Новые подходы к идентификации и определению сапонинов растений методом высокоэффективной жидкостной хромато-масс-спектрометрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат наук Стекольщикова, Елена Алексеевна

• Стекольщикова, Елена Алексеевна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Стекольщикова, Елена Алексеевна

Содержание

Список используемых сокращений

Введение

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Объекты исследования

1.2. Методы извлечения сапонинов

1.3. Методы идентификации и определения сапонинов

1.4. Методы количественного анализа, используемые для контроля качества растительного сырья

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Оборудование и материалы

2.2. Техника эксперимента по изучению масс - спектрометрического поведения сапонинов

2.3. Техника эксперимента по изучению состава женьшеневого улуна

2.4. Техника эксперимента по разработке методов определения сапонинов

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ МАСС - СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО ПОВЕДЕНИЯ САПОНИНОВ

3.1. Изучение особенностей масс - спектрометрического поведения гинсенозидов женьшеня

3.2. Изучение особенностей масс - спектрометрического поведения стероидных сапонинов якорцев стелющихся

3.3. Изучение особенностей масс - спектрометрического поведения сапонинов солодки

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ВЭЖХ - МС ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ГЛИКОЗИДОВ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИХ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ

4.1. Идентификация и определение глицирризина в составе женьшеневого улуна в режиме МЗР

4.2. Анализ состава женьшеневого улуна

4.3. Применение режима детектирования выделенных ионов для групповой масс -спектрометрической идентификации сапонинов

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА САПОНИНОВ

5.1. Особенности хроматографического поведения гинсенозидов женьшеня

5.2. Разработка метода КАМС для определения гинсенозидов женьшеня

5.3. Изучение извлечения и хроматографического поведения сапонинов растения Т. terrestris для разработки ВЭЖХ - МС - КАМС способа их определения

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БАД биологически активная добавка

ВП входной потенциал

ВЭЖХ высокоэффективная жидкостная хроматография

ГХ газовая хроматография

ДМД диодно - матричное детектирование

ДМСО диметилсульфоксид

ЗЧАД детектирование заряженных частиц в аэрозоле

ИДСР испарительное детектирование по светорассеянию

ИЦРФП масс - спектрометр на основе ион - циклотронного резонанса с Фурье преобразованием

ИЭР ионизация электрораспылением

КАМС количественный анализ многокомпонентной системы

ЛС лекарственные средства

МВЭ микроволновая экстракция

МЗР мониторинг заданных реакций

МС масс - спектрометрия

МСВР масс-спектрометрия высокого разрешения

ОАК олеаноловая кислота

ООМ относительная ошибка метода

ОСО относительное стандартное отклонение

ОТ окотиллол

ОФ относительный фактор

ПД потенциал декластеризации

ПМР протонный магнитный резонанс

ППД протопанаксадиол

ППТ протопанаксатриол

СФЭ сверхкритическая флюидная экстракция

СЭ экстракция в аппарате Сокслета

ТМ традиционная медицина

ТСХ тонкослойная хроматография

УЗЭ ультразвуковая экстракция

УФ ультрафиолетовый

ХИАД химическая ионизация

ЭКР экстракция кипящим растворителем

ЭКРПН экстракция кипящим растворителем при пониженном давлении

ЯМР ядерный магнитный резонанса

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые подходы к идентификации и определению сапонинов растений методом высокоэффективной жидкостной хромато-масс-спектрометрии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. На рынке растительного сырья и вторичной продукции на его основе зачастую происходят случаи фальсификации, т.е. умышленного изменения свойств и качества продукта за счет замены ценных лекарственных растений более дешёвыми аналогами, действие которых на человеческий организм может оказаться непредсказуемым. В некоторых случаях лекарственные растения входят в состав биологически активных добавок (БАД) или средств традиционной медицины (ТМ) в качестве добавки, а не основного компонента, что обуславливает необходимость разработки чувствительных и селективных методов аналитического контроля таких продуктов.

Сапонины представляют собой структурно разнообразный класс соединений, встречающийся у многих видов растений и характеризующийся скелетом, полученным от 30-углеродного предшественника - 2,3-оксидосквалена, к которому присоединены гликозидные остатки. Сапонины подразделяются на тритерпеноидные и стероидные гликозиды, которые, в свою очередь, делятся на спиростаноловые и фуростаноловые. Известны сотни гликозидов, входящих в состав таких растений, как женьшень, якорцы, солодка и пр. Традиционно для определения таких компонентов в растительном сырье и лекарственных средствах используют методы тонкослойной хроматографии (ТСХ) и высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в сочетании с УФ - детектированием, а идентификацию проводят по совпадению времен удерживания наблюдаемых хроматографических пиков с временами удерживания на хроматограмме стандартной смеси определяемых соединений. Такой подход предполагает определение нескольких основных компонентов - биомаркеров, по содержанию которых оценивают подлинность и качество исследуемого растительного материала или препарата. При этом содержание минорных компонентов не контролируется, поскольку стандартные образцы для них получают препаративным хроматографическим выделением из растительных экстрактов, что делает такой исчерпывающий анализ сапонинового профиля образца трудоемким и дорогостоящим. В условиях ограниченной доступности стандартных образцов для

одновременной количественной оценки содержания нескольких компонентов растений во многих современных ВЭЖХ - УФ методиках применяют способ количественного анализа многокомпонентной системы (КАМС), основанный на использовании относительных факторов отклика. Наибольшие затруднения возникают при трансформации определяемых соединений при обработке исходного сырья, а также при анализе лекарственных составов и БАД из нескольких растений, содержащих смесь сапонинов и других компонентов. В этом случае идентификация сапонинов затруднена из-за отсутствия характеристичных максимумов в их спектрах поглощения и перекрывания хроматографических пиков. В этой связи, актуальной задачей является разработка и применение более селективных и информативных подходов на основе современных способов «мягкой» ионизации и масс-спектрометрического детектирования. Разрабатываемые подходы должны обеспечивать не только возможность проведения одновременного определения большого числа соединений, но и уменьшение количества стандартных образцов. Также, необходимо разработать способы, позволяющие проводить отнесение сапонинов к отдельным группам по типу остова молекулы - сапогенина, используя характеристичные сигналы фрагментных ионов, и, таким образом, многократно увеличить получаемый объем информации о составе исследуемого растительного объекта в режиме скрининга.

Цель работы состояла в изучении особенностей формирования масс-спектров электрораспылительной ионизации тритерпеновых и стероидных сапонинов, разработке и оценке границ применимости унифицированных способов их обнаружения, групповой идентификации и определения в растительном сырье и продуктах на его основе методом ВЭЖХ - МС.

Достижение поставленной цели предусматривало решение следующих задач:

1. Изучение фрагментации исследуемых групп сапонинов в условиях электрораспылительной ионизации. Выявление групповых особенностей формирования масс - спектров на примере различных сапонинов женьшеня, солодки,

абруса и якорцев и выбор характеристичных сигналов, которые следует использовать для обнаружения и идентификации этих компонентов.

2. Выбор условий извлечения и очистки гликозидных фракций из растительных материалов и продуктов на их основе и определение их качественного и количественного состава методами ВЭЖХ - МСВР и ЯМР, а также выбор условий проведения гидролиза для выделения неизвестных сапогенинов.

3. Создание способов быстрого ВЭЖХ - МС скрининга экстрактов из растительного сырья и многокомпонентных препаратов для обнаружения и идентификации исследуемых групп сапонинов.

4. Исследование хроматографического поведения сапонинов на неподвижных фазах с различной селективностью в условиях обращенно - фазовой ВЭЖХ и выбор условий разделения соединений, регистрируемых по групповым характеристичным сигналам фрагментных ионов.

5. Выбор референтных компонентов и условий детектирования для ВЭЖХ -МС определения сапонинов с помощью способа КАМС и определение метрологических характеристик разработанных подходов.

Научная новизна. Изучено формирование сигналов в масс-спектрах ионизации электрораспылением физиологически активных сапонинов женьшеня, солодки, абруса и якорцев, что позволило расширить и унифицировать предложенный ранее оригинальный способ обнаружения и групповой идентификации сапонинов женьшеня с использованием характеристичных сигналов, образующих паттерны фрагментации сапогенинов. Разработан способ масс-спектрометрического детектирования исследованных групп соединений в режиме регистрации выделенных ионов, позволяющий проводить скрининговое обнаружение и групповую идентификацию сапонинов в течение одного хроматографического анализа.

Выбраны условия обращенно - фазового хроматографического разделения тритерпеновых сапонинов женьшеня с использованием в качестве неподвижной фазы сорбента на основе силикагеля с пентафторфенильными заместителями, совместимые с последующим МС детектированием. Предложенный ВЭЖХ - МС способ

обеспечивает более высокую селективность разделения гинсенозидов протопанаксатриольного (ППТ) и протопанакасадиольного (ППД) типа, а также достоверность и чувствительность обнаружения, обусловленные регистрацией сигналов выделенных диагностических ионов, по сравнению с описанными в литературе подходами.

Изучен состав гликозидной фракции, выделенной из женьшеневого улуна, и обнаружено 6 ранее не описанных производных абрусогенина. Идентификация компонентов поведена с помощью методов ВЭЖХ - МС/МС, ВЭЖХ - МСВР и ЯМР. Групповая идентификация компонентов, проведенная с помощью разработанного подхода, подтверждена при сопоставлении профилей гликозидов в экстрактах из чая и исходного растительного сырья.

Предложены способы селективного ВЭЖХ - МС - КАМС анализа растительных экстрактов из женьшеня и якорцев стелющихся, выгодными отличиями которых являются стабильность значений факторов отклика, обусловленная регистрацией одинаковых по значению m/z сигналов фрагментных ионов для референтных и определяемых соединений, а также возможность проводить более достоверную идентификацию определяемых соединений по сигналам в масс-спектре, по сравнению с использованием относительных времен удерживания в предложенных ранее ВЭЖХ - УФ - КАМС подходах.

Практическая значимость. Предложен унифицированный ВЭЖХ - МС подход для групповой идентификации и определения сапонинов, входящих в состав лекарственных средств и пищевых добавок на основе женьшеня, солодки и якорцев стелющихся.

Предложен подход для быстрого скрининга и обнаружения сапонинов, отвечающих за сладкий вкус и аромат продуктов и препаратов на основе женьшеня, солодки и абруса молитвенного.

Предложены способы извлечения сапонинов из образцов растительных материалов и коммерческих продуктов, обеспечивающие эффективное извлечение и очистку получаемых фракций.

Получены данные о химическом составе женьшеневого чая (улуна), который находится в свободной продаже по всему миру. Дальнейшее исследование обнаруженных новых соединений позволит определить их влияние на организм человека и повысить безопасность данного продукта питания и его аналогов.

Разработана стратегия ВЭЖХ - МС - КАМС анализа экстрактов из растительного сырья и продуктов на его основе, которая позволяет многократно снизить затраты на приобретение дорогостоящих стандартных образцов определяемых сапонинов, а также получить данные о содержании их аналогов, стандартные образцы которых в коммерческом доступе отсутствуют.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Результаты исследования особенностей масс-спектров электрораспылительной ионизации сапонинов женьшеня, солодки и якорцев с использованием источников ионов разной конструкции.

2. Способ быстрого скрининга, основанный на регистрации диагностических ионов из паттернов фрагментации сапогенинов, позволяющий проводить обнаружение и отнесение сапонинов к разным классам, а также осуществлять проверку подлинности растительного сырья и препаратов на его основе.

3. Условия извлечения и очистки гликозидных фракций, с последующим гидролизом для выделения сапогенина и результаты проведения идентификации сапонинов, входящих в состав листьев абруса молитвенного и женьшеневого чая, методами ВЭЖХ - МС/МС, ВЭЖХ - МСВР и ЯМР.

4. Условия хроматографического разделения гинсенозидов ППТ и ППД типа в обращенно-фазовом режиме на сорбентах с различной селективностью, совместимые с последующим МС детектированием низкого разрешения.

5. Разработанные ВЭЖХ - МС - КАМС способы обнаружения и селективного определения тритерпеновых сапонинов женьшеня и стероидных сапонинов якорцев стелющихся в экстрактах из растительного сырья и продуктах на их основе.

Апробация работы.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 статей в российских и зарубежных журналах и 20 тезисов докладов.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, 3 глав экспериментальной части, общих выводов и списка цитируемой литературы. Материал изложен на 178 страницах машинописного текста (без учета приложения), содержит 2 схемы, 50 рисунков и 48 таблиц, в списке цитируемой литературы 163 источника. Приложение включает 12 рисунков и 14 таблиц на 16 страницах.

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

В течение тысячелетий для предотвращения и лечения различных заболеваний использовали рецепты ТМ, представляющие смесь экстрактов нескольких лекарственных растений. Их терапевтическое действие обусловлено комплексным воздействием биологически активных веществ: алкалоидов, гликозидов, кумаринов и фурокумаринов, эфирных масел, смол, дубильных веществ, витаминов и др.

Сапонины широко известны как нелетучие, поверхностно - активные вещества, встречающиеся более, чем в 90 семействах растений и являющиеся вторичными метаболитами, синтезирующимися в ходе естественной программы роста и развития растения или в ответ на патогенную атаку или стресс [1-3].

Стероидные сапонины относятся к сложным безазотистым органическим соединениям, состоящим из агликона (сапогенина) и углеводной части, и содержатся в корнях, лепестках и листьях высших растений. Растения, накапливающие тритерпеновые сапонины, не содержат стероидные, и наоборот. В растениях сапонины обычно находятся в клеточном соке почти всех органов в растворенном виде [4]. Стероиды — бесцветные, реже желтоватые аморфные или кристаллические вещества, углеводная часть которых имеет до 4 сахаридных остатков. Сапонины с 1 - 4 моносахаридными остатками плохо растворимы в воде; легко — в водных растворах этанола и метанола (60 - 70%) на холоде [5]. Легко гидролизуются ферментами и кислотами.

Структура молекул сапонинов состоит из гидрофобной (агликон) и гидрофильной (однин или несколько присоединённых сахаридных заместителей) частей [2]. С химической точки зрения термин «сапонин» относится к определённой группе молекул, включающей в себя гликозилированные стероиды, стероидные алкалоиды и тритерпеноиды. Сапонины подразделяют на два основных класса: тритерпеновые и стероидные [6], которые в свою очередь делятся на спиростаноловые и фуростаноловые. Оба класса происходят от общего предшественника — оксидосквалена, содержащего 30 атомов углерода. В структуре тритерпеновых сапонинов сохраняются все 30 атомов углерода, а в зависимости от количества

углеродных колец в структуре, их можно разделить тетрациклические, содержащие 4 углеродных кольца, и пентациклические, содержащие 5 углеродных колец. В остове стероидных сапонинов удалены три метильные группы. Иногда к классу сапонинов причисляют также гликостероидные алкалоиды, однако их следует относить к отдельной группе, поскольку их агликон содержит атом азота [7].

Сапонины обладают широким спектром свойств, включающим в себя сладкий или горький вкус [8,9], способность образовывать пены и эмульсии [10], проявляют различные фармакологические и медицинские свойства [11], а именно: гемолитическую, противомикробную и инсектицидную активность [12]. Сапонины нашли широкое применение при изготовлении напитков [10], кондитерских изделий [13] и косметической продукции [14].

Совокупность различных гликозидов зачастую присутствует в растении в виде сложной комбинации, а их состав и соотношение значительным образом зависят от генетических особенностей растения, типа ткани, возраста и физиологического состояния растения, а так же условий окружающей среды [10,15-18]. В связи с этим определение качественного и количественного состава гликозидов является важной и актуальной задачей в области контроля качества растительного сырья.

1.1. Объекты исследования

1.1.1. Корень женьшеня

Женьшень считается одним из самых ценных лекарственных растений, и в настоящее время он широко используется как в альтернативной, так и в традиционной медицине Китая, Кореи и Японии [19]. Женьшень оказывает влияние на центральную нервную, эндокринную, сердечно-сосудистую, а также иммунную системы, обладает противоопухолевыми, антистрессовыми свойствами и антиоксидантной активностью [20-22]. Женьшень и продукция на его основе применяются в качестве общеукрепляющего средства (адаптогена), поскольку они способствуют повышению приспосабливаемости организма к изменяющимся неблагоприятным условиям окружающей среды. Также существуют исследования, подтверждающие

эффективность применения препаратов женьшеня в лечении злокачественных образований [23].

Согласно ботанической классификации, женьшень настоящий — Panax ginseng C.A.Meyer относится к отделу (Magnoliophyta), классу Двудольные (Magnoliopsida), порядку Зонтикоцветные (Apiales), роду Женьшень (Panax) семействa Аралиевые (Araliacee). В настоящее время известно более 11 различных видов женьшеней, обладающих уникальным набором свойств за счет разнообразия содержащихся в них биологически активных компонентов.

Основную фармакологическую активность женьшеня приписывают содержащимся в его составе гинсенозидам — тетрациклическим тритерпеновым сапонинам, относящимся к классу производных даммарана. К настоящему моменту известно более 600 различных гинсенозидов [24].

Тетрациклические тритерпеновые сапонины представлены гинсенозидами с протопанаксатриольными (ППТ), протопанаксадиольными (ППД), окотиллольными (ОТ) сапогенинами (рис. 1, 2). В структуре сапогенина ОТ - типа имеется эпоксидное пятичленное кольцо в положении С - 20. Кроме того, встречаются соединения с модифицированной структурой боковой цепи: гидратация по двойной связи (положения 24 - 25), дегидратация в положениях 20 - 21 или 20 - 22 и другие. В состав женьшеня также входят производные олеаноловой кислоты (ОАК) [25], относящиеся к пентациклическим трипертеновым сапонинам (рис. 3).

Рис. 1. Структура ППТ (R1 = H) и ППД (R3 = H) гинсенозидов. R2, OR1 (R3) — сахаридные цепи.

Помимо сапогенина в состав гинсенозида входят сахаридные остатки, находящиеся в положениях С - 3 и/или С - 20 у гинсенозидов ППД - типа, С - 6 и/или С - 20 у гинсенозидов ППТ - типа, С - 6 у гинсенозидов ОТ - типа, С - 3 и/или С - 28 у производных ОАК.

0«4

Рис. 2. Структура ОТ гинсенозидов. OR4 — сахаридная цепь в положении С6.

В состав сахаридных заместителей входят глюкозa, рaмноза, ксилоза. Существенный вклад в суммарное содержание гинсенозидов в необработанном сырье вносят, так называемые, «кислотные» гинсенозиды, в структуре которых сахаридные фрагменты содержат ацетил - (1), малонил - (2), бутеноил (3), гептеноил (4) и иные заместители (рис. 4).

e^OR5

Рис. 3. Структура ОАК гинсенозидов. OR5 — сахаридная цепь в положении С28.

0 O O

O

O

R

R

Рис. 4. Примеры возможных заместителей в сахаридной цепи гинсенозидов.

Наиболее часто в литературе встречаются тривиальные названия гинсенозидов, основанные на их миграции на пластинах ТСХ и формирующиеся по принципу уменьшения полярности и сокращению числа сахаридных заместителей от от «a» до

1

2

3

4

«h» (Ra1, Rb2, Rc и т.д.) [26]. Для более подробной расшифровки структуры гликозидов иногда используют обозначения в виде «S - 20 - R1 - 6(3) - R2», где S — сапогенин, а R1 и R2 — последовательность сокращенных названий сахаридных остатков и их заместителей [27].

1.1.2. Трава якорцев стелющихся

Якорцы стелющиеся (Tribulus terrestris Linnaeus.) — вид цветковых растений рода Якорцы (Tribulus L.) семейства Парнолистниковые (Zygophyllaceae), произрастающие в умеренном и тропическом климате в Южной Европе, Южной Азии, в Африке и северной Австралии [28]. В традиционной китайской и индийской медицине T. terrestris издревле используют для лечения различных заболеваний. Препараты на основе данного растения обладают тонизирующими, противоотечными, противоопухолевыми, мочегонными, противомикробными, противовоспалительными, антисклеротическими и ранозаживляющими свойствами [29], а также проявляют свойства афродизиака [30]. Биологические свойства данного растения обусловлены химическим составом стероидного профиля двух различных групп соединений (не менее 0,7 %): менее полярных - спиростаноловых и более полярных -фуростаноловых сапонинов [31], агликоном которых является диосгенин (рис. 5).

Спиростаноловый сапогенин Фуростаноловый сапогенин

Сапогенин R, r2 r3 r,

Тигогеиин н н сн2 он

Гитогенин н он сн2 он

Хецо гении —О н сн2 он

Хлорогенин н н СН(ОН) он

Диосгенин н н =сн он

Примеры спиросапонинов

Диосцин н н =сн OGIc(Rha}Rha

Аговозид =о н сн, OGIc

Примеры фурустаноловыхсапонинов

Протодиосцин н н =сн OGIc(Rha)Rha

Прототрибестин н н =сн OGIc(Rha)S03Na

Рис. 5. Структуры спиростаноловых и фуростаноловых стероидных сапонинов.

В работе [28] отражены существенные различия в содержании стероидных сапонинов в зависимости от региона произрастания и времени сбора растения, а также определено, что основным представителем стероидных гликозидов фуростанолового типа является протодиосцин, а спиростанолового - диосцин.

1.1.3. Корен ь сол одки гол ой

Корень солодки голой (Glycyrrhiza glabra) семейства бобовые (Fabaceae) находит широкое применение в процессе изготовления кондитерских изделий в качестве естественного подсластителя и ароматизатора. Значительное количество корня солодки добавляется производителями табака для улучшения запаха дыма и уменьшения ощущений сухости во рту и глотке. Экстракты солодки активно используются в косметологии в качестве депигментирующих агентов [32], и проявляют эффективность при лечении меланодермии [33], а измельченный корень солодки является широко известным лекарственным средством, входящим в состав более половины существующих рецептур средств ТМ [34]. Показано, что вытяжки из корня солодки оказывают антидиабетическое и антидепрессивное дейстсвие, характеризуются гепато-протекторными свойствами, способствуют отхаркиванию и положительно влияют на процесс запоминания [35-38].

К настоящему моменту в составе растения G. Glabra и родственных видах обнаружен и охарактеризован целый ряд флавоноидов и более 400 сапонинов (рис. 6), присутствие которых обуславливает терапевтический эффект растений [39]. Основным действующим соединением, присутствующем в корнях солодки, является глицирризиновая кислота или глицирризин (20в-карбокси-11-оксо-30-норолеан-12-ен-3р-ил-2-О-Р^-глюкопирануроно-зил-а^-глюкопиранозидуроновая кислота). Аналогично тритерпеновым сапонинам из листьев растения Abrus precatorius L. (четочник молитвенный) [40], глицирризин характеризуется сладким привкусом, по интенсивности превышающем сахарозу более, чем в 150 раз [41]. Известно, что глицирризин проявляет противовирусную, противовоспалительную активность, эффективен для лечения рака и СПИДа, а также обладает антиаллергенным эффектом [42-44].

Сапонины корня солодки о Ликорица-сапонин Н2

Соединение «1 к2 Из

Глицирризин Н о н н С1иА Н

Ликорица-сапонин АЗ Н о н С1с С1иА н

Ликорица-сапонин В2 н о н н С1иА н

Ликорица-сапонин 03 н н2 ОСОСНз н 01иАРИа н

Ликорица-сапонин 02 он о н н С1иА н

Ликорица-сапонин ¿2 он Н2 н н С1иА н

Ликорица-сапонин 1.3 он Н2 ОСОСНз н С1иАРИа н

22|3-ацетоксиглицирризин н 0 ОСОСНз н аид н

Уралсапонин В н о Н н н в1иА

Апиоглицирризин н о н н Ар1 Н

Арабоглицирризин н 0 н н Ага Н

Дегидропроизводные глицирризина Производные с агликоном глабролида

Ликорица-сапонин С2 <Р=Н) Ликорица-сапонин Е2 (^=0, Р2=01иА)

Ликорица-сапонин К2 (Р=ОН) Ликорица-сапонин РЗ (Р,=Н2, Р2=01иАРИа)

Рис. 6. Структуры сапонинов корня солодки.

Подавляющее большинство сапонинов солодки находятся в форме глюкуронидов. Некоторые агликоны корня солодки и их производные могут стать причиной возникновения негативных побочных эффектов, включающие

гипокалиемическую артериальную гипертензию и нарушение солевого баланса, заключающегося в снижении содержания калия и повышения солей натрия [45]. Проявления превышения дозы употребления лекарственных средств, содержащих в составе корень солодки, могут развиваться в течение достаточно длинного периода времени и наблюдаться спустя полгода после прекращения приема по причине относительно большого периода деградации глицирризина в организме [46]. Рекомендованная максимальная норма суточного потребления глицирризина составляет около 100 мг, что в пересчете на растительное сырье составляет приблизительно 60 - 70 г высушенного корня G. glabra [47].

1.1.4. Листья абруса молитвенного

Абрус молитвенный (Abrus precatorius L.) — растение семейства Fabaceae (бобовые), произрастающее в тропических и субтропических регионах [48]. Листья растения используются для лечения болей в горле, кашля, нарушений сна [49], диабетов, астмы [50], хронических нефритов, для обработки ран и царапин [51], а также для лечения инфекций, вызванных бактериями Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae [52]. Наиболее токсичной частью растения являются семена. Известны многочисленные случаи отравления абрином, являющимся одним из самых активных токсинов [53], входящих в состав семян Абруса молитвенного [48]. Несмотря на ядовитость семян растения, его корни с 19 века применяются в качестве заменителя корня солодки. Согласно некоторым литературным источникам, листья растения Абруса молитвенного характеризуются более сладким вкусом, чем корни [54], и близки к сахару [50]. Долгое время считалось, что за сладкий вкус листьев абруса молитвенного отвечает глицирризин [55], однако было показано, что глицирризин не входит в состав листьев, а основными компонентами этого растения являются абрусозиды (рис. 7) [56,57].

Рис. 7. Структуры сапонинов Абруса молитвенного [57,58].

К настоящему моменту выделены и охарактеризованы абрусозиды А - E, состоящие из агликона циклоартанового типа, абрусогенина, с присоединенными сахаридными заместителями [56-58].

1.1.5. Женьшеневый улун

Чай является древнейшим из известных напитков, состав которого неоднократно изучался. Биологически активные свойства чая относят к наличию в его составе полифенолов и кофеина [59]. Основными видами чая являются черный, зеленый и улун. Производство улуна обычно занимает несколько дней и представляет собой настаивание листьев растения в окислительной среде под воздействием солнца, скручивание и высушивание. Для раскрытия вкусовых особенностей чая процесс зачастую сопровождается обжариванием полученных гранул на углях [60]. Женьшеневый чай получают обработкой листьев растения Camellia sinensis экстрактом из растения Panax ginseng, основными действующими компонентами которого являются тритерпеновые сапонины и их малонил - и ацетил - производные [61]. Известно, что в ходе нагревания и обработки паром сырья изменяется профиль соединений, обнаруживающихся в женьшене [62,63]. Показано, что обработка паром приводит к процессам отщепления сахаридных заместителей с последующей потерей молекулы воды при C - 20 [64].

К настоящему времени в научной литературе отсутствует информация о трансформации сапонинов в ходе процесса изготовления женьшеневого чая. Вопрос изучения состава сапонинов коммерчески доступных образцов женьшеневого улуна остается актуальным.

1.2. Методы извлечения сапонинов

1.2.1. Традиционные методы

Извлечение компонентов из твердых матриц растительного сырья основано на распределении вещества в системе твердое тело - жидкость. Особенностью процесса является более медленное наступление равновесия на границе раздела жидкой и твердой фаз, по сравнению с жидкость-жидкостной экстракцией. Скорость процесса переноса вещества определяется тремя основными этапами: переход из твердой фазы в раствор, диффузия в среде растворителя и удаление вещества с поверхности раздела фаз [65]. Для извлечения гликозидов из матрицы растительного сырья чаще всего используют воду и различные водно - спиртовые смеси метанола, этанола и изопропанола с концентрацией органического компонента 50 - 95 % по объему.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Стекольщикова, Елена Алексеевна, 2018 год

СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Lasztity R., Hidvegi M., Bata A. Saponins in food // Food Rev. Int. 1998. Vol. 14. № 4. P. 371-390.

2. Oleszek W. A. Chromatographic determination of plant saponins // J. Chromatogr. A. 2002. Vol. 967. № 1. P. 147-162.

3. Hostettmann K. Saponins. Chemistry and pharmacology of natural products / K. Hostettmann, A. Marston. - Cambridge: Cambridge University Press, 2005. - 564 p.

4. Vincken P. J., Heng L., Groot A., Gruppen H. Saponins, classification and occurrence in the plant kingdom // Phytochemistry. 2007. Vol. 68. № 3. P. 275-297.

5. Муравьева Д. А. Фармакогнозия / Д. А. Муравьева, И. А. Самылина, Г. П. Яковлев. 4-е изд., перераб. и доп. — М.: Медицина, 2002. - 656 с.

6. Abe I., Rohmer M., Prestwich G. D. Enzymatic cyclization of squalene and oxidosqualene to sterols and triterpenes // Chem. Rev. 1993. Vol. 93. № 6. P. 2189-2206.

7. Haralampidis K, Trojanowska M., Osbourn A. E. Biosynthesis of triterpenoid saponins in plants // Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. 2002. Vol. 75. P. 31-49.

8. Kitagawa I. Licorice root. A natural sweetener and an important ingredient in Chinese medicine // Pure Appl. Chem. 2002. Vol. 74. № 7. P. 1189-1198.

9. Heng L., Vincken J. P., van Koningsveld G., Legger A., Gruppen H., van Boekel T., Roozen J., Voragen F. Bitterness of saponins and their content in dry peas // J. Sci. Food Agric. 2006. Vol. 86. № 8. P. 1225-1231.

10. Price K. R., Johnson I. T., Fenwick G. R., Malinow M. R. The Chemistry and Biological Significance of Saponins in Foods and Feedingstuffs // CRC Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 1987. Vol. 26. № 1. P. 27-135.

11. Attele A. S., Wu J. A., Yuan C. S. Ginseng pharmacology: Multiple constituents and multiple actions // Biochem. Pharmacol. 1999. Vol. 58. № 11. P. 1685-1693.

12. Sparg S. G., Light M. E., van Staden J. Biological activities and distribution of plant saponins // J. Ethnopharmacol. 2004. Vol. 94. № 2-3. P. 219-243.

13. Petit P. R., Sauvaire Y. D., Hillaire-Buys D. M., Leconte O. M., Baissac Y. G., Posin G. R., Ribes G. R. Steroid saponins from fenugreek seeds: extraction, purification, and pharmacological investigation on feeding behaviour and plasma cholesterol // Steroids. 1995. Vol. 60. № 10. P. 674-680.

14. Uematsu Y., Hirata K., Saito K., Kudo I. Spectrophotometric determination of saponin in Yucca extract used as food additive // J. AOAC Int. 2000. Vol. 83. № 6. P. 1451-1454.

15. Triterpenoids. // Methods in Plant Biochemistry / ed. P. Dey, J. Harborne, 1991. V. 7.- 580 p.

16. Fenwick G.R., Price K.R., Tsukamota C., Ocubo K. Saponins // Toxic substances in crop plants. / ed. D'Mello F. J. P., Duffus C. M., Duffus J. H. - Cambridge, UK: The Royal Society of Chemistry, 1991. - P. 285-327.

17. Hostettman K. Saponins: Chemistry and Pharmacology of Natural Products. / K. Hostettman, A. Marston. - Cambridge,UK: Cambridge University Press, 1995. - 548 p.

18. Roddick J. G. Biosynthesis and distribution of tomatine in cultured excised Lycopersicon Esculentum roots // Phytochemistry. 1974. Vol. 13. № 1956. P. 1459-1462.

19. Biologically active natural products: pharmaceuticals, Cutler, S. J., Cutler, H. G., Ed. -Boca Raton: CRC Press, 2000. - 296 p.

20. Kaneko H., Nakanishi K. Proof of the mysterious efficacy of ginseng: basic and clinical trials: clinical effects of medical ginseng, Korean red ginseng: specifically, its anti-stress action for prevention of disease // J. Pharmacol. Sci. 2004. Vol. 95. № 2. P. 158-162.

21

22

23

24

25

26

27

28

29

30

31

32

33

34

35

36

37

Keum Y. S., Park K. K., Lee J. M., Chun K. S., Park J. H., Lee S. K., Kwon H., Surh Y. J. Antioxidant and anti-tumor promoting activities of the methanol extract of heat-processed ginseng // Cancer Lett. 2000. Vol. 150. № 1. P. 41-48.

Hwang C. R., Lee S. H., Jang G. Y., Hwang I. G., Kim H. Y., Woo K. S., Lee J., Jeong H. S. Changes in ginsenoside compositions and antioxidant activities of hydroponic-cultured ginseng roots and leaves with heating temperature // J. Ginseng Res. 2014. Vol. 38. № 3. P.180-186.

Oka H., Yamamoto S., Kuroki T., Harihara S., Marumo T., Kim S. R., Monna T., Kobayashi K., Tango T. Prospective study of chemoprevention of hepatocellular carcinoma with sho-saiko-to (TJ-9) // Cancer. 1995. Vol. 76. № 5. P. 743-749. Yang W. Z., Ye M., Qiao X., Liu C.F., Miao W. J., Bo T., Tao H. Y., Guo D. A. A strategy for efficient discovery of new natural compounds by integrating orthogonal column chromatography and liquid chromatography/mass spectrometry analysis: Its application in Panax ginseng, Panax quinquefolium and Panax notoginseng to characterize 437 potential new ginsenosides // Anal. Chim. Acta. 2012. Vol. 739. P. 5666.

Qi L. W., Wang C. Z., Yuan C. S. Isolation and analysis of ginseng: advances and challenges // Nat. Prod. Rep. 2011 Vol. 28. № 3. P. 467-495.

Angelova N., Kong H. W., van der Heijden R., Yang S. Y., Choi Y. H., Kim H. K., Wang M., Hankemeier T., van der Greef J., Xu G., Verpoorte R. Recent methodology in the phytochemical analysis of ginseng // Phytochem. Anal. 2008. Vol. 19. № 1. P. 2-16. Fuzzati N. Analysis methods of ginsenosides // J. Chromatogr. B. 2004. Vol. 812. № 1-2. P.119-133.

Dinchev D., Janda B., Evstatieva L., Oleszek W., Aslani M. R., Kostova I. Distribution of steroidal saponins in Tribulus terrestris from different geographical regions // Phytochemistry. 2008. Vol. 69. № 1. P. 176-186.

Chhatre S., Nesari T., Somani G., Kanchan D., Sathaye S. Phytopharmacological overview of Tribulus terrestris // Pharmacogn. Rev. 2014. Vol. 8. № 15. P. 45. Gauthaman K., Adaikan P. G., Prasad R. N. V. Aphrodisiac properties of Tribulus terrestris extract (Protodioscin) in normal and castrated rats // Life Sci. 2002. Vol. 71. № 12. P. 1385-1396.

Kostova I., Dinchev D. Saponins in Tribulus terrestris - Chemistry and bioactivity // Phytochem. Rev. 2005. Vol. 4. № 2-3. P. 111-137.

Callender V. D., St Surin-Lord S., Davis E. C., Maclin M. Postinflammatory hyperpigmentation: Etiologic and therapeutic considerations // Am. J. Clin. Dermatol. 2011. Vol. 12. № 2. P. 87-99.

Sheth V. M., Pandya A. G. Melasma: A comprehensive update: Part i // J. Am. Acad. Dermatol. 2011. Vol. 65. № 4. P. 689-697.

Wang Y. C., Yang Y. S. Simultaneous quantification of flavonoids and triterpenoids in licorice using HPLC // J. Chromatogr. B. 2007. Vol. 850. № 1-2. P. 392-399. Ma J., Peng W., Liang D., Fu N., Pang D., Xu A. The extract of Glycyrrhiza uralensis Fisch induces apoptosis in MGC-803 cells and its molecular mechanism // Biomed. Res. 2000. Vol. 21. № 3. P. 129-137.

Dhingra D., Parle M., Kulkarni S. K. Memory enhancing activity of Glycyrrhiza glabra in mice // J. Ethnopharmacol. 2004. Vol. 91. № 2-3. P. 361-362.

Ko B. S., Jang J. S., Hong S. M., Sung S. R., Lee J. E., Lee M. Y., Jeon W. K., Park S. Changes in Components, Glycyrrhizin and Glycyrrhetinic Acid, in Raw Glycyrrhiza uralensis Fisch, Modify Insulin Sensitizing and Insulinotropic Actions // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2007. Vol. 71. № 6. P. 1452-1461.

38

39

40

41

42

43

44

45

46

47

48

49

50

51

52

53

54

55

56

57

58

Kao T. C., Wu C. H., Yen G. C. Bioactivity and potential health benefits of licorice // J. Agric. Food Chem. 2013. Vol. 62. № 3. P. 542-553.

Zhang Q., Ye M. Chemical analysis of the Chinese herbal medicine Gan-Cao (licorice) // J. Chromatogr. A. 2009. Vol. 1216. № 11. P. 1954-1969.

Kinghorn A. D., Soejarto D. D. Discovery of terpenoid and phenolic sweeteners from plants // Pure Appl. Chem. 2002. Vol. 74. № 7. P. 1169-1179.

Tanaka O. Improvement of taste of natural sweeteners // Pure Appl. Chem. 1997. Vol. 69. № 4. P. 675-683.

Pompei R., Flore O., Marccialis M. A., Pani A., Loddo B. Glycyrrhizic acid inhibits virus growth and inactivates virus particles. // Nature. 1979. Vol. 281. № 5733. P. 689-690. Finney R. S., Somers G. F. The antiinflammatory activity of glycyrrhetinic acid and derivatives // J. Pharm. Pharmacol. 1958. Vol. 10. № 1. P. 613-620. Jo E. H , Kim S. H., Ra J. C., Kim S. R., Cho S. D., Jung J. W., Yang S. R., Park J. S., Hwang J. W., Aruoma O. I., Kim T. Y., Lee Y. S., Kang K. S. Chemopreventive properties of the ethanol extract of chinese licorice (Glycyrrhiza uralensis) root: Induction of apoptosis and G1 cell cycle arrest in MCF-7 human breast cancer cells // Cancer Lett. 2005. Vol. 230. № 2. P. 239-247.

Heikens J., Fliers E., Endert E., Ackermans M., van Montfrans G. Liquorice-induced hypertension - a new understanding of an old disease: case report and brief review // Neth. J. Med. 1995. Vol. 47. № 5. P. 230-234.

Omar H. R., Komarova I., El-Ghonemi M., Fathy A., Rashad R., Abdelmalak H. D., Yerramadha M. R., Ali Y., Helal E., Camporesi E. M. Licorice abuse: Time to send a warning message // Ther. Adv. Endocrinol. Metab. 2012. Vol. 3. № 4. P. 125-138. Stowasser M. Too much of a good thing: A woman with hypertension and hypokalemia -Commentary // Clin. Chem. 2009. Vol. 55. № 12. P. 2097.

Morton J.F. Plants Poisonous to People in Florida and Other Warm Areas. 2nd ed. / J.F. Morton. - Miami, FL: Southeast, Stuart, 1982. - 45 p.

Mann A. Medicinal and economic plants of Nupeland. 1st ed. / A. Mann; M. Gbate; A. N. Umar. - Bida: Jube Evans Books and Publications, 2003. - 275 p.

Inglett G. E., May J. F. Tropical plants with unusual taste properties // Econ. Bot. 1968. Vol. 22. № 4. P. 326-331.

Vijayakumari K., Siddhuraju P., Janardhanan K. Chemical composition and nutritional potential of the tribal pulse (Bauhinia malabarica Roxb) // Plant Foods Hum. Nutr. 1993. Vol. 44. № 3. P. 291-298.

Adelowotan O., Aibinu I., Adenipekun E., Odugbemi T. In-vitro antimicrobial activities testing of Abrus precatorius cold water leaf extract on Salmonella typhimurium, Escherichia coliand Klebsiella pneumoniae // J. Sci. Technol. Res. 2005. Vol. 4. P. 70-73. Olsnes S., Refsnes K., Pihl A. Mechanism of action of the toxic lectins abrin and ricin // Nature. 1974. Vol. 249. № 5458. P. 627-631.

Dymock W. Pharmacographia Indica. / W. Dymock, D. Hooper, C. J. H. Warden. - London: Kegan Paul, Trench, Trubner & Co., 1890. - 430 p. Irvine F.R. Woody Plants of Ghana. - London: Oxford University Press, 1961. - 358 p. Choi Y. H., Kinghorn A. D., Shi X., Zhang H., Teo B. K. Abrusoside A: a new type of highly sweet triterpene glycoside // J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1989. № 13. P. 887. Choi Y. H., Hussain R. A., Pezzuto J. M., Kinghorn A. D., Morton J. F. Abrusosides A-D, four novel sweet-tasting triterpene glycosides from the leaves of Abrus precatorius // J. Nat. Prod. 1989. Vol. 52. № 5. P. 1118-1127.

Kennelly E. J., Cai L., Kim N. C., Kinghorn A. D. Abrusoside E, a further sweet-tasting

cycloartane glycoside from the leaves of Abrusprecatorius // Phytochemistry. 1996. Vol. 41. № 5. P. 1381-1383.

59. Li D. W., Zhu M., Shao Y. D., Shen Z., Weng C. C., Yan W. D. Determination and quality evaluation of green tea extracts through qualitative and quantitative analysis of multi-components by single marker (QAMS) // Food Chem. 2016. Vol. 197. P. 11121120.

60. Xu N., Chen Z. M. Green tea, black tea and semi-fermented tea // Tea, bioactivity and therapeutic potential. / ed. Y. S Zhen, Z.M. Chen, S. J. Cheng, M. L. Chen. New York, NY: Taylor & Francis. - P. 35-55.

61. Du X. W., Wills R. B. H., Stuart D. L. Changes in neutral and malonyl ginsenosides in American ginseng (Panax quinquefolium) during drying, storage and ethanolic extraction // Food Chem. 2004. Vol. 86. № 2. P. 155-159.

62. Wang C. Z., Aung H. H., Ni M., Wu J. A., Tong R., Wicks S., He T. C., Yuan C.S. Red American ginseng: Ginsenoside constituents and antiproliferative activities of heat-processed Panax quinquefolius roots // Planta Med. 2007. Vol. 73. № 7. P. 669-674.

63. Chang Y. H., Ng P. K. W. Effects of extrusion process variables on extractable ginsenosides in wheat-ginseng extrudates // J. Agric. Food Chem. 2009. Vol. 57. № 6. P. 2356-2362.

64. Lau A. J., Seo B. H., Woo S. O., Koh H. L. High-performance liquid chromatographic method with quantitative comparisons of whole chromatograms of raw and steamed Panax notoginseng // J. Chromatogr. A. 2004. Vol. 1057. № 1-2. P. 141-149.

65. Методы разделения и концентрирования. Методическое пособие для студентов химического факультета / С.Г. Дмитриенко, С.В. Смирнова, И.И. Торочешникова, Л. Н. Хатунцева. - М: Изд. МГУ, Химфак Москва, 2008. - 197 с.

66. Чуешов В. И. Промышленная технология лекарств. / В. И.Чуешов, Е. В. Гладух, О. А. Ляпунова, И. В. Сайко, А. А. Сичкарь, Е. А. Рубан, Т.В. Крутских - Х: Изд. НФАУ МТК, 2002. - т.1.- 560 с.

67. Su L., Chen G., Feng S. G., Wang W., Li Z. F., Chen H., Liu Y. X., Pei Y.H. Steroidal saponins from Tribulus terrestris // Steroids. 2009. Vol. 74. № 4-5. P. 399-403.

68. Hong S. S., Choi Y. H., Jeong W., Kwon J. G., Kim J. K., Seo C., Ahn E. K., Lee H. H., Ko H. J., Seo D. W., Oh J. S. Two new furostanol glycosides from the fruits of Tribulus terrestris // Tetrahedron Lett. 2013. Vol. 54. № 30. P. 3967-3970.

69. Spinks E. A., Fenwick G. R. The determination of glycyrrhizin in selected UK liquorice products // Food Addit. Contam. 1990. Vol. 7. № 6. P. 769-778.

70. British Pharmacopoeia Commission. The British Pharmacopoeia. London: Her Majesty's Stationery Office, 1998.

71. European Pharmacopoeia Commission. The European Pharmacopoeia. 3rd Edition. Strasbourg: Council of Europe, 1997.

72. Court W. A., Hendel J. G., Elmi J. Reversed-phase high-performance liquid chromatography determination of ginsenosides of Panax quinquefolium // J. Chromatogr. A. 1996. Vol. 755. № 1. P. 11-17.

73. Kang L. P., Wu K. L., Yu H. S., Pang X., Liu J., Han L. F., Zhang J., Zhao Y., Xiong C. Q., Song X. B., Liu C., Cong Y. W., Ma B.P. Steroidal saponins from Tribulus terrestris // Phytochemistry. 2014. Vol. 107. P. 182-189.

74. Engelberth A. S., Clausen E. C., Carrier D. J. Comparing extraction methods to recover ginseng saponins from American ginseng (Panax quinquefolium), followed by purification using fast centrifugal partition chromatography with HPLC verification // Sep. Purif. Technol. 2010. Vol. 72. № 1. P. 1-6.

75. Wu J., Lin L., Chau F. Ultrasound-assisted extraction of ginseng saponins from ginseng

76

77

78

79

80

81

82

83

84

85

86

87

88

89

90

91

92

roots and cultured ginseng cells // Ultrason. Sonochem. 2001. Vol. 8. № 4. P. 347-352. The Society of Japanese Pharmacopeia. The Japanese Pharmacopeia. JP XV: English version. Japan: Yakuji Nippo, 1996.

Ganzera M., Bedir E., Khan I. A. Determination of steroidal saponins in Tribulus terrestris by reversed-phase high-performance liquid chromatography and evaporative light scattering detection // J. Pharm. Sci. 2001. Vol. 90. № 11. P. 1752-1758. Wang M., Tadmor Y., Wu Q. L., Chin C. K., Garrison S. A., Simon J. E. Quantification of protodioscin and rutin in asparagus shoots by LC/MS and HPLC methods // J. Agric. Food Chem. 2003. Vol. 51. № 21. P. 6132-6136.

De Combarieu E., Fuzzati N., Lovati M., Mercalli E. Furostanol saponins from Tribulus terrestris // Fitoterapia. 2003. Vol. 74. № 6. P. 583-591.

Chemat F. Microwaved-assisted extraction for bioactive compounds. Theory and Practice./ F. Chemat, C. Giancarlo. - NY: Springer Science, 2013. - 238 p. Shu Y. Y., Ko M. Y., Chang Y. S. Microwave-assisted extraction of ginsenosides from ginseng root // Microchem. J. 2003. Vol. 74. № 2. P. 131-139.

Kwon J. H., Bélanger J. M. R., Paré J.R.J., Yaylayan V. A.Application of the microwave-assisted process (MAPTM) to the fast extraction of ginseng saponins // Food Res. Int. 2003. Vol. 36. № 5. P. 491-498.

Wang H. C., Chen C. R., Chang C. J. Carbon dioxide extraction of ginseng root hair oil and ginsenosides // Food Chem. 2001. Vol. 72. № 4. P. 505-509.

Bitencourt R. G., Queiroga C. L., Junior Í. M., Cabral F. A. Fractionated extraction of saponins from Brazilian ginseng by sequential process using supercritical CO2, ethanol and water // J. Supercrit. Fluids. 2014. Vol. 92. P. 272-281.

Kim H. S., Lee S. Y., Kim B. Y., Lee E. K., Ryu J. H., Lim G. B.Effects of modifiers on the supercritical CO2 extraction of glycyrrhizin from licorice and the morphology of licorice tissue after extraction // Biotechnol. Bioprocess Eng. 2004. Vol. 9. № 6. P. 447453.

Hedayati A., Ghoreishi S. M. Supercritical carbon dioxide extraction of glycyrrhizic acid from licorice plant root using binary entrainer: Experimental optimization via response surface methodology // J. Supercrit. Fluids. 2015. Vol. 100. P. 209-217. Shabkhiz M. A., Eikani M. H., Bashiri Sadr Z., Golmohammad F. Superheated water extraction of glycyrrhizic acid from licorice root // Food Chem. 2016. Vol. 210. P. 396401.

Ghoreishi S. M., Bataghva E., Dadkhah A. A. Response Surface Optimization of Essential Oil and Diosgenin Extraction from Tribulus terrestris via Supercritical Fluid Technology // Chem. Eng. Technol. 2012. Vol. 35. № 1. P. 133-141.

Куркин В.А., Акушская А.С. Разработка Методов Контроля Качества Женьшеня Настойки // Хим. раст. сырья. 2013. № 2. С. 177-182.

Ohno T., Mikami E., Oka H. Analysis of crude drugs using reversed-phase TLC/scanning densitometry. (II) Identification of ginseng, red ginseng, gentian, Japanese gentian, pueraria root, gardenia fruit, schisandra fruit and ginger // J. Nat. Med. 2006. Vol. 60. № 2. P. 141-145.

Reich E., Schibli A., DeBatt A. Validation of High-Performance Thin-Layer Chromatographic Methods for the Identification of Botanicals in a cGMP Environment // J. AOAC Int. 2008. Vol. 91. № 1. P. 13-20.

Xie P., Chen S., Liang Y. Z., Wang X., Tian R., Upton R. Chromatographic fingerprint analysis — a rational approach for quality assessment of traditional Chinese herbal medicine // J. Chromatogr. A. 2006. Vol. 1112. № 1-2. P. 171-180.

93. Vanhaelen-Fastre R. J. , Faes M. L., Vanhaelen M. H. High-performance thin-layer chromatographic determination of six major ginsenosides in Panax ginseng // J. Chromatogr. A. 2000. Vol. 868. № 2. P. 269-276.

94. Cui S., Fu B., Lee F. S., Wang X. Application of microemulsion thin layer chromatography for the fingerprinting of licorice (Glycyrrhiza spp.) // J. Chromatogr. B. 2005. Vol. 828. № 1-2. P. 33-40.

95. Bombardelli E., Gabetta B., Martinelli E.M., Mustich G.. Quantitative evaluation of glycyrrhetic acid and gas chromatography and mass spectrometric investigation of liquorice triterpenoids // Fitoterapia. 1979. Vol. 50. P. 11.

96. Li T., Zhang Z., Zhang L., Huang X., Lin J., Chen G. An improved facile method for extraction and determination of steroidal saponins in Tribulus terrestris by focused microwave-assisted extraction coupled with GC-MS // J. Sep. Sci. 2009. Vol. 32. № 2324. P. 4167-4175.

97. Cui J. F., Garle M., Lund E., Bjorkhem I., Eneroth P. Analysis of ginsenosides by Chromatography and mass spectrometry: release of 20 S-protopanaxadiol and 20 S-protopanaxatriol for quantitation // Anal. Biochem. 1993. Vol. 210. № 2. P. 411-417.

98. Cui J. F., Garle M., Bjorkhem I, Eneroth P. Determination of aglycones of ginsenosides in ginseng preparations sold in Sweden and in urine samples from Swedish athletes consuming ginseng. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1996. Vol. 56. № 2. P. 151-160.

99. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - М: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 240 с.

100. Wang C. Z., Wu J. A., McEntee E., Yuan C.S. Saponins composition in American ginseng leaf and berry assayed by high-performance liquid chromatography // J. Agric. Food Chem. 2006. Vol. 54. № 6. P. 2261-2266.

101. Vehovec T., Obreza A. Review of operating principle and applications of the charged aerosol detector // J. Chromatogr. A. 2010. Vol. 1217. № 10. P. 1549-1556.

102. Wang L., He W. S., Yan H. X., Jiang Y., Bi K. S., Tu P. F. Performance Evaluation of Charged Aerosol and Evaporative Light Scattering Detection for the Determination of Ginsenosides by LC // Chromatographia. 2009. Vol. 70. № 3-4. P. 603-608.

103. Ставрианиди А.Н. Новые подходы к обнаружению физиологически активных компонентов женьшеня методом высокоэффективной жидкостной хромато-масс-спектрометрии: дис. ...канд. хим. наук. - М.: Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, 2014. - 202 с.

104. Yu Z., Gao X., Zhao Y., Chen X., Bi K. Simultaneous determination of components in preparation Naodesheng injection by high performance liquid chromatograph-atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry (HPLC-MS/APCI) // Chem. Pharm. Bull. (Tokyo). 2006. Vol. 54. № 4. P. 588-590.

105. Mulinacci N., Vignolini P., la Marca G., Pieraccini G., Innocent M., Vincieri F. F. Food supplements of Tribulus terrestris L.: An HPLC-ESI-MS method for an estimation of the saponin content // Chromatographia. 2003. Vol. 57. № 9-10. P. 581-592.

106. Perreault H., Costello C. E. Liquid secondary ionization, tandem and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometric characterization of glycosphingolipid derivatives // Org. Mass Spectrom. 1994. Vol. 29. № 12. P. 720-735.

107. Liu S., Cui M., Liu Z., Song F., Mo W. Structural analysis of saponins from medicinal herbs using electrospray ionization tandem mass spectrometry // J. Am. Soc. Mass Spectrom. 2004. Vol. 15. № 2. P. 133-141.

108. Song F., Liu Z., Liu S., Cai Z. Differentiation and identification of ginsenoside isomers by electrospray ionization tandem mass spectrometry // Anal. Chim. Acta. 2005. Vol. 531.

109

110

111

112

113

114

115

116

117

118

119

120

121

122

123

№ 1. P. 69-77.

Miao X. S., Metcalfe C. D., Hao C., March R. E. Electrospray ionization mass spectrometry of ginsenosides // J. Mass Spectrom. 2002. Vol. 37. № 5. P. 495-506. Montoro P., Maldini M., Russo M., Postorino S., Piacente S., Pizza C. Metabolic profiling of roots of liquorice (Glycyrrhiza glabra) from different geographical areas by ESI/MS/MS and determination of major metabolites by LC-ESI/MS and LC-ESI/MS/MS // J. Pharm. Biomed. Anal. 2011. Vol. 54. № 3. P. 535-544.

Tao W., Duan J., Guo J., Li J., Tang Y., Liu P., Yang N. Simultaneous determination of triterpenoid saponins in dog plasma by a validated UPLC-MS/MS and its application to a pharmacokinetic study after administration of total saponin of licorice // J. Pharm. Biomed. Anal. 2013. Vol. 75. P. 248-255.

Liu Y., Yang J., Cai Z. Chemical investigation on Sijunzi decoction and its two major herbs Panax ginseng and Glycyrrhiza uralensis by LC/MS/MS // J. Pharm. Biomed. Anal. 2006. Vol. 41. № 5. P. 1642-1647.

Ye M., Liu S. H., Jiang Z. L., Lee Y. S., Tilton R., Cheng Y.C. Liquid chromatography/mass spectrometry analysis of PHY906, a Chinese medicine formulation for cancer therapy // Rapid Commun. Mass Spectrom. 2007. Vol. 21. № 22. P. 35933607.

U.S. Department of Health and Human Services Food and Drug Administration Center for Drug Evaluation and Research. Guidance for Industry, Botanical Drug Products. 2002. He M., Lv H. Y., Li Y. P., Go^alves C. M. V., Dong N. P., Pan L. S., Liu P. L., Liang Y. Z. A multiplex approach for the UPLC-PDA-MS/MS data: analysis of licorice // Anal. Methods. 2014. Vol. 6. № 7. P. 2239-2246.

Liang X., Zhang L., Zhang X., Dai W., Li H., Hu L., Liu H., Su J., Zhang W. Qualitative and quantitative analysis of traditional Chinese medicine Niu Huang Jie Du Pill using ultra performance liquid chromatography coupled with tunable UV detector and rapid resolution liquid chromatography coupled with time-of-flight tandem mass spectrometry // J. Pharm. Biomed. Anal. 2010. Vol. 51. № 3. P. 565-571.

Wei S. S, Yang M., Chen X., Wang Q. R., Cui Y.J. Simultaneous determination and assignment of 13 major flavonoids and glycyrrhizic acid in licorices by HPLC-DAD and Orbirap mass spectrometry analyses // Chin. J. Nat. Med. 2015. Vol. 13. № 3. P. 232-240. Zhao Y. N., Wang Z. L., Dai J. G., Chen L., Huang Y. F. Preparation and quality assessment of high-purity ginseng total saponins by ion exchange resin combined with macroporous adsorption resin separation // Chin. J. Nat. Med. 2014. Vol. 12. № 5. P. 382392.

Основы аналитической химии. Книга 1. Общие вопросы. Методы разделения. Под ред. академика Золотова Ю.А. - М: Высшая школа, 2004. - 359 с. European Pharmacopoeia Commission. European Pharmacopoeia. 5th edit. Strasbourg: The Directorate for the Quality of Medicines of the Council of Europe, 2004. P. 27392740.

Uhr L., Chen Y., Sit D., Li P. C. H. Ginsenosides in Commercial Ginseng Products Analyzed by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry // ISRN Anal. Chem. 2014. Vol. 2014. P. 1-8.

Wang N., Wan J. B., Chan S. W., Deng Y. H., Yu N., Zhang Q. W., Wang Y. T., Lee S.M. Comparative study on saponin fractions from Panax notoginseng inhibiting inflammation-induced endothelial adhesion molecule expression and monocyte adhesion // Chin. Med. 2011. Vol. 6. № 1. P. 37.

Wang Z. M., Gao H. M., Fu X. T., Wang W.H. Multi-components quantitation by one marker new method for quality evaluation of Chinese herbal medicine // Zhongguo Zhong

Yao Za Zhi. 2006. Vol. 31. № 23. P. 1925-1928.

124. Hou J. J., Wu W. Y., Da J., Yao S., Long H. L., Yang Z., Cai L. Y., Yang M., Liu X., Jiang B. H., Guo D. A. Ruggedness and robustness of conversion factors in method of simultaneous determination of multi-components with single reference standard // J. Chromatogr. A. 2011. Vol. 1218. № 33. P. 5618-5627.

125. Yan L., Wei X., Ji T., Hong L. C., Yan Y. S., Guo Guo Z., Bin H. Development of a novel method combining multi-wavelength HPLC fingerprint and quantitative analysis of multi-component by single marker for quality control of Houttuynia cordata // J. Chem. Pharm. Res. 2014. Vol. 6. № 8. P. 347-356.

126. Wang C. Q., Jia X. H., Zhu S., Komatsu K., Wang X., Cai S. Q. A systematic study on the influencing parameters and improvement of quantitative analysis of multi-component with single marker method using notoginseng as research subject // Talanta. 2015. Vol. 134. P. 587-595.

127. Gao D., Li Y. M., Wang N., Li C. Y., Zhang C. E., Bai Z. F., Xiao X. H., Gao W. W., Wang J. B. Establishment and validation of quantitative analysis of multi-components by a single marker for quality control of polygoni multiflori radix // Anal. Methods. 2016. Vol. 8. № 39. P. 7170-7176.

128. Pan W., Yang L., Feng W., Lin L., Li C., Liu W., Gan G., Fan J., Zou J., Wang Z., Pan H. Determination of five sesquiterpenoids in Xingnaojing injection by quantitative analysis of multiple components with a single marker // J. Sep. Sci. 2015. Vol. 38. № 19. P. 33133323.

129. Sun J., Jiang Z. Z., Yan R. Q., Olaleye O., Zhang X. L., Chai X., Wang Y. F. Quality Evaluation of Astragali Radix Products by Quantitative Analysis of Multi-components by Single Marker // Chinese Herb. Med. 2013. Vol. 5. № 4. P. 272-279.

130. Kuang G., Zhou J., Yao M., Tan Q., Qi L., Liang J., Li Y., Zhao Z., Zhang L. Systematic study on QAMS method for simultaneous determination of triterpenoid saponins in Ilex pubescens by HPLC and UPLC // Anal. Methods. 2015. Vol. 7. № 16. P. 6579-6587.

131. Wu X., He J., Xu H., Bi K., Li Q. Quality assessment of Cinnamomi Ramulus by the simultaneous analysis of multiple active components using high-performance thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography // J. Sep. Sci. 2014. Vol. 37. № 18. P. 2490-2498.

132. Chen J., Wang Y., Sun G., Ma Y., Guo X. Multi-components determination by single reference standard and HPLC fingerprint analysis for Lamiophlomis rotata Pill // Nat. Prod. Res. 2016. Vol. 30. № 13. P. 1561-1564.

133. Liao H., Li Q., Liu R., Liu J., Bi K. Fingerprint analysis and multi-ingredient determination using a single reference standard for saposhnikoviae radix // Anal. Sci. 2014. Vol. 30. № 12. P. 1157 - 1163.

134. Hou J. J., Wu W. Y., Liang J., Yang Z., Long H. L., Cai L.Y., Fang L., Wang D. D., Yao S., Liu X., Jiang B. H., Guo D.A. A single, multi-faceted, enhanced strategy to quantify the chromatographically diverse constituents in the roots of Euphorbia kansui // J. Pharm. Biomed. Anal. 2014. Vol. 88. P. 321-330.

135. Bo L. Y., Kipletting T. E., Jinga J., Jun Z. Y. Quantitative determination of multiple components in Herba Epimedii using a single reference standard: a comparison of two methods // Anal. Methods. 2013. Vol. 5. № 15. P. 3741 - 3746.

136. Li S. P., Qiao C. F., Chen Y. W., Zhao J., Cui X. M., Zhang Q. W., Liu X. M., Hu D. J. A novel strategy with standardized reference extract qualification and single compound quantitative evaluation for quality control of Panax notoginseng used as a functional food // J. Chromatogr. A. 2013. Vol. 1313. P. 302-307.

137. Wang W., Ma X., Guo X., Zhao M., Tu P., Jiang Y. A series of strategies for solving the

138

139

140

141

142

143

144

145

146

147

148

149

150

151

152

153

154

shortage of reference standards for multi-components determination of traditional Chinese medicine, Mahoniae Caulis as a case // J. Chromatogr. A. 2015. Vol. 1412. P. 100-111. Xie J., Li J., Liang J., Luo P., Qing L. S., Ding L. S. Determination of Contents of Catechins in Oolong Teas by Quantitative Analysis of Multi-components Via a Single Marker (QAMS) Method // Food Anal. Methods. 2017. Vol. 10. № 2. P. 363-368. Wei F., Cheng X. L., Ma L. Y., Xiao X. Y., Ma S.C., Lin R. C. Discussion on technical requirements of substitution method of reference substance used for drug standards // Drug Stand China. 2012. Vol. 13. P. 12-15.

Yang T. W., Zhao C., Fan Y., Qi L. W., Li P. Design of ultraviolet wavelength and standard solution concentrations in relative response factors for simultaneous determination of multi-components with single reference standard in herbal medicines // J. Pharm. Biomed. Anal. 2015. Vol. 114. P. 280-287.

Lai C. J., Tan T., Zeng S. L., Dong X., Liu E. H., Li P. Relative quantification of multi-components in Panax notoginseng (Sanqi) by high-performance liquid chromatography with mass spectrometry using mobile phase compensation // J. Pharm. Biomed. Anal. 2015. Vol. 102. P. 150-156.

Jung S., Effelsberg U., Tallarek U. Microchip electrospray: Improvements in spray and signal stability during gradient elution by an inverted postcolumn makeup flow // Anal. Chem. 2011. Vol. 83. № 23. P. 9167-9173.

Zhou J. L., Li P., Li H. J., Jiang Y., Ren M. T., Liu Y. Development and validation of a liquid chromatography/electrospray ionization time-of-flight mass spectrometry method for relative and absolute quantification of steroidal alkaloids in Fritillaria species // J. Chromatogr. A. 2008. Vol. 1177. № 1. P. 126-137.

Stavrianidi A., Rodin I., Braun A., Stekolshchikova E., Shpigun O. Single-run HPLC/ESI-LITMS profiling of ginsenosides in plant extracts and ginseng based products // Biomed. Chromatogr. 2015. Vol. 29. № 6. P. 853-859.

Sun P., Wang X., Alquier L., Maryanoff C. A. Determination of relative response factors of impurities in paclitaxel with high performance liquid chromatography equipped with ultraviolet and charged aerosol detectors // J. Chromatogr. A. 2008. Vol. 1177. № 1. P. 87-91.

Lai C. M., Li S. P., Yu H., Wan J. B., Kan K. W., Wang Y. T. A rapid HPLC-ESI-MS/MS for qualitative and quantitative analysis of saponins in "XUESETONG" injection. // J. Pharm. Biomed. Anal. 2006. Vol. 40. № 3. P. 669-678.

European Pharmacopoeia Commission. European Pharmacopeia. Strasbourg: European

Directorate for the Quality of Medicines & Health Care, 2006. P. 1136-1138.

The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia 33-NF.

Rockville, MD: The United States Pharmacopoeial Convention, 2010. P. 1046.

The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia 35-NF.

Rockville, MD: The United States Pharmacopoeial Convention, 2012. P. 1418-1420.

The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia 35-NF.

Rockville, MD: The United States Pharmacopoeial Convention, 2012. P. 1426-1427.

The United States Pharmacopeia Convention. The U.S. Pharmacopeia. Rockville, MD:

The United States Pharmacopoeial Convention, 2010. P. 1087-1089.

The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia 33-NF.

Rockville, MD: The United States Pharmacopoeial Convention, 2010. P. 1037.

State Pharmacopoeia Committee. Chinese Pharmacopoeia. Beijing: Medical Science and

Technology Press, 2015.

Liu X., Ye W., Mo Z., Yu B., Zhao S., Wu H., Che C., Jiang R., Mak T. C., Hsiao W. L. Five New Ocotillone-Type Saponins from Gynostemma pentaphyllum. // J. Nat. Prod.

2004. Vol. 67. № 7. P. 1147-1151.

155. Ky P. T., Huong P. T., My T. K., Anh P. T., Kiem P. V., Minh C. V., Cuong N. X., Thao N. P., Nhiem N. X., Hyun J. H., Kang H. K., Kim Y. H. Phytochemistry Dammarane-type saponins from Gynostemma pentaphyllum // Phytochemistry. 2010. Vol. 71. № 8-9. P. 994-1001.

156. Chen Y., Nose M., Ogihara Y. Alkaline cleavage of ginsenosides // Chem. Pharm. Bull (Tokyo). 1987. Vol. 35. № 4. P. 1653-1655.

157. Liang Y., Guan T., Zhou Y., Liu Y., Xing L., Zheng X., Dai C., Du P., Rao T., Zhou L., Yu X., Hao K., Xie L., Wang G. Effect of mobile phase additives on qualitative and quantitative analysis of ginsenosides by liquid chromatography hybrid quadrupole-time of flight mass spectrometry // J. Chromatogr. A. 2013. Vol. 1297. P. 29-36.

158. European Pharmacopoeia Commission. European Pharmacopeia. 2nd ed. Strasbourg: European Directorate for the Quality of Medicines & Health Care, 1995.

159. Qi L. W., Wang C. Z., Yuan C. S. Ginsenosides from American ginseng : Chemical and pharmacological diversity // Phytochemistry. 2011. Vol. 72. № 8. P. 689-699.

160. The United States Pharmacopeial Convention. United States Pharmacopeia. 30th ed. Rockville, MD: The United States Pharmacopeial Convention, 2007.

161. Li S. P., Zhao J., Yang B. Strategies for quality control of Chinese medicines // J. Pharm. Biomed. Anal. 2011. Vol. 55. № 4. P. 802-809.

162. Health Canada - Monograph: Ginseng, Panax. http://webprod.hc-sc.gc.ca/nhpid-bdipsn/monoReq.do?id=146 (Accessed 12.09.2018).

163. Wang L., Weller C. L. Recent advances in extraction of nutraceuticals from plants. // Trends Food Sci. Technol. 2006. Vol. 17. № 6.P. 300-312.