Новые подходы к изучению структурно-функционального разнообразия полипептидных токсинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, доктор химических наук Козлов, Сергей Александрович

• Козлов, Сергей Александрович
• доктор химических наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор химических наук Козлов, Сергей Александрович

I. ВВЕДЕНИЕ :

1.1. Объекты исследования

1.2. Цели и задачи работыб

1.3. Основные реализованные в работе подходы

II. Обзор литературы

2.1. Введение

2.2. Классификация токсинов

2.3. Структурные особенности токсинов

2.4. Биосинтез полипептидных токсинов

2.5. Биологические свойства полипептидных токсинов

2.5.1. Токсины, действующие на К+ каналы

2.5.2. Токсины, действующие на Са2+ каналы

2.5.3. Токсины, воздействующие на Na+ каналы

2.5.4. Токсины, действующие на другие типы рецепторов

2.5.5. Токсины с неспецифичным действием

2.6. Современные подходы к исследованию токсинов пауков

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые подходы к изучению структурно-функционального разнообразия полипептидных токсинов»

4.6.1. Актуальность проблемы поиска модуляторов TRPV1 и первичное тестирование ядов114

4.6.2. Выделение полипептидных компонентов из яда морской анемоны Н. crispa 115

4.6.3. Биологическая активность новых токсинов из морских анемон 120

V. Выводы124

VI. Список сокращений125

VII. Благодарности127

VIII. Список цитируемой литературы128

IX. Приложение I149

X. Приложение И153

XI. Приложение III161

I. ВВЕДЕНИЕ

Начало 21 века ознаменовано технологическими прорывами в области биохимических исследований. Возросли темпы сбора и обработки биоинформации, ускорились процессы расшифровки новых структур, активно разрабатываются и внедряются постгеномные технологии. Труд ученых становится все более и более продуктивным, и практическая составляющая научных исследований приобретает все более значимый интерес. Настоящая работа посвящена изучению биологически активных молекул, которые могут быть использованы в медицине, ветеринарии или агропромышленном комплексе.

Природные биологически активные молекулы давно используются как основа для производства различных лекарственных препаратов. Многие биологически активные вещества прошли долгий эволюционный отбор и заслужили право стать стандартом в медицине. Однако, всегда остается возможность улучшить определенные свойства имеющихся соединений или найти более эффективные. В последнее время наметилась тенденция активного изучения полипептидных молекул, которые в скором времени смогут конкурировать на рынке с небелковыми соединениями. Самыми разнообразными по структуре и функции биологически активными соединениями являются природные токсины.

Животные, способные продуцировать яд, известны давно. По своему составу яд животных - сложная многокомпонентная смесь активных молекул, которая идеально подходит для поиска новых лекарственных средств. В настоящей работе внимание уделяется полипептидным компонентам природных ядов, в основном это нейротоксины, способные при низких концентрациях вызывать смерть или паралич потенциальных жертв. Быстрый эффект обусловлен запуском различных механизмов блокирования прохождения нервных импульсов от периферии к центральной нервной системе (ЦНС). Преимущественными мишенями при этом являются ионотропные рецепторы Са2+, К+, СГ каналов, а также глутаматные и ацетилхолиновые рецепторы, возбуждение и/или ингибирование которых происходит одновременно под действием разно ориентированных нейротоксинов. После чего происходит сбой работы основных контролируемых систем дыхания, кровоснабжения и движения.

Вторыми по распространенности компонентами природных ядов являются мембрано-активные пептиды (МАП). Они представляют собой обширный и гетерогенный класс соединений, способных взаимодействовать не со специфическим белковым рецептором, а с липидным бислоем - неотъемлемым компонентом любой клетки. Характерная черта большого числа МАП - способность к дестабилизации мембраны-мишени, приводящая к клеточной гибели. Поэтому

МАП, функция которых состоит в разрушении мембраны и убийстве клетки, называют таюке цитолитическими пептидами или цитотоксинами. Из-за способности образовывать в мембране поры часть из них может именоваться пороформерами. Из-за специфичности сродства отдельных МАП к мембранам прокариот некоторые носят название антимикробные пептиды (АМП). Наконец кМАП можно отнести отдельные полипептиды с ферментативной активностью, например, фосфолипазы.

В природных ядах встречается еще несколько функциональных классов белков, в том числе и полипептидные молекулы, нетоксичные для животных, однако такие компоненты принято также именовать токсинами, как и вышеперечисленные МАП.

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Козлов, Сергей Александрович

V. выводы

1) Предложена новая стратегия анализа структурного разнообразия полипептидных компонентов яда животного происхождения на основе обработки баз данных EST фрагментов и идентификации зрелых форм компонентов природных ядов. При использовании данной стратегии в 3 изученных банках EST обнаружено 232 полипептидные последовательности, из которых только 8 были известны ранее; достоверность предсказанных посттрансляционных модификаций подтверждена при протеомном анализе нескольких ядов.

2) С помощью метода формализации белковых последовательностей для цистеинсодержащих полипептидов обнаружено два характерных мотива первичной структуры токсинов пауков и 13 мотивов токсинов морских анемон.

3) Проведен протеомный анализ ядов индивидуальных пауков и найдены их различия на уровне отдельной особи. Продемонстрировано присутствие постоянных и "мобильных" компонентов яда пауков и доказана необходимость комбинации геномных и протеомных технологий для полной характеристики компонентного состава яда.

4) На основе функциональной протеомики обнаружен и структурно охарактеризован 31 новый инсектотоксин из ядов двух видов пауков S. florentina и L. tarabaevi.

5) При изучении антимикробных полипептидных компонентов яда паука L. tarabaevi найдено 17 новых пептидов и открыт новый функциональный класс — цито-инсектотоксины.

6) Впервые обнаружены полипептиды, способные ингибировать функциональную активность ванилоидных рецепторов TRPV1. Показано, что эти пептиды обладают выраженным анальгетическим действием и могут служить основой для создания новых анальгетиков.

VI. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ANOVA - дисперсионный анализ,

ASIC - кислотно-чувствительный ионный канал,

BAPNA - и-нитроанилид Аг-бснзоил-.0£-аргинина,

BDS - blood depressing substance,

ВК - кальций-активируемые К+ каналы большой проводимости,

ВТЕЕ - этиловый эфир-ТУ-бензошь/хгирозина,

CIT - цито-инсектотоксин,

CPD - карбоксипептидаза D,

СРЕ - карбоксипептидаза Е, dbEST - база данных последовательностей EST,

DDH - disulfide directed р-hairpin,

DPP - дипептидил пептидаза,

EafterR - inversed processing quadruplet мотив,

EC50 - значение концентрации вещества вызывающее 50% эффект,

EST - случайные нуклеотидные последовательности,

EtoR - Arginine cleavage by Glutamic acid control мотив.

Fmoc - флуоренилметоксикарбонил,

HEPES - 4-(2-оксиэтил) 1 -пиперазинэтансульфоновая кислота,

IC5o - значение 50% ингибирования тока,

ICK - мотив цистеинового узла,

IK - кальций-активируемые К+ каналы средней проводимости,

NARC - K-type neural apoptosis regulated convertase,

R(K)toR - Arginine cleavage by basic control мотив,

SK - кальций-активируемые K+ каналы малой проводимости,

SRDA - анализ распределения одиночного остатка,

TRPV - ионотропный ванилоидный рецептор,

TTX-R - тетродотоксин устойчивые Na+ каналы,

TTX-S - тетродотоксин чувствительные Na+ каналы,

VPE - vacuolar processing enzyme,

АМП - антимикробный пептид,

ВП - винилпиридин,

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография,

ДСМ - дополнительный структурный мотив,

ДТТ - 1,4-дитиотреитол, иПКМ - inversed processing quadruplet мотив,

ЛД50 - средняя летальная доза,

МАЛДИ - ионизация лазерной десорбцией, ассистируемая матрицей,

МАП - мембрано-активный пептид,

МИК - минимальная ингибирующая концентрация,

МС/МС - тандемная масс-спектрометрия,

ПАМ - пептидилглицин а-амидирующая монооксигеназа,

ПГЛ - пептидил-а-гидроксиглицин а-амидирующая лиаза,

ПГМ - пептидил-а-гидроксилирующая монооксигеназа,

ПКМ - processing quadruplet мотив,

ПСМ - принципиальный структурный мотив,

ПСМ(С) - принципиальный структурный мотив с одним дополнительным цистеином,

ПСМ(СС) - принципиальный структурный мотив с двумя дополнительными цистеинами,

ПЦР - полимеразная цепная реакция, ски - субтилизин кексин изоцим,

СППК - субтилизин-подобные пропротеин конвертазы

Трис - трис-(оксиметил)аминометан,

ТФУ - трифторуксусная кислота, цнс - центральная нервная система,

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота,

ЭК5о - концентрация вызывающая 50% эффект.

VII. БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность за помощь в работе:

- Коллективу лаборатории нехфорецепторов и нейрорегуляторов ИБХ РАН и лично Молявке А.А., Шляпникову Ю.М., Андрееву Я.А., Василевскому А.А., Липкину А.В., Кошелеву С.Г., Корольковой Ю.В. и Гришину Е.В. за непосредственное участие в работе, Егорову Ц. А. и Мусолямову А.Х. за помощь при секвенировании пептидов;

- Коллективу лаборатории химии пептидов ИБХ РАН и лично Егоровой Н.С., Суровому А.Ю. а также сотруднику лаборатории рецепции нейропептидов Жмаку М.Н. за химический синтез пептидов;

- Сотрудникам структурных подразделений ИБХ РАН: лаборатории оптической микроскопии и спектроскопии биомолекул, лаборатории биомолекулярной ЯМР спектроскопии, лаборатории моделирования биомолекулярных систем за анализ и расчет структур антимикробных пептидов;

- Руководителю патентного отдела ИБХ РАН Мартине кой Т.Д.;

- Сотрудникам лаборатории биологических испытаний филиала ИБХ РАН в городе Пущино и лично Мурашеву А.Н. за измерение биологической активности на животных моделях;

- Сотрудникам лаборатории химии пептидов Тихоокеанского института биоорганической химии ДВО РАН за поставку полипептидных фракций морских анемон;

- Федорову А.А. (ТОО «Научно-производственное объединение Фауна»; Алматы, Республика Казахстан) за предоставление качественного материала для работы;

- Сотрудникам структурных подразделений Pioneer Hi-Bred International, Inc., и DuPont Agriculture and Nutrition и лично Bill McCutchen, Albert Lu, Eric Schepers, Rafi Herrmann за помощь в конструировании и секвенировании банков данных нуклеотидных последовательностей из желез пауков.

2.7. Заключение

В состав яда пауков входят самые разнообразные полипептидные компоненты, имеющие различные мишени, которые направленно модулируют множество физиологических процессов. Яды можно рассматривать как природные фармакопеи, и практический интерес к ним в настоящее время вызван возможностью получения новых фармакологических препаратов. Поскольку основной добычей пауков служат насекомые, разнообразные инсектотоксины, содержащиеся в их ядах, могут быть использованы как биоинсектициды для снижения потерь в сельском хозяйстве, связанных с насекомыми-вредителями. Присутствует и фундаментальный интерес к компонентам ядов пауков, который заключается в получении высокоселективных инструментов для исследования различных клеточных рецепторов.

Большему внедрению полипептидов из ядов пауков в практику пока мешает их недоступность. Токсины пауков могут быть в ряде случаев успешно экспрессированны в клеточных системах, но при использовании прокариотических

36 систем экспрессии не всегда обеспечивается правильное замыкание многочисленных дисульфидных связей. Возможно осуществить химический синтез полипептидов, так как они имеют не слишком протяженную полипептидную цепь, но проблема правильного замыкания дисульфидных связей стоит здесь так же остро. Есть надежда, что дальнейшее совершенствование технологий позволит снять существующие ограничения, и полипептиды из ядов пауков займут достойное место в научной и практической сфере.

III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы

3.1.1. Реактивы

В работе использовались реактивы и материалы производства Clontech, ICN, Merck, Novabiochem, Novagen, Promega, Sigma-Aldrich, Fluka Chemie GmbH, Fermentas (Литва), Криохром и Химмед. Все реактивы отечественного производства, использовавшиеся в работе, имели квалификацию осч или чда, импортные реактивы имели маркировку для молекулярной биологии или аналитической работы. Все растворы были приготовлены с использованием деионизованной воды (сопротивление 18.2 МОм), полученной на установке Millipore. Для клеточных работ использовалась вода, стерилизованная с помощью автоклавирования.

3.1.2. Биологический материал и животные

Пауки среднеазиатского региона были собраны на территории Казахстана и Киргизии сотрудниками ТОО «Научно-производственное объединение Фауна» (Казахстан). Цельный яд пауков (лиофилизованные препараты) и железы, секретирующие яд (глубокая заморозка на сухом льде), были приобретены у объединения «Фауна» в готовом виде. Там же были приобретены образцы ядов индивидуальной дойки пауков A. orientalis. Живые морские анемоны Н. crispa в работе не использовали, вместо них использовали фракции после разделения спиртовых и водных экстрактов морской анемоны, любезно предоставленные ТИБОХ РАН для совместной работы. Методика приготовления экстрактов анемон изложена [161]. В исследованиях эффектов in vivo использовались мыши лини CD-I (НПП «Питомник лабораторных животных ФИБХ РАН») весом 19-21 г. Животные содержались при температуре 23±2°С, вода и еда ad libitum. Каждое животное использовалось для эксперимента один раз.

3.1.3. Бактериальные штаммы и плазмидные векторы

Штамм Е. coli XL 1-Blue использовали для молекулярного клонирования, Е. coli BL21(DE3) - для проведения экспрессии. Использовали на различных этапах работы плазмидные вектора pBlueScriptll SK+ (Stratagene), pET32b (Novagen), pAL-TA (Евроген). Бактериальные культуры для анализа антимикробной активности были получены из Всероссийской коллекции микроорганизмов (http://www.vkm.ru/).

3.2. Математические вычисления и данные для анализа

3.2.1. Исходные данные для анализа

Аминокислотные последовательности белков для проведения анализов были получены из депозитария национального центра биотехнологической информации [162]. Для поиска необходимых последовательностей использовали специализированные запросы, сужающие поиск. Следующие выборки аминокислотных последовательностей были получены с сервера, преобразованы в нужный формат и проанализированы.

1) 39903 аннотированные белковые последовательности с детализированной информацией о координатах активного полипептида для анализа созревания всевозможных белков предшественников многоклеточных организмов (январь 2008 года). Для формирования выборки первоначально использовали поисковый запрос "metazoa", "precursor" после чего фильтровали выбранные последовательности локально автоматическими скриптами по дополнительным критериям. Выбирали только последовательности для которых был описан хотя бы один пропептид и указаны точные координаты процессируемой активной цепи.

2) 231 аминокислотная последовательность токсинов, выделенных из морских анемон (февраль 2010).

3) 10903 последовательности полипептидных токсинов для проверки эффективности работы разработанных алгоритмов и запросов поиска (апрель 2010). Для выборки использовали поисковый запрос "toxin" и ограничение по видовой принадлежности к царству животных.

Для поиска токсинов морских анемон использовали банк EST, созданный для средиземноморской морской анемоны А. viridis [163]. Весь объем исходных данных в количестве 39939 EST был загружен с сервера [164].

3.2.2. Вычисления

Анализ последовательностей проводили на персональном компьютере средней производительности под управлением операционной системы Windows ХР. Анализируемые последовательности экспортировали в табличный редактор Excel (из пакета программ MS Office 2003) с параметрами безопасности, разрешающими применение внешних макрокоманд. Использовали набор специальных функций, написанных на языке VBA для использования внутри MS Excel, MS Word, которые осуществляли трансляцию нуклеотидных последовательностей, поиск гомологии по образцу, конвертирование в упрощенные последовательности, расчет молекулярных масс и прочие операции с массивами данных.

Для проведения множественного выравнивания полипептидных последовательностей с визуализацией результатов, формирования контигов и выведения консенсусной последовательности, разработки олигонуклеотидных зондов, анализа свойств полипептидов использовали набор утилит программного комплекса Winstar (DNASTAR Inc.). Расчет молекулярных масс белковых последовательностей природных и модифицированных, а также молекулярных масс пептидов, получаемых после специфической фрагментации полипептидной цепи, проводили с использованием программы GPMAW 4.04 (Lighthouse data, Дания). Для

39 статистической обработки экспериментальных данных использовали пакет программ ORIGIN (OriginLab).

Структуру сигнального пептида устанавливали с помощью сетевого ресурса SignaP [165] по двум предлагаемым методикам расчета, на основе нейрональной сети и Hidden Markov модели. Для определения новизны найденных структур проводили поиск гомологии их первичной структуры против не вырожденной базы белковых последовательностей методами blastp and PSI-BLAST [166].

3.3. Оборудование

В работе использовали основное лабораторное оборудование ведущих фирм производителей: Eppendorf, LKB-Pharmacia, Bio-Rad, Hitachi, Flow Laboratories, B.Braun Melsunger AG, Leybold-Heraeus, Sanyo, SAVANT Instruments Inc. Несколько хроматографических систем высокого давления было задействовано в работе: фирмы Beckman, состоящих из модуля поршневых насосов модели 126 System Gold и двулучевого УФ детектора 167 модели с изменяемой длиной волны, дополнительно укомплектованного детектором с фотодиодной сканирующей матрицей Waters 991; фирмы Kontron Instruments состоящей из блока насосов модели 522 и УФ-детектора с переменной длиной волны модели 535; а также моноблочная хроматографическая система 130А (Applied Biosystems). Для хроматографии низкого давления использовали отдельные компоненты фирмы Gilson и LKB-Pharmacia, которые комбинировали между собой в зависимости от стоящих задач. Масс-спектры получали на МАЛДИ-время пролетных масс-спектрометрах M@LDI-LR (Micromass) и Ultraflex TOF-TOF (Bruker Daltonik GmbH), оснащенных УФ-лазером (337 нм), с идентификацией положительных ионов в линейном или рефлекторном режиме. При необходимости использовали тандемную масс спектрометрию (МС/МС) для определения вторичных ионов на приборе Ultraflex TOF-TOF. -/V-концевую аминокислотную последовательность полипептидов определяли на автоматическом секвенаторе белков Procise 492 (Applied Biosystems). Для чтения нуклеотидных последовательностей применяли ABI Model 373 Automated DNA Sequencer (Applied Biosystems). Полимеразную цепную реакцию (ПЦР) проводили на градиентном амплификаторе РТС-200 (MJ Research). Спектры КД измеряли с помощью спектрополяриметра J-810 (Jasco) в области поглощения амидного хромофора (диапазон длин волн 190-250 нм) с шагом 0.2 нм при 20°С. Для электрофизиологических измерений использовали установку собственного производства, основанную на усилителе слабых токов Gene Clamp 500 (Axon Instrument).

3.4. Методы

3.4.1. Создание библиотек EST из ядовитых желез

Библиотеки иуклеотидных последовательностей были созданы сотрудниками DuPont Agriculture & Nutrition для пауков среднеазиатского региона в ходе выполнения совместной научно исследовательской работы. Общая РНК из ядовитых желез была получена набором TRIzol (Life Technologies) из замороженных в жидком азоте образцов. Далее мРНК выделяли аффинной хроматографией с помощью набора mRNA Purification Kit (Amersham Pharmacia Biotech) и синтезировали первую цепь кДНК набором Superscript II (Life Technologies). Продукты по добавленным адаптерным последовательностям клонировали по сайтам EcoRI и Xhol в плазмиду pBlueScript SK+ и далее считывали информацию с универсального праймера М13 (см. структуру в Таблице 2) автоматическими методами определения иуклеотидных последовательностей.

3.4.2. Получение кДНК из пауков и морских анемон

Для получения кДНК использовали замороженные в жидком азоте железы пауков или нематоцисты морских анемон. Исходный материал 50-100 мкг гомогенизировали при помощи специального пестика (Eppendorf) в 300 мкл буфера содержащего 4 М гуанидинтиоционат, 25 мМ цитрат натрия, 0.5% TV-лауроилсаркозин, затем добавляли 300 мкл фенола, насыщенного Трис-НС1 (pH 8.0), интенсивно перемешивали, инкубировали 10 мин при 40°С. Затем для разделения фаз добавляли 125 мкл хлороформа, интенсивно смешивали и центрифугировали при 14000 об/мин 2 мин. Водную фазу отбирали и повторяли обработку фенолом и хлороформом. К водной фазе добавляли 2 объема 96% этилового спирта, перемешивали, центрифугировали при 14000 об/мин в течение 5 мин. Осадок растворяли в 150 мкл 40 мМ Трис-ацетат (pH 8.3), 1 мМ ЭДТА буфера. К раствору добавляли 300 мкл 9 М LiCl, инкубировали 2 часа при -20°С, затем центрифугировали 5 мин при 14000 об/мин. Осадок подсушивали и растворяли в 50 мкл воды. В качестве альтернативы использовали набор реактивов RNAwiz (Ambion) по протоколу фирмы производителя.

Количество РНК и наличие примесей на различных стадиях выделения определяли спектрофотометрически по поглощению при 260 и 280 нм. мРНК выделяли аффинной хроматографией с помощью набора mRNA Purification Kit (Amersham Pharmacia Biotech) и синтезировали первую цепь кДНК набором Superscript II (Life Technologies).

Образцы геномной ДНК получали сходной методикой из щупалец морских анемон.

3.4.3. Определение нуклеотидной последовательности генов, кодирующих токсины

ПЦР с использованием специфических зондов (см. структуру в Таблице 2) применяли для определения нуклеотидных последовательностей, кодирующих выделенные из ядов природные токсины. Для встраивания продуктов реакции в pBlueScript SK+ vector (Stratagene) и дальнейшего клонирования в клетках Е. coli XL-1 Blue использовали несколько универсальных зондов.

Секвенирование проводили на автоматическом секвенаторе (Model 373А Applied Biosystems, США) при помощи набора реактивов ABI PRISM® BigDye™ Terminator v. 3.1 (Applied Biosystems, США).

Список литературы диссертационного исследования доктор химических наук Козлов, Сергей Александрович, 2011 год

1. The World Spider Catalog, by Norman I. Platnick, American Museum of Natural History: Электронный ресурс. Режим доступа: http://research.amnh.org/entomology/spiders/catalog/index.html. Дата обращения: ноябрь 2010.

2. Sheumack D. D., Claassens R., Whiteley N. M., Howden M. E. Complete amino acid sequence of a new type of lethal neurotoxin from the venom of the funnel-web spider Atrax robustus // FEBS Lett. 1985. V. 181. P. 154-156.

3. Brown M. R., Sheumack D. D., Tyler M. I., Howden M. E. Amino acid sequence of versutoxin, a lethal neurotoxin from the venom of the funnel-web spider Atrax versutus // Biochem J. 1988. V. 250. P. 401-405.

4. Rezende Junior L., Cordeiro M. N., Oliveira E. В., Diniz C. R. Isolation of neurotoxic peptides from the venom of the 'armed' spider Phoneutria nigriventer // Toxicon. 1991. V. 29. P. 1225-1233.

5. Mcintosh J. M., Santos A. D., Olivera В. M. Conus peptides targeted to specific nicotinic acetylcholine receptor subtypes // Annu Rev Biochem. 1999. V. 68. P. 59-88.

6. Olivera В. M., Cruz L. J. Conotoxins, in retrospect // Toxicon. 2001. V. 39. P. 7-14.

7. Miller C. The charybdotoxin family of K+ channel-blocking peptides // Neuron. 1995. V. 15. P. 5-10.

8. King G. F., Gentz M. C., Escoubas P., Nicholson G. M. A rational nomenclature for naming peptide toxins from spiders and other venomous animals // Toxicon. 2008. V. 52. P. 264-276.

9. Norton R. S., Pallaghy P. K. The cystine knot structure of ion channel toxins and related polypeptides//Toxicon. 1998. V. 36. P. 1573-1583.

10. Craik D. J., Daly N. L., Waine C. The cystine knot motif in toxins and implications for drug design // Toxicon. 2001. V. 39. P. 43-60.

11. Gracy J., Le-Nguyen D., Gelly J. C., Kaas Q., Heitz A., Chiche L. KNOTTIN: the knottin or inhibitor cystine knot scaffold in 2007 // Nucleic Acids Res. 2008. V. 36. P. D314-319.

12. Bulet P., Stocklin R. Insect antimicrobial peptides: structures, properties and gene regulation // Protein Pept Lett. 2005. V. 12. P. 3-11.

13. Craik D. J., Daly N. L., Mulvenna J., Plan M. R., Trabi M. Discovery, structure and biological activities of the cyclotides // Curr Protein Pept Sci. 2004. V. 5. P. 297-315.

14. Liu Z., Dai J., Dai L., Deng M., Hu Z., Hu W., Liang S. Function and solution structure of Huwentoxin-X, a specific blocker of N-type calcium channels, from the Chinese bird spider Ornithoctonus huwena // J Biol Chem. 2006. V. 281. P. 8628-8635.

15. Bernard C., Legros C., Ferrat G., Bischoff U., Marquardt A., Pongs O., Darbon H. Solution structure of hpTX2, a toxin from Heteropoda venatoria spider that blocks Kv4.2 potassium channel //Protein Sci. 2000. V. 9. P. 2059-2067.

16. Oswald R. E., Suchyna T. M., Mcfeeters R., Gottlieb P., Sachs F. Solution structure of peptide toxins that block mechanosensitive ion channels // J Biol Chem. 2002. V. 277. P. 34443-34450.

17. Shu Q., Lu S. Y., Gu X. C., Liang S. P. The structure of spider toxin huwentoxin-II with unique disulfide linkage: evidence for structural evolution // Protein Sci. 2002. V. 11. P. 245-252.

18. Pallaghy P. K., Alewood D., Alewood P. F., Norton R. S. Solution structure of robustoxin, the lethal neurotoxin from the funnel-web spider Atrax robustus // FEBS Lett. 1997. V. 419. P. 191-196.

19. Antuch W., Bemdt K. D., Chavez M. A., Delfin J., Wuthrich K. The NMR solution structure of a Kunitz-type proteinase inhibitor from the sea anemone Stichodactyla helianthus // Eur J Biochem. 1993. V. 212. P. 675-684.

20. Harvey A. L. Twenty years of dendrotoxins // Toxicon. 2001. V. 39. P. 15-26.

21. Schweitz H., Bruhn T., Guillemare E., Moinier D., Lancelin J. M., Beress L., Lazdunski M. Kalicludines and kaliseptine. Two different classes of sea anemone toxins for voltage sensitive K+ channels // J Biol Chem. 1995. V. 270. P. 25121-25126.

22. Buczek O., Bulaj G., Olivera B. M. Conotoxins and the posttranslational modification of secreted gene products // Cell Mol Life Sci. 2005. V. 62. P. 3067-3079.

23. Branton W. D., Rudnick M. S., Zhou Y., Eccleston E. D., Fields G. B., Bowers L. D. Fatty acylated toxin structure //Nature. 1993. V. 365. P. 496-497.

24. Sollod B. L., Wilson D., Zhaxybayeva O., Gogarten J. P., Drinkwater R, King G. F. Were arachnids the first to use combinatorial peptide libraries? // Peptides. 2005. V. 26. P. 131-139.

25. Jiang L., Peng L., Chen J., Zhang Y., Xiong X., Liang S. Molecular diversification based on analysis of expressed sequence tags from the venom glands of the Chinese bird spider Omithoctonus huwena//Toxicon. 2008. V. 51. P. 1479-1489.

26. Yuan D. D., Han Y. H., Wang C. G., Chi C. W. From the identification of gene organization of alpha conotoxins to the cloning of novel toxins // Toxicon. 2007. V. 49. P. 1135-1149.

27. Froy O., Sagiv Т., Poreh M., Urbach D., Zilberberg N., Gurevitz M. Dynamic diversification from a putative common ancestor of scorpion toxins affecting sodium, potassium, and chloride channels // J Mol Evol. 1999. V. 48. P. 187-196.

28. Chen J., Deng M., He Q., Meng E., Jiang L., Liao Z., Rong M., Liang S. Molecular diversity and evolution of cystine knot toxins of the tarantula Chilobrachys jingzhao // Cell Mol Life Sci. 2008. V. 65. P. 2431-2444.

29. Jiang L., Chen J., Peng L., Zhang Y., Xiong X., Liang S. Genomic organization and cloning of novel genes encoding toxin-like peptides of three superfamilies from the spider Orinithoctonus huvvena// Peptides. 2008. V. 29. P. 1679-1684.

30. Qiao P., Zuo X. P., Chai Z. F., Ji Y. H. The cDNA and genomic DNA organization of a novel toxin SHT-I from spider Ornithoctonus huwena // Acta Biochim Biophys Sin (Shanghai). 2004. V. 36. P. 656-660.

31. Данилевич В. H., Лукьянов С. А., Гришин Е. В. Клонирование и структура гена, кодирующего а-латрокрустотоксин в составе ядовитых желез паука каракурта // Биоорган химия. 1999. Т. 25. С. 537-547.

32. Данилевич В. Н., Гришин Е. В. Хромосомные гены нейротоксинов паука каракурта не содержат инронов // Биоорган химия. 2000. Т. 26. С. 933-939.

33. Krapcho К. J., Krai R. М., Jr., Vanwagenen В. С., Eppler К. G., Morgan Т. К. Characterization and cloning of insecticidal peptides from the primitive weaving spider Diguetia canities // Insect Biochem Mol Biol. 1995. V. 25. P. 991-1000.

34. Binford G. J., Cordes M. H., Wells M. A. Sphingomyelinase D from venoms of Loxosceles spiders: evolutionary insights from cDNA sequences and gene structure // Toxicon. 2005. V. 45. P. 547-560.

35. Coetzee W. A., Amarillo Y., Chiu J., Chow A., Lau D., Mccormack Т., Moreno H., Nadal M. S., Ozaita A., Pountney D., Saganich M., Vega-Saenz De Miera E., Rudy B. Molecular diversity of K+ channels // Ann NY Acad Sci. 1999. V. 868. P. 233-285.

36. Latorre R., Oberhauser A., Labarca P., Alvarez O. Varieties of calcium-activated potassium channels // Annu Rev Physiol. 1989. V. 51. P. 385-399.

37. Rudy B. Molecular diversity of ion channels and cell function // Ann NY Acad Sci. 1999. V. 868. P. 1-12.

38. Vergara C., Latorre R., Marrion N. V., Adelman J. P. Calcium-activated potassium channels // Curr Opin Neurobiol. 1998. V. 8. P. 321-329.

39. Swartz K. J., Mackinnon R. An inhibitor of the Kv2.1 potassium channel isolated from the venom of a Chilean tarantula // Neuron. 1995. V. 15. P. 941-949.

40. Takahashi H., Kim J. I., Min H. J., Sato K., Swartz K. J., Shimada I. Solution structure of hanatoxinl, a gating modifier of voltage-dependent K(+) channels: common surface features of gating modifier toxins // J Mol Biol. 2000. V. 297. P. 771-780.

41. Swartz K. J., Mackinnon R. Hanatoxin modifies the gating of a voltage-dependent K+ channel through multiple binding sites //Neuron. 1997. V. 18. P. 665-673.

42. Swartz K. J., Mackinnon R. Mapping the receptor site for hanatoxin, a gating modifier of voltage-dependent K+ channels // Neuron. 1997. V. 18. P. 675-682.

43. Li-Smerin Y., Swartz K. J. Localization and molecular determinants of the Hanatoxin receptors on the voltage-sensing domains of a K(+) channel // J Gen Physiol. 2000. V. 115. P. 673-684.

44. Li-Smerin Y., Swartz K. J. Gating modifier toxins reveal a conserved structural motif in voltage-gated Ca2+ and K+ channels // Proc Natl Acad Sci USA. 1998. V. 95. P. 8585-8589.

45. Sanguinetti M. C., Johnson J. H., Hammerland L. G., Kelbaugh P. R., Volkmann R. A., Saccomano N. A., Mueller A. L. Heteropodatoxins: peptides isolated from spider venom that block Kv4.2 potassium channels // Mol Pharmacol. 1997. V. 51. P. 491-498.

46. Diochot S., Drici M. D., Moinier D., Fink M., Lazdunski M. Effects of phrixotoxins on the Kv4 family of potassium channels and implications for the role of Itol in cardiac electrogenesis // Br J Pharmacol. 1999. V. 126. P. 251-263.

47. Corzo G., Escoubas P. Pharmacologically active spider peptide toxins // Cell Mol Life Sci. 2003. V. 60. P. 2409-2426.

48. Marvin L., De E., Cosette P., Gagnon J., Molle G., Lange C. Isolation, amino acid sequence and functional assays of SGTxl. The first toxin purified from the venom of the spider scodra griseipes // Eur J Biochem. 1999. V. 265. P. 572-579.

49. Ebbinghaus J., Legros C., Nolting A., Guette C., Celerier M. L., Pongs O., Bahring R. Modulation of Kv4.2 channels by a peptide isolated from the venom of the giant bird-eating tarantula Theraphosa leblondi // Toxicon. 2004. V. 43. P. 923-932.

50. Ruta V., Jiang Y., Lee A., Chen J., Mackinnon R. Functional analysis of an archaebacterial voltage-dependent K+ channel //Nature. 2003. V. 422. P. 180-185.

51. Ruta V., Mackinnon R. Localization of the voltage-sensor toxin receptor on KvAP // Biochemistry. 2004. V. 43. P. 10071-10079.

52. Liao Z., Yuan C., Deng M., Li J., Chen J., Yang Y., Hu W., Liang S. Solution structure and functional characterization of jingzhaotoxin-XI: a novel gating modifier of both potassium and sodium channels // Biochemistry. 2006. V. 45. P. 15591-15600.

53. Yuan C., Liao Z., Zeng X., Dai L., Kuang F., Liang S. Jingzhaotoxin-XII, a gating modifier specific for Kv4.1 channels // Toxicon. 2007. V. 50. P. 646-652.

54. Ertel E. A., Campbell K. P., Harpold M. M., Hofmann F., Mori Y., Perez-Reyes E., Schwartz A., Snutch T. P., Tanabe T., Birnbaumer L., Tsien R. W., Catterall W. A. Nomenclature of voltage-gated calcium channels //Neuron. 2000. V. 25. P. 533-535.

55. Adams M. E., Bindokas V. P., Hasegawa L., Venema V. J. Omega-agatoxins: novel calcium channel antagonists of two subtypes from funnel web spider (Agelenopsis aperta) venom // J Biol Chem. 1990. V. 265. P. 861-867.

56. Scott R. H., Dolphin A. C., Bindokas V. P., Adams M. E. Inhibition of neuronal Ca2+ channel currents by the funnel web spider toxin omega-Aga-IA // Mol Pharmacol. 1990. V. 38. P. 711-718.

57. Venema V. J., Swiderek K. M., Lee T. D., Hathaway G. M., Adams M. E. Antagonism of synaptosomal calcium channels by subtypes of omega-agatoxins // J Biol Chem. 1992. V. 267. P. 2610-2615.

58. Pocock J. M., Venema V. J., Adams M. E. Omega-agatoxins differentially block calcium channels in locust, chick and rat synaptosomes // Neurochem Int. 1992. V. 20. P. 263-270.

59. Adams M. E. Agatoxins: ion channel specific toxins from the American funnel web spider, Agelenopsis aperta // Toxicon. 2004. V. 43. P. 509-525.

60. Mintz I. M. Block of Ca channels in rat central neurons by the spider toxin omega-Aga-IIIA // J Neurosci. 1994. V. 14. P. 2844-2853.

61. Yan L., Adams M. E. The spider toxin omega-Aga IIIA defines a high affinity site on neuronal high voltage-activated calcium channels // J Biol Chem. 2000. V. 275. P. 21309-21316.

62. Olivera B. M., Miljanich G. P., Ramachandran J., Adams M. E. Calcium channel diversity and neurotransmitter release: the omega-conotoxins and omega-agatoxins // Annu Rev Biochem. 1994. V. 63. P. 823-867.

63. Mintz I. M., Venema V. J., Swiderek K. M., Lee T. D., Bean B. P., Adams M. E. P-type calcium channels blocked by the spider toxin omega-Aga-IVA // Nature. 1992. V. 355. P. 827-829.

64. Sidach S. S., Mintz I. M. Low-affinity blockade of neuronal N-type Ca channels by the spider toxin omega-agatoxin-IVA // J Neurosci. 2000. V. 20. P. 7174-7182.

65. Sather W. A., Tanabe T., Zhang J. F., Tsien R. W. Biophysical and pharmacological characterization of a class A calcium channel // Ann NY Acad Sci. 1994. V. 747. P. 294-301.

66. Leao R. M., Cruz J. S., Diniz C. R., Cordeiro M. N., Beirao P. S. Inhibition of neuronal high-voltage activated calcium channels by the omega-phoneutria nigriventer Tx3-3 peptide toxin//Neuropharmacology. 2000. V. 39. P. 1756-1767.

67. Bourinet E., Stotz S. C., Spaetgens R. L., Dayanithi G., Lemos J., Nargeot J., Zamponi G. W. Interaction of SNX482 with domains III and IV inhibits activation gating of alpha(lE) (Ca(V)2.3) calcium channels // Biophys J. 2001. V. 81. P. 79-88.

68. Arroyo G., Aldea M., Fuentealba J., Albillos A., Garcia A. G. SNX482 selectively blocks P/Q Ca2+ channels and delays the inactivation of Na+ channels of chromaffin cells // Eur J Pharmacol. 2003. V. 475. P. 11-18.

69. Newcomb R., Palma A., Fox J., Gaur S., Lau K., Chung D., Cong R., Bell J. R., Home B., Nadasdi L., Et Al. SNX-325, a novel calcium antagonist from the spider Segestria florentina//Biochemistry. 1995. V. 34. P. 8341-8347.

70. Peng K., Chen X. D., Liang S. P. The effect of Huwentoxin-I on Ca(2+) channels in differentiated NG108-15 cells, a patch-clamp study // Toxicon. 2001. V. 39. P. 491-498.

71. Wang M., Guan X., Liang S. The cross channel activities of spider neurotoxin huwentoxin-I on rat dorsal root ganglion neurons // Biochem Biophys Res Commun. 2007. V. 357. P. 579-583.

72. Pluzhnikov K., Vassilevski A., Korolkova Y., Fisyunov A., Iegorova O., Krishtal O., Grishin E. omega-Lsp-IA, a novel modulator of P-type Ca2+ channels // Toxicon. 2007. V. 50. P. 993-1004.

73. Sutton K. G., Siok C., Stea A., Zamponi G. W., Heck S. D., Volkmann R. A., Ahlijanian M. K., Snutch T. P. Inhibition of neuronal calcium channels by a novel peptide spider toxin, DW13.3 // Mol Pharmacol. 1998. V. 54. P. 407-418.

74. Bloomquist J. R. Mode of action of atracotoxin at central and peripheral synapses of insects // Invert Neurosci. 2003. V. 5. P. 45-50.

75. Villegas E., Adachi-Akahane S., Bosnians F., Tytgat J., Nakajima T., Corzo G. Biochemical characterization of cysteine-rich peptides from Oxyopes sp. venom that block calcium ion channels // Toxicon. 2008. V. 52. P. 228-236.

76. Catterall W. A., Goldin A. L., Waxman S. G. International Union of Pharmacology. XLVII. Nomenclature and structure-function relationships of voltage-gated sodium channels // Pharmacol Rev. 2005. V. 57. P. 397-409.

77. Catterall W. A., Cestele S., Yarov-Yarovoy V., Yu F. H., Konoki K., Scheuer T. Voltage-gated ion channels and gating modifier toxins // Toxicon. 2007. V. 49. P. 124-141.

78. Nicholson G. M., Willow M., Howden M. E., Narahashi T. Modification of sodium channel gating and kinetics by versutoxin from the Australian funnel-web spider Hadronyche versuta// Pflugers Arch. 1994. V. 428. P. 400-409.

79. Nicholson G. M., Little M. J., Birinyi-Strachan L. C. Structure and function of delta-atracotoxins: lethal neurotoxins targeting the voltage-gated sodium channel // Toxicon. 2004. V. 43. P. 587-599.

80. Bloomquist J. R., Kinne L. P., Deutsch V., Simpson S. F. Mode of action of an insecticidal peptide toxin from the venom of a weaving spider (Diguetia canities) // Toxicon. 1996. V. 34. P. 1072-1075.

81. Peng K., Shu Q., Liu Z., Liang S. Function and solution structure of huwentoxin-IY, a potent neuronal tetrodotoxin (TTX)-sensitive sodium channel antagonist from Chinese bird spider Selenocosmia huwena// J Biol Chem. 2002. V. 277. P. 47564-47571.

82. Xiao Y. C., Liang S. P. Purification and characterization of Hainantoxin-V, a tetrodotoxin-sensitive sodium channel inhibitor from the venom of the spider Selenocosmia hainana // Toxicon. 2003. V. 41. P. 643-650.

83. Xiao Y., Liang S. Inhibition of neuronal tetrodotoxin-sensitive Na+ channels by two spider toxins: hainantoxin-III and hainantoxin-IV // Eur J Pharmacol. 2003. V. 477. P. 1-7.

84. Li D., Xiao Y., Hu W., Xie J., Bosnians F., Tytgat J., Liang S. Function and solution structure of hainantoxin-I, a novel insect sodium channel inhibitor from the Chinese bird spider Selenocosmia hainana//FEBS Lett. 2003. V. 555. P. 616-622.

85. Bosmans F., Rash L., Zhu S., Diochot S., Lazdunski M., Escoubas P., Tytgat J. Four novel tarantula toxins as selective modulators of voltage-gated sodium channel subtypes // Mol Pharmacol. 2006. V. 69. P. 419-429.

86. Clement H., Odell G., Zamudio F. Z., Redaelli E., Wanke E., Alagon A., Possani L. D. Isolation and characterization of a novel toxin from the venom of the spider Grammostola rosea that blocks sodium channels // Toxicon. 2007. V. 50. P. 65-74.

87. Xiao Y., Tang J., Hu W., Xie J., Maertens C., Tytgat J., Liang S. Jingzhaotoxin-I, a novel spider neurotoxin preferentially inhibiting cardiac sodium channel inactivation // J Biol Chem. 2005. V. 280. P. 12069-12076.

88. Xiao Y., Li J., Deng M., Dai C., Liang S. Characterization of the excitatory mechanism induced by Jingzhaotoxin-I inhibiting sodium channel inactivation // Toxicon. 2007. V. 50. P. 507-517.

89. Xiao Y., Tang J., Yang Y., Wang M., Hu W., Xie J., Zeng X., Liang S. Jingzhaotoxin-III, a novel spider toxin inhibiting activation of voltage-gated sodium channel in rat cardiac myocytes // J Biol Chem. 2004. V. 279. P. 26220-26226.

90. Liao Z., Yuan C., Peng K., Xiao Y., Liang S. Solution structure of Jingzhaotoxin-III, a peptide toxin inhibiting both Navl.5 and Kv2.1 channels // Toxicon. 2007. V. 50. P. 135-143.

91. Wang M., Diao J., Li J., Tang J., Lin Y., Hu W., Zhang Y., Xiao Y., Liang S. JZTX-IV, a unique acidic sodium channel toxin isolated from the spider Chilobrachys jingzhao // Toxicon. 2008. V. 52. P. 871-880.

92. Zeng X., Deng M., Lin Y., Yuan C., Pi J., Liang S. Isolation and characterization of Jingzhaotoxin-V, a novel neurotoxin from the venom of the spider Chilobrachys jingzhao // Toxicon. 2007. Y. 49. P. 388-399.

93. Deng M., Kuang F., Sun Z., Tao H., Cai Т., Zhong L., Chen Z., Xiao Y., Liang S. Jingzhaotoxin-IX, a novel gating modifier of both sodium and potassium channels from Chinese tarantula Chilobrachys jingzhao // Neuropharmacology. 2009. V. 57. P. 77-87.

94. Smith J. J., Cummins T. R., Alphy S., Blumenthal К. M. Molecular interactions of the gating modifier toxin ProTx-II with NaV 1.5: implied existence of a novel toxin binding site coupled to activation // J Biol Chem. 2007. V. 282. P. 12687-12697.

95. Reis H. J., Gomez M. V., Kalapothakis E., Diniz C. R., Cordeiro M. N., Prado M. A., Romano-Silva M. A. Inhibition of glutamate uptake by Tx3-4 is dependent on the redox state of cysteine residues // Neuroreport. 2000. V. 11. P. 2191-2194.

96. Escoubas P., De Weille J. R., Lecoq A., Diochot S., Waldmann R., Champigny G., Moinier D., Menez A., Lazdunski M. Isolation of a tarantula toxin specific for a class of proton-gated Na+ channels // J Biol Chem. 2000. Y. 275. P. 25116-25121.

97. Патент US5877026 Analgesic peptides from venom of Grammostola spatulata and use thereof / Lampe R. А.; Опубл. 1999.

98. Siemens J., Zhou S., Piskorowski R., Nikai T., Lumpkin E. A., Basbaum A. I., King D., Julius D. Spider toxins activate the capsaicin receptor to produce inflammatory pain // Nature. 2006. V. 444. P. 208-212.

99. Bohlen C. J., Priel A., Zhou S., King D., Siemens J., Julius D. A bivalent tarantula toxin activates the capsaicin receptor, TRPV1, by targeting the outer pore domain // Cell. 2010. V. 141. P. 834-845.

100. Yuan C. H., He Q. Y., Peng K., Diao J. B., Jiang L. P., Tang X., Liang S. P. Discovery of a distinct superfamily of Kunitz-type toxin (KTT) from tarantulas // PLoS One. 2008. V. 3. P. e3414.

101. Liang S. P., Pan X. A lectin-like peptide isolated from the venom of the Chinese bird spider Selenocosmia huwena // Toxicon. 1995. V. 33. P. 875-882.

102. Lu S., Liang S., Gu X. Three-dimensional structure of Selenocosmia huwena lectin-I (SHL-I) from the venom of the spider Selenocosmia huwena by 2D-NMR // J Protein Chem. 1999. V. 18. P. 609-617.

103. Pimentel C., Choi S. J., Chagot B., Guette C., Camadro J. M., Darbon H. Solution structure of PcFKl, a spider peptide active against Plasmodium falciparum // Protein Sci. 2006. V. 15. P. 628-634.

104. Yan L., Adams M. E. Lycotoxins, antimicrobial peptides from venom of the wolf spider Lycosa carolinensis // J Biol Chem. 1998. V. 273. P. 2059-2066.

105. Kuhn-Nentwig L., Muller J., Schaller J., Walz A., Dathe M., Nentwig W. Cupiennin 1, a new family of highly basic antimicrobial peptides in the venom of the spider Cupiennius salei (Ctenidae) // J Biol Chem. 2002. V. 277. P. 11208-11216.

106. Liang S. Proteome and peptidome profiling of spider venoms // Expert Rev Proteomics. 2008. V.5.P. 731-746.

107. Escoubas P., Quinton L., Nicholson G. M. Venomics: unravelling the complexity of animal venoms with mass spectrometry // J Mass Spectrom. 2008. V. 43. P. 279-295.

108. Escoubas P., Sollod B., King G. F. Venom landscapes: mining the complexity of spider venoms via a combined cDNA and mass spectrometric approach // Toxicon. 2006. V. 47. P. 650-663.

109. Yuan C., Jin Q., Tang X., Hu W., Cao R., Yang S., Xiong J., Xie C., Xie J., Liang S. Proteomic and peptidomic characterization of the venom from the Chinese bird spider, Ornithoctonus huwena Wang // J Proteome Res. 2007. V. 6. P. 2792-2801.

110. Liao Z., Cao J., Li S., Yan X., Hu W., He Q., Chen J., Tang J., Xie J., Liang S. Proteomic and peptidomic analysis of the venom from Chinese tarantula Chilobrachys jingzhao //Proteomics. 2007. V. 7. P. 1892-1907.

111. Legros C., Celerier M. L., Henry M., Guette C. Nanospray analysis of the venom of the tarantula Theraphosa leblondi: a powerful method for direct venom mass fingerprinting and toxin sequencing // Rapid Commun Mass Spectrom. 2004. V. 18. P. 1024-1032.

112. Zhang Y., Chen J., Tang X., Wang F., Jiang L., Xiong X., Wang M., Rong M., Liu Z., Liang S. Transcriptome analysis of the venom glands of the Chinese wolf spider Lycosa singoriensis //Zoology (Jena). 2010. V. 113. P. 10-18.

113. The National Center for Biotechnology Information, Protein database Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein.

114. Sabourault С., Ganot P., Deleury E., Allemand D., Furla P. Comprehensive EST analysis of the symbiotic sea anemone, Anemonia viridis // BMC Genomics. 2009. V. 10. P. 333.

115. The National Center for Biotechnology Information, EST database Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nucest.

116. SignalP 3.0 server Электронный ресурс. Режим доступа: http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP.

117. Basic Local Alignment Search Tool Электронный ресурс. Режим доступа: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov.

118. Thomsen J., Bayne S. J. Microsomal alkylation with 4-vinylpyridine // J Protein Chem. 1988. V. 7. P. 295-296.

119. Dixon M. The determination of enzyme inhibitor constants // Biochem J. 1953. V. 55. P. 170-171.

120. Otvos L., Cudic M. Broth microdilution antibacterial assay of peptides // Methods Mol Biol. 2007. Y. 386. P. 309-320.

121. Wiegand I., Hilpert K., Hancock R. E. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances // Nat Protoc. 2008. , V. 3.P. 163-175.

122. Julius D., Brake A., Blair L., Kunisawa R., Thorner J. Isolation of the putative structural gene for the lysine-arginine-cleaving endopeptidase required for processing of yeast prepro-alpha-factor // Cell. 1984. V. 37. P. 1075-1089.

123. Van De Ven W. J., Roebroek A. J., Van Duijnhoven H. L. Structure and function of eukaryotic proprotein processing enzymes of the subtilisin family of serine proteases // CritRev Oncog. 1993. V. 4. P. 115-136.

124. Rehfeld J. F., Goetze J. P. The posttranslational phase of gene expression: new possibilities in molecular diagnosis // Curr Mol Med. 2003. V. 3. P. 25-38.

125. Gomord V., Faye L. Posttranslational modification of therapeutic proteins in plants // Curr Opin Plant Biol. 2004. V. 7. P. 171-181.

126. Routtenberg A., Rekart J. L. Post-translational protein modification as the substrate for long-lasting memory // Trends Neurosci. 2005. V. 28. P. 12-19.

127. Xin X., Varlamov O., Day R., Dong W., Bridgett M. M., Leiter E. H., Fricker L. D. Cloning and sequence analysis of cDNA encoding rat carboxypeptidase D // DNA Cell Biol. 1997. V. 16. P. 897-909.

128. Fricker L. D. Carboxypeptidase E // Annu Rev Physiol. 1988. V. 50. P. 309-321.

129. Mentlein R. Dipeptidyl-peptidase IV (CD26)-role in the inactivation of regulatory peptides // Regul Pept. 1999. V. 85. P. 9-24.

130. Eipper B. A., Stoffers D. A., Mains R. E. The biosynthesis of neuropeptides: peptide alpha-amidation//Annu Rev Neurosci. 1992. V. 15. P. 57-85.

131. Prigge S. T., Mains R. E., Eipper B. A., Amzel L. M. New insights into copper monooxygenases and peptide amidation: structure, mechanism and function // Cell Mol Life Sci. 2000. V. 57. P. 1236-1259.

132. Satani M., Takahashi K., Sakamoto H., Harada S., Kaida Y., Noguchi M. Expression and characterization of human bifunctional peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase // Protein Expr Purif. 2003. V. 28. P. 293-302.

133. Fuller R. S., Brake A. J., Thorner J. Intracellular targeting and structural conservation of a prohormone-processing endoprotease // Science. 1989. V. 246. P. 482-486.

134. Schechter I., Berger A. On the size of the active site in proteases. I. Papain // Biochem Biophys Res Commun. 1967. V. 27. P. 157-162.

135. Matthews D. J., Goodman L. J., Gorman C. M., Wells J. A. A survey of furin substrate specificity using substrate phage display // Protein Sci. 1994. V. 3. P. 1197-1205.

136. Lindberg I., Hutton J. C. Peptide processing proteinases with selectivity for paired basic residues. // Peptide Biosynthesis and Processing / Eds. Fricker L. D. Boca Raton, FL: CRC Press, 1991. P. 141-174.

137. Lipkind G., Gong Q., Steiner D. F. Molecular modeling of the substrate specificity of prohormone convertases SPC2 and SPC3 // J Biol Chem. 1995. V. 270. P. 13277-13284.

138. Nakayama K. Furin: a mammalian subtilisin/Kex2p-like endoprotease involved in processing of a wide variety of precursor proteins // Biochem J. 1997. V. 327. P. 625-635.

139. Molloy S. S., Anderson E. D., Jean F., Thomas G. Bi-cycling the furin pathway: from TGN localization to pathogen activation and embryogenesis // Trends Cell Biol. 1999. V. 9. P. 28-35.

140. Klimpel K. R., Molloy S. S., Thomas G., Leppla S. H. Anthrax toxin protective antigen is activated by a cell surface protease with the sequence specificity and catalytic properties of furin // Proc Natl Acad Sci USA. 1992. V. 89. P. 10277-10281.

141. Cheng D., Espenshade P. J., Slaughter C. A., Jaen J. C., Brown M. S., Goldstein J. L. Secreted site-1 protease cleaves peptides corresponding to luminal loop of sterol regulatory element-binding proteins // J Biol Chem. 1999. V. 274. P. 22805-22812.

142. Hara-Nishimura I., Takeuchi Y. , Nishimura M. Molecular characterization of a vacuolar processing enzyme related to a putative cysteine proteinase of Schistosoma mansoni // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 1651-1659.

143. Janzik I., Macheroux P., Amrhein N., Schaller A. LeSBTl, a subtilase from tomato plants. Overexpression in insect cells, purification, and characterization // J Biol Chem. 2000. V. 275. P. 5193-5199.

144. Boyd P. M., Barnaby N., Tan-Wilson A., Wilson K. A. Cleavage specificity of the subtilisin-like protease CI from soybean // Biochim Biophys Acta. 2002. V. 1596. P. 269-282.

145. Coffeen W. C., Wolpert T. J. Purification and characterization of serine proteases that exhibit caspase-like activity and are associated with programmed cell death in Avena sativa//Plant Cell. 2004. V. 16. P. 857-873.

146. Christie A. E. In silico analyses of peptide paracrines/hormones in Aphidoidea // Gen Comp Endocrinol. 2008. V. 159. P. 67-79.

147. Sunagawa S., Desalvo M. K., Yoolstra C. R., Reyes-Bermudez A., Medina M. Identification and gene expression analysis of a taxonomically restricted cysteine-rich protein family in reef-building corals // PLoS One. 2009. V. 4. P. e4865.

148. Wigger E., Kuhn-Nentwig L., Nentwig W. The venom optimisation hypothesis: a spider injects large venom quantities only into difficult prey types // Toxicon. 2002. V. 40. P. 749-752.

149. Malli H., Kuhn-Nentwig L., Imboden H., Nentwig W. Effects of size, motility and paralysation time of prey on the quantity of venom injected by the hunting spider Cupiennius salei // J Exp Biol. 1999. V. 202. P. 2083-2089.

150. Boeve J. L., Kuhn-Nentwig L., Keller S., Nentwig W. Quantity and quality of venom released by a spider (Cupiennius salei, Ctenidae) // Toxicon. 1995. V. 33. P. 1347-1357.

151. Qu Y., Liang S., Ding J., Liu X., Zhang R., Gu X. Proton nuclear magnetic resonance studies on huwentoxin-I from the venom of the spider Selenocosmia huwena: 2. Three-dimensional structure in solution// J Protein Chem. 1997. V. 16. P. 565-574.

152. Omecinsky D. O., Holub K. E., Adams M. E., Reily M. D. Three-dimensional structure analysis of mu-agatoxins: further evidence for common motifs among neurotoxins with diverse ion channel specificities // Biochemistry. 1996. V. 35. P. 2836-2844.

153. Inui T., Hagiwara K., Nakajima K., Kimura T., Nakajima T., Sakakibara S. Synthesis and disulfide structure determination of agelenin: identification of the carboxy-terminus as an amide form // Pept Res. 1992. V. 5. P. 140-144.

154. Parkinson J., Blaxter M. Expressed sequence tags: an overview // Methods Mol Biol. 2009. V. 533. P. 1-12.

155. Quevillon E., Silventoinen V., Pillai S., Harte N., Mulder N., Apweiler R., Lopez R. InterProScan: protein domains identifier // Nucleic Acids Res. 2005. V. 33. P. 116-120.

156. Manoleras N., Norton R. S. Three-dimensional structure in solution of neurotoxin III from the sea anemone Anemonia sulcata// Biochemistry. 1994. V. 33. P. 11051-11061.

157. Anderluh G., Macek P. Cytolytic peptide and protein toxins from sea anemones (Anthozoa: Actiniaria) // Toxicon. 2002. V. 40. P. 111-124.

158. Elliott R. С., Konya R. S., Vickneshwara К. The isolation of a toxin from the dahlia sea anemone, Tealia felina L // Toxicon. 1986. V. 24. P. 117-122.

159. Anderluh G., Pungercar J., Strukelj В., Macek P., Gubensek F. Cloning, sequencing, and expression of equinatoxin II // Biochem Biophys Res Commun. 1996. V. 220. P. 437-442.

160. Ильина А. П., Монастырная M. M., Исаева М. П., Гузев К. В., Рассказов В. А., Козловская Э. П. Первичная структура актинопоринов актинии Oulactis orientalis // Биоорг химия. 2005. Т. 31. С. 357-362.

161. Cline Е. I., Wiebe L. I., Young J. D., Samuel J. Toxic effects of the novel protein Upl from the sea anemone Urticina piscivora // Pharmacol Res. 1995. V. 32. P. 309-314.

162. Grotendorst G. R., Hessinger D. A. Purification and partial characterization of the phospholipase A2 and co-lytic factor from sea anemone (Aiptasia pallida) nematocyst venom//Toxicon. 1999. V. 37. P. 1779-1796.

163. Монастырная M. M., Козловская Э. П., Иванов А. С., Мольнар А. А., Халилов Э. М., Еляков Г. Б. Действие метридиолизина из морской анемоны Metridium senile на биологические и модельные мембраны // Биол мембраны. 1988. Т. 5. С. 830-835.

164. Diochot S., Schweitz Н., Beress L., Lazdunski M. Sea anemone peptides with a specific blocking activity against the fast inactivating potassium channel Kv3.4 // J Biol Chem.1998. V. 273. P. 6744-6749.

165. Alsen C. Biological significance of peptides from Anemonia sulcata // Fed Proc. 1983. V. 42. P. 101-108.

166. Wunderer G., Machleidt W., Fritz H. The broad-specificity proteinase inhibitor 5 II from the sea anemone Anemonia sulcata // Methods Enzymol. 1981. V. 80. P. 816-820.

167. Wang H. X., Ng Т. B. Concurrent isolation of a Kunitz-type trypsin inhibitor with antifungal activity and a novel lectin from Pseudostellaria heterophylla roots // Biochem Biophys Res Commun. 2006. V. 342. P. 349-353.

168. Beress L., Wunderer G., Wachter E. Amino acid sequence of toxin III from Anemonia sulcata//Hoppe Seylers Z Physiol Chem. 1977. V. 358. P. 985-988.

169. Moran Y., Weinberger H., Lazarus N., Gur M., Kahn R., Gordon D., Gurevitz M. Fusion and retrotransposition events in the evolution of the sea anemone Anemonia viridis neurotoxin genes // J Mol Evol. 2009. V. 69. P. 115-124.

170. Shiomi K., Honma Т., Ide M., Nagashima Y., Ishida M., Chino M. An epidermal growth factor-like toxin and two sodium channel toxins from the sea anemone Stichodactyla gigantea // Toxicon. 2003. V. 41. P. 229-236.

171. Honma Т., Hasegawa Y., Ishida M., Nagai H., Nagashima Y., Shiomi K. Isolation and molecular cloning of novel peptide toxins from the sea anemone Antheopsis maculata // Toxicon. 2005. V. 45. P. 33-41.

172. Darmer D., Hauser F., Nothacker H. P., Bosch Т. C., Williamson M., Grimmelikhuijzen C. J. Three different prohormones yield a variety of Hydra-RFamide (Arg-Phe-NH2) neuropeptides in Hydra magnipapillata// Biochem J. 1998. V. 332. P. 403-412.

173. Gajewski M., Leitz Т., SchloBherr J., Plickert G., Ehnasri H. LWamides from Cnidaria constitute a novel family of neuropeptides with morphogenetic activity // Dev Genes Evol. 1996. V. 205. P. 232-242.

174. Mcfarlane I. D., Anderson P. A., Grimmelikhuijzen C. J. Effects of three anthozoan neuropeptides, Antho-RWamide I, Antho-RWamide II and Antho-RFamide, on slow muscles from sea anemones // J Exp Biol. 1991. V. 156. P. 419-431.

175. Katsukura Y., Ando H., David C. N., Grimmelikhuijzen C. J., Sugiyama T. Control of planula migration by LWamide and RFamide neuropeptides in Hydractinia echinata // J Exp Biol. 2004. V. 207. P. 1803-1810.

176. Сагдиев, H. Ж., Валиева, JI. А., Корнеев, А. С., Садыков, А. А., Салихов, Ш. И. Изучение токсических компонентов яда погребного паука Segestria florentina // Биоорг химия. 1987. Т. 13. С. 1013-1018.

177. Shin S. Y., Kang S. W., Lee D. G., Eom S-. H., Song W. K., Kim J. I. CRAMP analogues having potent antibiotic activity against bacterial, fungal, and tumor cells without hemolytic activity // Biochem Biophys Res Commun. 2000. V. 275. P. 904-909.

178. Tossi A., Scocchi M., Skerlavaj В., Gennaro R. Identification and characterization of a primary antibacterial domain in CAP 18, a lipopolysaccharide binding protein from rabbit leukocytes // FEBS Lett. 1994. V. 339. P. 108-112.

179. Raghuraman H., Chattopadhyay A. Melittin: a membrane-active peptide with diverse functions // Biosci Rep. 2007. V. 27. P. 189-223.

180. Rajan R., Balaram P. A model for the interaction of trifluoroethanol with peptides and proteins // Int J Pept Protein Res. 1996. V. 48. P. 328-336.

181. Caterina M. J., Leffler A., Malmberg А. В., Martin W. J., Trafton J., Petersen-Zeitz K. R., Koltzenburg M., Basbaum A. I., Julius D. Impaired nociception and pain sensation in mice lacking the capsaicin receptor // Science. 2000. V. 288. P. 306-313.

182. Szallasi A., Cortright D. N., Blum C. A., Eid S. R. The vanilloid receptor TRPV1: 10 years from channel cloning to antagonist proof-of-concept // Nat Rev Drug Discov. 2007. V. 6. P. 357-372.

183. Immke D. C., Gavva N. R. The TRPY1 receptor and nociception // Semin Cell Dev Biol. 2006. V. 17. P. 582-591.

184. Garcia-Martinez C., Morenilla-Palao C., Planells-Cases R., Merino J. M., Ferrer-Montiel A. Identification of an aspartic residue in the P-loop of the vanilloid receptor that modulates pore properties // J Biol Chem. 2000. V. 275. P. 32552-32558.

185. Planells-Cases R., Aracil A., Merino J. M., Gallar J., Perez-Paya E., Belmonte C., Gonzalez-Ros J. M., Ferrer-Montiel A. V. Arginine-rich peptides are blockers of VR-1 channels with analgesic activity // FEBS Lett. 2000. V. 481. P. 131-136.

186. Kitaguchi Т., Swartz K. J. An inhibitor of TRPV1 channels isolated from funnel Web spider venom // Biochemistry. 2005. V. 44. P. 15544-15549.

187. Зыкова Т. А., Винокуров JT. M., Маркова Л. Ф., Козловская Э. П., Еляков Г. Б. Аминокислотная последовательность трипсинового ингибитора IV из Radianthus macrodactylus. //Биоорг химия. 1985. Т. 11. С. 293-301.

188. Le Bars D., Gozariu M., Cadden S. W. Animal models of nociception // Pharmacol Rev. 2001. V. 53. P. 597-652.