Морфофункциональное состояние опухолевых и неопухолевых клеток под влиянием хорионического гонадотропина и эмбихина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат медицинских наук Горшков, Антон Сергеевич

• Горшков, Антон Сергеевич
• кандидат медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Горшков, Антон Сергеевич

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1.1. Строение и функции хорионического гонадотропина

1.2. Рецептор хорионического гонадотропина и пути передачи

гормонального сигнала

1.3. Негонадные эффекты хорионического гонадотропина

1.4. Хорионический гонадотропин в канцерогенезе

1.5. Использование цитостатиков для лечения опухолей

1.6. Молекулярные механизмы регуляции пролиферации и онкогенеза

1.7. Молекулярные основы дифференцировки клеток

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ РАБОТЫ

2.1. Дизайн эксперимента

2.2. Культивирование клеток

2.3. Криоконсервация клеток

2.4. Митотический анализ культивируемых клеток

2.5. Морфометрический анализ культивируемых клеток

2.6. МТТ-тест

2.7. Апоптозный тест

2.8. Статистическая обработка данных

Глава 3. ВЛИЯНИЕ ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА НА

НЕОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ

3.1. Общая характеристика культивируемых линий

3.2. Влияние хорионического гонадотропина на клетки культуры Ь20В

3.3. Влияние хорионического гонадотропина на клетки культуры

фибробластов легкого

Глава 4. ВЛИЯНИЕ ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА НА

ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ

4.1. Общая характеристика культивируемых линий

4.2. Влияние хорионического гонадотропина на клетки культуры ИХ)

4.3. Влияние хорионического гонадотропина на клетки культуры Нер-2

Глава 5. ВЛИЯНИЕ СВЕРХВЫСОКИХ КОНЦЕНТРАЦИЙ

ХОРИОНИЧЕСКОГО ГОНАДОТРОПИНА НА КУЛЬТУРУ

НЕР-2

Глава 6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВИЧ - вирус иммунодефицита человека

ДМБА ■ - диметилбензантрацен

ИЛ - интерлейкин

ЛГ - лютеинизирующий гормон

ТТГ - тиреотропный гормон

ФСГ - фолликкуло-стимулирующий гормон

ХГч - хорионический гонадотропин человека

яко - ядерно-клеточное отношение

со - кластер дифференцировки

сак - циклин-зависимая киназа

ЕвР - эпидермальный фактор роста

СТР - гтф-связывающий белок

1ТА - антиген инвазивного трофобласта

РСЫА - антиген ядер пролиферирующих клеток

ТСР - трансформирующий фактор роста

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Морфофункциональное состояние опухолевых и неопухолевых клеток под влиянием хорионического гонадотропина и эмбихина»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы

В последнее время в медицинском сообществе возрастает интерес к регенеративной медицине [44,72-76,117]. Это связано с тем, что управление процессами дифференцировки и пролиферации клеток позволит решать такие насущные проблемы здравоохранения, как заместительная клеточная терапия, а также восстановление функций органов и тканей путем введения стимуляторов роста и дифференцировки клеток.

Несмотря на большие достижения в области молекулярной биологии, ряд насущных медицинских проблем до сих пор не решен, поскольку не все механизмы данных процессов изучены достаточно полно. Так, стимуляция пролиферативной активности клеточных популяций в патологически измененных органах чревата запуском программы малигнизации. С другой стороны, подавление отдельных клеточных популяций при цитостатической терапии неизбежно сказывается и на немалигнизированных клетках, что приводит к тяжелым побочным эффектам. Решение данной проблемы пытались найти при помощи молекулярно-генетических методов [39,42,56,70]. В некоторых случаях манипуляции с геномом эукариот приводят к его нестабильности, и, как следствие этого, к злокачественной трансформации клеток. Так, создание ¡РЗ-сеПБ было сопряжено с малигнизацией части репрограммированных клеток, в основном за счет трансгена с-Мус [179].

На этом фоне особую актуальность приобретают работы ученых советского периода - М.В. Воронцовой, Б.П. Солопаева, А.Я. Фриденштейна, отдававших проблемам регенерации и регенеративной медицины ключевую роль в развитии морфологической науки и практики. Именно они показали, что организм имеет собственные мощные резервы восстановления утраченных функций, основанные, в частности, на взаимодействии различных клеток в тканях, что в настоящее время принято связывать с

понятиями «стволовой клетки», «тканевых ниш», «хоуминга». Поэтому тенденцией современной биологической науки является повышенный интерес к возможностям включения собственных резервов клеток организма, контроля их клеточного цикла при помощи естественных пара- и аутокринных модуляторов. Эмбриональный период развития организма характеризуется наличием большого количества таких модуляторов -дифференцировочных факторов и гормонов. Их слаженное взаимодействие приводит к развитию из зиготы большого числа тканей, находящихся в сбалансированном состоянии кооперации, за счет которого реализуется четкая программа миграции, пролиферации и дифференцировки клеток. При этом существует достаточно строгий контроль над данными процессами -часть образовавшихся клеток отсеивается и погибает в результате направленного отбора, примером чего может служить, например, клональная селекция лимфоцитов, сенсибилизированных к аутоантигенам. Поскольку дифференцировочные факторы и гормоны стимулируют процессы пролиферации и дифференцировки в эмбриогенезе, теоретически можно предположить возможность их влияния на процессы регенерации и онкогенеза взрослого организма.

Из большого количества гормонов, участвующих в эмбриогенезе, особый интерес представляет хорионический гонадотропин, обладающий способностью стимулировать регенерацию патологически изменённых органов и тканей [44,72-76].

Рецепторы к ХГч имеются на поверхности клеток органов репродуктивной системы (железистый эпителий молочной железы, тека, клетки Лейдига и эмбриональные ткани) [76,95,111,163]. Кроме того, действие данного гормона не ограничивается репродуктивной системой и внутриутробным периодом. Показано, что он способен повышать митотическую активность гепатоцитов при циррозе и резекции печени в эксперименте с 0,04%о до 4,26%о [44,76]. При этом рядом авторов отмечается, что митотический сигнал передается не прямо, а опосредован

лимфоцитарным присутствием [76]. Более того, ХГч способен не только стимулировать, но и подавлять деление некоторых типов клеток. Так, например, он подавляет митогенстимулированную пролиферацию лимфоцитов, снижает иммунореактивность организма матери по отношению к формирующимся тканям плода, угнетает пролиферацию клеток промиелоидного лейкоза HL-60 in vitro и ряда лейкемий in vivo. [16,15,123]. Исследуемый гормон способен подавлять клетки рака молочной железы MCF-7 через активацию апоптоза и ингибирование транскрипционных факторов NF-kB и АР-1, на основании чего некоторые исследователи предлагают включить хорионический гонадотропин в протоколы терапии рака молочной железы [163,167]. В отношении клеток HL-60, MCF-7, лимфоцитов достоверно известно, что они имеют специфические рецепторы к ХГч. Однако нет достоверных данных о том, будет ли ХГч оказывать влияние на клетки, не имеющие специфических рецепторов к ХГч. В последнее время рядом авторов высказывается мнение, что хорионический гонадотропин способен действовать на многие клетки и ткани, в том числе и на негонадные ткани взрослого организма [76,164,165].

Таким образом, результаты экспериментального и клинического применения ХГч при негонадной патологии говорят о том, что данный гормон обладает доказанным клинически и статистически значимым эффектом стимуляции регенерации патологически измененных органов, что говорит о его протективном действии в отношении немалигнизированных клеток. При этом есть данные о его токсическом действии на ряд опухолевых линий, что позволяет рассматривать ХГч с точки зрения не изолированного ингибитора/стимулятора, а регулятора пролиферации, дифференцировки и малигнизации клеток. Тем не менее, большинство исследований, противопоставляющих эффекты ХГч на опухолевые и неопухолевые клетки, выполнено на модели in vivo, что вносит существенные коррективы и обладает рядом недостатков. Например, в данном случае невозможно устранить вероятность косвенных эффектов ХГч через другие гормональные

пути или иммунную систему. Чтобы ответить на вопросы, какую роль играет ХГч в дифференцировке, пролиферации и апоптозе опухолевых/неопухолевых клеток, селективно ли его действие, необходимо исследовать его действие на клетки, не имеющие рецепторов к ХГч, что осуществимо только в условиях in vitro.

Говоря о противоопухолевых эффектах веществ, необходимо опираться на уже известные методы борьбы с процессом опухолевого роста. На сегодняшний день ведущую роль в схемах лечения опухолей занимают цитостатики, и разработка новых противоопухолевых средств предполагает их использование в первую очередь в адъювантной терапии. Поэтому при разработке новых противоопухолевых препаратов необходимо учитывать эффекты их комбинаций с уже известными противоопухолевыми средствами. Таким образом, рассматривая противоопухолевые свойства ХГч, необходимо установить его влияние на опухолевые и неопухолевые клетки не только в чистом виде, но и в комплексе с цитостатиком. Одной из групп цитостатиков являются алкилирующие агенты, селективно повреждающие ДНК клеток-мишеней (например, эмбихин). Данный препарат наиболее удобен для комбинирования с ХГч, поскольку предполагаемые эффекты ХГч связаны с запуском апоптоза и возможно влиянием на ДНК клеток.

Цель и основные задачи исследования

Оценить морфофункциональное состояние опухолевых и неопухолевых клеток под влиянием хорионического гонадотропина и эмбихина в условиях in vitro. Для достижения данной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Определить структурно-функциональные особенности и морфометрические показатели культур неопухолевых клеток L20B и фибробластов легкого крысы в норме и при воздействии хорионического гонадотропина в концентрациях 1, 2 и 4 МЕ/мл.

2. Изучить структурно-функциональные особенности и морфометрические показатели культур опухолевых клеток Нер-2 и RD в норме и при воздействии хорионического гонадотропина в концентрациях 1, 2 и 4 МЕ/мл.

3. Установить закономерности морфологических и функциональных изменений в культурах опухолевых и неопухолевых клеток при комбинированном воздействии хорионического гонадотропина.

4. Провести анализ митотической активности клеток карциномы гортани Нер-2 при воздействии сверхвысоких концентраций хорионического гонадотропина 50, 100 и 150 МЕ/мл.

Публикации

Материалы исследований опубликованы в 14 печатных работах, в том числе 2 статьи опубликованы в журналах, включенных в перечень ведущих рецензируемых изданий ВАК, 1 статья в материалах XIV Международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке», получен 1 патент на изобретение.

Научная новизна исследования

В работе впервые проведено исследование влияния хорионического гонадотропина в различных концентрациях на опухолевые и неопухолевые клетки млекопитающих, как в чистом виде, так и в комплексе с эмбихином. Полученные результаты свидетельствуют о том, что ХГч способен воздействовать на клетки, происходящие из тканей, не имеющих специфических рецепторов к половым гормонам и гонадотропинам, стимулировать апоптоз и дифференцировку опухолевых клеток Нер-2. При этом действие ХГч не опосредовано иными гормональными путями и лимфоцитами, поскольку все эксперименты проведены в условиях in vitro.

Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты данного исследования имеют фундаментальное и прикладное значение. Показано, что механизм реализации действия хорионического гонадотропина на опухолевые и неопухолевые клетки может быть обусловлен иными рецепторами, нежели рецепторы к гонадотропинам и половым гормонам.

Результаты работы позволяют рассматривать хорионический гонадотропин не только как маркер неоплазий, но как индуктор апоптоза опухолевых клеток в условиях in vitro, что позволяет предложить ХГч в качестве противоопухолевого средства. Показано, что в комбинации с эмбихином в низких концентрациях хорионический гонадотропин проявляет преимущественно супресорное действие, в высоких концентрациях - преимущественно протективное действие в отношении опухолевых клеток, что необходимо учитывать при составлении схем противоопухолевой терапии. Теоретические положения включены в учебный процесс кафедр биологии, патологической физиологии, гистологии, цитологии и эмбриологии и онкологии Кировской ГМА и используются при чтении лекций, проведении занятий со студентами, на основании полученных данных разработан и запатентован метод подавления карциномы гортани Нер-2.

Внедрение результатов исследования

Теоретические положения включены в учебный процесс кафедр биологии, патологической физиологии, гистологии, цитологии и эмбриологии и онкологии Кировской ГМА и используются при чтении лекций, проведении занятий со студентами по темам «Эмбриология» и «Основы опухолевого роста», а также вошли в учебно-методические пособия «Временная организация клетки. Клеточный цикл» и «Проблемы клеточной

пролиферации. Клеточный цикл» для самостоятельной работы студентов I и II курсов по предмету «Медицинская генетика». Созданные микропрепараты патологических митозов используются как демонстрационные на практических занятиях со студентами, на основе хорионического гонадотропина проводится разработка противоопухолевого препарата.

Положения диссертации, выносимые на защиту

1. Выявлены морфологические и функциональные изменения, происходящие в опухолевых и неопухолевых клетках под воздействием хорионического гонадотропина, заключающиеся в стимуляции апоптоза, снижении митотической активности клеток и дифференцировке опухолевых клеток Нер-2.

2. Установлено, что супрессорный эффект хорионического гонадотропина в отношении опухолевых клеток выражен сильнее, чем в отношении неопухолевых клеток.

3. Показано, что в комбинации с цитостатиком эмбихином хорионический гонадотропин в зависимости от концентрации проявляет как супрессорное, так и протективное действие.

Степень достоверности и апробация результатов работы

Материалы исследований доложены на научно-практической конференции «Молодежь и медицинская наука в XXI веке» 14-15 мая 2007 года (г. Киров), 81-й Всероссийской студенческой научной конференции, посвященной 150-летию В.М. Бехтерева 10-12 апреля 2007 года (г.Казань), XI научно-практической конференция молодых ученых и студентов с международным участием «Молодежь и медицинская наука в XXI веке» 1-2 апреля 2009 года (г. Киров), II Всероссийской конференции «Студенческая наука и медицина XXI века: традиции, инновации и приоритеты», 15-16 апреля 2008 года (г. Самара), заочной электронной конференции (научный

электронный архив академии естествознания), XII научно-практической конференции «Молодежь и медицинская наука в XXI веке», 31 марта -1 апреля 2011 года (г. Киров), на конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке», 14- 17 ноября 2012 года (г.Москва), а также на расширенном межкафедральном заседании ГБОУ ВПО Кировская ГМА 21 декабря 2012г.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 130 страницах машинописного текста, включает 12 таблиц и 35 рисунков (микрофотографии, графики, диаграммы). Диссертация состоит из введения, 3 глав собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций и библиографического указателя. Список литературы включает 192 источника, в том числе 93 отечественных и 99 иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Горшков, Антон Сергеевич

ВЫВОДЫ

1. Хорионический гонадотропин в условиях культуры клеток оказывает прямое влияние на клетки, происходящие из тканей, не имеющих рецепторов к половым гормонам и гонадотропинам (фибробласты, рабдомиосаркома, карцинома гортани).

2. В отношении культур неопухолевых клеток L20B и фибробластов легкого крысы хорионический гонадотропин снижает митотическую активность клеток и стимулирует их апоптоз.

3. В отношении культур опухолевых клеток Нер-2 и RD хорионический гонадотропин оказывает выраженное антипролиферативное и проапоптотическое действие, снижает метаболическую активность и ядерно-клеточное отношение клеток Нер-2, что является признаком их дифференцировки.

4. В комбинации с эмбихином хорионический гонадотропин в концентрациях 1 и 2 МЕ/мл приводит к стимуляции апоптоза, снижении оптической плотности лизатов в МТТ-тесте, а в концентрации 4 МЕ/мл оказывает преимущественно протективное действие, что проявляется в снижении доли апоптозных клеток и повышении оптической плотности лизатов в МТТ-тесте в отношении опухолевых клеток.

5. В сверхвысоких концентрациях (50, 100 и 150 МЕ/мл) хорионический гонадотропин не приводит к катаплазии клеток Нер-2, снижает митотическую активность данных клеток, дезорганизует монослой, повышает долю патологических митозов в культуре.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Процессы пролиферации, дифференцировки, регенерации и опухолевого роста тесно связаны между собой, что заставляет исследователей всего мира искать ключ к комплексному решению проблемы управления кинетикой клеточных популяций. Давно известно, что каждая из клеток уникальна по биохимическим каскадам реакций, что обусловлено тканеспецифичностью промоторов генов и эпигенетическими механизмами регуляции экспрессии генов. Тем не менее, общность вышеперечисленных механизмов заставляет проводить дальнейшие научные поиски.

Для решения этой проблемы многие исследователи обращают внимание на гормоны и ростовые факторы внутриутробного периода, в частности на хорионический гонадотропин. Существует несколько гипотез, согласно которым ХГч рассматривают как стимулятор регенерации, противоопухолевое средство, иммуномодулятор и даже как универсальный регулятор на протяжении всего онтогенеза. Для детального исследования влияния ХГч на различные типы клеток необходимо было исключить все возможные влияния со стороны макроорганизма (иммунная система, неспецифическое связывание препарата ХГч белками сыворотки, выведение препарата), что возможно только в культуре клеток.

Сам факт того, что ХГч in vitro влияет на клетки негонадного происхождения (рабдомиосаркома, карцинома гортани, фибробласты), говорит о существовании для него сигнального пути, не связанного с ХГч/ЛГ - рецептором. При этом важен не столько характер влияния (подавление/стимуляция), сколько сам факт такого влияния хорионического гонадотропина. В настоящий момент известно, что пролиферация может быть запущена активированными лимфоцитами или макрофагами [39,71]. Исследования, выполненные in vitro, позволяют полностью исключить наличие клеток-посредников между гормоном и «целевой» клеточной популяцией. Таким образом, экспериментально подтверждается мнение, что

ХГч играет роль не только эмбрионального гормона, но может принимать участие в регуляции процессов созревания и роста тканей на протяжении всего онтогенеза и прямо влиять на клетки различного тканевого происхождения.

В теории ХГч, как стимулятор регенерации, должен был стимулировать пролиферацию неопухолевых клеток. Оказалось, что такая гипотеза справедлива только частично, и эффект ХГч зависит от его концентрации в среде культивирования. В низкой концентрации (т1 МЕ/мл) ХГч либо не влияет на пролиферацию фибробластов (легочные фибробласты), либо усиливает её (линейные фибробласты). Повышение содержания ХГч в среде культивирования снижает МИ легочных фибробластов, а также оптическую плотность лизатов культур в МТТ-тесте. Более того, ХГч стимулирует апоптоз линейных фибробластов, что невозможно было объяснить с точки зрения существующих теорий действия ХГч.

Новый взгляд на проблему сформировался после исследования влияния ХГч, а также комбинации ХГч и эмбихина на опухолевую линию Нер-2. По результатам анализа литературы не было ясно, способен ли ХГч действовать на опухолевые линии, лишенные специфического ХГч/ЛГ рецептора, ведь роль ХГч на протяжении всего онтогенеза была только гипотезой. Оказалось, что в целом по результатам четырех тестов (митотическая активность, МТТ-тест, апоптозный тест, морфометрическое исследование) ХГч выступает как супрессор клеток Нер-2, но в комбинации с цитостатиком способен оказать как супрессорный (преимущественно для 1,2 МЕ/мл), так и протективный эффект (преимущественно для 4 МЕ/мл).

Поскольку ХГч оказал протективный эффект в отношении опухолевой линии, необходимо было удостовериться, что ХГч не является триггером опухолевого роста. Для этого было исследовано влияние сверхвысоких концентраций ХГч на клетки Нер-2. Если гормон обладает трансформирующим потенциалом, то в сверхвысоких концентрациях он может привести к опухолевой прогрессии. Как оказалось, в концентрациях

50, 100 и 150 МЕ/мл ХГч оказывает антипролиферативное и резкое дестабилизирующее действие на клетки Нер-2.

Следовательно, для объективной оценки влияния ХГч на исследуемые клетки необходимо отказаться от концепции противопоставления супрессорных и протективных эффектов - влияние ХГч на метаболизм культивируемых клеток оказалось намного шире и многограннее.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Горшков, Антон Сергеевич, 2013 год

СПИСОК ЦИТИРОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Абелев Г.И. Механизмы дифференцировки и опухолевый рост (обзор)// Биохимия. -2000-Т.65.-№1- С. 127-139.

2. Агеенко А.И. Онкогены и канцерогенез. - М.: Медицина, 1986. -256 с.

3. Адаме Р. Методы культуры клеток для биохимиков. [Пер. с англ. Под ред. М.А. Панова] -М.: Мир, 1983.-263 с.

4. Алов И.А. Цитофизиология и патология митоза. - М.: Медицина, 1972. -264 с.

5. Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях /Анджапаридзе О.Г., Гаврилов В. И., Б. Ф. Семенов, Степанова Л. Г. -М.: Медицина, 1962. - 212 с.

6. Бажутова Г. А. Реакция одиночных и контактирующих клеток культуры Hela на действие ионизирующего излучения: Автореф. дис. ... канд. биол. наук. - Москва, 1996. - 23 с.

7. Бажутова Г.А. Влияние y-облучения в различных режимах на образование клеточных комплексов в культуре HeLa / Бажутова Г.А., Календо Г.С., Ягубов A.C. и др. //Бюл. эксп. биол. и мед. - 1997. - №4.

- С. 435-439.

8. Байдюк Е.В. Сравнительный анализ морфофункциональных показателей культуры гепатоцитов, выделенных из нормальной и патологически измененной печени крыс /Байдюк Е.В., Ширяева А.П., Безбородкина H.H., Сакута Г.А. //Цитология. - 2009. - Том 51. - № 10.

- С.797-805.

9. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. - М.: Эдиториал УРСС, 2002.- 320 с.

10. Бельский Ю.П. Механизмы противоопухолевой активности естественных супрессрных клеток костного мозга /Бельский Ю.П.,

Патрушев В.К., Вельская Н.В. //Бюл. эксп. биол. и мед. - 2005. - Т. 139. - №2. - С.208-210.

11. Берштейн JIM. Гормональный канцерогенез. СПб.: Наука, 2000. - 199 с.

12. Бигвава Х.А. Влияние фактора некроза опухоли на цитотоксичность и индукцию апоптоза противоопухолевыми препаратами на клеточных линиях меланом: Автореф. дисс.... канд. биол. наук. - М., 2012 - 26 с.

13. Блюмкин В.Н., Жданов В.М.. Влияние вирусов на хромосомный аппарат и деление клеток. -М.: Медицина, 1973. - 266 с.

14. Быстревская В.Б. Структура митотического аппарата при некоторых формах патологии митоза. Дисс.... докт. биол. наук. -М., 1984. -Т.1. -164с.

15. Валуйских А.Н. Синтетический полипептидный фрагмент ß-субъединицы хорионического гонадотропина угнетает митогенстимулированную пролиферацию лимфоцитов человека in vivo //Валуйских А.Н., Ромашкова Ю.А., Данилкович A.B. и др. //Бюл. эксп. биол. и мед. - 1997. - №4. - С.424-426.

16. Валуйских А.Н. Биологическое действие хорионического гонадотропина и его синтетического пептидного фрагмента на клеточную линию HL-60 / Валуйских А.Н., Ромашкова Ю.А., Данилкович A.B. и др.//Бюл. эксп. биол. и мед.-1997- №3. - С. 319322.

17. Вирусология. Методы. [Пер. с анл. Под ред. Б.Мейхи.] - М.: Мир, 1988. -344 с.

18. Владимирская Е.Б. Биологические основы противоопухолевой терапии. -М.: Агат-мед, 2001. - 110 с.

19. Вотинцев A.A. Морфологические критерии прогноза рецидивирования рака яичников и выживаемость больных: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук. Челябинск, 2005. - 24 с.

20. Вотинцев А.А., Разин А.П. Морфологическая диагностика и оценка прогрессии эндометриоидного овариального рака //Фундаментальные исследования. - 2006. - № 9. - С. 46-48.

21. Газарян К.Г., Тарантул В.В. Геном эукариот. Молекулярная организация и экспрессия. М.: Изд-во Моск. ун-та., 1983. - 272 с.

22. Ганцев Ш. X. Онкология: Учебник для студентов медицинских вузов. [2-е изд., испр. и доп.] М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2006. - 488 с.

23. Глинских Н.П. Методические рекомендации по приготовлению клеточных культур, используемых в практике вирусологических исследований /Сост. Глинских Н.П., Зусман Ф.Я., Колесникова Г.Г., Тахтулова В.И., Огараков И.П. Свердловск. - 1974.

24. Гольдина Т. А. Варианты организации ядрышек при гепатоканцерогенезе, вызванном гиперэкспрессией генов-регуляторов клеточного цикла у трансгенных мышей: Автореф. дисс... канд. биол. наук. -М.: 2007.-25 с.

25. Горбунова O.J1. Регуляция фагоцитарной активности лейкоцитов хорионическим гонадотропином в период формирования первичного гуморального ответа /Горбунова O.JI., Ширшев С.В., Бахметьев Б.А.//Проблемы эндокринологии. -2007. - № 3. - Т.53. - С.44-48.

26. Горшкова Е.В. SNP в начале интрона 2 гена K-ras мыши, ассоциированный с развитием рака легких, влияет на связывание с факторами транскрипции /Горшкова Е.В., Каледин В.И., Кобзеев В.Ф., Меркулова Т.И. // Бюл. эксп. биол. и мед. - 2006. - Т.141. - №6. С.681-684.

27. Гулак П.В. Гепатоцит: Функционально-метаболичесике свойства. /Гулак П.В., Дудченко A.M., Зайцев В.В., Лукьянова Л.Д., и др. - М.: Наука, 1985.-271с.

28. Гурьева Е.П. Перевиваемые клетки, используемые в вирусологических исследованиях. Методические указания /Сост. Гурьева Е.П., Бохневич Г.М. - Л.: 1968. - 20 с.

29. Девятьярова О.Н. Функциональная активность лейкоцитов, перенесших криоанабиоз при -20°С: Автореф.... дисс. канд. биол. наук. - Киров, 2005. - 24с.

30. Дейчман Г.И.. Естественный отбор и ранние изменения фенотипа опухолевых клеток in vivo: приобретение новых механизмов защиты (обзор)// Биохимия. -2000. -Т.65.- №1.-С. 92-112.

31. Димитров Д.Я. Хориальный гонадотропин человека. [Пер. с болг.] -М.: Медицина, 1979. - 143 с.

32. Жанаева С.Я. Влияние ингибиторов цистеиновых протеаз ЕР-475 на ФНО-а независимый апоптоз клеток мышиной лимфосаркомы LS, индуцированный циклофосфаном /Жанаева С.Я., Короленко Т.А., Хощенко О.М., Спиридонов В.К., Николин В.П., Каледин В.И. //Бюл. эксп. биол. и мед. - 2005. -Т.139. -№2. - С.153-156.

33. Ильинских И.Н. Кариопатологические изменения в иммунокомпетентных клетках человека и животных под влиянием факторов инфекционной природы. Дисс.... докт. биол. наук. - Томск, 2002.-364с.

34. Иммуноцитохимия и моноклональные антитела в онкогематологии АН УССР. Ин.-т проблем онкологии им. P.E. Кавецкого [Под общ. ред. Пинчука В.Г., Глузмана Д.Ф] - Киев: Наук. Думка, 1990. - 232 с.

35. Инге-Вечтомов С.Г. Введение в молекулярную генетику: Учебн. пособие для студентов Вузов, обучающихся по специальности «Генетика». -М.: Высш. шк., 1983.-343 с.

36. Кадагидзе З.Г., Шелепова В.М., Соколов A.B. Значение опухолевых маркеров в клинике герминогенных опухолей яичка. URL:

http ://www.rosonco web .ru/1 ibrary/congress/ru/uicc/4 .php (Дата

обращения: 03.05.2011)

37. Кирилина E.A. Индукция дифференцировки в лейкозных клеточных линиях под влиянием миелопептида-4 /Кирилина Е.А., Суворов Н.И., Попова С.С., Хайдуков C.B. и др. // Бюл. эксп. биол. и мед. - 2005. -№11.- Т.140. -С.565-569.

38. Киселев Ф.Л. Вирус - ассоциированные опухоли человека: рак шейки матки и вирусы папиллом (обзор) // Биохимия. - 2000. - Т.65. - №1. -С.79-92.

39. Киселев Ф.Л., Павлиш O.A., Татосян А.Г. Молекулярные основы канцерогенеза у человека /АМН СССР. - М.: Медицина, 1990.-320 с.

40. Ключивская О., Якимович И., Стойка Р. Параметры роста сублиний клеток Нер-2, различающихся по чувствительности к индукции апоптоза под действием стероидных гормонов //Экспериментальная онкология. -2001.-№23. - С. 134-135.

41. Комарова Е.А., Гудков A.B. Супрессия р53: новый подход к преодолению побочных эффектов противоопухолевой терапии (обзор) //Биохимия. - 2000. -Т.65. -№1.- С.48-57.

42. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза (обзор) //Биохимия. - 2000. - Т.65. -№1. - С.5-34.

43. Костяев A.A., Утемов C.B. Способ криоконсервирования клеточных суспензий // Патент России № 2195111. 2002.

44. Косых A.A. Соединительная ткань печени в норме, при хроническом гепатите и циррозе в условиях регенерации (морфо-функциональное исследование): Дисс.....докт. мед. наук. - Киров, 1992. -474 с.

45. Крамаренко И.И. Роль коррекционной репарации ДНК (MMR) в механизме гено- и цитотоксического действия метилнитрозомочевины

в опухолевых клетках человека: Дисс. ... канд. биол. наук. - Москва. 2006.- 86 с.

46. Красильников М.А. Сигнальные пути, регулируемые фисфатидилинозит-3-киназой и их значение для роста, выживаемости и злокачественной трансформации клеток (обзор) //Биохимия. - 2000. - Т.65. - №1. - С.68-79.

47. Культура животных клеток. Методы. [Пер. с англ. Под ред. Р. Фрешни] -М.: Мир, 1989.-333 с.

48. Культура нервной ткани. [Под ред. Жаботинского Ю.М.] - М.: Медицина. 1977. - 184 с.

49. Культура ткани в онкологии [Ин.-т экспериментальной и клинической онкологии АМН СССР.] -М., 1968.-331 с.

50. Лавров A.B., Вольдгорн Я.И. Особенности расположения хромосом в ядрах мезенхимных стволовых клеток человека при культивировании in vitro //Клеточные культуры. Информационный бюллетень. — 2011.— №27.-С. 68-73.

51. Лазаревич Н.Л.. Молекулярные механизмы экспрессии гена альфа -фетопротеина (обзор) //Биохимия. - 2000. - Т.65. - №1. - С. 139-150.

52. Леонтьева О.В. Цитотоксичность мевалоната, ловастатина и карминомицина в отношении человеческих злокачественных лимфобластов MOLT-4 in vitro /Леонтьева О.В., Тренин A.C., Бухман В.М., Дудник Ю.В. - НИИ по изысканию новых антибиотиков РАМН, Москва. URL: http://nature.web.ru/db/msg.html?mid=l 176765&uri=index.html (Дата обращения: 7.08.2011)

53. Магакян Ю.А. Влияние солкосерила на популяционные и клеточные параметры культур Hela и RD / Магакян Ю.А., Каралян З.А., Каралова Е.М., Аброян Л.О., Акопян Л.А., Гаспарян М.Г., Джагацпанян Н.Г., Семерджян З.Б., Тер-Погосян З.Р. //Цитология. -2010. - Т.52. - №2. - С. 126-130.

54. Манских В.Н. Морфологические методы верификации и количественной оценки апоптоза //Бюллетень сибирской медицины. -2004. -№ 1. - С. 63-70.

55. Методы культивирования клеток: сборник науч. трудов. - Л.: Наука, 1988.-313 с.

56. Москалева Е. Ю. Регуляция чувствительности опухолевых клеток с помощью антисмысловых олигонуклеотидов к гену Вс1-2 /Москалева Е.Ю., Сладкова Л.В., Обухова В.В., Белушкина Н.Н. и др. //Молекулярная медицина. - 2001. - №1. - С.45-51.

57. Новичков Е.В. Определение степени риска рецидива овариального рака по данным морфометрического и иммуногистохимического исследования первичной опухоли //Вестник ВолГМУ. - 2009. - №3(31). -С. 70-73.

58. Новые методы культуры животных тканей. [Пер. с англ.] - М.: Мир, 1976.- 255 с.

59. Онкология: учебник с компакт-диском. [Под ред. В.И. Чиссова, С.Л. Дарьяловой.] - М. : ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 560 с.

60. Пальцев М.А., Иванов А.А. Межклеточные взаимодействия. - М.: Медицина, 1995. - 224 с.

61. Панкова О.В. Морфометрические критерии обратимости дисплазии бронхиального эпителия II степени при различных видах лечения. /Панкова О.В., Перельмутер В.М., Черемисина О.В.//Сибирский онкологический журнал. - 2005. -№3(15). - С.44-47.

62. Панкова О.В. Оценка эффективности различных методов лечения бронхиальной дисплазии с использованием комплексного цитоморфометрического исследования /Панкова О.В., Черемисина О.В. // Сибирский онкологический журнал. - 2003. - №4. - С. 9-11.

63. Подчерняева Р.Я. Методические рекомендации по работе с клеточными культурами /Подчерняева Р.Я., Данлыбаева Г.А.,

Гринкевич О.М., Корнилаева Г.В. - М.: РАМН. ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, - 2008.

64. Получение и культивирование первично-трипсинизированных культур. [Под ред. проф. Карпова С.П.] - Томск: Изд. ТГУ, 1974. - 16 с.

65. Репин B.C. Эмбриональные стволовые клетки: фундаментальная биология и медицина. /Репин B.C., Ржанинова A.A., Шаменков Д.А. -М.: РеМеТекс, 2002. - 225 с.

66. Рецепторы клеточных мембран для лекарств и гормонов: междисциплинарный подход. [Пер. с англ., под ред. Штрауба Р.У., Болисс Л.] - М.: Медицина, 1983. - 386 с.

67. Романко Ю.С. Зависимость противоопухолевой эффективности фотодинамической терапии с фотодитиазином от плотности световой энергии. /Романко Ю.С., Цыб А.Ф., Каплан М.А., Попучиев Е.В. //Бюлл. эксп. биол. и мед. - 2005. - №4. - С.456-461.

68. Свирновский А.И. Молекулярные основы феномена химио- и радиорезистентности при опухолевых процессах. /Свирновский А.И., Пасюков В.В. //Медицинские новости, 2007. -№11.- С.7-19.

69. Севостьянова Н.В. Цитогенетические изменения в клетках Нер-2, инфицированных вирусом Эпштейна-Барр /Севостьянова Н.В., Рудакова Е.Г., Исаева Т.М., Плотникова H.H., Уразова Л.Н.// Экспериментальная онкология. - 2001. - №23,- С.131-133.

70. Сейц И.Ф. Молекулярная онкология: руководство для врачей /Сейц И.Ф., Князев П.Г. - Л.: Медицина, 1986. - 352 с.

71. Симонова B.C. Оливомицин вызывает апоптоз опухолевых клеток и подавляет р53-индуцированную транскрипцию/Симонова B.C., Самусенко A.B., Филиппова H.A., Тевяшова А.Н.. и др. //Бюл. эксп. биол. и мед.-2005.-Т. 139,- №4.-С.451-455.

72. Солопаева И.М. Роль хорионического гонадотропина в структурно-функциональном обеспечении онтогенеза млекопитающих в норме и

патологии /Солопаева И.М. //Нижегородский медицинский журнал. -2003.- №1. URL: http://www.medicum.nnov.rU/nmi/2003/l/14.php (Дата обращения: 20.09.2012)

73. Солопаева И.М. Новый взгляд на фармакологическую активность хорионического гонадотропина человека и его влияние на патологически измененную печень /Солопаева И.М., Иванова H.JT.//Современные технологии в медицине. - 2010. - №1. - С.12-20.

74. Солопаева И.М. Стимуляция регенерации патологически измененной печени и хорионический гонадотропин. Монография /Солопаева И.М., Солопаев Б.П. - Н.Новгород. Издательство ННГУ, 1991. - 124 с.

75. Солопаева И.М. Хорионический гонадотропин в биологии и медицине. Монография. /Солопаева И.М. - Н.Новгород: Изд-во нижегородского госуниверситета им Н.И.Лобачевского, 2000. - 192 с.

76. Солопаева И.М. Хорионический гонадотропин в онтогенезе и онкогенезе (по материалам двух научных открытий и одной гипотезы). /Солопаева И.М. - Н.Новгород: Растр-НН, 2007. - 282 с.

77. Ставровская A.A. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток //Биохимия. - 2000. -Т.65.-№1. -С. 112-127.

78. Татосян А.Г. Киназы семейства Src: структура и функции /Татосян А.Г., Мизенина О.А // Биохимия. - 2000. - Т.65. - №1. - С.57-68.

79. Ткачук В.А. Введение в молекулярную эндокринологию. - М.: Изд-во Московского университета, 1983. - 256 с.

80. Трансформированная клетка. [Под общ. ред. Камерона И.Л., Пула Т.Б.] - Киев: Наук. Думка, 1985. - 384 с.

81. Федосеева В.М. Влияние факторов тимуса, хорионического гонадотропина и тестостерона на дисфункцию бронхиального эпителия у больных хроническим обструктивным заболеванием легких и циррозом печени /Федосеева В.М., Хренов A.A. URL:

http://studentdoctoфrofessor■com■ua/ru/node/498 (Дата обращения: 30.09.2012)

82. Филатова E.H. Влияние хорионического гонадотропина на пролиферацию и апоптоз клеток у крыс-носителей лимфосаркомы Плисса: Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. - Н.Новгород. -2010.-23 с.

83. Фрешни Р.Я. Культура животных клеток. Практическое руководство. [5-е изд. Пер. с англ.] - М.: Бином, 2010. - 691с.

84. Харрис Г. Ядро и цитоплазма. [Пер. с англ] - М.: Мир. 1973. - 190 с.

85. Химиотерапия злокачественных опухолей /Под ред. Н.Н.Блохина. -М.: Медицина, 1997.-320 с.

86. Хрипков И.С. Пролиферативная активность клеток опухоли Герена при действии гомологичных опухолевых рибонуклеиновых кислот /Хрипков И.С.//Морфолопя. - 2008. -Т.2.- №3. - С.77-80.

87. Ченцов Ю.С. Введение в клеточную биологию. [ 4-е изд., перераб. и доп] - М.: ИКЦ "Академкнига", 2004. -495 с.

88. Чернышева М.П. Гормоны животных. Введение в физиологическую эндокринологию: учебное пособие. - СПб.: Глаголь, 1995. -296 с.

89. Чехун В.Ф. Злокачественные опухоли и беременность /Чехун В.Ф. //Здоровье Украины XXI век. - 2003. - №73. URL: http://health-ua.com/articles/254.html (Дата обращения: 13.07.2012)

90. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью (обзор) /Чумаков П.М. //Биохимия. - 2000. - Т .65. -№1. - С.34-48.

91. Щеглова О.О. Функциональное состояние лейкоцитов после выхода из холодового анабиоза при умеренно-низкой температуре: Автореф. ... дисс. канд. биол. наук. - Киров, 2005. -24 с.

92. Юдинцева Н.М. Различия в морфологии и функциональной активности дермальных фибробластов в зависимости от их происхождения и условий культивирования: Автореф. дисс... канд. биол.наук. - С-Пб., 2010.-25 с.

. 93. Ярмоненко С.П. Биологические основы лучевой терапии опухолей / Ярмоненко С.П., Вайнсон А.А, Календо Г.С., Рапман Ю.И.-М.: Медицина, 1976.-272 с.

94. Abbasian F. A comparative analysis of routine techniques: reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and five cell lines for detection of enteroviruses in stool specimens /Abbasian F., Tabatabaie H., Sarijloo M., Shahmahmoodi S., et al. //Iran. J. Microbiol. - 2011. - Vol. 3(2).-P. 75-79.

95. Abdallah M.A. Human fetal nongonadal tissues contain human chorionic gonadotropin/luteinizing hormone receptors /Abdallah M.A., Lei Z.M., Li X., et al. //The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. - Vol. 89(2).- P.952-956.

96. Animal Cell Culture. [Edit, by Pollard J.W., Walker J.M.] //Methods in Molecular Biology, Vol. 5. - Totowa, Humana Press. Inc. - 1990. -704 p.

97. Apoptosis and Cancer. [Edit, by Мог G., Alvero A.B.] //Methods in Molecular Biology, Vol. 414. -Totowa. Humana Press Inc., 2007. -252 p.

98. Basic Cell Culture Protocols [3-rd ed. Edit, by Helgason C.D., Miller C.L.] //Methods in Molecular Biology, Vol. 290. - Totowa, Humana Press Inc., 2004.-384 p.

99. Basic Cell Culture Protocols. [Edit, by Pollard J.W., Walker J.M.] Methods in Molecular Biology, Vol. 75. -Totowa. Humana Press Inc., 1997. -482 p.

100. Bellet D. Malignant transformation of nontrophoblastic cells is associated with the expression of chorionic gonadotropin beta genes normally transcribed in trophoblastic cells //Bellet D., Lazar V., Bieche I., et al. //Cancer. Res. - 1997,-Vol. 57. - P.516-523.

101. Birken S. Preparation and characterization of new WHO reference reagents for human chorionic gonadotropin and metabolites /Birken S., Berger P., Bidart J.M., et al.//Clin. Chem. - 2003. - Vol.49. - P. 144-154.

102. Birken S. Specific measurement of o-linked core 2 sugar-containing isoforms of hyperglycosylated human chorionic gonadotropin by antibody B152 /Birken S.//Tumour Biol. - 2005. - Vol. 26. -P.131-141.

103. Blithe D.L. Free alpha molecules from pregnancy stimulate secretion of prolactin from human decidual cells: a novel function for free alpha in pregnancy /Blithe D.L., Richards R.G., Skarulis M.C. //Endocrinology. -1991. - Vol. 129. - P. 2257-2259.

104. Bourinbaiar A.S. Use of beta HCG for the control of retroviral infection // USA Patent US5811390. 22 08.1995.

105. Braunstein G.D. Widespread distribution of a chorionic gonadotropin-like substance in normal human tissues /Braunstein G.D., Kamdar V., Rasor J., et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 1979. - Vol.49 (6). - P. 917-25.

106. Bruns C.J. Blockade of the epidermal growth factor receptor signaling by a novel tyrosine kinase inhibitor leads to apoptosis of endothelial cells and therapy of human pancreatic carcinoma /Bruns C.J., Solorzano C.C., Harbison M.T., Ozawa S., et al. //Cancer Res. - 2000. - Vol.60. - P.2926-2935.

107. Cancer Cell Culture: Methods and Protocols. [Edit, by Langdon S. P.] //Methods in Molecular Medicine, Vol. 88. - Totowa. Humana Press Inc., 2003.-334 p.

108. Cancer Cytogenetics: Methods and Protocols. [Edit, by Swansbury J.] //Methods in Molecular Biology, Vol. 220. - Totowa. Humana Press Inc., 2003.-269 p.

109. Cell Biology Protocols. [Edit, by Harris J.R., Graham J., Rickwood D.] Wiley & Sons, Ltd, 2006. - 402p.

110. Cell Separation: Fundamentals, Analytical and Preparative Methods. [Edit, by Kumar A., Galaev I.Yu., Mattiasson B.] Advances in Biochemical Engineering Biotechnology, Vol. 106. - 2007. - 203 p.

111. Cole L.A. Biological functions of hCG and hCG-related molecules /Cole L.A. //Reprod. Biol. Endocrinol. - 2010. - P.8-102.

112. Cryopreservation and Freeze-Drymg Protocols. [Edit, by Day J.G., McLellan M.R.] //Methods In Molecular Biology, Vol. 38. - Totowa. Humana Press Inc., 1995. -205 p.

113. Culture of Epitelial Cells. [2-nd edition. Edit, by Freshney R.I., Freshney M.G.] - Wiley-liss, 2002. - 467p.

114. D'Hauterive S.P. Human chorionic gonadotropin and growth factors at the embryonic-endometrial interface control leukemia inhibitory factor (LIF) and interleukin 6 (IL-6) secretion by human endometrial epithelium /D'Hauterive S.P., Charlet-Renard C., Berndt S., et al. //Human Reproduction. - 2004. -Vol.19 (11). - P.2633-2643.

115. De Coster M.A. The Nuclear Area Factor (NAF): a measure for cell apoptosis using microscopy and image analysis /De Coster M.A. //Modern Research and Educational Topics in Microscopy. - 2007. - P.378-384.

116. De Medeiros S.F. Human choriogonadotrophin protein core and sugar branches heterogeneity: basic and clinical insights /De Medeiros S.F., Norman R.J. //Human Reproduction Update. - 2009. - Vol. 15(1).-P. 6995.

117. Di Campli C. Cell-based therapy for liver diseases /Di Campli C., Nestola M., Piscaglia A.C., Santoliquido A., et al. //European Review for Medical and Pharmacological Sciences. - 2003. - Vol. 7. - P.41-44.

118. Dworaczek H. The early prophase index assay: tailored for checkpoint analysis /Dworaczek H., Andersen P.L., Xiao W. URL: http://www.zerk.ca/PDFfiles/The%20earlv%20prophase%20index%20assav .pdf (Дата обращения: 18.08.2012)

119. Elliott M.M. Carbohydrate and peptide structure of the alpha- and beta-subunits of human chorionic gonadotropin from normal and aberrant pregnancy and choriocarcinoma /Elliott M.M., Kardana A., Lustbader J.W., Cole L.A.//Endocrine. - 1997,-Vol. 7.-P. 15-32.

120. Fawcett D.W. The Cell. Chapter 4: Nucleus. [2-nd edition.]. - W. B. Saunders Company, 1981. - P. 195-302.

121. Fedoroff S. Effect of human blood serum on tissue cultures. Development of resistance to toxic human serum in fibroblast-like cells (Earle's strain L) obtained from a C3H mouse /Fedoroff S., Cook B. //J. Exp. Med. - 1959. -Vol. 109(6).-P.615-632.

122. Feild J. A. Structure-function analysis of human transforming growth factor-a by site-directed mutagenesis /Feild J.A., Reid R.H., Rieman D.J., et al. //Biochem. J. - 1992. -Vol. 283. - P. 91-98.

123. Feldman E.J. In vitro effects and clinical evaluation of a human chorionic gonadotrophin preparation in acute leukemia /Feldman E.J., Seiter K., Chiao J.W., et al. //Leukemia. - 1998. - Vol.12 (11). - P.1749-55.

124. Fox C.H. Morphometric Analysis of Neoplastic Transformation in Rodent Fibroblast Cell Lines/Fox C.H., Caspersson Т., Kudynowski J., et al. //Cancer Research. - 1977. - Vol.37. - P.892-897.

125. Gallo R.C. Treatment and prevention of HIV infection by administration of derivatives of human chorionic gonadotropin /Gallo R.C., Bryant J., Lunardi-Iskandar Y.// USA Patent US6319504. 9.09.1996.

126. Gebauer G. Cytotoxic effect of conjugates of doxorubicin and human chorionic gonadotropin (hCG) in breast cancer cells /Gebauer G., Fehm Т., Beck E.P., et al. //Breast Cancer Research and Treatment. - 2003. - Vol. 77. P.125-131.

127. Giarratana M-C. Ex vivo generation of fully mature human red blood cells from hematopoietic stem cells /Giarratana M-C., Kobari L., Lapillonne H., et al. //Nature Biotechnology. - 2005. - Vol. 23(1). - P. 69-74.

128. Gil-Gomez G. Measurement of Changes in Apoptosis and Cell Cycle Regulatory Kinase Cdk2 /Gil-Gomez G. //Methods in Molecular Biology. Vol. 282: Apoptosis Methods and Protocols [Edited Brady H.J.M.] -Totowa, Humana Press Inc., 2004. - P.131-145. URL: http://www.ncbi.nlm.nih.gOv/pubmed/l 5885144 (Дата обращения: 15.09.2012)

129. Graesslin D. The microheterogeneity of human chorionic gonadotropin (hCG) reflected in the P-subunits. /Graesslin D., Weise H.C., Braendle W. //FEBS Lett. - 1973. - Vol. 31. - P.214-216.

130. Hattori M.A. A novel action of epidermal growth factor in rat granulosa cells: its potentiation of gonadotrophin action /Hattori M.A., Yoshino E., Shinohara Y., et al. //Journal of Molecular Endocrinology. - 1995. - Vol.15 (3). -P. 283-291.

131. Hofmann J. Characterization of epidermal growth factor-related proteins from human urinary chorionic gonadotrophin /Hofmann J., Holzel F., Hackenberg R., Schulz K.D. //Journal of Endocrinology. - 1989. - Vol. 123(2).-P.333-340.

132. Hu Y.L. Determinants of transcription of the Chorionic Gonadotropin /Luteinizing Hormone receptor gene in human breast cells /Hu Y.L., Lei Z.M., Huang Z.H., Rao Ch.V.// The Breast Journal. - 1999. - Vol. 5(3). -P.186-193.

133. Human Cell Culture Protocols. [2-nd ed. Edit. By Picot J.] //Methods in Molecular Medicine. Vol. 107. - Totowa, Humana Press Inc., 2004. -352 P-

134. In Vitro Toxicity Testing Protocols. [Edit, by O'Hare S., Allerwlll C. K.] Methods m Molecular Biology, Vol. 43. - Totowa. Humana Press Inc., 1995.-346p.

135. Jackson A.M. The biological action of choriogonadotropin is not dependent on the complete native quaternary interactions between the subunits /Jackson A.M., Berger P., Pixley M., et al. //Molecular Endocrinology. -1999.-Vol. 13. - P.2175-2188.

136. Jankowska A. Coexpression of human chorionic gonadotropin beta subunit and its receptor in nontrophoblastic gynecological cancer /Jankowska A., Andrusiewicz M., Grabowski J., et al. //International Journal of Gynecological Cancer. - 2008. - Vol. 18(5). - P. 1102-1107.

137. Kang D. The checkpoint protein Chfr is a ligase that ubiquitinates Plkl and inhibits Cdc2 at the G2 to M transition /Kang D., Chen J., Wong J., Fang G.//The Journal of Cell Biology.-Vol. 156. - 2002(2). - P.249-259.

138. Kashima L. CHFR Protein Regulates Mitotic Checkpoint by Targeting PARP-1 Protein for Ubiquitination and degradation /Kashima L., Idogawa M., MitaH., Shitashige M., et al.//J. Biol. Chem. - 2012. - Vol. 287. -

P.12975-12984.

139. Kiiveri S. GATA transcription factors in the development and tumors of the adrenal cortex. Academic dissertation. Helsinki. - 2004. - 80 p.

140. Kobata A. Structure, pathology and function of the N-linked sugar chains of human chorionic gonadotropin /Kobata A., Takeuchi M. //Biochim. Biophys. Acta. -1999.-Vol. 1455. - P.315-326.

141. Kovalevskaya G. Trophoblast origin of hCG isoforms: cytotrophoblasts are the primary source of choriocarcinoma-like hCG /Kovalevskaya G., Genbacev O., Fisher S.J., et al. //Mol. Cell. Endocrinol. - 2002. - Vol. 194. -P.147-155.

142. Kovalevskaya G. Differential expression of human chorionic gonadotropin (hCG) glycosylation isoforms in failing and continuing pregnancies: preliminary characterization of the hyperglycosylated hCG epitope /Kovalevskaya G., Birken S., Kakuma T., et al. // J.Endocrinol. - 2002. -Vol. 172. -P.497-506.

143. Laitakari J. Computer-assisted quantitative image analysis of cell proliferation, angiogenesis and stromal markers in experimental and laryngeal tumor development. Oulu. Oulun Yliopisto. -2003.- 91 p.

144. Langley B. Myostatin inhibits rhabdomyosarcoma cell proliferation through an Rb-independent pathway /Langley B., Thomas M., McFarlane C., et al. //Oncogene. - 2004. - Vol. 23(2). - P. 524-34.

145. Lei Z.M. Novel Expression of Human Chorionic Gonadotropin/ Luteinizing Hormone Receptor Gene in Brain /Lei Z.M., Rao Ch.V., Kornyei J.L., et al. //Endocrinology. - 1993. - Vol. 132(5). - P.2262-2272.

146. Lei Z. M. Targeted Disruption of Luteinizing Hormone/Human Chorionic Gonadotropin Receptor Gene /Lei Z. M., Mishra S., Zou W., et al. //Molecular Endocrinology - 2001. - Vol. 15( 1). - P. 184-200.

147. Lempiainen A. Free -Subunit of Human Chorionic Gonadotropin in Serum Is a Diagnostically Sensitive Marker of Seminomatous Testicular Cancer /Lempiainen A., Stenman U-H., Blomqvist C., Hotakainen K. //Clinical Chemistry. - 2008. - Vol.54 (11). - P. 1840-1843.

148. Lunardi-Iskandar Y. Effects of a urinary factor from women in early pregnancy on HIV-1, SIV and associated disease /Lunardi-Iskandar Y., Bryant J.L., Blattner W.A., et al. //Nature Medicine. - 1998. - Vol.4. -P.428 - 434.

149. Mann K. Molecular heterogeneity of human chorionic gonadotropin and its subunits in testicular cancer /Mann K., Karl H.J. //Cancer. - 1983. - Vol. 52. - P.654-660.

150. Manna S.K. Human Chorionic Gonadotropin Suppresses Activation of Nuclear Transcription Factor-kB and Activator Protein-1 Induced by Tumor Necrosis Factor /Manna S.K., Mukhopadhyay A., Aggarwal B.B. //The Journal Of Biological Chemistry. - 2000. - Vol. 275(18).-P. 13307-13314.

151. Matassov D. Measurement of Apoptosis by DNA Fragmentation /Matassov D., Kagan J., Leblanc J., et al. //Methods in Molecular Biology. Vol. 282: Apoptosis Methods and Protocols [Edited Brady H.J.M.] - Totowa, Humana Press Inc., 2004,-P.l-19.

152. Matsumoto K. Human chorionic gonadotropin-alpha gene is transcriptionally activated by epidermal growth factor through cAMP response element in trophoblast cells / Matsumoto K., Yamamoto T., Kurachi H., et al. //J. Biol. Chem. - 1998. - Vol. 273(14). - P. 7800-7806.

153. Meisser A. Effects of tumour necrosis factor-a, interleukin-1 a, macrophage colony stimulating factor and transforming growth factor (3 on trophoblastic matrix metalloproteinases /Meisser A., Chardonnens D., Campana A.,

Bischof P. //Molecular Human Reproduction. - 1999. - Vol.5 (3). - P.252-260.

154. Meng X-Li. Human Chorionic Gonadotropin Induces Neuronal Differentiation of PC 12 Cells through Activation of Stably Expressed Lutropin/Choriogonadotropin Receptor /Meng X-Li, Rennert O.M., Chan W-Y. //Endocrinology. - 2007. - Vol. 148(12). - P.5865-5873.

155. Mizuochi T. Structures of the asparagine-linked sugar chains of human chorionic gonadotropin produced in choriocarcinoma. Appearance of triantennary sugar chains and unique biantennary sugar chains /Mizuochi T., Nishimura R., Derappe C., et al //J. Biol. Chem. - 1983. - Vol. 258. -

P.14126-14129.

156. Moy E. Glycoprotein hormone alpha-subunit functions synergistically with progesterone to stimulate differentiation of cultured human endometrial stromal cells to decidualized cells: a novel role for free alpha-subunit in reproduction /Moy E., Kimzey L.M., Nelson L.M., Blithe D.L. //Endocrinology. - 1996.-Vol. 137. - P.1332-1339.

157. Odell W.D. Human chorionic gonadotropin-like proteins: secretion in nonpregnant humans and production by bacteria /Odell W.D., Griffin J., Grover S., Carrell D.T. //Trans. Am. Clin. Climatol. Assoc. - 1992. -Vol.103.-P. 238 -254.

158. Padovani J.A.J. Morphometric Analysis of Nucleus and Nucleolar Organizer Regions (NORs) in Tongue Squamous Cell Carcinoma (SCC) /Padovani J.A.J., Monteiro R., Zan T., et al.//Int. J. Morphol. - 2007.-Vol. 25(3). - P.493-499.

159. Paunesku T. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA): ringmaster of the Genome /Paunesku T., Mittal S., Protic M.. , et al. //Int. J. Radiat. Biol. -2001.-Vol. 77(10).-P.1007-1021.

160. Pierce J.G. Glycoprotein hormones: structure and function /Pierce J.G. Parsons T.F. //Annu. Rev. Biochem. - 1981. - Vol. 50. - P.465-495.

161. Polliotti B.M. Human chorionic gonadotropin (hCG) inhibition of HIV infection in human placenta in vitro /Polliotti B.M, Gnall S., Laughlin Т., Miller R.K.// International Conference on AIDS. - 2000. - Jul. 9-14; 13: abstract no. MoPeB2194. URL:

http://wwl .aegis.org/conferences/iac/2000/MoPeB2194.html (Дата обращения: 15.09.2012)

162. Polliotti B.M. Inhibitory effects of human chorionic gonadotropin (hCG) preparations on HIV infection of human placenta in vitro /Polliotti B.M, Gnall S., Laughlin Т., Miller R.K.// Placenta. - 2002. - Vol.23. Suppl. A. -P.102-106.

163. Pond-Tor S. Enhancement of radiosensitivity of the MCF-7 breast cancer cell line with human chorionic gonadotropin /Pond-Tor S., Rhodes R.G., Dahlberg P.E., et al.// Breast Cancer Res. Treat. - 2002. - Vol. 72(1). - P. 45-51.

164. Rahman N.A. Recent progress in luteinizing hormone/human chorionic gonadotrophin hormone research /Rahman N.A., Rao Ch.V. //Molecular Human Reproduction. - 2009. - Vol. 15(11). - P.703-711.

165. Rao Ch.V. An overview of the past, present and future of nongonadal LH/hCG actions in reproductive biology and medicine /Rao Ch.V. //Semin. Reprod. Med. -2001. - Vol. 19(1). - P.7-17.

166. Rao Ch.V. HCG and LH - old hormones with new actions and potential for novel therapeutic applications. URL: http://icgr.info/icgr2005/proRram/abstracts/Rao.pdf (Дата обращения: 16.10.2011)

167. Rao Ch.V. Human Chorionic Gonadotropin Decreases Proliferation and Invasion of Breast Cancer MCF-7 Cells by inhibiting NF-kB and AP-1 Activation /Rao Ch.V., Li X., Manna S.K., et al. //The Journal Of Biological Chemistry. - 2004. - Vol. 279(24). - P.25503-25510.

168. Ribble D. A simple technique for quantifying apoptosis in 96-well plates /Ribble D., Goldstein N.B., Norris D.A., Shellman Y.G. //BMC Biotechnol. -2005,-Vol.10.-P. 5-12.

169. Roberts W.E. Nuclear size as a cell-kinetic marker for osteoblast differentiation /Roberts W.E., Mozsary P.G., Klingler E. //Am. J. Anat. -1982.-Vol. 165(4).-P.373-384.

170. Rossi S. Differentiation of human rhabdomyosarcoma RD cells is regulated by reciprocal, functional interactions between myostatin, p38 and extracellular regulated kinase signalling pathways /Rossi S., Stoppani E., Puri P.L., Fanzani A. //Eur. J. Cancer. -2011. - Vol. 47(7). - P. 1095-1105.

171. Rulli S.B. Focus on Gonadotrophin Signalling. What have gonadotrophin overexpressing transgenic mice taught us about gonadal function? /Rulli S.B., Huhtaniemi I.//Reproduction.-2005.-Vol. 130. - P.283-291.

172. Russo I.H. Human Chorionic Gonadotropin and Rat Mammary Cancer Prevention /Russo I.H., Koszalka M., Russo J. //Journal of the National Cancer Institute. - 1990,-Vol. 82(15). - P. 1286-1289.

173. Santos E.D. In vitro effects of chorionic gonadotropin hormone on human adipose development /Santos E.D., Dieudonne M.N., Leneveu M.C., et al. //Journal of Endocrinology. - 2007. - Vol. 194. - P. 313-325.

174. Sarmiento L. Evidence for other non-poliovirus enteroviruses multiplies in L20B Cells /Sarmiento L., Mas P., Palomera R., et al. //Clin. Vaccine Immunol.-2007. - P. 1-12.

175. Smitz J. Epidermal growth factor combined with recombinant human chorionic gonadotrophin improves meiotic progression in mouse follicle-enclosed oocyte culture /Smitz J., Cortvrindt R., Hu Y. //Human Reproduction. - 1998. - Vol. 13(3). - P.664-669. '

176. Srivastava P. Chorionic gonadotropin inhibits rat mammary carcinogenesis through activation of programmed cell death /Srivastava P., Russo J., Russo I.H. // Carcinogenesis. - 1997. - Vol. 18 (9). - P.1799-1808.

177. Stenman U-H. The classification, functions and clinical use of different isoforms of HCG /Stenman U-H., Tiitinen A., Alfthan H., Valmu L. //Human Reproduction Update. - 2006. - Vol. 12(6). -P.769-784.

178. Sun P.D. The cystine-knot growth-factor superfamily /Sun P.D., Davies D.R. //Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. - 1995. - Vol. 24. - P.269-291.

179. Takahashi K. Induction of Pluripotent Stem Cells from Mouse Embryonic and Adult Fibroblast Cultures by Defined Factors /Takahashi K., Yamanaka S. //Cell. 2006. - Vol. 126. -P.663-676.

180. Tanaka T. Cell nucleus segmentation of skin tumor using image processing: Annual Conference IEEE /Tanaka T., Joke T., Oka T. //EMBS. Oct. 25-28. Istanbul. -2001.

181. Tao Y.-X. Human intermediate trophoblasts express chorionic Gonadotropin/Luteinizing hormone receptor gene /Tao Y.-X., Lei Z.M., Hofmann G.E., Rao Ch.V.//Biology Of Reproduction. - 1995. - Vol. 53.

- P.899-904.

182. Therman E. The prophase index and the occurrence of multipolar divisions in human cancer cells /Therman E., Timonen S. //Hereditas. - 1954. - Vol. 40(3-4). -P.313-324.

URL: http://www.dtic.mil/cgi-bin/GetTRDoc7AD~ADA410134

183. Vinals F. Transforming Growth Factor pi (TGF-pi) Promotes Endothelial Cell Survival during In Vitro Angiogenesis via an Autocrine Mechanism Implicating TGF-a Signaling /Vinals F., Pouyssegur J. //Molecular and Cellular Biology. - 2001. - P. 7218-7230.

184. Vita M. The Myc oncoprotein as a therapeutic target for human cancer /Vita M., Henriksson M. //Seminars in Cancer Byology. - 2006. - Vol.16. - P.318

- 330.

185. Vitt U.A. Evolution and classification of cystine knot-containing hormones and related extracellular signaling molecules /Vitt U.A., Hsu S.Y., Hsueh A.J. W. //Molecular Endocrinology. - 2001.- Vol. 15(5). - P. 681-694.

186. Wang D. Transcription Factor AP-2 Controls Transcription of the Human-Transforming Growth Factor-a Gene /Wang D., Shin T.H., Kudlow J.E. //The Journal Of Biological Chemistry. - 1997. - Vol. 272(22). - P. 1424414250.

187. Weisz B. Cancer in pregnancy: maternal and fetal implications /Weisz B., Schiff E., Lishner M //Human Reproduction Update. - 2001. - Vol. 7(4). -P. 384-393.

188. Williams O. Flow Cytometry-Based Methods for Apoptosis Detection in Lymphoid Cells /Williams O. //Methods in Molecular Biology. Vol. 282: Apoptosis Methods and Protocols [Edited Brady H.J.M.] Totowa: Humana Press Inc., 2004. - P. 31-43.

189. Xirner K. The influence of Vero cell culture on human embryo development and chorionic gonadotrophin production in vitro /Xirner K., Lenton E.A. // Human Reproduction. - 1996. - Vol.11 (9). - P. 1966-1974.

190. Yoshida J. Secretion of hCG/(3-hCG by Squamous Cell Carcinoma of the Lung in a 31-year-old Female Smoker /Yoshida J., Nagai K., Nishimura M., et al. //Jpn. J. Clin. Oncol. - 2000. - Vol. 30(3). - P. 163-166.

191. Ziecik A.J. Novel biological and possible applicable roles of LH/hCG receptor /Ziecik A.J, Kaczmarek M.M., Blitek A., et al. // Mol. Cell. Endocrinol. - 2007. - Vol. 269. - 51p.

192. Zvi Kelman. PCNA: structure, functions and interactions /Zvi Kelman //Oncogene. - 1997. - Vol.14. - P. 629-640.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

№ Наименование иллюстрации Стр.

Рисунки

1. Предполагаемый механизм действия ХГч через ХГч/ЛГ-рецептор 17

2. Клетки Нер-2 на вторые сутки культивирования 41

3. Клетки Ь20В на вторые сутки культивирования 41

4. Клетки 1Ш на вторые сутки культивирования 42

5. Фибробласты легкого крысы 42

6. Фибробласты легкого крысы 43

7. Фигуры деления в культуре клеток Нер-2 45

8. Фигуры деления в культуре клеток РШ 45

9. Фигуры деления в культуре клеток Ь20В 46

10. Препарат фибробластов легкого для программно-аппаратного 47 анализа

11. Шаги морфометрического анализа в программе «Морфология 5.0» 48

12. Микрофотографии апоптозного теста 50

13. Клеточная культура фибробластов Ь20В 52

14. Культура фибробластов легкого крысы 53

15. Влияние ХГч на митотический индекс клеток Ь20В 54

16. Влияние ХГч на оптическую плотность лизатов клеток Ь20В 57

17. Влияние ХГч и эмбихина на оптическую плотность лизатов 60 клеток Ь20В

18. Влияние ХГч на митотический индекс фибробластов легкого 63 крысы

19. Влияние ХГч на оптическую плотность лизатов фибробластов 65 легкого крысы

20. Влияние ХГч и эмбихина на оптическую плотность лизатов 67 фибробластов легкого крысы

21. Клеточная культура рабдомиосаркомы ГШ 69

22. Клеточная культура Нер-2 70

23. Влияние ХГч на митотический индекс клеток 1Ш 71

24. Влияние ХГч на оптическую плотность лизатов клеток ЯЭ 73

25. Влияние ХГч и эмбихина на оптическую плотность лизатов 75 клеток ЯЭ

26. Влияние ХГч на митотический индекс клеток Нер-2 78

27. Влияние ХГч на оптическую плотность лизатов клеток Нер-2. 80

28. Влияние ХГч и эмбихина на оптическую плотность лизатов 83 клеток Нер-2

29. Вид клеточной культуры Нер-2 при воздействии 100 МЕ/мл ХГч 86

30. Влияние сверхвысоких концентраций ХГч на митотический 87 индекс клеток Нер-2

31. Влияние сверхвысоких концентраций ХГч на прирост 88 митотического индекса клеток Нер-2

32. Патологические митозы в культуре Нер-2 89

33. Зависимость доли патологических митозов клеток Нер-2 от 90 содержания ХГч в среде культивирования

34. Зависимость доли поликариоцитов от содержания ХГч в среде 91 культивирования

35. Зависимость МПИ от содержания ХГч в среде культивирования 91

№ Наименование иллюстрации Стр.

п/п

Таблицы

1. Схема МТТ-теста и апоптозного теста для культур клеток 39

2. Влияние ХГч на кариологические показатели клеток Ь20В 55

3. Влияние ХГч на содержание живых, апоптозных и некротических 58

клеток в культуре Ь20В

4. Влияние ХГч и эмбихина на содержание живых, апоптозных и 62

некротических клеток в культуре Ь20В

5. Кариологические показатели фибробластов легкого в зависимости 64

от содержания ХГч в среде культивирования

6. Влияние ХГч на содержание живых, апоптозных и некротических 67

клеток в культуре фибробластов легкого крысы

7. Кариологические показатели клеток ЯО в зависимости от 72

содержания ХГч в среде культивирования

8. Влияние ХГч на содержание живых, апоптозных и некротических 74

клеток в культуре КО

9. Влияние ХГч и эмбихина на содержание живых, апоптозных и 77

некротических клеток в культуре ШЭ

10. Кариологические показатели клеток Нер-2 в зависимости от 79

содержания ХГч в среде культивирования

11. Влияние ХГч на содержание живых, апоптозных и некротических 81

клеток в культуре Нер-2

12. Влияние ХГч и эмбихина на содержание живых, апоптозных и 85

некротических клеток в культуре Нер-2