Мультиклеточные опухолевые сфероиды в микрокапсулах как 3D модель in vitro для изучения эффекта фотодинамической терапии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Зайцева-Зотова, Дарья Сергеевна

• Зайцева-Зотова, Дарья Сергеевна
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Зайцева-Зотова, Дарья Сергеевна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Фотодинамическая терапия

1.1.1. Механизмы деструкции раковой клетки при ФДТ

1.1.2. Параметры светового воздействия при фотодинамической терапии

1.1.3. Фотосенсибилизаторы

1.2. Модели раковых опухолей

1.2.1. Модели раковых опухолей in vitro

1.2.2. Мулътиклеточные опухолевые сфероиды

1.2.2.1. Строение сфероидов, некроз и гипоксия

1.2.2.2. Сфероиды для исследования фотодинамической терапии

1.2.2.2.1. Фундаментальные исследования фотодинамического воздействия

1.2.2.2.2. Оптимизация уровня светового воздействия

1.2.2.2.3. Многоэтапная фотодинамическая терапия

1.2.2.2.4. Комбинированная терапия

1.2.2.2.5. Инвазия

1.2.2.2.6. Ангиогенез

1.2.2.2.7. Математическое моделирование

1.2.2.2.8. Заключение

1.2.2.3. Методы получения сфероидов

1.3. МИКРОКАПСУЛИРОВАНИЕ ЖИВОТНЫХ КЛЕТОК

1.3.1. Полиэлектролитные микрокапсулы для иммобилизации теток

1.3.2. Основные требования предъявляемые к микрокапсулам

1.3.3. Полиэлектролиты для получения микрокапсул

1.3.3.1. Полианионы

1.3.3.2. Поликатионы

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.2. ЛАБОРАТОРНОЕ ОБОРУДОВАНИЕ

2.3. Методы исследования

2.3.1. Оптимизация методов формирования полиэлектролитных микрокапсул

2.3.1.1. Получение микрогранул на основе альгината кальция

2.3.1.2. Получение полиэлектролитных микрокапсул из микрогранул

2.3.2. Методы работы с культурами клеток

2.3.3. Исследование цитотоксичности модифицированных декстранов

2.3.4. Исследование агрегации клеток в присутствии пептида сус1о-1ЮВ/К

2.3.5. Формирование сфероидов в микрокапсулах

2.3.5.1. Стерилизация растворов для микрокапсулирования

2.3.5.2. Микрокапсулирование клеточных культур

2.3.5.3. Формирование сфероидов из заранее полученных агрегатов МЗ

2.3.5.4. Культивирование микрокапсулированных клеток

3

2.3.6. Исследование фотодинамического воздействия на сфероидах

2.3.6.1. Получение микрочастиц с включенным ФС®

2.3.6.2. Исследование проницаемости микрокапсул для фотосенсибилизаторов

2.3.6.3. Темновая цитотоксичность фотосенсибилизаторов

2.3.6.4. Фотоцитотоксичность фотосенсибилизаторов

2.3.6.5. Исследование эффекта фотодинамического воздействия с использованием ФС®-микрочастиц на мультиклеточные сфероиды

2.3.6.6. Гистологическое исследование сфероидов после фотодинамического воздействия

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выбор полимеров для формирования полиэлектролитных микрокапсул

3.2. Исследование цитотоксичности выбранных полиэлектролитов

3.3. Оптимизация метода формирования микрокапсул

3.3.1. Оптимизация параметров формирования микрогранул

3.3.1.1. Получение микрогранул с помощью прибора с коаксиальной подачей сжатого воздуха (метод 1)

3.3.1.2. Получение микрогранул с помощью электростатического генератора микрочастиц (метод 2)

3.3.2. Определение оптимальных условий формирования микрокапсул

3.3.3. Характеристика полученных полиэлектролитных микрокапсул

3.4. Получение микрокапсулированных мультиклеточных опухолевых

сфероидов

4

3.4.1. Формирование мулыпиклеточных опухолевых сфероидов в микрокапсулах

3.4.2. Получение сфероидов из микрокапсулированных агрегатов клеток

3.5. Исследование фотодинамического воздействия фотосенсибилизаторов Хлорина е6 и Фотосенса® на микрокапсулированные сфероиды

3.5.1. Проницаемость микрокапсул для Себ и ФС®

3.5.2. «Темновая» цитотоксичностъ фотосенсибилизаторов

3.5.3. Изучения эффекта воздействия лазерного облучения на сфероиды

3.5.4. Фотоцитотоксичность фотосенсибилизаторов Себ и ФС®

3.3.5. Изучение эффекта фотодинамического воздействия с использованием ФС®-микрочастиц на мулътиклеточные сфероиды

3.5.6. Гистологическое исследование образцов сфероидов после ФДТ

ВЫВОДЫ

БЛАГОДАРНОСТИ

ЛИТЕРАТУРА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ПВС - поливиниловый спирт

Хит^-ПВС N - графт-сополимер хитозана с ПВС, N - номер образца

МД - модифицированный декстран

ША^ - альгинат натрия

СаА^ - альгинат кальция

МОС - мультиклеточные опухолевые сфероиды

РБ - фтосенсибилизатор

ФДТ - фотодинамическая терапия

Себ - Хлорин еб

ФС® - Фотосенс®

ЭДТА - Этилендиамин КДЧД'ДЧ'-тетрауксусной кислоты динатриевая соль

РВБ - эмбриональная телячья сыворотка

2Б и ЗБ - двумерные и трехмерные

ЭГМ - электростаический генератор микрочастиц

АЛК - 5-аминолевулиновая кислота

АФК - активные формы кислорода

ХАО - хориоаллантоисная оболочка

ИПК - интерполиэлектролитный комплекс

МТТ - 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенил тетразолий бромид

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мультиклеточные опухолевые сфероиды в микрокапсулах как 3D модель in vitro для изучения эффекта фотодинамической терапии»

ВВЕДЕНИЕ

В настоящее время стремительно развиваются фундаментальные и прикладные исследования, направленные на создание новых противораковых лекарств и систем их доставки, а также совершенствование методов лечения рака, в том числе фотодинамической терапии (ФДТ). Тестирование новых соединений с противораковой активностью проводится на моделях раковых опухолей, таких как спонтанные, перевиваемые и индуцированные опухоли животных, опухоли человека, перевитые животным, различные культуры клеток опухолей человека и животных, а также молекулярно-генетические модели. В связи с расширением спектра исследуемых соединений и ужесточением требований к работе с экспериментальными животными особое значение приобретают модели in vitro на основе клеточных культур. Классическими моделями in vitro являются суспензионная и монослойная культуры. Однако очевидно, что в таких условиях клетки не могут достаточно полно имитировать опухоли in vivo. Например, при росте в монослое (в двумерных (2D) условиях) клетки теряют ряд тканеспецифических функций, нарушаются межклеточные контакты и взаимодействие клеток с внеклеточным матриксом, изменяются профили экспрессии генов, характерные для клеток, растущих в трехмерных (3D) условиях (в тканях, органах, опухолях). На сегодняшнем этапе развития медицинской биотехнологии важной становится разработка более достоверных методов скрининга лекарств. Поэтому на смену 2D моделям приходят более сложные 3D системы, в частности культуры клеток, выращенные в/на макропористых микроносителях и гидрогелях, микро- и нановолокнах, а также мультиклеточные опухолевые сфероиды (МОС) и др.

Впервые МОС в качестве 3D модели малой солидной (от англ. solid, твердый) опухоли были предложены в 1970 году Р. Сазерлендом. С тех пор сфероиды используются при изучении механизмов действия различных противоопухолевых препаратов, а также в фундаментальных исследованиях механизмов пролиферации и дифференцировки клеток, апоптоза, некроза, инвазии, ангиогенеза. Сфероиды - 3D агрегаты клеток — сходны с первичными, лишенными сосудов злокачественными опухолями, с микрометастазами и межкапиллярными областями в опухолях. Кроме того, они имеют подобный опухолям внеклеточный матрикс, сходную 3D структуру и радиальное строение: гетерогенные клеточные популяции располагаются в сфероиде концентрически. Близка к ситуации in vivo и экспрессия генов в клетках, входящих в состав сфероида.

В связи с ростом интереса к исследованиям на сфероидах активно ведется разработка эффективных методов их формирования, которые позволили бы легко и быстро получать сфероиды заданных размеров (от 100 до 1000 мкм). Однако существующие методы не позволяют формировать МОС с узким распределением по размерам в пределах заданного диаметра, получать сфероиды на основе линий клеток, вообще не способных формировать агрегаты при росте в суспензионной культуре, а также осуществлять совместное культивирование раковых клеток с нормальными клетками (фибробластами, макрофагами, моноцитами и др.), которые присутствуют в солидных опухолях in vivo. Формирование сфероидов внутри полиэлектролитных микрокапсул как возможное решение этой задачи исследовано в настоящей работе.

Целью настоящей работы была разработка нового метода формирования

сфероидов путем культивирования иммобилизованных раковых клеток в биосовместимых полимерных микрокапсулах и демонстрация возможности их использования в качестве 3D модели in vitro для изучения эффектов фотодинамического воздействия.

Для достижения цели предстояло решить следующие задачи:

1. Предложить биосовместимые полимеры для формирования полиэлектролитных микрокапсул с заданными свойствами и оптимизировать условия получения этих микрокапсул.

2. Изучить физико-химические свойства полученных микрокапсул (распределение по размерам, толщину полиэлектролитной мембраны, набухаемость и др.).

3. Исследовать кинетику роста различных раковых клеточных линий в микрокапсулах.

4. Изучить возможность формирования сфероидов в микрокапсулах путем длительного культивирования инкапсулированных раковых клеток.

5. Продемонстрировать возможность использования микрокапсулированных мультиклеточных опухолевых сфероидов в качестве 3D модели in vitro для исследования эффектов фотодинамического воздействия.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Зайцева-Зотова, Дарья Сергеевна

выводы

1. Предложены новые графт-сополимеры хнтозана с поливиниловым спиртом и модифицированные декстраны для получения микрокапсул с заданными свойствами и изучена их биосовместимость.

2. Оптимизирован метод формирования микрокапсул на основе новых биосовместимых полимеров с помощью электростатического генератора микрочастиц.

3. Изучены физико-химические свойства полученных микрокапсул, такие как распределение по размерам, толщина мембраны, механическая стабильность, набухаемость, проницаемость. Показано, что микрокапсулы устойчивы в среде для культивирования, а следовательно, могут быть использованы для длительного культивирования клеток.

4. Исследован рост и пролиферация различных культур раковых клеток в микрокапсулах на основе различных поликатионов. Продемонстрировано, что 6 культур клеток активно пролиферируют будучи заключенными в микрокапсулы.

5. Показано, что при длительном культивировании инкапсулированных раковых клеток (от 14 до 30 дней) внутри микрокапсул формируются сфероиды.

6. На примере микрокапсулированных мультиклеточных опухолевых сфероидов, сформированных на основе клеточной линии аденокарциномы молочной железы человека (МСР-7) исследовано фотодинамическое воздействие двух модельных фотосенсибилизаторов (Себ и ФС®). Найдено, что фотодинамическое воздействие как Себ, так и ФС® (в свободной и инкапсулированной форме), на микрокапсулированных МОС ниже по сравнению со стандартной монослойной культурой.

БЛАГОДАРНОСТИ

Автор выражает благодарность своему научному руководителю д.х.н. Е. А Марквичевой (Институт биоогранической химии им. акад. М. М. Шемякина и Ю. А. Овчинникова РАН), д.х.н. А. Н. Зеленецкому и к.х.н. Т. А. Акоповой (Институт синтетических полимерных материалов РАН, Москва) за предоставленные образцы новых графт-сополимеров хитозана с ПВС, проф. А. Бартковиаку (Западнопомеранский университет, г. Щецин, Польша) за образцы олигохитозанов и МД, а также проф. Л. Н. Бездетной (Центр Алексиса Вонтрана, г. Нанси, Франция) и проф. Ж.-Л. Горжену (Политехнический ун-т Лотарингии, г. Нанси, Франция) за возможность выполнения части экспериментов в их лабораториях, а также к.б.н. Е. Р. Андреевой (Институт медико-биологических проблем РАН, Москва, Россия) за сотрудничество и помощь в проведении экспериментов по ФДТ. Кроме того, автор благодарна д.х.н. С. В. Бурову (Институт высокомолекулярных соединений, Санкт-Петербург) за синтез образцов циклических пептидов, а также к.х.н. О. Е. Селиной и асп. М. Г. Дроздовой (ИБХ РАН, Москва). Особую благодарность автор выражает группе д.х.н. Д. А. Горина (Саратовский государственный университет, Саратов, Россия) за сотрудничество и результаты по измерению ^-потенциала и гидродинамического радиуса образцов модифицированных декстранов.

1.2.2.2.8. Заключение

Сфероид - это трехмерная система in vitro, воспроизводящая достаточно близко строение малых солидных опухолей. В частности, в сфероидах наблюдаются сходные с реальными градиенты кислорода, питательных веществ и рН. В противоположность сложнейшим моделям in vivo (экспериментальным животным), сфероиды позволяют напрямую наблюдать противораковый эффект ФДТ, отделяя его от влияния фотодинамического воздействия на сосуды, иммунных реакций и других эффектов, наблюдаемых ш vivo. Конечно, следует принимать во внимание, что сфероиды -неидеальная модель для исследования ФДТ. Самый существенный их недостаток - это зависимость кинетики роста клеток и насыщения сфероидов кислородом от типа клеточной культуры. Кроме того, внеклеточный матрикс в сфероидах образуют только опухолевые клетки, в то время как in vivo это происходит с участием нормальных клеток ткани. Как бы то ни было, сфероиды играют и будут продолжать играть ключевую роль в исследованиях основных параметров ФДТ, таких как концентрации кислорода и фотосенсибилизатора, дозы облучения и освещенности. Сфероиды являются чрезвычайно удобной моделью для изучения кинетики фотообесцвечивания, антиангиогенных эффектов ФДТ, многоэтапной ФДТ и комбинированной терапии. И наконец, на основе информации о росте сфероидов возможно моделировать кинетику роста опухолей и их реакцию на ФДТ.

1.2.2.3. Методы получения сфероидов

В связи с ростом интереса к исследованиям на сфероидах, в настоящее время идет разработка эффективных и универсальных методов получения сфероидов, позволяющих заранее задавать размер сфероидов. В таблице 1 представлены некоторые методы, предложенные в настоящее время для формирования сфероидов [96].

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Зайцева-Зотова, Дарья Сергеевна, 2012 год

ЛИТЕРАТУРА

1. http ://www.who jnt/mediacentre/factsheets/fs297/ru/index.html

2. Миронов А.Ф. Фотодинамическая терапия рака новый метод диагностики и лечения злокачественных опухолей // Соросовский образовательный журнал. -1996. -№8.-C.33-38.

3. Dougherty T.J., Potter W.R., Weishaupt K.R. The structure of active component of hematoporphyrin derivative / Proceedings of the international Symposium on Porphyrins in Tumor Phototherapy (18-26 May, Milan, 1983) // N.Y.: Plenium Press. -1984. -P.23-35.

4. Dima V.R, Ionescu M.D., Balotescu C., Dima S.F. Photodynamic therapy and some clinical applications in oncology // Roum. Arch. Microbiol. Immunol. - 2002. -V.61. -P. 159-205.

5. Lopez R.R, Lange N., Guy R, Bentley MV. Photodynamic therapy of skin cancer: controlled drug delivery of 5-ALA and its esters // Adv. Drug Deliv. Rev.- 2004. -V.56.- P.77-94.

6. Странадко Е.Ф. Современные достижения в области фотодинамической терапии рака и неопухолевых заболеваний / Е.Ф. Странадко, М.В. Рябов, Н.Н. Волкова (Государственный научный центр лазерной медицины МЗ РФ, Москва) // Научная сессия МИФИ - 2002. Сборник научных трудов. - 2002. - Т.5. - С. 16-17.

7. Чиссов В. И., Соколов В. В., Булгакова Н. Н., Филоненко Е. В. Флуоресцентная эндоскопия, дермаскопия и спектрофотометрия в диагностике злокачественных опухолей основных локализаций // Рос. биотер. журн. — 2003. — Т. 2, № 4. — С. 45—56.

8. Толстых П.И., Дербенёв В.А., Кулешов И.Ю., Азимшоев A.M., Елисеенко В.И.,

Соловьёва А.Б., Иванов А.В., Мелик-Нубаров Н.С., Макоев С.Н., Шин

Е.Ф. Теоретические и практические аспекты лазерной фотохимии для лечения гнойных

ран // Российский биотерапевтический журнал. - 2008. - №4, Т.7. -С.20-24.

121

9. Волнухин В.А., Жилова М.Б., Бутарева М.М. Современные аспекты фототерапии псориаза // Вестник дерматологии и венерологии, 2010.-N3.-C.27-32.

10. Гельфонд, M.JI. Фотодинамическая терапия в онкологии / М. JI. Гельфонд // Практическая онкология. - 2007. - Т. 8, № 4. - С. 204-210.

11. Castano A., Demidova Т., Hamblin М. Mechanisms in photodynamic therapy: part one -photosensitizers, photochemistry and cellular localization // Photodiagn. Photodyn. Ther. -2004. -Nl. -P.279-293.

12. Girotti A.W. Photosensitized oxidation of membrane lipids: reaction pathways, cytotoxic effects, and cytoprotective mechanisms // J. Photochem. Photobiol. B. -2001. -V63. - P.103-113.

13. Красновский А.А. Синглетный молекулярный кислород и первичные механизмы фотодинамического действия оптического излучения, Итоги науки и техники // Совр. пробл. лаз. физ. М.: ВИНИТИ. -1990. -Т. 3. -С.224.

14. Piette J., Volanti С., Vantieghem A., Matroule J.Y., Habraken Y., Agostinis P. Cell death and growth arrest in response to photodynamic therapy with membrane-bound photosensitizers // Biochem. Pharmacol. -2003. -V.66. - P. 1651-1659.

15. Salet C., Moreno G. New trends in photobiology. Photosensitization of mitochondria. Molecular and cellular aspects // J. Photochem Photobiol., B:Biol. -1990. -V.5. - P. 133-150.

16. Boegheim J.P.J., Scholte H., Dubbelmann T.M.A.R., Beems E., Raap A.K., van Stevenik J. Photodynamic effects of hematoporphyrin derivative on enzyme activities of murine L929 fibroblasts // J. Photochem. Photobiol. B:Biol. -1987. -V.l. - P.61-73.

17. Moan J., Berg K., Kvam E., Western A., Malik Z., Ruck A., Schneckenburger H.

122

Intracellular localization of photosencitizers / Photosensitizing Compounds: their Chemistry, Biolody and Clinical Use // Wiley, Chichester (Ciba Foundation Symposium 146). -1989. -P.95-107.

18. Specht K.J., Rodgers M.A. Depolarisation of mouse myeloma cell membranes during photodynamic action//Photochem. Photobiol. -1990. -V.51. -P.319-324.

19. Pushpan S.K., Venkatraman S., Anand V.G., Sankar J., Parmeswaran D., Ganesan S., Chandrashekar Т.К. Porphyrins in photodynamic therapy - a search for ideal photosensitizers // Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents. -2002. -V2. -P. 187-207.

20. Vicente M.G. Porphyrin-based sensitizers in the detection and treatment of cancer: recent progress // Curr. Med. Chem. Anti-Canc. Agents. -2001. -VI. -P. 175-194.

21. Madsen S.J., Sun C.H., Tromberg B.J., Cristini V., De Magalhaes N., Hirschberg H. Multicell tumor spheroids in photodynamic therapy // Lasers Surg. Med. -2006. -V.38,N5. -P.555-64.

22. Rodica-Mariana I. Synthetic metallo-porphyrins and selection criteria for PDT // Oftalmologia. 2003. -V.5. -P.83-88.

23. Попова H.A., Модели экспериментальной онкологии // Соросовский образовательный журнал. -2000. -Т.6. -С.33-38.

24. Mazzoleni G., Di Lorenzo D., Steimberg N. Modelling tissues in 3D: the next future of pharmaco-toxicology and food research? // Genes & Nutrition. -2009. -V.4,N1. -P. 13-22.

25. Sivaraman A., Leach J.K., Townsend S., Iida Т., Hogan В .J., Stolz D.B., Fry R., Samson

L.D., Tannenbaum S.R., Griffith L.G. A microscale in vitro physiological model of the liver:

predictive screens for drug metabolism and enzyme induction // Curr. Drug Metab. -2005. -V.

123

6, N.6. Р.569-91.

26. Katoh М., Matsui Т., Okumura Н., Nakajima М., Nishimnra М., Naito S., Tateno С., Yoshizato К., Yokoi Т. Expression of human phase II enzymes in chimeric mice with humanized liver // Drug Metab. Dispos. -2005. -V.33.N.9, P. 1333-40.

27. Rangarajan A., Hong S.J., Gifford A., Weinberg R.A. Species- and cell type-specific requirements for cellular transformation. // Cancer Cell. -2004. -V.6, N2. -P. 171-83.

28. Sanford K.K., Earle W.R., Likely G.D., The growth in vitro of single isolated tissue cells //J .Natl. Cancer. Inst. -1948. -V.9,N3. -P.229-46.

29. Scherer W.F., Syveton J.Т., Gey G.O. Studies on the propagation in vitro of poliomyelitis viruses. IV. Viral multiplication in a stable strain of human malignant epithelial cells (strain HeLa) derived from an epidermoid carcinoma of the cervix // J. Exp. Med. -1953. -V.97,N5. -P.695-710.

30. Eagle H. Propagation in a fluid medium of a human epidermoid carcinoma, strain KB // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1955, V.89,N.3. -P.362-4.

31. Andrei G. Three-dimensional culture models for human viral diseases and antiviral drug development //Antiviral Research. -2006. - V.71, N2-3. -P.96-107.

32. Фрешни P. Культуры животных клеток. // Методы; М.: Мир. -1989. -С. 10.

33. Методы культивирования клеток / под редакцией Г. П. Пинаева, М. С. Богдановой // Спб.: Изд-во Политехи. Ун-та. -2008. -С.278.

34. Grun В., Benjamin Е., Sinclair J., Timms J.F., Jacobs I.J., Gayther S.A., Dafou D. Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer // Cell. Prolif. -2009. -V42, N2, -P.219-28.

35. Zietarska M., Maugard C.M., Filali-Mouhim A., Alam-Fahmy M., Tonin P.N., Provencher D.M., Mes-Masson A.M. Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC) HMo\. Carcinog. -2007. -V.46,N10. -P.872-85.

36. Kumar H.R., Zhong X., Hoelz D.J., Rescorla F.J., Hickey R.J., Malkas L.H., Sandoval J.A. Three-dimensional neuroblastoma cell culture: proteomic analysis between monolayer and multicellular tumor spheroids // Pediatr. Surg. Int. -2008. -V.24,N11. -P. 1229-34.

37. Indovina P., Collini M., Chirico G., Santini M.T. Three-dimensional cell organization leads to almost immediate HRE activity as demonstrated by molecular imaging of MG-63 spheroids using two-photon excitation microscopy // FEBS Lett. -2007, -V.581,N4. -P.719-26.

38. Pickl M., Ries C.H. Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab // Oncogene. -2009. -V.28, N3. -P.461-8.

39. Holtfreter J. A study of the mechanics of gastrulation // Journal of Experimental Zoology. -1944.-V. 95.-P.171 -212.

40. Moscona A. Cell suspensions from organ rudiments of chick embryos // Experimental Cell Research. -1952. -V.3. -P.535-539.

41. Halpern B., Pejsachowicz B., Febvre H. L., Barski G. Differences in patterns of aggregation of malignant and non-malignant mammalian cells // Nature. -1966. -V.8. -P.157-159.

42. Schleich A. Studies on aggregation of human ascites tumor cells // European Journal of Cancer. 1967. -V.3. -P.243-246.

43. Knudsen K.A., Horwitz, A.F. Tandem events in myoblast fusion // Developmental Biology. -1977. -V.58. -P.328-338.

44. Hausman R.E., Dobi E.T., Woodford E.J., Petrides S., Ernst M., Nichols E.B. Prostaglandin binding activity and myoblast fusion in aggregates of avian mybblasts // Developmental Biology. -1986. -V.113. -P.40—48.

45. Santini M.T., Cametti C., Straface E., Indovina P.L. The fusion radiosensitivity of differentiating chick embryo myoblasts in vitro is not determined by the plasma membrane // International Journal of Radiation Biology. -1993. -V.63. -P.21-26.

46. Sutherland R.M., Carlsson J., Durand R.E., Yuhas J. Spheroids in cancer research // Cancer Research. -1981. -V.41. -P.2980-2994.

47. Sutherland R.M., Durand R.E. Growth and cellular characteristics of multicell spheroids. In Recent Results in Cancer Research. Spheroids in Cancer Research / edited by H. Acker, J. Carlsson, R. Durand and R. M. Sutherland // Berlin: Springer-Verlag. 1984. -P.24—49.

48. Mueller-Klieser W., Multicellular spheroids: a review on cellular aggregates in cancer research // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. -1987. -V.113. -P.101-122.

49. Sutherland R.M., Inch W.R., McCredie J.A., Kruuv J. A multicomponent radiation survival curve using an in vitro tumor model // International Journal of Radiation Biology. -1970. -V.18. -P.491-495.

50. Durand R.E., Sutherland R.M. Effects of intercellular contact on repair of radiation damage // Experimental Cell Research. -1972. -V.71. -P.75-80.

51. Carlsson J., Stalnacke C.G., Acker H., Haji Karim M., Nilsson S., Larsson B. The influence of oxygen on viability and proliferation in cellular spheroids // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. -1979.-V.5.-P.2011-2020.

52. Mueller-Klieser W.F., Sutherland R.M. Oxygen tensions in multicell spheroids of two cell

126

lines // Br. J. Cancer. -1982. -V45. -P.256-264.

53. Wolfgang M.K. Three-dimensional cell cultures: from molecular mechanisms to clinical applications // Review oct. -1997. V.273,N4. -P.1109-1123.

54. Freyer J.P. Rates of oxygen consumption for proliferating and quiescent cells isolated from multicellular tumor spheroids //Adv. Exp. Med. Biol. -1994. V345. -P.335-342.

55. Lord E.M., Harwell L., Koch C.J. Detection of hypoxic cells by monoclonal antibody recognizing 2-nitroimidazole adducts // Cancer Res. -1993. -V53. -P.5721-5726.

56. Waleh N.S., Brody M.D., Knapp M.A., Mendonca H.L., Lord E.M., Koch C.J., Laderoute K.R., Sutherland R.M. Mapping of the vascular endothelial growth factor-producing hypoxic cells in multicellular tumor spheroids using a hypoxia-specific marker // Cancer Res. -1995. -V55. -P.6222-6226.

57. Gross M.W., Karbach U., Groebe K., Franko A.J., Mueller-Klieser W., Calibration of misonidazole labeling by simultaneous measurement of oxygen tension and labeling density in multicellular spheroids // Int. J. Cancer. -1995. -V61. -P.567-573.

58. Berchner-Pfannschmidt U., Frede S., Wotzlaw C., Fandrey J., Imaging of the hypoxia-inducible factor pathway: insights into oxygen sensing // Eur Respir J.-2008.-V.32,Nl.-P.210-7.

59. Christensen T., Moan J., Sandquist T., Smedshammer L. Multicellular spheroids as an in vitro model system for photoradiation therapy in the presence of Hpd // Prog. Clin. Biol. Res. -1984.-V.170. -P.381-390.

60. West C.M., Moore J.V. Flowcytometric analysis of intracellular hematoporphyrin derivative in human tumour cells and multicellular spheroids // Photochem. Photobiol. -1989, V.50,N5. -P. 665 - 669.

61. Purkiss S.F., Grahn M.F., Turkish M., Macey M.G., Williams N.S. In vitro modulation of hematoporphyrin derivative photodynamic therapy on colorectal carcinoma multicellular spheroids by verapamil // Br. J. Surg. -1992. -V.79, N2. -P.120-125.

62. Coutier S., Mitra S., Bezdetnaya L.N., Parache R.M., Georgakoudi I., Foster T.H., Guillemin F. Effects of fluence rate on cell survival and photobleaching in meta-tetra-(hydroxyphenyl)- chlorin-photosensitized Colo 26 multicell tumor spheroids // Photochem. Photobiol. -2001. -V.73,N3. -P.297 - 303.

63. Huygens A., Huyghe D., Bormans G., Verbruggen A., Kamuhabwa A.R., Roskams T., deWitte PA. Accumulation and photocytotoxicity of hypericin and analogs in two- and three-dimensional cultures of transitional cell carcinoma cells // Photochem. Photobiol. -2003. -V.78, N6. -P.607 - 614.

64. West C.M. Size-dependent resistance of human tumour spheroids to photodynamic treatment // Br. J. Cancer. -1989. -V.59,N4. -P.510 - 514.

65. Bigelow C.E., Mitra S., Knuechel R., Foster T.H. ALA- and ALA- hexylester-induced protoporphyrin IX fluorescence and distribution in multicell tumor spheroids // Br. J. Cancer. -2001.-V.85. -P.727 - 734.

66. Foster T.H., Hartley D.F., Nichols M.G., Hilf R. Fluence rate effects in photodynamic therapy of multicell tumor spheroids // Cancer Res. -1993. -V.53. -P.1249 - 1254.

67. Madsen S.J., Sun C.H., Tromberg B.J., Wallace V.P., Hirschberg H. Photodynamic therapy of human glioma spheroids using 5-aminolevulinic acid // Photochem. Photobiol. -2000. -V.72. -P. 128 -134.

68. Marchal S., Fadloun A., Maugain E., D'Hallewin M.A., Guillemin F., Bezdetnaya L.

128

Necrotic and apoptotic features of cell death in response to Foscan photosensitization of HT29 monolayer andmulticell spheroids // Biochem. Pharmacol. -2005. V.69, N8. -P. 1167 - 1176.

69. Georgakoudi I., Foster T.H. Singlet oxygen- versus nonsinglet oxygen-mediated mechanisms of sensitizer photobleaching and their effects on photodynamic dosimetry // Photochem. Photobiol. -1998. -V.67. -P.612 - 625.

70. Madsen S.J., Sun C.H., Tromberg B.J., Hirschberg H. Repetitive 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on human glioma spheroids // J. Neurooncol. -2003. V.62. -P.243-250.

71. Mathews M.S., Angell-Petersen E., Sanchez R., Sun C.H., Vo V., Hirschberg H., Madsen S.J. The effects of ultra low fluence rate single and repetitive photodynamic therapy on glioma spheroids // Lasers Surg. Med. -2009. -V.41,N8. -P.578-84.

72. Madsen S.J., Sun C.H., Tromberg B.J., Yeh A.T., Sanchez R., Hirschberg H. Effects of combined photodynamic therapy and ionizing radiation on human glioma spheroids // Photochem. Photobiol. -2002. -V.76. -P.411 -416.

73. Song C.W. Effect of local hyperthermia on blood flow and microenvironment // Cancer Res. -1984. V.44. -P.4721-4730.

74. Olive P.L., Durand R.E. Drug and radiation resistance in spheroids: Cell contact and kinetics // Cancer Metastasis Rev. -1994. -V.13. -P.121 - 138.

75. Wigle J.C., Sutherland R.M. Increased thermoresistance developed during growth of small multicellular spheroids // J Cell. Physiol. -1985. -V.122. -P.281 - 289.

76. Prinsze C., Penning L.C., Dubbelman T.M.A.R., Van Steveninck J. Interaction of

photodynamic treatment and either hyperthermia and ionizing radiation and of ionizing

129

radiation and hyperthermia with respect to cell killing of L929 fibroblasts, Chinese hamster ovary cells, and T24 human bladder carcinoma cells // Cancer Res. -1992. -V.52,N1. -P. 117-20.

77. Prinsze C., Dubbelman T.M.A.R., Van Steveninck J. Potentiation of the thermal inactivation of glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase by photodynamic treatment. A possible model for the synergistic interaction between photodynamic therapy and hyperthermia // Biochem J. -1991. -V.276,N2. -P.357-362.

78. Easty G.C., Easty G.M. In vivo and in vitro models of invasion. / Mareel M.M., Caiman K.C., editors. Invasion. Experimental and Clinical Implications. // New York: Oxford University Press. -1984. -P.24 - 62.

79. Evans C.W. In vitro model systems for the study of tumor cell invasion and metastasis. / The Metastatic Cell: Behavior and Biochemistry // New York: Chapman and Hall. -1991. -P.293-331.

80. Hirschberg H., Sun C.H., Madsen S.J. Reduction of invasiveness of human glioma cells by ALA mediated photodynamic therapy // Proc SPIE. -2006. -V.6078. -P.481 - 486.

81. Uhm J.H., Dooley N.P., Villemure J.G., Yong V.W. Mechanisms of glioma invasion: Role of matrix-metalloproteinases // Can. J. Neuro. Sci. -1997. -V.4. -P.3 - 15.

82. Knighton D., Ausprunk D., Tapper D., Folkman J., Avascular and vascular phases of tumour growth in the chick embryo // Br. J. Cancer. -1977. -V.35,N3. -P.347-56.

83. Zwi L.J., Baguley B.C., Gavin J.B., Wilson W.R., The use of vascularised spheroids to investigate the action of flavone acetic acid on tumour blood vessels // Br. J. Cancer. 1990. -V.62. -P.231-237.

84. Petruzzelli G.J., Snyderman C.H., Johnson J.T., Myers E.N. Angiogenesis induced by head

130

and neck squamous cell carcinoma xenografts in the chick embryo chorioallantoic membrane model //Ann. Otol. Rhinol. Laryngol. -1993. -V.102. -P.215-221.

85. Hornung R., Hammer-Wilson M.J., Kimel S., Liaw L.H., Tadir Y., Berns M.W. Systemic applications of photosensitizers in the chick chorioallantoic membrane (CAM) model: Photo-dynamic response of CAM vessels and 5-aminolevulinic acid uptake kinetics by transplantable tumors // J. Photochem. Photobiol. B: Biol. -1999. -V.49. -P.41 -49.

86. De Magalhaes N., Liaw L.H.L., Li L., Liogys A., Madsen S.J., Hirschberg H., Tromberg B J. Investigating the effects of combined photodynamic and anti-angiogenic therapies using a three-dimensional in vivo brain tumor system // Proc. SPIE. -2006. -V.6078. -P.503 - 508.

87. Delsanto P.P., Condat C.A., Pugno N., Gliozzi A.S., Griffa MJ. A multilevel approach to cancer growth modeling // Theor. Biol. -2008. -V.250,N1. -P. 16-24.

88. Cristini V., Li X., Lowengrub J.S., Wise S.M., Nonlinear simulations of solid tumor growth using a mixture model: invasion and branching // J. Math. Biol. -2009. -V.58,N4-5. -P.723-63.

89. Bertuzzi A., Fasano A., Gandolfi A., Sinisgalli C., Necrotic core in EMT6/R0 tumour spheroids: Is it caused by an ATP deficit? // J. Theor. Biol. -2010. -V.262, N1. -P. 142-50.

90. Tindall MJ., Please C.P., Peddie M.J., Modelling the formation of necrotic regions in avascular tumours // Math. Biosci. -2008. -V.211,N1. -P.34-55.

91. Jackson T.L., Byrne H.M., A mathematical model to study the effects of drug resistance and vasculature on the response of solid tumors to chemotherapy // Math. Biosci. -2000. -V.164,N1. -P. 17-38.

92. Goodman T.T., Chen J., Matveev K., Pun S.H., Spatio-temporal modeling of nanoparticle

delivery to multicellular tumor spheroids // Biotechnol. Bioeng. -2008. -V.101,N2. -P.388-99.

131

93. Sheng C., Hoopes P.J., Hasan T., Pogue B.W. Photobleaching-based dosimetry predicts deposited dose in ALA-PpIX PDT of rodent esophagus // Photochem. Photobiol. -2007. -V83. -P73 8-748.

94. Zhou X., Pogue B.W., Chen B., Demidenko E., Joshi R., Hoopes J., Hasan T. Pretreatment photosensitizer dosimetry reduces variation in tumor response // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. -2006. -V.64. -P. 12208-12.

95. Huang N., Cheng G., Li X., Ying G., Liu F., Zhong Q., Wang Y., Zen J, Qiu H., Chen H. Influence of drug-light-interval on photodynamic therapy of port wine stains-Simulation and validation of mathematic models // Photodiag. Photodyna. Ther. -2008. -V.5,N2. -P.120-126.

96. Lin R.Z., Chang H.Y. Recent advances in three-dimensional multicellular spheroid culture for biomedical research //Biotechnol. J. -2008. -V.3,N9-10. -P. 1172-84.

97. E. Markvicheva, Bezdetnaya L., Bartkowiak A., Marc A., Gorgen J.L., Guillemin F., Poncelet D. Encapsulated multicellular tumor spheroids as a novel in vitro model to study small size tumors // Chem. Ind. -2003. -V.57. -P.585-588.

98. Zhang X., Wang W., Yu W., Xie Y., Zhang X., Zhang Y., Ma X. Development of an in vitro multicellular tumor spheroid model using microencapsulation and its application in anticancer drug screening and testing // Biotechnol. Prog. -2005. -V.21,N4. -P. 1289-96.

99. Wang Q., Li S., Xie Y., Yu W., Xiong Y., Ma X., Yuan Q. Cytoskeletal reorganization and repolarization of hepatocarcinoma cells in APA microcapsule to mimic native tumor characteristics // Hepatol. Res. -2006. -V.35,N2. -P.96-103.

100. Sakai S., Inamoto K., Liu Y., Tanaka S., Arii S., Taya M. Multicellular tumor spheroid

formation in duplex microcapsules for analysis of chemosensitivity // Cancer Sci. -2012. -

132

V.103,N3. -P.549-54.

101. Sakai S., Ito S., Kawakami K. Calcium alginate microcapsules with spherical liquid cores templated by gelatin microparticles for mass production of multicellular spheroids // Acta Biomater. -2010. -V.6, N8. -P.3132-7.

102. Sakai S., Ito S., Ogushi Y., Hashimoto I., Hosoda N., Sawae Y., Kawakami K. Enzymatically fabricated and degradable microcapsules for production of multicellular spheroids with well-defined diameters of less than 150 microm // Biomaterials. -2009. V.30,N30. -P.5937-42.

103. Bisceglie V. Uber die antineoplastische immunitat; heterologe Einpflnzung von tumoren in Huhner-embryonen // Ztschr. Krebsforsch. -1933. -V.40. -P.122-140.

104. Chang T.M. Semipermeable microcapsules // Science. -1964. -V.146,N3643. -P.524-5.

105. Klein J., Vorlop K.D., Steinert H.J. / German Patient, DE 34432923. -1986.

106. Yoshioka T., Hirano R., Shioya T., Kako M. Encapsulation of mammalian cell with Chitosan-CMC capsule // Biotecnology and Bioengeneering -1990. V.35. -P.66-72.

107. Кабанов B.A. Физико-химические основы и перспективы применения растворимых интерполиэлектролитных комплексов // ВМС. - 1994. - т. 36,№2. - С. 183-197.

108. Алюшин М.Т., Ли В.Н., Алексеев К.В. и др. Полимеры в фармации. /Ред. А. И. Тенцова, М.Т. Алюшин // М.:Медицина. -1985. - 254с.

109. Платэ Н.А., Васильев А.Е. Физиологически активные полимеры. // М.:Химия. -1986. -296с.

110. Lim F., Sun A. Microencapsulated islets as bioartificial endocrine pancreas.

Microencapsulation// Science. -1980.-P.210:908.

133

111. Bartkowiak A., Hunkler D. Alginate-oligochitosan microcapsules: a mechanistic study relating membrane and capsule properties to reaction conditions // Chemistry of materials. -

1999. -V.ll, № 9. -P.2486-2492.

112. Bartkowiak A., Hunkler D. Alginate-oligochitosan microcapsules II: control of mechanical resistance and permeability of the membrane // Chemistry of materials. -2000. -V.39, №1. -P. 61-70.

113. Schuldt U., Hunkeler D. Characterization methods for microcapsules // Minerva biotechnologia. -2001. - V.12. -P.249-269.

114. Платэ H.A. Полимеры для медицины // Наука В СССР. - 1986. - №1. - с 2-9.

115. Синтетические полимеры медицинского назначения: Тез. Докл. VII всесоюз. симпоз. (Ред. Л.И. Валуев) // Минск: Университетское. - 1985. - 114с.

116. Ramadas М, Paul W, Dileep К J, Anitha Y and Sharma С P. Lipoinsulin encapsulatedalginate-chitosan capsules: Intestinal delivery in diabetic rats // J. Microencapsul. -

2000. -V.17. -P.405-11.

117. Santos E, Zarate J, Orive G, Hernandez RM, Pedraz Ль. Biomaterials in cell microencapsulation //Adv. Exp. Med. Biol. -2010. -V.670. -P.5-21.

118. Prokop A., Hunkeler D., Powers A.C., Whitesell R.R., Wang T.G. Water soluble polymers for immunoisolation. П: Evaluation of multicomponent microencapsulation systems // Advances in polymer science. -1998. -V.136. -P.53-73.

119. Strand B.L., Rayn M., Veld P.I., Kulseng В., Rokstad A.M., Skjak-Brek G., Espevik T. Poly-L-Lysine induces fibrosis on alginate microcapsules via the induction of cytokines. // Cell Transplantation. -2001. -V. 10. -p. 263-275.

120. Ross С.J., Ralph M., Chang R Delivery of recombinant gene products to the central nervous system with nonautologous cells in alginate microcapsules. // Ibid. - 1999. - V.10. N 1. -p. 49-59.

121. Марквичева E.A. Хитозан и его производные в биоинкапсулировании // В кн.: Хитин и хитозан: получение, свойства и применение. Под ред.: К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова: -М.: Наука, 2002. -с.315-327.

122. Gaserod О., Skjak-Braek G. Microcapsules of alginate - chitosan // Biomaterials. -1998. -V. 49, N 6. -P.572-575.

123. Гамзазаде А.И. Структурная неоднородность как фактор изменчивости свойств хитина и хитозана / Хитин и хитозан: получение, свойства и применение. Под ред.: К.Г. Скрябина, Г.А. Вихоревой, В.П. Варламова: //М.: Наука, 2002. -с. 112-119.

124. Usov D., Sukhorukov G.B. Dextran coatings for aggregation control of layer-by-layer assembled polyelectrolyte microcapsules //Langmuir. -2010.V.36,N15. -P.12575-84.

125. Huguet M.L., Neufeld R.J., Dellacherie E. Calcium-alginate beads coated with polycationic polymers: Comparison of chitosan and DEAE-dextran // Process Biochemistry. -1996. -V.31,N4. -P.347-353.

126. Manosroi A., Manosroi J. Microencapsulation of human insulin DEAE-dextran complex and the complex in liposomes by the emulsion non-solvent addition method // J. Microencapsul. -1997. -V.14,N6. -P.761-8.

127. Kaplan J.M., Pennington S.E., St George J.A., Woodworth L.A., Fasbender A., Marshall

J., Cheng S.H., Wadsworth S.C., Gregory R.J., Smith A.E. Potentiation of gene transfer to the

mouse lung by complexes of adenovirus vector and polycations improves therapeutic potential

135

//Hum. Gene. Ther. -1998. -V.9,N10. -P. 1469-79.

128. Gavalas V.G., Chaniotakis N.A., Gibson T.D. Improved operational stability of biosensors based on enzyme-polyeleetrolyte complex adsorbed into a porous carbon electrode // Biosens Bioelectron. -1998. -V.13,N11. -P.1205-11.

129. Bartkowiak A. Hydrogel microcapsules containing natural and chemically modified oligochitosans - mechanical properties and porosity / Bartkowiak A., Brylak W. // Polimery. -2006. -V.51(7-8). - P.547-554.

130. Ozerin A. N., Zelenetskii A. N., Akopova T. A., Pavlova-Verevkina О. В., Ozerina L. A., Surin N. M., Kechek'yan A. S. Nanocomposites based on modified chitosan and titanium oxide // Polym. Sci. Ser. A. -2006. -V.48. -P.638.

131. Kiernan J.A. Methods for connective tissue. / Kiernan JA, editors. Histological and histochemical methods, theory and practice // Oxford: Butterworth-Heinemann. -1999. -P. 144164.

132. Болдырев В.В. Механохимия и механическая активация твердых веществ / Болдырев В.В. // Успехи химии. - 2006. - Т.75, N 3. - С.203-216.

133. Virnik A.D., Khomyakov К.Р., Skokova I.F. Dextran and its derivatives // Russ. Chem. Rev. -1975. V.44,N7. -P. 588-602.

134. Orive G., Bartkowiak A., Lisiecki S., De Castro M., Hernández R.M., Gascon A.R., Pedraz J.L. Biocompatible oligochitosans as cationic modifiers of alginate/Ca microcapsules // J. Biomed. Mater. Res. В Appl. Biomater. -2005. -V.74,N1. -P.429-39.

135. Onuki Y., Bhardwaj U., Papadimitrakopoulos F., Burgess D.J. A review of the

biocompatibility of implantable devices: current challenges to overcome foreign body response

136

// J. Diabetes Sci. Technol. -2008. -V.2,N6. -P.1003-15.

136. Strand B.L., Skjak-Braek G., Gaserod O. Microcapsule formulation and formation / Willaert R., Nedovich V., editors. Fundamentals of cell immobilization biotechnology, Series Focus on Biotechnology // Dordrecht-Boston-London: Kluwer Academic Publishers. -2004. -P. 165-185.

137. Bugarski В., Li Q., Goosen M.F.A., Poncelet D., Neufeld R. J., Vunjak G. Electrostatic droplet generation: Mechanism of polymer droplet formation // AIChE J. -1994. -V.40,N6. -P. 1026.

138. Балабашин Д.С., Зайцева-Зотова Д.С., Топорова B.A., Панина А.А., Марквичева Е.А., Свирщевская Е.В., Алиев Т.К. Способы увеличения продукции рекомбинантных антител в клеточных линиях СНО DG44. // Современные проблемы науки и образования. -2011.-№ 5.

139. Zaytseva-Zotova D., Balysheva V., Tsoy A., Drozdova М., Akopova Т., Vladimirov L., Chevalot I., Marc A., Goergen J.-L., Markvicheva E. Biocompatible Smart Microcapsules Based on Chitosan-Poly(Vinyl Alcohol) Copolymers for Cultivation of Animal Cells. // Advanced engineering materials. -2011. -V.13,N12. -P. B493-B503.

140. Salmenpera P., Kankuri E., Bizik J., Siren V., Virtanen I., Takahashi S., Leiss M., Fassler R., Vaheri A. Formation and activation of fibroblast spheroids depend on fibronectin-integrin interaction // Exp. Cell Res. -2008. -V.314,N19. -P.3444-52.

141. Xiong L., Chen Z., Tian Q., Cao Т., Xu C., Li F. High contrast upconversion luminescence targeted imaging in vivo using peptide-labeled nanophosphors // Anal. Chem. -2009. -V.81,N21. -P.8687-94.

142. Albelda S.M., Mette S.A., Elder D.E., Stewart R.M., Damjanovich S., Herlyn M., Buck C.A. Integrin distribution in malignant melanoma: association of the beta 3 subunit with tumor progression // Cancer Res. -1990. -V.50.. -P.6757-6774.

143. http://www.niopik.ru/products/medicine/photosense/

144. Merlin J.L., Gautier H., Barberi-Heyob M., Teiten M.H., Guillemin F. The multidrug resistance modulator SDZ-PSC 833 potentiates the photodynamic activity of chlorine e6 independently on P-glycoprotein in multidrug resistant human breast adenocarcinoma cells // Int. J. Oncol. -2003. -V.22. -P.733-739.

145. Wang Q., Yan X.H., Cui Y., Qi W., Duan L., Li J.B., Encapsulated photosensitive drugs by biodegradable microcapsules to incapacitate cancer cells // J. Mater. Chem. -2007. -V.17. -P.

Л A1 О A AO '

tUlO-HWZl.

146. O.E. Селина, С. Ю. Белов, Н.Н. Власова, В. И. Балышева, А.И. Чурин, А. Бартковиак, Г.Б. Сухоруков, Е.А. Марквичева. Биодеградируемые микрокапсулы с включенной в них ДНК для создания новых ДНК-вакцин // Биоорганическая химия -2009.-Т. 35, № 1.-C.113-121.

147. De Geest B.G., Vandenbroucke R.E., Guenther A.M., Sukhorukov G.B., Hennink W.E., Sanders N.N., Demeester J., De Smedt S.C. Intracellular^ degradable polyelectrolyte microcapsules //Adv. Mater. -2006. -V.18. -P. 1005-9.

148. Agostinis P., Buytaert E., Breyssens H., Hendrickx N. Regulatory pathways in photodynamic therapy induced apoptosis // Photochem. Photobiol. Sci. -2004,- V.3,N8. -P.721-9.