Морфологические и физиологические особенности взаимодействия протозойного патогена Cryptosporidium parvum (Coccidia, Sporozoa) с иммунокомпетентными клетками макроорганизма тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Свежова, Надежда Викторовна

• Свежова, Надежда Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Свежова, Надежда Викторовна

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1. История изучения криптоспоридий.

2. Положение Cryptosporidium в системе простейших.

3. Специфичность Cryptosporidium по отношению к хозяину.

4. Пути передачи инвазии.

5. Жизненный цикл Cryptosporidium.

6. Криптоспоридиоз как оппортунистическая инфекция.

7. Патология и патофизиология криптоспоридиоза.

8. Биохимические особенности Cryptosporidium.

Глава II. Материал и методы исследования.

1. Очистка и концентрация ооцист С. parvum.

2. Заражение лабораторных животных.

3. Электронная микроскопия.

4. Получение и поддержание первичной культуры резидентных пе-ритонеальных макрофагов мыши.

5. Микрофлуориметрическое измерение образования активных форм кислорода в одиночных макрофагах.

6. Определение рН внутри фагосом макрофагов.

Глава III. Результаты.

1. Электронномикроскопическое исследование взаимодействия С. parvum с клетками иммунной системы хозяина (опыты in vivo).

2. Особенности взаимодействия С. parvum с макрофагами в культуре.

3. Влияние паразита на окислительный взрыв в культивируемых макрофагах.

3.1. Окислительный взрыв при контакте макрофагов с ооцистами С. parvum.

3.2. Индукция окислительного взрыва в макрофагах хемотактиче-ским пептидом fMLP после фагоцитоза оцист.

4. Влияние С. parvum на лизосомальную систему макрофагов.

Глава IV. Обсуждение.

1. Иммунный ответ хозяина при криптоспоридиозе.

2. Окислительный взрыв в клетках хозяина и механизмы защиты от него у внутриклеточных паразитических простейших.

3. Обсуждение результатов исследования.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфологические и физиологические особенности взаимодействия протозойного патогена Cryptosporidium parvum (Coccidia, Sporozoa) с иммунокомпетентными клетками макроорганизма»

Кокцидии рода Cryptosporidium Tyzzer, 1907 - облигатные внутриклеточные паразитические простейшие, относящиеся к типу Apicomplexa, классу Sporozoa, подклассу Coccidia. Особенность Cryptosporidium состоит в их избирательном паразитировании в эпителиальных клетках, имеющих на дистальном конце развитую сеть микроворсинок (щеточную каемку). Поэтому криптоспоридии поражают преимущественно клетки эпителиев кишечника, мочевыводящих путей, желчных протоков, матки и легких. В отличие от других гомоксенных (проходящих полный жизненный цикл в одном хозяине) кокцидий, криптоспоридии имеют широкий круг хозяев, включающий млекопитающих, в том числе человека, а также птиц, рептилий и рыб.

Род Cryptosporidimn Tyzzer, 1907 был описан более 90 лет назад, но долгое время детально не изучался, т.к. его представителей ошибочно считали непатогенными. В настоящее время Cryptosporidimn признается опасным патогеном, вызывающим острые, чаще всего диарейные заболевания (криптоспоридиозы) животных и человека. Криптоспоридиоз относится к числу оппортунистических инфекций и может стать одной из причин смертельного исхода у людей, больных СПИД или иными формами иммунодефицита, что делает изучение возбудителя этой инфекции особенно актуальным в настоящее время.

Большое практическое значение крштгоспоридий привлекло к ним в последние полтора десятилетия внимание многих исследователей. Фундаментальные исследования криптоспоридии могут способствовать решению ряда общецитологических проблем, таких, как изменение плазматической мембраны и цитоскелета эукариотной клетки под действием паразита, механизмы движения зоитов Cryptosporidium и их взаимодействия с субстратом и клетками хозяина, регуляция взаимосвязей в сложной системе, состоящей из двух эукариотных клеток - клетки хозяина и клетки паразита, использующей первую как среду обитания.

Сравнительный анализ собранных нами литературных данных по Cryptosporidium, представленный в главе 1, позволяет заключить, что несмотря на огромное число исследований, выполненных во многих странах мира, криптоспоридии по-прежнему остаются малоизученным объектом. Этим отчасти объясняются неудачи с поиском эффективных лекарственных препаратов против криптоспоридиоза (в отличие от других кокцидиозов). Нет четких представлений о механизмах патогенеза криптоспо-ридий, о влиянии паразита на метаболизм зараженной клетки. До сих пор не удается выяснить характер питания этих внутриклеточных паразитов.

Сама оппортунистическая природа криптоспоридий сегодня постулируется только на основании имеющихся наблюдений реактивации возбудителя у пациентов с иммунодефицитом. В то же время неизвестно, возможно ли паразитирование эндогенных стадий Cryptosporidium в клетках иных, нежели эпителиальные, что позволило бы выявить возможные места переживания (персистирования) паразита в зараженном хозяине.

Способность к персистированию известна у многих паразитов, а среди возбудителей оппортунистических инфекций (ОИ) протозойной природы этой способностью обладают Isospora belli и Toxoplasma gondii (Бейер,1989). У Т. gondii эндогенные стадии персистируют во внутренних органах в форме тканевых цист, у I. belli - в форме гигаюзоитов, или уни-зоитных цист.

Cryptosporidium parvum реализует свою способность к персистированию, по-видимому, иным способом, поскольку в его жизненном цикле тканевые цисты не выявлены. Криптоспоридии являются паразитами, главным образом, кишечного эпителия. Однако долговременное переживание патогена в энтероцитах представляется сомнительным, поскольку время жизни этих клеток крайне невелико.

Имеющиеся в литературе косвенные доказательства участия макрофагов в транспорте криптоспоридий в организме хозяина и немногочисленные данные о наличии криптоспоридий во внекишечных тканях позволяют предположить, что местом персистирования Cryptosporidium могут быть макрофаги хозяина. Исходя из этой гипотезы и были сформулированы задачи настоящей работы.

Целью настоящей работы было изучение взаимодействия С. parvum с клетками иммунной системы хозяина при его экспериментальном заражении, а также изучение взаимодействия криптоспоридий с резидентными перитонеальными макрофагами мыши in vitro.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие экспериментальные задачи:

1. В опытах in vivo выяснить возможность заражения криптоспоридиями макрофагов и других клеток иммунной системы лабораторных животных.

2. Изучить особенности взаимодействия ооцист С. parvum с макрофагами в культуре. Для этого: а) выяснить возможность заражения макрофагов криптоспори-диями in vitro; б) проследить изменение морфологии ооцист при взаимодействии с макрофагами в культуре.

3. Изучить влияние ооцист С. parvum на функциональную активность макрофагов в условиях культуры.

Для оценки функциональной активности макрофагов предстояло исследовать: а) способность макрофагов отвечать своей нормальной защитной реакцией (окислительным взрывом) на введение в инкубационную среду ооцист C.parvum; б) если ооцисты С. parvum будут способны персистировать в фа-госомах макрофагов, то исследовать способность макрофагов, 4 содержащих ооцисты в фагосомах, сохранять свою нормальную защитную реакцию, а именно отвечать ОВ при активации хемо-тактическим пептидом fMLP (известным индуктором ОВ макрофагов); в) исследовать влияние переживающих в фагосомах ооцист С. parvum на слияние таких фагосом с лизосомами.

Окислительный взрыв был выбран в качестве показателя функциональной активности макрофагов, поскольку он является одной из важнейших реакций иммунокомпетентных клеток на чужеродные агенты. ОВ представляет собой выделение клеткой больших количеств активных форм кислорода (АФК), таких как супероксид анион, перекись водорода и др. в ответ на стимуляцию определенных рецепторов (Bogdan et al., 2000). У макрофагов ОВ обычно сопряжен с фагоцитированием чужеродного агента.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Свежова, Надежда Викторовна

Выводы

По результатам представленной работы можно сделать следующие выводы:

1. На лабораторной модели кишечного криптоспоридиоза новорожденных крысят подтверждена возможность заражения криптоспоридиями не только клеток ворсинчатого эпителия, но и других, а именно макрофагов.

2. Впервые показано, что зоиты С. parvum способны заражать макрофаги кишечника хозяина и претерпевать в них полный цикл развития.

3. Выявлена способность ооцист криптоспоридий сохранять свою морфологическую целостность, находясь в фагосомах макрофагов в кишечнике хозяина и in vitro.

4. Резидентные перитонеальные макрофаги мыши отвечают на контакт с ооцистами С. parvum в условиях in vitro присущей им защитной реакцией (окислительным взрывом). Продукты окислительного взрыва не убивают ооцисты, которые способны переживать в фагосомах макрофагов в течение нескольких суток. При длительном переживании ооцист в фагосомах макрофаги сохраняют способность отвечать окислительным взрывом на действие хемотактического пептида.

5. Фагосомы макрофагов, содержащие ооцисты Cryptosporidium не сливаются с лизосомами даже по истечении 2-3 сут после введения ооцист в среду культивирования.

Роль этих явлений в персистировании ооцист криптоспоридий в организме хозяина и, как следствие, раскрытие феномена оппортуни-стичности Cryptosporidium требуют дальнейшего исследования.

Необходимо изучить влияние персистирующих ооцист на продолжительность жизни и фагоцитарную функцию заключающих их макрофагов. Необходимо также выявить белки или другие факторы клеточной поверхности ооцист, ответственных за их устойчивость к АФК.

Заключение

Исходя из собственных и литературных данных о взаимодействии ооцист С. parvum с макрофагами в условиях in vivo и in vitro, мы полагаем, что ооцисты криптоспоридий являются персистирующими стадиями в жизненном цикле этого паразита. Ооцисты способны длительное время переживать в макрофагах, сопротивляясь действию окислительного взрыва и подавляя лизосомальное переваривание, и, по-видимому, транспортироваться макрофагами по организму хозяина.

Механизм персистирования криптоспоридий в организме хозяина мы представляем следующим образом. Вероятнее всего, макрофаги транспортируют ооцисты по кровеносной системе из кишечника в печень, где переживают в паренхиме печени по соседству с желчными протоками. Когда время жизни такого тканевого макрофага подходит к концу, он может выходить в просвет желчных протоков и погибать там. Вышедшие из погибших макрофагов ооцисты эксцистируются в просвете желчных путей, спорозоиты заражают клетки их эпителия, где паразит претерпевает несколько раундов развития. Поэтому не удивительно, что у иммуноком-прометированных хозяев криптоспоридии часто обнаруживаются в желчном пузыре и желчных протоках (Gross et al., 1986; Hasan et al., 1991; Stephens et al., 1999). Вновь образованные ооцисты могут снова быть захвачены макрофагами и персистировать в них до момента гибели последних. Таким образом достигается основная цель персистирования оппортунистического паразита - поддержание в течение длительного времени в организме хозяина пула инвазионных стадий.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Свежова, Надежда Викторовна, 2001 год

1. Бейер Т.В. 1989. Клеточная биология споровиков возбудителей про-тозойных болезней животных и человека. Л.: Наука, 184с.

2. Бейер Т.В., Сидоренко Н.В., Григорьев М.В. 1995а. Cryptosporidium parvum (Sporozoa, Coccidia, Apicomplexa) оптимизация техники получения большой массы ооцист. Паразитология. 29 (3): 198-207.

3. Гамалей И. А., Каулин А. Б., Кирпичникова К.М. 1988. Применение диацетата флуоресцеина для исследования активации макрофагов. Цитология. 30(12): 1426-1431.

4. Гамалей И. А., Клюбин И. В. 1996, Перекись водорода как сигнальная молекула. Цитология. 38 (12): 1233-1247.

5. Горышина Е.Н., Чага О.Ю. 1990. Сравнительная гистология тканей внутренней среды с основами иммунологии. Л.: Изд-во ЛГУ: 197.

6. Зенков Н. К., Меньшикова Е. Б. 1993. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах. Успехи соврем, биологии. 113: 286-296.

7. Клюбин И. В., Гамалей И. А. 1997. NADPH оксидаза специализированный ферментативный комплекс для образования активных метаболитов кислорода. Цитология. 39 (4/5): 320-340.

8. Осипов А. Н., Азизова О. А., Владимиров Ю. А. 1989. Активные формы кислорода и их роль в организме. Успехи биол. химии. 31: 180-208.

9. Островский Д. Н. 1997. Новые участники окислительного стресса у бактерий. Успехи биол. химии. 37: 147-169.

10. Свежова Н.В. 1997. Взаимоотношения кокцидии Cryptosporidium parvum (Apicomplexa: Sporozoa) с клетками иммунной системы хозяина-млекопитающего. Паразитология. 31 (4): 328-333.

11. Aguirre S.A., Mason Р.Н., Perryman L.E. 1994. Susceptibility a major histocompatibility complex (MHC) class I and MHC class II deficient mice to Cryptosporidium parvum infection. Inf. Immun. 62 (2): 697-699.

12. Allen R. G. 1991. Oxygen-reactive species and antioxidant responses during development: the metabolic paradox of cellular differentiation. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 196: 117-129.

13. Angus K.W. 1987. Cryptosporidiosis in domestic animals and humans. In Practice. 9: 47-52.

14. Anonymous. 1982a. Human cryptosporidiosis Alabama. MMWR. 31: 252.

15. Anonymous 1982b. Cryptosporidiosis: assessment of chemiotherapy of males with acquired immunedeficiency syndrome (AIDS). MMWR. 31: 589.

16. Arcay L., Baez de Borges E., Bruzual E. 1995. Cryptosporidiosis experimental en la escala de vertebriados. I. Infectiones experimentales. II. Estudio histopatologico. Parasito! alDia. 19: 20-31.

17. Argenzio R. A., Liacos J. A., Levy M. L., Meuten D. J., Lecce J. G., Powell D. W. 1990. Villous atrophy, crypt hyperplasia, cellular infiltration and impaired glucose-Na absorption in enteric cryptosporidiosis of pigs. Gastroenterology. 98: 1129-1140.

18. Arrowood M. J., Sterling C. R. 1987. Isolation of Cryptosporidium oocysts and sporozoites using discontinuous sucrose and isopycnic percoll gradients. J. Parasit. 73 (2): 314-319

19. Asahi H., Koyama Т., Arai H., Kunakoshi Y., Yamaura H., Sirasaka R., Okutoni K. 1991. Biological nature of Cryptosporidium sp. isolated from a cat. Parasitol. Res. 77: 273-275.

20. Awad-El-Kariem F. M., Robinson H. A., Petry F., McDonald V., Evans D., Casemore D. 1998. Differentiation between human and animal isolates of Cryptosporidium parvum using molecular and biological markers. Parasitol. Res. 84: 297-301.

21. Ball S. J., Pittilo R. M., Long P. L. 1989. Intestinal and extraintestinal life cycles of eimeriid coccidia. Adv. Parasitol. 28: 1-54.

22. В art a J.R., Jenkins M.C. Danforth H.D. 1991. Evolutionary relationships between avian Eimeria species among other apicomplexan protozoa: mono-phyly of Apicomplexa is supported. Mol. Biol. Evol. 8: 345-348.

23. Beyer Т. V., Svezhova N. V., Sidorenko N. V., Khokhlov S. E. 2000. Cryptosporidium parvum (Coccidia, Apicomplexa): some new ultrastuctural observations on its endogenous development. Europ. J. Protistol. 36: 151159

24. Blagburn B. L., Soave R. 1997. Prophylaxis and chemopherapy: human and animal. In: Cryptosporidium and cryptosporidiosis. R. Fayer ed. CRC Press. Boca Raton: 111-128.

25. Bogdan C., Rollinghoff M. 1998. The immune response to Leishmania: mechanisms of parasite control and evasion. Int. J. Parasitol. 28: 121-134.

26. Bogdan C., Rollinghoff M. 1999. How do protozoan parasites survive inside macrophages?. Parasitology Today. 15 (l):22-28.

27. Bogdan C., Rollinghoff M., Diefenbach A. 2000. Reactive oxigen and reactive nitrogen intermediates in innate and specific immunity. Curr. Opin. Immunol. 12: 64-76.

28. Campbell P.N., Current W.L. 1983. Demonstration of serum antibodies to Cryptosporidium sp. in normal and immunodeficient humans with confirmed infections. J. Clin. Microbiol. 18: 165-167.

29. Campbell А. Т., Robertson L. J., Smith H. У. 1992. Viability of Cryptosporidium parvum oocysts: correlation of in vitro excystation with inclusion or exclusion of fluorogenic vital dyes. Appl. Environ. Microbiol. 58: 34883493.

30. Carvalho de L., Souza de W. 1990. Internalisation of surface anionic sites and phagosome-lysosome fusion during interaction of Toxoplasma gondii with macrophages. Eur. J. Cell Biol. 51: 211-219.

31. Cathcart R., Schwiers E., Ames B. N. 1984. Detection of picomole levels of lipid hydroperoxides using a dichlorofluorescein fluorescent assay. Meth. Enzymol. 105: 352-358.

32. Chanock S. J., El Benna J., Smith R. M., Babior В. M. 1994. The respiratory burst oxidase. J. Biol. Chem. 269: 24519-24522.

33. Cross A. R, Jones О. T. G. 1991. Enzymic mechanisms of superoxide production. Biochem. Biophys. Acta. 1057: 281-298.

34. Cullis R.R., Hope M. J. 1985. Physical properties and functional roles of lipids in membranes. In: Biochemistry of Lipids and Membranes, Vance D.E. and Vance J.E., eds. Benjamin Cummings, Menlo Park, CA.: 25-42.

35. Current W.L., Reese N.C., Ernst J.V., Bailey W.C., Heyman M.B., Wein-stein M.D. 1983. Human cryptosporidiosis in immunocompetent and immu-nodeficient persons: studies on an outbreak and experimental transmission. New Engl. J. Med. 308:1252-1257.

36. Current W.L. 1985a. Cryptosporidiosis: a protozoologist's view of an emerging zoonosis. Microecol. Ther. 15: 165-169.

37. Current W.L. 1985b. Cryptosporidiosis. J. Am. Vet. Med. Assoc. 187: 1334-1346.

38. Current W.L., Upton S.J., Haynes T.B. 1986. The life cycle of Cryptosporidium baileyi n. sp. (Apicomplexa, Cryptosporidiidae) infecting chickens. J. Protozool. 33: 289-296.

39. Current W.L. 1988. The biology of Cryptosporidium. Am. Soc. Microbiol. News. 54: 605-616.

40. Current W.L. 1989. Cryptosporidium spp. In: Parasitic infection in the compromised host, Walzer P.D. and Genta R. M. eds. Margel Dekker Ink., NY: 281-341.

41. Current W.L., Bick P.W. 1989. The immunobiology of Cryptosporidium spp. Path, and Immunopath. Res. 8: 141-160.

42. Ditrich O., Palcovic L., Sterba J., Procopic J., Loudova J., Giboda M. 1991. The first finding of Cryptosporidium baileyi in man. Parasitol. Res. 77: 4446.

43. Doyle P.S., Grabb J., Petersen C. 1993. Anti-Cryptosporidium antibodies inhibit infectivity in vitro and in vivo. Infect. Immun. 61: 4079- 4083.

44. Eggieston M.T. 1993. Development of the 3H- uracil incorporation assay to monitor in vitro development of Cryptosporidium parvum. M.S. thesis, Kansas State University.

45. Eggieston M.T., Tilley M., Upton S.J. 1994. Enchanced development of Cryptosporidium parvum in vitro by removal of oocyst toxins from infected cell monolayers. J. Helminthol. Soc. Wash. 61: 122- 126.

46. Farthing M. J. G. 2000. Clinical aspects of human cryptosporidiosis. In: Cryptosporidiosis and microspiridiosis. (Contributions to microbiology Vol. 6) F. Petry ed. Karger. Basel: 50-74.

47. Favennec L., Comby E., Ballet J.J., Brasseur P. 1995. Serum IgA antibody response to Cryptosporidium parvum is mainly represented by IgAl. J. Infect. Dis. 171: 256-260.

48. Fayer R., Speer C.A., Dubey J.P. 1990. General biology of Cryptosporidium. In: Cryptosporidiosis of man and animals, Dubey J.P, Speer C.A., and Fayer R. eds. CRC Press, Boca Raton, Florida: 1-57.

49. Fayer R., Speer C.A., Dubey J.P. 1997. General biology of Cryptosporidium. In: Cryptosporidium and cryptosporidiosis, Fayer R. ed. CRC Press, Boca Raton, Florida: 1-41.

50. Fayer R., Trout J. M., Jenkins M. C. 1998. Infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts stored in water at environmental temperatures. J. Parasitol. 84(60): 1165-1169.

51. Fayer R., Ungar B.L.P. 1986. Cryptosporidium spp. and cryptosporidiosis. Microbiol. Revs. 50: 458-483.

52. Fleta J., Sanchez-Acedo C., Clavel A., Quilez J. 1995. Detection of Cryptosporidium oocysts in extra- intestinal tissues of sheep and pigs. Vet. Parasitol. 59: 201-205.

53. Foussard F., Leriche M.A., Dubremetz J.F. 1991. Characterization of the lipid content of Toxoplasma gondii rhoptries. Parasitology. 102: 367-370.

54. Fridovich I. 1976. Oxygen radicals, hydrogen peroxide and oxygen toxicity. In: Free radicals in biology. New York: Acad. Press. 1: 239-277.

55. Gallois Y., Foussard F., Girault A., Hodbert J., Tricaud A., Mauras G. Motta C. 1988. Membrane fluidity of Toxoplasma gondii: a fluorescence polarisations study. Biol. Cell. 62: 11-14.

56. Gamaley I. A., Klybin I. V. 1999. Roles of reactive oxigen species: signalling and regulation of cellular functions. Int. Rev. Cytol. 188: 203-255.

57. Gardiner C.H., hnes G.D. 1984. Cryptosporidium sp. in the kidneys of black-throated finch. J. Amer. Med. Vet. Assoc. 85: 1401-1402.

58. Garza D.H., Fedorak R.N., Soave R. 1986. Enterotoxine-like activity in cultured Cryptosporidia: role in diarrhea. Gastroenterology. 90: 1424.

59. Gazzard B.G. 1995. Opportunistic infections in HIV seropositive individuals. J. Roy. Coll. Phys. Lond. 29: 335-339.

60. Gentile G., Baldassarri L., Caprioli A., Donelli G., Venditti M., Awisati G., Martino P. 1987. Colonic vascular invasion as a possible route of extraintestinal cryptosporidiosis. Am. J. Medicine. 82: 574-575.

61. Gomez Morales M.A., Ausiello C.M., Urbani F., Pozio E. 1995. Crude extract and recombinant protein of Cryptosporidium parvum oocysts inducedprolipheration of human peripheral blood mononuclear cells in vitro. J. Inf. Dis. 172(1): 211-216.

62. Goodgame R. W., Kimball K„ Ou C. N„ White C., Genta R. M., Lifschitz С. H., Chappell C. L. 1995. Intestinal function and injury in acquired immunodeficiency syndrome-related cryptosporidiosis. Gastroenterology. 108: 1075-1082.

63. Green M. J., Hill H. A. O. 1984. Chemistry of dioxygen. Meth. Enzymol. 105: 3-22.

64. Gross T. L., Wheat J., Bailett M., O'Connor K. W. 1986. AIDS and multiple system involvement with Cryptosporidium. Am. J. Gastroenterol. 81: 456-458.

65. Guarino A., Canani R.B., Pozio E., Terraciano L., Albano F. Mazzeo M. 1994. Enterotoxic effect of stool supernatant of Cryptosporidium infected calves on human jejunum. Gastroenterology. 106: 28 32.

66. Guarino A., Canani R.B., Casola A., Pozio E., Russo R, Buzzese E., Fon-tana M., Rubino A. 1995. Human intestinal cryptosporidiosis: Secretory diarrhea and enterotoxic activity in CaCo-2 cells. J. Infect. Dis. 171: 976-983.

67. Gut J., Nelson R.G. 1994. Cryptosporidium parvum sporozoite deposit trials of 11A5 antigen during gliding locomotion and shed 11A5 antigen during invasion of MDCK cells in vitro. J. Euk. Microbiol. 41: 42s 47s.

68. Hadas E., Stankiewicz M. 1996. Strategies of biochemical defence macha-nisms of parasites against oxidants and free radicals. Acta Parasitologica. 41 (1): 1-6.

69. Hall B. F., Joiner K. A. 1991. Strategies of obligate intracellular parasites for evading host defences. Immunology Today. 12 (3): A22-A27.

70. Hasan F. A., Jeffers L. J., Dickinson G., Otralji C. L., Greer P. J., Reddy K. R,, Schiff E. R. 1991. Hepatobiliary cryptosporidiosis and cytomegalovirus infection mimicking metastatic cancer to the liver. Gastroenterology. 100: 1743-1748.

71. Havashi S. 1993. Effects of immune rabbit serum and monoclonal antibodies on infectivity of Cryptosporidium muris in mice. J. Osaca City Medical Center. 72(2): 165-189.

72. Heine J., Pohlenz J.F.L., Moon H.W., Woode G.N. 1984. Enteric lesions and diarrhea in gnotobiotic calves monoinfected with Cryptosporidium species. J. Infect. Dis. 150: 768-775.

73. Holland R.E., Herdt Т.Н., Refsal K.R. 1989. Pulmonary excretion of H2in calves with Cryptosporidium induced malapsorption. Dig. Dis. Sci. 34: 1399-1403.

74. Hoover D.M., Hoerr F.J., Carlton W.W., et al. 1981. Enteric cryptosporidiosis in Naso tang (Naso literatus, Block and Schneider). J. Fish Dis. 4: 425428.

75. Huang J.-X., Petersen C. 1997. Soluble expression of Cryptopain, a cysteine proteinase of Cryptosporidium parvum. In: Molecular and Cellular Biology of Apicomplexan Protozoa, Keystone Symposia, Jan. 7-12, 1997. Park City, Utah, USA: 23.

76. Hughes H. P. A., Boik R. J., Gerhardt S. A., Speer C. A. 1989. Susceptibility of Eimeria bovis and Toxoplasma gondii to oxigen intermediates and a new mathematical model for parasite killing. J. Parasitol. 75 (4): 489-497.

77. IsekiM. 1979. Cryptosporidium felis n. sp. (Protozoa: Eimeriorina ) from the domestic cat. Jap. J. Parasitol. 28:285 307.

78. Jacyna M.R., Parkin J., Goldin R, Baron J. H. 1990. Protracted enteric Cryptosporidia! infection in selective immunoglobulin A and saccaromyces opsonin deficiencies. Gut. 31: 714 715.

79. Jenkins M.S., Petersen C. 1997. Molecular biology of Cryptosporidium. In: book Cryptosporidium and cryptosporidiosis, Fayer R. ed. CRC Press, Boka Raton, Florida: 225 232.

80. Jenkins M. В., Anguish L. J., Bowman D. D., Walker M. J., Ghiorse W. C. 1997. Assessment of a dye permeability assay for determination of inactiva-tion rates of Cryptosporidium parvum oocysts. Appl. Environ. Microbiol. 63: 3844-3850.

81. Johnson A.M., Fielke R., Lumb R., Baverstock P.R. 1990. Phylogenetic relationships of Cryptosporidium determinated by ribosomal RNA sequence comparison. Int. J. Parasitol. 20 (2): 141 147.

82. Joiner K.A. 1991. Rhoptry lipids and parasitophorous vacuole formation: a slippery issue. Parasitol. Today 7: 226 230.

83. Kaplan J. E., Jones J. L., Dykewicz C. A. 2000. Protists as opportunistic pathogens: public health impact in the 1990s and beyond. J. Eukaryot. Microbiol. 47 (1): 15-20.

84. Langermans J. A. M., Hazenbos W. L. W., van Furth R. 1994. Antimicrobial function of mononuclear phagocytes. J. Immunol. Meth. 174: 185-194.

85. Lawton Ph., Naciri M., Mancassola R, Petavy A.-F. 1996. Cultivation of Cryptosporidium parvum in non-adherent human monocytic cell line. J. Microbiol. Methods. 27: 165-173.

86. Levine N.D. 1980. Some correlations of coccidian (Apicomplexa: Protozoa) nomenclature. J. Parasitol. 66: 830 840.

87. Levine N.D., Corliss J.O., Cock F.E.G. et. al. 1980. A newly revised classification of the Protozoa. J.Protozool. 27: 37 58.

88. Levine N.D. 1984. Taxonomy and review of the coccidian genus Cryptosporidium (Protozoa, Apicomplexa). J.Protozool. 31: 94 98.

89. Lindsay D. S., Upton S. J., Owens D. S„ Morgan U. M., Mead J. R., Blag-burn B. L. 2000. Cryptosporidium andersoni n. sp. (Apicomplexa, Crypto-sporidiidae) from cattle, Bos taurus. J. Euk. Microbiol. 47 (1): 91-95.

90. Locksley R. M., Klebanoff S. J. 1983. Oxigen-dependent microbicidal systems of phagocytes and host defence against intracellular protozoa. J. Cell. Bioch. 22: 173-185.

91. Makino N., Mochizuki Y., Batumi S., Sugita Y. 1994. Kinetic studies on the removal of extracellular hydrogen peroxide by cultured fibroblasts. J. Biol. Chem. 269: 1020-1025.

92. Malek S., Lindmark D.G., Jarroll E.L., Wade S., Schaaf S. 1996. Detection of selection enzyme activities in Cryptosporidium parvum. In: 4th Int.

93. Works, on Opportunistic Protists, June 11 15, 1996, Tucson, Arizona. J. Euk. Microbiol. 43 (5): 82s.

94. Marcial M.A., Madara J.L. 1986. Cryptosporidium: cellular localisation, structural analysis of absorptive cell-parasite membrane-membrane interactions in guinea pigs, and suggestion of protozoa transport by M-cells. Gastroenterology. 90: 583 594.

95. Martins C.A.P., Guerrant R.L. 1995. Cryptosporidium and cryptosporidio-sis. Parasitol. Today. 11 (11): 434 436.

96. Martinez F., Mascaro C., Rosales M.J., Diaz J., Cifuentez J., Osuna A. 1992. In vitro multiplication of Cryptosporidium parvum in mouse peritoneal macrophages. Vet. Parasitol. 42: 27-31.

97. Mauel J. 1996. Intracellular survivial of protozoan parasites with special reference to Leishmania spp., Toxoplasma gondii and Trypanosoma cruzi. Adv. Parasitol. 38: 1-51.

98. Meisel J.L., Perera D.R., Meligro C., Rubin C.E. 1976. Overwhelming watery diarrhea associated with a Cryptosporidium in a immunosupressed patient. Gastroenterology. 70: 1156 1158.

99. Meuten D.J., Van Kruiningen H.J., Kein D.H. 1974. Cryptosporidiosis on a calf. J. Amer. Vet. Med. Assoc. 165: 914 917.

100. McGowan I., Hawkins A. S., Weller I. V. D. 1993. The natural history of Cryptosporidia! diarrhoea in HIV-infected patients. AIDS. 7: 349-354.

101. McKenzie W.R., Hoxie N.J., Proctor M.E., Gradus M.S., Blair K.A., Peterson D.E. et. al. 1994. A massive outbreak in Milwaukee of Cryptosporidium infection transmitted through the public water supply. N. Eng. J. Med. 331: 161 162.

102. Michalski W.P., Prowse S.J. 1991. Superoxide dismutases in Eimeria tenella. Mol. Biochem. Parasitol. 47: 189 192.

103. Millard P., Gensheimer K. 1994. An outbreak of Cryptosporidiosis from fresh pressed apple cider. J. Am. Med. Assoc. 272: 1592 1597.

104. Mitschler R.R. 1994. Lipid biology of Cryptosporidium parvum and Eimeria nieschulzi (Apicomplexa) Ph. D. Thesis, Kansas State University.

105. Mitschler R.R., Wetti R., Upton S.J. 1994. A comparative study of lipid compositions of Cryptosporidium parvum (Apicomplexa) and Madin-Darby bovine kidney cells. J. Euk. Mikrobiol. 41: 8-12.

106. Morrison D.A. 1997. Molecular phylogeny and evolution of the coccidia. In: Control of coccidiosis into the next millenium, 7th Int. Coccidiosis Conf, 1997, Sept, 1 5, Oxford, U.K.: 72.

107. Nakamura K., Abe. F. 1988. Respiratory (especially pulmonary) and urinary infection of Cryptosporidium in layer chickens. Avian Pathol. 17: 703 -711.

108. Nanduri J., Williams S., Aji Т., Flanigan T. P. 1999. Characterisation of an immunogenic glycocalyx on the surfaces of the Cryptosporidium parvum oocysts and sporozoites. Inf. Immun. 67 (4): 2022-2024.

109. Nesterenko M.V., Tilley M., Upton S.J. 1995. A metallo-dependent cysteine proteinase of Cryptosporidium parvum associated with the surface of sporozoites. Microbios. 83: 77 80.

110. Nime F.A., Burek J.D., Page D.L. et.al. 1976. Acute enterocolitis in a human being infected with the protozoon Cryptosporidium. Gastroenterology. 70: 592 598.

111. O'Donoghue P.J. 1995. Cryptosporidium and cryptosporidiosis in man and animals. Int. J. Parasitol. 25: 139 157.

112. Pavlasek I. 1984. First record of developmental stages of Cryptosporidium sp. in various organs of experimentally infected mice and spontaneously infected calves. Folia Parasitologica (Praha). 31: 191-192.

113. Petersen C., Barnes D., Gousett L., Wu J., Huang J.-X. 1997. The structure and function of Cryptosporidium parvum GP900. In: molecular and cellular biology of apicomplexan protozoa, Keystone Symposia, Jan. 7-12, 1997, Park City, Utah, USA: 3.

114. Pohlenz J., Bemrick W.J., Moon H.W., Cheville N.F. 1978. Bovine cryptosporidiosis: a transmission and scanning electron microscope study of some staged in life-cycle and host-parasite relationship. Vet. Parasitol. 15: 417 427.

115. Pryor W. A. 1986. Oxy-radicals and related species: their formation, lifetimes, and relations. Ann. Rev. Physiol. 48: 657-667.

116. Pryor W. A., Squadrito G. L. 1995. The chemistry of peroxynitrite: a product from the reaction of nitric oxide with superoxide. Amer. J. Physiol. 268: L699-L722.

117. Reduker D.W., Speer C.A. 1985. Factors influencing excystation in Cryptosporidium oocysts from cattle. J. Parasitol. 71: 112 -115.

118. Riggs M.W. 1997. Immunology: host response and development of passive immunotherapy and vaccines. In: Cryptosporidium and cryptosporidiosis, Fayer R, ed., CRC Press, Boca Raton, Florida: 130 162.

119. Sibley L. D., Weidner E., Krachenbuchl J. L. 1985. Phagosome acidification blocked by intracellular Toxoplasma gondii. Nature. 315: 416-419.

120. Sibley L. D., Krachenbuchl J. L., Adams G. M., Weidner E. 1986. Toxoplasma modifies macrophage phagosome by secretion of a vesicular network rich in surface proteins. J. Cell Biol. 103: 867-874.

121. Sibley L. D., Krachenbuchl J. L. 1988. Modification of host cell phagosomes by Toxoplasma gondii involves redistribution of surface proteins and secretion of a 32 kDa protein, Eur. J. Cell. Biol. 47: 81-87.

122. Sibley L. D. 1995. Invasion of vertebrate cells by Toxoplasma gondii. Trends Cell Biol. 5: 129-132.

123. Slavin D. 1955. Cryptosporidium meleagridis (sp.n.). J. Сотр. Pathol. 65: 262 265.

124. Speer C.A., Dubey J.P. 1998. Ultrastructure of early stades of infections in mice fed Toxoplasma gondii oocysts. Parasitology. 116: 35-42.

125. Squadrito G. L., Pryor W. A. 1998. Oxidative chemistry of nitric oxide: the roles of superoxide, peroxynitrite and carbon dioxide. Free Radical Biol. Med. 25 (4/5): 392-403.

126. Stephens J., Cosyns M., Jones M., Hayward A. 1999. Liver and bile duct pathology following Cryptosporidium parvum infection of immunodeficient mice. Hepatology. 30 (1): 27-35.

127. Taghi-Kilani R.T., Wenman W.M. 1994. Geographical variation of 18S rRNA gene sequence of Cryptosporidium parvum. Int. J. Parasitol. 24: 303 -308.

128. Tilley M., Upton S.J. 1994. Both Cp 15 and Cp 25 are as trails behind gliding sporozoites of Cryptosporidium parvum. FEMS Microbiol. Lett. 120: 275.

129. Tilley M., McDonald V., Bancroft G.J. 1995. Resolution of crypto-sporidial infection in mice correlates with parasite-specific lymphocyte proliferation associated with both Thl and T22 cytokine secretion. Parasite Immunology. 17 (9): 459 464.

130. Tilley M., Upton S.J. 1997. Biochemistry of Cryptosporidium. In: Cryptosporidium and cryptosporidiosis., Fayer R., ed., CRC Press, Boca Raton, Florida: 163 180.

131. Triffitt M.J. 1925. Observation on the new species of coccidia parasite in snakes. Protozoology. 1: 19-26.

132. Tyzzer E.E. 1907. A sporozoan found in the peptic glands of the common mouse. Proc. Soc. Exp. Bid. Med. 5: 12-13.

133. Tyzzer E.E. 1910. An extracellular coccidium, Cryptosporidium parvum (gen. et. sp. nov.) of the gastric glands of the common mouse. J. Med. Res. 23:487-509.

134. Tyzzer E.E. 1912. Cryptosporidium parvum (sp. nov.), a coccidian found in the small intestine of the common mouse. Arch. Protistenk. 26: 394 412.

135. Tyzzer E.E. 1929. Coccidiosis in gallinaceous birds. Amer. J. Hyg. 10: 269-383.

136. Tzipori S., Smith M., Haplin C., Angus K.W., Sherwood, Campbell J. 1983. Experimental cryptosporidiosis in calves: clinical manifestations and pathological findings. Vet. Rec. 112: 116 -121.

137. Tzipori S. 1988. Cryptosporidiosis in perspective (1988). Adv. in Parasi-tol. 27: 63 129.

138. Tzipori S., Widmer G. 2000. The biology of Cryptosporidium. In: Cryptosporidiosis and microspiridiosis. (Contributions to microbiology Vol. 6) F. Petry ed. Karger. Basel: 1-32.

139. Urban J.F.Jr., Fayer R., Chen Shen Jue, Gause W.C., Gately M.K., Finkelman F.D. 1996. IL 12 protects immunocompetent and immunodefi-cient neonatal mice against infection with Cryptosporidium parvum. J. of Immunology (Baltimore). 156 (1): 263 - 268.

140. Vetteling J.M., Takeuchi A., Madden P.A. 1971. Ultrastructure of Cryptosporidium wrairi from the guinea pig. J.Protozool. 18 (2): 248 260.

141. Vuillaume M. 1987. Reduced oxygen species, mutation, induction and cancer initiation. Mutation Res. 186: 43-72.

142. Waldman E., Tzipori S., Forsyth J.RL. 1986. Separation of Cryptosporidium species oocysts from feces by using a Percoll discontinuous density gradient. J. of Clinical Microbiol. 23 (1): 199 100.

143. Weidner E., Sibley L. D. 1985. Phagocytozed intracellular microsporidia blocks phagosome acidification and phagosome-lysosome fusion. J. Protozool. 32 (2): 311-317.

144. Widmer G„ Tzipori S., Fichtenbaum C. J., Griffiths J. K. 1998. Genotypic and phenotypic characterization of Cryptosporidium parvum isolates from people with AIDS. J. Infect Dis. 178: 834-840.

145. Yang Sh., Healey M. 1994. Patent gut infections in immunosupressed adult C57BL/6N mice following intraperithoneal injections of Cryptosporidium parvum oocysts. J. Parasitol. 80(2): 338-342.

146. Zhu G., Keithly J. S., Philippe H. 2000. What is phylogenetic position of Cryptosporidium? Int. J. Systematic Evol. Microbiol. 50: 1673-1681.

147. Zu S.-X., Fang G.-D., Fayer R, Guerrant R.L. 1992. Cryptosporidiosis: Pathogenesis and immunology. Parasitol. Today. 8: 22 24.