Молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности в злокачественных лимфомах при проявлении опухолевой прогрессии в условиях полихимиотерапии (экспериментально-клиническое исследование) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Воронина, Евгения Игоревна

• Воронина, Евгения Игоревна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Воронина, Евгения Игоревна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные механизмы канцерогенеза и опухолевой прогрессии злокачественных опухолей системы крови

1.1.1. Роль пролиферативной активности опухолевых клеток в развитии опухолевой прогрессии

1.1.2. Роль нарушения механизмов апоптоза в опухолевой прогрессии

1.1.3. Множественная лекарственная устойчивость и ее роль в опухолевой прогрессии злокачественных новообразований

1.2. Роль химиотерапии в лечении гемобластозов

1.2.1. Токсическое поражение ткани печени при цитостатической терапии

1.3. Цитохром Р450 и его роль в биотрансформации ксенобиотиков

1.4. Подходы к индивидуализации лечения пациентов со злокачественными

новообразованиями

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Экспериментальная часть работы

2.1.1. Лабораторные животные и используемые опухолевые модели

2.1.2. Описание исходного штамма лимфосаркомы ЬБ

2.2. Эксперимент №1

2.3. Эксперимент №2

2.4. Клинический материал исследования

2.5. Материалы, использованные в работе

2.5.1. Оборудование

2.5.2. Препараты и реактивы

2.5.3. Олигонуклеотиды, использоваиные в работе

2.5.4. Буферы и растворы

2.6. Использованные в работе методы

2.6.1. Получение первичной культуры клеток из опухолевого узла

2.6.2. Выделение суммарной клеточной РНК

2.6.3. Обратная транскрипция

2.6.4. Проведение ПЦР

2.6.5. Оценка эффективности ПХТ и динамика роста опухоли

2.6.6. Морфологические методы, используемые в работе

2.6.7. Статистический анализ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Модель экспериментальной лимфомы мышей RLS. Оценка опухолевой прогрессии у экспериментальных животных в зависимости от количества курсов ПХТ

3.2. Гистологическое строение перевиваемой лимфомы RLS и морфологические особенности ткани опухоли в зависимости от числа курсов ПХТ

3.3. Влияние ПХТ на динамику роста лимфомы мышей RLS и продолжительность жизни животных с опухолью

3.4. Определение уровня экспрессии генов, участвующих в формировании МЛУ, в клетках опухоли RLS после воздействия нескольких курсов ПХТ

3.5. Динамика уровня экспрессии Ki-67 в экспериментальной лимфоме мышей RLS без лечения и после проведения ПХТ

3.6. Уровень некрозов и апоптозов в экспериментальной лимфоме RLS без

лечения и после курсов ПХТ

3.6.1. Результаты исследования индекса мечения окрашенных caspase 3 опухолевых клеток в экспериментальной лимфоме мышей RLS без лечения и после проведения курсов ПХТ

3.7. Результаты исследования индекса мечения окрашенных на Р-гликопротеин опухолевых клеток экспериментальной лимфомы мышей RLS без лечения и после проведения курсов ПХТ

3.8. Структурные изменения ткани печени и результаты исследования индекса мечения окрашенных на цитохром Р450 гепатоцитов у животных с RLS до

лечения и после проведения курсов

ПХТ

3.9. Исследование опухолевой прогрессии диффузной В-крупноклеточной лимфомы у пациентов в процессе полихимиотерапии: сравнительная молекулярно-клеточная характеристика опухоли у пациентов до лечения и после

курсов химиотерапии по поводу рецидивов

3.9.1. Результаты исследования индекса мечения окрашенных на Р-гликопротеин клеток ткани опухоли пациентов с первично возникшей ДБККЛ и в группе

пациентов с рецидивами ДББКЛ после проведения курсов

ПХТ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ЛИТЕРАТУРА

СОКРАЩЕНИЯ:

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ДБККЛ - диффузная В-крупноклеточная лимфома ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИМ - индекс мечения

МЛУ - множественная лекарственная устойчивость

мРНК - матричная РНК

НХЛ - неходжкинская лимфома

ОТ - обратная транскрипция

ПААГ - полиакриламидный гель

п.н. - пары нуклеотидов

ПХТ - полихимиотерапия

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

СЭИ - синдром эндогенной интоксикации

Трис - трис- (оксиметил)- аминометан

СНОР - схема полихимиотерапии, содержащая циклофосфан, винкристин,

доксорубицин, преднизолон

СУР - цитохром Р450

БЕРС - диэтилпирокарбонат

ЭМ80 - диметилсульфоксид

ЭТТ - дитиотреитол

ЕБТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ЕОРЯ - рецептор эпидермального фактора роста

ЕКЕТЭ - Европейское общество по изучению нейроэндокринных опухолей 1МБМ - среда для выращивания клеточных культур Дульбеко в модификации Искова

ЬБ - лимфосаркома

Ь8М - среда для отделения лимфоцитов

MDR - множественная лекарственная устойчивость

NADP-H - никотинамидадениндинуклеотидфосфат

PBS - буфер фосфатный

P-gp - Р-гликопротеин

PSA - персульфат аммония

RLS - резистентная лимфосаркома

SDS - додецилсульфат натрия

TEMED - тетраметилэтилендиамин

Wt -р53 - «дикий тип» гена р53

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности в злокачественных лимфомах при проявлении опухолевой прогрессии в условиях полихимиотерапии (экспериментально-клиническое исследование)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Основным методом лечеиия гемобластозов является многокурсовая полихимиотерапия, что определяет особую важность моииторирования и оценки изменяющихся под воздействием цитостатиков молекулярно-биологических характеристик именно данного вида опухолей и приближает к основной идее персонализированной медицины -индивидуализации подходов диагностики и лечения злокачественных опухолей (Jain К.К. 1998; Foussard С. et ah, 2005; Bosly A. et al., 2008).

Это делает необходимым понимание процессов опухолевой прогрессии, в том числе и в опухолях после химио-лучевого воздействия (Hanahan D. et al., 2000). Полученные сведения помогут оптимизировать схемы лечения каждого пациента индивидуально и сделают возможным проведение более успешной таргетной терапии данной группе онкологических больных (Miura К. et al., 2011).

Существует ряд проблем, не позволяющих полноценно и эффективно использовать химиотерапию: это развитие опухолевой прогрессии в результате накопления мутаций и генетической нестабильности, отбор клонов с максимальными возможностями к пролиферации, развитие множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) (Блохин Д.Ю., 2009; Foulds L., 1969). Все эти качества опухолевой клетки направлены на выживание и рост опухоли и нередко в ней включается сразу несколько механизмов защиты от воздействия химиотерапии. Отдельные свойства опухоли прогрессируют независимо друг от друга, а непредсказуемость количества и качества вторичных мутаций делают эту прогрессию уникальной и индивидуальной для каждой опухоли, что требует определения исходного и меняющегося под воздействием лечения генотипа каждого злокачественного новообразования.

В настоящее время существенным недостатком противоопухолевых препаратов является их токсическое воздействие на органы и ткани. Все цитостатики подвергаются биотрансформации в печени с помощью системы микросомальпых оксигеназ и в результате образуются токсические метаболиты,

которые вызывают развитие гепатотоксичности и повреждение гепатоцитов. Это в свою очередь является фактором ограничивающим проведение многократных курсов полихимиотерапии (Казюлин А.Н., 2012; Donepudi I., 2012; Amacher D.E., 2013).

В научной литературе приводится крайне мало данных об изменениях в ткани печени при проведении многократных курсов терапии цитостатиками, это обстоятельство делает необходимым изучение морфологических изменений ткани печени в условиях цитотоксической нагрузки, а так же изменений уровней ферментных систем, отвечающих за метаболизм ксенобиотиков.

Кроме того, большой проблемой является моделирование схем лечения опухолей в эксперименте на животных, приближающееся по продолжительности курсов полихимиотерапии у пациентов, что существенно ограничивает исследование процессов, формирующихся в опухоли под воздействием химиотерапии.

Степень разработанности темы исследования:

Вышеизложенные обстоятельства указывают на очевидную недостаточность данных по обсуждаемой проблеме опухолевой прогрессии под воздействием цитостатиков и необходимость уточнения существующих сведений, что и определило цель и задачи настоящего исследования.

Цель исследования: изучить молекулярно-клеточные и патоморфологические особенности проявлений опухолевой прогрессии в злокачественных лимфомах в условиях полихимиотерапии: в эксперименте на резистентной лимфоме мышей RLS и в опухолевой ткани пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой.

Задачи исследования:

1. На экспериментальной модели лимфомы мышей RLS исследовать динамику роста опухоли и соотнести её с показателями уровней некрозов и апоптозов в ткани опухоли под воздействием курсов полихимиотерапии.

2. Исследовать экспрессию генов, участвующих в формировании множественной лекарственной устойчивости и инициации программы апоптоза, в клетках опухоли мышей RLS без лечения и после проведения курсов полихимиотерапии.

3. Иммуногистохимическим методом изучить динамику изменения экспрессии Ki-67, р53, caspase 3, Ьс12 и Р-гликопротеина в клетках опухоли RLS под воздействием курсов полихимиотерапии.

4. Провести патоморфологическое изучение структурных изменений в печени мышей с лимфомой RLS и изучить экспрессию цитохрома Р450 в гепатоцитах в динамике курсов полихимиотерапии.

5. Исследовать морфологические и молекулярно-биологические особенности проявлений опухолевой прогрессии в диффузной В-крупноклеточной лимфоме у пациентов до и после проведения многократных курсов полихимиотерапии.

Научная новизна исследования:

Впервые разработана оптимальная доза имплантирования опухолевых клеток резистентной лимфомы мышей RLS, позволяющая провести четырехкратное введение комплекса цитостатиков, что сделало возможным изучить спектр молекулярно-биологических изменений, происходящих в изначально резистентной к химиотерапии опухоли RLS поэтапно, после каждого из 4-х курсов химиотерапии.

Впервые в резистентной лимфоме RLS на фоне четырехкратного введения комплекса цитостатиков установлено изменение экспрессии ключевых генов, регулирующих апоптоз и участвующих в формировании МЛУ, что в

совокупности с данными о динамике экспрессии соответствующих белков позволило сделать вывод об особенностях опухолевой прогрессии изначально резистентной к цитостатикам опухоли RLS.

Впервые в лимфоме RLS после четырехкратного воздействия цитостатиков установлено нарушение процессов апоптоза, которые характеризовались повышением количества клеток, экспрессирующих белок bcl-2, снижением количества р53-позитивных клеток при невысоком числе клеток, синтезирующих каспазу 3 в течение всех 4 курсов полихимиотерапии. Впервые показано, что пролиферативная активность опухолевых клеток RLS до лечения и на этапах полихимиотерапии нарастает в совокупности с увеличением количества опухолевых клеток, экспрессирующих Р-гликопротеии, участвующий в формировании множественной лекарственной устойчивости.

Впервые у животных с лимфомой RLS исследована динамика нарастания структурных изменений в паренхиме печени на фоне воздействия опухолевого процесса и 4 курсов полихимиотерапии, а так же впервые на основании изменений количества гепатоцитов, экспрессирующих цитохром Р450, показано «истощение» системы микросомального окисления в зависимости от нагрузки цитостатиками и нарастания деструктивных изменений паренхимы печени.

Впервые у пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой на основании исследования уровней экспрессии ряда белков, характеризующих опухолевую прогрессию (Ki-67, bcl-2, р53, Р-гликопротеин), установлены изменения молекулярных характеристик опухолевых лимфомных клеток под воздействием многократных курсов полихимиотерапии в процессе лечения заболевания в сравнении с впервые диагностированной диффузной В-крупноклеточной лимфомой.

Научно-практическая значимость работы:

Полученные новые данные дополняют сведения о молекулярно-клеточных механизмах формирования опухолевой прогрессии и множественной лекарственной устойчивости в изначально резистентных к химиопрепаратам

опухолях под воздействием многократных курсов полихимиотерапии, что зачастую наблюдают в клинике у пациентов с агрессивными формами лимфом.

Данное исследование продемонстрировало особенности структурных изменений в печени при проведении многокурсовой химиотерапии свидетельствующих об «истощении» системы цитохрома Р450 в течение курсов введения цитостатиков, что сопряжено с нарушениями метаболизма цитостатиков и, как следствие, снижению их воздействия на опухолевую ткань, что следует учитывать в процессе длительного лечения онкологических больных химиопрепаратами.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. На фоне многократных введений комплекса цитостатических препаратов животным с лимфомой RLS, которая характеризуется изначально лекарственно-резистентным фенотипом, продолжала нарастать степень злокачественности опухоли, как отражение опухолевой прогрессии. Это выражалось в нарушениях механизмов гибели опухолевых клеток апоптозом, усилении множественной лекарственной устойчивости, наращивании пролиферативной активности опухолевых клеток. В итоге наблюдали снижении чувствительности опухоли к цитостатикам и прогрессирующий рост опухолевого узла на фоне курсов химиотерапии.

2. В условиях влияния опухолевого процесса и проведения многокурсовой полихимиотерапии нарастают деструктивные изменения в паренхиме печени животных и происходит «истощение» синтеза цитохрома Р450 в гепатоцитах, что снижает чувствительность опухоли к цитостатикам и повышает токсическую нагрузку на организм.

3. Проведение многократных курсов полихимиотерапии пациентам с диффузной В-крупноклеточной лимфомой в процессе лечения заболевания приводит к изменениям молекулярных характеристик лимфомных клеток, отражающих опухолевую прогрессию: в леченой опухоли в сравнении с первичной диффузной В-крупноклеточной лимфомой происходит блок

процессов апоптоза и активация множественной лекарственной устойчивости, что способствует прогрессированию опухолевого процесса у пациентов, снижает чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии, способствует увеличению опухолевой массы, повышению токсической нагрузки.

Апробация результатов исследования: материалы исследования были представлены на ежегодной конкурс - конференции «Авиценна» (Новосибирск 2010, 2012), на всероссийской конференции с международным участием «Молодые ученые - медицине» (Самара 2011), на межвузовской научной студенческой конференции «Интеллектуальный потенциал Сибири» (Новосибирск 2012), первой всероссийской научной конференции молодых ученых-медиков «Инновационные технологии в медицине XXI века» (Москва 2012), па научно-практической конференции патологоанатомов ДВФО посвященной 100-летию со дня рождения профессора А.И. Зеленского «Актуальные вопросы патологической анатомии» (Хабаровск 2012), на научно-практической патологоанатомической конференции Южного Урала с участием патологоанатомов других регионов России и СНГ, посвященной 30-летию Челябинского областного патологоанатомического бюро (Челябинск 2014).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрпауки России для публикации материалов диссертационных исследований, 1 статья в зарубежном издании.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа иллюстрирована 36 рисунками и содержит 3 таблицы. Библиографический указатель содержит 185 источников, из которых 45 отечественных и 140 зарубежных работ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные механизмы канцерогенеза и опухолевой прогрессии злокачественных опухолей системы крови

В настоящее время в развитии злокачественных новообразований, в том числе и гемобластозов, общепризнанной является мутационная теория, согласно которой злокачественные опухоли возникают вследствие повреждений в генетическом аппарате клеток. Спектр этих повреждений в неоплазмах характеризуется большим разнообразием и чаще всего наблюдается сумма нескольких видов мутаций в специфических генах регулирующих клеточный цикл (Зильбер Л.А., 1968; Имянитов E.H. 2007; Santella R. 2002; Coleman W. 2006;). Эти новые знания и современные достижения в области молекулярной биологии и диагностики злокачественных новообразований стали возможны благодаря расшифровке генома человека.

Расшифровка молекулярных механизмов канцерогенеза стала основой для разработки новых тактик лечения онкозаболевний и повышения его эффективности, что реализовалось в улучшение показателей выживаемости онкологических пациентов. Так, в опубликованном в 2008 году сообщении Американского общества клинической онкологии (ASCO), подводящем итоги успехов клинической онкологии, приводятся данные о том, что сегодня не менее 2/3 лиц со злокачественными новообразованиями живут не менее 5 лет от момента установления диагноза, тогда как в 1970-е годы этот показатель не превышал 50%. В настоящее время в США проживают не менее 12 млн. лиц с диагнозом злокачественной опухоли, в то время как в 1971 году таких пациентов было лишь 3 млн. (Winer Е. et al., 2009).

Новые знания в области фундаментальных наук, подкрепляемые современными достижениями молекулярной биологии, позволили получить в конце 20-го столетия беспрецедентно важную информацию о процессах канцерогенеза, участии в злокачественной трансформации клеток множества

клеточных сигнальных путей, механизмах выживания и приспосабливания неоплазированных клеток в условиях химиолучевого лечения, что в совокупности с современными методами диагностики злокачественных новообразований открывают новые перспективы и ставят новые задачи в клинической онкологии -максимально индивидуализировать лечение пациента.

Одной из передовых областей в этом направлении является онкогематология, для которой молекулярные методы позволили охарактеризовать процессы оикогенеза, выявить основные типы генов, которые часто становятся мишенями для аберраций и приводят к появлению опухолевого клона. В последние годы достигнуты впечатляющие результаты в лечении прежде всего злокачественных неходжкинских лимфом.

Неходжкинские лимфомы (НХЛ) являются гетерогенной группой злокачественных лимфоидных новообразований, заболеваемость которыми ежегодно неуклонно растет и широко распространена в группах населения разного возраста. Смертность в данной группе новообразований занимает шестое место среди онкологических заболеваний (Чиссов В.И., 2013). Каждая из неходжкинских лимфом имеет характерные клинические проявления, диагностические критерии и индивидуальное лечение.

Одним из наиболее часто встречающихся нозологических вариантов злокачественных лимфом, является диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ), составляющая более 1/3 от всех В-клеточных НХЛ. И даже внутри этой нозологической единицы выделены различные варианты, которые представлены в классификации ВОЗ и характеризуются существенным разнообразием гистологических, иммуноморфологических, генетических характеристик и клинического течения (8луегс11ош 8. & а1., 2008), в связи с чем данное заболевание требует особенно тщательного и обдуманного подхода в диагностике и лечении, который предусматривает как правильность определения морфологического варианта опухоли, выбор адекватных схем терапии с соблюдением и подбором доз, так и мониторирование эффективности лечения с целыо выявления ответа опухоли на терапию, а так же максимально индивидуальный подход к каждому

пациенту с учетом молекулярно-биологических особенностей его варианта онкологического заболевания (ЫапБ С.,2004).

Например абберантные соматические гипермутации встречаются более чем в 50% ДБККЛ и определяются во многих генетических локусах и включают такие гены, как Р1М1, РАХ5, МУС (Pasqualucci Ь. е1 а1., 2001). До 30 % случаев выявленных аномалий 1^27) касаются гена ВСЬб и является самой распространенной транслокацией в ДБККЛ (НкоБЫ О., 2012), в 20-30 % случаев фолликулярных лимфом выявляется транслокация гена ВСЬ2 (1 (14; 18)) (Хи У., 2005; Капигщо А. е1 а1., 2006; Уш С., 2013).

Возникающая в результате генетических аномалий дисфункция в процессах клеточной пролиферации, дифференцировки и гибели приводит к неконтролируемому росту популяции опухолевых клеток. На основе сформированных молекулярных повреждений и их комбинаций существует несколько основных типов нарушений в клеточной физиологии, которые опосредуют злокачественный рост, но в то же время они могут являться основными направлениями поиска управления опухолевым процессом: нечувствительность к сигналам генов - супрессоров, которые ингибируют рост клеток, независимость от сигналов роста, возможность неограниченного деления (пролиферативная активность), ангиогенез, ускользание от клеточной гибели, инвазивный рост, способность к метастазированию, развитие множественной лекарственной устойчивости, нарушения в регуляции клеточного цикла (НапаЬап Э. а1., 2000).

В результате накопления мутаций и генетической нестабильности, отбора клонов с максимальными возможностями к пролиферации, развивается так называемая опухолевая прогрессия, то есть прогрессирующие негативные изменения свойств опухоли по мере ее роста (Блохин Д.Ю.,2009; РоиШБ Ь., 1969;), направленные на выживание опухоли в организме опухоленосителя и даже получение преимуществ перед ним. Отдельные признаки опухоли, например, скорость роста или способность вызывать иммунный ответ и ответ на химио- и лучевую терапию, прогрессируют независимо друг от друга, а непредсказуемость

количества и качества вторичных мутаций делают эту прогрессию уникальной и индивидуальной для каждой опухоли, что требует определения исходного генотипа каждого злокачественного новообразования и па его основе поиска новых подходов в выборе оптимальных программ лечения.

В современной онкоморфологии постоянно ведется поиск критериев, которые позволили бы верифицировать степень гистологической злокачественности опухолей и могли бы предсказывать клиническое течение онкологического заболевания. Основными критериями являются: пролиферативная активность опухолевых клеток, выраженность процессов ангиогенеза, нарушение процессов апоптоза, формирование множественной лекарственной устойчивости (МЛУ).

Научных изысканий, посвященных вышеуказанным аспектам онкоморфологии очень много, однако подавляющее большинство из них посвящено оценке показателей пролиферации, апоптоза либо ангиогенеза на этапе диагностики опухолевого заболевания с целью определить прогноз его течения. Однако необходимо учитывать, что в процессе течения онкозаболевания в рецидивах опухоли и в ее метастазах молекулярно-биологические характеристики опухолевой ткани могут существенно изменяться, особенно если опухоль подвергалась химио-лучевому воздействию.

Именно для гемобластозов (как для лейкозов, так и для НХЛ) основным методом лечения является многокурсовая полихимиотерапия (ПХТ), что определяет особую важность оценки изменяющихся под воздействием цитостатиков молекулярно-биологических характеристик именно данного вида опухолей. В литературе представлено крайне мало исследований в данном направлении, хотя именно мониторирование «портрета» опухоли в процессе ПХТ максимально приближает к идее индивидуализации лечения каждого пациента. Исходя из того, что в классическом канцерогенезе реализуется тезис «один больной - индивидуальная опухоль» в современной онкологии наступил период, когда необходимо понять вектор прогрессии огромного разнообразия опухолей, индуцированный химио-лучевым воздействием.

1.1.1. Роль пролиферативной активности опухолевых клеток в развитии опухолевой прогрессии

Опухолевые клетки обладают неограниченной, бесконтрольной пролиферацией и отсутствием баланса между ростом и гибелью, вызванными грубыми поломками в процессе прохождения по клеточному циклу, за счет чего и имеют преимущество перед нормальными клетками организма. Определение пролиферативной активности ткани опухоли является одной из наиболее важных характеристик ее фенотипа, которая определяет прогноз скорости роста опухоли в дальнейшем, ее ответ на лечение, способность к метастазированию и исход заболевания, а соответственно отражает индивидуальные свойства злокачественного новообразования любой локализации.

В процессе роста и клеточного деления в опухолевых клетках могут появляться так называемые атипические митозы, в основе развития которых лежат повреждения митотического аппарата и которые характеризуются неравномерным распределением генетического материала между клетками -анеуплоидией (от греч. an - не, ей - правильное, ploon - складываю), в результате чего появляются гигантские клетки в которых цитотомия может отсутствовать. Атипические митозы характерны для злокачественных опухолей и облученных тканей - чем выше уровень их пролиферации и чем значительнее степень анеуплоидии, тем соответственно, более агрессивной и прогностически неблагоприятной является опухоль (Weinberg, R., 2006).

Для закономерной последовательности смены периодов клеточного цикла и для определения завершения прохождения каждой его фазы существуют контрольные точки. Если клетка проходит контрольную точку, то она может двигаться по клеточному циклу дальше, если же какие-либо обстоятельства, например повреждение ДНК, мешают клетке пройти через контрольную точку, то она останавливается и другой фазы клеточного цикла не наступит до тех пор, пока не будут устранены причины, не позволявшие клетке пройти через контрольную точку либо она подвергнется апоптозу (Nurse P.M., 2002; Bronchud

M.H. et al., 2004; Doonan J.H. et al., 2009).

Существует несколько контрольных точек клеточного цикла: точка в G1-фазе, где проверяется интактность ДНК перед вхождением в S-фазу, контрольная точка в S-фазе, в которой проверяется правильность репликации ДНК, контрольная точка в 02-фазе, где оцениваются повреждения, пропущенные при прохождении предыдущих сверочных точек, либо полученные на последующих стадиях клеточного цикла. В 02-фазе проверяется полнота репликации ДНК, и клетки, в которых ДНК недореплицировапа, не входят в митоз (Фаллер Д. М., 2006; Афанасьев Ю.И., 2012; Tyson J. J., 2008).

Таким образом, клеточный цикл - исключительно сложно регулируемый многоступенчатый и многократно дублируемый процесс, кодируемый каскадом генов-регуляторов и обеспечивающий гомеостаз организма (Ченцов Ю.С.. 2004; Alberts В., 2008; Tyson J. J., 2008; Frasca D., 2009).

Нарушение нормальной регуляции клеточного цикла является причиной появления большинства опухолей (Stewart Z., 2003). Для опухолевых клеток характерны множественные изменения компонентов контрольных точек клеточного цикла. При инактивации контрольных точек клеточного цикла наблюдается дисфункция некоторых транскрипционных факторов, многие из которых являются опкосупрессорами и протоонкогенами, например самые известные из них - р53, с-Мус, K-ras - их мутации или неправильная регуляция очень часто встречаются в различных злокачественных опухолях.

Известно, что мутации антиопкогена р53 выявляются в 50% новообразований самых разных локализаций (Mitselou А., 2003; Salaverria I., 2011; Leventaki V., 2013). Мутации гена с-Мус были обнаружены у пациентов с лимфомой Беркитта, 8 хромосома опухолевых клеток которых имеет характерную транслокацию t (8; 14) (Simonsson Т.. 2002), позже его аномалии выявлены в различных видах рака легкого, яичников, нейробластоме, миеломе и многих других (Кабилова Т.О., 2008; Ruddell А., 2003; Schwab М., 2004; Gomez-Curet I. et al., 2006).

K-ras в свою очередь, является геном, кодирующим один из белков,

играющих важную роль в сигнальной системе рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) - сложного сигнального каскада, принимающего участие в развитии и прогрессировавши рака, мутации которого выявлены при колоректальных раках, опухолях поджелудочной железы и легких ( Janssen К.Р., 2003; Luan H. et al., 2010; Belyaeva V. et al., 2012; Court H. et al., 2013).

Одним из критериев оценки пролиферативного потенциала опухоли, является определение числа делящихся клеток. С помощью большого количества маркеров пролиферативной активности проведено множество исследований активности пролиферации клеток опухоли в самых разных типах злокачественных новообразований и показано, что наиболее оптимальным, специфичным и удобным в ежедневной патоморфологической практике является иммуноморфологическое выявление ядерного белка Ki-67, который присутствует на всех стадиях клеточного цикла кроме G0, с определением индекса мечения ядер опухолевых клеток с помощью моноклонального антитела Ki-67 (клон MIB-1) (Ковригина А., 2006; Dabbs J., 2010).

Индекс мечения антителом к белку Ki-67 — надежный прогностический маркер для злокачественных опухолей различных локализаций, коррелирующий с гистологической степенью дифференцировки и клиническим течением, что продемонстрировано для глиальных опухолей головного мозга (Louis D.N. et al., 2007; Pouratian N.et al., 2008; Karim K.A. et al., 2012), опухолей молочной железы (Archer C.D. et al., 2003; Yerushalmi R. et al., 2010; Inwald E.C. et al., 2013), толстого кишечника (Takano Y.et al., 1996; Kim N.K. et al., 2001; Andrade N.R. et al., 2011), легких (Erler B.S. et al., 2011; Sofocleous C.T. et al., 2013) и множества других неоплазм.

Например, для опухолей молочной железы в исследовании Penault-Llorca F., (2003) было показано, что пациентки, у которых Ki-67 экспрессируют более 50% клеток, имеют высокий риск развития рецидива заболевания. В исследовании Aas Т. с соавт. (2003) было отмечено, что в случаях, когда высокий митотический индекс и показатель Ki-67 в раке молочной железы ассоциированы с мутацией

гена р53, вероятность хорошего эффекта неоадъювантной химиотерапии крайне низка, а отдаленные результаты лечения значительно ухудшаются.

Показано, что определение индекса мечения маркера Ki-67 так же целесообразно для HXJ1, характеризующихся диффузной пролиферацией опухолевых лимфоидных клеток (Chang С., 2004; Szczuraszek К. et al., 2008). Broyde А. С. с соавт. (2009) в своем исследовании, выполненном па материале образцов ткани опухоли от 319 пациентов с впервые диагностированными HXJI, показали, что уровень маркера пролиферации Ki-67 в среднем составляет 26,6% у пациентов с индолентными лимфомами, 67,2% - для агрессивных лимфом и 97,6% - для крайне агрессивных форм лимфом. При этом у разных подтипов HXJI внутри группы индекс пролиферации также различался: среди индолеитных лимфом фолликулярная лимфома имела индекс пролиферации в среднем 32,12%, MALT-лимфома (mucosa-associated lymphoid tissue) - 13,2%, а

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Воронина, Евгения Игоревна, 2014 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Автандилов, Г.Г. Медицинская морфометрия: руководство/ Г.Г. Автандилов - М.: Медицина, 1990. - 384 с.

2. Агеева, Т.А. Патоморфологические аспекты постцитостатических поражений печени и желудка при гемобластозах: автореф. дис. .. .д.мед.наук: 14.00.15 / Агеева Татьяна Августовна. - Новосибирск, 2002. - 42 с.

3. Андрианов, A.B., Значение маркеров прогрессии при остеосаркомах у детей / A.B. Андрианов, A.B. Моргун, Т.Е.Таранушенко // Сибирский онкологический журнал. - 2008. - №5. - С. 37-40.

4. Анисимов, В. Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения / В.Н. Анисимов. - 2-ое изд., перераб. и доп. - СПб.: Наука, 2008. - Т. 1. - 481 с.

5. Афанасьев, Ю.И. Гистология, эмбриология, цитология / Ю.И. Афанасьев, H.A. Юрина, Е.Ф. Котовский и др. - 6-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012.- С.93-101.

6. Банержи, А. Медицинская статистика понятным языком: вводный курс / Банержи А., перевод с англ. под ред. В.П. Леонова. -М.: Практическая медицина, 2007-287 с.

7. Блохин, Д.Ю. Механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолевых клеток / Д.Ю. Блохин // Клиническая онкогематология. - 2009. - Т.2. - №1. - С. 167-175.

8. Блохин, Д.Ю. «Постгеномный взгляд» на проблемы онкогенеза / Д.Ю. Блохин // Клиническая онкогематология. - 2009. - том 2. - №3. - С.277-282.

9. Бобкова, М.М. Эффективность применения интенсивной полихимиотерапии в лечении молодых больных с диффузной В-крупноклеточной лимфомой из клеток терминального центра / М.М. Бобкова, C.B. Семочкин, В.Л. Иванова и др. // Онкогематология. - 2009. - С.4-11.

10. Буеверов, А. О. Лекарственные поражения печени / А.О. Буеверов // РМЖ. - 2001. - Т. 9. - № 13-14.

11. Гершанович, M.JI. Основные принципы лечения неходжкинских лимфом / М.Л. Гершанович // Практическая онкология. - 2004. -Т.5. -СЛ 85-193.

12. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Глапц. -Пер.с англ. -М., Практика, 1999. - 459с.

13. Гольдберг, Е.Д. Морфология печени в ранние и отдаленные сроки после введения противоопухолевых препаратов / Е.Д. Гольдберг, Т.П. Фомина, Т.В. Ветошкина и др. // Бюлл. экспер. биол.и медицины. -1998. -Т. 126. - №11. -С.561-565.

14. Гольдберг, Е.Д. Роль гемопоэзиндуцирующего микроокружения в регуляции кроветворения при цитостатических миелодепрессиях / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.В. Жданов // Томск: STT, 1999. - 147 с.

15. Гольдберг, Е.Д. Механизмы локальной регуляции кроветворения / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, Е.Ю. Шерстобоев // Томск: STT, 2000. - 147 с.

16. Захаров, О.Д. Маркеры множественной лекарственной устойчивости при острых миелоидных лейкозах / О.Д. Захаров, Е.Ю. Рыбалкин, М.А.Волкова // Онкогематология. -2006. - №1-2.

17. Зильбер, Л. А. Вирусно-генетическая теория происхождения злокачественных опухолей / Л.А. Зильбер - М.: Медицина, 1968. - 197 с.

18. Имянитов, E.H. Молекулярная онкология: клинические аспекты / E.H. Имянитов, К.П. Хансон . - С.-Петербург, Изд. Дом МАПО, 2007. - 212 с.

19. Кабилова, Т.О. Онкогены семейства туе как терапевтические мишени / Т.О. Кабилова, Е.Л. Черноловская // Бюллетень Сибирской медицины. - 2008. -С. 11-26.

20. Казюлин, А.Н. Лекарственная гепатотоксичность при проведении противоопухолевой химиотерапии онкологических заболеваний и возможности ее коррекции / А.Н. Казюлин, Л.З. Вельшер, H.H. Данилевская и др. // Фарматека. -2012. - №8. - С.37-44.

21. Каледин, В.И. Изучение эффективности моно- и полихимиотерапии на модели перевиваемой мышиной лимфосаркомы, нечувствительной к индукции

апоптоза / В.И. Каледин, H.A. Попова, Е.М. Андреева // Вопросы онкологии. -2006. - Т.52. - №1. - С.70-73.

22. Ковригина, A.M. Морфоиммуногистохимическая диагностика как основа диагноза лимфомы / A.M. Ковригина // Вместе против рака. Врачам всех специальностей. -2006. - №2.

23. Ковынев, И.Б. Апоптоз и механизмы опухолевой прогрессии неходжкинских злокачественных лимфом / И.Б. Ковынев, Т.И. Поспелова Т.И., Т.А. Агеева и др. // Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Т.7. - Приложение 3. - С. 26-32.

24. Кондратовский, П.М. Нарушения в системе белка р53 и их влияние на патогенез хронических лимфопролиферативных заболеваний / П.М. Кондратовский, А.И. Дубиков, АЛО. Дорошевская // Онкогематология. -2011. -№3.- С.65-74.

25. Копнин, Б.П. Многоликий р53: разнообразие форм, функций, опухольсупрессирующих и онкогенных активностей / Б.П. Копнин, П.Б. Копнин, Н.В. Хромова и др. // Клиническая онкогематология. -2008. -Т.1. -№1. -С.2-9.

26. Куценко, С.А. Основы токсикологии: учебное пособие / С.А. Куценко. -С.-Петербург: Фолиант. - 2004. -720 с.

27. Лосева, М.И. Печень при гемобластозах / М.И. Лосева, Т.И. Поспелова. - Новосибирск: Наука, 1999. - 414 с.

28. Лосева, М.И. Отдаленные последствия противоопухолевой терапии гемобластозов / М.И Лосева., Т.И., Поспелова Г.С Солдатова и др.: под ред. профессора Лосевой М.И. - Новосибирск: ИПП «Art-avenue», 2005. -364с.

29. Манских, В. Н. Пути гибели клетки и их биологическое значение/ В. Н. Манских // Цитология. -2007. -Т. 49. - №11. - С.909-915.

30. Молодых, О.П. Внутриклеточная реорганизация гепатоцитов при воздействии доксорубицина / О.П. Молодых, Е.Л.Лушникова, М.Г. Клинникова и др. // Бюлл.экспер.биол. и медицины. - 2007. - Т. 144. - №10. - С.464-472.

31. Пасюков, В.В. Перекрестная устойчивость опухолевых клеток к повреждающим факторам на модели полученных радио- и химиорезистентных

лимфобластоидных сублиний: автореф. дис. ...канд. биол. наук / Пасюков В.В. -Минск, 2007.

32. Петров, C.B. Руководство по иммуногистохимической диагностике опухолей человека / C.B. Петров, Н.Т. Райхлин . - 4-е изд., перераб. и доп. -Казань, 2012.-624 с.

33. Пономаренко, Т.М. Система цитохрома Р450 в лёгких: роль в патогенезе заболеваний и фармакокинетике лекарственных средств / Т.М. Пономаренко, Д.А. Сычёв, А.О. Чикало и др. // Фармакокинетика и Фармакодинамика. - 2012. -№1. -С. 25-28.

34. Сенькова, A.B. Структурные изменения в опухоли и печени мышей при нарастании множественной лекарственной устойчивости перевиваемой лимфосаркомы RLS40 в условиях полихимиотерапии: автореф. Дис. ... канд. мед. наук: 14.03.02,03.03.04 / Сенькова Александра Васильевна. - Новосибирск, 2010. -23 с.

35. Серов, В.В. Морфологическая диагностика заболеваний печени / В.В. Серов, К. Лапиш. -М.: Медицина, - 1989. -363 с.

36. Ставровская, А. А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток / A.A. Ставровская // Биохимия. -2000. - Т. 65. № 1. - С. 112-126.

37. Струков, А.И. Патологическая анатомия / А.И. Струков, В.В. Серов. -М.: Медицина, 1995. - 688 с.

38. Тюляндин, С.А. Ред. русского перевода Клинические рекомендации ESMO по диагностике, лечению и наблюдению при первичнодиагностированной крупноклеточной неходжкинской лимфоме / С.А. Тюляндин, Н.И. Переводчикова, Д.А. Носов // Минимальные клинические рекомендации Европейского общества медицинской онкологии (ESMO), М.: РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН. -2003. -С.2527.

39. Фаллер Д.М. Молекулярная биология клетки: руководство для врачей / Д.М. Фаллер, Д. Шилдс. - пер. с англ. М.: Издательство БИНОМ, 2006. - С. 126144.

40. Хлопушина, Т.Г. Влияние наследственных и средовых факторов на метаболизирующуга активность системы цитохрома Р-450 и формирование эффектов лекарственных средств: автореф. дис. ...док. биол. наук: 14.00.25/ Хлопушина Татьяна Григорьевна. - Москва, 1996. - С. 41.

41. Ченцов, Ю.С. Введение в клеточную биологию / Ю.С. Чепцов. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: ИКЦ Академкнига, 2004. - с. 390-434.

42. Чиссов, В.И. Злокачественные новообразования в России в 2011 году (заболеваемость и смертность) / В.И. Чиссов, В.В. Старинский , Г.В. Петрова // ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздрава России, 2013. - 289 с.

43. Чумаков, П. М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью / П.М. Чумаков // Биохимия. - 2000. - Т. 65. - № 1. - С. 34-47.

44. Шкляева, О.А. Противоопухолевая и антиметастатическая активность siPHK, РНКазы А и ДНКазы I -препаратов, способных специфически и неспецифически вызывать деградацию нуклеиновых кислот: автореф. дис. ...канд.биол.наук: 03.00.04 / Шкляева Ольга Александровна. - Новосибирск, 2009. -20 с.

45. Штиль, А.А. Развитие множественной лекарственной устойчивости как срочный ответ клетки на экзогенные воздействия / А.А. Штиль // Биол. Мембраны. -2003. -20(3). - С. 236-243.

46. Aas, Т. Predictive value of tumor cell proliferation in locally advanced breast cancer treated with neoadjuvant chemotherapy / T. Aas , S. Geisler, G.E. Eide et al. // Eur. J. Cancer 2003. -Vol.39. -№3. - P.438-446.

47. Abbott, D.R. Apoptosis of t(14;18)-positive lymphoma cells by a Bcl-2 interacting small molecule / D. R. Abbott, R.T. Abbott, S.D. Jensons et al. // Journal of Hematopathology. -2009. -Vol. 2. - P. 113-119.

48. Alberts, B. Molecular biology of the cell / B. Alberts. - 5th edition. - Garland science, 2008.- 1601 p.

49. Allouche, M. Influence of the Bcl-2 overexpression on the ceramide pathway in daunorubicin-induced apoptosis of leukemic cells / M. Allouche, A. Bettaieb, C. Vindis et al. // Oncogene. 1997-Vol. 14.-№15.-P. 1837-1845.

50. Amacher, D.E. Development of Blood Biomarkers for Drug-Induced Liver Injury: An Evaluation of Their Potential for Risk Assessment and Diagnostics / D.E. Amacher, S.J. Schomaker , J. Aubrecht et al. // Molecular Diagnosis & Therapy. -2013.-Vol.17.-P.343-354.

51. Andrade, N.R. Imunoexpression of Ki-67 and p53 in Rectal Cancer Tissue After Treatment with Neoadjuvant Chemoradiation / N. R. Andrade, C.T. Fujiyama Oshima, T.S. Gomes T.S. et al. // Journal of Gastrointestinal Cancer. -2011. - Vol. 42 (1) - P.34-39.

52. Archer, C. Apoptosis Pathways / C. Archer, P. Trott, M. Dowsett // Principles of Molecular Oncology. - 2000. - P. - 237-255.

53. Archer, C. Early changes in apoptosis and proliferation following primary chemotherapy for breast cancer / C. Archer, M. Parton, I.E. Smith // Br. J. Cancer. -2003.-Vol.89 (6).-P. 1035-1041.

54. Baguley, B.C. Multidrug Resistance in Cancer / B.C. Baguley // Methods in Molecular Biology.-2010.-Vol. 596.-P. 1-14.

55. Banfalvi, G. Apoptotic chromatin changes / G. Banfalvi // Springer science + Business media B. V., 2009. - 412 p.

56. Barnes, T. Practical management of imatinib in gastrointestinal stromal tumors / T. Barnes, D. Reinke // Clin. J. Oncol. Nurs. - 2011. - Vol. 15(5). P. -533545.

57. Baselga, J. Combined anti - EOF receptor and anti - HER2 receptor therapy in breast cancer: a promising strategy ready for clinical testing / J. Baselga // Ann. Oncol. -2002.-Vol.13.-P.8-9.

58. Belyaeva, A.V. Age-related and clinicopathological features of colorectal cancer associated with K-ras gene status / A.V. Belyaeva, G.A. Yanus, E.N. Suspitsyn et al. // Advances in Gerontology. -2012. -Vol.2. -Issue 4. - P. 306-311.

59. Birner , P. Prognostic relevance of p53 protein expression in glioblastoma / P. Birner, M. Piribauer, I. Fischer et al. // Oncol. Reports. -2002. - V.9. - P.703-707.

60. Bogler, O. The p53 gene and its role in human brain tumors / O. Bogler, H.J. Huang, P. Kleihues et al. // Glia. - 1995. V.15. - P. 308-327.

61. Bosly, A. Achievement of optimal average relative dose intensity and correlation with survival in diffuse large B-cell lymphoma patients treated with CHOP /

A. Bosly, D. Bron, A.Van Hoof et al. // Annals of Hematology. - 2008. -Vol. 87. -Issue 4. - P. 277-283.

62. Bronchud, M. H. Cyclin-Dependent Kinases and Their Regulators as Potential Targets for Anticancer Therapeutics / M. H. Bronchud, L. Brizuela, J. Gyuris et al. // Principles of Molecular Oncology. -2004. -P. 359-410.

63. Broker, L.E. Cell death independent of caspases: a review / L.E. Broker, F.E.A. Kruyt, G. Giaccone // Clinical cancer research: an official journal of the American Association for Cancer Research. - 2005. -11(9). - P.3155-3162.

64. Broyde, A. Role and prognostic significance of the Ki-67 index in non-Hodgkin's lymphoma / A. Broyde, O. Boycov, Y. Strenov //Am. J. Hematol. - 2009. -Vol.-84.-P. 338-344.

65. Buchwalow, I. Immunohistochemistry. Basics and methods / I. Buchwalow, W. Bocker. -2010.- 150 p.

66. Campling, B.G. Clinical implication of p53 mutation in lung cancer / B.G. Campling, W.S. El-Deiry // Molecular Biotechnology. - 2003 -.Vol. 24. - Issue 2. - P. 141-156.

67. Chang, C.C. Immunohistochemical expression patterns of germinal center and activation B-cell markers correlate with prognosis in diffuse large B-cell lymphoma / C. C. Chang, S. McClintock S., R. Cleveland et al. // Am. J. Surg. Pathol. - 2004. -Vol. 28. - P.464-70.

68. Chattopadhyay, N. Inexpensive SDS/phenol method for RNA extraction from tissues / N. Chattopadhyay, R. Kher, M. Godbole // Biotechniques. - 1993. - Vol. 15. -№1. - P. 24-26.

69. Chatzitolios, A. Prognostic significance of CD95, P53, and BCL2 expression in extranodal non-Hodgkin's lymphoma / A. Chatzitolios, I.Venizelos, G.Tripsiannis et al. // Annals of Hematology. - 2010. - Vol. 89. -Issue 9. - P. 889-896.

70. Chen, G. G., Apoptosis in carcinogenesis and chemotherapy / G. G.Chen, P.

B. S. Lai // Apoptosis in cancer. - Springer, 2009. - 384 p.

71. Chomel, J.C. Chronic myeloid leukemia stem cells in the era of targeted therapies: resistance, persistence and long-term dormancy / J.C. Chomel, A.G. Turhan // Oncotarget. - 2011. - Vol. 2(9). - P.713-727.

72. Coleman, W.B. Molecular mechanisms of human carcinogenesis / W.B. Coleman, G.J.Tsongalis // Cancer: Cell Structures, Carcinogens and Genomic Instability Experientia Supplementum - 2006. - P. 321-349.

73. Court, H. The Biology of K-Ras Signaling Pathways in Pancreatic Cancer / H. Court, M.R.Philips, D. Bar-Sagi // Molecular Genetics of Pancreatic Cancer . -2013. -P.83-115.

74. Dabbs, D.G. Diagnostic immunohistochemistry: theranostic and genomic applications. - 3rd ed. - 2010. - Vol. 941. - P. 167-169.

75. Danielson, P.B. The cytochrome P450 superfamily: biochemistry, evolution and drug metabolism in humans / P.B Danielson // Curr. Drug Metab. - 2002. - T.3. -№6.-P. 561-597.

76. De Boer, R. Systemic treatment of HER2+ metastatic breast cancer: clinical conundrums and future perspectives / R. De Boer, J. Beith, J. Chirgwin //Asia Pac. J. Clin. Oncol. - 2014. - P. 15-25.

77. DiPaola, R.S. Overcoming bcl-2 and p53-mediated resistance in prostate cancer / R.S. DiPaola, J. Aisner // Semin Oncology. -1999. -26. - P. 112-118.

78. Donepudi, I. Drug-Induced Liver Injury / I. Donepudi, H.Massoumi, T.S. Dharmarajan et al. // Geriatric Gastroenterology. - 2012. -P.409-420.

79. Doonan, J.H. Functional Evolution of Cyclin-Dependent Kinases / J. H. Doonan, D. Kitsios // Molecular Biotechnology. -2009. -Vol. 42. - Issue 1. - P. 14-29.

80. Dutheil, F. Xenobiotic metabolizing enzymes in the central nervous system: Contribution of cytochrome P450 enzymes in normal and pathological human brain / F. Dutheil, P. Beaune, M.A. Loriot // Biochimie. -2008. -Vol.90. - P.426-436.

81. Erler, B.S. CD 117, Ki-67, and p53 predict survival in neuroendocrine carcinomas, but not within the subgroup of small cell lung carcinoma / B.S. Erler, M.M. Presby, M. Finch M. et al. // Tumor Biology.- 2011. -Vol.32 (1). P. 107-111.

82. Esteva, F. Prognostic markers in early breast cancer / F. Esteva, G.

Hortobagyi // Breast Cancer Res. -2004. -Vol.6. - №3. - P. 109-118.

83. Filipits, M. Mechanisms of cancer: multidrug resistance / M. Filipits // Drug Discovery Today: Disease Mechanisms. - 2004. - Vol.1. - №2. - P. 229-234.

84. Foulds, L. Neoplastic Development / Foulds, L. // Vol. 1. Academic Press, New York.-1969.

85. Foussard, C. Long-term follow-up of a randomized trial of fludarabine-mitoxantrone, compared with cyclophosphamide, doxorubicin, vindesine, prednisone (CHVP), as first-line treatment of elderly patients with advanced, low-grade non-Hodgkin's lymphoma before the era of monoclonal antibodies / C. Foussard , P. Colombat, H. Maisonneuve // Annals of Oncology. -2005. -Vol.16. -P.466-472.

86. Frank, N. A. Acute and Chronic Liver Diseases Induced by Drugs or Xenobiotics / N.A. Frank , M.A. Carey, J.B. Carey // Liver Immunology. - 2007. -P.375-388.

87. Frasca, D.Transcription Factors in Mature B-Cells During Aging / D. Frasca, R.L. Riley, B.B. Blomberg//Handbook on Immunosenescence.-2009.-P.381-391.

88. Giaccone, G. Targeted Therapies in Oncology / G. Giaccone // Taylor&Francis . - 2007. - 424 p.

89. Gillian, M.K. Rituximab / M.K. Gillian // Drugs. - 2010. -Vol.70 -P. 14451476.

90. Ginsburg, G. S. Personalized medicine: Revolutionizing drug discovery and patient care / G.S. Ginsburg, J.J. McCarthy // Trends Biotechnol. - 2001. - Vol.19. -P.491-496.

91. Goldstein, L.J. Expression of a multidrug resistance gene in human cancers / L.J. Goldstein, H. Galski, A. Fojo et al. // J.Nat. Cancer Inst. 1989. — Vol. 81. - P. 116124.

92. Gomez-Curet, I. c-Myc inhibition negatively impacts lymphoma growth / I. Gomez-Curet, R.S. Perkins, R.Bennett et al. // J. Pediatr. Surg. - 2006. -V. 41. - P.207-211.

93. Goradini, D. Biomolecular prognostic factors in breast cancer / D. Goradini, M. Diadone // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. -2004. -Vol.16., №1. -P.49-55.

94. Hanahan, D. The hallmarks of cancer / D. Hanahan, R.A. Weinberg // Cell. -2000.-Vol.100.-P.57-70.

95. Hans, C.P. Confirmation of the molecular classification of diffuse large B-cell lymphoma by immunohistochemistry using a tissue microarray / C.P. Hans, D.D. Weisenburger, T.C. Creiner // Blood. - 2004. - Vol.103. -P.275-282.

96. Hegewisch-Becker, S. The MDR phenotype in hematologic malignancies: prognostic relevance and future perspectives / S. Hegewisch-Becker, D.K. Hossfeld // Ann. Hematol. -1996. -Vol. 72. - P. 105-117.

97. Hiraga, J. Promoter Hypermethylation of the DNA-Repair Gene 0 6-Methylguanine - DNA Methyltransferase and p53 Mutation in Diffuse Large B-cell Lymphoma / J. Hiraga, T. Kinoshita, T. Ohno et al. // International Journal of Hematology. - 2006. - Vol. 84. - Issue 3. - P.248-255.

98. Hitoshi, O. BCL6 Translocations in B-Cell Tumors /0. Hitoshi // Encyclopedia of Cancer. - 2012. - P.364-368.

99. Inwald, E.C. Ki-67 is a prognostic parameter in breast cancer patients: results of a large population-based cohort of a cancer registry / E.C. Inwald, M. KlinkhammerSchalke, F. Hofstadter // Breast Cancer Research and Treatment. - 2013. -Vol. 139 (2). -P. 539-552.

100. Jain, K.K. Personalized Medicine / K.K. Jain // Decision Resources Inc. Waltham. - MA. - USA. - 1998.

101. Jain, K.K. From molecular diagnostics to personalized medicine / K.K. Jain // Exp. Rev. Mol. Diagn. - 2002. -Vol. 2. - P. 299-301 / The IBC Workshop. London, and Clinical Oncology. -2000. - Vol. 126. - Issue 4. - P.238-245.

102. Jain, K.K. Personalized Medicine / K.K. Jain // Jain PharmaBiotech Publications. Basel, Switzerland. - 2003. - Vol. 4 (6). - P.548-558.

103. Jain, K.K. Personalized Therapy for Cancer / K.K. Jain // Textbook of Personalized Medicine. - 2009. - P. 165-254.

104. Janssen, K.P. Murine models of colorectal cancer: studying the role of oncogenic K-ras / K.P. Janssen // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2003. -Vol.60. - Issue 3. - P. 495-506.

105. Jeffrey, P. Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations / P. Jeffrey, N. Pavletich // Journal: Science. -1994. - Vol. 265. -№5170. - P.346-355.

106. Junker, K. p53 tumour-suppressor gene in non-small-cell lung cancer with neoadjuvant therapy / K. Junker, T. Wiethege, K.M. Muller // J. Cancer Res. Clin. Oncol. - 2001. - 126 (4). P. -238-245.

107. Kanungo, A. Lymphoid neoplasms associated with concurrent t(14;18) and 8q24/c-MYC translocation generally have a poor prognosis / A. Kanungo, L.J. Medeiros, L.V. Abruzzo et al. // Mod Pathol. - 2006. -№ 19. - P.25-33.

108. Kaplowitz , N. Drug metabolism and hepatotoxicity / In: Kaplowitz N., ed. Liver and Biliary Diseases / Kaplowitz. - 2-nd ed. Williams and Wilkins, 1996. - P. 103-120.

109. Karim, K.A. Temozolomide and radiotherapy in newly diagnosed glioblastoma patients: 06-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) promotor methylation status and Ki-67 as biomarkers for survival and response to treatment / K.A. Karim, M.M. Mahdy, M.M.A.Wahab et al. // The Chinese-German Journal of Clinical Oncology.-2012.-Vol.11 (3).-P. 168-176.

110. Kim, N.K. p53, BCL-2, and Ki-67 Expression According to Tumor Response After Concurrent Chemoradiotherapy for Advanced Rectal Cancer / N.K. Kim, J.K. Park, K.Y. Lee et al. // Annals of Surgical Oncology. - 2001. - Vol. 8 (5). -P. 418-424.

111. Kojima, Y. Fas and Fas ligand expression on germinal center type-diffuse large B-cell lymphoma is associated with the clinical outcome / Y. Kojima, H. Tsurumi, N. Goto et al. // Eur. J. Haematol. -2006. - Vol. 76. - №6. - P. 465-472.

112. Komdeur, R. Expression of multidrug resistance proteins, P-gp, MRP1 and LRP, in soft tissue sarcomas analysed according to their histological type and grade / R. Komdeur, B.E.C. Plaat, W.T.A. Graaf // European Journal of Cancer - 2002. -№39 -P. 909-916.

113. Kotala, V. Potent induction of wild-type p53-dependent transcription in tumour cells by a synthetic inhibitor of cyclin-dependent kinases / V. Kotala, S.

Uldrijan, M. Horky et al. // Cellular and Molecular Life Sciences. -2001. - Vol.58. -Issue 9.-P. 1333-1339.

114. Lee, E.C. Programmed cell death and survival pathways in prostate cancer cells / E.C. Lee, M. Tenniswood // Arch Androl. - 2004. -Vol.50. - P. 27-32.

115. Lee, S. Cytochrome P450 networks in chemical space / S. Lee, D. Kim // Archives of Pharmacal Research. - 2010. - Vol.33. - P. 1361-1374.

116. Leitner, J. M. Hepatotoxicity of antibacterials: Pathomechanisms and clinical / J.M. Leitner, W. Graninger, F. Thalhammer // Infection. -2010. -№ 38. -P. 311.

117. Leventaki, V. Lymphoid Malignancies: Molecular Diagnostics / V. Leventaki, F.Vega // Molecular Genetic Pathology. - 2013. - P. 887-928.

118. Levine, A.J. The P53 pathway: what questions remain to be explored? / A.J. Levine, W. Hu, Z. Feng // Journal Cell Death and Differentiation - cell death differentiation. -2006. -Vol. 13. - №.6. - P.1027-1036.

119. Llanos, M. Prognostic significance of Ki-67 nuclear proliferative antigen, bcl-2 protein, and p53 expression in follicular and diffuse large B-cell lymphoma / M. Llanos, H. Alvarez-Arguelles, R. Aleman // Med Oncology. - 2001. -Vol. 18. - P. 1522.

120. Loo, T.W. Recent progress in understanding the mechanism of P-glycoprotein-mediated drug efflux / T.W. Loo, D. M. Clarke // J. Membr. Biol. - 2005. -Vol. 206. - P.173-185.

121. Lopez-Terrada D. Genetics and Molecular Biology of Bone and Soft Tissue Tumors / D. Lopez-Terrada, J.M. Hicks // Bone Pathology. - 2009. - P. 91-124.

122. Louis, D.N. WHO Classification of Tumors of the Central Nervous System / D.N. Louis, H. Ohgaki, O.D.Wiestler et al. - 3rd Edition. -2007. -P. 13-50.

123. Luan, H. Study of the correlation of EGFR and K-RAS gene mutations with its protein expression in non-small cell lung cancer / H. Luan, L.Sun, N. Dong et al. // Clinical Oncology and Cancer Research. - 2010. - Vol.7. - Issue 2. - P. 97-102.

124. Lugtenburg, P. Treatment of diffuse large B-cell lymphoma in the elderly: strategies integrating oncogeriatric themes / P. Lugtenburg, P. Sonneveld // Curr. Oncol. Rep. - 2008 Vol. 10(5). - P.412-9.

125. Marie, J.P. Drug resistance in hematologic malignancies / J.P. Marie // Curr. Opin. Oncol. 2001. - Vol. 13. - P. 463-469.

126. Matsunaga, S. Indomethacin overcomes doxorubicin resistance with inhibiting multi-drug resistance protein 1 (MRP1) / S. Matsunaga, T. Asano, A. Tsutsuda-Asano et al. // Cancer Chemotherapy and Pharmacology. - 2006. -Vol.58. -Issue 3.-P.348-353.

127. Mengoli, M. Drug-induced hepatotoxicity: clinical and biochemical features of 26 patients and a review of the literature / M. Mengoli, D. Parmeggiani, M.C. Mengoli // Recent. Prog. Med. -2011. -102 (6). - P. 253-260.

128. Mitselou, A. Immunohistochemical study of apoptosis - related bcl-2 protein and its correlation with proliferation indices (Ki-67, PCNA), tumor suppression genes (p53, pRb), the oncogene c-erb-B2, sex steroid hormone receptors and other clinico-pathological features, in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium / A. Mitselou, E. Ioachim, E. Kitsou // In vivo. - 2003. - 17. - P.469-478.

129. Miura, K. An effective salvage treatment using ifosfamide, etoposide, cytarabine, dexamethasone, and rituximab (R-IVAD) for patients with relapsed or refractory aggressive B-cell lymphoma / K. Miura, K.Takei, S. Kobayashi // International Journal of Hematology. - 2011. - Vol.94. - P.90-96.

130. Moch, H. Personalized cancer medicine and the future of pathology / H. Moch, P.R. Blank, M. Dietel et al. // Virchows Archiv. - 2012. - Vol. 460. - Issue 1. -P. 3-8.

131. Montellano, O. Cytochrome P450: structure, mechanism, and biochemistry/ O. Montellano, R. Paul. -3rd edition. -2005. - New York, Kluwer Academic/Plenum Publishers.

132. Monti, E. Molecular Determinants of Intrinsic Multidrug Resistance in Cancer Cells and Tumors / E. Monti // Cancer Drug Resistance Cancer Drug Discovery and Development. - 2006. - P. 241-260.

133. Morioka, E. Recurrent breast cancer obtained long-term survival with local treatment (surgery and stereotactic body radiotherapy) and systemic therapy / E. Morioka, Y. Ohno, M. Noguchi // Gan To Kagaku Ryoho. 2012. - 39(12). - P. 19421944.

134. Munoz-Pinedo, C. Signaling Pathways that Regulate Life and Cell Death: Evolution of Apoptosis in the Context of Self-Defense / C. Munoz-Pinedo // Advances in Experimental Medicine and Biology. - 2012. -Vol.738. - P. 124-143.

135. Neder, L. M1B-1 labeling index in astrocytic tumors- a clinicopathologic study / L.Neder, B.O. Colli, H.R. Machado et al. // Clin.Neuropathol. 2001. - № 23. -P.262-270.

136. Nurse, P.M. Nobel lecture: Cyclin Dependent Kinases and Cell Cycle Control Bioscience Reports / P.M. Nurse. - 2002. - Vol. 22. - Issue 5-6. - P. 487-499.

137.0kamoto, Y. Oncothermia research and veterinary application in Japan, Tottori University / Y. Okamoto, G. Andocs, K. Kinya // Oncothermia Toyama city. -2011.

138. Pajeva, I. Molecular Modeling of P-Glycoprotein and Related Drugs / I. Pajeva, G. Globisch, R. Fleischer R. // Medicinal Chemistry Research. - 2005. -Vol.14. -Issue 2.-P. 106-117.

139. Pasqualucci, L. Hypermutation of multiple pro to-oncogenes in B-cell diffuse large-cell lymphomas / L. Pasqualucci, P. Neumeister, T. Goossens // Nature. - 2001. -P. 341-346.

140. Paul, D. Hepatotoxicity of chemotherapy / D. Paul // The Oncologist. -2001. - № 6. - P. 162-176.

141. Payne, S.R. Tumor suppressor genetics / S.R. Payne, C.J. Kemp // Carcinogenesis. - 2005. -26(12). -P. 2031-2045.

142. Penault-Llorca, F. Induction chemotherapy for breast carcinoma: predictive markers and relation with outcome / F. Penault-Llorca, A. Cayre, M.F. Bouchet // Int. J. Oncol. - 2003. - №22 (6). - P.1319-1325.

143. Pouratian, N. Low-grade gliomas in older patients: a retrospective analysis of prognostic factors / N. Pouratian, M. Mut, J. Jagannathan et al. // Journal of NeuroOncology. - 2008. - Vol. 90(3). - P. 341-350.

144. Reed, J.C. BCL-2-family proteins and hematologic malignancies: history and future prospects / J.C. Reed // Blood. -2008. -Vol. 111. - P. 3322-3330.

145. Rindi ,G. TNM staging of foregut neuroendocrine tumors: a consensus proposal including agrading system / G. Rindi, G. Kloppel, H. Alhman // Virchows Arch. - 2006. - Vol. 449. - P. 395-340.

146. Ruddell, A. B lymphocyte-specific c-Myc expression stimulates early and functional expansion of the vasculature and lymphatics during lymphomagenesis / A. Ruddell, P. Mezquita, K.A. Brandvold et al. // Am. J. Pathol. - 2003. - Vol. 163. - P. 2233—2245.

147. Rudner, J. Apoptosis InTech, Chapters published / J. Rudner. - 2013. - 202

P-

148. Salaverria, I. Molecular mechanisms in malignant lymphomas network project of the Deutsche Krebshilfe; German high-grade lymphoma study group; BerlinFrankfurt-Munster-NHL trial group. Translocations activating IRF4 identify a subtype of germinal center-derived B-cell lymphoma affecting predominantly children and young adults /1. Salaverria, C. Philipp, I. Oschlies et al. // Blood. - 2011. - 118 (1). -P.139-147.

149. Santella, R.M. Mechanisms and Biological Markers of Carcinogenesis / R.M. Santella // Cancer Precursors. - 2002. - P. 7-19.

150. Schinkel, A.H. Pharmacological insights from P-glycoprotein knockout mice / A.H. Schinkel // Int J Clin Pharmacol Ther. -1998 -Vol. 36.-P.9-13.

151. Schneider-Stock, R. p53 gene mutations in soft-tissue sarcomas-correlations with p53 immunohistochemistry and DNA ploidy / R.Schneider-Stock, Radig K., O.Yoshinao // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. - 1997. -Vol. 123. -Issue4.-P. 211-218.

152. Schumacher, M.A. Structural mechanism of the simultaneous binding of two drugs to a multidrug-binding protein / M. A. Schumacher, M.C. Miller, R.G. Brennan // EMBO J. -2004. - Vol. 23. - P.2923-2930.

153. Schwab, M. MycN in neuronal tumours / M. Schwab // Cancer Lett. 2004. -Vol. 204(2).-P. 179-187.

154. Selivanova, G. Reactivation of mutant p53: molecular mechanisms and therapeutic potential / G. Selivanova, K. Wiman // Journal Oncogene. -2007. - Vol. 26. -№15.- P.2243-2254.

155. Shah, N.P. Mechanisms of resistance to STI571 in Philadelphia chromosome-associated leukemias / N.P.Shah, C.L.Sawyers // Oncogene. - 2003. -Vol. 22.-P. 7389-7395.

156. Shtil ,A.A. Emergence of multidrug resistance in leukemia cells during chemotherapy: mechanisms and prevention / A.A. Shtil // J.Hematother. Stem Cell Res. -2002. - Vol. 11. - P. 231 -241.

157. Simonsson, T. c-Myc Suppression in Burkitt's lymphoma cells / T. Simonsson, M. Henriksson // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2002. - Vol. 290. -P. 11-15.

158. Slamon ,D.J. Human breast cancer. Correlanion of replase and survival with amplification of HER2/neu oncogene / D J. Slamon, G.M. Clark, S.G. Wong et al. // Science. - 1987.-Vol.235. - P. 177-182.

159. Sofocleous ,C.T. Ki-67 is an Independent Predictive Biomarker of Cancer Specific and Local Recurrence-Free Survival After Lung Tumor Ablation / C.T. Sofocleous, S.K. Garg, P. Cohen et al. // Annals of Surgical Oncology. - 2013. - Vol. 20 (3).-P. 676-683.

160. Song, Y. Expression profile of CD10, Bcl-6, CD138, Bcl-2 and MUM1 and their prognostic value in 136 patients with diffuse large B-cell lymphoma / Y. Song, Z. Cao, Q. Su et al. // The Chinese-German Journal of Clinical Oncology. -2009. - Vol. 8. -Issue 10.-P. 585-591.

161. Soussi, T. p53 website and analysis of p53 gene mutations in human cancer: forging a link between epidemiology and carcinogenesis / T. Soussi, K. Dehouche, C. Beroud Hum. Mutat. - 2000. - Vol.15. -P. 105-113.

162. Staud, F. Expression and Function of P-Glycoprotein in Normal Tissues: Effect on Pharmacokinetics / F. Staud, M. Ceckova, S. Micuda et al. // Methods in Molecular Biology. - 2010. - Vol. 596. - P. 199-222.

163. Stavrovskaya, A.A. Transport proteins of the ABC family and multidrug resistance of tumor cells / A. A. Stavrovskaya, T.P. Stromskaya // Biochemistry. - 2008. -Vol. 73(5).-P. 592-604.

164. Stewart, Z.A., Westfall M.D., Pietenpol J.A. Cell-cycle dysregulation and anticancer therapy RENDS in Pharmacological Sciences. - 2003 - Vol.24. -No.3. -P. 139.

165. Swerdlow, S. WHO Classification of tumors of hematopoietic and lymphoid tissues / S. Swerdlow, E. Campo, N. Harris et al. //1. ARC, Lyon. -2008. -P.233-237.

166. Szczuraszek, K. Prognostic Significance of Ki-67 Antigen Expression in Non-Hodgkin's Lymphomas / K. Szczuraszek, G.Mazur, M. Jelen et al. // Anticancer Res. 2008. - Vol. 28. - P. 1113-1118.

167. Takano, Y. Apoptosis of colon cancer: Comparison with Ki-67 proliferative activity and expression of p53 / Y. Takano, M. Saegusa, M. Ikenaga // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. - 1996. - Vol.122 (3). - P. 166-170.

168. Thor, A.D. Accumulation of p53 tumor suppressor gene protein: an independent marker of prognosis in breast cancers / A.D. Thor // J. Natl. Cancer Inst. 1992. - № 84. - P.845-855.

169. Tyson ,J.J. Temporal Organization of the Cell Cycle Current Biology / J.J.Tyson, B.Novak//-. 2008. -Vol. 18. - Issue 17. - P. 759-768.

170. Varghese, J. Caspase-3 activation is an early event and initiates apoptotic damage in a human leukemia cell line / J. Varghese, N.S. Khandre, A. Sarin // Apoptosis. -2003. -Vol.8. - Issue 4. - P.363-370.

171. Vaux, D. L. Apoptosis Timeline / D.L. Vaux // Cell Death and Differentiation. - 2002. - Vol.9. - P. 349-354.

172. Vizirianakis, I.S. Pharmaceutical education in the wake of genomic technologies for drug development and personalized medicine / I.S. Vizirianakis // Eur. J. Pharm. Sci. - 2002. - Vol. 15. - P. 243-250.

173. Wang, C. High prevalence of significant fibrosis in patients with immunotolerance to chronic hepatitis B infection / C. Wang, H. Deubner, M. Shuhart et al. // Hepatology. - 2005. - Vol.42. -P.573.

174. Wang, D. VEGF and Bcl-2 Interact Via MAPKs Signaling Pathway in the Response to Hypoxia in Neuroblastoma / D.Wang, Q. Weng, L. Zhang L. et al. // Cellular and Molecular Neurobiology. - 2009. - Vol. 29 (3). - P. 391-401.

175. Weinberg, R. The Biology of Cancer / R. Weinberg // Cellular Oncogenesis, Garland Science. - 2006. - P. 91-118.

176. Wieskowska, A. Noninvasive diagnosis and monitoring of nonalcoholic steatohepatitis: present and future / A. Wieskowska, A.J. McCullough, A.E. Feldstein // Hepatology. -2007. - Vol. 46. - P.582-589.

177. Winer, E. Clinical Cancer Advances 2008: Major Research Advances in Cancer Treatment, Prevention, and Screening - A Report From the American Society of Clinical Oncology / E. Winer, G. Gralow, L. Diller et al. // J.Clin. One. -2009. -Vol.27.-№5.-P. 812-826.

178. Xu, Y. The t(14;18) in diffuse large B-cell lymphoma correlation with germinal center-associated markers and clinical features / Y. Xu, R.W.McKenna, J.E. Doolittle et al. // Appl. Immunohistochem. Mol. Morphol. - 2005. - Vol. 13(2). P. 116123.

179. Yan, C. P53 gene mutations in non-Hodgkin's lymphoma / C.Yan, X. Zhifu, L. Huiyu, et al. // Journal of Tongji Medical University. - 1999. - Vol. 19. - Issue 1. -P.27-30.

180. Yerushalmi, R. Ki67 in breast cancer: prognostic and predictive potential / R. Yerushalmi, R. Woods, P.M. Ravdin // Lancet Oncol. - 2010. - Vol. 11 (2). - P. 174-183.

181. Yin, C.C. Molecular Detection"©^ 14; 18)(q32;q21) in Follicular Lymphoma / C.C.Yin, R. Luthra // Hematological Malignancies Methods in Molecular Biology. -2013.-P. 203-209.

182. Youle, R.J. The BCL-2 protein family: opposing activities that mediate cell death / R.J. Youle, A.Strasse // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2008. - Vol. 9.-P. 47-59.

183. Zhang, G.J. Apoptotic index correlates to bcl-2 and p53 protein expression, histological grade and prognosis in invasive breast cancers / G.J. Zhang, I. Kimijima, R. Abe //Anticancer Res. - 1998. - Vol.18. - P. 1989-1998.

184. Zhong, C. Expression of multidrug-associated protein, P-glycoprotein, P53 and Bcl-2 proteins in bladder cancer and clinical implication / C. Zhong, Z. Yongxing, Z. Xu// Journal of Tongji Medical University. - 2001. - Vol. 21(1). - P. 56-58.

185. Ziepert, M. Standard International prognostic index remains a valid predictor of outcome for patients with aggressive CD20+ B-cell lymphoma in the rituximab era / M. Ziepert, D. Hasenclever, E. Kuhnt // J. Clin. Oncol. - 2010. - Vol. 28(14). - P. 2373-2380.