Новые методы определения биологически активных соединений, основанные на иммунохимических реакциях на поверхности пьезокварцевых сенсоров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Дергунова, Елена Сергеевна

• Дергунова, Елена Сергеевна
• кандидат химических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат химических наук Дергунова, Елена Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Современные способы определения эндокринных деструкторов в объектах окружающей среды.

1.2. Методы формирования биочувствительного покрытия пьезокварцевого иммуносенсора.

2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Характеристика объектов исследования, химических реагентов, биополимеров и иммунореагентов.

2.2. Приборы и вспомогательное оборудование.

2.3. Подготовка проб для анализа объектов окружающей среды, лекарственных препаратов, полимерных материалов и средств гигиены.

2.4. Синтез гаптен-белковых конъюгатов для определения линейных алкилбензолсульфонатов.

2.5. Определение константы аффинности.

3. ИССЛЕДОВАНИЕ УСЛОВИЙ ПОЛУЧЕНИЯ РЕЦЕПТОРНОГО

СЛОЯ НА ПОВЕРХНОСТИ ЭЛЕКТРОДОВ

ИММУНОСЕНСОРОВ.

3.1 Ковалентная иммобилизация рецепторных молекул.

3.2. Фотоиммобилизация рецепторных молекул.

4: ОЦЕНКА АФФИННОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ

ИММУНОРЕАГЕНТОВ.

4.1. Кинетические исследования иммунохимического взаимодействия антиген-антитело.

4.2. Оценка специфичности иммунореагентов.

5. ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ ПРОТОЧНО-ИНЖЕКЦИОННОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

5.1. Сравнение форматов иммунохимического анализа.

5.2. Влияние концентрации иммунореагентов на полноту протекания иммунохимических реакций.

5.3. Влияние скорости, природы и рН буферного раствора-носителя на величину аналитического сигнала.

5.4. Влияние природы регенерирующего раствора на воспроизводимость аналитического сигнала.

6. ПРИМЕНЕНИЕ ПЬЕЗОКВАРЦЕВЫХ ИММУНОСЕНСОРОВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ.

6.1. Определение нонилфенола в водных средах.

6.2. Определение бисфенола А в жидких средах.

6.3. Определение линейных алкилбензолсульфонатов в жидких средах.

6.4. Определение 4-аминофенола в фармацевтических формах.

6.5. Определение котинина в биологических пробах.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые методы определения биологически активных соединений, основанные на иммунохимических реакциях на поверхности пьезокварцевых сенсоров»

Актуальность. Иммунохимические методы анализа находят применение при анализе объектов окружающей среды, пищевой и фармацевтической промышленности, в клинической диагностике. Они основаны на специфическом гомогенном или гетерогенном связывании определяемого антигена с антителами, что обеспечивает селективное определение целевых компонентов в сложных матрицах. Такие методы характеризуются достаточно высокой чувствительностью и селективностью. Однако, как правило, анализ выполняется в дискретном режиме и плохо поддается автоматизации.

Известно, что проведение иммунохимических реакций на поверхности электродов сенсоров облегчает автоматизацию анализа, снижает его продолжительность. Применение пьезокварцевых резонаторов, чувствительных к изменению массы, и специфических иммунореагентов, иммобилизованных на поверхности электродов, позволяет разработать пьезокварцевые иммуносенсоры, обеспечивающие прямое детектирование токсичных соединений в водных средах без введения дополнительных меток. Такие сенсоры положительно зарекомендовали себя при определении ряда токсикантов, характеризуются высокой чувствительностью, малой инерционностью, что обеспечивает наблюдение за ходом иммунохимических взаимодействий практически в режиме реального времени.

Загрязнение объектов окружающей среды соединениями, оказывающими негативное влияние на эндокринный статус человека (эндокринные деструкторы), явилось следствием широкого применения их при производстве пластмасс, моющих средств, красителей и гербицидов. Эндокринные деструкторы (бисфенол А - ВРА, нонилфенол - NP, линейные алкилбензолсульфонаты - LAS; ПДК - 1, 20, 500 нг/мл, соответственно^ подобно половому гормону эстрогену влияют на репродуктивные функции человека, блокируют выработку мужских гормонов, характеризуются мутагенным и канцерогенным свойствами, вызывают расстройства половой и эндокринной систем. Присутствующий в качестве примеси в фармацевтических препаратах на основе парацетамола 4-аминофенол (4-АР) обладает пирогенным эффектом и вызывает заболевания кожных покровов, глаз, нарушает работу печени (содержание в препарате не должно превышать 0,01%). Котинин (СОТ) может служить маркером для оценки степени отравления курильщиков никотином при проведении анализа биологических проб.

Высокочувствительное и селективное определение таких биологически активных веществ (БАВ) в объектах окружающей среды, лекарственных препаратах и биологических образцах является актуальной задачей аналитической химии.

Цель работы. Исследование закономерностей иммунохимических реакций, протекающих на поверхности электродов пьезокварцевых сенсоров, и разработка методик проточно-инжекционного определения следовых концентраций эндокринных деструкторов, 4-аминофенола и котинина в жидких средах.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

- Изучить и научно обосновать стратегию сайт-направленной ковалентной иммобилизации гаптен-белковых конъюгатов или аналитов на предварительно активированной поверхности пьезокварцевого резонатора;

- Исследовать закономерности гетерогенной иммунохимической реакции антиген-антитело;

- Исследовать кинетику взаимодействия гаптен-белковых конъюгатов, иммобилизованных на поверхности электрода сенсора с антителами;

- Оценить специфичность применяемых иммунореагентов;

- Выявить доминирующие факторы, определяющих чувствительность проточно-инжекционного определения биологически активных соединений;

- Разработать методики проточно-инжекционного определения эндокринных ядов, 4-аминофенола, котинина в различных объектах с применением пьезокварцевых иммуносенсоров в качестве детектора.

Научная новизна.

- Установлены и реализованы на практике принципы формирования многослойного биорецепторного покрытия пьезокварцевых иммуносенсоров, обеспеччвающие высокую активность биослоя и сохранение его постоянной массы в течение 15-30 циклов измерений.

- Изучено влияние природы рецепторных покрытий и технологии их получения на величину аналитического сигнала сенсора при определении нонилфенола, бисфенола А, линейных алкилбензолсульфонатов.

- Установлены закономерности иммунохимической реакции, протекающей на поверхности сенсора, позволяющие прогнозировать пути оптимизации условий проточно-инжекционного определения нонилфенола, бисфенола А, линейных алкилбензолсульфонатов, 4-аминофенола и котинина в сложн »ix по составу смесях с применением пьезокварцевого сенсора.

- Оценено влияние различных форматов иммунохимического анализа (конкурентный, анализ с утяжелением массы) на аналитический сигнал пьезокварцевого иммуносенсора.

Установлены количественные взаимосвязи чувствительности определения фенолов (А) с величинами электронных эффектов заместителя в их молекулах, имеющие прогнозирующие функции.

Выявлены основные факторы, влияющие на оперативные характеристики пьезокварцевых сенсоров при проточно-инжекционном определ ;нии БАВ в жидких средах.

- Показана возможность конкурентного определения следовых концентрации эндокринных ядов, 4-аминофенола в жидких средах на уровне нг/мл.

Практическая значимость. Предложены способы получения многослойных рецепторных покрытий пьезокварцевых иммуносенсоров, обеспечивающие высокую чувствительность определения биологически активных веществ, широкий диапазон определяемых содержаний и продолжительность эксплуатации.

Разработаны методики высокочувствительного и селективного проточно-инжекционного определения следовых концентраций эндокринных ядов, 4-аминофенола, котинина в жидких средах. Методика определения нонилфенола в жидких средах защищена патентом РФ (Патент № 2287820).

Показана возможность применения пьезокварцевого иммуносенсора для экспрессного определения следовых концентраций эндокринных ядов в объектах окружающей среды, 4-аминофенола в фармацевтических препаратах и котинина в биологических жидкостях.

На защиту выносятся:

- Результаты исследований и выбора способов формирования биорецепторных покрытий пьезокварцевых иммуносенсоров, предназначенных для определения нонилфенола, бисфенола А, линейных алкилбензолсульфонатов.

- Результаты изучения закономерностей иммунохимических реакций антиген-антитело, протекающих на поверхности пьезокварцевого сенсора и лежащих в основе определения биологически активных веществ в жидких средах.

- Кинетические исследования иммунохимических реакций, рассчитанные значения констант скоростей прямой и обратной реакции, констант аффинности комплементарных иммунореагентов

- Коэффициенты перекрестного реагирования поликлональных антител с эндокринными ядами и их структурными аналогами.

- Результаты исследования условий проточно-инжекционного определения биологически активных веществ и факторы, обеспечивающие оптимальные оперативные характеристики пьезокварцевых сенсоров.

- Методики проточно-инжекционного определения следовых концентраций эндокринных ядов в объектах окружающей среды, 4-аминофенола в фармацевтических препаратах, котинина в биологических жидкостях.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены на конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Актуальные проблемы современного естествознания» (Иваново, 2003); XII научно-практической конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Наша общая окружающая среда» (Липецк, 2003); IV Всероссийской конференции молодых ученых «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Саратов, 2003); XVII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (Казань, 2003); I Международном форуме «Аналитика и аналитики» (Воронеж, 2003); Всероссийской конференции по аналитической химии «Аналитика России» (Москва, 2004); Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2005» (Москва, 2005); II Международном симпозиуме «Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии» (Краснодар, 2005); Всероссийской студенческой научно-технической школе -конференции «Инженерные науки - защите окружающей среды» (Тула, 2006); The International Congress on Analytical Sciences ICAS-2006 (Москва, 2006); VI Всероссийской конференции по анализу объектов окружающей среды с международным участием «Экоаналитика - 2006» (Самара, 2006); Всероссийской конференции «Фагран-2006» (Воронеж, 2006).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 3 статьях, 14 тезисах докладов, 1 патенте РФ на изобретение.

Структура работы. Диссертационная работа изложена на Д9 страницах машинописного текста, включает 19 рисунков и 20 таблиц. Состоит из введения, 6 глав, выводов и списка использованных библиографических источников, включающего 125 ссылок на отечественные и зарубежные работы.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Дергунова, Елена Сергеевна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны способы ковалентной иммобилизации биомолекул на поверхности электродов пьезокварцевых иммуносенсоров для определения эндокринных ядов, 4-аминофенола и котинина в жидких средах, обеспечивающие прочное закрепление иммунореагентов, сайт-направленную пространственную ориентацию, уменьшение неспецифической сорбции и высокую продолжительности эксплуатации. Показано, что наилучшие характеристики сенсоров достигаются при иммобилизации иммунореагентов на предварительно полученную методом самособирающихся монослоев подложку на основе у-аминопропилтриэтоксисилана с помощью глутарового альдегида. Установлено, что метод фотоиммобилизации позволяет ускоренно формировать легкое и тонкое покрытие (30 - 45 мин), расширяет линейный диапазон определяемых содержаний бисфенола А в жидких средах.

2. Изучены закономерности обратимой иммунохимической реакции на поверхности электродов пьезокварцевых сенсоров, лежащей в основе определ.?ния бисфенола А, нонилфенола, линейных алкилбензолсульфонатов, 4-аминофенола и котинина в жидких средах. Установлены значения Кл, количественно описывающие степень связывания биологически активных веществ со специфичными антителами. Исследованы перекрестные взаимодействия нонилфенола, бисфенола А, линейных алкилбензолсульфонатов и их структурных аналогов с поликлональными антителами, рассчитаны коэффициенты перекрестного реагирования (CR, %), использованные для выбора комплементарных пар иммунореагентов, предназначенных для селективного определения БАВ в многокомпонентных пробах.

3. Выявлены доминирующие факторы и оптимизированы условия проточно-инжекционного определения биологически активных соединений в жидких средах с помощью пьезокварцевых иммуносенсоров. Показано, что оптимальная скорость потока носителя различна при применении поликлональных (50 - 60 мкл/мин) и моноклональных (80 мкл/мин) антител. Для регенерации биорецепторного слоя рекомендован раствор тиоцианата калия с концентрацией 0,035 тМ, практически полностью разрушающий гетерогенный иммунокомплекс и обеспечиаающий многократное использовании сенсора. На примере нонилфенола, исследовано влияние различных форматов иммуноанализа на чувствительность определения токсикантов.

4. Разработаны методики проточно-инжекционного определения с применением пьезокварцевых иммуносенсоров нонилфенола, линейных алкилбензолсульфонатов, бисфенола А в объектах окружающей среды, 4-аминофенола в фармацевтических препаратах и котинина в биологических жидкостях (урина).

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Дергунова, Елена Сергеевна, 2007 год

1. Schettler, Т. Generations at Risk. Reproductive Health and Environment Tixt./ T. Schettler. L.: Mil Press, 1999. - 326 p. - ISBN 0-262-19413-9.

2. Loder, N. Royal Society Warns on Hormone Disrupters Text./ N. Loder// Nature. 2000. - Vol. 406. - P. 4 - 5.

3. Katzenellenbogen, J. The Structural Pervasiveness of Estrogenic Activity/ J. Katzenellenbogen Text.// Environ. Health. Perspect. 1995. - V.103. - №7. -P. 99-101.

4. Никитин, А.И. Гормоноподобные ксенобиотики и репродуктивная система Текст./ А.И. Никитин// Проблемы репродукции. 2002. - №2. -С. 5-15.

5. Другов, Ю.С. Экологическая аналитическая химия Текст./ Ю.С. Другов. СПб.: АНАТОЛИЯ, 2000. - 432 с. - ISBN 5-88851-034-3.

6. Майстренко, В.Н. Эколого-аналитический мониторинг супертоксикантов Текст./ В.Н. Майстренко, Р.З. Хамитов, Г.К. Будников. М.: Химия, 1996. - 319 с. - ISBN 5-7245-1100-2.

7. Dalzell, D.J. A comparison of five rapid direct toxicity assessment methods to determine toxicity of pollutants to activated sludge Text./ D.J. Dalzell, S. Alte, E. Aspichueta, A. de la Sota, J. Etxebarria, M. Gutierrez, C.C.

8. Hoffmann, D. Sales, U. Obst, N. Christofi// Chemosphere. 2002. - V. 47, N.5.-P. 535-545.

9. Hellmann, H. Abbau von Alkylphenolethoxilaten in Waschmitteln — Ni.chweis durch IR-Spektroskopie/Dunnschicht-Chromatographie Text./ H. Hellmann// Fresenius' J. Anal. Chem. 1985. - V. 321, N. 2, - P. 159-162.

10. Huang, Ling. Определение следов фенольных примесей в бисфеноле А методом капиллярной газовой хроматографии Text./ Ling Huang,

11. Ming-jun Xie, Yan Jiang// Shiyou huagong. 2002. - V. 31, N 6. - P. 476478.

12. Wang, Shengping. Определение синтетических продуктов переэтерификации фенола диметиоксалатом методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии Text./ Shengping Wang, Zhenhua Li, Xinbin Ma, Genhui Xu// Fenxi huaxue. 2002. - V. 30, N 7. - P. 829832.

13. Giese, R. W. Measurement of endogenous estrogens: analytical challenges and recent advances Text./ R. W. Giese// J. Chromatogr. A. 2003. - V. 1000.-P. 401-412.

14. Chiron AS Company электронный ресурс./ The Biomarker Catalog 20042005// Режим доступа: www.chiron.no/html/biomarker2004/19-25.pdf, свободный. Загл. с экрана.

15. Lee, Н. С. Bisphenol A and nonylphenol bioconcentration in spotted halibut Varaspar variegates Text./ H. C. Lee, K. Soyano, A. Ishimatsu, M. Nagae, S. Kohra, Y. Ishibashi, K. Arizono, Y. Takao// Fisheries Science. 2004. -V. 70.-P. 192- 194.

16. Jiang, J.Q. Occurrence and treatment trials of endocrine disrupting chemicals (EDCs) in wastewaters Text./ J.Q. Jiang, Q. Yin, J.L. Zhou, P. Pearce// Chemosphere. 2005. - V. 61. - P. 544 - 550.

17. Guenther, К. Estrogen-active nonylphenols from an isomer-specific viewpoint: a systematic numbering system and future trends Text./ K. Guenther, E. Kleist, B. Thiele// Anal. Bioanal. Chem. 2006. - V. 384, № 2.- P. 542-546.

18. Thibaut, R. Identification of 4-n-nonylphenol metabolic pathways and residues in aquatic organism by HPLC and LC-MS analyses Text./ R. Thibaut, A. Jumet, L. Debrauwer, E. Rathahao, L. Lagadic, J.-P. Cravedi// Analusis. 2000. - V. 28, № 9. - V. 793-801.

19. Haefliger, О. P. Universal two-dimensional HPLC technique for the chemical analysis of complex surfactant mixtures Text./ O. P. Haefliger// Anal. Chem. 2003. - V. 75. - P. 371-378.

20. Yamamoto, H. Effects of Physical-Chemical Characteristics on the Sorption of Selected Endocrine Disruptors by Dissolved Organic Matter Surrogates/

21. H. Yamamoto, H. M. Liljestr, Y. Hisashimizu, M. Morita Text.// Environ. Sci. Technol. 2003. - V. 37. - P. 2646-2657.

22. Garballo, A. Methodology for different resolution degrees of LAS homologues and isomers in commercial formulations by HPLC-FD Text./ A. Garballo, M. del Olmo, A. Gonzalez-Casado, A. Navalon, J. L. Vilchez,

23. Lopez, J. A. de Ferrer, A. Moreno, J. L. Berna // Luminescence. 2002. -V. 17.-P. 224-227.

24. Petrovic, M. Analysis and environmental levels of endocrinedisrupting compounds in freshwater sediments Text./ M. Petrovic, E. Eljarrat, M. J. Lopez de Alda, D. Barcelo //TRAC: Trends Anal. Chem. Ref. Ed. 2001. -V.20. - P. 637 - 648.

25. Hideyuki, Y. Liquid chromatographic determination of bisphenols based on intramolecular excimer-forming fluorescence derivatization Text./ Y. Hideyuki, H. Hajime, N. Hitoshi, Y. Masatoshi// Anal. chim. Acta. 2003. -V. 488, N2.-P. 211-221.

26. Mottaleb, M. A. Application of HPLC-FTIR spectroscopy using thermospray interface for analysis of anionic surfactants Text./ M. A Mottaleb//Anal. Sci. 1999. - V. 15. - P. 1137-1140

27. Shao, B. Determination of nonylphenol ethoxylates in the aquatic environment by normal phase liquid chromatography-electrospray mass spectrometry Text./ B. Shao, J. Ни, M. Yang//J. Chromatogr. A. 2002. -V. 950.-P. 167-174.

28. Nagahashi, M. Separation and estimation of bisphenol a by liquid chromatography with UV detection Text./ M. Nagahashi, N. Kikuchi, E. Migaki, S. Watanabe, T. Miki// Acta chromatogr. 2000. - N 10. - P. 110121.

29. Inoue, K. Determination of phenolic xenoestrogens in water by liquid chromatography with coulometric-array detection Text./ K. Inoue// J. Chromatogr. A. 2002. - V. 946. - P. 291-294.

30. Babay, P.A. Separation of nonylphenol ethoxylates and nonylphenol by nonaqueous capillary electrophoresis Text./ P.A. Babay, R.T. Gettar, M.F.

31. Silva, В. Thiele, D. Batistoni//J. Chromatogr. A. 2006. - V. 1116. - P. 277-285.

32. Yakovleva, J. Development of a polarization fluoroimmunoassay for linear alkylbenzenesulfonates (LAS) Text./ J. Yakovleva, A. Lobanova, I. Michura, A. Formanovsky, M. Franek, J. Zeravik, S. Eremin// Anal. Lett. -2002. V. 35, N 14. - P. 2279-2294.

33. Nistor, C. Competitive flow immunoassay with fluorescence detection for determination of 4-nitrophenol Text./ C. Nistor, A. Oubina, M.-P. Marco, D. Barcelo, J. Emneus//Anal. chim. Acta. 2001. - V. 426, N 2. - P. 185195.

34. Farre, M. La. Wastewater toxicity screening of non-ionic surfactants by Toxalert' and Microtox' bioluminescence inhibition assays Text./ M. La Farre, M.-J. Garcia, L. Tirapu, A. Ginebreda, D. Barcelo// Anal. chim. Acta. -2001.-V. 427,N2.-P. 181-189.

35. Ohno, K. Estrogen receptor binding assay method for endocrine disruptors using fluorescence polarization Text./ K. Ohno, T. Fukushima, T. Santa, N. Waizumi, H. Tokuyama, M. Maeda, K. Imai// Anal. Chem. 2002. V.74. -P. 4391-4396.

36. Korshin, G.V. Comparative study of reactions of endocrine disruptors bisphenol A and diethylstilbestrol in electrochemical treatment andchlorination Text./ G.V. Korshin, J. Kim, L. Gan// Water Res. 2006. - V. 40.-P. 1070- 1078.

37. Wang, Y. Определение анионных поверхностно-активных веществ в природных водах потенциометрическим методом в системе проточно-инжекционного анализа Text./ Y. Wang, S. Guan, D. Hao, D. Dan// Fenxi huaxue. 2002. - V. 30. - P. 1455-1458.

38. Гоголашвили, Э. JI. Применение магнитно-релаксационного метода для эк ;пресс-анализа строения неионогенных ПАВ Текст./ Э. Л. Гоголашвили/ Физико-химические методы в координационной и аналитической химии. 1999. - С. 48 - 51.

39. Tojo, Т. A simple and extremely sensitive system for detecting estrogenic activity using transgenic Arabidopsis thaliana Text./T. Tojo, K. Tsuda, T. S. Wada, К. I. Yamazaki// Ecotoxicol. Environ. Saf. 2006. - V. 64. - P. 106- 114.

40. Horisberger, М. Labelling of colloidal gold with protein Text./ M. Horisberger, M. Vauthey// Histochemistry and Cell Biology. 1984. - V. 80, №1.-P. 13-18.

41. Abad, J.M. A quartz crystal microbalance assay for detection of antibodies against the recombinant African swine fever virus attachment protein pl2 in swine serum Text./ J.M. Abad, F. Pariente, L. HernaAndez, E. Lorenzo//

42. Anal. Chim. Acta. 1998.-V. 368. P. 183-189.

43. Huenerbein, A. Real-time monitoring of peptic and tryptic digestions of bovine (3-casein using quartz crystal microbalance Text./ A. Huenerbein, С. E.H. Schmelzer, R. H.H. Neubert// Anal. Chim. Acta. 2007. - V. 584. - P. 72-77.

44. Иммобилизованные ферменты Текст./ Отв. ред. И. В. Березин, В. К. Антонов, К. Мартинек. М.: изд-во МГУ, 1976. - Т. I. - С. 266.

45. Uttenthaler, Е. Quartz crystal biosensor for detection of the African Swine Fever disease Text./ E. Uttenthaler, C. Koeslinger, S. Drost// Anal. Chim. Acta.- 1998.-V.362.-P. 91-100.

46. Carter, R.M. Piezoelectric Detection of Ricin and Affinity-Purified Goat Anti-Ricin Antibody Text./ R.M. Carter, M.B. Jacobs, G.J. Lubrano, G.G. Guilbault// Anal. Lett. 1995. - V. 28. - P. 1379 - 1386.

47. Konig, B. Detection of viruses and bacteria with piezoelectric immunosensors Text./ B. Konig, M. Gratzel// Anal. Lett. -1993. V. 26. -P. 1567- 1585.

48. Babacan, S. Evaluation of antibody immobilization methods for piezoelectric biosensor application Text./ S. Babacan, P. Privarnik, S. Letcher, A.G. Rand// Biosens. Bioelectron. 2000. - V.15. - P. 615 -621.

49. Barnes, C. Lectin coated piezoelectric crystal biosensors Text./ C. Barnes, C. D'Silva, J. P. Jones, T. J. Lewis// Sensors and Actuators B: Chemical.1992.-V. 7.-P. 347-350.

50. Quinn, J. The use of regenerable, affinity ligand-based surfaces for immunosensor applications Text./ J. Quinn, P. Patel, B. Fitzpatrick [et al]// Biosens.Bioelectron. 1999. - V. 14. - P. 587 - 595.

51. Okada, T. Application of peptide probe for evaluating affinity properties of proteins using quartz crystal microbalance Text./ T. Okada, Y. Yamamoto, H. M., I. Karube, H. Muramatsu// Biosens. Bioelectron. 2007. - V. 22. - P. 1480-1486.

52. Saha, S. Sandwich microgravimetric immunoassay: sensitive and specific detection of low molecular weight analytes using piezoelectric quartz crystal Text./ S. Saha, M. Raje, C.R. Suri// Biotechnol. Lett. 2002. - V.24. - P. 711-716.

53. Babacan, S. Piezoelectric Flow Injection Analysis Biosensor for the Detection of Salmonella Typhimurium J. Text./S. Babacan, P. Pivarmik, S. Letcher, A. Rand// Food Sci. 2002. -V. 67. P. 314-320.

54. Liu, M. Flow injection immunosensing of polycyclic aromatic hydrocarbons with a quartz crystal microbalance Text./ M. Liu, Q. X. Li, G. A. Rechnitz// Anal. Chim. Acta. 1999. - V. 387. - P. 29-38.

55. Halamek, J. Highly sensitive detection of cocaine using a piezoelectric immunosensor Text./ J. Halamek, A. Makower, P. Skladal, F. W. Scheller// Biosens. Bioelectron.-2002. V. 17.-P. 1045-1050.

56. Su, X.D. Piezoelectric quartz crystal based label-free analysis for allergy disease Text./ X.D. Su, F.T. Chew, S.F.Y. Li// Biosens. Bioelectron. -2000.-V.15.-P. 629-639.

57. Park, I.-S. Operational characteristics of an antibody-immobilized QCM system detecting Salmonella spp. Text./ I.-S. Park, W.-Y. Kim, N. Kim// Biosens. Bioelectron.- 2000. V. 15. - P. 167 - 172.

58. Zhang, S. L. A piezoelectric gene-sensor using acimomycin D-functionalized nano-microspheres as amplifying probes Text./ S. L. Zhang, T. Z. Peng, C. F. Yang// J. Electroanal. Chem. 2002. - V. 522. - P. 152

59. Wink, Th. Self-assembled Monolayers for Biosensors Text./ Th. Wink, S. J. van Zuilen, A. Bult, W. P. van Bennekom// Analyst. 1997. - V. 122. - P. 43R-50R.

60. Skladal, P. Kinetic study of affinity interactions: comparison of piezoelectric and resonant mirror-based biosensors Text./ P. Skladal, J. Horacek//Anal. Lett. 1999.-V. 32.-P. 1519- 1529.

61. Фадеев, Ф.Ю. Жидкостной химически модифицированный кварцевый резонатор как иммуносенсор Текст./ Ф. Ю. Фадеев, А. А. Ельцов, Ю. К. Алешин, С. И. Малышенко, Г. В. Лисичкин// Ж. физич. химии -1994.-Т. 68., № 11.-С. 2071 -2075.

62. Barie, N. Covalent bound sensing layers on surface acoustic wave (SAW) biosensors Text./ N.Barie, M.Rapp // Biosens. Bioelectron. 2001. - V. 16. -P. 979-987.

63. Tang, A. H. J. Immunosensor for okadaic acid using quartz crystal microbalance Text./ A. H. J. Tang, M. Pravda, G. G. Guilbault, S. Piletsky, A. P. F. Turner// Anal. Chim. Acta. 2002. - V. 471. - P. 33-40.

64. Liu, Y.-C. Comparison of Different Protein Immobilization Methods on Quartz Crystal Microbalance Surface in Flow Injection Immunoassay Text./ Y.-C.Liu, C.-M. Wang, K.-P. Hsiung // Anal. Biochem. 2001. - V. 299.-P. 130-135.

65. He, F.J. A TSM immunosensor for detection of M. tuberculosis with a new membrane material Text./ F.J. He, L.D. Zhang, J.W. Zhao, B.L. Hu, J.T. Lei// Sens. Actuators, B. 2002. - V. 85. - P. 284 - 290.

66. Storri, S. Surface modifications for the development of piezoimmunosensors Text./ S.Storri, T.Santoni, M.Minunni, M.Mascini// Biosens. Bioelectron. 1998. -V. 13. - P. 347 - 357.

67. Palaniappan, Al. Cyclodextrin functionalized mesoporous silica films on quartz crystal microbalance for enhanced gas sensing Text./ Al. Pdaniappan, Xu Li, F. Tay, J. Li, X. Su// Sensors and Actuators B: Chemical. 2006. - V. 119. - P. 220 - 226.

68. Chu, Xia. Simultaneous immunoassay using piezoelectric immunosensor array and robust method Text./ Xia Chu, Jian-Hui Jiang, Guo-Li Shen, Ru-Qin Yu//Anal. Chim. Acta. 1996. -V.336. - P. 185-193.

69. Химия привитых поверхностных соединений Текст./ Под ред. Г. В. Лисичкина. -М.: «Мир», 2003. 592 с. - ISBN 5-9221-0342-3.

70. Harsanyi, G. Polymer films in sensor applications: a review of present uses and future possibilities Text./ G. Harsanyi// Sens. Rev. 2000. -V. 20. P. 98-105.

71. Saber, R. Glow-discharge treated piezoelectric quartz crystals as immunosensors for HSA detection Text./ R. Saber, S. Mutlu, E. Piskin // Biosens. Bioelectron. 2002. - V. 17. - P. 727-734.

72. Gamier, F. Toward intelligent polymers: DNA sensors based onoligonucleotidefunctionalized polypyrroles Text. / F.Gamier, H.Korri-Yousouffi, P.Srivastava, B.Mandrand, T.Delair // Synth.Metals.-1999.-V.100.- P.89-94.

73. Carter, R. M. Quartz crystal microbalance detection of Vibrio cholerae 0139 serotype Text./ R. M. Carter, J. J. Mekalanos, M. B. Jacobs, G. J. Lubrano, G. G. Guilbault// J. Immunol. Methods. 1995. - V. 187. -P. 121 - 125.

74. Su, X. Quartz tuning fork biosensor Text./ X. Su, C. Dai, J. Zhan, S. J. O'Shea// Biosens. Bioelectron. 2002. - V. 17. - P. 111-117.

75. Konig, B. Detection of human T-lymphocytes with a piezoelectric immunosensor Text./ B. Konig, M. Gratzel// Anal. Chim. Acta. -1993.-V. 281.-P. 13-18.

76. Konig, B. Development of a piezoelectric immunosensor for the detection of human erythrocytes Text./ B. Konig, M. Gratzel// Anal. Chim. Acta. -1993.-V. 276.-P. 329-333.

77. Konig, B. Long-term stability and improved reusability of a piezoelectric immunosensor for human erythrocytes Text./B. Konig, M. Gratzel// Anal. Chim. Acta. -1993. V. 280. - P. 37-41.

78. Konig, B. Human granulocytes detected with a piezoimmunosensor Text./ B. Konig, M. Gratzel//Anal. Lett. 1993.-V. 26. - P. 2313 - 2328.

79. EPA: Federal Register. Notices Text. 2004. - Vol. 69, No. 2. - P. 342.

80. Государственная фармакопея СССР Текст.: XI изд. М.: Медицина, 1987.-Вып. 1 и2.-С. 1081.

81. Handbook on the Implementation of EC Environmental Legislation Электронный ресурс. European Union Drinking Water Directive, 98/83/EC. - 2006. - Режим доступа: http://ec.europa.eu/ environment/ enlarg/handbook/water.pdf, свободный. Заглавие с экрана.

82. Досон, Р. Справочник биохимика Текст./ Р. Досон, Д. Эллиот, У. Эллиот, К. Джонс-М.: «Мир», 1991.-544 с.

83. Sauerbrey, G.Z. Use a quartz vibration form weigh thin films on a microbalance Text./ G.Z. Sauerbrey // Z. Phys. 1959. - B. 155. - P. 206 -210.

84. Guilbault G.G. Nomenclature for automed and mechanized analysis Text./ G.G. Guilbault, M. Hjelm// Pure&Appl.Chem. 1989. - V.61, № 9. - P. 1657-1664.

85. Bhatia, R. Phase transitions in a methyl-terminated Monolayer Self-Assembled on Au{ 111} Text./ R. Bhatia, B. J. Garrison// Langmuir. -1997. -V. 13,No.4.-P. 765-769.

86. Джонсон, К. Уравнение Гамета Текст./ К. Джонсон М.: «Мир», 1977.240 с.

87. Azevedo, D. de A. Occurrence of nonylphenol and bisphenol-A in surface wi .ters from Portugal Text./ D. de A. Azevedo, S. Lacorte, P. Viana, D. Barcelo// J. Braz. Chem. Soc. 2001. Vol. 12. - P. 532 -537.

88. U. S. EPA: Methods for organic chemical analysis of municipal and industrial wastewaters Text. USA, 1995. - Part 40. - P. 136.

89. British Pharmacopoeia 2007Text./ British Pharmacopoeia Commission. -Stationery Office. 2006. -V. 1. P. 3500. - ISBN 10 - 0113227256.

90. Thompson, M. Thickness-shear-mode acoustic wave sensors in the liquid phase. A review Text./ M. Thompson, A. L. Kipling, W. C. Duncan-Hewitt, L. V. Rajakovic, B. A. Cavic-Vlasak// Analyst.- 1991. -V.l 16.- P. 881-890.

91. Er;min, S. A. Urinary cotinine fluoroimmunoassay for smoking status screening adapted to an automated analyzer Text./ S. A. Eremin, R. E. Coxon, D. L. Colbert, J. Landon, D. S. Smith// Analyst. 1992. - V. 117.-P. 697 - 699.