Нейропротективная активность и механизмы действия биологически активных соединений водяники черной тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Безверхняя Екатерина Александровна

• Безверхняя Екатерина Александровна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Безверхняя Екатерина Александровна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эпилепсия: определение, эпидемиология и патофизиология

1.2 Противоэпилептические препараты (ПЭП)

1.3 Средства растительного происхождения, обладающие противосудорожной активностью

1.4 Водяника черная (Empetrum nigrum L.)

1.4.1 Химический состав растений рода Empetrum

1.4.2 Водяника черная в традиционной медицине и экспериментальной фармакологии

1.5 Фармакология пентациклических тритерпеноидов классов урсана и олеанана

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Экспериментальные животные

2.2 Объекты исследования

2.3 Методы оценки противосудорожной активности

2.3.1 Судороги, вызванные подкожным введением пентилентетразола

2.3.2 Судороги, вызванные стрихнином при его подкожном введении

2.3.3 Тест максимального электрошока

2.3.4 Статистическая обработка экспериментальных данных, полученных на моделях патологии in vivo

2.4 Молекулярный докинг

2.4.1 Подготовка рецепторов и лигандов к проведению докинга

2.4.2 Докинг и визуализация результатов

2.5 Электрофизиологические методы исследования

2.5.1. Получение переживающих срезов мозжечка мышей

2.5.2 Регистрация токов нейронов в срезах мозжечка методом локальной фиксации потенциала

2.5.3 Иммуногистохимия нейронов в срезах мозжечка мыши

2.5.4 Получение деэндотелизированных изолированных гладкомышечных сегментов грудного отдела аорты крысы

2.5.5 Измерение механического напряжения сосудистых гладкомышечных клеток аорты крысы

2.6 Оценка нейропротективных и цитотоксических свойств урсоловой кислоты на моделях in vitro

2.6.1 Исследование цитотоксичности урсоловой кислоты и определение

IC50 на культуре лимфоцитов человека методом резазурин-теста

2.6.2 Исследование цитотоксичности урсоловой кислоты и определение IC50 на культуре нейробластомы человека методом МТТ-теста

2.6.3 Исследование нейропротективных свойств урсоловой кислоты в условиях окислительного стресса, индуцированного активными формами кислорода

2.6.4 Исследование нейропротективных свойств урсоловой кислоты в условиях глутамат-индуцированной эксайтотоксичности

ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение противосудорожных свойств липофильных фракций водяники черной в базисных тестах скрининга

3.1.1 Влияние липофильных экстрактов водяники черной на судорожную активность, вызванную подкожным введением пентилентетразола

3.1.2 Влияние липофильных фракций водяники черной на судорожную активность, вызванную подкожным введением стрихнина

3.1.3 Влияние липофильных фракций водяники черной на судорожную активность, вызванную максимальным электрошоком

3.2 Результаты прогнозирования противосудорожной активности перспективных тритерпеновых соединений

3.2.1 Оценка энергии связывания лигандов с молекулярной мишенью, визуализация взаимодействий

3.3 Результаты исследования влияния уросоловой кислоты на электрофизиологические параметры клеток Пуркинье

3.4 Результаты измерения механического напряжения сосудистых гладкомышечных клеток аорты крысы

3.4.1 Влияние урсоловой кислоты и карбамазепина на исходное

механическое напряжение аорты крысы

3.4.3 Влияние урсоловой кислоты и карбамазепина на фенилэфрин-индуцированное сокращение гладкомышечных сегментов аорты крысы

3.5 Результаты исследования нейропротективных и цитотоксических свойств урсоловой кислоты на моделях in vitro

3.5.1 Цитотоксичность урсоловой кислоты и определение IC50 на культуре лимфоцитов человека методом резазурин-теста

3.5.2 Цитотоксичность урсоловой кислоты и определение IC50 на культуре нейробластомы человека методом МТТ-теста

3.5.3 Результаты исследования нейроцитопротективных свойств урсоловой кислоты в условиях окислительного стресса, индуцированного

активными формами кислорода

3.5.4 Результаты исследования нейроцитопротективных свойств урсоловой кислоты в условиях глутамат-индуцированной

эксайтотоксичности

ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Нейропротективная активность и механизмы действия биологически активных соединений водяники черной»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Эпилепсия является одним из наиболее распространенных по всему миру хронических полиэтиологических неинфекционных заболеваний центральной нервной системы, которое характеризуется повторными пароксизмальными судорожными явлениями [1]. Применяемые в современной медицинской практике противоэпилептические препараты (ПЭП) предупреждают наступление судорог и купируют их, но не устраняют причину их возникновения. Более того, они вызывают ряд побочных эффектов, значительно ограничивающих их применение, в особенности в педиатрии. Постоянное применение синтетических ПЭП индуцирует у пациентов высокую степень фармакорезистентности, составляющей 20-30%. На сегодняшний день наблюдается тенденция широкого применения лекарственных средств растительного происхождения, преимущества которых заключаются в низкой токсичности и лучшей переносимости в широком диапазоне доз, что крайне важно в терапии таких хронических заболеваний как эпилепсия [2, 3].

Несомненный интерес представляют растения рода Empetrum, широко применяемые в народной медицине для лечения судорожных состояний и нейродегенеративных заболеваний. Водяника черная (Empetrum nigrum L.), представляющая собой вечнозеленый кустарничек из семейства Ericaceae, содержит в своем составе разнообразные классы вторичных метаболитов, которые обеспечивают значительное разнообразие показаний к применению [4-5]. Водяника черная широко применяется в народной медицине многих стран в качестве противоцинготного, гепатопротекторного средства, а также при заболеваниях мочевыделительной системы [6, 7].

Исследования, проведенные ранее на кафедрах фармацевтического анализа и фармакологии Сибирского государственного медицинского университета, выявили выраженный противосудорожный эффект экстрактов водяники черной, сравнимый с активностью синтетических ПЭП, наряду с их

низкой токсичностью [5, 8, 9]. Результатом исследований стала разработка технологии получения липофильной очищенной фракции, обладающей противосудорожным действием - "эмпетрин" (нерастворимая в ацетоне часть суммарного хлороформного экстракта) [8]. При создании безотходной технологии ее производства был получен густой экстракт водяники черной (ацетоновая фракция), проявивший по результатам исследований высокую антиоксидантную и антигипоксическую активность [9, 10]. В то же время, идентифицированные в ацетоновой фракции халконы и тритерпеновые соединения по данным литературы обладают рядом свойств, обеспечивающих устойчивость нейрональных клеток к повреждающим факторам, что позиционирует их в качестве потенциальных цитопротекторов в терапии нейродегенеративных заболеваний [11-15]. Таким образом, именно тритерпеновые соединения и (или) халконы, содержащиеся в составе ацетоновой фракции, могут обуславливать указанные биологические эффекты, что требует установления возможных молекулярных мишеней и метаболических путей их цитопротективного и противосудорожного действия с использованием методов биоинформационного анализа и экспериментального подтверждения с использованием моделей in vivo и in vitro.

Степень разработанности проблемы. В результате поиска и разработки новых лекарственных средств растительного происхождения, сочетающих высокую активность с безопасностью, водяника черная (Empetrum nigrum L.) была признана перспективной для создания фитопрепаратов с противосудорожным и нейропротективным действием [16]. Установлено, что нейропротективный эффект обуславливают флавоноиды, в частности группа халконов [10]. Противосудорожным эффектом обладают липофильные экстракты из надземных частей водяники черной, содержащие в своем составе широкий ряд биологически активных соединений (БАС). Не идентифицирована группа биологически активных веществ, ответственных за противосудорожное действие липофильных фракций [8]. В то же время,

тритерпеновые соединения, обнаруженные в составе липофильных фракций водяники черной, по литературным данным обладают противосудорожным действием на моделях патологии in vivo. Однако молеклярные механизмы реализации противоэпилептического действия данных соединений не установлены [17-19].

Цель работы. Изучить нейропротективную активность и механизмы действия липофильных фракций и тритерпеновых соединений водяники черной.

Задачи исследования:

1. Провести in vivo скрининг суммарного экстракта и липофильных фракций водяники черной на основных моделях судорожных состояний для выбора перспективных объектов.

2. Установить на основе биоинформационного анализа потенциальные молекулярные мишени для мажорных компонентов перспективных объектов исследования.

3. Изучить потенциальные электрофизиологические механизмы нейропротективной активности перспективных молекул на изолированных тканях.

4. Исследовать in vitro цитотоксические свойства урсоловой кислоты в отношении здоровых и опухолевых клеток человека.

5. Исследовать нейроцитопротективные эффекты урсоловой кислоты в условиях глутамат-индуцированной эксайтотоксичности и окислительного стресса.

Научная новизна. Выявлена противосудорожная активность ацетоновой фракции суммарного хлороформного экстракта из надземных частей водяники черной (Патент РФ на изобретение RU 2 714 687 C 1 "Средство, обладающее противосудорожной активностью"). Методами биоинформационного анализа впервые установлена аффинность пентациклических тритерпеновых соединений водяники черной к потенциалзависимым натриевым каналам. Впервые установлена способность

урсоловой кислоты, выделенной из водяники черной, уменьшать значение трансмембранного потенциала и частоту потенциала действия в мембране клеток Пуркинье переживающих срезов мозжечка мышей. Установлен выраженный вазорелаксирующий эффект урсоловой кислоты на сокращение, вызванное гиперкалиевой деполяризацией мембраны гладкомышечных клеток аорты крысы, а также фенилэфрин-индуцированное сокращение. Впервые установлено нейроцитопротективное действие урсоловой кислоты в условиях глутамат-индуцированной эксайтотоксичности и окислительного стресса.

Теоретическая и практическая значимость работы. Проведенные экспериментальные исследования показали перспективность урсоловой кислоты, выделенной из водяники черной, для разработки новых лекарственных средств с противосудорожным и нейроцитопротективным действием. Данные, полученные при изучении фармакологической активности липофильных фракций водяники черной, оформлены заявкой на изобретение, по которой зарегистрирован: Патент РФ на изобретение RU 2 714 687 C 1 «Средство, обладающее противосудорожной активностью».

Методология и методы исследования. В соответствии с поставленными задачами были выбраны современные высокоинформативные методические подходы, имеющиеся в научно-исследовательских лабораториях ФГАОУ ВО НИ ТПУ, НИИФиРМ им. Е. Д. Гольдберга, ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России. Объектами исследования являлись липофильные фракции, пентациклические тритерпеновые соединения и халконы водяники черной. Фармакологические исследования проводились в соответствии с «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств».

Положения, выносимые на защиту.

1. Среди липофильных фракций, выделенных из водяники черной (Empetrum nigrum L.), растворимая в ацетоне фракция суммарного хлороформного экстракта (РАФ) обладает наиболее выраженным

протективным эффектом на моделях первично-генерализованных судорог, что подтверждает гипотетические предпосылки высокой перспективности изучения водяники черной на предмет наличия противосудорожной активности, основанные на опыте народной медицины.

2. Противосудорожный эффект водяники черной обусловлен наличием тритерпеновых соединений (урсоловая кислота, олеаноловая кислота, а-амирин, Р-амирин), которые представляются перспективным классом для поиска и разработки новых высокоэффективных противосудорожных средств.

3. Урсоловая кислота, выделенная из водяники черной, обладает мембраностабилизирующим действием и приводит к повышению порога формирования потенциала действия мембран нейронов за счет возможной инактивации потенциалзависимых натриевых каналов. Урсоловая кислота, уменьшает сократимость гладкомышечных клеток. Вазорелаксирующий эффект урсоловой кислоты может быть обусловлен инактивацией потенцалзависимых натриевых каналов, инактивация которых ведет к остановке активного транспорта кальция и нарушению работы натрий-калиевой АТФ-азы.

4. Урсоловая кислота не проявляет выраженного цитотоксического влияния на жизнедеятельность здоровых клеток человека in vitro, обладая при этом избирательными цитотоксическими свойствами в отношении опухолевых линий.

5. Урсоловая кислота обладает свойствами первичной нейропротекции в условиях окислительного стресса и глутамат-индуцированной эксайтотоксичности, что выгодно отличает ее от синтетических противоэпилептических препаратов, проявляющих нейротоксическое действие.

Степень достоверности и апробация работы. Высокая степень достоверности полученных в ходе диссертационного исследования результатов подтверждается большим объемом экспериментальных данных,

применением актуальных методических подходов. Выводы, сформулированные в диссертации, подтверждены экспериментальными материалами, результатами статистической обработки полученных данных. Основные результаты диссертационного исследования были доложены на 23-й Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке» (Томск, 2022), Всероссийском инженерном конкурсе (Москва, 2022), Международной научно-практической конференции «Разработка лекарств - традиции и перспективы» (Томск, 2021), 22-й Международной научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Химия и химическая технология в XXI веке», (Томск, 2021), онлайн-олимпиаде Международного студенческого фестиваля «GxP-FEST» (Москва, 2021), 18-й Международной конференци студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2021), 29-м Европейском конгрессе психиатров (Италия, 2021), конкурсе «Молодые ученые» Фонда поддержки молодых ученых имени Геннадия Комиссарова (Москва, 2021), конференции молодых ученых «Фармакология: новые шаги в разработке инновационных лекарственных средств» (Томск, 2019), юбилейной V Междисциплинарной конференции МОБИ-ХимФарма (Судак, 2019).

Личный вклад автора. Автором лично выполнен поиск и анализ литературных источников, проведен весь блок экспериментальных исследований, обработка и интерпретация данных, сформулированы выводы. При непосредственном участии автора подготовлены публикации по теме диссертационного исследования.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 3 статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией при Министерстве науки и высшего образования Российской Федерации для опубликования основных научных результатов кандидатских и докторских диссертаций, 7 тезисов в материалах научных конференций и съездов. Получен 1 патент (КО) на изобретение.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов и списка использованной литературы. Работа изложена на 126 страницах, иллюстрирована 9 таблицами и 20 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения и выводов. Библиография включает 161 источник.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Эпилепсия: определение, эпидемиология и патофизиология

Согласно определению, сформулированному Международной противоэпилептической лигой, эпилепсия является хроническим состоянием мозга, характеризующимся устойчивой предрасположенностью к возникновению эпилептическиех приступов с нейробиологическими, когнитивными, психологическими и социальными последствиями [20]. Эпилепсия является одним из наиболее распространенных по всему миру хронических полиэтиологических неинфекционных заболеваний центральной нервной системы, которое характеризуется повторными пароксизмальными судорожными явлениями. По данным ВОЗ в мире эпилепсией страдают более 50 млн. человек. Почти 80% страдающих эпилепсией проживают в странах с низким и средним уровнем дохода [1]. Частота и распространенность эпилепсии варьируется в зависимости от возраста и является самой высокой среди детей младше 7 лет и среди лиц старше 55 лет. Судорожные состояния встречаются у 2-3% детей в различном возрасте. Среди взрослых трудоспособных пациентов, страдающих эпилепсией, 20-30% остаются безработными. Более 3% от общей популяции больных эпилепсией госпитализируется каждый год [21].

Эпилепсия характеризуется образованием в головном мозге стойкого патологического очага пароксизмальных импульсов в результате врожденных пороков развития, травм, инфекционных и сосудистых заболеваний мозга, наследственной предрасположенности и т. д. При этом эпилептический очаг может располагаться как в коре больших полушарий, так и в ряде подкорковых структур мозга, что обуславливает полиморфизм эпилептических приступов. Исследование лимбической системы головного мозга привело к возникновению двух теорий, касающихся изменений в нейрональной сети и ведущих к возникновению парциальных разрядов. Первая теория предполагает выборочную потерю интернейронов, что уменьшает

ингибирующую функцию гранулярных клеток зубчатой извилины. Другая теория предполагает синаптическую реорганизацию, которая следует за травмой и создает замкнутые рецидивирующие «самовозбуждающиеся» связи интернейронов. Эпилептогенный очаг состоит из 103-105 нейронов, мембрана которых в межприступном периоде находится в состоянии деполяризационного сдвига вследствие постоянной активации №+, Ca2+ и К+ каналов, что ведет к генерации потенциалов действия. Затем возникает так называемая «платообразная деполяризация», связанная с завершением вспышки потенциала действия с последующей быстрой реполяризацией и гиперполяризацией. Этот последовательный ряд является пароксизмальным деполяризующим сдвигом. Такая патологическая активность, обусловлена длительной деполяризацией мембраны нейрона и притоком внеклеточного Ca2+, что приводит к открытию потенциалзависимых каналов для ионов №+, притоку ионов №+ и генерации повторяющихся потенциалов действия. Во время потенциала покоя №+ каналы закрыты (закрыты наружные активационные и внутриклеточные инактивационные ворота); при деполяризации каналы открываются (открыты оба типа ворот); в период реполяризации №+ каналы находятся в инактивированном состоянии (активационные ворота открыты, инактивационные - закрыты). Последующий гиперполяризующий постпотенциал опосредуется ГАМК-рецепторами или/и притоком ионов С1—, и/или выбросом ионов К+, в зависимости от типа клеток нейронов и их локализации. Эти нейроны, спонтанно генерируя высокочастотные потенциалы действия, образуют гиперсинхронный разряд. В центре эпилептогенного очага находятся нейроны с постоянной эпилептической активностью, по периферии локализованы «дремлющие» нейроны. Их включение в импульсную активность повышает мощность гиперсинхронного разряда. Чаще всего эпилептогенный очаг формируется в структурах с низким порогом возбуждения - медиобазальных отделах коры больших полушарий, гиппокампе, амигдале, таламусе, ретикулярной формации среднего мозга [22, 23].

Распространение гиперсинхронного разряда обеспечивают тормозные нейроны. Повторяющиеся разряды приводят к: 1) повышению концентрации внеклеточного К+, снижающего степень гиперполяризации патологической клетки, стремясь деполяризовать соседние нейроны; 2) повышению концентрации ионов Ca2+ в пресинаптическом пространстве, что приводит к усилению выброса синаптических пузырьков с нейромедиаторами; 3) индуцированной деполяризации и активации ММОА-рецепторов, ведущей к повышенному обратному захвату ионов Са2+ и, соответственно, к большей активации тормозных нейронов. Систему антиэпилептической защиты составляют структуры с активно функционирующей системой ГАМК-ергического торможения: фронтоорбитальная кора, стриатум, мозжечок, ретикулярная формация моста. Они генерируют медленные волны, подавляющие возникновение пароксизмальных разрядов.

Согласно современному представлению, эпилепсия - не однородное заболевание, а мультифакториальное патологическое состояние. В формировании эпилептической активности большую роль играют нейрохимические механизмы и нарушения, сопровождающиеся дисбалансом ионных (каналопатии), медиаторных (глутамат, гамма-аминомасляная кислота) и энергетических процессов, ведущих к увеличению пермеабильности мембран нервных клеток и, как следствие, деполяризации нейронов, их сверхвозбудимости, эпилептизации и гиперсинхронизации, формированию эпилептического очага [24].

Нейрональная гибель является динамическим процессом и возникает вследствие влияния генетических факторов, эксайтотоксичности, обусловленной митохондриальной дисфункцией, изменения уровня цитокинов и оксидативного стресса, обусловленного снижением активности антиоксидантных систем. Установлено участие гормональных и иммунных систем в патогенезе эпилепсии [25]. В последнее время особое внимание исследователей привлекают каналопатии - патологические преобразования в

рецепторах №+ и К+ каналов (каналопатия), которые делают невозможным поддержку нормального градиента концентрации ионов по обе стороны мембраны и обусловливают пароксизмальную деполяризацию мембран нейронов. Известны два основных типа каналопатий: генетические, при которых функционирование ионных каналов аномально или отсутствует в результате мутаций (генетические каналопатии являются основной причиной идиопатической генерализованной формы эпилепсии), и аутоиммунные, при которых антитела нарушают функционирование ионных каналов [26].

Значительное влияние на функции ионных каналов оказывает опиоидная нейропептидергическая система и синтезируемые ею пептиды -энкефалины, эндорфины, реализующие функцию нейротрансмиттеров [27]. Важная роль в возникновении судорожных явлений принадлежит глутаматергической системе, включающей в себя КМОА-рецептор -ионотропный рецепторный комплекс глутамата, селективно связывающий N метил-D-аспартат (NMDA) и нейротрансмиттер глутамат. Глутамат является базисным нейротрансмиттером, участвующим в процессах синаптического возбуждения. Синапсы, использующие в качестве трансмиттера глутамат, локализуются приблизительно в 50% случаев в нейронах центральной нервной системы. Наибольшее их количество располагается в переднем мозге и гиппокампе. Другой возможный механизм возникновения судорог включает в себя мутации, приводящие к неэффективности гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) (наиболее распространенный тормозной нейромедиатор) [28].

1.2 Противоэпилептические препараты (ПЭП)

Противоэпилептические препараты (ПЭП) предназначены для патогенетической терапии эпилепсии и подавляют энергопродукцию в очаге эпилептогенеза. Некоторые ПЭП обладают комплексным механизмом действия. Так, зонисамид, помимо регуляции проницаемости натриевых и

кальциевых каналов нейронов, обладает уникальным свойством - уменьшает гиперпродукцию оксида азота и свободных радикалов, обеспечивая нейропротекторное действие [29, 30]. Механизм действия ПЭП (Таблица 1) направлен на блокаду натриевых и/или кальциевых каналов нейронов (карбамазепин, вальпроевая кислота, зонисамид), усиление ГАМК-ергического торможения (габапентин), уменьшение глутаматергического возбуждения (ламотриджин) [31].

Таблица 1 - Механизмы действия противоэпилептических препаратов

Механизм действия Традиционные противоэпилептические средства Новые противоэпилептические средства

Блокада натриевых каналов нейронов Фенитоин, карбамазепин, вальпроевая кислота Окскарбамазепин, эсликарбамазепина ацетат, ламотриджин, леветирацетам, топирамат, лакосамид, зонисамид

Блокада кальциевых каналов нейронов Этосуксимид, вальпроевая кислота Габапентин, прегабалин, леветирацетам, топирамат, зонисамид

Усиление ГАМК-ергического торможения Фенобарбитал, примидон, бензобарбитал, вальпроевая кислота, клоназепам Габапентин, топирамат, зонисамид

Уменьшение глутаматергиечского возбуждения — Окскарбамазепин, габапентин, прегабалин, ламотриджин, топирамат

Одну из наиболее тяжелых форм эпилепсии представляет собой эпилептический статус, являющийся однократным припадком продолжительностью до 30 минут или повторяющимся в течение 30 минут и более судорожными припадками. При этом между приступами сохраняются неврологические нарушения. Заболеваемость эпилептическим статусом достигает 0,02% и наиболее часто встречается среди детей и пожилых людей. Эпилептический статус протекает в форме тонико-клонических,

миоклонических судорог, абсансов и парциальных судорожных припадков. При судорожных формах статус в 6-20% случаев заканчивается летальным исходом от паралича дыхательной мускулатуры, отека легких, гипертермии, сосудистого коллапса, острой сердечной и почечной недостаточности, диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. С целью купирования эпилептического статуса ПЭП вводятся внутривенно. При статусе тонико-клонических и парциальных припадков используют в первую очередь фенитоин и фенобарбитал, альтернативой служат средства группы бензодиазепинов (диазепам, лоразепам, клоназепам) или вальпроевая кислота. Эпилептический статус абсансов купируют дизепамом внутривенно. При эпилептическом статусе миоклонических припадков применяют клоназепам и пирацетам в высокой дозе [31]. Идеальное ПЭП должно быть потенциально эффективным при припадках любых типов и в то же время иметь свою мишень - типы и формы припадков, при которых его действие наиболее выражено. Около 35% больных получают вальпроевую кислоту, 25% - карбамазепин, на каждое средство других групп приходится не более 10-15%. Неверный выбор первого ПЭП может спровоцировать резистентность к другим препаратам [31]. Применяемые в современной медицинской практике синтетические ПЭП обеспечивают противосудорожный, но не антиэпилептогенный эффект. Более того, ПЭП вызывают ряд побочных эффектов, значительно ограничивающих их применение, в особенности в педиатрии. Постоянное применение синтетических ПЭП индуцирует у пациентов высокую степень фармакорезистентности, составляющей 20-30% [2, 3].

1.3 Средства растительного происхождения, обладающие противосудорожной активностью

На сегодняшний день наблюдается тенденция широкого применения лекарственных средств растительного происхождения, преимущество которых заключается в низкой токсичности и лучшей переносимости в

широком диапазоне доз, что крайне важно в терапии таких хронических заболеваний, как эпилепсия [32, 33].

В настоящее время в мире нет ни одного коммерческого противосудорожного препарата растительного происхождения. В комплексной терапии эпилепсии фитопрепараты применяют эпизодически и только в качестве вспомогательных средств. Ряд экспериментальных работ посвящен изучению противосудорожной активности растительных экстрактивных комплексов (Таблица 2) [34].

Таблица 2 - Растения, обладающие противосудорожной активностью

Название растения Используемая часть Экстракт Доза Модели in vivo

1 2 3 4 5

Acosmium subelegans (сем. Fabacaeae) Спиртовой экстракт 100;500; 1000 мг/кг, перорально ПТЗ, МЭШ

Afrormosia laxiflora (сем. Fabacaeae) Корни Водный экстракт 50; 100; 150; 200; 250; 300 мг/кг, внутрибрюшинно ПИК, МЭШ

Albizzia lebbeck (сем. Fabacaeae) Листья Спиртовой экстракт 100 мг/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, МЭШ, СТР

Annona diversifolia (сем. Annonaceae) Листья Спиртовой экстракт 30 мг/кг, внутрибрюшинно ПЦН

Artemisia dracunculus (сем. Asteraceae) Надземная часть Эфирное масло 0,1; 0,15; 0,2; 0,4; 0,8; 1,0; 1,2 мл/кг ПТЗ, МЭШ

Benincasa hispida (сем. Cucurbitaceae) Плоды Метанольный экстракт 0,2; 0,4; 0,6; 1,0 г/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, МЭШ, СТР, ПИК

Bixa orellana (сем. Bixaceae) Листья Метанольный экстракт 125; 250; 500 мг/кг, перорально СТР

Butea monosperma (сем. Fabaceae) Цветки Петролейно-эфирный экстракт 10 - 150 мг/кг, внутрибрюшинно МЭШ, ПТЗ, ПИК, Li-ПИЛ

Bryophyllum pinnatum (сем. Lamiaceae) Листья Водный экстракт 50; 100; 200 мг/кг, внутрибрюшинно LD50=64 мг/кг ПИК, СТР

1 2 3 4 5

Centella asiatica (сем. Umbelliferae) Все растение Водный экстракт 100; 300 мг/кг, перорально ПТЗ - киндлин г

Cestrum nocturnum (сем. Solanaceae) Листья Водный экстракт 30% отвар внутрибрюшинно (30 г/100 мл воды) МЭШ, ИЗД

Citrus aurantium (сем. Rutaceae) Цветки Водный экстракт 120; 150; 175; 200; 300; 400 мг/кг, внутрибрюшинно ПТЗ

Cotyledon orbiculata (сем. Crassulaceae) Листья Водно-метанольный экстракт 50; 100; 200; 400 мг/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, БКЛ, ПИК, НМДА

Crocus sativus (сем. Iridaceae) Рыльца Водно-спиртовый экстракт 0,08-80; 0,2-2,0 г/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, МЭШ

Cymbopogon winterianus (сем. Poaceae) Листья Эфирное масло 200; 400 мг/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, ПИК, СТР

Cyperus articulatus (сем. Cyperaceae) Корневища Метанольный экстракт 200; 500; 1000; 2000 мг/кг, внутрибрюшинно МЭШ, ПТЗ, НМДА, СТР, ПИК, БКЛ, ИЗД

Delphinium denudatum (сем. Ranunculaceae) Корни Водно-спиртовый экстракт 200; 400; 600; 800 мг/кг, внутрибрюшинно МЭШ, ПТЗ, БКЛ, ПИК, СТР

Desmodium adscendens (сем. Papillionaceae) Листья Спиртовой экстракт 50; 100; 300 мг/кг, внутрибрюшинно ПТЗ, КК

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Безверхняя Екатерина Александровна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Duncan, J. S. Adult epilepsy / J. S. Duncan, J. W. Sander, S.M. Sisodiya et al. // The Lancet. - 2006. - Vol. 367, № 9516. - P. 1087-1100.

2. Авакян, Г. Н. Трансформации эпилептической системы. Состояние вопроса и возможности решения проблемы / Г. Н. Авакян, Г. Г. Авакян // Эпилепсия и пароксизмальные состояния. - 2017. - Т. 9, № 2. - С. 619.

3. Goldberg, J. F. Cognitive side effects of anticonvulsants / J. F. Goldberg, K. E. Burdick // The Journal of clinical psychiatry. - 2001. - Vol. 62, №2 14. - P. 27-33.

4. Барнаулов, О. Д. Сравнительная оценка церебропротективных и других фармакологических свойств растений семейства шикшевые Empetraceae / О. Д. Барнаулов // Традиционная медицина. - 2018. - № 1. - С. 38-47.

5. Кадырова, Т. В. Исследование биологически активных веществ водяники и возможности создания безотходной технологии ее переработки. Автореф. дисс. на соискание ученой степени кандидата фармацевт. наук : 14.04.02 / Кадырова Татьяна Владимировна. - Пермь, 2001.

6. Jurikova, T. Black crowberry (Empetrum nigrum L.) flavonoids and their health promoting activity / T. Jurikova, J. Mlcek, S. Skrovankova et al. // Molecules. - 2016. - Vol. 21, № 12. - P. 1685.

7. Matsuura, H. Antibacterial and antifungal compounds from Empetrum nigrum L. / H. Matsuura, G. Saxena, S. W. Farmer et al. // Planta Med. - 1995. - Vol. 61, № 6. - Р. 580.

8. Ермилова, Е. В. Химическое изучение растений рода Empetrum и возможности использования их в медицине. Автореф. дисс. на соискание ученой степени доктора фармацевт. наук : 14.04.02 / Ермилова Елена Васильевна. - Пермь, 2002.

9. Саратиков, А. С. Доклиническое токсикологическое изучение экстракта из надземной части Empetrum nigrum L. / А. С. Саратиков, Т. П. Новожеева, Н. С. Лившиц // Растительные ресурсы. - 2003. - Т. 39, № 2.

- С. 91-94.

10. Ильюшенко, С. В. Влияние экстракта водяники черной на энергетический обмен головного мозга крыс при гипоксии. Автореф. дис. На соискание ученой степени кандидата мед. наук : 14.00.00 /Ильюшенко Софья Владимировна. - Томск, 2003.

11.Степкина, Н. Н. Зависимость биологической активности халконов от их строения / Н. Н. Степкина, А. В. Великородов // Фундаментальные исследования. - 2015. - Т. 3, № 11. - С. 505-510.

12.Kun, X. Amyrin exerts potent anxiolytic and antidepressant effects via mechanisms involving monoamine oxidase and y-aminobutyric acid in mouse hippocampus / X. Kun, G. Zuhua // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. - 2019. - Vol. 18, № 8. - Р. 1673-1681.

13. Nogueira, A. O. Pharmacological effects of the isomeric mixture of alpha and beta amyrin from Protium heptaphyllum: a literature review / A. O. Nogueira, Y. I. S. Oliveira, B. L. Adjafre et al. //Fundamental & clinical pharmacology.

- 2019. - Vol. 33, № 1. - P. 4-12.

14.Gudoityte, E. Ursolic and oleanolic acids: Plant metabolites with neuroprotective potential / E. Gudoityte, O. Arandarcikaite, I. Mazeikiene // International Journal of Molecular Sciences. - 2021. - Vol. 22, № 9. - P. 4599.

15.Chen, C. Oleanolic acid and ursolic acid: therapeutic potential in neurodegenerative diseases, neuropsychiatric diseases and other brain disorders / C. Chen, Q. Ai, A. Shi // Nutritional Neuroscience. - 2022. - P. 115.

16. Способ получения средства, обладающего антиоксидантной активностью: Патент Рос. Федерации RU 2203077 C2. / Ермилова Е. В. Краснов Е. А., Писарева С. И., Кадырова Т. В. 27.04.2003. -

[Электронный ресурс]. - Режим доступа:

https://www.freepatent.ru/patents/2203077/.

17.Taviano, M. F. Ursolic acid plays a role in Nepeta sibthorpii Bentham CNS depressing effects / M. F. Taviano, N. Miceli, M. T. Monforte // Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives. - 2007. - Vol. 21, № 4. - P. 382-385.

18.Nieoczym, D. Assessment of the anticonvulsant potency of ursolic acid in seizure threshold tests in mice / D. Nieoczym, K. Socala, P. Wlaz // Neurochemical Research. - 2018. - Vol. 43, № 5. - P. 995-1002.

19.Khan, I. GABA-A receptor modulation and anticonvulsant, anxiolytic, and antidepressant activities of constituents from Artemisia indica Linn. / I. Khan, N. Karim, W. Ahmad // Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. - 2016. - P.2016.

20.Fisher, R. S. ILAE official report: a practical clinical definition of epilepsy / R. S. Fisher, C. Acevedo, A. Arzimanoglou et al. //Epilepsia. - 2014. - Vol. 55, № 4. - P. 475-482.

21.Banerjee, P. N. The descriptive epidemiology of epilepsy. A review / P. N. Banerjee, D. Filippi, W. A. Hauser // Epilepsy Research. - 2009. - Vol. 85, № 1. - P. 31-45.

22.Ayala, G. F. Genesis of epileptic interictal spikes: New knowledge of cortical feedback systems suggests a neurophysiological explanation of brief paroxysms / G.F. Ayala, M. Dichter, R.J. Gumnit et al. // Brain Research. -1973. -Vol 52. - P. 1-17.

23.Babb, T. L. Pathological Findings in Epilepsy / T. L. Babb, W. J. Brown // In: Engel J. Jr. Ed. Surgical Treatment of the Epilepsies. New York: Raven Press. - 1987. - P. 511-540.

24.Dichter, M. A. Emerging concepts in the pathogenesis of epilepsy and epileptogenesis / M. A. Dichter // Archives of neurology. - 2009. - Vol. 66, № 4. - P. 443-447.

25.Shin, E. J. Role of oxidative stress in epileptic seizures / E. J. Shin, J. H. Jeong, Y. H. Chung // Neurochemistry international. - 2022. - Vol. 59, № 2. - P. 122-137.

26.Белоусова, Е. Д. Трудности дифференциальной диагностики эпилепсии / Е. Д. Белоусова // Российский вестник перинатологии и педиатрии. — 2006. - № 6. - С. 13. 27.Stephen, G. Waxman Transcriptional channelopathies: An emerging class of disorders / G. Stephen // Nature Reviews Neuroscience. - 2001. - Vol. 2. - Р. 652-659.

28.Clements, J. D. The time course of glutamate in the synaptic cleft / J. D. Clements, R. A. Lester, G. Tong et al. // Science. - 1992. - Vol. 258, № 5087.

- P. 1498-1501.

29.Brodie, M. J. Antiepileptic drug therapy: does mechanism of action matter? / M. J. Brodie, A. Covanis, A. Gil-Nagel et al. // Epilepsy & Behavior. - 2022.

- Vol. 21, № 4. - P. 331-341.

30.Czapinski, P. Mechanisms of action of antiepileptic drugs / P. Czapinski, B. Blaszczyk, S. J. Czuczwar // Current topics in medicinal chemistry. - 2005. -Vol. 5, № 1. - P. 3-14.

31. Венгеровский, А. И. Фармакология. Курс лекций: учеб. пособие / А.И. Венгеровский. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2015. -736 с.: ил. С. 265-284.

32.Nsour, W. M. Review on phytotherapy in epilepsy / W. M. Nsour, C. S. Lau, I. C. K. Wong // Seizure. - 2000. - Vol. 9, № 2. - P. 96-107.

33.Самбукова, Т. В. Перспективы использования фитопрепаратов в современной фармакологии / Т. В. Самбукова, Б. В. Овчинников, В. П. Ганапольский и др. // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2017. - Т. 15, № 2. - С. 56-63.

34.Kamboj, P. Anticonvulsants from nature / P. Kamboj, I. Singh, N. Mahadevan et al. //Pharmacognosy Reviews. - 2009. - Vol. 3, № 5. - P. 108.

35.Fernández, S. P. Central nervous system depressant action of flavonoid glycosides / S. P. Fernández, C. Wasowski, L. M. Loscalzo et al. // European Journal of Pharmacology. - 2006. - Vol. 539. - P. 168-176.

36.Nassiri-Asl, M. Anticonvulsive effects of intracerebroventriculsar administration of rutin in rats. / M. Nassiri-Asl, S. Shariati-Rad, F. Zamansoltani // Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. - 2008. - Vol. 32. - P. 989-993.

37.Avallone, R. Pharmacological profile of apigenin, a flavonoid isolated from Matricaria chamomilla / R. Avallone, P. Zanoli, G. Puia et al. // Biochemical Pharmacology. - 2000. - Vol. 59. - P. 1387-1394.

38.Du, X. M. Sedative and anticonvulsant activities of goodyerin, a flavonol glycoside from Goodyera schlechtendaliana / X. M. Du, N. Y. Sun, N. Takizawa // Phytotherapy Research. - 2002. - Vol. 16. - P. 261-263.

39.Park, H. G. Anticonvulsant effect of wogonin isolated from Scutellaria baicalensis / H. G. Park, S. Y. Yoon, J. Y. Choi // European Journal of Pharmacology. - 2007. - Vol. 574. - P. 112-119.

40.Kavvadias, D. The flavone, hispidulin, a benzodiazepine receptor ligand with positive allosteric properties, traverses the blood-brain barrier and exhibits anticonvulsive effects / D. Kavvadias, P. Sand, K. A. Youdim // British Journal of Pharmacology. - 2004. - Vol. 142. - P. 811-820.

41.Ma, Y. Protective effects of Sanjoinine A against N-methylD-aspartate-induced seizure / Y. Ma, S. R. Yun, S. Y. Nam // Biological and Pharmaceutical Bulletin. - 2008. - Vol. 31, № 9. - P. 1749-1754.

42.Ribeiro, R. A. Nantenine alkaloid presents anticonvulsant effect on two classical animal models / R. A. Ribeiro, J. R. Leite // Phytomedicine. - 2003. - Vol. 10. - P. 563-568.

43.Felipe, F. C. B. Piplartine, an amide alkaloid from Piper tuberculatum, presents anxiolytic and antidepressant effects in mice / F. C. B. Felipe, J. T. S. Filho, L. E. O. Souza // Phytomedicine. - 2007. - Vol. 14. - P. 605-612.

44.Muceniece, R. Betulin binds to y-aminobutyric acid receptors and exerts anticonvulsant action in mice / R. Muceniece, K. Saleniece, J. Rumaks // Pharmacology Biochemistry and Behavior- 2008. - Vol. 90. - P. 712-716.

45.Hosseinzadeh, H. Protective effect of safranal on pentylenetetrazol-induced seizures in the rat: Involvement of GABAergic and opoid systems / H. Hosseinzadeh, H. R. Sadeghina // Phytomedicine. - 2007. - Vol. 14. - P. 256262.

46.Hosseinzadeh, H. Anticonvulsant evaluation of safranal and crocin from Crocus sativus in mice / H. Hosseinzadeh, F. Talebzadeh // Fitoterapia. -2005. - Vol. 76. - P. 722-724.

47.Souza, G. P. C. Anticonvulsant properties of y-decanolactone in mice / G. P. C. Souza, E. Elisabetsky, D. S. Nunes et al. // Journal of Ethnopharmacology.

- 1997. - Vol. 58. - 175-181.

48.Amin, K. M. Synthesis and preliminary evaluation of some substituted coumarins as anticonvulsant agents / K. M. Amin, D. E. A. Rahman, Y. A. Al-Eryani // Bioorganic & Medicinal Chemistry. - 2008. - Vol. 16. - 53775388.

49.Stevens, P. F. Ericaceae / P. F. Stevens, J. Luteyn, E. G. H. Oliver, T. L. Bell et al. // In: Kubitzki, K. ed. Flowering plants, dicotyledons: celastrales, oxalidales, rosales, cornales, ericales: The families and genera of vascular plants. Springer: Berlin. 2004 - Vol 1. - P.145-194. 50.Synonymic Checklists of the Vascular Plants of the World: Empetrum L. -[Электронный ресурс]. - Режим доступа:

https://www.gbif.org/species/2888367. 24.24.2022.

51.Куваев, В. Б. Хемосистематика и поиски новых лекарственных растений. Хемосистематика и эволюционная биохимия высших растений / В. Б. Куваев, Е. А. Краснов //. - Москва: СБС АН СССР, 1990.

- С. 50-52.

52.Maatta-Riihinen, K. R. Distribution and Contents of Phenolic Compounds in Eighteen Scandinavian Berry Species / K. R. Maatta-Riihinen, A. Kamal-

Eldin, P. H. Mattila et al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. -2004. - Vol. 52. - P. 4477-4486.

53.Laaksonen, O. Orosensory contributing compounds in crowberry (Empetrum nigrum) press-by products. / O. Laaksonen, M. Sandell, R. Jarvinen // Food Chemistry. - 2011. - Vol. 124, № 4. - P. 1514-1524.

54.Wollenweber, E. D. Lipophilic phenolics from the leaves of Empetrum nigrum - chemical structures and exudate localization / E. D. Wollenweber, M. Dorr, R. Stelzer et al. // Botanica Acta. - 1992. - Vol. 105, № 4. - P. 300305.

55.Lacramioara, O. Antioxidants content in Empetrum nigrum fresh and dried fruits / O. Lacramioara, M. Ciprian // Iranian Journal of Public Health. - 2016.

- Vol. 45. - P. 263-265.

56.Subramaniam, S. R. Umbelliferone and esculetin protect against N-nitrosodiethylamine-induced hepatotoxicity in rats / S. R. Subramaniam, E. M. Ellis // Cell Biology International. - 2016. - Vol. 40. - P. 761-769.

57.Yakovleva, E. V. Polycyclic aromatic hydrocarbons in soils and lower-layer plants of the southern shrub tundra under technogenic conditions / E. V. Yakovleva, D. N. Gabov, V. A. Beznosikov // Eurasian Soil Science. - 2014.

- Vol. 6. - P. 685-696.

58.Nilsson, M. C. Characterisation of the diferential interference efects of two boreal dwarf shrub species. / M. C. Nilsson, O. Zackrisson, O. Sterner et al. // Oecologia. - 2000. - Vol. 123. - P. 122-128.

59.Li, H. Dibenz[b, f]oxepin and antimycobacterial chalcone constituents of Empetrum nigrum / H. Li, S. Jean, D. Webster et al. // Journal of Natural Products. - 2015. - Vol. 78. - P. 2837-2840.

60.Wang, Q. Chemical constituents of ethyl acetate extract of Empetrum nigrum var. japonicum and their efect on alcoholic fatty liver of rats / Q. Wang, C. Zheng, S. Jin et al. // Chinese Traditional and Herbal Drugs. - 2016. - Vol. 47. - P. 3164-3168.

61.Zhang, Y. L. Chemical constituents of Empetrum nigrum var. japonicum / Y. L. Zhang, R. Q. Mei, X. Liu // Chinese Traditional and Herbal Drugs. - 2014. - Vol. 45. - P. 2293-2298.

62.Ermilova, E. V. Components of plants of the family Empetraceae: I: hydrocarbons from Empetrum nigrum / E. V. Ermilova, E. A. Krasnov, G. Z. Khanin // Chemistry of Natural Compounds. - 1987. - Vol. 23. - P. 503.

63.Vincevica-Gaile, Z. From forest to pharmacy: studies of pharmaceutically valuable compounds in wild black crowberry (Empetrum nigrum) / Z. Vincevica-Gaile, S. Strauta, J. Kviesis et al. // Forest. - 2017. - Vol. 2. - P. 37.

64.Черепнин, В. Л. Пищевые растения Сибири / В. Л. Черепнин. -Новосибирск: Издательство «Наука», 1987. - 147 с.

65.Андреева, Н. В. Виды шикш как перспективный источник БАВ в условиях Якутии / Н. В. Андреева, И. С. Малогулова // Современные наукоемкие технологии. - 2013. - № 9. - С. 51-52.

66.Park, S. Y. Antioxidative efects of two native berry species, Empetrum nigrum var. japonicum K. Koch and Rubus buergeri Miq., from the Jeju island of Korea / S. Y. Park, E. S. Lee, S. H. Han // Journal of Food Biochemistry. -2012. - Vol. 36. - P. 675-682.

67. Краснов, Е. А. Эффективность мази, содержащей экстракт водяники, при дерматите у крыс / Е. А. Краснов, Э. В. Сапрыкина, А. П. Петрова и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Т. 7, № 4. - С. 26-30.

68.Alfadda, A. A. Reactive oxygen species in health and disease / A. A. Alfadda, R. M. Sallam // Journal of Biomedicine and Biotechnology. - 2012. - P. 2012.

69.Rauha, J. P. Antimicrobial efects of fnnish plant extracts containing favonoids and other phenolic compounds / J. P. Rauha, S. Remes, M. Heinonen et al. // International Journal of Food Microbiology. - 2000. - Vol. 56. - P. 3-12.

70.Nohynek, L. J. Berry phenolics: antimicrobial properties and mechanisms of action against severe human pathogens / L. J. Nohynek, H. L. Alakomi, M. P. Kahkonen et al. // Nutrition and Cancer. - 2006. - Vol. 54. - P. 18-32.

71.Hyun, T. K. Antioxidant, antimicrobial, and antidiabetic activities of crowberry fruits / T. K. Hyun, J. H. Ra, S. H. Han et al. // Indian Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2018. - Vol. 80. - P. 489-495.

72.Барнаулов, О. Д. Сравнительная оценка влияния фитопрепаратов из растений флоры России на концентрацию инсулина и глюкозы в крови крыс с экспериментальным аллоксановым диабетом / О. Д. Барнаулов // Психофармакология и биологическая наркология. - 2008. - Т. 8, № 3-4.

- С. 2484-2490.

73.Kellogg, J. Alaskan wild berry resources and human health under the cloud of climate change / J. Kellogg, J. Wang, C. Flint et al. // Journal of Agricultural and Food Chemistry. - 2010. - Vol. 58. - P. 3884-3900.

74.Torronen, R. Fortifcation of blackcurrant juice with crowberry: impact on polyphenol composition, urinary phenolic metabolites, and postprandial glycemic response in health subjects / R. Torronen, G. J. McDougall, G. Dobson et al. // Journal of Functional Foods. - 2012. - Vol. 4. - P. 746-756.

75.Лупанова, И. А. Тритерпеновые гликозиды-перспективный класс природных соединений для создания новых фитопрепаратов / И. А. Лупанова, М. Ф. Минеева, В. К. Колхир // Сибирский медицинский журнал (Иркутск). - 2011. - T.105, № 6. - С. 244-246.

76.Флехтер, О. Б. Синтез и фармакологическая активность эфиров бетулина, бетулиновой кислоты и аллобетулина / О. Б. Флехтер, Н. И. Медведева, Л. Т. Карачурина и др. // Химико-фармацевтический журнал.

- 2005. - Т. 39, № 8. - С. 9-12.

77.Hodon, J. Design and synthesis of pentacyclic triterpene conjugates and their use in medicinal research / J. Hodon, L. Borkova, J. Pokorny et al. // European journal of medicinal chemistry. - 2019. - Vol. 182. - P. 111653.

78.Sohag, A. A. M. Molecular pharmacology and therapeutic advances of the pentacyclic triterpene lupeol / A. A. M. Sohag, T. Hossain, A. Rahaman et al. // Phytomedicine. - 2022. - P. 154012.

79.Пайгачкина, А. С. Исследование влияния тритерпеноидов лупанового и олеанового ряда на некоторые характеристики мембран эритроцитов крови млекопитающих / А. С. Пайгачкина, О. В. Попова // Биосистемы: организация, поведение, управление. - 2020. - С. 160.

80.Jang, S. M. Ursolic acid enhances the cellular immune system and pancreatic P-cell function in streptozotocin-induced diabetic mice fed a high-fat diet / S. M. Jang, S. T. Yee, J. Choi et al. // International immunopharmacology. -2009. - Vol. 9, № 1. - Р.113-119.

81.Ramachandran, S. Effect of ursolic acid, a triterpenoid antioxidant, on ultraviolet-B radiation-induced cytotoxicity, lipid peroxidation and DNA damage in human lymphocytes / S. Ramachandran, N. R. Prasad // Chemico-biological interactions. - 2008. - Vol. 176, № 2-3. - P. 99-107.

82.Kashiwada, Y. Anti-AIDS agents. 30. Anti-HIV activity of oleanolic acid, pomolic acid, and structurally related triterpenoids / Y. Kashiwada, H. K. Wang, T. Nagao et al. // Journal of Natural Products. - 1998. - Vol. 61, № 9. - P. 1090-1095.

83.Lee, S. U. Anabolic activity of ursolic acid in bone: Stimulating osteoblast differentiation in vitro and inducing new bone formation in vivo / S. U. Lee, S. J. Park, H. B. Kwak et al. // Pharmacological research. - 2008. - Vol. 58, № 5-6. - P. 290-296.

84.Min, S. W. Antihyperlipidemic effects of red ginseng, crataegii fructus and their main constituents ginsenoside Rg3 and ursolic acid in mice / S. W. Min, S. H. Jung, K. H. Cho et al. // Biomolecules & Therapeutics. - 2008. - Vol. 16, № 4. - P. 364-369.

85.Huang, F. X. Microbial transformation of ursolic acid by Syncephalastrum racemosum (Cohn) Schroter AS 3.264 / F. X. Huang, W. Z. Yang, F. Ye et al. // Phytochemistry. - 2012. - Vol. 82. - P. 56-60.

86.Resende, F. A. Antimutagenicity of ursolic acid and oleanolic acid against doxorubicin-induced clastogenesis in Balb/c mice / F. A. Resende, C. A. M.

de Andrade Barcala et al. // Life Sciences. - 2006. - Vol. 79, № 13. - Р. 1268-1273.

87.Hsu, Y. L. Proliferative inhibition, cell-cycle dysregulation, and induction of apoptosis by ursolic acid in human non-small cell lung cancer A549 cells / Y. L. Hsu, P. L. Kuo, C. C. Lin // Life sciences. - 2004. - Vol. 75, № 19. - Р. 2303-2316.

88. Somova, L. I. Cardiotonic and antidysrhythmic effects of oleanolic and ursolic acids, methyl maslinate and uvaol / L. I. Somova, F. O. Shode, M. Mipando // Phytomedicine. - 2004. - Vol. 11, № 2-3. - P. 121-129.

89.Saraswat, B. Ursolic acid isolated from Eucalyptus tereticornis protects against ethanol toxicity in isolated rat hepatocytes / B. Saraswat, P. K. Visen, D. P. Agarwal // Phytotherapy Research. - 2000. - Vol. 14, № 3. - Р. 163166.

90.Gangwal, A. Neuropharmacological effects of triterpenoids / A. Gangwal // Phytopharmacology. - 2013. - Vol. 4. - P. 354-372.

91.Wang, X. Antioxidant activities of oleanolic acid in vitro: possible role of Nrf2 and MAP kinases / X. Wang, X. Ye, R. Liu et al. // Chemico-Biological Interactions. - 2010. - Vol. 184, № 2-3. - P. 328-337.

92. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.

93.Eberhardt, J. AutoDock Vina: improving the speed and accuracy of docking with a new scoring function, efficient optimization, and multithreading / J. Eberhardt, D. Santos-Martins, A. F. Tillack et al. // Journal of computational chemistry. - 2010. - Vol. 31, № 2. - Р. 455-461.

94.Morris, G. M. Autodock4 and AutoDockTools4: automated docking with selective receptor flexiblity / G. M. Morris, R. Huey, W. Lindstrom et al. // Journal of Computational Chemistry. - 2009. - Vol. 16. - P. 2785-2791.

95.Huey, R. A. Semiempirical Free Energy Force Field with Charge-Based Desolvation / R. A. Huey, G. M. Morris, A. J. Olson // Journal of Computational Chemistry. - 2007. - Vol. 28. - P. 1145- 1152.

96.Ravindranath, P. A. AutoDockFR: Advances in Protein-Ligand Docking with Explicitly Specified Binding Site Flexibility / P. A. Ravindranath, S. Forli, D. S. Goodsell et al. // PLOS Computational Biology. -2015. - Vol. 11, № 12. -Р. e1004586.

97.PyMOL by Schrodinger. - [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //pymol. org/2/#page-top].

98. Discovery Studio Visualizer. - [Электронный ресурс]. - Режим доступа: [https://discover.3ds.com/discovery-studio-visualizer-download.

99.Forli, S. Metrics Computational protein-ligand docking and virtual drug screening with the AutoDock suite / S. Forli, R. Huey, M. E. Pique et al. // Nature Protocols. - 2016. - Vol.11. - P. 905-919.

100. Protein Data Bank. - [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //www. rcsb. org

101. Naylor, C. E. Complex of Voltage-gated ion channel in a the presence of channel blocking compound / C. E. Naylor, C. Bagneris, B. A. Wallace et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America). - 2014. -Vol. 111, № 23. - Р. 8428-8433.

102. Pan, X. Comparative structural analysis of human Nav 1.1 and Nav 1.5 reveals mutational hotspots for sodium channelopathies / X. Pan, Z. Li, X. Jin et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences (Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America).- 2021. -Vol. 118, № 11. - Р. e2100066118.

103. Pan, X. J. Structure of the human voltage-gated sodium channel Nav 1.4 in complex with p1 / X. J. Pan, Z. Q. Li, Q. Zhou et al. // Science. -2018. -Vol. 362, № 6412. - P. eaau2486.

104. Li, Z. Structural Basis for Pore Blockade of the Human Cardiac Sodium Channel Na v 1.5 by the Antiarrhythmic Drug Quinidine / Z. Li, X. Jin, T. Wu et al. //Angewandte Chemie International Edition. - 2021. - Vol. 60. - P. 11474-11480.

105. Jiang, D. Structure of the Cardiac Sodium Channel / D. Jiang, H. Shi, L. Tonggu et al. // Cell. -2020. - Vol. 180, № 1. - P. 122-134.

106. Shen, H. Structures of human Nav1.7 channel in complex with auxiliary subunits and animal toxins / H. Shen, D. Liu, K. Wu et al. // Science. - 2019. Vol. 363, № 6433. - Р. 1303-1308.

107. National Center for Biotechnology Information. PubChem. -[Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //pubchem. ncbi.nlm. nih. gov.

108. Apra, E. NWChem: Past, present, and future / E. Apra, E. J. Bylaska, W. A. de Jong et al. // The Journal of Chemical Physics. - 2020. - Vol. 152, № 18. - P. 184102.

109. Software for analysis of patch-clamp recordings and other wave data: Nest-o-Patch. - [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https: //sourceforge. net/p/nestopatch/wiki/Home/.

110. Cox, R. H. Voltage-gated sodium channels in human aortic smooth muscle cells / R. H. Cox, Z. Zhou, T. N. Tulenko // Journal of vascular research. - 1998. - Vol. 35, №. 5. - P. 310-317.

111. Thomsom, K. A direct resazurin test for measuring chemical toxicity / K. Thomsom, D. Liu, K. L. Kaiser // Toxicity Assessment. - 1986. - Vol. 1, № 4. - Р. 407-418.

112. Клаус, Д. Лимфоциты. Методы / Д. Клаус. - М.: Медицина, 1990. -377 с.

113. Wan, H. A study of the reproducibility of the MTT test / H. Wan, R. Williams, P. Doherty et al. // Journal of Materials Science: Materials in Medicine. -1994. - Vol. 5, № 3. - Р. 154-159.

114. Дубинина, Е. Е. Процессы нейрогенеза и нейродегенерации при депрессивных расстройствах / Е. Е. Дубинина, Л. В. Щедрина, Г. Э. Мазо // Психическое здоровье. - 2016. - Т. 14, № 7. - С. 29-36.

115. Жалсрай, А. Изучение нейропротективного действия экстракта чистотела большого (Chelidonium majus L.) in vitro / А. Жалсрай, Л. Ц. Санжиева //Acta Biomedica Scientifica. - 2019. - Т. 4, № 2. - С. 106-112.

116. Громова, О. А. Изучение нейропротективного действия мексидола на клеточной модели глутаматного стресса / О. А. Громова, И. Ю. Торшин, Е. В. Стельмашук // Журнал неврологии и психиатрии имени С. С. Корсакова. - 2017. - Т. 117, № 12. - С. 71-77.

117. Стельмашук, Е. В. Влияние глутамина на гибель культивированных зернистых нейронов, индуцированную глюкозной депривацией и химической гипоксией / Е. В. Стельмашук, С. В. Новикова, Н. К. Исаев // Биохимия. - 2010. - Т. 75, № 8. - С. 1150-1156.

118. Лапин, И. П. Фармакологические различия между кинурениновыми и коразоловыми судорогами (участие ГАМКА-рецепторов и дофамина) / И. П. Лапин // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1998. - Т. 61, № 2. - С. 20.

119. Lehmann, J. CGS 19755, a selective and competitive N-methyl-D-aspartate-type excitatory amino acid receptor antagonist / J. Lehmann, A. J. Hutchison, S. E. McPherson et al. // Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. - 1988. - Vol. 246, № 1. - P. 65-75.

120. Swinyard, E. A. Laboratory evaluation of antiepileptic drugs / E. A. Swinyard // Epilepsia. - 1969. - Vol. 10, № 2. - P. 107-119.

121. Fricker, D. Cell-attached measurements of the firing threshold of rat hippocampal neurons / D. Fricker, J. A. H. Verheugen, R. Miles // Journal of Physiology. - 1999. - Vol. 517, № 3. - Р. 791-804.

122. Сандаков, Д. Б. e-Физиология. Электронный учебник по курсу «Физиология человека и животных». - [Электронный ресурс]. - Режим доступа:

http://www.bio.bsu.by/phha/01/01_text.html#:~:text=%D0%9F%D0%BE% D1 %80%D0%BE%D0%B3%D0%BE%D0%B2%D 1 %8B%D0%B9%20% D0%BF%D0%BE%D 1 %82%D0%B5%D0%BD%D 1 %86%D0%B8%D0%

B0%D0%BB%20%E2%80%93 %20%D 1 %80%D0%B0%D0%B7%D0%B D%D0%BE%D 1 %81 %D 1 %82%D 1 %8C%20%D0%BC%D0%B5%D0%B 6%D0%B4%D 1 %83%20%D0%BC%D0%B5%D0%BC%D0%B 1%D 1 %80 %D0%B0%D0%BD%D0%BD%D1%8B%D0%BC,%D0%BF%D0%BE% D1 %82%D0%B5%D0%BD%D 1 %86%D0%B8%D0%B0%D0%BB%2C% 20%D 1 %82%D0%B5%D0%BC%20%D0%BC%D0%B5%D0%BD%D 1% 8C%D 1 %88%D0%B5%20%D0%B2%D0%BE%D0%B7%D0%B 1%D 1 %8 3%D0%B4%D0%B8%D0%BC%D0%BE%D 1 %81 %D1%82%D 1 %8C%20 %D0%BA%D0%BB%D0%B5%D1%82%D0%BA%D0%B8.

123. Ransdell, J. L. Voltage-Gated Sodium Currents in Cerebellar Purkinje Neurons: Functional and Molecular Diversity / J. L. Ransdell, J. M. Nerbonne // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2018. - Vol. 75, № 19. - P. 34953505.

124. Manu, K. Ursolic acid induces apoptosis by activating p53 and caspase-3 gene expressions and suppressing NF-kB mediated activation of bcl-2 in B16F-10 melanoma cells / K. Manu, G. Kuttan // International immunopharmacology. - 2008. - Vol. 8. - P. 974-981.

125. Ovesna, Z. Pentacyclic triterpenoic acids: New chemoprotective compounds. Minireview / Z. Ovesna, A. Vachalkova, K. Horvathova et al. // Neoplasma. - 2004. - Vol. 51, № 5. - C. 327-33.

126. Liu, Y. Clozapine inhibits strychnine-sensitive glycine receptors in rat hippocampal neurons / Y. Liu, C. Hu, Y. Tang et al. // Brain research. - 2009. - Vol. 1278. - P. 27-33.

127. Mandhane, S. N. Timed pentylenetetrazol infusion test: a comparative analysis with sc PTZ and MES models of anticonvulsant screening in mice / S. N. Mandhane, K. Aavula, T. Rajamannar et al. // Seizure. - 2007. - Vol. 16, № 7. - P. 636-644.

128. Wang, T. The pharmacological and toxicological action of strychnine on central nervous system / T. Wang, Q. Yang, R. Gao et al. // Asian Journal of Traditional Medicines. -2020. - Vol. 15, № 2. - P. 76-86.

129. Yu, H. Characterization of the subunit composition and structure of adult human glycine receptors / H. Yu, X. C. Bai, W. Wang et al. // Neuron.

- 2021. - Vol. 109, № 17. - P. 2707-2716.

130. Patocka, J. Strychnine. In Handbook of toxicology of chemical warfare agents. - Academic Press, 2020. - P. 239-247.

131. Breitinger, U. Modulators of the inhibitory glycine receptor / U. Breitinger, H. G. Breitinger et al. // ACS Chemical Neuroscience. - 2020. -Vol. 11, № 12. - P. 1706-1725.

132. Pinzi, L. Molecular docking: shifting paradigms in drug discovery / L. Pinzi, G. Rastelli // International journal of molecular sciences. - 2019. - Vol. 20, № 18. - P. 4331.

133. Sethi, A. Molecular docking in modern drug discovery: Principles and recent applications / A. Sethi, K. Joshi, K. Sasikala et al. // Drug discovery and development-new advances. - 2019. - Vol. 2. - P. 1-21.

134. Torres, P. H., Sodero, A. C., Jofily, P. Key topics in molecular docking for drug design / P. H. Torres, A. C. Sodero, P. Jofily et al. // International journal of molecular sciences. - 2019. -Vol. 20, № 18. - P. 4574.

135. Saikia, S. Molecular docking: challenges, advances and its use in drug discovery perspective / S. Saikia, M. Bordoloi // Current drug targets. - 2019. -Vol. 20, № 5. - P. 501-521.

136. Xu, L. Voltage-gated sodium channels: structures, functions, and molecular modeling / L. Xu, X. Ding, T. Wang et al. // Drug discovery today.

- 2019. -Vol. 24, № 7. - P. 1389-1397.

137. Catterall, W. A. Structure and pharmacology of voltage-gated sodium and calcium channels / W. A. Catterall, M. J. Lenaeus, T. M. Gamal El-Din et al. // Annual Review of Pharmacology and Toxicology. - 2020. -Vol. 60.

- P. 133-154.

138. Vidaurre J. New antiepileptic drugs / J. Vidaurre, J. Herbst // Medicina.

- 2019. - Vol. 79. - P. 48-53.

139. Patsalos P. N. Therapeutic drug monitoring of antiepileptic drugs in epilepsy: a 2018 update / P. N. Patsalos, E. P. Spencer, D. J. Berry et al. // Therapeutic drug monitoring. - 2018. - Vol. 40, № 5. - P. 526-548.

140. Miziak, B. Anti-epileptogenic effects of antiepileptic drugs / B. Miziak, A. Konarzewska, M. Ulamek-Koziol et al. // International journal of molecular sciences. - 2020. - Vol. 21, № 7. - P. 2340.

141. Mebs, D. Toxins acting on ion channels and synapses / D. Mebs, F. Hucho // Handbook of Toxicology. - CRC Press, 2020. - P. 493-600.

142. Xu, H. L. Picrotoxin / H. L. Xu, L. D. Du, G. H. Du et al. //Natural Small Molecule Drugs from Plants. - Springer, Singapore, 2018. - P. 303307.

143. George K. GABA inhibitors / K. George, N. M. Sadiq // StatPearls. -StatPearls Publishing, 2021. - P. 545230.

144. Zhang, L. The Na, K-ATPase in vascular smooth muscle cells / L. Zhang, C. Staehr, F. Zeng et al. // Current Topics in Membranes. -2019. -Vol. 83. - P. 151-175.

145. Bouzinova, E. V. The a2 isoform Na, K-ATPase modulates contraction of rat mesenteric small artery via cSrc-dependent Ca2+ sensitization / E. V. Bouzinova, L. Hangaard, C. Staehr et al. // Acta Physiologica. - 2018. - Vol. 224, № 1. - P. 13059.

146. Sergeant, G. P. Spontaneous activity in urethral smooth muscle / G. P. Sergeant, M. A. Hollywood, K. D. Thornbury et al. // Smooth Muscle Spontaneous Activity. - 2019. - Vol. 1124. - P. 149-167.

147. Wojta, J. Vascular Smooth Muscle Cells: Regulation of Vasoconstriction and Vasodilation / J. Wojta // Fundamentals of Vascular Biology. - Springer, Cham, 2019. - P. 97-111.

148. Chan, E. W. C Ursolic acid: An overview on its cytotoxic activities against breast and colorectal cancer cells / E. W. C. Chan, C. Y. Soon, J. B. L. Tan et al. // Journal of integrative medicine. - 2019. - Vol. 17, № 3. - P. 155-160.

149. Khwaza, V. Ursolic acid-based derivatives as potential anti-cancer agents: An update / V. Khwaza, O. O. Oyedeji, B. A. Aderibigbe et al. // International journal of molecular sciences. - 2020. - Vol. 21, № 16. - P. 5920.

150. Kim, K. Ursolic acid induces apoptosis in colorectal cancer cells partially via upregulation of MicroRNA-4500 and inhibition of JAK2/STAT3 phosphorylation / K. Kim, E. A. Shin, J. H. Jung et al. // International Journal of Molecular Sciences. - 2018. - Vol. 20, № 1. - P. 114.

151. Khatri, N. Oxidative stress: major threat in traumatic brain injury / N. Khatri, M. Thakur, V. Pareek et al. // CNS & Neurological Disorders-Drug Targets. - 2018. - Vol. 19, № 9. - P. 689-695.

152. Song, K. Oxidative stress-mediated blood-brain barrier (BBB) disruption in neurological diseases / K. Song, Y. Li, H. Zhang et al. // Oxidative Medicine and Cellular Longevity. - 2020. - Vol. 2020.

153. Srinivasan, R. Antioxidant and antiproliferative potential of bioactive molecules ursolic acid and thujone isolated from memecylon edule and elaeagnus indica and their inhibitory effect on topoisomerase II by molecular docking approach / R. Srinivasan, A. Aruna, J. S. Lee et al. // BioMed research international. - 2020. - Vol. 2020.

154. Samsonowicz, M. Enhanced antioxidant activity of ursolic acid by complexation with copper (II): Experimental and theoretical study / M. Samsonowicz, M. Kalinowska, K. Gryko et al. // Materials. - 2021. - Vol. 14, № 2. - P. 264.

155. Jachova, J., Gottlieb, M., Nemethova, M., Neuroprotection mediated by remote preconditioning is associated with a decrease in systemic oxidative stress and changes in brain and blood glutamate concentration / J. Jachova, M. Gottlieb, M. Nemethova et al. // Neurochemistry International. - 2019. -Vol. 129. - P. 104461.

156. Todd, A. C. The regulation of astrocytic glutamate transporters in health and neurodegenerative diseases / A. C. Todd, G. E. Hardingham //

International journal of molecular sciences. - 2020. - Vol. 21, № 24. - P. 9607.

157. Zaitsev, A. V. Neurobiology, Functions, and Relevance of Excitatory Amino Acid Transporters (EAATs) to Treatment of Refractory Epilepsy / A. V. Zaitsev, I. V. Smolensky, P. Jorratt et al. // CNS drugs. - 2020. - Vol. 34, № 11. - P. 1089-1103.

158. Zhang, X., Wang, D., Zhang, B., Zhu, J., Zhou, Z., & Cui, L. (2020). Regulation of microglia by glutamate and its signal pathway in neurodegenerative diseases. Drug discovery today. - 2020. - Vol. 25, № 6. -P. 1074-1085.

159. Шуваев, А. Н. Современные тенденции в развитии метода локальной фиксации потенциала: новые возможности для нейрофармакологии и нейробиологии / А. Н. Шуваев, В. В. Салмин, Н. В. Кувачева и др. // Анналы клинической и экспериментальной неврологии. - 2015. - Т. 9, № 4. - С. 54- 58.

160. Ковалев, И. В. Механизмы регуляции оксидом азота электрической и сократительной функции гладких мышц: дис. ...д-ра мед. наук : 03.00.13; 03.00.02 / Ковалев Игорь Викторович. - Томск, 2002. - 220 с.

161. Liobikas, J. Uncoupling and antioxidant effects of ursolic acid in isolated rat heart mitochondria / J. Liobikas, D. Majiene, S. Trumbeckaite et al. // Journal of natural products. - 2011. - Vol. 74, № 7. - Р. 1640-1644.