Направленный ангиогенез с использованием клеточных технологий в сочетании с лазерным туннелированием при хронической ишемии конечностей в эксперименте тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат медицинских наук Новрузов, Руслан Байрам оглы

• Новрузов, Руслан Байрам оглы
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Новрузов, Руслан Байрам оглы

СПИСОК ТЕРМИНОЛОГИЧЕСКИХ СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1 Современный взгляд на проблему хронической ишемии нижних конечностей.

1.2 Патоморфологические аспекты развития атеросклероза.

1.3 Основные направления хирургического и консервативного лечения хронической ишемии нижних конечностей.

1.4 Современные подходы в лечении хронической ишемии нижних конечностей.

1.5 Роль стволовых клеток в ангиогенезе.

1.6 Предшественники эндотелиальных клеток.

1.7 Молекулярные маркеры эндотелиальных клеток.

1.8 Ангиогенные факторы роста как предшественники ангиогенеза.

1.9 Лазеры в сердечно-сосудистой хирургии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общее описание проведенного исследования.

2.2. Методика выполнения модели хронической ишемии нижних конечностей.

2.3. Методика проведения экспериментальных исследований.

2.4. Исследование микроциркуляторного кровотока нижних конечностей методом лазерной доплеровской флоуметрии.

2.5. Методика морфологической оценки зон непрямой реваскуляризации

2.6. Методика оценки хоуминга мононуклеарной клеточной фракции методом включения 5-бромдезоксиуридина (ВгРЦ) в ядра.

2.7. Протокол окрашивания и инкубации клеток с ВгсЮ.

2.8. Методика забора и получения мононуклеарных костномозговых клеток и разделение её на фракции.

2.9. Диагностика клеточного материала.

2.10. Методика морфологической оценки экспериментальной ишемии.

2.11. Статистические методы исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Верификация экспериментальной "модели" хронической ишемии нижних конечностей.

3.2 Результаты лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ).

3.3 Результаты исследования прироста величины перфузии ишемизированной конечности по данным ЛД флуометрии.

3.4 Оценка хоуминга мононуклеарной клеточной фракции методом включения 5-бромдезоксиуридина (ВгБи) в ядра.

3.5 Индукция неоангиогенеза в ишемизированной конечности.

3.6 Сравнительный морфологический анализ результатов непрямой реваскуляризации.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Направленный ангиогенез с использованием клеточных технологий в сочетании с лазерным туннелированием при хронической ишемии конечностей в эксперименте»

Актуальность проблемы: Идея клеточной трансплантации для лечения хронической ишемии нижних конечностей (ХИНК) (прежде всего атеросклеротического и диабетического генеза) успешно реализуется последние 5 лет (Cho H-J et al., 2003). Эти исследования стали предпосылкой для продолжения работ по изучению неоваскуляризации с использованием «клеточных технологий». Разработке этой лечебной тактики способствовало развитие современных представлений о молекулярных и клеточных механизмах регуляции роста и ремоделирования кровеносных сосудов. Большое внимание в этом аспекте уделяется теоретическим и практическим разработкам использования клеток мононуклеарной фракции костного мозга (МНФ КМ). Это объясняется их уникальным свойством - пластичностью, т.е. способностью дифференцироваться в клетки практически всех мезенхимальных тканей. Проведен ряд исследований, в которых доказана возможность клеток костного мозга и других источников дифференцироваться в клетки других типов (нейроны головного и спинного мозга, гепатоциты, клеточные популяции поджелудочной железы, в том числе продуцирующие инсулин, эндотелиоциты, миобласты, остеоциты, хондроциты, эпителиоциты и др.), (Деев Р.В. и др., 2005; Волков А.В. и др., 2005; Chen J. et al., 2001; Arvidsson A. et al., 2002; Riess P. et al., 2002; Aliotta J. M. et al., 2007).

Хроническими облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей, по данным А.В. Покровского, страдает более 3% населения.

При этом количество больных с тяжелой ишемией пораженной конечности достаточно велико - 600-800 человек на 1 млн. жителей. Считается, что даже на фоне самого современного лечения около 25% больных с критической ишемией потребуется высокая ампутация, при которой смертность достигает

10-40%. Поскольку при критической ишемии особенно часто имеется дистальная форма поражения артериального русла, перспективы 5 традиционного хирургического вмешательства (эндартерэктомия, шунтирование), а также рентгенэндоваскулярной дезоблитерации сосудов у таких больных весьма ограниченны. И именно это и определяет стратегию лечения - восстановление кровотока в дистальных отделах пораженных конечностей.

Существует значительная группа больных, для которых выбор традиционных методов прямой реваскуляризации ограничен. Невозможность выполнения прямой реваскуляризации обусловлена не только возрастом и общим состоянием больных, сопутствующей патологией, но и многоэтажностью атеросклеротического поражения артерий, дистальными окклюзиями.

Несмотря на мощный арсенал современных фармакологических средств и хирургических методик, проблема лечения вышеуказанного контингента больных далека от решения. Хотя прямая реваскуляризация была, есть и будет в ближайшем будущем приоритетным методом лечения хронической ишемии нижних конечностей, наряду с ней одним из альтернативных путей лечения является использование непрямых методик стимуляции неоангиогенеза в поражённых конечностях, позволяющих избежать ампутации. Эти методы направлены на улучшение трофики конечности, и как следствие этого - увеличение объёма микроциркуляторного русла.

Таким образом, несмотря на мощный арсенал современных фармакологических средств и хирургических методик, проблема лечения вышеуказанного контингента больных далека от решения. Использование лазерных технологий для выполнения процедуры непрямой реваскуляризации нижних конечностей, широко распространено в настоящее время. Клинические и морфологические данные к настоящему времени показали, что для проведения процедуры лазерной реваскуляризации могут использоваться разные виды лазерных источников.

Именно эти предпосылки определили развитие альтернативных методов реваскуляризации нижних конечностей.

Решение перечисленных вопросов определяет актуальность настоящего исследования.

Цель исследования:

Изучить структурно-клеточные и функциональные изменения при клеточно-опосредованном и лазерно-индуцированном ангиогенезе в условиях хронической ишемии конечностей крыс.

Задачи исследования:

1. Дать морфо-функциональную оценку клеточно-опосредованного неоангиогенеза тканей бедра при имплантации мононуклеарной фракции клеток костного мозга.

2. Оценить морфо-функциональные изменения мышечных тканей в местах имплантации мононуклеарных клеток костного мозга в лазерные каналы.

3. Выявить особенности распределения мононуклеарных клеток при их имплантации в лазерные каналы и при инъекционном методе их введения в следующие постимплантационные периоды (6,12 и 24 часа).

4. Сопоставить структурно-клеточные и функциональные изменения, полученные при использовании лазерного туннелирования в сочетании с инъекцией костномозговых клеток и изолированной имплантации мононуклеарных клеток.

Научная новизна:

Впервые разработана в экспериментальных условиях методика имплантации костномозговых мононуклеарных клеток в лазерные каналы.

Проведен анализ непосредственных результатов и дана комплексная морфо7 функциональная оценка неоангиогенеза после комбинированного лазерно-индуцированного и клеточно-опосредованного неоангиогенеза на модели хронической ишемии конечностей крыс. Оценены отдаленные результаты комбинированного применения имплантации костномозговых мононуклеарных клеток в сочетании с лазерным туннелированием мышц конечностей. Проанализирована динамика изменения тканевого кровотока и степени ишемии конечностей при сочетанном применении лазерно-индуцированного и клеточно-опосредованного неоангиогенеза. Впервые при комплексной морфо-функциональной оценке проведен анализ ангиогенного потенциала методики лазерного туннелирования и имплантации костномозговых клеток и обоснована значимость данной методики в сердечно-сосудистой хирургии.

Теоретическая и практическая значимость:

Разработана в эксперименте методика имплантации костномозговых мононуклеарных клеточных культур и использовании полупроводникового лазера. Результаты работы позволяют сделать новый шаг по освоению метода лечения пациентов с хронической ишемией конечностей. Полученные в процессе экспериментального исследования результаты вносят существенный вклад в понимание роли эндотелиальных клеток-предшественников костномозгового происхождения в процессах васкуляризации ишемизированных областей скелетной мускулатуры, позволяют усовершенствовать метод непрямой реваскуляризации конечностей.

Основные положения выносимые на защиту:

1. Комбинация клеточно-опосредованного и лазер-индуцированного ангиогенеза обладает более выраженным ангиогенным потенциалом против изолированной имплантации мононуклеарных клеток костного мозга на модели ишемии конечностей.

2. Комбинированная морфо-функциональная оценка с использованием методов иммуногистохимического определения капиллярной сети на основе окрашивания СД31+ и лазерной доплеровской флуометрии адекватно отражает состояние микроциркуляторного русла.

Апробация материалов диссертации.

Основные материалы исследования доложены на VI научных чтениях, посвященных памяти академика РАМН Е.Н.Мешалкина, с международным участием (Новосибирск, 2008), на VII Международной конференции "Гемореология и микроциркуляция" (Ярославль, 2009), на заседании ученого совета Новосибирского научно-исследовательского института патологии кровообращения имени академика E.H. Мешалкина (Новосибирск, 2009), на заседании Ученого совета Новосибирского государственного медицинского университета (Новосибирск, 2012).

Публикации по теме диссертации.

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных научных работ, из них 3 статьи - в ведущих рецензируемых научных журналах, рекомендуемых для публикаций результатов диссертационных исследований.

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 108 страницах машинописного текста и содержит 4 таблицы и 17 рисунков, работа состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, главы результатов собственного исследования, заключения и обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Список использованной литературы содержит перечень 177 работ отечественных и зарубежных авторов. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Новрузов, Руслан Байрам оглы

Выводы:

1. Морфо-функциональный анализ ишемизированных конечностей, показал: запустевание сосудов микроциркуляторного русла, развитие периваскулярного и межмышечного склероза, уменьшение численной плотности С031 позитивных сосудов, а так же уменьшение показателей

85 кровотока: снижение индекса эффективности микроциркуляции и снижение показателей перфузии тканей.

2. Для клеточно-опосредованного ангиогенеза при имплантации мононуклеарной фракции костного мозга было характерным формирование сосудов микроциркуляторного русла с гиперхромным эндотелием, присутствием умеренного количества мононуклеарных клеток в местах имплантации, увеличение численной плотности СБЗ1 позитивных сосудов, а так же умеренным увеличением показателей кровотока по результатам лазерной допплеровской флоуметрии.

3. Комбинированный клеточно-опосредованный и лазерно-индуцированный ангиогенез морфологически проявляется формированием значительного количества хаотично ориентированных сосудов с гиперхромным эндотелием и элементами ангиоматоза, формированием сосудов синусоидного типа, присутствием значительного количества мононуклеарных клеток, достоверным увеличением численной плотности СБ31 позитивных сосудов, а также увеличением индекса эффективности микроциркуляции и показателей перфузии ткани.

4. Процентное соотношение имплантируемых ВгсШ-позитивных и негативных мононуклеарных клеток костного мозга остается неизменным в зонах инъекции как при имплантации клеток иглой, так и при введении клеток в лазерные каналы в изучаемые сроки - 6, 12 и 24 часа.

5. Сопоставление результатов комбинированного лазерно-индуцированного и клеточно-опосредованного ангиогенеза против изолированной инъекции мононуклеарных клеток костного мозга проявляется достоверно значимым увеличением сосудов СБ 31+ микроциркуляторно русла, а также функциональных показателей лазерной допплеровской флоуметрии, выявлен эффект улучшения микроциркуляции, наиболее выраженный функционированием активного механизма модуляции тканевого кровотока.

Рекомендации по использованию научных выводов:

1. Для улучшения перфузии конечностей следует применять комбинированный метод имплантация костномозговых мононуклеарных клеток костного мозга в сформированные лазерные каналы, так как при этом способе наблюдается наибольшая степень неоваскуляризации.

2. Мы рекомендуем методику непрямой комбинированной реваскуляризации конечностей с использованием мононуклеарной фракции костномозговых клеток и лазерного туннелирования для дальнейшего изучения эффективности методов непрямой реваскуляризаци.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Новрузов, Руслан Байрам оглы, 2012 год

1. Афонин Д.Н., Лебедев Л.В. Малые ампутации при ишемии нижних конечностей. Проблемы клинической ангиологии и сосудистой хирургии. // Сборник научных работ. -Иркутск. -1999/2000. -С.15-18.

2. Беликов A.B., Скрипник A.B. Лазерные биомедицинские технологии (часть 1).// Учебное пособие.-Санкт-Петербург. -2008.

3. Бокерия Л.А., Гудкова Р.Г. // Хирургия сердца и сосудов в Российской федерации. Москва. -1998; -С 43.

4. Бурлева Е.П. Значение клинико-эпидемиологического и экономического анализа для организации помощи пациентам с хронической артериальной недостаточностью нижних конечностей. // Ангиология и сосудистая хирургия . -2002. -Т.8. -№4. -С. 15-20.

5. Бурлева Е.П. Критическая ишемия нижних конечностей: современные клинические и управленческие подходы. // Дисс. . доктора мед. наук.-Москва. -2003.

6. Бурлева Е.П., Смирнов O.A. Размышления по поводу критической ишемии конечностей. // Ангиология и сосудистая хирургия. 1999. -Том 5 — №1. -С. 17-21.

7. Волков A.B. Пластичность стволовых клеток костного мозга: участие Flk-1+ клеток в химеризации кожи и в дифференцировке // Клеточная трансплантология и тканевая инженерияю 2005.-№1.-С. 11-13.

8. Габбасов З.А., Соболева Э.Л. Стволовые клетки костного мозга и их участие в атерогенезе человека. // Клиническая геронтология. -2005. —Т. 11.— №10. -С 3-7.

9. Гавриленко A.B., Кохан Е.П., Абрамян A.B. и др. Применение поясничной симпатэктомии в лечении облитерирующий заболеваний артерий нижних конечностей современный взгляд на проблему. // Ангиология и сосудистая хирургия. -2004. -№3. -С.90-95.

10. Гавриленко A.B., Омаржанов O.A. Выбор метода хирургического лечения при критической ишемии нижних конечностей. // Хирургия. Журнал им. Н.И. Пирогова. 11. -2006. С.8.

11. Генык С.Н., Крыса В.М., Гудз И.М., Пыптюк A.B. Методический подход к лечению критической ишемии нижних конечностей. // Грудная и сердечно-сосудистая хирургия. -1996. -№6. -С.323.

12. Герасимов В.Б. , Авксентьева М.В., Воробьев П.А., Баркаган З.С.,89

13. Деркач Е.В„ Фисенко В.П. Фармакоэкономика Вазапростана при критической ишемии нижних конечностей. // Ангиология и сосудистая хирургия . -2001. -Т.7. -№3. -С.21-27.

14. Голованева Е.С., Козель А.И., Попов Г.К. Патофизиологический механизм реваскуляризации тканей с помощью воздействия высокоинтенсивного лазерного излучения. // Вестник Российской академии медицинских наук. Москва. 2003. - №6. -С.23-26.

15. Давыденко В.В., Мачс В.М. Стимулированный ангиогенез- новое направление в лечении при ишемических состояниях. // Вестник хирургии.-2000. -Т.159. -№1. С.117- 120.

16. Деев Р.В., Берсенев A.B. Роль стволовых стромальных (мезенхимальных) клеток в формировании гетеротопических оссификатов // Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. -2005. № 1. - С. 46-48.

17. Демидова O.A. Комбинированное лечение хронической ишемии нижних конечностей с использованием стимулятора ангиогенеза. // Дисс. . кандидата мед. наук. Москва. - 2005.

18. Дерлеменко Л.И. К динамике температурных изменений в тканях при лазерном облучении. // Биофизика. 1978. - №23. - С.556- 557.

19. Диверт В.Э. Импульсная активность в кожных афферентных волокнах крысы при сочетанном воздействии локальной температуры и давления. // Бюллетень СО РАМН №4. С. 110.

20. Зусманович Ф.Н. Реваскуляризирующая остеотрепанация в лечении хронической критической ишемии конечностей. // Хирургия. 1999. -№4. -С. 10-12.

21. Казьмин З.В. Комплексное хирургическое и консервативное лечение хронической критической ишемии при отсутствии условий прямой реваскуляризации нижних конечностей. // Дисс. . кандидата мед. наук.-Москва. -2006

22. Каримов 3.3. Хирургическое лечение окклюзий бедренно-подколенно-берцового сегменте при критической ишемии. // Ангиология и сосудистая хирургия . -2001. -Т.7. -№2.С.82-85.

23. Козлов В.И. Механизм модуляции кровотока в системе микроциркуляции и его расстройство при гипертонической болезни. // Материалы II Всероссийского симпозиума «Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике».Москва. -2000, -С. 515.

24. Королев В.Н. Оптимизация результатов хирургического леченияпатологии периферических артерий путем использования дистанционной91гамма-терапии. // Автореферат дисс. . кандидата мед. наук. -Новосибирск. 2003.

25. Кротовский Г.С., Зудин A.M. // Тактика лечения пациентов с критической ишемией нижних конечностей. Москва. -2005.

26. Ларионов П.М., Чернявский A.M., Боярских У.А. и др. Различные варианты непрямой реваскуляризации миокарда с использованием аутологичных стволовых клеток // Медицинская консультация. 2004. -№ 45. -С.2-6.

27. Лосев Р.З., Буров Ю.А., Москаленко А.Н. и др. Хирургическое лечение больных с критической ишемией нижних конечностей атеросклеротического генеза. // Вестник хирургии. -1999. -№4. -С.42^14.

28. Лосев Р.З., Буров Ю.А., Москаленко А.Н. и др. Хирургическое лечение больных с критической ишемией нижних конечностей атеросклеротического генеза. // Вестник хирургии. -1999. -№4. -С.42-44

29. Малайцев В.В., Богданова И.М., Сухих Г.Т. Современные представления о биологии стволовой клетки. // Архив патологии-2002-№4 С.7-12

30. Петухов Е.Б., Кошкин В.М., Вагнер Т.Е. Квантовая гемотерапия при поздних стадиях хронической артериальной недостаточности. // Клиническая хирургия. -1985. -№7.С.43-45.

31. Плетнев С.Д. Лазеры в клинической медицине. // Руководство. -Москва, Медицина, 1996

32. Плетнев С.Д., Девятков Н.Д., Беляев В.П. // Газовые лазеры в экспериментальной и клинической онкологии. Москва, Медицина. -1978. -С.184.

33. Покровский A.B., Дан В.Н., Сапелкин C.B., Перисаев Г.А. Аспирин или оральные антикоагулянты после реконструктивных сосудистых операций на артериях нижних конечностей: что лучше? // Ангиология и сосудистая хирургия. 2004. -Т. 10. -№1. - С. 12-16.

34. Покровский A.B., Дан В.Н., Чупин A.B., Хоровец А.Г. Артериализация венозной системы стопы в лечении критической ишемии нижней конечности при окклюзии дистального артериального русла. // Ангиология и сосудистая хирургия. 1996. -Т. 4. -С. 73.

35. Покровский A.B., Кияшко В.А. Клиническая ангиология на пороге XXI века. // Российский медицинский журнал. 1999. -№ 3. - С. 3-7

36. Покровский A.B., Кошкин В.М., Кириченко A.A. и др. Вазапростан (простагландин El) в лечении тяжелых стадий артериальной недостаточности нижних конечностей. // Пособие для врачей. -Москва, -1999.

37. Савельев B.C., Кошкин В.М. // Критическая ишемия нижних конечностей. Москва, Медицина. -1997. - С. 11-80.

38. Сергеевичев Д.С. Морфологический и молекулярный аналих ангиогенеза при моделировании ишемии и реваскуляризации миокарда. // Автореф. дис. кандидата мед. наук. Новосибирск. -2009. -С. 21

39. Фокин A.A., Козель А.И., Конов О.И. и др. Средства оценки реваскуляризирующей возможности высокоинтенсивного лазерного излучения в процессе эксперимента на животных. // Лазерные технологии в медицине. -Челябинск. -1998. -Вып.1. -С.39-43.

40. Хамитов Ф.Ф., Брискин Б.С., Лисицкий Д.А., Чельдиев К.В. Consilium medicum. // Хирургия. 2008. -N 1. -С.70-74

41. Царев O.A. Хирургическое лечение больных облитерирующим атеросклерозом аорты и периферических артерий с использованием низкоинтенсивного лазерного излучения. // Автореферат дисс. .доктора мед. наук. -Саратов. -1999.

42. Швальб П.Г., Пешкин П.Г., Мартынов А.И. и др. Рентгеноваскулярная реваскуляризация. Москва, Медицина. - 1987. -С. 23-24

43. Шевцов В.И., Бунов B.C., Гордиевских Н.И. Влияние туннелизации на давление в полости большеберцовой кости при артериальной недостаточности в конечности. // Вестник хирургии. 1999. -№6. - С.43-46

44. Шевченко Ю.Л., Матвеев С.А. // Клеточные технологии в сердечно сосудистой хирургии. Москва, Медицина. - 2005.

45. Шумаков В.И., Онищенко Н.А., Гуреев С.В., Темнов А.А., Остроумов Е.Н., Васильев К.Н., Сухачев А.А., Никольская А.О., Шумаков Д.В. Клеточная трансплантация. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. -2006. -№4. -С. 94-102.

46. Amento E.P., Ehsani N., Palmer H., Libby P. (1991) Cytokines and growth factors positively and negatively regulate interstitial collagen gene expression in human vascular smooth muscle cells. // Arterioscler. Thromb.-Vol.l 1(5) -P.1223-1230.

47. Aqel N.M., Ball R.Y.,Waldmann H., Mitchinson M.J. Monocytic origin of foam cells in human atherosclerotic plaques.//Atherosclerosis, 1984, Vol.53. 265-271

48. Arvidsson A, Collin T, Kirik D, Kokaia Z, Lindvall O. Neuronal replacement from endogenous precursors in the adult brain after stroke. // Nat Med. 2002 Vol.8(9). -P. 928-930.

49. Asahara Т., Murohara Т., Sullivan A., Silver M., Van der Zee R., Li Т., Witzenbichler В., Schatteman G., Isner J.M. Isolation of putative progenitor cells for angiogenesis. // Science 275. -P. 964-967t

50. Aulivola B.Hile CN, Hamdan AD, Sheahan MG, Veraldi JR, Skillman JJ, Campbell DR, Scovell SD, LoGerfo FW, Pomposelli FB Jr. Major lower extremity amputation: outcome of a modern series. // Arch Surg. 2004. -Vol. 139(4). -P. 395-9; discussion 399.

51. Balzer K, Rogatti W., Ruttqerodt K. Efficacy and tolerability of intra-arterial and intravenous prostaglandin El infusions in occlusive arterial disease stage III/IV. // Vasa Suppl. -1989. Vol.28. -P. 31-38

52. Bavendiek U., Libby P., Kilbride M. et al. (2002) Induction of tissue factor expression in human endothelial cells by CD40 ligand is mediated via activator protein 1, nuclear factor kappa B, and Egr-1. // J. Biol. Chem., Vol.277(28) . -P. 25032-25039.

53. Beg A.A, Baltimore D. An essential role for NF-kappaB in preventing TNF-alpha-induced cell death. // Science. 1996. - Vol.274. . -P. 782-784.

54. Chen J., Sanberg P.R., Li Y. et al. Intravenous administration of human umbilical cord blood reduces behavioral deficits after stroke in rats // Stroke. -2001. Vol. 32. -P. 2682-2688.

55. Chen X, Li Y, Wang L, Katakowski M, Zhang L, Chen J, Xu Y, Gautam SC, Chopp M. Ischemic rat brain extracts induce human marrow stromal cell growth factor production. Neuropathology. 2002 Dec;22(4):275-9

56. Croce K., Libby P. (2007) Intertwining of thrombosis and inflammation in atherosclerosis. // Curr. Opin. Hematol., 14(1) . -P. 55-61

57. Cybulsky M.I., Gimbrone M.A. Jr (1991) Endothelial expression of a mononuclear leukocyte adhesion molecule during atherogenesis. // Science. 1991. -Vol.251(4995). -P. 788-791.

58. Cybulsky M.I., Iiyama K., Li H. et al. (2001) A major role for VCAM-1, butnot ICAM-1, in early atherosclerosis. // J. Clin. Invest., -Vol. 107(10). -P. 125595

59. Degischer S., Labs K.H., Hohstrasser J., Aschwanden M., Tschoepl M., Jaeger K.A. Physical training for intermittent claudication: a comparison of structured rehabilitation versus home-based training. // Vase. Med.-2002-Vol.7(2). -P. 109-115.

60. Dormandy J., Mahir M., Ascady G., Balsano F., De Leeuw P., Blombery P., Bousser M.G., Clement D., Coffman J., Deutshinoff A., et al., Fate of the patient with chronic leg ischaemia. // J. Cardiovascular Surgery. -1989. -30 (1). -P.50-57.

61. Duan J., Murohara T. et.al. Hyperholesterolemia inhibitis angiogenesis in response to hindlimb ischemia. // Circulation. -2000. -Vol. 102. -P. 370-376.

62. Esato K., Hamano K., Li T.S., Furutani A., Seyama A., Takenaka H., Zempo N. Neovascularization induced by autologous bone marrow cell implantation in peripheral arterial disease. //Cell Transplant. 2002. -Vol. 11(8). -P.747-52.

63. Ferrara N. Vascular endothelial growth factor: molecular and biological aspects // Curr. Top. Microbiol. Immunol. -1999. Vol. 237. -P.l-30.

64. Folkman J. Therapeutic angiogenesis in ischemic limb. // Ibid. -1998. -Vol. 97.-P. 1108-1110.

65. Folkman J., Klagsburn M. Angiogenetic factors. // Science. -1987. -Vol.235., №4787. -P. 442-447.

66. Fong G.H., Klingensmith J., Wood C.R. Regulation of flt-1 expression during mouse embryogenesis suggests a role in the establishment of vascular endothelium. // Dev. Dyn. -1996. -Vol.207. -P. 1-10.

67. Fuchs JSA. Atherogenesis and the medical management of Atherosclerosis. // Vascular surgery. Philadelphia: W.B. Saunders Company. -1996.-Vol.l -P.222-235.

68. Gerety S. S., Wang H. U., Chen Z. F. et al. Symmetrical mutant phenotypes96of the receptor EphB4 and its specific transmembrane ligand ephrin-B2 in cardiovascular development // Mol. Cell. 1999. - Vol. 4. - P. 403-414.

69. Gerhard J. Muller, Brita Schaladach. Воздействие лазера на ткани при трансмиокардиальной реваскуляризации. // Лазерная медицина. 1998., Т. №2., Выпуск 1.-С. 4-8.

70. Godin I.E, Garcia-Porrero J.A., Dieterlen-Lievre F. Stem cell emergence and hemopoietic activity are incompatible in mouse intraembryonic sites. // J. Experimental Medicine. 1999. - vol.190. -P. 43-52.

71. Godin I.E., Garcia-Porrero J.A., Coutinho A.Para-aortic splanchnopleura from early mouse embryos contains В la cell progenitors. // Nature. 1993. - Vol. 364. -P. 67-70.

72. Grayston J.T. Background and current knowledge of Chlamydia pneumoniae and atherosclerosis. // J Infect Disease. 2000.-Vol.l81(3). -P. 402-410

73. Haimovici H. Matas Lecture. The early pioneers in vascular surgery and their legacy. // J Cardiovasc Surg (Torino).1984 -Vol.25(4).-P. 275-86.

74. Hardy R.I., Bove K.E., James F.W., Kaplan S., Goldman L. A histologic study of laser-induced transmyocardial channels. //Lasers. Surg. Med. -1987-Vol. 6. .-P. 563-573.

75. Helisch A., Ware A. // Thrombosis Haemostasis. 1999. 82.-P. 772-780.

76. Herzog Y., Kalcheim C., Kahane N. et al. Differential expression of neuropilin-1 and neuropilin-2 in arteries and veins // Mech. Dev. 2001. - Vol. 109. - P. 115-119.

77. Ho T.K., Rajkumar V., Black D.C., Abraham D., Baker D. Critical Limb Ischemia Classification and Therapeutic Angiogenesis. // International Journal of Angiology 2005.-Vol.14.-P. 49-59

78. Iba O, Matsubara H., Nozawa Y., Fujiyama S., Amano K., Mori Y., Kojima H., Iwasaka T. Angiogenesis is by implantation of peripheral blood mononuclear cells and platelets into ischemic limbs. // Circulation. 2002:8; 106(15) .-P. 2019-25

79. Jansen E.D., Frenz M., Kadipasaoglu K.A. et al. Laser-tissue interaction during transmyocardial laser revascularization. // Ann. Thorac. Surg. -1997. -Vol. 63. .-P. 640-647.

80. Jongstra-Bilen J., Haidari M., Zhu S.N. et al. (2006) Low-grade chronic inflammation in regions of the normal mouse arterial intima predisposed to atherosclerosis. // J. Exp. Med. .-Vol.203(9) .-P. 2073-2083

81. Kabrun N., Buhring H.J., Choi K. Flk-1 expression defines a population of early embryonic hematopoietic precursors. // Development. 1997.-Vol.124. -P. 2039-2048.

82. Kalra M, Gloviczki P, Bower TC, Panneton JM, Harmsen WS, Jenkins GD, Stanson AW, Toomey BJ, Canton LG. Limb salvage after successful pedal bypass grafting is associated with improved long-term survival. // J.Vasc.Surg. 2001. .Vol.33 (1) .-P. 6-16.

83. Kamihata H., Matsubara H., Nishiue T. et al. Implantation of bone marrowmononuclear cells into ischemic myocardium enhances collateral perfusion andregional function via side supply of angioblasts, angiogenic ligands, and cytokines.98

84. Circulation.-2001.-Vol. 104-P. 1046-1052.

85. Kaski J.C., Zouridakis E.G. Inflammation, infection and acute coronary plaque events. //Eur Heart J. 2001.-Vol.3(I) .-P. 10-15.,

86. Kohmoto T., De Rosa C.M., Yamamoto N. Evidence of vascular growth associated with laser treatment of normal canine myocardium. // Ann Thorac Surg. 1998. -Vol.65.-P. 1360-1367.

87. Krause D.S. Plasticity of marrow-derived stem cells. // Gene Ther. 2002-Vol.9.-P. 754-758.

88. Kroger K, Stang A, Kondratieva J, Moebus S, Beck E, Schmermund A,Mohlenkamp S, Dragano N, Siegrist J, Jockel KH, Erbel R. Prevalence of peripheral arterial disease—results of the Heinz Nixdorf recall study. // Eur J Epidemiol 2006.-Vol.21.-P. 279-285

89. Kullander K. and Klein R. Mechanisms and functions of Eph and ephrin signalling // Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 2002. - Vol. 3. - P. 475 - 486.

90. Kvernmo H.D., Stefanovska A., Kirkeboen K.A., Kvernebo K. // Oscillations in the human cutaneous blood perfusion signal modified by endothelium-dependent and endothelium-independent vasodilators. // Microvasc. Res. 1999. .-Vol.57. № 3.-P. 298-309

91. Lagasse E.N., Connors H.A., Al-Dhalimy M.L. Purified hematopoietic stem cells can differentiate into hepatocytes in vivo. // Nat. Med. -2000. -Vol. 6. -P. 1229-1234.

92. Lawson N. D., Scheer N., Pham V. N. et al. Notch signaling is required for arterial-venous differentiation during embryonic vascular development // Development.-2001.-Vol.128.-P. 3675-3683.

93. Libby P. Current concepts of the pathogenesis of the acute coronary syndromes. // Circulation. -2001.-Vol. 104(3) .-P. 365-372

94. Libby P., Aikawa M. Stabilization of atherosclerotic plaques: new mechanisms and clinical targets. //Nat. Med.-2002-Vol 8(11) -P. 1257-1262.

95. Libby P., Simon D.I. Inflammation and thrombosis: the clot thickens. // Circulation. -2001.-Vol. 103(13): 1718-1720.

96. Libby P., Theroux P. (2005) Pathophysiology of coronary artery disease. // Circulation.-2005.-Vol 111(25): 3481-3488.

97. Mach F., Schonbeck U., Bonnefoy J.Y. et al. (1997) Activation of monocyte/macrophage functions related to acute atheroma complication by ligation of CD40: induction of collagenase, stromelysin, and tissue factor. // Circulation. .-Vol 96(2): 396-399

98. Mach F., Schonbeck U., Sukhova G.K. et al. (1998) Reduction of atherosclerosis in mice by inhibition of CD40 signalling. // Nature.-Vol 394(6689) .-P. 200-203.

99. Managment of Peripheral Arterial Disease. TransAtlantic Inter-Society Consensus. I I Eur. J. Vase. Endovasc. Surg. 2000 -Vol 19 (Suppl.A)

100. Markus H.S., Ruigrok Y., Ali N., Powell J.F. Endothelial nitric oxidesynthase exon 7 polymorphism, ischemic cerebrovascular disease, and carotid atheroma. // Stroke. 1998.-Vol 29(9) .-P. 1908-11

101. Marshak D.R., Gardner R.L., Gottlieb D. // Stem cell biology. 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, -P. 550

102. Maseri A., Cianflone D. Inflammation in acute coronary syndromes. // Eur Heart J. 2002-Vol 4(B) .-P. 8-13

103. Mason D.P., Kenagy R.D., Hasenstab D. et al. (1999) Matrix metalloproteinase-9 overexpression enhances vascular smooth muscle cell migration and alters remodeling in the injured rat carotid artery. // Circ. Res.-Vol 85(12) .-P. 1179-1185

104. Maximow A. Der Lymphozyt als gemeinsame Stammzelle der verschiedenen Blutelemente in der embryonalen Entwicklung und im postfetalen Leben der Säugetiere. // Folia Haematol (Leipz). I909.-Vol.8.-P. 125-141

105. Medvinsky A.L., Samoylina N.L., Müller A.M.An early preliver intra-embryonic source of CFU-S in the developing mouse. // Nature. 1993. vol. 364. - p. 64-67

106. Michael Simons, J. Anthony Ware. Therapeutic angiogenesis in cardiovascular disease. Nature Reviews Drug Discovery. -2003., 2, №11, -P. 863872.

107. Morishige K., Shimokawa H., Matsumoto Y. et al. (2003) Overexpression of matrix metalloproteinase-9 promotes intravascular thrombus formation in porcine coronary arteries in vivo. // Cardiovasc. Res. -Vol.57(2) -P. 572-585

108. Moulton K.S., Vakili K., Zurakowski D. etal. (2003) Inhibition of plaque neovascularization reduces macrophage accumulation and progression of advanced atherosclerosis. //Proc. Natl. Acad. Sei. USA.-Vol. 100(8) .-P. 4736-4741.

109. Müller A.M., Medvinsky A.L, Strouboulis J. Development of hematopoieticstem cell activity in the mouse embryo. // Immunity. 1994. -Vol.1. -P. 291—101

110. Murohara T., Ikeda H., Duan J., Shintani S., Sasaki K., Eguchi H., Onitsuka I., Matsui K., Imaizumi T. Transplanted cord blood-derived endothelial precursor cells augment postnatal neovascularization. // J Clin Invest 2000-Vol. 105(11) -P. 1527-1536

111. Murray P.D.F. The development in vitro of the blood of the early chick embryo. //Proc. Roy. Soc. 1932. -Vol.111. -P. 497-521.

112. Naghavi M., Libby P., Falk E. et al. (2003) From vulnerable plaque to vulnerable patient: a call for new definitions and risk assessment strategies: Part I. // Circulation, 108(14) .-P. 1664-1672.

113. Neri Serneri G.G., Prisco D., Martini F., et al. Acute T-cell activation is detectable in unstable angina. // Circulation. 1997. -Vol.95.-P. 1806-1812

114. Norgren L, Hiatt WR, Dormandy JA, Nehler MR, Harris KA, Fowkes FGR. Inter-Society Consensus for the Management of Peripheral Arterial Disease (TASC II). // J Vase Surg 2007. -Vol.45.-P. 65-67.

115. Orlic D., Kajstura J., Chimenti S., Jakoniuk I., Anderson S.M., Li B., Pickel J., McKay R., Nadal-Ginard B., Bodine D.M., Leri A., Anversa P. Bone marrow cells regenerate infarcted myocardium. // Nature 2001; 410 (6829) .-P. 701-705.

116. Ozerdem U., Alitalo K., Salven P., Li A.Contribution of bone marrow-derived pericyte precursor cells to corneal vasculogenesis. // Invest Ophthalmol Vis. Sei. 2005. -Vol.46(10) .-P. 3502-3506.

117. Pelosi E., Valtieri M., Coppola S., Bocta R., Gabbianelli M., Lulli V., Varziali G., Masella B., Muller R., Scadari C., Testa U., Bonaneo G., Peschle C. Identification of the hemangioblast in postnatal life. // Blood 2002. -Vol.100: 3203-3208

118. Pesce M., Orlandi A., Iachininoto M.G., Straino S., Torella A.R., Rizzuti V.,102

119. Pompilio G., Bonanno G., Scambia G., Capogrossi M.C. Myoendothelial differentiation of human umbilical cord blood-derived stem cells in ischemic limb tissues. // Circ Res 2003. -Vol.93; 5.-P. 51-62

120. Prockop D.G. Marrow Stromal Cells as Stem Cells for Nonhematopoietic Tissues. // Science -1997. -Vol. 276. -P. 1634-1642.

121. Raines E.W., Ferri N. (2005) Thematic review series: The immune system and atherogenesis. Cytokines affecting endothelial and smooth muscle cells in vascular disease. // J. Lipid. Res., 46(6) -P. 1081-1092

122. Riess P., Zhang C., Saatman K. et al. Transplanted neural stem cells survive, differentiate, and improve neurological motor function after experimental traumatic brain injury //Neurosurg-2000 Vol.51. -P. 1043-1054.

123. Robbins M., Topol E.J. Inflammation in acute coronary syndromes. Acutecoronary syndromes // E.J. Topol. 2nd ed., revised and expanded. N.Y.Marcel Dekker Inc., 2001. -P. 1-31.

124. Ross R. The pathogenesis of atherosclerosis an update.N. Engl. // J. Med., 1986,314.-P.489-500

125. Ross R., Harker L. Hyperlipidemia and atherosclerosis. // Science, 1976, 193.-P. 1094-1100.

126. Saikku P., Mattila K. Niemien M., et al. Serological evidence of an association of a novel Chlamydia, TWAR, with chronic coronary heart disease and acute myocardial infarction. //Lancet. 1998;2. -P. 983-986.

127. Schonbeck U., Sukhova G.K., Shimizu K. et al. (2000) Inhibition of CD40 signaling limits evolution of established atherosclerosis in mice. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97(13). -P.7458-7463

128. Selvin E, Erlinger TP.// Prevalence of and risk factors for peripheral arterialdisease in the United States: National Health and Nutrition Examination Survey,1031999-2000. // Circulation. 2004. Vol. 110. -P.738-740.

129. Shintani S, Murohara T., Ikeda H., Ueno T., Sasaki K., Duan J., Imaizumi T. Augmentation of postnatal neovascularization with autologous bone marrow transplantation. // Circulation 2001:13; 103(6) . -P.897-903.

130. Spanier T., Smith C.R., Burkhoff D. Angiogenesis: a possible mechanism underlying the clinical benefits of transmyocardial laser revascularization. // J. Clin Laser Med Surg. (6) 1997. -P. 269-273.

131. Sukhova G.K., Schonbeck U., Rabkin E. et al. (1999) Evidence for increased collagenolysis by interstitial collagenases-1 and -3 in vulnerable human atheromatous plaques. // Circulation, 99(19). -P. 2503-2509.

132. Till L.E., McCulloch E.A. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells. // Rad. Res. 1961; 14. -P.213-222.

133. Tomita M., Adachi Y., Yamada T. et al. Bone marrow-derived stem cells can differentiate into retinal cells in injured rat retina. // Stem cell -2002. -Vol. 20. -P. 279-283.

134. Villa N., Walker L., Lindsell C. E. et al. Vascular expression of Notch pathway receptors and ligands is restricted to arterial vessels // Mech. Dev. 2001. -Vol. 108.-P. 161-164.

135. Walter D. H., Dimmeler S. Endothelial Progenitor Cells: Regulation and Contribution to Adult Neovascularization // Herz. 2002. vol. 27. -P.579-88.

136. Wang H. U., Chen Z. F. and Anderson D. J. Molecular distinction and104angiogenic interaction between embryonic arteries and veins revealed by ephrin-B2 and its receptor Eph-B4 // Cell. 1998. - Vol. 93. - P. 741-753.

137. Whitlow P.L, Knopf W.D., O'Neill W.W., Kaul U., Londero H., Shawl F.A. Percutaneous transmyocardial revascularization in patients with refractory angina. // Circulation. -1998. -Vol. 98. -Suppl. 1. -P.87.

138. Yamashita J., Itoh H., Hirashima M. Flkl-positive cells derived from embryonic stem cells serve as vascular progenitors // Nature. 2000. vol. 408. -P.92-96.

139. Yannaki E., Papayannopoulou T. Stem cell have an identity crisis // Haema.- 2001.vol.4, №3. p.158-166.

140. Yin Y., Que J., Teh M. Embryonic Cell Lines with Endothelial Potential: An In Vitro System for Studying Endothelial Differentiation // Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 2004. vol. 24. . -P.691.

141. Young P.E., Baumhueter S., and Lasky L.A. The sialomucin CD34 is expressed on hematopoietic cells and blood vessels during murine development. // Blood.- 1995. vol. 85.-P.96-105.

142. Zhong T. P., Childs S., Leu J. P. et al. Gridlock signalling pathway fashions the first embryonic artery // Nature. 2001. - Vol. 414. - P. 216-220.

143. Ziegelhoeffer T, Fernandez B, Kostin S, Heil M, Voswinckel R, Helisch A, Schaper W. Bone marrow-derived cells do not incorporate into the adult growing vasculature. // Circ Res 2004. Vol.94. -P. 230-238

144. Anggard E. Nitric oxide: mediator, murderer, and medicine. //Lancet. 1994.- Vol.343(8907). -P.l 199-1206