Морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток жировой ткани тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат медицинских наук Макаров, Андрей Витальевич

• Макаров, Андрей Витальевич
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Макаров, Андрей Витальевич

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность темы.

Цель и задачи исследования.

Научная новизна.

Научно-практическая значимость.

Положения, выносимые на защиту.

Апробация работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные методы коррекции дефицита соединительных тканей.

1.2. Методы тканевой инженерии.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Выделение культуры стромальных клеток жировой ткани.

2.2. Трансфекция культуры клеток маркерным геном Green Fluorescent Protein

2.3. Девитализация культуры клеток.

2.4. Постановка экспериментального исследования.

2.5. Гистологические методы исследования.

2.6. Иммуногистохимическое исследование.

2.7. Морфометрическое исследование.

2.8. Статистические методы исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Создание тканеинженерной конструкции.

3.2. Результаты морфологического исследования.

3.2.1. Интактная ткань.

3.2.2. Группа с введением тканеинженерной конструкции, содержащей аутологичную культуру стромальных клеток жировой ткани (АУ).

3.2.3. Группа с введением тканеинженерной конструкции, содержащей аллогенную культуру стромальных клеток жировой ткани (АЛ).

3.2.4. Группа с введением тканеинженерной конструкции, содержащей девитализированную культуру стромальных клеток жировой ткани (Д).

3.2.5. Группа с введением матрикса тканеинженерной конструкции без клеточной культуры (М).

3.3. Иммуногистохимическое исследование.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток жировой ткани»

Актуальность темы

В современной медицинской практике при различных дефектах соединительной ткани используется введение восполняющих объём препаратов. К таким дефектам соединительной ткани, нуждающимся в коррекции, относятся дегенеративные заболевания кожи и собственно соединительной ткани, врождённые заболевания мочевыводящих путей, стрессовое недержание мочи и ряд других заболеваний.

Так, например, для коррекции стрессового недержания мочи у женщин разработано более 200 терапевтических и хирургических подходов [Пушкарь Д.Ю., 1996]. Методом выбора являются слинговые (петлевые) операции [Кулаков В.И., 2000]. Однако при использовании минимально инвазивных слинговых методик, их эффективность не достаточна, также лечение может сопровождаться осложнениями в виде пролежней и/или прорезания в просвет уретры синтетической ленты, что требует разработки принципиально новых подходов.

Наиболее эффективными для коррекции дефектов собственно соединительной ткани являются методы, основанные на введении препаратов, создающих в области трансплантации дополнительный объём и направленные на достижение равновесного давления между мочевым пузырем и уретрой.

Преимущества данного подхода заключаются в том, что пара- или 4 периуретрально вводятся различные биоматериалы, которые образуют дополнительный искусственный неконтролируемый сфинктер, увеличивающий парциальное давление в просвете уретры [Pickard R., 2003], что также является конечной целью и при использовании слинговых операций.

В связи с тем, что создание такого препарата основано на способности организма реагировать на инородное тело, особые требования предъявляются к физико-химическим свойствам компонентов, входящих в его состав. Для создания продолжительного эффекта компоненты должны быть нетоксичными, длительное время сохраняться в области введения и не мигрировать в окружающие ткани.

В ряде работ показано, что использование клеточных суспензий (мультипотентных стромальных клеток) дает положительный эффект при введении в парауретральную область, который заключается во временной ремиссии клинических проявлений стрессового недержании мочи [Carr L.K., 2008; Mitterberger М., 2007]. Однако введение неприкрепленных клеток сопровождается их диффузной миграцией в окружающие ткани и массовой гибелью из-за стрессового воздействия изменений окружающей среды, в связи с чем данный эффект является непродолжительным. Поэтому перед исследователями стоит задача создать такой препарат, который был бы лишен этих недостатков. Данный препарат должен быть способным к восполнению собственного объёма, и замещать дефицит соединительной ткани. В связи с этим была поставлена задача создания тканеинженерной конструкции, которая включает клеточную культуру, способную восполнять объём соединительной ткани. При этом матрица-носитель должна обеспечивать сохранность клеток при малоинвазивном (инъекционном) способе введения, а также фиксировать клетки в месте введения.

При выборе оптимального носителя тканеинженерной конструкции были исключены многие синтетические препараты, из-за их неспособности к биодеградации, токсичности и неконтролируемым миграционным свойствам [Roques С., 2009; Fano V., 2007; Goldberg M., 2008]. Использование препаратов на основе полиэстеров органических кислот ограничено из-за невозможности создания инъекционной формы [Peter S.J., 1997]. Гели на основе коллагена и гиалуроновой кислоты не являются полностью биологически инертными и могут вызывать аллергические реакции [Hirsch R.J., 2008].

В качестве носителя тканеинженерной конструкции предложено использовать желатиновую губку. Желатин является продуктом денатурации коллагена, и поэтому, обладая всеми свойствами, характерными для коллагена, является невидоспецифичным, полностью инертным материалом, нашедшим широкое применение в медицине. Ряд авторов считает, что препараты на основе желатина являются оптимальными для создания биогелей и конструкций на их основе [Hsu S.H., 2007; Sung HW, 1999].

Выбор стромальной фракции жировой ткани в качестве клеточного компонента тканеинженерной конструкции был основан на соответствии культуры определенным параметрам. Благодаря малой травматичности забора первичного материала, получают именно аутологичную клеточную культуру. По данным литературы данная культура характеризуется высокой пролиферативной активностью и активным синтезом внеклеточного матрикса [Wang H.J., 2004]. При этом ряд авторов утверждает, что мультипотентные мезенхимальные стромальные клетки, выделенные именно из жировой ткани, обладают более выраженной способностью образовывать коллаген, при сравнении с клеточными культурами из других источников [Wagner W., 2005; Shvetsova E.V., 2008]. Однако, в современной литературе отсутствует описание морфологических изменений, которые развиваются при введении тканеинженерных конструкций на основе мультипотентных стромальных клеток фракции жировой ткани и желатиновой матрицы-носителя в область собственно соединительной ткани.

В свете приведенных положений, разрабатываемая проблема является актуальной, представляет не только теоретическое, но и практическое значение, что определяет актуальность данного экспериментального исследования.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является изучение морфологических изменений в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе мультипотентных стромальных клеток жировой ткани и желатиновой матрицы- но сите ля.

Для достижения указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Разработать тканеинженерную конструкцию (комбинированный трансплантат) на основе мультипотентных стромальных клеток фракции жировой ткани и желатиновой матрицы-носителя;

2. Изучить морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе аутологичной клеточной культуры мультипотнетных стромальных клеток жировой ткани

3. Изучить морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе аллогенной клеточной культуры мультипотентных стромальных клеток жировой ткани

4. Изучить морфологические изменения в парауретральной области при введении тканеинженерной конструкции на основе девитализированной клеточной культуры стромальных клеток жировой ткани и при введении только желатинового матрикса конструкции без клеточного компонента.

Научная новизна

Впервые дана сравнительная структурная характеристика реакции соединительной ткани на введение инъекционной формы тканеинженерной конструкции на основе клеточной культуры стромальных клеток жировой ткани. Разработана оригинальная инъекционная форма тканеинженерной конструкции, содержащая желатиновую губку и клеточную культуру мультипотентных стромальных клеток жировой ткани, характеризующуюся высокой пролиферативной активностью, которая впервые использовалана для парауретрального введения с целью коррекции дефектов соединительной ткани.

Парауретральное введение тканеинженерной конструкции, содержащей клеточную культуру стромальной фракции жировой ткани и желатиновую губку, в качестве носителя, сопровождается активным образованием соединительной ткани, что позволяет длительное время сохранять заданный объём. Сохранение массы образованной соединительной ткани конструкции обеспечивается функционированием трансплантированной культуры стромальных клеток жировой ткани. Трансплантация только носителя или носителя с девитализированной клеточной культурой даёт временный эффект и не приводит к выраженному образованию соединительной ткани и коллагеновых волокон.

Начальная стадия формирования соединительной ткани одинакова во всех группах и характеризуется преобладанием клеточного компонента в основных группах наблюдения. По мере удлинения срока эксперимента при использовании тканеинженерных конструкций, содержащих клеточные культуры, как аллогенные, так и аутологичные, отмечается увеличение объёма соединительной ткани, по сравнению с его деградацией в контрольных группах.

Иммуногистохимическое исследование выявило сохранение витальной метки Green fluorescent protein (GFP) на всех сроках эксперимента, что свидетельствует о длительном выживании трансплантированных клеточных культур.

Трансплантация тканеинженерной конструкции, содержащей аутологичную культуру стромальной фракции жировой ткани, вызывает наиболее быструю деградацию матрикса и образование максимального количества коллагеновых волокон даже на ранних сроках эксперимента и является максимально эффективной.

Научно-практическая значимость

На основе изучения морфологических изменений соединительной ткани парауретральной области после введения тканеинженерной конструкции показано, что наиболее эффективным является введение трансплантата, содержащего аутологичную клеточную культуру, что приводит к выраженному образованию коллагеновых волокон. Полученные данные открывают перспективы для разработки методов коррекции дефектов собственно соединительной ткани при ряде патологических состояний.

Положения, выносимые на защиту

1. Разработана инъекционная форма тканеинженерной конструкции, содержащая желатиновую губку и обладающую высокой пролиферативной активностью клеточную культуру стромальных клеток жировой ткани. При парауретральном введении тканеинженерной конструкции происходит образование собственно соединительной ткани.

2. Тканеинженерная конструкция, содержащая аутологичную клеточную культуру стромальной фракции жировой ткани, способствует в большей степени формированию соединительной ткани, по сравнению с аллогенной и девитализированной клеточной культурами

3. Девитализированная клеточная культура неэффективна для использования в составе тканеинженерной конструкции: при её трансплантации образование коллагеновых волокон не отличается от контрольной группы.

Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на Первом международный конгрессе по репродуктивной медицине "Проблемы репродукции, Конференции в РГМУ (Москва, 2006); Ежегодной Всёроссийской и международной научной конференции "Стволовые клетки и перспектива их использования в здравоохранении" (Москва, 2007); Британско-российском совещании в сотрудничестве с Европейской Комиссией «Стволовые клетки: законодательство, исследования и инновации. Международные перспективы сотрудничества» (Москва, 2007); XX юбилейном международном конгрессе с курсом эндоскопии "Современные технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний" (Москва, 2007); Всероссийской научной школе-конференции «Аутологичные стволовые клетки: экспериментальные и клинические исследования (Москва, 2009); межлабораторной конференции в Учреждении РАМН НИИ морфологии человека РАМН (май, 2009).

Публикации: По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, получен патент на изобретение. Объем и структура работы: Работа изложена на 125 страницах и состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания материалов и методов исследования (глава 2), изложения результатов собственных исследований (глава 3) и их обсуждения (глава 4), заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 59 рисунками. Указатель цитируемой литературы включает 86 источников.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Макаров, Андрей Витальевич

выводы

1. Разработана инъекционная форма тканеинженерной конструкции, содержащая желатиновую губку и обладающую высокой пролиферативной активностью клеточную культуру стромальных клеток жировой ткани. При парауретральном введении тканеинженерной конструкции происходит образование собственно соединительной ткани.

2. На ранних сроках после парауретральной инъекции тканеинженерных конструкций преобладают клеточные элементы, представленные макрофагами, фибробластами и фиброцитами, на поздних сроках — коллагеновые волокна.

3. При трансплантации тканеинженерной конструкции содержащей аутологичную клеточную культуру стромальной фракции жировой ткани клеточный компонент максимален, в его составе преобладают фибробласты, фиброциты и трансплантированные клетки, матрикс конструкции деградирует на ранних сроках, образование коллагеновых волокон значительно выше, чем в других группах наблюдения.

4. Трансплантация тканеинженерной конструкции, содержащей аллогенную культуру стромальной фракции жировой ткани характеризуется также выраженной клеточной инфильтрацией, представленной трансплантированными клетками, макрофагами, фибробластами и фиброцитами, быстрой деградацией матрикса конструкции и выраженным образованием коллагеновых волокон.

5. Трансплантация тканеинженерных конструкций, содержащих девитализированную клеточную культуру и изолировано желатиновый матрикс, вызывает выраженную макрофагальную реакцию, выявляется небольшое количество фибробластов и фиброцитов, длительное, даже на поздних сроках, сохранение матрикса конструкции и низкий уровень образования коллагеновых волокон.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ данных литературы и результаты, полученные нами в настоящем экспериментальном исследовании, дают основание утверждать, что предложенный нами метод получения тканеинженерной конструкции лишен основных недостатков и имеет ряд преимуществ, по сравнению с другими методами. Созданная тканеинженерная конструкция на основе стромальных клеток жировой ткани в комбинации с матрицей-носителем для локального формирования соединительной ткани в парауретральной области характеризуется тем, что её носитель быстро деградирует, наличие живых клеточных культур сопровождается образованием соединительной ткани и коллагеновых волокон. Преимущества использования тканеинженерной конструкции по сравнению с введением неприкреплённых суспензионных культур заключается в наличии оптимального микроокружения, обеспечивающего выживание клеток, а также препятствующего миграции клеток в окружающие ткани. Данные эффекты, а также наличие живых клеточных культур в составе конструкции обеспечивает длительное и локальное увеличение соединительной ткани и площади коллагеновых волокон.

В ходе работы было впервые предложено для поставленной цели использовать тканеинженерную конструкцию, в состав которой вошли стромальные клетки жировой ткани и желатиновая губка в качестве матрикса-носителя. Отработан стандартный протокол, позволяющий получать стандартизированную тканеинженерную конструкцию, пригодную для инъекционного введения.

Морфологическое исследование выявило, что при использовании тканеинженерной. конструкции, - содержащей живые клеточные культуры стромальной фракции жировой ткани, обеспечивается значительное формирование коллагеновых волокон в области введения на всех сроках эксперимента. При этом, введение тканеинженерной конструкции, содержащей аутологичную клеточную культуру наиболее эффективно. Отмечается быстрая деградация матрикса, выраженность клеточного компонента в области введения и достоверно более высокая площадь коллагеновых волокон.

При иммуногистохимическом исследовании трансплантированные клетки, меченные зелёным флюоресцентным белком, выявлялись на поздних сроках эксперимента.

В нашей работе, в качестве дополнительного контроля была использована тканеинженерная конструкция, содержащая девитализированную клеточную культуру. Однако, при сравнительном исследовании данной группы было отмечено длительное сохранение трансплантированного матрикса, незначительное формирование клеточной инфильтрации и образование коллагеновых волокон в области введения, статистически значимо не отличающееся от группы, в которой вводился только матрикс без клеточной культуры.

Следует отметить, что положительное влияние живых клеточных культур, как аутологичных, так и аллогенных, заключается в том, что они способствуют длительному сохранению объёма соединительной ткани и постоянному её пополнению за счёт их пролиферации, тем самым обеспечивая более длительное функционирование конструкции, что не всегда сопровождало пересадку раннее используемых в медицине препаратов.

Таким образом, данные, полученные в ходе экспериментального исследования, позволяют говорить об эффективности использования тканеинженерной конструкции, содержащей аутологичную клеточную культуру стромальной фракции жировой ткани для локального формирования соединительной ткани. Перечисленные преимущества тканеинженерной конструкции открывают перспективы в области лечения дефектов собственно соединительной ткани при ряде патологических состояний.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Макаров, Андрей Витальевич, 2009 год

1. Абоянц Р.К., Истранов Л.П., Истранова Е.В. Материалы и изделия медицинского назначения на основе природного биополимера коллагена. // Конгресс "Человек и лекарство". М., 1998

2. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Медицина, 1990.

3. Кулаков В.И., Адамян Л.В., Сашин Б.Е. Современные методы хирургической коррекции недержания мочи. // Эндоскопия в диагностике, лечении и мониторинге женских болезней. М., 2000; 592-621.

4. Панасюк А.Ф., Ларионов Е.В. Хондроитинсульфаты и их роль в обмене хондроцитов и межклеточного матрикса хрящевой ткани // Научно-практическая ревматология. №2. - 2000. - С.46-55.

5. Пушкарь Д.Ю. Диагностика и лечение сложных и комбинированных форм недержания мочи у женщин: Автореф. дисс. . д-ра мед. наук. М., 1996. -53 с.

6. Серов В. П., Шехтер А. Б., Соединительная ткань. Функциональная морфология и общая патология. М., 1981. 312 с.

7. Урбах В. Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. М.: Медицина, 1975. - 295 с.

8. Aboushwareb Т, Atala A. Stem cells in urology. // Nat Clin Pract Urol. 2008. -V. 5.-№ 11.-P. 621-631.

9. Agrawal C.M., Biodegradable PLA/PGA polymers for tissue engineering inorthopaedica. // Material Science. 1997. - V. 250. - P. 115-128.114

10. Alhadlaq A., Tang M., Mao J.J. Engineered adipose tissue from human mesenchymal stem cells maintains predefined shape and dimension: implications in soft tissue augmentation and reconstruction. // Tissue Eng. -2005.-№ 11.-P. 556-566.

11. Attawia M.A., Cytotoxocity testing of poly(anhydride) for orthopaedic applications. // J Biomed Mater Res. 1995. - V. 29. - P. 1233-1240.

12. Baksh D., Song L., Tuan. R.S. Adult mesenchymal stem cells: characterization, differentiation, and application in cell and gene therapy. // J. Cell. Mol. Med. -2004.- V. 8.-№3.-P. 301-316.

13. Beahm E.K., Walton R.L., Patrick C.W.Jr. Progress in adipose tissue construct development. // Clin Plast Surg. 2003. - V.30. - №4. - P. 547-558

14. Bello Y.M., Falabella A.F., Eaglstein W.H. Tissue-engineered skin. Current status in wound healing. // Am J Clin Dermatol. 2002. - V. 3. - № 7. P. 507512.

15. Burg K.J.L. Biomaterials development for bone tissue engineering. // Biomaterials. 2000. -V. 21. - P. 2347-2359.

16. Chappie C.R., Haab F., Cervigni M., Dannecker C., Fianu-Jonasson A., Sultan A.H. An open, multicentre study of NASHA/Dx Gel (Zuidex) for the treatment of stress urinary incontinence. // Eur Urol. 2005. - V. 48. - № 3. - P. 488-494.

17. Chu C.C. The in-vitro degradation of poly(glycolic acid) sutures- effect of pH. // J Biomed Mater Res. 1981. - № 15. - P. 795-804.

18. Corre J., Barreau C., Cousin B. Human subcutaneous adipose cells support complete differentiation but not self-renewal of hematopoietic progenitors. // J Cell Physiol. 2006 - V. 208. - P. 282-288.

19. Del Balso A.M., Kauffman F.C. Acid hydrolases in developing oro-facial structures of the rat. // Arch Oral Biol. 1975. - V. 20. - № 4. - P. 247-249.

20. Dicker A., Le Blanc K., Astrom G. Functional studies of mesenchymal stem cells derived from adult human adipose tissue. // Exp Cell Res. 2005. V. 308, P. 283-290.

21. Di Rocco G., Iachininoto M.G., Tritarelli A. Myogenic potential of adipose tissue-derived cells. // J Cell Sci. 2006 - V. 119. - P. 2945-2952.

22. Dominici M., Le Blanc K., Mueller I. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement. // Cytotherapy. 2006. - № 8. - P. 315-317.

23. Domb A.J., Langer R. Polyanhydrides I: Preparation of high molecular weight polyanhydrides. // J Polym Sci. 1987. - V. 25. - P. 3373-3386.

24. Enneking W.F., Eady J.L., Burchardt H. Autogenous cortical bone grafts in the reconstruction of segmental skeletal defects. // J Bone Joint Surg Am. -1980. V. 62. -№ 7. p. 1039-1058.

25. Estes B.T., Wu A.W., Guilak F. Potent induction of chondrocytic differentiation of human adipose-derived adult stem cells by bone morphogenetic protein 6. // Arthritis Rheum 2006. - V. 54. - P. 1222-1232.

26. Fano V., Shatel M., Tanzi M.L. Release phenomena and toxicity in polymer-based dental restorative materials. // Acta Biomed. 2007. - V. 78. - № 3. - P. 190-197.

27. Flynn L, Woodhouse KA. Adipose tissue engineering with cells in engineered matrices. // Organogenesis. 2008. - V.4. - № 4. - P. 228-235.

28. Frazier D.D. Ex vivo degradation of a poly(propylene glycol-fumarate) biodegradable particulate composite bone cement. // J Biomed Mater Res. -1997. V. 35. - № 3. - P. 383-389.

29. Friedenstein A.J, Kulagina N.N. Precursors for fibroblasts in different populations of hematopoietic cells as detected by the in vitro colony assay. // Exp. Hematology. 1974. - V. 2. - P. 83-92.

30. Goldberg M. In vitro and in vivo studies on the toxicity of dental resin components: a review. // Clin Oral Investig. 2008. - V. 12. - № 1. - P. 1-8.

31. Gorton E., Stanton S., Monga A., Wiskind A.K., Lentz G.M., Bland D.R. Periurethral collagen injection: a long-term follow-up study. // BJU Int. 1999. -V. 84. -№9. - P. 966-971.

32. Gregory C. D., Devitt A., The macrophage and the apoptotic cell: an innate immune interaction viewed simplistically? // Immunology. 2004. V. 113. - P. 1-14.

33. Gronthos S., Franklin D.M., Leddy H.A. Surface protein characterization of human adipose tissue-derived stromal cells. // J Cell Physiol. 2001. - V. 189. -P. 54-63.

34. Gupta D., Tuli S.M. Osteoinductivity of partially decalcified alloimplants in healing of large osteoperiosteal defects. // Acta Orthop Scand. 1982. - V. 53. -№ 6. - P. 857-865.

35. Hirsch R.J., Stier M. Complications of soft tissue augmentation. // J Drugs Dermatol. 2008. V. 7. - № 9. - P. 841-845.

36. Hodde J., Hiles M. Constructive soft tissue remodelling with a biologic extracellular matrix graft: overview and review of the clinical literature. // Acta Chir Belg. 2007. - V. 107. - № 6. - P. 641-647

37. Hong L., Peptan I.A., Colpan A., Daw J.L. Adipose tissue engineering by human adipose-derived stromal cells. // Cells Tissues Organs. 2006. - V. 183. -№ 3. - P. 133-140.

38. Horowitz M.C., Friedlaender G.E. Induction of specific T-cell responsiveness to allogeneic bone. // J Bone Joint Surg Am. 1991. - V. 73. - № 8. - P. 11571168.

39. Horvitz E., Le Blanc K, Dominici M. Clarification of nomenclature for MSC: The International Society for Cellular Therapy position statement. // Cytoterapy. 2005. - V. 7. - № 5. - P. 393-395.

40. Hsu SH, Lin CH. The properties of gelatin-poly (gamma-glutamic acid) hydrogels as biological glues. // Biorheology. 2007. - V 44. - № 1. - P. 17-28

41. Kiilholma P, Makinen J. Disappointing effect of endoscopic Teflon injection for female stress incontinence. // Eur Urol. 1991. - V. 20. - №3. - P. 197-199.

42. Junqueira L.C.U., Bignolas G., Bretani R. Picrosirius staining plus polarizing microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. // Histochem. J. 1979. - V. 11. - P.447-455.

43. Klutke J .J., Subir C., Andriole G., Klutke C.G. Long-term results after antegrade collagen injection for stress urinary incontinence following radical retropubic prostatectomy. // Urology. 1999. - V. 53. - № 5. - P. 974-977.

44. Knippenberg M, Helder M N, Zandieh Doulabi Betal. Osteogenesis versus chondrogenesis by BMP-2 and BMP-7 in adipose stem cells. // Biochem Biophys Res Commun. 2006 - V. 342. - P. 902-908

45. Langer R., Vacanti J.P. Tissue engineering. // Science. 1993. - V 14. - P. 920926.

46. Lee R. H., Kim B., Choi I. Characterization and expression analysis of mesenchymal stem cells from human bone marrow and adipose tissue. // Cell Physiol Biochem. 2004 - № 14. - P. 311-324

47. Lin S.D., Wang K.H., Kao A.P. Engineered adipose tissue of predefined shape and dimensions from human adipose-derived mesenchymal stem cells. // Tissue Eng. 2008. - V.14. - № 5. - P. 571-581.

48. Liu X., Smith L.A., Hu J., Ma P.X. Biomimetic nanofibrous gelatin/apatite composite scaffolds for bone tissue engineering. // Biomaterials. 2009. - V. 30. - № 12.-P. 2252-2258.

49. Mimura T., Amano S., Yokoo S., Uchida S., Yamagami S., Usui T., Kimura Y., Tabata Y. Tissue engineering of corneal stroma with rabbit fibroblast precursors and gelatin hydrogels. // Mol Vis. 2008 -V. 14. - P. 1819-1828.

50. Moon M.H., Kim S.Y., Kim Y.J. Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells improve postnatal neovascularization in a mouse model of hind limb ischemia. // Cell Physiol Biochem. 2006. - V. 17. - P. 279-290.

51. Nakahara H., Goldberg V.M., Caplan A.I. Culture-expanded human periosteal-derived cells exhibit osteochondral potential in vivo. // J Orthop Res. 1991. — V. 9. - № 4. - P. 465-476.

52. Oedayrajsingh-Varma M., van Ham S., Knippenberg M. Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell yield and growth characteristics are affected by the tissue-harvesting procedure. // Cytotherapy. 2006 - V. 8. - P. 166-177.

53. Owen M. Marrow stromal stem cells. // J. Cell Sci. 1988. - №; 10. - P. 63-76.

54. Pathiraja A.Gunatillake, Raju Adhikari. Biodegradable synthetic polymers for tissue engineering. // European Cells and Materials. 2003. - № 5. - P. 1-16.

55. Pérez L.M., Smith E.A., Parrott T.S., Broecker B.H., Massad C.A., Woodard J.R. Submucosal bladder neck injection of bovine dermal collagen for stress urinary incontinence in the pediatric population. // J Urol. 1996. - V 156. - P. 633-636.

56. Peter S.J., Domb A.J., Kost J., Wiseman D.M. Handbook of Biodegradable Polymers. Harwood Academic Publishers, 1997. P. 87-98.

57. Pickard R., Reaper J., Wyness L., Cody D.J., McClinton S., N'Dow J. Periurethral injection therapy for urinary incontinence in women. // Cochrane Database Syst Rev. 2007. - V.18. - №.2.

58. Planat-Benard V., Silvestre J.S., Cousin B. Plasticity of human adipose lineage cells toward endothelial cells: Physiological and therapeutic perspectives. // Circulation. 2004. -V. 109. - P. 656-663.

59. Pruitt B.A. Jr., Levine N.S. Characteristics and uses of biologic dressings and skin substitutes. // Arch Surg. 1984. - V. 119. - № 3. - P. 312-322.

60. Reddi A.H. Implant-stimulated interface reactions during collagenous bone matrix-induced bone formation. // J Biomed Mater Res. 1985 - V. 19. - P. 233239.

61. Roques C., Fattal E., Fromes Y. Comparison of toxicity and transfection efficiency of amphiphilic block copolymers and polycationic polymers in striated muscles. // J Gene Med. 2009. V. 11. - № 3. - P. 240-249.

62. Sengene's C., Lolmede K., Zakaroff-Girard A. Preadipocytes in the human subcutaneous adipose tissue display distinct features from the adult mesenchymal and hematopoietic stem cells. // J Cell Physiol. 2005i - V. 205. -P. 114-122.

63. Seo M.J., Suh S.Y., Bae Y.C. Differentiation of human adipose stromal cells into hepatic lineage in vitro and in vivo. // Biochem Biophys Res Commun. -2005.-V. 328.-P. 258-264

64. Shi Y.Y., Nacamuli R.P., Salim A. The osteogenic potential of adipose-derived mesenchymal cells is maintained with aging. // Plast Reconstr Surg. 2005. - V. 116.-P. 1686-1696.

65. Shvetsova E.V., Rogovaia O.S., Tkachenko S.B., Kiselev I.V., Vasil'ev A.V., Terskikh V.V. // Izv Akad Nauk Ser Biol. 2008. - № 2. - P 169-173.

66. Strem B.M., Hicok K.C., Zhu M. Multipotential differentiation of adipose tissue-derived stem cells. // Keio J Med. 2005. - V. 54. - № 3. - P. 132-141.

67. Summers B.N., Eisenstein S.M. Donor site pain from the ilium. A complication of lumbar spine fusion. // J Bone Joint Surg Br. 1989. - V. 71. - № 4. - P. 677680.

68. Sung HW, Huang DM, Chang WH, Huang RN, Hsu JC. Evaluation of gelatin hydrogel crosslinked with various crosslinking agents as bioadhesives: in vitro study. // J Biomed Mater Res. 1999. - V. 46. - № 4. - P. 520-30.

69. Timper K., Seboek D., Eberhardt M. Human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells differentiate into insulin, somatostatin, and glucagons expressing cells. // Biochem Biophys Res Commun. 2006 - V. 341. - P. 11351140.

70. Wagner W., Wein F., Seckinger A. Comparative characteristics of mesenchymal stem cells from human bone marrow, adipose tissue, and umbilical cordblood. // Exp Hematol. -2005.-V. 33. P. 1402-1416.

71. Wang H.J., Pieper J., Schotel R., van Blitterswijk C.A., Lamme E.N. // Tissue Eng 2004. - V. 10. - P. 1054-1064.

72. Wendel M., Sommarin Y., Heinegard D. Bone matrix proteins: isolation and characterization of a novel cell-binding keratan sulfate proteoglycan (osteoadherin) from bovine bone. // J Cell Biol. 1998. - V. 141. - № 3. - P. 839-847.

73. Wynn T.A. Common and unique mechanisms regulate fibrosis in various fibroproliferative diseases. // The Journal of Clinical Investigation. 2007. - V. 117.- №3.-P. 524-529.

74. Yamada Y., Wang X.D., Yokoyama S. Cardiac progenitor cells in brown adipose tissue repaired damaged myocardium. // Biochem Biophys Res Commun. 2006. - V. 342. - P. 662-670.

75. Yannas I.V., Burke J.F., Gordon P.L., Huang C., Rubenstein R.H. Design of an artificial skin. // Control of chemical composition. 1980 - V. 14. - № 2. -P. 107-132.

76. Yazemski M.J. Evolution of bone transplantation: molecular, cellular and tissue strategies to engineer human bone. // Biomaterials. 1996 - V. 17. - P. 175-185.

77. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. // Mol Biol Cell. 2002. - V. 13. - P. 4279-4295.

78. Yamada Y., Wang X.D., Yokoyama S. Cardiac progenitor cells in brown adipose tissue repaired damaged myocardium. // Biochem Biophys Res Commun. 2006. - V. 342. - P. 662-670.

79. Yannas I.V., Burke J.F., Gordon P.L., Huang C., Rubenstein R.H. Design of an artificial skin. // Control of chemical composition. 1980 - V. 14. - № 2. -P. 107-132.

80. Yazemski M.J. Evolution of bone transplantation: molecular, cellular and tissue strategies to engineer human bone. // Biomaterials. 1996 - V. 17. - P. 175-185.

81. Zuk P.A., Zhu M., Ashjian P. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. // Mol Biol Cell. 2002. - V. 13. - P. 4279-4295.