Мультифункциональные полиэлектролитные микрочастицы для пероральной доставки рекомбинантных инсулинов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат химических наук Печенкин, Михаил Александрович

• Печенкин, Михаил Александрович
• кандидат химических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат химических наук Печенкин, Михаил Александрович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Инсулин. Общие сведения.

1.1. Структура и физико-химические свойства.

1.2. Биологическая активность инсулина.

1.3. Биосинтез и регуляция секреции инсулина.

1.4. Механизм действия инсулина.

Глава 2. Способы доставки инсулина.

2.1. Традиционные методы введения инсулина.

2.2. Альтернативные методы введения инсулина.

2.2.1. Доставка через слизистую ротовой полости.

2.2.2. Пульмонарная доставка.

2.2.3. Назальная доставка.

2.2.4. Трансдермальная доставка.

2.2.5. Окулярная доставка.

Глава 3. Пероральная доставка инсулина.

3.1. Полиэлектролитные системы доставки.

3.2. Защита инсулина от протеолиза.

3.2.1. Действие носителя.

3.2.2. Ингибиторы протеолитических ферментов.

3.2.2.1. Небелковые ингибиторы.

3.2.2.2. Белковые ингибиторы.

3.3. Транспорт инсулина через эпителий кишечника.

3.3.1. Мукоадгезия.

3.3.2. Захват М-клетками.

3.3.3. Трансцеллюлярный путь.

3.3.4. Парацеллюлярный путь.

ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Глава 4. Материалы и методы.

4.1. Материалы и реактивы.

4.2. Оборудование.

4.3. Методы исследования.

4.3.1. Получение микрочастиц с использованием альгината и хитозана.

4.3.2. Получение микрочастиц с использованием декстрансульфата и хитозана.

4.3.2.1. Турбидиметрическое титрование инсулина декстрансульфатом.

4.3.2.2. Получение микроагрегатов комплекса (инсулин-декстрансульфат).

4.3.2.3. Постадийная адсорбция полиэлектролитов.

4.3.3. Включение ингибиторов протеаз в полиэлектролитные микрочастицы.

4.3.3.1. Включение на стадии образования комплекса (белок-декстрансульфат).

4.3.3.2. Включение на стадии сорбции поликатиона.

4.3.4. Характеристика полиэлектролитных микрочастиц.

4.3.4.1. Растровая электронная микроскопия.

4.3.4.2. Конфокальная флуоресцентная сканирующая микроскопия.

4.3.4.3. Оптическая микроскопия.

4.3.4.4. Определение ^-потенциала микрочастиц.

4.3.4.5. Определение белка.

4.3.4.6. Определение декстрансульфата.

4.3.4.7. Определение хитозана.

4.3.4.8. Определение содержания активного ингибитора протеаз с использованием трипсина.

4.3.4.9. Определение содержания активного ингибитора протеаз с использованием химотрипсина.

4.3.4.10. Определение содержания активного овомукоида.

4.3.5. Высвобождение белков и декстрансульфата из микрочастиц.

4.3.5.1. рН-зависимое высвобождение.

4.3.5.2. Кинетика высвобождения инсулина в модельных средах.

4.3.6. Определение формы высвобождения белков из микрочастиц.

4.3.6.1. Гель-хроматография.

4.3.6.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография.

4.3.7. Изучение факторов, влияющих на активность протеаз.

4.3.7.1. Влияние Са2+, ЭДТА и декстрансульфата.

4.3.7.2. Влияние микрочастиц.

4.3.8. Изучение протеолитической деградации инсулина.

4.3.8.1. Определение активности трипсина.

4.3.8.2. Определение активности а-химотрипсина.

4.3.8.3. Деградация белка в модельных средах.

4.3.8.4. Анализ количества недеградированного белка.

4.3.9. Определение связывания микрочастицами ионов кальция.

4.3.10. Определение связывания микрочастицами муцина.

4.3.11. Изучение действия микрокапсулированного инсулина in vivo.

4.3.11.1. Определение содержания глюкозы в плазме крови.

4.3.11.2. Определение содержания инсулина в плазме крови.

4.3.11.3. Изучение на здоровых кроликах.

4.3.11.4. Изучение на крысах с диабетом.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 5. Разработка методов анализа полиэлектролитных микрочастиц.

5.1. Определение хитозана при наличии белка и полианионов в смеси.

5.2. Определение активности протеаз при наличии полиэлектролитов в смеси.

Глава 6. Инсулинсодержащие полиэлектролитные микрочастицы.

6.1. Исследование микрочастиц из альгината и хитозана.

6.1.1. Получение микрочастиц из альгината и хитозана.

6.1.2. Высвобождение белка из альгинат-хитозановых микрочастиц.

6.2. Исследование микрочастиц из декстрансульфата и хитозана.

6.2.1. Получение микрочастиц из декстрансульфата и хитозана с инсулином человека

6.2.2. Включение быстродействующих аналогов инсулина.

6.2.3. Включение ингибиторов протеаз.

6.2.4. Высвобождение белка и декстрансульфата из полиэлектролитных микрочастиц.

6.2.5. Исследование формы высвобождения белков из полиэлектролитных микрочастиц.

6.2.6. Мукоадгезивные свойства полиэлектролитных микрочастиц.

6.2.7. Са2+-связывающая способность полиэлектролитных микрочастиц.

6.2.8. Защитное действие полиэлектролитных микрочастиц от протеолитических ферментов.

Глава 7. Исследование биологического действия микрокапсулироваииого инсулина.

7.1. Исследование сохранения активности инсулина.

7.2. Исследование гипогликемического действия инсулина при пероральном введении здоровым кроликам.

7.3. Исследование фармакологического действия инсулина при пероральном введении крысам с диабетом.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Мультифункциональные полиэлектролитные микрочастицы для пероральной доставки рекомбинантных инсулинов»

Сахарный диабет занимает третье место в мире по распространенности после сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний. Сахарным диабетом в мире болеют более 300 миллионов человек, при этом около 10 - 15 % из них болеют диабетом первого типа — в их поджелудочной железе инсулин не синтезируется совсем или производится в недостаточном количестве. Больные вынуждены строго контролировать уровень глюкозы в крови путём постоянных инъекций инсулина, что, в свою очередь, может повлечь за собой такие нежелательные последствия, как гиперинсулинемию и липоатрофию.

Были исследованы альтернативные пути доставки инсулина, тем не менее, на настоящий момент существует лишь одна доступная на рынке форма неинвазивного инсулина, хотя было предложено множество идей, разработок и препаратов, проходящих различные фазы клинических испытаний. Большое внимание учёных уделяется созданию пульмонарной, интраназальной и трансдермальной форм доставки гормона. Однако наиболее естественным и удобным способом введения инсулина была бы пер оральная доставка. Это связано с тем, что в норме секретируемый инсулин из поджелудочной железы попадает в печень через кровеносные сосуды, а печень, в свою очередь, контролирует количество инсулина, достигающего другие органы и ткани. При пероральном введении инсулин из тонкого кишечника через брыжеечную и воротную вену также попал бы в печень. Таким образом, при пероральной доставке был бы возможен контроль секреции инсулина, который отсутствует при инвазивном введении и других альтернативных путях его доставки. Ключевой довод в пользу разработки такой системы состоит в том, что большинство пациентов предпочтет таблетки инъекциям и ингаляторам.

Однако, биодоступность белков, введённых перорально, не превышает 1 - 2 %. Связано это с тремя основными причинами. Во-первых, это гидролиз белка при экстремальных значениях рН желудочного сока; во-вторых, расщепление белка под действием протеолитических ферментов желудка и тонкого кишечника; и, в-третьих, низкая проницаемость мембран клеток кишечника для больших белковых молекул.

Разрабатываются специальные системы доставки белковых препаратов, направленные на преодоление выш перечисленных проблем. Однако многие методы микрокапсулирования (получение липосом, смешанных мицелл, множественных эмульсий, микроэмульсий и др.) не лишены серьёзных недостатков, среди которых использование органических растворителей и жёстких условий капсулирования, что в случае инсулина может привести к значительной потере активности. На основе полиэлектролитов созданы системы доставки, способные с различной специфичностью высвобождать белки в заданных отделах желудочно-кишечного тракта. К ним относятся 5 включение белка в различные гидрогели, образование наночастиц ионотропным гелеобразованием и адсорбцией усиливающих биодоступность агентов на агрегатах белка.

В работе для микрокапсулирования инсулина выбрана последовательная адсорбция противоположно заряженных природных полиэлектролитов на микроагрегатах комплекса белок-полианион. Способ характеризуется простотой методики и возможностью проведения в мягких водных условиях при комнатной температуре. Полиэлектролитные микрочастицы являются стабильными и рН-чув твительными.

Целью настоящей работы являлось получение полиэлектролитных микрочастиц, обеспечивающих повышенную биодоступность рекомбинантных инсулинов при пероральном применении.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

• Получить и охарактеризовать полиэлектролитные микрочастицы, содержащие рекомбинантные инсулины.

• Выявить свойства микрочастиц, обеспечивающие увеличение биодоступности инсулина при пероральном введении.

• Включить в полиэлектролитные микрочастицы белковые ингибиторы протеолитических ферментов для защиты микрокапсулированного инсулина от воздействия протеаз желудочно-кишечного тракта.

• Оценить in vivo биологическое действие препарата микрокапсулированного инсулина.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Печенкин, Михаил Александрович

выводы

1. Разработан и оптимизирован метод получения микрочастиц с рекомбинантными инсулинами (человека, аспарт и лизпро) путем последовательной адсорбции хитозана и декстрансульфата на микроагрегатах нерастворимого полиэлектролитного комплекса. Частицы характеризуются небольшими размерами 3-9 мкм, высокой эффективностью включения (62 - 68 %) и значительным содержанием (57-63 %) инсулина.

2. Выявлено мультифункциональное действие микрочастиц с четырьмя стадиями сорбции полиэлектролитов на факторы, повышающие биодоступность микрокапсулированного белка при пероральной доставке. Действие состоит в защите от агрессивной среды желудочного сока, проявлении мукоадгезивных свойств, высвобождении микрокапсулированных инсулинов в условиях тонкого кишечника, связывании ионов кальция и уменьшении протеолиза белков под действием ферментов желудочно-кишечного тракта человека.

3. Впервые в состав полиэлектролитных микрочастиц одновременно включены мономерные инсулины и различные белковые ингибиторы протеаз. Наличие в микрочастицах 2 — 3 % соевого ингибитора типа Баумана-Бирк полностью предотвращает деградацию инсулина человека протеазами тонкого кишечника человека и значительно ослабляет деградацию мономерных инсулинов аспарт и лизпро, которые являются более перспективными для пероральной доставки.

4. В биологических экспериментах подтверждено сохранение активности инсулина при его включении в микрочастицы. По гипогликемическому действию при подкожном введении кроликам микрокапсулированный инсулин не отличался от инсулина в растворе в той же дозе (4 МЕ/кг). Однократное пероральное введение микрокапсулированного инсулина в низких дозах (10 и 25 МЕ/кг) крысам со стрептозотоцин-индуцированным диабетом вызывало пролонгированный (до 12 ч) гипогликемический эффект. При этом биодоступность микрокапсулированного инсулина составила 10,7 %. Иммуноферментный анализ показал рост содержания инсулина в крови крыс при пероральном введении микрокапсулированного инсулина.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе были подобраны условия для получения мультифункциональных микрочастиц с рекомбинантными инсулинами (человека, аспарт, лизпро) из биосовместимых и биодеградируемых полиэлектролитов. Микрочастицы были охарактеризованы по составу и физико-химическим свойствам. Микрочастицы с четырьмя стадиями сорбции полиэлектролитов связывали кальций, уменьшали деградацию микрокапсулированного инсулина под действием протеаз желудочно-кишечного тракта человека и проявляли мукоадгезивные свойства. Для дополнительной защиты инсулина от протеолиза изучено включение ингибиторов протеаз в микрочастицы. Наилучшую эффективность показал метод включения ингибиторов протеаз на стадии образования нерастворимого полиэлектролитного комплекса с полианионом. Ингибитор типа Баумана-Бирк высвобождался из микрочастиц одновременно с инсулином и наиболее эффективно защищал белок от протеолиза в модельных средах. In vivo показано сохранение биологической активности инсулина в процессе получения микрочастиц, а также повышение концентрации инсулина в крови крыс с диабетом после перорального введения. На основании оценки гипогликемического эффекта рассчитана биодоступность микрокапсулированного инсулина при пероралыюм введении.

Обобщая полученные результаты, общий принцип действия при пероральном применении полиэлектролитных инсулинсодержащих микрочастиц из декстрансульфата и хитозана, содержащих ингибитор протеаз, можно представить следующим образом (рис. 53).

• Инсулин ¡J Протеаза о Ингибитор

Слизистая оболочка Эпителий кишечника

Рис. 53. Схема предполагаемого действия в тонком кишечнике мультифункциональных полиэлектролитных микрочастиц, содержащих инсулин и ингибитор протеаз.

Полиэлектролитные микрочастицы в = 4 защищают капсулированный белок при воздействии кислой среды желудка, содержащей пепсин. Положительный ^-потенциал усиливает прилипание микрочастиц к отрицательно заряженной поверхности эпителия тонкого кишечника, а их мукоадгезивные свойства обеспечивают прочный и продолжительный контакт частиц со слизистой эпителия.

С увеличением рН по мере продвижения по кишечнику из микрочастиц происходит одновременное и постепенное высвобождение инсулина и ингибитора протеаз. Инсулин высвобождается в высокой концентрации в непосредственной близости от места абсорбции. Локальное выделение ингибитора в низких дозах не нарушая пищеварения должно защитить белок от воздействия протеаз поджелудочной железы, что особенно важно для более подверженных протеолизу мономерных форм инсулина. Таким образом, белок высвободится вблизи поверхности слизистой тонкого кишечника в активном состоянии.

Как известно, в месте контакта с эпителием хитозан за счет специфических взаимодействий с белками плотных контактов клеток эпителия (окклюдином, актином и ZO-\) способен обратимо повысить межклеточную проницаемость [191, 192, 194]. Са2+-Связывающее действие микрочастиц усиливает раскрытие ПКК [233, 234] и ослабляет адгезионные контакты, обеспеченные кадгерином [244] (рис. 54). Одновременное задействование обоих механизмов должно способствовать более эффективному транспорту белка в кровоток.

Инсулин человека высвобождается из микрочастиц в виде гексамера, в то время как быстродействующие аналоги инсулины аспарт и лизпро — в виде мономеров. Размер межклеточного пространства между клетками эпителия кишечника в нормальном состоянии составляет от 1 до 5 нм [199], а ослабление плотных контактов клеток эпителия должно его дополнительно увеличить. В связи с этим вероятность парацеллюлярного транспорта мономерных аналогов инсулина, имеющих средний размер 2,3 нм, больше, чем у гексамера инсулина размером 5 нм.

Рис. 54. Схематическое изображение апикального билипидного слоя эпителиальных клеток тонкого кишечника и основных компонентов контактов эпителиальных клеток с указанием пути трансцеллюлярной пассивной диффузии [244].

Изменение положительного поверхностного заряда микрочастиц на отрицательный после высвобождения инсулина должно способствовать выведению из кишечника их остатков, состоящих из хитозана и декстрансульфата. Полиэлектролиты благодаря высокой молекулярной массе не должны абсорбироваться в ЖКТ и, следовательно, не должны вызывать нежелательных системных эффектов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Печенкин, Михаил Александрович, 2012 год

1. Кнунянц И.Л. Химическая энциклопедия. М.: Советская энциклопедия. 1990. Т. 2, 673 с.

2. Балаболкин М.И. Эндокринология М.: Universum Publishing. 1998, 632 с.

3. Информационный бюллетень № 312, Август 2011 г // ВОЗ. URL: http://\vww.who.int/mediacentre/factsheets/fs312/ru/index.html.

4. Социальный отчет 2007 // Ново Нордиск Россия. URL: http:/Novo-nordisk.ru/media/pdf/Socialreport2007.pdf.

5. Corbett J.A. Insulin biosynthesis: The IREny of it all // Cell. Metab. 2006. V. 4. № 3. P. 175-176.

6. Балаболкин М.И., Клебанова E.M., Креминская B.M. Лечение сахарного диабета и его осложнений-М.: Медицина. 2005, 512 с.

7. Stare А.А., Heinemann L., Hohmann A., Berger M. The action profile of human NPH insulin preparations // Diabet. Med. 1989. V. 6. № 3. P. 239 244.

8. Байрамишвили Д.И., Беликова E.M., Кудлай Д.А. Анализ отечественного рынка лекарственных препаратов инсулина человека // Биофарм. журнал. 2010. Т. 2. № 1. С. 3-13.

9. Gómez-Pérez F.J., Rull J.A. Insulin therapy: current alternatives // Arch. Med. Res. 2005. V. 36. № 3. P. 258-272.

10. Peppas N.A., Kavimandan N.J. Nanoscale analysis of protein and peptide absorption: insulin absorption using complexation and pH-sensitive hydrogels as delivery vehicles // Eur. J. Pharm. Sci. 2006. V. 29. № 3 4. P. 183 - 197.

11. Insulin Pump // American Diabetes Association. URL: http://www.diabetes.org/living-with-diabetes/treatment-and-care/medication/insulin/insulin-pumps.html.

12. Pillai O., Panchagnula R. Insulin therapies past, present and future // Drug Discov. Today. 2001. V. 6. №20. P. 1056- 1061.

13. Yip C.M., Brader M.L., Frank B.H., DeFelippis M.R., Ward M.D. Structural studies of a crystalline insulin analog complex with protamine by atomic force microscopy // Biophys. J. 2000. V. 78. № 1. P. 466 473.

14. Trehan A., Ali A. Recent approaches in insulin delivery // Drug Dev. Ind. Pharm. 1998. V. 24. № 7. p. 589 597.18. §enel S. Potential applications of chitosan in oral mucosal delivery // J. Drug Del. Sci. Tech. 2010. V. 20. № l.P. 23-32.

15. Pather S.I., Rathbone M.J., Senel S. Current status and the future of buccal drug delivery systems // Expert Opin. Drug Deliv. 2008. V. 5. № 5. P. 531 542.

16. Sudhakar Y., Kuotsu K., Bandyopadhyay A.K. Buccal bioadhesive drug delivery a promising option for orally less efficient drugs // J. Control. Release. 2006. V. 114. № 1. P. 15-40.

17. Patel V.F., Liu F., Brown M.B. Advances in oral transmucosal drug delivery // J. Control. Release. 201 l.V. 153. №2. P. 106-116.

18. Consuelo I.D., Jacques Y., Pizzolato G., Guy R.H., Falson F. Comparison of the lipid composition of porcine buccal and esophageal permeability barriers // Arch. Oral Biol. 2005. V. 50. № 12. P. 981 -987.

19. Squier C.A., Senel S., Wertz P. Oral (buccal) mucosal drug delivery, promises and probabilities // STP Pharma Prat. 2000. V. 10. P. 47 54.

20. Collins L.M.C., Dawes C. The surface area of the adult human mouth and thickness of the salivary film covering teeth and oral mucosa // J. Dent. Res. 1987. V. 66. P. 1300 1302.

21. Pozzilli P., Manfrini S., Costanza F., Coppolino G., Cavallo M.G., Fioriti E., Modi P. Biokinetics of buccal spray insulin in patients with type 1 diabetes // Metabol. Clin. Exp. 2005. V. 54. № 7. P. 930 934.

22. Xu H., Huang K., Zhu Y., Gao Q., Wu Q., Tian W., Sheng X., Chen Z., Gao Z. Hypoglycaemic effect of a novel insulin buccal formulation on rabbits // Pharmacol. Res. 2002. V. 46. № 5. P. 459 467.

23. RapidMist™ // Generex Biotechnology Corporation. URL: http://www.generex.com/index.php/id/261.

24. Makhlof A., Werle M., Takeuchi H. Mucoadhesive drug carriers and polymers for effective drug delivery // J. Drug Del. Sci. Tech. 2008. V. 18. № 6. P. 375 386.

25. Patton J.S. Mechanisms of macromolecule absorption by the lungs // Adv. Drug Deliv. Rev. 1996. V. 19. № 1. p. 3-36.

26. Schulz H. Mechanisms and factors affecting intrapulmonary particle deposition: implications for efficient inhalation therapies // Pharm. Sci. Technol. Today 1998. V. 1. № 8. P. 326 334.

27. Diabetes (type 1 and 2), Inhaled Insulin Appraisal Consultation Document (second) // National Institute for Health and Clinical Excellence. URL: http://wAvw.nice.org.uk/guidance/index.jsp?action=article&r=true&o=33783.

28. Lima I.S., Airoldi C. A thermodynamic investigation on chitosan-divalent cation interactions // Thermochimica Acta. 2004. V. 421. № 1 2. P. 133 - 139.

29. Stock Exchange no 2 / 2008 // Novo Nordisk A/S. URL: http://www.novonordisk.com/include/asp/exenewsattachment.asp?sAttachmentGUID=15 31cc83-f75c-4368-995e-f0667112304f.

30. Ilium L. Nasal delivery of peptides, factors affecting nasal absorption // Topics in Pharmaceutical Sciences eds. Crommelin D.J.A., Midha K.K.. Stuttgart : Medpharm Scientific. 1992. P. 71-82.

31. Hinchcliffe M., Ilium L. Intranasal insulin delivery and therapy // Adv. Drug Deliv. Rev. 1999. V. 35. № 2 3. P. 199 - 234.

32. Soane R.J., Frier M., Perkins A.C., Jones N.S., Davis S.S., Ilium L. Evaluation of the clearance characteristics of bioadhesive systems in humans // Int. J. Pharm. 1999. V. 178. № l.P. 55-65.

33. O'Hagan D.T., Ilium L. Absorption of peptides and proteins from the respiratory tract and the potential for development of locally administered vaccine // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1990. V. 7. № 1. P. 35 97.

34. Schipper N.G.M., Olsson S., Hoogstraate J.A., deBoer A.G., Varum K.M., Artursson P. Chitosans as absorption enhancers for poorly absorbable drugs. 2: Mechanism of absorption enhancement // Pharm. Res. 1997. V. 14. № 7. P. 923 929.

35. Hirai S., Yashiki T., Mima H. Mechanisms for the enhancement of the nasal absorption of insulin by surfactants // Int. J. Pharm. 1981. V. 9. № 2. P. 173 184.141

36. Barry B.W. Novel mechanisms and devices to enable successful transdermal drug delivery // Eur. J. Pharm. Sci. 2001. V. 14. №2. P. 101-114.

37. Prausnitz M.R., Mitragotri S., Langer R. Current status and future potential of transdermal drug delivery//Nat. Rev. Drug Discov. 2004. V. 3. № 2. P. 115 124.

38. Kanikkannan N., Kandimalla K., Lamba S.S., Singh M. Structure-activity relationship of chemical penetration enhancers in transdermal drug delivery // Curr. Med. Chem. 2000. V. 7. № 6. P. 593 608.

39. Cevc G. Transdermal drug delivery of insulin with ultradeformable carriers // Clin. Pharmacokinet. 2003. V. 42. № 5. P. 461 474.

40. Curdy C., Kalia Y.N., Guy R.H. Non-invasive assessment of the effects of iontophoresis on human skin in-vivo // J. Pharmacol. 2001. V. 53. № 6. P. 769 777.

41. Kanikkannan N. Iontophoresis-based transdermal delivery systems // BioDrugs. 2002. V. 16. №5. P. 339-347.

42. Machet L., Boucaud A. Phonophoresis: efficiency, mechanisms and skin tolerance // Int. J. Pharm. 2002. V. 243. № 1 2. P. 1 - 15.

43. Mitragotri S., Kost J. Low-frequency sonophoresis. A review // Adv. Drug Deliv. Rev. 2004. V. 56. №5. P. 589-601.

44. Transdermal & Microneedle Technologies // 3M Drug Delivery Systems. URL: http://solutions.3m.com/wps/portal/3M/enWW/3M-DDSD/Drug-Delivery-Systems/Transdermal-Microneedle-Directory.

45. Shivanand P. Non-invasive insulin delivery systems: challenges and needs for improvement // Int. J. PharmTech Res. 2010. V. 2. № 1. P. 603 614.

46. Xuan B., McClellan D.A., Moore R., Chiou G.C. Alternative delivery of insulin via eye drops // Diabetes Technol. Ther. 2005. V. 7. № 5. P. 695 698.

47. Muzzarelli R.A.A., Muzzarelli C. Chitosan chemistry: relevance to the biomedical sciences //Adv. Polym. Sci. 2005. V. 186. P. 151 -209.

48. Lassmann-Vague V., Raccah D. Alternatives routes of insulin delivery // Diabetes Metab. 2006. V. 32. № 5 Pt. 2. P. 513 522.

49. Carino G.P., Mathiowitz E. Oral insulin delivery // Adv. Drug Deliv. Rev. 1999. V. 35. №2-3. P. 249-257.

50. Schilling R.J., Mitra A.K. Intestinal mucosal transport of insulin // Int. J. Pharm. 1990. V. 62. № LP. 53-64.

51. Michel C., Aprahamian M., Defontaine L., Couvreur P., Damge C. The effect of site of administration in the gastrointestinal tract on the absorption of insulin from nanocapsules in diabetic rats // J. Pharm. Pharmacol. 1991. V. 43. № 1. P. 1 5.

52. Damge С., Hillaire-Buys D., Puech R., Hoeltzel A., Michel C., Ribes G. Effects of orally administered insulin nanocapsules in normal and diabetic dogs // Diab. Nutr. Metab. 1995. V. 8. P. 3 9.

53. Шмидт P., Тевс Г. Физиология человека M.: Мир. 1996. Т. 3, 198 с.

54. Haverstick D.M., Dickemper D., Gold A.H. Cycloheximide inhibition of insulin control of liver glycogen synthase b into a conversion // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1979. V. 87. № 1. P. 177-183.

55. Blackard W.G., Nelson N.C. Portal and peripheral vein immunoreactive insulin concentrations before and after glucose infusion // Diabetes. 1970. V. 19. № 5. P. 302 306.

56. Hamman, J.H., Enslin, G.M., Kotze, A.F. Oral delivery of peptide drugs: barriers and developments //BioDrugs. 2005. V. 1. № 3. P. 165 177.

57. Chen M.C., Sonaje K., Chen K.J., Sung H.W. A review of the prospects for polymeric nanoparticle platforms in oral insulin delivery // Biomaterials. 2011. V. 32. № 36. P. 9826 -9838.

58. Werle M., Takeuchi H. Strategies to overcome the enzymatic barrier // Oral delivery of macromolecular drugs: barriers, strategies and future trends, ed. Bernkop-Schnurch A.. -New York : Springer Science + Business Media. 2009. P. 65-83.

59. Damge C., Reis C.P., Maincent P. Nanoparticle strategies for the oral delivery of insulin // Expert Opin. Drug Deliv. 2008. V. 5. № 1. P. 1 24.

60. Zaghloul A., Taha E., Afouna M., Khattab I., Nazzal S. Ex vivo mucoadhesion and in vivo bioavailability assessment and correlation of ketoprofen tablet dosage forms containing bioadhesives // Pharmazie. 2007. V. 62. № 5. P. 346 350.

61. Платэ H.A., Старосельцева JI.K., Валуев Л.И., Сытов Г.А., Ульянова М.В., Валуев И.Л., Ванчугова Л.В. Раствор инсулина для перорального введения // Хим. -фарм. журн. 2006. Т. 40. № 4. С. 47 50.

62. Valuev L.I., Sytov G.A., Starosel'tseva L.K., Valuev I.L., Vanchugova L.V., Valueva T.A., Ul'yanova M.V., Plate N.A. Oral insulin preparation for regulation of the blood glucose level//Biomed. Khim. 2010. V. 4. № i.p. 112-115.

63. Изумрудов B.A. Явления самосборки и молекулярного "узнавания" в растворах (био)полиэлектролитных комплексов //Успехи химии. 2008. Т. 77. № 4. С. 401 -415.

64. EUDRAGIT® // American Association of Pharmaceutical Scientists (AAPS). URL: http://abstracts.aapspharmaceutica.com/ExpoAAPS09/Data/EC/Event/Exhibitors/33/product Brochurel.pdf.

65. Park K., Kwon I.C., Park K. Oral protein delivery: Current status and future prospect // React. Funct. Polym. 2011. V. 71. № 3. P. 280 287.

66. Smart J.D. The basics and underlying mechanisms of mucoadhesion // Adv. Drug Deliv. Rev. 2005. V. 57. №11. P. 1556- 1568.

67. Валуев И.Л., Сытов Г.А., Валуев Л.И., Валуева Т.А., Ульянова М.В., Плате Н.А. Ингибиторы протеолитических ферментов в терапии сахарного диабета // Вопр. мед. химии. 2001. Т. 47. № 1.С. 132-139.

68. Plate N.A., Valuev I.L., Sytov G.A., Valuev L.I. Mucoadhesive polymers with immobilized proteinase inhibitors for oral administration of protein drugs // Biomaterials. 2002. V. 23. №7. P. 1673-1677.

69. Besheer A., Wood K.M., Peppas N.A., Mader K. Loading and mobility of spin-labeled insulin in physiologically responsive complexation hydrogels intended for oral administration // J. Control. Release. 2006. V. 111. № 1 2. P. 73 - 80.

70. Martins S., Sarmento В., Souto E.B., Ferreira D.C. Insulin-loaded alginate microspheres for oral delivery Effect of polysaccharide reinforcement on physicochemical properties and release profile // Carbohydr. Polym. 2007. V. 69. № 4. P. 725 - 731.

71. Sarmento В., Ribeiro A.J., Veiga F., Ferreira D.C., Neufeld R.J. Insulin-loaded nanoparticles are prepared by alginate ionotropic pre-gelation followed by chitosan polyelectrolyte complexation // J. Nanosci. Nanotechnol. 2007. V. 7. № 8. P. 2833-2841.

72. Sarmento В., Ribeiro A., Veiga F., Sampaio P., Neufeld R., Ferreira D. Alginate/chitosan nanoparticles are effective for oral insulin delivery // Pharm. Res. 2007. V. 24. № 12. P. 2198-2206.

73. Zhang N., Li J., Jiang W., Ren C., Li J., Xin J., Li K. Effective protection and controlled release of insulin by cationic beta-cyclodextrin polymers from alginate/chitosan nanoparticles // Int. J. Pharm. 2010. V. 393. № 1 2. P. 212-218.

74. Sarmento В., Ribeiro A., Veiga F., Ferreira D. Development and characterization of new insulin containing polysaccharide nanoparticles // Colloids Surf. B: Bio interfaces. 2006. V. 53. №2. P. 193-202.

75. Sarmento В., Ribeiro A., Veiga F., Ferreira D., Neufeld R. Oral bioavailability of insulin contained in polysaccharide nanoparticles // Biomacromolecules. 2007. V. 8. № 10. P. 3054-3060.

76. Cui F., Zhang L., Zheng J., Kawashima Y. A study of insulin-chitosan complex nanoparticles used for oral administration // J. Drug Del. Sci. Tech. 2004. V. 14. № 6. P. 435-439.

77. Sonaje K., Lin Y.H., Juang J.H., Wey S.P., Chen C.T., Sung H.W. In vivo evaluation of safety and efficacy of self-assembled nanoparticles for oral insulin delivery // Biomaterials. 2009. V. 30. № 12. P. 2329-2339.

78. Dai Z., Heilig A., Zastrow H., Donath E., Môhwald H. Novel formulations of vitamins and insulin by nanoengineering of polyelectrolyte multilayers around microcrystals // Chemistry. 2004. V. 10. № 24. P. 6369 6374.

79. Балабушевич Н.Г., Ларионова Н.И. Получение и характеристика полиэлектролитных микрочастиц с белком //Биохимия. 2004. Т. 69. № 7. С. 930 936.

80. Балабушевич Н.Г., Вихорева Г.А., Михальчик Е.В., Ларионова Н.И. Получение и свойства рН-чувствительных наноструктурированных полиэлектролитных микрочастиц с инсулином // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2010. Т. 51. № 3. С. 178-184.

81. Zheng J., Yue X., Dai Z., Wang Y., Liu S., Yan X. Novel iron-polysaccharide multilayered microcapsules for controlled insulin release // Acta Biomater. 2009. V. 5. № 5. P. 1499 -1507.

82. Балабушевич Н.Г., Изумрудов B.A., Зоров И.Н., Ларионова Н.И. Создание хитозан-содержащих полиэлектролитных микрочастиц для пероральной доставки белков // Биофарм. журнал. 2010. Т. 2. № 1. С. 35 -41.

83. Fan Y.F., Wang Y.N., Fan Y.G., Ma J.B. Preparation of insulin nanoparticles and their encapsulation with biodegradable polyelectrolytes via the layer-by-layer adsorption // Int. J. Pharm. 2006. V. 324. № 2. P. 158 167.

84. Fernândez-Urrusuno R., Calvo P., Remunân-Lôpez C., Vila-Jato J.L., Alonso M.J. Enhancement of nasal absorption of insulin using chitosan nanoparticles // Pharm. Res. 1999. V. 16. № 10. P. 1576- 1581.

85. Балабушевич Н.Г., Изумрудов B.A., Ларионова Н.И. Белковые микрочастицы с контролируемой стабильностью, полученные послойной адсорбцией биополиэлектролитов // Высокомолек. соед. С. 2012. V. 54. № 4. Р. 1 14.145

86. Iler R.K. Multilayers of colloidal particles // J. Colloid Interface Sci. 1966. V. 21. № 6. P. 569-594.

87. Decher G. Fuzzy Nanoassemblies: Toward Layered Polymeric Multicomposites // Science. 1997. V. 277. № 5330. P. 1232 1237.

88. Zhao J., Cui Y., Wang A., Fei J., Yang Y., Li J. Side effect reduction of encapsulated hydrocortisone crystals by insulin/alginate shells // Langmuir. 2011. V. 27. № 4.-P. 1499 -1504.

89. Kamiya N., Klibanov A.M. Controling the rate of protein release from polyelectrolyte complexes // Biotechnol. Bioeng. 2003. V. 82. № 5. P. 590 594.

90. Balabushevich N.G, Lebedeva O.V., Vinogradova O.I., Larionova N.I. Polyelectrolyte assembling for protein microencapsulation // J. Drug Del. Sci. Tech. 2006. V. 16. № 4. P. 315 — 319.

91. Ю2.Балабушевич Н.Г., Сухорукое Г.В., Ларионова Н.И. Включение белков в полиэлектролитные микрокапсулы из декстран сульфата, протамина и меламинформальдегида // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2002. V. 43. № 6. Р. 370-376.

92. Qi W., Duan L., Li J. Fabrication of glucose-sensitive protein microcapsules and their applications // Soft Matter. 2011. V. 7. № 5. P. 1571 1576.

93. Lee H., Jeong Y., Park T.G. Shell cross-linked hyaluronic acid/polylysine layer-by-layer polyelectrolyte microcapsules prepared by removal of reducible hyaluronic acid microgel cores // Biomacromolecules. 2007. V. 8. № 12. P. 3705 3711.

94. Rivera-Gil P., De Koker S., De Geest B.G., Parak W.J. Intracellular processing of proteins mediated by biodegradable polyelectrolyte capsules // Nano Lett. 2009. V. 9. № 12. P. 4398-4402.

95. Langguth P., Bohner V., Heizman J., Merkle H.P., Wolfram S., Amidon G.L., Yamashita S. The challenge of proteolytic enzymes in intestinal peptide delivery // Int. J. Pharm. 1997. V. 46. № 1-2. P. 39-57.

96. Liu F.Y.,Mitra A.K. Insulin aggregation in aqueous media and its effect on alpha-chymotrypsin-mediated proteolytic degradation // Pharm. Res. 1991. V. 8. № 7. P. 925 -929.

97. Bohe M., Borgstrom A., Genell S., Ohlsson K. Determination of immunoreactive trypsin, pancreatic elastase and chymotrypsin in extracts of human feces and ileostomy drainage // Digestion. 1983. V. 27. № 1. P. 8 15.

98. Takeuchi H., Yamamoto H., Niwa T., Hino T., Kawashima Y. Enteral absorption of insulin in rats from mucoadhesive chitosan-coated liposomes // Pharm. Res. 1996. V. 13. № 6. P. 896-901.

99. Sajeesh S., Vauthier C., Gueutin C., Ponchel G., Sharma C.P. Thiol functionalized polymethacrylic acid-based hydrogel microparticles for oral insulin delivery // Acta Biomater. 2010. V. 6. № 8. P. 3072 3080.

100. Dorkoosh F.A., Verhoef J.C., Borchard G., Rafiee-Tehrani M., Junginger H.E. Development and characterization of a novel peroral peptide drug delivery system // J. Control. Release. 2001. V. 71. №3. P. 307-318.

101. Reis C.P., Veiga F.J., Ribeiro A.J., Neufeld R.J., Damge C. Nanoparticulate biopolymers deliver insulin orally eliciting pharmacological response // J. Pharm. Sei. 2008. V. 97. № 12. P. 5290-5305.

102. Woitiski C.B., Neufeld R.J., Veiga F., Carvalho R.A., Figueiredo I.V. Pharmacological effect of orally delivered insulin facilitated by multilayered stable nanoparticles // Eur. J. Pharm. Sei. 2010. V. 41. № 3 4. P. 556 - 563.

103. Bernkop-Schnürch A., Marschütz M.K. Development and in vitro evaluation of systems to protect peptide drugs from aminopeptidase N//Pharm. Res. 1997. V. 14.№2. P. 181 185.

104. Wu Z.H., Ping Q.N., Song Y.M., Lei X.M., Li J.Y., Cai P. Studies on the insulin-liposomes double-coated by chitosan and chitosan-EDTA conjugates // Yao Xue Xue Bao. 2004. V. 39. № 11. P. 933-938.

105. Loretz B., Föger F., Werle M., Bernkop-Schnürch A. Oral gene delivery: Strategies to improve stability of pDNA towards intestinal digestion // J. Drug Targ. 2006. V. 14. № 5. P. 311 -319.

106. Biruss B., Valenta C. Skin permeation of different steroid hormones from polymeric coated liposomal formulations // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2006. V. 62. № 2. P. 210-219.

107. Bernkop-Schnürch A., Gockel N.C. Development and analysis of a polymer protecting from luminal enzymatic degradation caused by a-chymotrypsin // Drug Dev. Ind. Pharm. 1997. V. 23. №8. P. 733-740.

108. Madsen F., Peppas N.A. Complexation graft copolymer networks: swelling properties, calcium binding and proteolytic enzyme inhibition // Biomaterials. 1999. V. 20. № 18. P. 1701- 1708.

109. Akiyama Y., LueBen H.L., de Boer A.G., Verhoef J.C., Junginger H.E. Design of fast dissolving poly(acrylate) and controlled drug releasing capsule formulations with trypsin inhibiting properties // Int. J. Pharm. 1996. V. 138. № 1. P. 13 23.

110. Fujii S., Yokoyama T., Ikegaya K., Sato F., Yokoo N. Promoting effect of the new chymotrypsin inhibitor FK-448 on the intestinal absorption of insulin in rats and dogs // J. Pharm. Pharmacol. 1985. V. 37. № 8. P. 545 549.

111. Yamamoto A., Taniguchi T., Rikyuu K., Tsuji T., Fujita T., Murakami M., Muranishi S. Effects of various protease inhibitors on the intestinal absorption and degradation of insulin in rats // Pharm. Res. 1994. V. 11. № 10. P. 1496 1500.

112. Werle M., Loretz B., Entstrasser D., Foger F. Design and evaluation of a chitosan-aprotinin conjugate for the peroral delivery of therapeutic eptides and proteins susceptible to enzymatic degradation // J. Drug Targ. 2007. V. 15. № 5. P. 327 333.

113. Drapeau G., Petitclerc E., Toulouse A., Marceau F. Dissociation of the antimicrobial activity of bacitracin USP from its renovascular effects // Antimicrob. Agents Chemother. 1992. V. 36. № 5. P. 955-961.

114. Watanabe S., Takeuchi T., Chey W.Y. Mediation of trypsin inhibitor-induced pancreatic hypersecretion by secretin and cholecystokinin in rats // Gastroenterology. 1992. V. 102. №2. P. 621 -628.

115. Bernkop-Schnurch A., Scerbe-Saiko A. Synthesis and in vitro evaluation of chitosan-EDTA-protease inhibitor conjugates which might be useful in oral delivery of peptides and proteins //Pharm. Res. 1998. V. 15. №2. P. 263-269.

116. Bernkop-Schnurch A., Bratengeyer I., Valenta C. Development and in vitro evaluation of a drug delivery system protecting from trypsinic degradation // Int. J. Pharm. 1997. V. 157. № 1. P. 17-25.

117. McClellan J.B.Jr, Garner C.W. Purification and properties of human intestine alanine aminopeptidase // Biochim. Biophys. Acta. 1980. V. 613. № 1. P. 160 167.

118. Langguth P., Bohner V., Biber J., Merkle H.P. Metabolism and transport of the pentapeptide metkephamid by brush-border membrane vesicles of rat intestine // J. Pharm. Pharmacol. 1994. V. 46. № i.p. 34-40.

119. Kimura T., Sato K., Sugimoto K., Tao R., Murakami T., Kurosaki Y., Nakayama T. Oral administration of insulin as polyvinyl alcohol)-gel spheres in diabetic rats // Biol. Pharm. Bull. 1996. V. 19. №6. P. 897-900.

120. Larionova N.V., Ponchel G., Duchene D., Larionova N.I. Biodegradable cross-linked starch/protein microcapsules containing proteinase inhibitor for oral protein administration // Int. J. Pharm. 1999. V. 189. №2. P. 171-178.

121. Esposito E., Cortesi R., Bortolotti F., Menegatti E., Nastruzzi C. Production and characterisation of biodegradable microparticles for the controlled delivery of protease inhibitors // Int. J. Pharm. 1996. V. 129. № 1 2. P. 263 - 273.

122. Krauland A.H., Guggi D., Bernkop-Schnurch A. Oral insulin delivery: the potential of thiolated chitosan-insulin tablets on non-diabetic rats // J. Control. Release. 2004. V. 95. № 3. P. 547-555.

123. Marschtitz M.K., Bernkop-Schnurch A. Oral peptide drug delivery: polymer-inhibitor conjugates protecting insulin from enzymatic degradation in vitro // Biomaterials. 2000. V. 21. № 14. P. 1499-1507.

124. Nagai T., Morishita M., Maitani Y. Trials of enteral delivery of peptide drugs // Recent Adv. in Peptide and Protein Delivery, 8th Int. Pharm. Tech. Symp., Ankara. 1996. P. 45 57.

125. Kidron M., Krausz M.M., Raz I., Bar-On H., Ziv E. The absorption of insulin // Tenside Surf. Det. 1989. V. 26. № 3. P. 352 354.

126. Veuillez F., Kalia Y.N., Jacques Y., Deshusses J., Buri P. Factors and strategies for improving buccal absorption of peptides // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2001. V. 51. № 2. P. 93-109.

127. Caramella C., Ferrari F., Bonferoni M.C., Rossi S., Sandri G. Chitosan and its derivatives as drug penetration enhancers // J. Drug Del. Sci. Tech. 2010. V. 20. № 1. P. 5 13.

128. Gordon Still J. Development of oral insulin: progress and current status // Diabetes Metab. Res. Rev. 2002. V. 18. № 1. P. S29 S37.

129. Norris D.A., Puri N., Sinko P.J. The effect of physical barriers and properties on the oral absorption of particulates // Adv. Drug Deliv. Rev. 1998. V. 34. № 2 3. P. 135 - 154.

130. Slomiany B.L., Murty V.L., Piotrowski J., Slomiany A. Salivary mucins in oral mucosal defense // Gen. Pharmac. 1996. V. 27. № 5. P. 761 771.

131. Attivi D., Wehrle P., Ubrich N., Damge C., Hoffman M., Maincent P. Formulation of insulin-loaded polymeric nanoparticles using response surface methodology // Drug Dev. Ind. Pharm. 2005. V. 31. № 2. P. 179 89.150

132. Bures P., Huang Y., Oral E., Peppas N.A. Surface modifications and molecular imprinting of polymers in medical and pharmaceutical applications // J. Control. Release. 2001. V. 72. №1-3. P. 25-33.

133. Ludwig A. The use of mucoadhesive polymers in ocular drug delivery // Adv. Drug Deliv. Rev. 2005. V. 57. № 11. P. 1595- 1639.

134. Fefelova N., Nurkeeva Z., Mun G., Khutoryanskiy V. Mucoadhesive interactions of amphiphilic cationic copolymers based on 2-(methacryloyloxy) ethyl. trimethyl ammonium chloride // Int. J. Pharm. 2007. V. 339. № 1 2. P. 25 - 32.

135. He P., Davis S., Ilium L. In vitro evaluation of the mucoadhesive properties of chitosan microspheres // Int. J. Pharm. 1998. V. 166. № 1. P. 75 88.

136. Needleman I.G., Smales F.C. In vitro assessment of bioadhesion for periodontal and buccal drug delivery // Biomaterials. 1995. V. 16. № 8. P. 617 624.

137. Snyman D., Hamman J.H., Kotze A.F. Evaluation of the mucoadhesive properties of N-trimethyl chitosan chloride // Drug Dev. Ind. Pharm. 2003. V. 29. № 1. P. 61 69.

138. Thirawong N., Nunthanid J., Puttipipatkhachorn S., Sriamornsak P. Mucoadhesive properties of various pectins on gastrointestinal mucosa: an in vitro evaluation using texture analyzer // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2007. V. 67. № 1. P. 132 140.

139. Gu J.M., Robinson J.R., Leung S.H. Binding of acrylic polymers to mucin/epithelial surfaces: structure-property relationships // Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 1988. V. 5. № LP. 21-67.

140. Ch'ng H.S., Park H., Kelly P., Robinson J.R. Bioadhesive polymers as platforms for oral controlled drug delivery II: synthesis and evaluation of some swelling, water-insoluble bioadhesive polymers // J. Pharm. Sci. 1985. V. 74. № 4. P. 399 405.

141. Arya R.K.K., Singh R., Juyal V. Mucoadhesive microspheres of famotidine: preparation characterization and in vitro evaluation // Int. J. Eng. Sci. Tech. 2010. V. 2. № 6. P. 1575 -1580.

142. Shimoda J., Onishi H., Machida Y. Bioadhesive characteristics of chitosan microspheres to the mucosa of rat small intestine // Drug Dev. Ind. Pharm. 2001. V. 27. № 6. P. 567 576.151

143. Takishima J., Onishi H., Machida Y. Prolonged intestinal absorption of cephradine with chitosan-coated ethylcellulose microparticles in rats // Biol. Pharm. Bull. 2002. V. 25. №11. P. 1498- 1502.

144. Desai M.P., Labhasetwar V., Amidon G.L., Levy R.J. Gastrointestinal uptake of biodegradable microparticles: effect of particle size // Pharm. Res. 1996. V. 13. № 12. P. 1838- 1845.

145. Billings P.C., Brandon D.L., Habres J.M. Internalisation of the Bowman-Birk protease inhibitor by intestinal epithelial cells // Eur. J. Cancer. 1991. V. 7. № 27. P. 903 908.

146. Swaan P.W. Recent advances in intestinal macromolecular drug delivery via receptor-mediated transport pathways // Pharm. Res. 1998. V. 15. № 6. P. 826 834.

147. Bai J.P., Chang L.L. Transepithelial transport of insulin: I. Insulin degradation by insulin-degrading enzyme in small intestinal epithelium // Pharm. Res. 1995. V. 12. № 8. P. 1171 -1175.

148. Javelow J., Scott C.B., Mayer T.C. Fluorescent visualization of binding and internalization of the anticarcinogenic Bowman-Birk type protease inhibitors in transformed fibroblasts // Cancer Res. 1987. V. 47. № 6. P. 1602 1607.

149. Chalasani K.B., Russell-Jones G.J., Yandrapu S.K., Diwan P.V., Jain S.K. A novel vitamin B12-nanosphere conjugate carrier system for peroral delivery of insulin // J. Control. Release. 2007. V. 117. № 3. P. 421 -429.

150. Chiba H., Osanai M., Murata M., Kojima M., Sawada N. Transmembrane proteins of tight junctions // Biochim. Biophys. Acta. 2008. V. 1778. № 3. P. 588 600.

151. Deli M.A. Potential use of tight junction modulators to reversibly open membranous barriers and improve drug delivery // Biochim. Biophys. eta. 2009. V. 1788. № 4. P. 892 910.

152. Smith J.M., Dornish M., Wood E.J. Involvement of protein kinase C in chitosan glutamate-mediated tight junction disruption // Biomaterials. 2005. V. 26. № 16. P. 3269 3276.

153. Ilium L. Nanoparticulate systems for nasal delivery of drugs: a real improvement over simple systems? // J. Pharm. Sci. 2007. V. 96. № 3. P. 473 483.

154. Kriwet B., Kissel T. Poly(acrylic acid) microparticles widen the intercellular spaces of Caco-2 cell monolayers: An examination by confocal laser scanning microscopy // Eur. J. Pharm. Biopharm. 1996. V. 42. № 4. p. 233-240.

155. Kassab F.Jr, Marques R.P., Lacaz-Vieira F. Modeling tight junction dynamics and oscillations // J. Gen. Physiol. 2002. V. 120. № 2. P. 237 247.

156. Bravo-Osuna I., Millotti G., Vauthier C., Ponchel G. In vitro evaluation of calcium binding capacity of chitosan and thiolated chitosan poly(isobutyl cyanoacrylate) core-shell nanoparticles // Int. J. Pharm. 2007. V. 338. №1-2. P. 284 290.

157. Artursson P., Lindmark T., Davis S.S., Ilium L. Effect of chitosan on the permeability of monolayers of intestinal epithelial cells (Caco-2) // Pharm. Res. 1994. V. 11. № 9. P. 1358 -1361.

158. Thanou M., Verhoef J.C., Junginger H.E. Oral drug absorption enhancement by chitosan and its derivatives//Adv. DrugDeliv. Rev. 2001. V. 52. №2. P. 117- 126.

159. Dodane V., Amin Khan M., Merwin J.R. Effect of chitosan on epithelial permeability and structure// Int. J. Pharm. 1999. V. 182. № 1. P. 21 -32.

160. Smith J., Wood E., Dornish M. Effect of chitosan on epithelial cell tight junctions // Pharm. Res. 2004. V. 21. № 1. P. 43 49.

161. Amersham Biosciences. Dextran sulfate sodium salt // GE Healthcare Life Sciences. URL: https://www.gelifesciences.com/gehclsimages/GELS/Related%20Content/Files/131472311 6657/litdoc 18115175 AA20110830202529.pdf.

162. Tiyaboonchai W., Woiszwillo J., Sims R.C., Middaugh C.R. Insulin containing polyethylenimine-dextran sulfate nanoparticles // Int. J. Pharm. 2003. V. 255. № 1 2. P. 139-151.

163. Brems D.N., Alter L.A., Beckage M.J., Chance R.E., DiMarchi R.D., Green L.K., Long H.B., Pekar A.H., Shields J.E., Frank B.H. Altering the association properties of insulin by amino acid replacement // Protein Engineering. 1992. V. 5. № 6. P. 527 533.

164. Salama N.N., Eddington N.D., Fasano A. Tight junction modulation and its relationship to drug delivery // Adv. Drug Deliv. Rev. 2006. V. 58. № 1. P. 15 28.

165. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent//J. Biol. Chem. 1951. V. 193. № 1. p. 265-275.

166. Rick W. Chymotrypsin // Methods of enzymatic analysis ed. Bergmeyer H.V.. New York : Academic. 1992. V. 2. P. 1013 - 1018.

167. Kakade M.L., Simons N., Liener I.E. An evaluation of natural vs. synthetic substrates for measuring the antitryptic activity of soybean samples. // Cereal Chem. 1969. V. 46. № 5. P. 518-526.

168. Mantle M., Allen A. A colorimetric assay for glycoproteins based on the periodic acid/Schiff stain // Biochem. Soc. Trans. 1978. V. 6. № 3. P. 607 609.

169. Schwert G.W., Takenaka Y.A. A spectrophotometric determination of trypsin and chymotrypsin // Biochim. Biophys. Acta. 1965. V. 16. P. 570 576.

170. European Pharmacopoeia, 7th Edition Strasbourg: Council of Europe. 2011, 1000 p.

171. Bernkop-Schniirch A. Mucoadhesive systems in oral drug delivery. // Drug Discov. Today. 2005. V. 2. № LP. 83-87.

172. Sarmento В., Ribeiro A., Veiga F., Ferreira D. Development and validation of a rapid reversed-phase HPLC method for the determination of insulin from nanoparticulate systems // Biomed. Chromatogr. 2006. V. 20. № 9. P. 898 903.

173. Purvinis G., Cameron B.D., Altrogge D.M. Noninvasive polarimetric-based glucose monitoring: an in vivo study // J. Diabetes Sci. Technol. 2011. V. 5. № 2. P. 380 387.

174. Hauschke D., Steinijans V., Pigeot I. Bioequivalence Studies in Drug Development: Methods and Applications Chichester, UK : John Wiley and Sons. 2007, 328 p.154

175. Spector T. Refinement of the coomassie blue method of protein quantitation. A simple and linear spectrophotometry assay for less than or equal to 0.5 to 50 microgram of protein // Anal. Biochem. 1978. V. 86. № 1. P. 142 146.

176. Muzzarelli R.A.A. Colorimetric determination of chitosan // Anal. Biochem. 1998. V. 260. №2. P. 255-257.

177. Wischke C., Borchert H.-H. Increased sensitivity of chitosan determination by a dye binding method // Carbohydr. Res. 2006. V. 341. № 18. P. 2978 2979.

178. Prochazkova S., Varum K.M., 0stgaard K. Quantitative determination of chitosans by ninhydrin // Carbohydr. Polym. 1999. V. 38. № 2. P. 115 -122.

179. Svedas V.-J.K., Galaev I.J., Borisov I.L., Berezin I.V. The interaction of amino acids with o-phthaldialdehyde: a kinetic study and spectrophotometric assay of the reaction product // Anal. Biochem. 1980. V. 101. № 1. P. 188 195.

180. Blundell T., Dodson G., Hodgkin D., Mercola D. Insulin: the structure in the crystal and its reflection in chemistry and biology // Adv. Protein Chem. 1972. V. 26. P. 279 402.

181. Tanford C., Kirkwood J.G. Theory of protein titration curves. I. General equations for impenetrable spheres // J. Am. Chem. Soc. 1957. V. 79. № 20. P. 5333 5339.

182. Tanford C., Roxby R. Interpretation of protein titration curves. Application to lysozyme // Biochemistry. 1972. V. 11. № 11. P. 2192-2198.

183. Peppas N.A., Sahlin J.J. Hydrogels as mucoadhesive and bioadhesive materials: a review // Biomaterials. 1996. V. 17. № 16. P. 1553 1561.

184. Березин И.В., Казанская Н.Ф., Ларионова Н.И. Взаимодействие четырех активных форм трипсина со специфическим субстратом и панкреатическим ингибитором // Биохимия. 1970. V. 35. № 5. Р. 983 988.

185. Ascenzi P., Bocedi A., Bolognesi M., Spallarossa A., Coletta M., De Cristofaro R., Menegatti E. The bovine basic pancreatic trypsin inhibitor (Kunitz inhibitor): a milestone protein // Curr. Protein Pept. Sci. 2003. V. 4. № 3. P. 231 251.

186. Ларионова Н.И., Гладышева И.П., Тихонова T.B., Казанская Н.Ф. Ингибирование катепсина G и эластазы гранулоцитов человека множественными формами соевого ингибитора типа Баумана-Бирк // Биохимия. 1993. V. 58. № 9. Р. 1437 1444.

187. B6sterling В., Quast U. Soybean trypsin inhibitor (Kunitz) is doubleheaded. Kinetics of the interaction of alpha-chymotrypsin with each side // Biochim. Biophys. Acta. 1981. V. 657. № 1. P. 58-72.

188. Matsushima A., Ashida Y., Watanabe J., Hirata T. Characterization of recombinant p20 trypsin inhibitor, a new protein from Glicine max // Plant Biotechnol. 2003. V. 20. № 1. P. 93-96.

189. Izumrudov V.A., Volkova I.F., Gorshkova M.Yu. Chitosan-based polyelectrolyte complexes soluble in enzyme-friendly pH range // Macromol. Chem. Phys. 2010. V. 211. № 4. P. 453 -460.

190. González-Mariscal L., Tapia R., Chamorro D. Crosstalk of tight junction components with signalling pathways // Biochim. Biophys. Acta. 2008. V. 1778. № 3. P. 729 756.

191. Krizbai I.A., Deli M.A. Signalling pathways regulating the tight junction permeability in the blood-brain barrier // Cell. Mol. Biol. 2003. V. 49. № 1. P. 23 31.

192. Lima I.S., Airoldi C. Interaction of copper with chitosan and succinic anhydride derivative -a factorial design evaluation of the chemisorption process // Colloids and Surfaces A: Physicochem. Eng. Aspects. 2003. V. 229. № 1 3. P. 129 - 136.

193. Enzyme Explorer Pepsin // Sigma-Aldrich Co. LLC. URL: http://www.sigmaaldrich.com/life-science/metabolomics/enzyme-explorer/analytical-enzymes/pepsin.html.

194. SI Units for Clinical Data // The University of North Carolina at Chapel Hill. URL: http://www.unc.edu/~rowlett/units/scales/clinicaldata.html.

195. Marschütz M.K., Calceti P., Bernkop-Schniirch A. Design and in vivo evaluation of an oral delivery system for insulin // Pharm. Res. 2000. V. 17. № 12. P. 1468 1474.

196. Kararli T.T. Comparison of the gastrointestinal anatomy, physiology, and biochemistry of humans and commonly used laboratory animals // Biopharm. Drug. Dispos. 1995. V. 16. №5. P. 351 -380.

197. Sun S., Cui F., Kawashima Y., Liang N., Zhang L., Shi K., Yu Y. A novel insulin-sodium oleate complex for oral administration: preparation, characterization and in vivo evaluation // J. Drug Del. Sci. Tech. 2008. V. 18. № 4. P. 239 243.

198. Schwartz M.S., Chadha A. Type 2 diabetes mellitus in childhood: obesity and insulin resistance // J. Am. Osteopath. Assoc. 2008. V. 108. № 9. P. 518-524.

199. Damge C., Michel C., Aprahamian M., Couvreur P., Devissaguet J.P. Nanocapsules as carriers for oral peptide delivery // J. Control. Release. 1990. V. 13. № 2 3. P. 233 - 239.

200. First report of the BVA/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Removal of blood from laboratory mammals and birds // Lab. Anim. 1993. V. 27. № 1.

201. Avdeef A. Physicochemical profiling (solubility, permeability and charge state) // Curr. Top. Med. Chem. 2001. V. 1. № 4. P. 277 351.1. P. 1-22.