторов, остается много вопросов относительно механизмов их взаимодействия. В частности неизвестно, каким образом белки, связывающиеся с энхансером, взаимодействуют с транскрипционным комплексом, собранным на промоторе, минуя большие расстояния, и каким образом происходит взаимодействие между «правильными» энхансером и промотором. Многие из существующих экспериментальных данных косвенно согласуются с тем, что белки, связанные с энхансером, непосредственно взаимодействуют с белками основного транскрипционного комплекса или вспомогательными белками, собранными на промоторе, при этом ДНК между ними образует петлю (Blackwood and Kadonaga 1998). Существуют также другие модели взаимодействия между энхансером и промотором. Например, одна из моделей предполагает существование белков посредников, которые способны кооперативно взаимодействовать между собой, а также с большим количеством сайтов на ДНК, что приводит к притягиванию, собранных на энхансере и промоторе белковых комплексов друг к другу (Dorsett 1999).

В понимании механизмов дальних взаимодействий между регуляторными элементами большую роль могут сыграть инсуляторы.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная генетика», Каракозова, Марина Викторовна

выводы

1. Показано, что взаимодействие между 8и(Н\у) инсуляторами определяет частоту Независимой рекомбинации между И1Т сайтами как в половых так и в соматических клетках. Частота рекомбинации зависит от взаимного расположения 8и(Н\у) инсуляторов и БЯТ сайтов. Белок Мос1(тс1§4) не имеет определяющего значения в регуляции взаимодействии между БЯТ сайтами.

2. Продемонстрировано, что взаимодействие между 8и(Н\у) инсуляторами, находящимися на сестринских хроматидах, супрессирует негомологичное спаривание в половых и соматических клетках. Инактивация Мос1(шё§4) только частично иакативирует эту активность 8и(Н\у) инсулятора.

3. Выявлено, что один или два 8и(Н\у) инсулятора, которые расположены между концами Р-элемента, эффективно блокируют транспозиции Р-элемента в половых клетках самцов. Этот эффект полностью определяется белком Мо<3(тс1£4).

4. Проведенные исследования показывают, что 8и(Н\у) инсулятор в отсутствии белка Мос1(п^4) непосредственно может репрессировать промотор, а не приводит к индукции репрессированного хроматина.

5. Показано, что репрессия, индуцированная 8и(Н\у) инсулятором в отсутствии белка I

Мо<1(тс1§4) зависит от локализации конструкции в геноме.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Каракозова, Марина Викторовна, 2003 год

1. Глазков М.В. Границы структурно-функциональных единиц транскрипции (доменов) в хромосомах эукариот//Генетика. 1998. Т. 34. С. 593-604.

2. Ahmad К and Golic С. The transmission of fragmented chromosomes in Drosophila melanogaster. Genetics. 1998 V148(2), P.775-92.

3. Barges S., Mihaly J., Galloni M. et al. The Fab-8 boundary defines the distal limit of the bithorax complex iab-1 domain and insulated iab-1 from initiation elements and a PRE in the adjacent iab-8 domain // Development. 2000. V. 127 P.779-790.

4. Bell A. C., West A. G., Felsenfeld G. The protein CTCF is required for the enhancer blocking activity of vertebrate insulators // Cell. 1999. V. 98. P. 387-396.

5. Bell A.C., Felsenfeld G. Methylation of a CTCF-dependent boundary controls imprinted expression of the Ig/2 gene // Nature. 2000. V.405. P.482-485.

6. Bell A., West G., Felsenfeld G. Insulators and boundaries: versatile regulatory elements in the eukaryotic genome // Science. 2001. V.291. P.447-450.

7. Bi X., Broach J. Chromosomal boundaries in S. cerevisiae II Curr. Opin. Gen. Dev. 2001. V. 11. P. 199-204.

8. Bi X., Broach J. UAS rpg can function as a heterochromatin boundary element in yeast // Genes Dev. 1999. V. 13. P.1089-1101.

9. Blackwood E.M., Kagonaga I.T. Going the distance: a current view of enhancer action. Since. 1998. 281 (5373). P.61-63.

10. Breiling A., Bonte S., Ferrari P. et al. The Drosophila polycomb protein interacts with nucleosomal core particles in vitro via its repression domain // Mol. Cell. Biol. 1999. V.19. P.8451-8460.

11. Buchner K., Roth P., Schotta G., Krauss V., Saumweber H., Reuter G., Dorn R. Genetic and4molecular complexity of the position effect variegation modifier mod(mdg4) in Drosophila II Genetics. 2000. V.155. P.141-157.

12. Cai H., Levine M. Modulation of enhancer-promoter interactions by insulators in the Drosophila embryo // Nature. 1995. V. 376. P. 533-536.

13. Cai H., Levine M. The gypsy insulator can function as a promoter-specific silencer in the Drosophila embrio IIEMBO J. 1997. V.16. P. 1732-1741.

14. Cai H., Shen P. Effects of cis arrangement of chromatin insulators on enhancer-blocking activity // Science. 2001. V.291. P.293-295.

15. Chiang J., Whitely M., Felsenfeld G. A 5' element of the chicken (J-globin domain serves as an insulator in human erythroid cells and protects against position effect in Drosophila II Cell. 1993. V. 74. P. 505-514.

16. Chung J., Bell A., Felsenfeld G. Characterization of the chicken beta-globin insulator // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997 V.94. P.575-580.

17. Cuvier O., Hart C., Laemmli U. Identification of a class of chromatin boundary elements // Mol. Cell. Biol. 1998. V. 18. P. 7478-7486.

18. Dunaway M., Hwang J., Xiong M., Yuen H. The activity of the scs and scs' insulator elements is not dependent on chromosomal context// Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P. 182-189.

19. Donze D., Adams C.R., Rine J. et al. The boundaries of the silenced HMR domain in Saccharomyces cerevisiae II Genes Dev. 1999. V. 13. P.698-708.

20. Dorsett D. Distant liaisons: long range enhancer-promoter interactions in Drosophila I I Curr. Opin.Genet. Dev. 1999. V. 9. P. 505-514.

21. Farkas G., Leibovitch B., Elgin S. Chromatin organization and transcriptional control of gene expression in Drosophila II Gene. 2000. V.253.P.l 17-136.

22. Georgiev P., Kozycina M Interaction between mutations in the suppressor of Hairy wing andmodifier of mdg4 genes of Drosophila melanogaster affecting the phenotype of gypjy-induced mutations // Genetics. 1996. V. 142. P. 425-436.

23. Georgiev P., Corces V. The Su(Hw) protein bound to gypsy sequences in one chromosome can repress enhancer-promoter interactions in the paired gene located in the other homolog // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V.92. P.5184-5188.

24. Gerasimova T., Corces V. Polycomb and Trithorax group proteins mediate the function of a chromatin insulator // Cell. 1998. V. 92. P.511-521.

25. Gerasimova, T. I, and Corces, V. G. 2001. Chromatin insulators and boundaries: effects on transcription and nuclear organization. Annu. Rev. Genet. 35, P. 193-208.

26. Gerasimova T., Gdula D., Gerasimov D., Simonova O., Corces V. A Drosophila protein that impacts directionality on a chromatin insulator is an enhancer of position-effect variegation // Cell. 1995. V. 82. P.587-597.

27. Gerasimova T., Byrd K., Corces V. A chromatin insulator determines the nuclear localization of DNA // Mol.Cell. 2000. V.6. P.1025-1035.

28. Geyer P. The role of insulator elements in defining domains of gene expression // Curr. Opin. Genet Dev. 1997. V. 7. P. 242-248.

29. Geyer P., Corces V. DNA position-specific repression of transcription by a Drosophila, zinc finger protein // Genes Dev. 1992. V.6. P. 1865-1873.

30. Geyer P., Corces V. Separate regulatory elements are responsible for the complex pattern of tissue-specific and developmental transcription of the yellow locus in Drosophila melanogaster II Genes Dev. 1987. V. 1. P.996-1004.

31. Gdula D., Corces V. Characterization of functional domains of the Su(Hw) protein that mediate the silencing effect oimod(mdg4) mutations // Genetics. 1997. V.145. P.153-161.

32. Ghosh D., Gerasimova T., Corces V. Interactions between the Su(Hw) and Mod(mdg4) proteins required for gypsy insulator function // EMBO J. 2001. V.20. P.2518-2527.

33. Golic K., Lindquist S. The FLP recombinase of yeast catalyzes site-specific recombination in the Drosophila genome // Cell. 1989. V.59. P.499-509.

34. Gorczyca M., Popova X., Budnik V. The gene mod(mdg4) affects synapse specificity and structure in Drosophila II J.Neurobiol. 1999. V.39. P.447-460.

35. Hagstrom K., Muller M., Schedl P. Fab-7 functions as a chromatin domain boundary to ensure proper segment specification by the Drosophila bithorax complex // Genes Dev. 1996. V.10. P.3202-3215.

36. Hark A., Schoenherr C., Katz D. et al. CTCF mediates methilation-sensitive enhancer-blocking activity at the H19/Igf2 locus //Nature. 2000. V.405. P.486-489.m

37. Harrison D., Gdula D., Coyne R., Corces V. A leucine zipper domain of the suppressor of Hairy-wing protein mediates its repressive effect on enhancer function // Genes Dev. 1993.'V.7. P. 1966-1978.

38. Hart C., Zhao K., Laemmli U. The scs' boundary element: characterization of boundary element-assaciated factors // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.999-1009.

39. Holdridge C., Dorsett D. Repression of hsp70 heat shock gene transcription by the suppressor of Hairy-wing protein of Drosophila melanogaster // Mol. Cell. Biol. 1991. V.l 1. P. 1894-1900.

40. Jack J., Dorsett D., DeLotto Y. et al. Expression of the cut locus in the Drosophila wing margin is required for cell type specification and is regulated by a distant enhancer // Development. 1991. V.l 13. P.735-747.

41. Kares R., Rubin G. Analysis of P transposable element functions in Drosophila II Cell. 1984. V.38. P.135-146.

42. Kellum R., Schedl P. A position-effect assay for boundaries of higher order chromosomaldomains II Cell. 1991. V. 64. P.941-950.

43. Kellum R., Schedl P. A group of scs elements function as domain boundaries in an enhancer-blocking assay II Mol. CeL BioL 1992. V. 12. P. 2424-2431.

44. Kim J., Shen B., Rosen C., Dorsett D. The DNA-binding and enhancer-blocking domains of the

45. Drosophila suppressor of Hairy-wing protein // MoL Cell. Biol. 1996. V. 16. P.3381-3392.

46. Krebs J. E., Dunaway M. Insulator elements impart a cis requirement on enhancer-promoter interactions // Mol. Cell. 1998. V. 1. P. 301-308.

47. Labrador M., Corces V.G. Setting the boundaries of chromatin domains and nuclear organization. Cell. 2002; 111(2) P.151-154.

48. Lu L., Tower J. A transcriptional insulator element, the su(Hw) binding site, protects a chromosomal DNA replication origin from position effects // Mol. Cell. Biol. 1997. V.17. P.2202-2206.

49. Lindsley D., Zimm G. The genome of Drosophila melanogaster. Academic Press, New York. // 1992.

50. Mallin D., Myung J., Patton J. et al. Polycomb group gene repression is blocked by the Drosophila suppressor of Hairy-wing Su(Hw. insulator//Genetics. 1998. V.148. P.331-339.

51. Mazo A., Mizrokhi L., Karavanov A. et al. Suppression in Drosophila-. su(Hw) and su(f) gene products interact with a region of mdg4 (gypsy) regulating its transcriptional activity // EMBO J. 1989. V.8.P.903-911.

52. Mihaly J., Hogga I., Barges S., Gallon M., Mishra R., Hagstrom K., Muller M., Schedl P., Sipos L., Gausz J., Gyurkovics H., Karch F. Chromatin domain boundaries in the Bithorax complex // Cell. Mol. Life Sci. 1998. V. 54. P. 60-70.

53. Mongelard F., Corces V. Two insulators are not better than one // Nat. Struct, biol. 2001- V.8. P.192-194.

54. Mongelard F., Labrador M., Baxter E.M., Gerasimova T.I., Corces V. Trans-splising as a novel meshanism to explain interallelic complementation in Drosophila. Genetics. 2002. 160. 4. P. 14811487.

55. Morcillo P., Rosen C., Baylies M., Dorsett D. Chip, a widely expressed chromosomal protein required for segmentation and activity of a remote wing margin enhancer in Drosophila II Genes Dev. 1997. V.ll. P.2729-2740.

56. Morcillo P., Rosen C., Dorsett D. Genes regulating the remote wing margin enhancer in the Drosophila cut locus // Genetics. 1996. V.144. P.l 143-1154.

57. Muller M., Hangstrom K., Gyurkovics H., Pirrotta V., Schedl P. The Mcp element from the Drosophila melanogaster bithorax complex mediates long-distance regulatory interactions // Genetics. 1999. V.153. P.1333-1356.

58. Muravyova, E., Golovnin, A., Gracheva, E., Parshikov, P., Belenkaya, T., Pirrotta, V. and Georgiev, P. (2001). Loss of insulator activity by paired Su(Hw) chromatin insulators. Science 291, 495-497.

59. Nabirochkin S., Ossokina M., Heidmann T. A nuclear matrix/scaffold attachment region co-localizes with the gypsy retrotransposon insulator sequence // J.Biol.Chem. 1998. V.273. P.2473-2479.

60. Pai C.Y., Corces V.G., The nuclear pore complex and chromatin boundaries. Trends Cell Biol. 2002 10 P.452-455.

61. Palla F., Melfi R., Anello L., Di Bernardo M., Spinelli G. Enhancer blocking activity located near the 3* end of the sea urchin early H2A histone gene // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.2272-2277.

62. Parnell T., Geyer P. Differences in insulator properties revealed by enhancer blocking assays on episomes // EMBO J. 2000. V.19. P.5864-5874.

63. Pikaart M., Recillas-targa F., Felsenfeld G. Loss of transcriptional activity of a transgene is accompanied by DNA methilation and histone deacetylation and is prevented by insulators // Genes Dev. 1998. V.12. P.2852-2862.

64. Pirrotta V. Polycomb silencing and the maintenance of stable chromatin states // Results Probl. Cell Differ. 1999. V.25. P.205-228.

65. Pirrotta V. PcG complexes and chromatin silencing //Curr.Opin.Gen.Dev. 1997. V.7. P.249-258.

66. Recillas-Targa F., Bell A., Felsenfeld G. Positional enhancer-blocking activity of the chicken Piglobin insulator in transiently transfected cells // Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1999. V.96. P.14354-14359.

67. Rollins S., Morsillo P., Dorsett D. Nipped-B, a Drosophila homologue of chromosomal adherins, participates in activation by remote enhancers in the cut and Ultrabithorax genes // Genetics. 1999. V.152. P.577-593.

68. Roseman R, Pirrotta V., Geyer P. The Su(Hw) protein insulates expression of the Drosophila melanogaster white gene from chromosomal position-effects //EMBO J. 1993. V. 12. P.435-442.

69. Rubin G., Sprandling A. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vectors // Science. 1982. V.218. P.348-353.

70. Sanger F., Nicken S., Coulson A. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc Natl. Acad. Sci. USA. 1977. V.74. P.5463-5487.t

71. Sambrook J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning: a Laboratory Manual, Ed.2. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY // 1989.

72. Scott K., Geyer P. Effects of the Su(Hw) insulator protein on the expression of the divergently transcribed Drosophila yolk protein genes // EMBO J. 1995. V.14. P.6258-6279.

73. Scott K., Taubman A., Geyer P. Enhancer blocking by the Drosophila gypsy insulator depends upon insulator anatomy and enhancer strength // Genetics. 1999. V.153. P.787-798.

74. Shao Z., Raible R., Mollaaghababa R. et al. Stabilization of chromatin structure by PRC1, a polycomb complex // Cell. 1999. V.98. P.37-46.

75. Sigrist C., Pirrotta V. Chromatin insulator elements block the silencing of a target gene by the Drosophila Polycomb Response Element (PRE) but allow trans interactions between PREs on different chromosomes // Genetics. 1997. V.147. P.209-221.

76. Smith P., Corces V. The suppressor of Hairy-wing binding region is required for gypsy mutagenesis // Mol.Gen.Genet. 1992. V.233. P.65-70.

77. Spana C., Harrison D., Corces V. The Drosophila melanogaster supressor of Hairy wing protein binds to specific sequences of the gypsy retrotransposon // Genes Dev. 1988. V.2. P.1414-1423.

78. Spana C., Corces V. DNA bending is a determinant of binding specificity for a Drosophila zink finger protein // Genes Dev. 1990. V.4. P.1505-1515.

79. Sun F.-L., Elgin S. Putting boundaries on silence // Cell. 1999. V.99. P.459-462.

80. Newsome T.P., Asling B., Dickson B.J. Analysis of Drosophila photoreceptor axon guiidance in eye-specific mosaics. Development 2000.127. P.851-860.

81. Udvardy A., Maine E., Schedl P. The 87A7 chromomere. Identification of novel chromatin structures flanking the heat shock locus that may define the boundaries of higher order domains // J. Mol. Biol. 1985. V.185. P.341-358.

82. Vazquez J., Schedl P. Deletion of an insulator element by the mutation facet-strawberry in Drosophila melanogaster II Genetics. 2000. V.155. P.1297-1311.

83. Webber A., Ingram R., Levorse J. et al. Location of enhancers is essential for imprinting of HI9 and Igf2 II Nature. 1998. V.391. P.711-715.

84. West, A.G., Gaszner, M. and Felsenfeld, G. (2002). Insulators: many functions, many mechanisms. Genes Dev. 16,271-288.

85. Zhao K., Hart C. M, Laemmli U. Visualization of chromosomal domains with boundary element-associated factor BEAF-32 // Cell. 1995. V. 81. P. 879-889.

86. Zhong X., Krangel M. An enhancer-blocking element between alpha and delta gene segments within the human T cell receptor alpha/delta locus // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. V.94. P.5219-5224.

87. Zhou J., Barolo S., Szymanski P. et al. The Fab-7 element of the bithorax complex attenuates enhancer-promoter interactions in the Drosophila embryo // Genes Dev. 1996. V.10. P.3195-3201.

88. Zhou J., Levine M. A novel cis-regulatory element, the PTS, mediates an anti-insulator activityin the Drosophila embryo II Cell. 1999. V. 99. P.567-575.1. Благодарности

89. Автор благодарит своего научного руководителя чл.-корр. РАН., д.б.н., профессора

90. П.Г. Георгиева за предложенную тему диссертации, помощь в проведении экспериментов и ценные замечания по работе.

91. Автор выражает искреннюю благодарность всему коллективу лаборатории регуляции4генетических процессов за моральную поддержку и за проявленный к работе интерес.