Неоспороз крупного рогатого скота: Эпизоотология, диагностика тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат биологических наук Чернышова, Ольга Анатольевна

• Чернышова, Ольга Анатольевна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Чернышова, Ольга Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

1.0БЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Биология и морфология Neospora caninum.

1.1.1. Жизненный цикл.

1.1.2. Морфология и ультраструктура тахизоитов, тканевых цист и брадизоитов паразита.

1.1.3. Взаимоотношение паразит - хозяин

1.1.4. Действие препаратов разной природы на N. caninum in vitro и in vivo.

1.2. Неоспороз крупного рогатого скота.

1.2.1. Клинические признаки заболевания.

1.2.2. Патология абортов.

1.2.3. Возрастные особенности неоспороза.

1.2.4. Сезон абортов.

1.2.5. Аборты неоспорозной этиологии.

1.2.6. Повторные аборты и повторное трансплацентарное заражение плодов, вызванное N. caninum.

1.2.7 Экспериментальное моделирование болезни.

1.2.8 Эпизоотология неоспороза.

1.2.9 Диагностика неоспороза.

II. СОБСТВЕННЫЕИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.1.1. Сероэпизоотологический анализ неоспороза крупного рогатого скота в Центральной зоне Европейской части РФ.

2.1.2. Серологическая диагностика неоспороза.

2.1.2.1. Люминесцентная диагностика. а) Приготовление антигена из N. caninum, выращенной в культуре клеток Vero. б) Приготовление антигена из перитонеального экссудата мышей, зараженных T.gondii. в) Подготовка люминесцирующих конъюгатов и приготовление рабочих смесей для окраски препаратов (мазков). г) Постановка реакции непрямой иммунофлуоресценции.

2.1.3. Гистопатологическая диагностика неоспороза.

2.1.3.1. Гистохимическая диагностика.

2.1.3.2. Иммунопероксидазный метод диагностики основанный на использовании системы авидин-биотин

2.1.4. Культивирование N. caninum в перевиваемой линии клеток Vero. а) Приготовление смеси растворов версена с трипсином, используемой для пересева клеток. б) Обработка посуды, резиновых изделий и инструментов. в) Изучение динамики роста N. caninum в культуре клетокУего.

2.1.5. Экспериментальное заражение лабораторных животных Т. gondii и N. caninum. а) Подготовка посуды и вспомогательных материалов. б) Интраперитонеальное заражение.

2.1.6. Статистическая обработка данных.

III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Анализ данных сероэпизоотологического исследования крупного рогатого скота

3.1.1. Степень распространения неоспороза крупного рогатого скота в Центральной зоне Европейской части РФ.

3.1.2. Степень распространения неоспороза крупного рогатого скота в стаде.

3.1.3. Возраст положительно реагировавших животных при серологическом исследовании.

3.1.4. Возраст абортированных плодов

3.1.5. Сезон абортов у положительно реагировавших животных.

3.1.6. Число абортов среди положительно и отрицательно реагировавших животных

3.1.7. Родственная связь между положительно реагирующими на неоспороз животными.

3.1.8. Поиск источника распространения инвазии.

3.1.9. Поиск дефинитивного хозяина.

3.2. Анализ результатов серологической диагностики заболевания.

3.3. Характеристика люминесцентного метода исследования (чувствительность и специфичность).

3.4. Анализ результатов гистопатологической диагностики заболевания

3.5. Сравнительная характеристика серологического и гистологического методов диагностики.

3.6. Анализ полученных данных по культивированию N. саптиш

3.7. Результаты экспериментального заражения.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Неоспороз крупного рогатого скота: Эпизоотология, диагностика»

Актуальность темы. Многие годы считалось, что среди протозойных болезней значительный экономический ущерб животноводству наносят кокцидиозы, возбудители которых одна из самых значительных групп паразитических простейших, объединяющихся в класс Sporozoa, тип Apicomplexa, п/царство Protozoa.

Наибольший практический интерес представляют: эймерии, криптоспоридии, саркоцисты и токсоплазмы. Три последних возбудителя имеют, социально - экономическое значение, они вызывают зооантропонозные болезни.

В последние годы во всем мире активно обсуждается еще одна кокцидийная проблема - неоспороз привлекая внимание биологов и ветеринарных специалистов своей актуальностью.

Возбудителем неоспороза является Neospora caninum внутриклеточный паразит, вызывающий аборты у сельскохозяйственных и домашних животных, а также тяжелые неврологические заболевания у молодняка различных млекопитающих: собак, кошек, коз, лошадей, крупного рогатого скота, оленей и других животных (63, 64).

Неоспороз широко распространенное заболевание. Экономические потери, причиняемые неоспорозом КРС, могут быть значительными. В Австралии потери от абортов у молочных и мясных коров оценивали в 100 млн. долларов США в год, а в США только в штате Калифорния - 35 млн. долларов в год. Всего в США неблагополучно по неоспорозу 36 штатов из 50. (63, 64, 128). N. caninum была признана главной причиной абортов у крупного рогатого скота во всем мире (64). Полагают, что неоспороз явился основной причиной абортов у молочных коров в Австралии, Англии, Канаде, США, Дании, Ирландии, Израиле, Японии, Нидерландах, Мексике, Швеции, Южной Африке и у коров мясного направления в Новой Зеландии. Так, в США неоспороз явился главной причиной 19% абортов у молочного скота (14), в Калифорнии - 18%, 20% (15) и 42,5% (15), в Нидерландах - 18,6% (134), в Англии - 4,2% (109), в Северной Ирландии - 9% (16), в Новой Зеландии аборты у коров мясного направления составили: 28% (63), 30% (123), 33% (63) и 40% (127).

Вспышки абортов неоспорозной этиологии могут длиться от нескольких дней до нескольких месяцев (63, 64). Кроме того, инвазированные коровы длительное время могут неоднократно абортировать или рождать инвазированных телят с признаками поражения центральной нервной системы. Повторное трансплацентарное заражение плодов считают важной эпизоотологической особенностью неоспороза (63, 64). Жизненный цикл паразита слабо изучен.

Из вышеизложенного следует, что данное заболевание является серьезной проблемой и требует особого внимания при ее решении.

В Российской Федерации данное заболевание зарегистрировано нами совместно с ВИЭВ в 1996 году в результате выявления антител к N. сашпшп в сыворотке крови крупного рогатого скота. В последующие годы животные, давшие положительный результат, были подвергнуты иммуногистологическому анализу. Полученные результаты свидетельствуют о присутствии Мсашпит в нашей стране. Цели и задачи исследования. Основной целью нашего исследования было выделить паразита, разработать серологический метод диагностики неоспороза и изучить сероэпизоотологию заболевания. Для выполнения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1) Собрать необходимый материал для проведения диагностических исследований и изучения сероэпизоотологии неоспороза;

2) Разработать методы диагностики заболевания;

3) Усовершенствовать методику культивирования 1Ч.сатпшп;

4) Отработать методы заражения лабораторных животных;

5) Модернизировать технику приготовления антигена.

Научная новизна. Впервые в нашей стране установлен неоспороз-протозойное заболевание крупного рогатого скота. Впервые изучена сероэпизоотология неоспороза крупного рогатого скота в Центральной зоне Европейской части Российской Федерации и установлена интенсивность инвазии в стаде. Впервые проведена гистопатологическая диагностика заболевания и выделен паразит из тканей, абортированных плодов. Впервые изучена динамика роста N. caninum в культуре клеток Vero.

Практическая ценность работы. По материалам диссертационной работы разработан «Лабораторный регламент постановки реакции непрямой иммунофлюоресценции при диагностике неоспороза крупного рогатого скота».

Усовершенствован метод культивирования N. caninum в перевиваемой линии Vero cells.

Полученные данные могут быть использованы в лабораторной практике для диагностики неоспороза крупного рогатого скота, а также материалы исследования могут представлять интерес для ветеринарных специалистов хозяйств.

Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены:

1) На Всероссийской научной конференции «История и современные проблемы гельминтологии в России» (октябрь, 1999 г.).

2) Ученых советах ВИГИС в 1998-1999 гг. Основные положения, выносимые на защиту:

1) Сероэпизоотология неоспороза крупного рогатого скота в Центральной зоне Европейской части Российской Федерации;

2) Диагностика неоспороза крупного рогатого скота: а) Серологическая диагностика заболевания; б) Гистопатологическая диагностика болезни.

3) Изучение динамики роста N.caninum в культуре Vero cells.

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Чернышова, Ольга Анатольевна

выводы

1. Полученные нами данные подтверждают, что N. caninum является внутриклеточным паразитом.

2. Морфологические признаки N. caninum не могут быть использованы для постановки диагноза вследствие идентичности ее с Т. gondii.

3. Усовершенствован метод культивирования N. caninum в перевиваемой линии Vero cells. Культура клеток Vero была адаптирована к смеси версена с трипсином. Заражение культуры клеток Vero проводили через 24-48 часов после начала культивирования без удаления питательной среды и инкубации паразита на монослое, а вненсением 1-2 мл суспензии зараженных клеток и свободных тахизоитов из 5-6 суточной культуры инвазированной N. caninum.

4. Разработан лабораторный регламент постановки реакции непрямой иммунофлюоресценции при диагностике неоспороза крупного рогатого скота.

5. Обнаружение тахизоитов и брадизоитов паразита в мозге абортированного плода от положительно реагировавшей коровы и антител к N. caninum в 466 (17,5%) сыворотках крови крупного рогатого скота свидетельствует о присутствии данного заболевания в нашей стране.

6. Серологическое исследование 2652 проб на неоспороз крупного рогатого скота в реакции непрямой иммунофлюоресценции выявило положительно реагировавших животных в хозяйствах: Московской области: 17,8%-30,4%; Калужской области: 12,7%-24,5%; Ивановской области: 6,6%-8,6%; Нижегородской области: 3,4%-18,2%.

7. В 18 обследованных хозяйствах Центральной зоны РФ уровень обнаружения антител к N. caninum колебался от 3,4% до 30,4%.

8. Связь между возрастом животных и их серологическим статусом отсутствует.

9. Установлено, что 22% положительно реагировавших на неоспороз коров абортировали, в то время как среди отрицательно реагировавших -только 3%.

10. Между некоторыми положительно реагировавшими на неоспороз животными обнаружена родственная связь на уровне мать-дочь (6 телят от 8 сероположительных коров были сероположительными), что подтверждает мнение о трансплацентарной передаче возбудителя. Кроме того, среди животных выявлена следующая закономерность: аборты были более частыми у дочерей, чем у их матерей. Это, по-видимому, связано с тем, что при увеличении числа пассажей на восприимчивых животных возрастает его вирулентность.

11. Диагностическая оценка РНИФ показала, что с помощью этой реакции возможно выявление специфических анти-]Ч.сашпит антител у крупного рогатого скота всех возрастных групп.

12. Титр антител к N. сашпшп в разведении > 1:200 можно считать условно диагностическим для неоспороза крупного рогатого скота в Центральной зоне Европейской части РФ.

Практические предложения.

По материалам диссертационной работы разработан «Лабораторный регламент постановки реакции непрямой иммунофлуоресценции для диагностики неоспороза крупного рогатого скота», доложенный на секции Отделения ветеринарной медицины РАСХН "Инвазионные болезни животных".

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Чернышова, Ольга Анатольевна, 2000 год

1. Вершинин И.И. Критерии дифференциации цистообразующих кокцидий // Пр. Свердл. н. вет. ст-ции. 1987.- Вып. 9.- С. 88-91.

2. Вершинин И.И. Дифференциация цистообразующих кокцидий // Теорет. и практ. вопросы вет-рии.- 1988.- Т.2.- С. 41-43.

3. Вершинин И.И. К дифференциации изоспор, саркоцист, токсоплазм и родственных организмов // Тр. Свердл. СХИ.- 1988.- Т. 9.- С. 63-70.

4. Вершинин И.И. Кокцидиозы животных и их дифференциальная диагностика//Екатеринбург, 1996.-С. 140-184.

5. Дьяконов Л.П., Глухов В.Ф., Поздняков A.A., Денисенко Г.Ф., Гололобова М.Т., Панкова Т.Е., Камыкова Т.Т. Культура клеток и тканей животных:Учебно-методическое пособие // Ставрополь.-1980.-112 С.

6. Крылов М.В. Определитель протозойных простейших // Санк-Петербург, 1996,- С. 218.

7. Кэтти Д. Антитела. Методы. Книга II.- М.: Мир, 1991.- С. 153-237, 241-267, 269-300.

8. Луппа X. Основы гистохимии,- М.: Мир, 1980.- С. 11-57, 297-307.

9. Меркулов Г.А. Курс патологической техники,- Л.: Медицина, 1969.-С. 10-100.

10. Шаткин И.В. Методические рекомендации по лабораторной диагностике токсоплазмоза.- М., 1980.- 21 С.

11. Шишков В.А. Методические рекомендации по изучению и разработке мер борьбы с протозойными болезнями животных,- М., 1984.-С. 19-30.

12. Заблоцкий В.Т. Неоспороз животных // Ветеринария.- 1996.- № 10.-С. 53-55.

13. Agerholm J.S., Barr B.C. Bovine abortions associated with Neospora in Denmark // Acta Vet. Scand.- 1994.- V. 35.- № 4.- P. 461-464.

14. Anderson M.L., Blanchard P.C., Barr B.C., Dubey J.P., Hoffman R.L., conrad P.A. Neospora-like protozoan infection as a major cause of abortion in California dairy cattle //J. Am. Vet. Med. Assoc.-1991.- V. 198.- P. 241-244.

15. Barr B.S., Anderson M.L., Blanchard P.C., Dafl B.M., Kinde H., Conrad P.A. Bovine fetal encephalitis and myocarditis associated with protozoal infection // Vet. Pathol.- 1990.- V. 27.-P. 354-361.

16. Barr B.C., Conrad P.A., Dubey J.P., Anderson M.L. Neospora-like encephalomyelitis in a calf pathology, ultrasttucture and immunoreactivity // J. Vet. Diagn. Invest.- 1991.-V.3.- P. 39-46.

17. Barr B.C., Conrad P.A., Sverlow K.W., Tarantal A.F., Hendrickx A.G. Experimental fetal and transplacental Neospora infection in the nonhuman primate //Lab. Invest.- 1994,- V.71.-P. 236-242.

18. Barr B.C., Rowe J.D., Sverlow K.W., BonDurant R.H., Ardans A.A., Oliver M.N., Conrad P.A. Experimental reproduction of bovine fetal Neospora infection and death with a bovine Neospora isolate // J. Vet. Diagn. Invest.-1994.-V6.-P.207-215.

19. Barr B.S., Anderson M.L., Sverlow K.W., Conrad P.A. Diagnosis of bovine fetal Neospora infection with an indirect fluorescent antibody test //Vet. Rec.-1995.-V.137.-№ 24. P. 611-613.

20. Barber J.S., VanHam L., Polis I., Trees A.J. Seroplevalence of antibodies to Neospora caninum in Belgian dogs //Small.Anim. Pract.-1997.-V.38.- № l.-P. 15-16.

21. Baszler T.V., Knowles D.P., Dubey J.P., Gay J.M., Matheson B.A., McElwain T.F. Serological diagnosis of bovine neosporosis by Neospora caninum monoclonal antibody-based competitive inhibition ELISA // J. Clin. Microbiol.- 1996.- V.34.- P. 1423-1428.

22. Bjerkas I., Mohn S.F., Presthus S. Unidentified cyst-forming sporozoan causing encephalomyelitis and myositis in dogs // Z. Parasitenkd.-1984.-V.70.-P.271-274.

23. Bjerkas I., Presthus J. Immuno-histochemical and ultrastructural characteristics of a cyst-forming sporozoan associated with encephalomyelitis and myositis in dogs // Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand.-1988.-V.96.-P.445-454.

24. Bjorkman C., Hunden A., Uddla A. Prevalence of antibodies to N. caninum and T. gondii in Swedish dogs //Acta Vet. Scand.-1994.-V.35.-№ 4.-P.445-447.

25. Bjorkman C., Johansson O., Stenlund J., Holmdahl J., Uggla A. Neospora species infection in a herd of dairy cattle //J. Am. Vet. Med. Assoc.-1996.- V.208.-№ 9.-P.1441-1444.

26. Bjorkman C., Holmdahl J., Uggla A. An inderect enzyme-lenked (ELISA) immunoassay for demonstration of antibodies to Neospora caninum in serum and milk cattle // Vet. Parasitol.-1997.-V.68.-№ 3.-P.251-260.

27. Blanchard P.C., Hietala S.K., Thurmond M.C. Diagnostic interpretation of Neospora serology //Abstract. Proc. 38th Ann. Med. Am. Assoc. Vet. Lab. Diagn., Sparks, Nevada.-1995.-P.40.

28. Boulton J.G., Gill P.A., Cook R.W., Fräser G.C., Harper P.A.W., Dubey J.P. Bovine Neospora abortion in northeastern New South Wales //Aust. J.-1995.- V.72.-P.119-120.

29. Bryan L.A., Gajadhar A.A., Dubey J.P., Haines P.M. Bovine neonatal encephalomyelitis associated with a Neospora sp. protozoan // Can. Vet. J.-1994,- V.35.-P.111-113.

30. Buxton D., Caldow G.L., Maley S.W., Marks J., Innes E.A. Neosporosis and bovine abortion in Scotland //Vet. Rec.-1997.-V.141.-№ 25.-P.649-651.

31. Buxton D., Maley S.W., Pastore R.P., Brochier B.A., Innes E.A. Examination of red-foxes (vulpes-vulpes) from Belgium for antibody to Neospora caninum and T. gondii // Vet. Rec.-1997.-V.141.-№ 12.-P.308-309.

32. Cole R.A., Lindsay D.S., Blagburn B/L., Sorjonen D.S., Dubey J.P. Vertical transmission of Neospora caninum in dogs // J. Parasitol.-1995.-V.81.-P.208-211.

33. Cole R.A., Lindsay D.S., Blagburn B.L., Dubey J.P. Vertical transmission of Neospora caninum in mice // J. Parasitol.-1995.-V.81.- № 5.-P. 703-732.

34. Conrad P., Barr B., Anderson M., Sverlow K., Rowe J., BonDurant R., Breitmeyer R., Picanso J., Dubey J.P., Palmer C. Neosporosis: a newlyrecognized cause of bovine abortion // Proc. 33 Ann. Calif, dairy cattle day, Ames (Jowa).-1994.-P.21 -26.

35. Cox B.T., Reichel M.P., Griffiths L.M. Serology of a Neospora abortion outbreak on a dairy farm in New Zealand: A cause study // N. Z. Vet. J.-1998.-V.46.-№ l.-P. 28-31.

36. Dannatt L., Guy F., Trees A.J. Abortion due to Neospora species in a dairy herd // Vet. Rec.-1995.-V.137.- № 22.- P. 566-567.

37. Dubey J.P., Hugher H.P.A., Lillehoj H.S., Gamble H.R., Munday B.L. Placental transfer of specific antibodies during ovine congenital toxoplasmosis // Am. J. Vet. Res.-1987.-V.48.-P. 474-476.

38. Dubey J.P., Carpenter J.L., Speer C.A., Topper M.J., Uggla A. Newly recognized fatal protozoan disease of dogs // J. Am. Vet. Med. Assoc.-1988.-V.192.-P1269-1285.

39. Dubey J.P., Hattel A.L., Lindsay D.S., Topper M.J. Neonatal Neospora caninum infection in dogs: Isolation of the causative agent and experimental transmission //J. Am. Vet. Med. Assoc.- 1988.-V.193.-P.1259-1263.

40. Dubey J.P., Leathers C.W., Lendsay D.S. Neospora caninum-like protozoan associated with fatal myelitis in newborn calves // J. Parasitol.-1989.-V.75.-№ 1.-P.146-148.

41. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Transplacental Neospora caninum infection in cars //J. Parasitol.-1989.-V.75.-№ 5.-P.765-771.

42. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Transplacental Neospora caninum infection in dogs //Am. J. Vet. Rec.-1989.-V. 50.-№ 9.-P.1578-1579.

43. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Fatal Neospora caninum infection in kittens /11. Parasitol.-1989.-V.75.-№ 1.-P.148-151.

44. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Neosporosis in dogs //Vet. Parasitol.-1990.-V.36.-№ V2.- P. 147-151.

45. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Neospora caninum induced abortion in sheep // J. Vet. Diagn. Invest.-1990.-V.2.-P. 230 233.

46. Dubey J.P. and Poterfield M.L. Neospora caninum (Apicomplexa) in an aborted equine fetus // J. Parasitol.-1990.-V.76.-№ 5.—P.732-734.

47. Dubey J.P., Hartley L.J. and Lindsay D.S. Congenital Neospora caninum infection in a calf with spinal cord anomaly // J. Am. Vet. Med. Assoc.-1990.-V.197.-№ 8.-P.1043-1044.

48. Dubey J.P., Hartley W.J., Lindsay D.S., Topper M.J. Fatal congenital Neospora caninum infection in a lamb // J. Parasitol.-1990.-V.76.-№ 1.-P.127-130.

49. Dubey J.P., Koesther A. and Piper R.C. Repeated transplacental transmission of Neospora caninum in dogs // J. Am. Vet. Med. Assoc.-1990.-V.197.-№> 7.-P.857-860.

50. Dubey J.P., Miller S., Lindsay D.S., Topper M.J. Neospora caninum associated myocarditis and encephalitis in an aborted calf // J. Vet. Diagn. Invest.-1990.-V.2.-P.66-69.

51. Dubey J.P., Acland A.M., Hamir A.N. Neospora caninum (Apicomplexa) in a stillborn goat // J. Parasitol.-1992.-V.78.-№ 3.-P.532-534.

52. Dubey J.P., Janovitz E.B. and Skowronek A.J. Clinical neosporosis in a 4-week-old Herford calf// Vet. Parasitol.-1992.-V.43.-P.137-141.

53. Dubey J.P., Lindsay D.S., Anderson M.L., Davis S.W., Shen S.K. Induced transplacental transmission of Neospora caninum in cattle // J. Am. Vet. Med. Assn.-1992.-V.207.-P709-713.

54. Dubey J.P. and Lindsay D.S. Neosporosis // J. Parasitol.-1993.-V.9.-P.452-458.

55. Dubey J.P. and deLahunta A. Neosporosis associated congenital limb deformities in a calf//Appl. Parasitol.-1993.-V.34.-№ 4.-P.229-233.

56. Dubey J.P., Hamir A.N., Shen S.K., Thulliez P., Rupprecht C.E. Experimental Toxoplasma gondii infection in raccoons (Procyon lotor) // J. Parasitol.-1993.-V.79.-P548-552.

57. Dubey J.P., Lindsay D.S., Adams D.S., Gay J.M., Baszler T.V., Blagburn B.L., Thulliez P. Serological responses of cattle and other animals infected with Neospora caninum// Am. J. Vet. Res.-1996.-V.57.-P.329-336.

58. Dubey J.P., Rigouet J., Lagourette P., George C., Longeart L., Lenet J.L. Fatal transplacental neosporosis in a deer (Cervus eldi siamensis) // J. Parasirol.-1996.-V.82.-№ 2.-P.338-339.

59. Dubey J.P. and Lindsay D.S. A revew of Neospora caninum and neosporosis // Vet. Parasitol.-1996.-V.67.-№ y2.-P.l-59.

60. Dubey J.P. Recent advances in Neospora and neosporosis // Vet. Parasitol.-1999.-V.84.-P.349-367.

61. Flagstad A., Sensen A.E., Bjerkas I., Rasmussen K. Neospora caninum infection in a litter of Labrador Retriever dogs in Denmark // Acta Vet. Scand.-1995.-V.36.-P.387-391.

62. Harmelin A., Perl S., Nyska A., Yakobson B., Shpigel N., Orgal U. Neosporosis and the cause of bovine abortion in Israel // Israel. J. Veter. Med.-1995.-V.50.-№ 2.-P.55-56.

63. Hemphill A, Gottstein B. And Kaufman H. Adhesion and invasion of bovine endothelial cells by Neospora caninum // J. Parasitol.-1996.-V.112.-P.183-197.

64. Hessbr M.A. and Halbur P. Application of immunohistochemistry and ELISA for the diagnosis of Neospora-infected cattle // As.(pubL), Jowa, State Univ. Coop. Extens. Serv. Ames.-1996.-V.632.-P.159-160.

65. Ho M.S.Y., Barr B.C., Rowe J.D., Anderson M.L., Sverlow K.W., Packham A., Marsh A.E., Conrad P.A. Detection of Neospora sp. from infected bovine tissue by PCR and probe hybridization // J. Parasitol.-1997.-V.85.-№ 3.-P.508-514.

66. Hoar B.R., Ribble C.S., Spitzer C.C., Janzen E.D. Investigation of pregnancy lossec in buf cattle herds associated with Neospora sp. infection // Canad. Veter. J.-1996.- V.37.-№ 6.-P.364-366.

67. Holmdahl O.J.M., Bjorkman D. and Uggla A. A case of Neospora associated bovine abortion in Sweden // Acta Veter. Scand.-1995.-V.36.-№ 2.-P.279-281.

68. Illanes O., Moore A., Prigle J. and Saindon A. Neospora-induced congenital myelitis and polyradiculoneuritis in a one-month-old Holstein calf // Canad. Veter. J.-1994.-V.35.-№ 10.-p.653-654.

69. Jacobson L.S. and Jardine J.E. Neospora caninum infection in three Labrador littermates // J. South. Afr. Vet. Assoc.-1993.-V.64.-№ 2.-P.101-102.

70. Jardine J.E. and Last R.D. Neospora caninum infection in aborted twin calves //J. South. Afr. Veter. Assoc.-1993.-V.64.-№ 2 .-P.101-102.

71. Jenkins M.C., Wouda W. and Dubey J.P. Serological response over time to recombinant Neospora caninum antigens in cattle after a Neosporosis-induced abortion // Clin. Diagn. Lab. Immunol.-1997.-V.4.-№ 3.-P.270-274.

72. Lindsay D.S. and Dubey J.P. In vitro development of Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) from dogs // J. Parasitol.- 1989.-V.75.-№ 1.-P.163-165.

73. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Evaluation of anticoccidial drugs inhibition of Neospora caninum development in cells cultures // J. Parasitol.-1989.-V.75.-№ 6.-P.990-992.

74. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Immunohistochemical diagnosis of Neospora caninum in tissue sections // Am. J. Vet. Rec.-1989.-V.50.-№ 11.-P.1981-1983.

75. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) infections in mice // J. Parasitol.-1989.-V.75.-№ 5.-P.772-779.

76. Lindsay D.S., Blagburn B.L. and Dubey J.P. Infection of mice with Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) does not protect against challenge with Toxoplasma gondii // Infect. Immun.-1990.-V.58.-P.2699-2700.

77. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Effects of sulfadiazine and amprolium on Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) infection in mice // J. Parasitol.-1990.-V.76.-№ 2.-P.177-179.

78. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Infection in mice with tachyzoites and bradyzoites of Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) // J. Parasitol.-1990.-V.76.-№ 3.-P.410-413.

79. Lindsay D.S. and Dubey J.P. Neospora caninum (Protozoa: Apicomplexa) infections in rats // Can. J. Zool.-1990.-V.68.-P.1595-1599.

80. Lindsay D.S., Speer C.A., Toivio-Kinnucan M.A., Dubey J.P., Blagburn B.L. Use of infected cultured cells to compare ultrastructural features of Neospora caninum from dogs and Toxoplasma gondii // Am. J. Vet. Res.-1993.-V.54.-№ 1.-P.103-106.

81. Lindsay D.S., Lenz S.D., Cole R.A., Dubey J.P., Blagburn B.L. Mouse model for central nervous system Neospora caninum infections // J. Parasitol.-1995.-V.81.-P.313-315.

82. Lindsay D.S., Rippey N.S., Powe T.A., Sartin E.A., Dubey J.P., Blagburn B.L. Abortions, fetal death, and stillbirths in pregnant pygmy goats inoculated with tachyzoites of Neospora caninum // Am. J. Vet. Rec.-1995.-V.56.-№ 9.-P.1176-1180.

83. Lindsay D.S., Steinberg H., Dubielzig R.R., Semrad S.D., Konkle D.M., Miller P.E., Blagburn B.L. Central nervous system neosporosis in a foal // J. Vet. Diagn. Invest.-1996.-V.8.-P.507-510.

84. Long M.T. and Baszier T.V. Fetal loss in Balb/c mice infected with Neospora caninum // J. Parasitol.-1996.-V.82.-№ 4.-P.608-611.

85. March A.E., Barr B.C., Madigan J., Lakritz J.L., Nordhausen R., Conrad P.A. Neospora associated cause of equine protozoal myeloencephalitis // J. Am. Vet. Med. Assn.-1996.-V.206.-№ 11.-P.1907-1913.

86. Mayhew I.G., Smith K.C., Dubey J.P., Gatward L.K., McGlennon N.J. Treatment of encephalomyelitis due to Neospora caninum in a littler of puppies //J. Small. Anim. Pract.-1991.-V.32.-P.609-612.

87. McAllister M.M. Protozoal abortion in cattle // J. Am. Vet. Med. Assoc.-1993.-V.203.-P.1251.

88. McAllister M.M., Huffman E.M., Hietala S.K., Conrad P.A., Anderson M.L., Salman M.O. Evidence suggesting a point source exposure in an outbreak of bovine abortion due to neosporosis // J. Vet. Diagn. Invest.-1996.-V.8.-P.355-357.

89. McAllister M.M., McGuire A.M., Jolley W.R., Lindsay D.S., Trees A.S., Stobart R.H. Experimental neosporosis in pregnant ewes and their offspring// Vet. Parasitol.-1996.-V.33.-P.647-655.

90. Mcintosh D.W. and Haines D.M. Neospora infection in an aborted fetus in British Columbia // Can. Vet. J.-1994.-V.35.-P.114-115.

91. McNamee P.T., Trees A.J.,Guy F., Moflett D., Kilpatrick D. The diagnosis and prevalence of neosporosis in Northern Ireland cattle // Vet. Rec.-1996.-V.139.-P.419-420.

92. Moen A.R. and Wouda W. Field experiences with bovine Neospora abortion in Dutch dairy herds // Proceedings, Symposium Neospora Abortus Bij Het Rund, 8 November 1995, Morra 2, Drachten, p.11-17.

93. Moen A.R., Wouda W. and VanWerver T. Clinical and sero-epidemiological follow up study in four dairy herds with an outbreak of Neospora abortion // Proc. Dutch Society for Veterinary Epidemiology and Economics. Lelystar, 13 December 1995, p.93-103.

94. Morales E., Ramirez J., Trigo F., Ibarra F., Puenta E., Santa Gruz M. Description de un caso de aborto bovine associado a infection por Neospora sp. en Mexico // Vet. Mexico.-1997.-V.28.-№ 4.-P.353-357.

95. Nietfeld J.C., Dubey J.P., Anderson M.L., Libal M.C., Yaeger M.J., Neiger R.D. Neospora-like protozoan infection as a cause of abortion in dairy cattle // J. Vet. Diagn. Invest.-1992.-V.4.-P.223-226.

96. O' Toole D. and Jeffrey M. Congenital sporozoa an encephalomyelitis in a calf// Vet. Rec.-1987.-V.121.-P.563-566.

97. Obendorf D.L., Murray N., Veldhuis G., Munday B.L., Dubey J.P. Abortion cause by neosporosis in cattle //Aust. Vet. J.-1995.-V.72.-P.117-118.

98. Ogino H., Watanabe E., Watanabe S., Agawa H., Narita M., Hatitani M., Kawashima K. Neosporosis in the aborted fetus and newborn calf // J. Comp. Pathol.-1992.-V.107.-P.231-237.

99. Okuda K., Fukutomi T., Ouchi M., Yamakawa M., Kawahara K., Maruno S., Simada A., Umemura T. Pathological findings on four abnormally bom calves with infection of Neospora-like protozoa // J. Japan. Vet. Med. Assn.-1992.-V.45.-№ 11.-P.833-836.

100. Okuda K., hukutami T., Ouchi N., Yamakawa M., Hujjwara M., Shimada A., Umemura T. Pathological findings on aborted fetuses of dairycattle associated with Neospora-like protozoal infection // J. Japan. Vet. Med. Assn.-1994.-V.47.-№ 2.-P.91-94.

101. Okuda K., Hirata Y., Fukutomi T., Fuziwara M., Jhimada A., Umemura T. Neospora induced hind limb paralusis in a 4-week-old Holstein calf // J. Japan. Vet. Ned. Assn.-1995.-V.48.-№ 8.-P.544-576.

102. Okuda K., Fukutomi T., Mori M., Yoshimo T. Detection of antibody to Neospora caninum and pathology of aborted fetuses in a bovine farm with multiple incidences of abortion and stillbirth // J. Japan. Vet. Med. Assn.-1998.-V.51.-№ 2.-P.76-79.

103. Otter A., Jeffrey M., Grifliths I.B., Dubey J.P. A survey of the incidence of Neospora caninum infection in aborted and stillborn bovine fetuses in England and Wales // Vet. Rec.-1995.-V.136.-№ 24.-P.602-608.

104. Otter A., Jeffrey M., Scholes S.F.E., Helmick B., Willsmith J.W., Trees A.S. Comparison of histology with maternal and fetal serology due to bovine neosporosis // Vet. Rec.-1997.-V.141.- № 19.-P.487-489.

105. Pare J., Thurmond M.C. and Hietala S.K. Congenital Neospora infection in dairy cattle // Vet. Rec.-1994.-V.134.-P.531-532.

106. Pare J., Hietala S.K. and Thurmond M.C. Interpretation of an indirect fluorescent antibody test for diagnosis of Neospora sp. infection in cattle // J. Vet. Diagn. Invest.-1995.-V.7.-P.273-275.

107. Pare J., Thurmond M.C. and Hietala S.K. Congenital Neospora caninum infection on dairy cattle and associated calfhood mortality // Can. J. Vet. Res.-1996.-V.60.-P.133-139.

108. Pare J., Thurmond M.C. and Hietala S.K. Neospora caninum antibodies in cows during pregnancy as a predictor of congenital infection and abortion // J. Parasitol.-1997.-V.83.-№ 1.-P.82-87.

109. Parish S.M., Maag-Miller L., Besser T.E., Weidner J.P., McElwain T., Knowles D.P., Leathers C.W. Myelitis associated with protozoal infection in newborn calves //J. Am. Vet. Ned. Assn,-1997.-V.191.-№ 12.-P.1599-1600.

110. Patitucci A.N. Neospora and abortion in New Zealand dairy cattle // Unpubleshed. Mphil thesis. Massey University Palmerston North, 1994.

111. Pedersen T.C.L., Jensen H.E., Flagstad A., Rasmussen K. Neospora caninum infection has husdur // Danks. Vet. Tidsskr. -1994.-V.77.-№ 24.-P1077-1084.

112. Reichel M.P. and Drake J.M. The diagnosis of Neospora abortion in cattle // New Zealand. Vet. J.-1996.-V.44.-№> 4.-P.151-154.

113. Robert F. Neosporose: Bilan des connaissances actuelles sur cette parasitose de decouverte recente // Rev. Fr. Lab.-1996.-V.25.-№ 285.-P.29-34.

114. Sheahan B.J., Caffrey J.F., Dubey J.P and McHenry D.F. Neospora caninum encephalomyelitis in seven dogs // Irish. Vet. J.-1993.-V.46.-№ 1.-P.3-7.

115. Shivaprasad H.L., Ely R. and Dubey J.P. A Neospora-like protozoon found in an aborted bovine placenta // Vet. Parasitol.-V.34.-№ y2.-P.145-148.

116. Speer C.A and Dubey J.P. Ultrastructure of tachyzoites, bradyzoites and tissue cysts of Neospora caninum // J. Parasitol.-1989.-V.36.-P.458-463.

117. Thilsted J.P. and Dubey J.P. Neosporosis-like abortions in a herd of dairy cattle //J. Vet. Diagn. Invest.-1989.-V.l.-P.205-209.

118. Thornton R.N., Thompson E.J. and Dubey J.P. Neospora abortion in New Zealand cattle // N. Z. Vet. j.-1991.-v.39.-№ 4.-P.129-133.

119. Thornton R.N., Gajadhar A. and Evans J. Neospora abortion epidemic in a dairy herd // N. Z. Vet. J.-1994.-V.42.-№ 5.-P.190-191.

120. Thurmond M. and Hietala S. Strategies to control Neospora infection in cattle // Bovine Pract.-1995.-№ 29.-P.60-63.

121. Thumond M., Heitala S., Blanchard P. and DeBey S. Congenital transmission of Neospora caninum in herds experiencing endemic or epidemic abortion //Abstract. Proc.38th Am. Meet. Am. Assoc. Vet. Lab. Diag., Sparks, Nevada.-1995.-P.97.

122. Thurmond M.C., Anderson M.L. and Blanchard P.C. Secular and seasond trends of Neospora abortion in California dairy cows // J. Parasitol.-1995.-V.81.-№ 3.-P.364-367.

123. Thurmond M.C. and Hietala S.K. Effect of Neospora caninum infection on milk-production in first-lactation dairy cows // J. Amer. Vet. Med. Assn.-1997.-V.210.-№ 5.-P.672-673.

124. Trees A.S., Guy F., Dubey J.P., Tennat B., Murray R.D., Hart C.A., Thompson H. Neospora caninum: Seroepidemiological studies // 6th Eur. Multi. Colloq. Parasitol., The Hague, Sept., 7-11, 1992. Programme and Abstr. The Hahue, 1992.-P.53.

125. Trees A.J., Guy F., Low J.C., Roberts L., Buxton D., Dubey J.P. Serological evidence implicating Neospora species as a cause of abortion in British cattle // Vet. Rec.-1994.-V.134.-№ 16.-P.405-407.

126. Umemura T., Shiraki K., Marita t., Shimada A., Haratani M., Kobayashi M., Yamagata S. Neosporosis in a dogs: The first case report in Japan // J. Vet. Med. Sci.-1992.-V.54.-№ 1.-P.157-159.

127. Williams D.J.L., McGarry J., Guy F., barber J.S., Trees A.J. A novel ELISA for detection of Neospora-specific antibodies in cattle // Vet. Rec.-1997.-V.140.-№ 13.-P.328-331.

128. Woods L.W., Anderson M.L., Swift P.K., Sverlow K.W. Systemic neosporosis in California black-tailed deer (Odocoileus hemionus columbianus) //J. Vet. Diagn. Invest.-1994.-V.6.-P.508-510.

129. Wouda W., van den Ingh T.S.G.A.M., van Knapen F., Sluyter F.J.H., Dubey J.P. Neospora abortus bij het rund in Nederland // Tijdchr. Diergeneeskd.-1992.-V.117.-P.599-602.

130. Wouda W., de Gee A.L.M., Moen A.R. and van Knapen F. Laboratory experiences with bovine Neospora abortion in Dutch dairy herds // Proceedings, Symposium Neospora Abortus Bij Het Rund, 8 November, Morra 2, Drachten.-1995.-P.3-9.116

131. Wouda W., Dubey J.P., Jenkins M.C. Serological diagnosis of bovine fetal neosporosis // J. Parasitol.-1997.-V.83.-№ 3.-P.545-547.

132. Yaeger M.J., Shawd-Wessels S. And Leslie-Steen P. Neospora abortion storm in a midwestern dairy // J. Vet. Diagn. Invest.-1994.-V.6.-P.506-508.

133. Yamane I., Kokuho T., Shimura K., Eto M., Hariani M., Ouchi Y., Sverlow K.W., Conrad P.A. In vitro isolation of a bovine Neospora in Japan // Vet. Rec.-1996.-V.138.-P.652.

134. Yamane I., Kokuho T., Shimura K., Eto M., Shibahara T., Haritani M., Ouchi Y., Sverlow K., Conrad P.A. In vitro isolation and characterisation of a bovine Neospora species in Japan // Res. In Vet. Sc.-1997.-V.63.-№l.-P.77-80.

135. Российская академия сельскохозяйственных наук Отделение ветеринарной медицины

136. Одобрено Бюро Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии25 » мая 2000 г., протокол № 3кадемик-секретарь ветеринарной медицины »y^A, М. Смирнов

137. Приготовление антигена из культуры N.caninum, выращенной на перевиваемой линии Vero cells.

138. Тахизоиты N.caninum с гомогенезированной культурой Vero cellsгомогенизацию клеточной суспензии осуществляют путем продавливания ее с помощью шприца через иглы с уменьшающимся диаметром (№ 19,23,27).

139. Эта процедура обеспечивает получение достаточно чистой суспензии тахизоитов, которые затем трижды отмывают в фосфатно-солевом буфере (рн 7,2) при 1500 об. в течение 15 минут.

140. П. Подготовка люминесцирующих конъюгатов и приготовление рабочих смесей для окрашивания препаратов (мазков).

141. Стекла с антигеном вынимают из морозильной камеры и помещают во влажную камеру при комнатной температуре на 20 минут.

142. Затем стекла инкубируют в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) (рн 7,2) в течение 10 минут при комнатной температуре.

143. При постановке реакции осуществляют следующие контроли:

144. Контроль на отсутствие неспецифического свечения неоспорийного антигена с люминесцирующей сывороткой. Отсутствие свечения.

145. Контроль с иммунной неоспорозной сывороткой (сыворотка крови Крс с подтвержденным диагнозом на неоспороз). Наличие свечения.

146. Контроль с отрицательной сывороткой. Отсутствие свечения.

147. За положительный результат принимают люминесценцию на ++++, +++. ++ 50% неоспор в поле зрения. За сомнительный результат принимают люминесценцию на +. При отрицательном результате люминесценция оболочек отсутствует.