Молекулярно-генетическое изучение устойчивости к киле Brassica rapa L. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат наук Нгуен Минь Ли

• Нгуен Минь Ли
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Нгуен Минь Ли

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Народнохозяйственное значение капусты пекинской

1.2. Кила капустных культур (возбудитель - Plasmodiophora brassicae Wor.)

1.2.1. Историческая справка

1.2.2. Систематика и биологическая характеристика Plasmodiophora brassicae Wor

1.2.3. Симптомы килы

1.2.4. Жизненный цикл патогена

1.2.5. Методы борьбы с килой

1.2.6. Система дифференциации рас Р. brassicae

1.3. Селекция на устойчивость к киле у капустных культур

1.3.1. Селекция на устойчивость к киле вида B. rapa

1.3.2. Селекция на устойчивость к киле B. oleracea

1.3.3. Селекция на устойчивость к киле B. napus

1.3.4. Селекция на устойчивость к киле Raphanus sativus

1.4. Маркер-опосредованный отбор в селекции на устойчивость к киле капустных культур

1.4.1. Молекулярные маркеры

1.4.2. Применение маркер - опосредованного отбора в селекционном процессе

1.4.3. Локусы устойчивости к киле видов Brassica и Raphanus

1.4.4. Клонирование локусов устойчивости к киле

1.5. Определение плоидности растений капустных культур подсчетом числа хлоропластов замыкающих клеток устьиц

ГЛАВА 2. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ УСТОЙЧИВОСТИ К КИЛЕ

2.1. Введение

2.2. Материал исследования

2.3. Методы исследования

2.4. Результаты и обсуждение

2.4.1. Изучение устойчивости линий капусты пекинской

2.4.2. Изучение генетики устойчивости инбредных линий европейского турнепса ЕСД04-05 и ЕСД04-10

2.4.3. Изучение генетики устойчивости линий капусты пекинской 20-2сс1-132 и Ха642DH, Кн70-1156

2.5. Выводы

ГЛАВА 3. МАРКИРОВАНИЕ ГЕНОВ УСТОЙЧИВОСТИ К КИЛЕ

3.1. Введение

3.2. Материал исследования

3.3. Методы исследования

3.4. Результаты и их обсуждения

3.4.1. Оценка эффективности известных маркеров локусов устойчивости к киле на селекционных популяциях

3.4.2. Поиск RAPD маркера, тесно сцепленного с геном устойчивости к киле

3.4.3. Секвенирование и анализ последовательности RAPD маркера

3.4.4. Конвертирование RAPD маркера в SCAR маркер

3.4.5. Картирование гена устойчивости

3.4.6. Оценка эффективности маркера Tau_cBrCR404

3.4.7. Использование маркера Tau_cBrCR404 в селекции капусты белокочанной на устойчивость к киле

3.4.8. Скрининг маркеров известных локусов устойчивости к киле в селекционной коллекции

3.5. Выводы

ГЛАВА 4. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЛОИДНОСТИ РАСТЕНИЙ КАПУСТНЫХ КУЛЬТУР МЕТОДОМ ПОДСЧЕТА ЧИСЛА ХЛОРОПЛАСТОВ В ЗАМЫКАЮЩИХ КЛЕТКАХ УСТЬИЦ

4.1. Введение

4.2. Материал исследования

4.3. Методы исследования

4.4. Результаты и обсуждение

4.4.1. Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц капусты пекинской (B. rapa)

4.4.2. Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц рапса (B. napus)

4.4.3. Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц капусты белокочанной (B. oleracea)

4.4.4. Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц отдаленных гибридов (B. rapa^B. napus)*B. oleracea)

4.4.5. Влияние температуры, стадии развития и срока созревания растений на число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц

4.5. Выводы

ВЫВОДЫ

РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЕСД: европейская система дифференциаторов ЗКУ: замыкающая клетка устьиц ПЦР: полимеразная цепная реакция п.н.: пара нуклеотидов УГ: удвоенный гаплоид

AFLP: полиморфизм длин амплифицированных фрагментов, англ. Amplified fragment length polymorphism

BSA: массовый сегрегационный анализ, англ. Bulked segregant analysis FAO: организация по продуктам питания и сельскому хозяйству при ООН, англ. Food and Agriculture Organization

ID: индекс болезни, англ. Disease index InDel: инсерция/делеция, англ. Insertions/Deletion

MAB: маркер-опосредованное беккросирование, англ. Marker-assisted backcrossing

MAS: маркер-опосредованный отбор, англ. Marker assisted selection QTL: локус количественного признака, англ. Quantitative Trait Locus RAPD: случайно амплифицированная полиморфная ДНК, англ. Randomly Аmplifïed Рolymorphic DNA

RFLP: полиморфизм длин рестрикционных фрагментов, англ. Restriction Fragment Length Polymorphism

SCAR: Амплифицированный фрагмент известной последовательности, англ. Sequence Characterized Amplified Region

SNP: Однонуклеотидный полиморфизм, англ. Single nucleotide polymorphism

SSR: простые повторяющиеся последовательности, англ. Simple sequence

repeat

STS: Меченный сайт последовательности, англ. Sequence-Tagged Site USDA: Сельскохозяйственное Торговое Представительство США, англ. United States Department of Agriculture.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическое изучение устойчивости к киле Brassica rapa L.»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. В настоящее время в ситуации сильной конкуренции на рынке семян капустных культур селекционные компании стремятся к повышению своей конкурентоспособности за счёт применения инновационных биотехнологических методов в селекционном процессе. При этом отмечается большое значение методов маркер - опосредованного отбора или селекции с помощью молекулярных маркеров (Brumlop S., Finckh M.R., 2010; Narasimhulu R. et al., 2013) и создания растений удвоенных гаплоидов (Takahashi Y. et al., 2011; Zhang Y. et al., 2012).

Среди овощных капустных культур особое место занимает капуста пекинская (Brassica rapa L. subsp. pekinensis (Lour.) Hanelt), которая представляет собой приоритетную культуру во многих странах восточной Азии, Америки, Австралии и т.д. (Wang X., 2011). В России она также становится более популярной. В мировой практике производства капусты пекинской большой ущерб наносят разные вредоносные заболевания. Одной из них является кила, борьба с которой возможна только методом создания устойчивых сортов и гибридов F1 (Монахос Г.Ф., Монахос С.Г. 2009а).

В селекции капусты пекинской на устойчивость к киле в течение более двадцати лет проводят интенсивные работы по созданию и внедрению молекулярных маркеров генов устойчивости, так как только с помощью маркеров можно пирамидировать несколько генов в одном генотипе для обеспечения высокой и надежной устойчивости к болезни.

В пределах вида B. rapa с помощью молекулярных маркеров выявлено, по меньшей мере, восемь локусов устойчивости к киле Crrl (Kikuchi М. et al., 1999), Crr2 (Suwabe K. et al., 2003), Crr3 (Hirai M. et al., 2004), Crr4 (Suwabe K. et al., 2006), CRa (Hayashida N. et al., 2008), CRb (Piao Z. et al., 2004), CRc, Crk (Sakamoto K. et al., 2008), которые локализованы на 5 группах сцепления. Несмотря на определенные успехи, конечная цель пока еще не достигнута - до сих пор отсутствуют универсальные маркеры локусов устойчивости для использования в практике селекционного процесса. Таким образом, работа по поиску

высокоэффективных генов устойчивости к киле и разработке их эффективных молекулярных маркеров для ускорения и повышения эффективности селекционного процесса на устойчивость к возбудителю килы Plasmodiophora brassicae Wor. остается актуальной.

В современных условиях в селекции F1 гибридов капустных культур, а также генетических исследованиях широко применяют метод культуры микроспор для получения чистых линий удвоенных гаплоидов. На завершающем этапе этой технологии для определения плоидности полученных растений-регенерантов может быть использован подсчет числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц, однако, сведений относительно стабильности проявления данного признака и силе его связи с числом хромосом растений в изменяющихся условиях среды у различных культур недостаточно и представляется актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Целью исследования явились изучение и разработка системы маркер-опосредованного отбора капустных растений по признаку устойчивости к киле и уровню плоидности для применения в практической селекции.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Изучить генетику устойчивости к киле линий капусты пекинской и линий европейского турнепса, как доноров генов устойчивости;

2. Оценить эффективность опубликованных молекулярных маркеров картированных локусов устойчивости к киле в расщепляющихся популяциях коллекции линий капусты пекинской и турнепса;

3. Изучить и создать высокоспецифичный молекулярный SCAR маркер, тесно связанный с геном устойчивости к киле;

4. Определить генетическое положение в группе сцепления генетической карты B. rapa маркированного локуса устойчивости к киле;

5. Провести скрининг наличия/отсутствия выявленного SCAR маркера гена устойчивости в коллекции устойчивых и восприимчивых к киле инбредных линий и F1 гибридов капусты пекинской, и в отдаленных скрещиваниях между B.

oleracea и гибрида (B. rapa^B. napus).

6. Изучить эффективность использования признака «число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц» для дифференциации растений видов Brassica, различающихся по уровню плоидности.

Научная новизна

На коллекции инбредных линий капусты пекинской и европейского турнепса дана оценка эффективности отдельных генов устойчивости к киле B. rapa.

С помощью высокоспецифичного и тесно сцепленного с одним из генов устойчивости SCAR маркера Tau_cBrCR404 проведена дифференциация линий капусты пекинской по генам устойчивости и выявлены линии, пригодные для поиска и разработки маркеров других генов устойчивости к киле B. rapa.

В генетической коллекции капусты пекинской и европейского турнепса выявлен новый ранее неизвестный высокоэффективный ген устойчивости к киле, картированный в 5-й группе сцепления B. rapa и обозначенный CrrA5.

Впервые на генотипах капустных растений B. rapa, B. oleracea и B. napus представлены данные о зависимости проявления признака «число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц» от внешнего фактора (температура воздуха), стадии онтогенетического развития (возраст растения) и биологии растения (продолжительность вегетационного периода), а также его связь с уровнем плоидности растений.

Теоретическая и практическая значимость

Разработан высокоэффективный ДНК маркер, пригодный для маркер-опосредованного отбора в селекционных программах, направленных на создание устойчивых к киле капустных культур.

Получены уточненные данные по наследованию устойчивости к киле и уровню обеспечиваемой устойчивости отдельными генами инбредных линий капусты пекинской и линий европейского турнепса.

Охарактеризована эффективность опубликованных молекулярных маркеров известных картированных локусов устойчивости к киле B. rapa.

Получены сведения о новом ранее неизвестном гене устойчивости к киле CrrA5 и его локализации в 5-й группе сцепления B. rapa.

Представлены данные об эффективности применения метода подсчета числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и стабильности проявления данного признака у капустных культур.

Методология и методы исследования

Для изучения генетики устойчивости киле использовали метод оценки устойчивости к киле на инфекционном фоне (Монахос Г.Ф. и др., 2009b).

Работу по маркированию генов устойчивости проводили с помощью метода выделения ДНК - ЦТАБ (Murray M.G., Thompson W.F., 1980), метода массового сегрегационного анализа (BSA) (Michelmore R.W. et al., 1991), полимеразной цепной реакции (ПЦР), электрофореза, клонирования фрагмента ДНК и секвенирования ПЦР продукта. Для определения степени сцепления между маркером и геном и картирования локуса устойчивости использовали программу MapDisto 1.7.6.5.1.1 (XL2010) (Lorieux M., 2012).

Определение числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц и числа хромосом в клетках меристематических тканей кончиков корешков и в делящихся клетках пыльников молодых бутонов проводили цитологическим анализом (Savitsky H., 1966; Пухальский В.А. и др., 2007).

Положения, выносимые на защиту:

1. Наследование устойчивости к киле инбредных линий капусты пекинской моногенное доминантное, инбредных линий европейского турнепса - полимерное доминантное;

2. Разработанный высокоспецифичный ДНК маркер Tau_cBrCR404, позволяет дифференцировать устойчивые и восприимчивые генотипы капусты пекинской в расщепляющихся популяциях и в генетических коллекциях, является эффективным в маркер-опосредованном отборе;

3. Маркированный ген устойчивости к киле CrrA5 капусты пекинской (линия 20-2сс1-132) располагается на A05 группе сцепления B. rapa и является новым, ранее неизвестным;

4. Число хлоропластов в замыкающих клетках устьиц является стабильным в проявлении маркерным признаком тесно связанным с плоидностью растений капустных культур B. rapa, B. oleracea и B. napus, а подсчет числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц - высокоэффективным методом оценки плоидности растений капусты пекинской, капусты белокочанной и рапса.

Степень достоверности и апробация результатов работы

Статистическую обработку полученных данных фенотипического расщепления в изучении генетики устойчивости к киле проводили с помощью критерия хи-квадрата.

Достоверность различий числа хлоропластов под влиянием различных факторов, температуры среды, возраста и уровня плоидности растения, определяли с использованием доверительного интервала на основе t-распределения Стьюдента при уровне значимости 0,05 (Доспехов Б.А., 1985) и программу Microsoft Exсel 2010.

Основные положения работы были представлены на научной конференции молодых ученных и специалистов РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2012; 2013); международной научно-практической конференции (VI Квасниковские чтения) в ГНУ ВНИИ овощеводства Россельхозакадемии (Московская обл., 2013); XI молодежной научной конференции: Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии (Москва, 2011); международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученных МГУ имени М.В. Ломоносова (Москва, 2011; 2010); научной конференции студентов РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева (Москва, 2009; 2010; 2011); Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых аграрных вузов Центрального федерального округа (Курск, 2011).

Публикации результатов исследования. По материалам диссертационного исследования опубликовано 10 работ, в том числе 3 в рецензируемых научных журналах и изданиях для опубликования основных научных результатов диссертаций ВАК при Министерстве образования и науки Российской Федерации.

Объем работы. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из введения, четырех глав, выводов, рекомендаций, списка сокращений, содержит 15 таблиц, 44 рисунка, 11 приложений. Список литературы включает 183 наименования, в том числе 157 работ иностранных авторов.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Народнохозяйственное значение капусты пекинской

Капуста пекинская является важной овощной культурой во многих странах мира. В восточноазиатских странах капуста пекинская является основным овощем, особенно в Корее, Японии и Китае (Wang X., 2011). По сравнению с другими странами мира эту культуру в Китае выращивают на самой большой площади, которая может достигать 2 млн. га с выходом продукции до 86 млн. т. (Sun R., 2003). В Японии в 2009 г. общий объем производства капусты пекинской составил 924 тыс. т. (Information export support web-site, 2010). Ежегодно корейские фермеры производят около 2,5 млн. тонн капусты пекинской на площади более 34 тыс. га (USDA, 2010).

На территорию России капуста пекинская была завезена в 20 веке. На сегодняшний день она относится к малораспространенным культурам и выращивается в основном в частном секторе (Андреев Ю.М. и др., 2011) огородниками-любителями. Площади, занятые в промышленном производстве, составляют примерно 300 га (Монахос Г.Ф., устное сообщение). В последнее время популярность данной культуры растет, и российские селекционеры усиливают работу с капустой пекинской с целью создания новых урожайных сортов и гибридов, подходящих к условиям выращивания в России. Это отражается в преобладании отечественных сортов и гибридов в государственном реестре селекционных достижений РФ, допущенных к использованию в 2014 г. (Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию на 14 февраля 2014 г.). Среди 44 сортов и гибридов капусты пекинской 12 сортов и 17 гибридов зарегистрированы отечественными компаниями и только 15 гибридов - иностранными.

Широкое распространение капуста пекинская получает благодаря своим ценным хозяйственным и биологическим качествам, таким как короткий период вегетации (40 - 120 дней); высокая урожайность, в зависимости от времени года и сорта 30 - 60 т/га; высокие вкусовые и диетические качества (Монахос Г.Ф. и

Монахос С.Г., 2009a). Кроме того, кочаны капусты пекинской способны к длительному хранению в течение 3-х и более месяцев (Andreas K. et al., 2001), что позволяет увеличить период потребления ее в свежем виде.

В 100 г капусты пекинской содержатся 16 ккал; 3,23 г углеводов; 1,2 г клетчатки; 0,2 г жиров; 1,2 г белков; 27 мг витамина С; 77 мг кальции; 0,31 мг железа; 13 мг магнии; 0,98 г золы (USDA Nutrient database, 2008). Пищевая ценность делает капусту пекинскую важным источником витаминов, минеральных веществ, незаменимых аминокислот, необходимых для нормальной жизнедеятельности организма человека, особенно во внесезонный период (Монахос Г.Ф. и Монахос С.Г., 2009a). Пекинская капуста имеет довольно высокое содержание витамина C. 100 г свежих овощей обеспечивает около 30% суточной потребности в этом витамине.

1.2. Кила капустных культур (возбудитель - Plasmodiophora brassicae Wor.)

1.2.1. Историческая справка

Одной из самых экономически вредоносных болезней всех капустных культур является кила, вызываемая патогеном Plasmodiophora brassicae Wor. (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b). Первое упоминание в Европе об этой болезни у капустных растений появилось в начале тринадцатого века (Dixon G., 2009). Болезнь была хорошо известна в Испании в XV веке, где было описано появление опухолей у капусты. Первое сообщение о киле в Англии было отмечено в 1736 г., и в начале XIX века шотландские ученые предположили, что причиной болезни являются неправильное применение удобрений и неудовлетворительные почвенные условия (Karling J.S., 1968a). Симптомы болезни были найдены у капусты цветной во Франции в 1820 г., в Германии в 1853 г., в Норвегии в 1855 г. Распространение килы в другие континенты мира (в Азию, в Америку и в Австралию) происходило в результате транспортировки кормов для животных из Европы (Karling J.S., 1968a; Sakamoto K. et al., 2008). В Японии первые записи о киле были сделаны в 1890 г. при обнаружении ее на

капусте белокочанной и в 1898 г. - на капусте пекинской (Ikegami H. et al., 1981) и в настоящее время она стала самой опасной болезнью при производстве капусты белокочанной и пекинской в Японии и Корее (Hirai M. et al., 2004).

В России кила стала распространенной в г. Санкт-Петербурге до такого уровня, что в 1872 г. королевское общество садоводов предложило призы за разработку методов борьбы с ней (Karling J.S., 1968a). В 1873 г. русский биолог М.С. Воронин начал изучать эту болезнь и через 5 лет в 1878 г. сообщил, что она вызывается патогеном Plasmodiophora и назвал его Plasmodiophora brassicae Wor. (Воронин М.С., 1877).

Вредоносность и распространение патогена. Р. brassicae поражает представителей семейства Капустные, которое включает в себя 350 родов и 3700 однолетних, двулетних и многолетних видов сорняков и травянистых культур (Karling J.S., 1968a; Dixon G., 2009). Поражение растений килой вызывает серьезный ущерб при производстве капустных культур. Снижение урожая рапса из-за килы может достигать 50%. Исследование в Швейцарии показало наличие патогена P. brassicae в 72% из 190 проб почвы засеянных рапсом полей (Wallenhammar A.C., 1996; 2000).

В России Р. brassicae распространена от Архангельской области до Закавказья, она охватывает Нечерноземный округ, Центрально-черноземный округ и Дальний Восток, включая Сахалин и Якутию (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b). В Северно-западных районах России ежегодно поражается до 50 - 75% от общего количества выращенных растений, при этом урожай снижается на 10 - 60% (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

1.2.2. Систематика и биологическая характеристика Plasmodiophora brassicae

Wor.

О классификации возбудителя килы продолжается дискуссия среди ученых. Первое время его относили к царству Грибов, однако в настоящее время после исследования генетической информации рибосомной РНК возбудитель килы

относят к царству Protozoa (Простейшие) по следующей классификации (Encyclopedia of life, 2013):

Царство: Protozoa (Простейшие)

Отдел: Cercozoa (Церкозоа) Класс: Phytomyxea

Порядок: Plasmodiophorida (Плазмодиофоровые)

Семейство: Plasmodiophoraceae (Плазмодиофоровые) Род: Plasmodiophora (Плазмодиофора)

Вид: Plasmodiophora brassicae Woronin

P. brassicae является почвенным облигатным паразитом, вегетативное тело которого является голым комочком многоядерной цитоплазмы. Плазмодий может содержать до 100 ядер, и не имеет собственной оболочки и постоянной формы и способен к амебообразному движению (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b). Он характеризуется наличием двужгутиковых зооспор с изоморфными жгутиками (Попкова К.В., 2005).

Развитие килы происходит под действием факторов окружающей среды, таких как температура, влажность и кислотность (рН) почвы, тип почвы и количество инфекции (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b). Оптимальными условиями для жизнедеятельности возбудителя килы является температура 22 - 24оС (Наумов Н.А., 1937), влажность около 75 - 80 % значение рН 5,4 - 5,6 (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

При попадании в почву значительная часть покоящихся спор возбудителя сразу прорастает, меньшая часть в первом году не прорастает и сохраняет жизнеспособность и патогенность в течение 15 - 17 лет (Wallenhammar A.C., 1996).

1.2.3. Симптомы килы

P. brassicae - внутриклеточный паразит, вызывающий не только гипертрофию клеток (увеличение размеров клетки), но и их гиперплазию (усиленное деление клеток) (Попкова К.В., 2005) (Рисунок 1).

Рисунок 1. (А) - Клетки корневой ткани с зооспорами пораженного растения килой, (Б) - Клетки корневой ткани без килы

Первые видимые симптомы килы часто наблюдаются на надземных частях пораженных растений. Листья увядают в жаркую и солнечную погоду (Agrios G.N., 2005), по мере развития болезни происходит пожелтение и опадение нижних листьев, рост растения-хозяина замедляется (Brown J., 1997). Пораженные килой растения, как правило, не способны сформировать товарные кочаны.

Характерными симптомами данного заболевания капустных растений является образование опухолей на корнях пораженных растений. Опухоли представляют собой веретенообразные, сферические, бугристые или булавовидные вздутия (Brown J., 1997). Эти галлы препятствуют эффективному поглощению и движению минеральных питательных веществ и воды через корневую систему (Agrios G.N., 2005).

Кроме того, в «желваки» могут вторгаться почвенные фитопатогенные бактерии (Erwinia carotovora, Pseudomonas ssp., Bacillus ssp.), приводя к развитию мокрой гнили корня и стебля, что служит причиной гибели растения (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

1.2.4. Жизненный цикл патогена

Жизненный цикл патогена включает две стадии (Рисунок 2). Первая стадия протекает в корневых волосках капустных растений, и поэтому она также называется этапом инфекции корневых волосков. Каждая первичная зооспора

появляется из одной гаплоидной покоящейся споры. При соприкосновении с корневыми волосками зооспоры вводят свое содержимое внутрь клетки хозяина. Оказавшись внутри корневых волосков, патоген формирует первичные плазмодии. Моноядерный первичный плазмодий проходит ряд синхронных митотических делений, в результате этого образуются зрелые многоядерные плазмодии (Tommerup I.C., 1971). После этого протоплазма каждого зрелого многоядерного плазмодия расщепляется в многоядерные сегменты, которые впоследствии развиваются в зооспорангии, содержащие 4-16 зооспор (Kageyama K., Asano T., 2009). Гаплоидные подвижные вторичные зооспоры высвобождаются из зооспорангия в конце первой фазы. Показано, что развитие зооспорангия может также проходить в корневых волосках устойчивых растений Brassica растений и других семейств (Colhoun J., 1958; Webb P.C., 1949).

Стадия вторичной инфекции P. brassicae начинается со слияния двух вторичных зооспор в почве и образования двуядерных зооспор, затем последние вторгаются в клетки коры корня (Tommerup I.C., 1971). Внутри инфицированных клеток коры корня, патоген формирует двуядерный вторичный плазмодий, который развивается в многоядерный плазмодий и в конечном итоге в покоящиеся споры после мейотического деления. Этот этап развития связан с гипертрофией и гиперплазией клеток-хозяев, что приводит к развитию характерных симптомов опухолей в корнях, которые часто визуально наблюдаются примерно через 4 недели после инокуляции (Tommerup I.C., 1971; Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

Плазмодии внутри ткани корня после инфицирования коры могут распространяться пассивно одновременно с делением клеток хозяина или активно, лизируя стенки клеток растения-хозяина. Покоящиеся споры попадают в почву, когда корни инфицированного хозяина начинают сгнивать и разрушаться. Одно пораженное растение после гибели оставляет в почве от 1010 до 1011 покоящихся спор (Voorips R.E., 1996).

Рисунок 2. Жизненный цикл P. brassicae Wor. (Agrios G.N., 2005)

1.2.5. Методы борьбы с килой

На практике для борьбы с килой применяют разные агротехнические, химические, биологические методы, отличающиеся по эффективности, стоимости и экологическим аспектам.

Агротехнические средства защиты включают в себя следующие методы: - Биологическое обеззараживание почвы. В этом методе используют

провоцирующие растения, которые представляют собой непоражаемые или устойчивые к киле растения. Они обладают способностью провоцировать прорастание покоящихся спор возбудителя килы в почве перед выращиванием основной культуры. На этих растениях проходит первая стадия жизненного цикла P. brassicae, однако, вторая стадия не может произойти, в результате этого формирование опухолей и образование новых покоящихся спор отсутствует и прорастающие споры гибнут. Это позволяет снизить концентрацию патогена в поле, и степень поражения килой основных восприимчивых культур (I. Macfarlane, 1952; H. Murakami, 2001; Е.А. Артемьева, 2000).

Показано, что в качестве провоцирующих растений для капусты пекинской можно использовать такие растения, как овес, шпинат, листовая редька, при этом отмечено уменьшение концентрации покоящихся спор P. brassicae от 29 до 62% в зависимости от предшественника (H. Murakami, 2001). Кроме того, установлено, что применение сухого порошка экстракта из морской травы (Posidonia australis) за 7 дней до посева позволило снизить развитие возбудителя килы в поле китайской капусты (S. Hata, 2002). Однако последние исследования показали, что метод биологического обеззараживания почвы является малоэффективным методом борьбы с килой в полевых условиях во многих регионах выращивания капустных культур (H.U. Ahmed, 2011; H. Friberg, 2005).

- Севооборот. Борьба с килой с помощью многопольных севооборотов не эффективна из-за длительного существования в почве спор до 15 лет, а также увеличения их числа из-за того, что кила поражает также и крестоцветные сорняки (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

- Известкование. Известь применяют для борьбы с килой уже более чем 200 лет (Karling J.S., 1968a). Известкование не устраняет возбудителя, а повышает pH почвы, следовательно, создает неблагоприятные условия для его развития и снижает концентрацию покоящихся спор (Webster M.A., 1991; Murakami H., 2002). Доказано, что на щелочной почве обычно поражается только 1 - 2 % растений (Smith J.E., 1955).

- Применение цианамида кальция давно используют для борьбы с

возбудителем килы. При контакте с влагой в почве цианамид кальция распадается, образуя гашеную известь и водород цианамида, который обладает противогрибковыми свойствами, в то время как известь имеет фунгистатический эффект (Klasse H.J., 1996). Кроме того, цианамид кальция также способствует распространению ризобактерий, которые подавляют развитие P. brassicae (Dixon G.R., 2012).

- Применение базамид-гранулята из расчета 200 г/м3 обеспечивало полное обеззараживание грунта в исследованиях Е.А. Артемьевой (2000).

- Применение бора может уменьшать заражение килой на 50 % и повышать урожайность пекинской капусты на 40 % (Dixon G., 2006). Однако роль бора во взаимодействии между P. brassicae и тканями корня капустных культур до сих пор неизвестна.

Применение известкования, цианамида кальция и бора являются потенциальными альтернативами фунгицидов. Однако использование этих агротехнических методов в конечном итоге приводит к значительному удорожанию продукции, поэтому их применение экономически неэффективно (Donald E.C., Porter I.J., 2009).

Химические методы. Многие исследования показали возможность применения ряда фунгицидов, которые позволяют бороться с килой, такие, как флусульфамид, квинтозен, флуазинам, циазофамид (Tanaka S., 1999; Naiki T., 1987; Suzuki K., 1995; Mitani S., 2003). Основным принципом действия множества фунгицидов является подавление прорастания покоящихся спор и ингибирование жизненного цикла патогена в почве, и даже в тканях корня хозяина (Tanaka S., 1999; Mitani S., 2003). Однако все современные фунгициды действуют малоэффективно при высокой концентрации покоящихся спор и высокой вирулентности популяций возбудителя килы P. brassicae. Кроме того, из-за отсутствия на сегодняшний день более дешевых и экологически безвредных фунгицидов для внесения в почву они не получают широкое распространение (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b).

Биологические методы. В настоящее время использование биологических

методов в борьбе с заболеваниями растет во всем мире (Donald E.C., Porter I.J., 2009). Поиск потенциальных эффективных биопрепаратов против P. brassicae довольно широко ведется, включая исследование ряда бактерий и грибов, например, Streptomyces sp., Bacillus sp., Trichoderma sp., Gliocladium catenulatum, и эндофитные грибы: Heteroconium chaetospira и Acremonium alternatum (Kasinathan H., 2012). Кроме того, имеются сведения о влиянии дождевых червей на степень поражения килой. Предполагается, что при прохождении через пищеварительный тракт дождевых червей споры P. brassicae частично теряют свою жизнеспособность, но до сих пор эта гипотеза не подтверждена (Friberg H., 2008). Эффективное применение биофунгицидов в различных эколого-географических зонах зависит от условий конкретного региона. Часто наблюдается относительно небольшое снижение вредоносности патогена и поэтому применение этого метода является экономически невыгодным (Kasinathan H., 2012).

Возделывание устойчивых растений. Мировая практика показала, что наиболее целесообразным методом борьбы с P. brassicae является возделывание устойчивых сортов и гибридов капустных культур (Монахос Г.Ф., Джалилов Ф.С., Монахос С.Г., 2009b). Селекция на устойчивость к киле ведется давно у всех капустных культур, в результате чего было создано много килоустойчивых сортов и гибридов, однако, на сегодняшний день не выведено абсолютно устойчивого сорта или F1 гибрида (Dodds P.N., 2010).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Нгуен Минь Ли, 2015 год

- 351 с.

6. Крашенинник, Н.В. Особенности технологии выращивания белокочанной капусты / Н.В. Крашенинник // Гавриш. - 2010. - № 2. - С. 16-19.

7. Леонова, И.Н. Молекулярные маркеры: использование в селекции зерновых культур для идентификации, интрогрессии и пирамидирования генов / И.Н. Леонова // Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2013. - том 17. - № 2.

- С. 314-325.

8. Лизгунова, Т.В. Культурная флора СССР. Т. XI. Капуста / Т.В. Лизгунова.

- Л.: Колос. Ленингр. Отд-ние. - 1984. - 328 с.

9. Май, Д.Ч. Совершенствование технологии получения гаплоидных и дигаплоидных растений рапса (Brassica napus L.) и белокочанной капусты (Brassica oleracea L.) in vitro: автореф. дис. .канд. биол. наук: 03.01.06 / Дык Чунг Май. - М. 2010a. - 22 с.

10. Май, Д.Ч. Технология получения гаплоидных растений рапса (Brassica

napus) in vitro / Д.Ч. Май, Е.А. Калашникова, А.А. Соловьев // Известия ТСХА. -2010b. - № 1. - C. 86 - 91.

11. Малецкий, С.И. Гармонические пропорции числа хлоропластов в замыкающих клетках устьиц сахарной свёклы (Beta vulgaris L.) / С.И. Малецкий, С.С. Юданова, Е.И. Малецкая // Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2013. - Том 17. - № 1. - 72-80.

12. Миронов, А.А. Создание мужски стерильных линий лобы (Raphanus sativus L. convar. lobo Sazon. et Stankev), оценка комбинационной способности устойчивых к киле линий: дис. ... канд. с-х. наук: 06.01.05 / Миронов Алексей Александрович. - М., 2007. - 140 с.

13. Монахос, Г.Ф. Наследование устойчивости к киле (Plasmodiophora brassicae Wor.) у линий листовой капусты (Brassica oleracea ssp. acephala) / Г.Ф. Монахос, А.А. Ушанов // Известия ТСХА. - 1998a. - №2 - С. 106-115.

14. Монахос, Г.Ф. Генетические источники устойчивости к киле крестоцветных (Plasmodiophora brassicae Wor.) при селекции пекинской капусты / Г.Ф. Монахос, Н.С. Теренина // Известия ТСХА. - 1998b. - Вып. 3. - С. 87-93.

15. Монахос, Г.Ф. Наследование устойчивости к киле у линий дайкона / Г.Ф. Монахос, И.Н. Зубик //Докл. ТСХА. - 2000. - Вып. 272. - С. 85-88.

16. Монахос Г.Ф. Капуста пекинская Brassica rapa L. Em. Metzg. ssp. pekinensis (Lour.) Hanelt. Биологические особенности, генетика, селекция и семеноводство: Монография / Г.Ф. Монахос, С.Г. Монахос - М: Изд-во РГАУ -МСХА имени К.А. Тимирязева. - 2009a. - 182 с.

17. Монахос, Г.Ф. Оценка устойчивости капусты к киле (возбудитель -Plasmodiophora brassicae Wor.): уч.-метод. Пособие / Г.Ф. Монахос, Ф.С. Джалилов, С.Г. Монахос. - М.: Изд-во РГАУ-МСХА имени К.А. Тимирязева. -2009b. - 24 с.

18. Монахос С.Г. Использование межвидовой гибридизации в селекции F1 гибридов капусты пекинской с групповой устойчивостью к киле и сосудистому бактериозу: дис. ... канд. с-х. наук: 06-01-05 / Монахос Сократ Григорьевич. - М., 2005. - 194 с.

19. Монахос, С.Г. Создание молекулярного маркера гена устойчивости к киле (Plasmodiophora brassicae Wor.j для селекции родительских линий капусты пекинской (Brassica rapa L) / С.Г. Монахос, А.Н. Игнатов // Изв. ТСХА. - 2007. Вып. 1. - C. 26-30.

20. Наумов, Н.А. Методы микологических и фитопатологических исследований / Н.А. Наумов. - М.: Сельхозгиз. - 1937. - 272 с.

21. Попкова, К.В. Общая фитопатология: учебник для вузов / К.В. Попкова - М.: Дрофа, 2005. - 445 с.

22. Рыжков, В.Л. Полиплоидия и количественно-качественные отношения в генетике / В.Л. Рыжков // Полиплоидия у растений: труды совещания по полиплоидии у растений, Москва, 25-28 июня 1958 г. - М.: Изд-во АН СССР. -1962. - С. 33-38.

23. Сазонова, Л.В. Корнеплодные растения: морковь, сельдерей, петрушка, пастернак, редис, редька / Л.В. Сазонова, Э.А. Власова. - Л.: Агропромиздат. -1990. - 295 с.

24. Синская, Е.Н. Род 649. Капуста — Brassica // Флора СССР / Е.Н. Синская; Гл. ред. В.Л. Комаров; Ред. VIII тома Н. А. Буш. - М. - Л.: Изд-во Академии наук СССР, 1939. - Т. VIII. - С. 459-466.

25. Сорока, А.И. Дифференциация гаплоидных и дигаплоидных растений рапса на цитологическом и морфологическом уровнях / А.И. Сорока // Цитология и генетика. - 2013. - Т. 47. - № 2. - С. 34 - 39.

26. Сулимова, Г.Е. ДНК-маркеры в генетических исследованиях: типы маркеров, их свойства и области применения / Г.Е. Сулимова // Успехи современной биологии. - 2004. - Т. 124. - № 3. - С. 260-271.

27. Agarwal, M. Advances in molecular marker techniques and their applications in plant sciences / M. Agarwal, N. Shrivastava, H. Padh // Plant Cell Rep. - 2008. -Vol. 27. - P. 617-631.

28. Agrios, G.N. Plant pathology / G.N. Agrios. - London: Elsevier Academic Press, 2005. - 952 p.

29. Ahmed, H.U. Assessment of bait crops to reduce inoculum of clubroot

(Plasmodiophora brassicae) of canola / H.U. Ahmed et al. // Can. J. Plant Sci. - 2011. -Vol. 91. - P. 545-551.

30. Allard, R.W. Principles of plant breeding / R.W. Allard. - 2nd edn. - New York: John Wiley & Sons Inc, 1999. - 264 p.

31. Andreas, K. Chinese Cabbage Management before and after Harvest / K. Andreas, P. Kerry, C. Graham // Proceedings of a workshop held in Beijing, People's Republic of China, 9-11 May 2001. - P. 92-99.

32. Arumuganathan, K. Estimation of nuclear DNA content of plants by flow cytometry / K. Arumuganathan, E. Earle // Plant Mol. Biol. Reporter 1991. - Vol. 9. - P. 221 - 231.

33. Ashikawa, M. Studies on breeding of clubroot-resistance in cole crops. Screening of cole crops for clubroot resistance / M. Ashikawa, H. Yoshikawa, K. Hida // Bull. of the Veg. and Orn. Crop Res. St. - 1980. - P. 35-73.

34. Ayers, G.W. Genetics of resistance in rutabaga to races of Plasmodiophora brassicae / G.W. Ayers, K.E. Lelacheur // Can J Plant Sci. - 1972. - Vol. 52. - P. 897900.

35. Baggett, J.R. Clubroot-resistant cabbage breeding lines Oregon 100, 123, 140, and 142 / J.R. Baggett // Hortic Sci. - 1983. - Vol. 18. - P. 112-114.

36. Baggett, J. Clubroot-resistant broccoli breeding lines Osu Cr-2 to Osu Cr-8 / J. Baggett, D. Kean // Hortscience. - 1985. - Vol. 20. - P. 784-785.

37. Bertrand, C.Y. Marker-assisted selection: an approach for precision plant breeding in the twenty-first century / C.Y. Bertrand, B.C. Collard, D.J. Mackill // Phil. Trans. R. Soc. B. - 2008. - Vol. 363. - № 1491. - P. 557 - 572.

38. Bradshaw, J.E. Transfer of resistance to clubroot (Plasmodiophora brassicae) to swedes (Brassica napus L. var. napobrassica Peterm) from B. rapa / J.E. Bradshaw, D.J. Gemmell, R.N. Wilson // Ann Appl Biol. - 1997. - Vol. 130. - P. 337-348.

39. Brown, J. Plant pathogens and plant diseases / J. Brown, H.J. Ogle. -Armidale: Rockvale Publications, 1997. - P. 49-50.

40. Brumlop, S. Applications and Potentials of Marker Assisted Selection (MAS) in Plant Breeding / S. Brumlop, M.R. Finckh // Final Report of the F+E Project

"Applications and Potentials of Smart Breeding" (FKZ 3508890020) on Behalf of the Federal Agency for Nature Conservation. - 2010. - 131 p.

41. Buczacki, S. Study of physiologic specialization in Plasmodiophora brassicae - Proposals for attempted rationalization through an international approach / S. Buczacki, H. Toxopeus, P. Mattusch, T. Johnston, G. Dixon, L. Hobolth // Transactions of the British Mycological Society. - 1975 - Vol. 65 - P. 295-303.

42. Cheng, F. BRAD, the genetics and genomics database for Brassica plants / F. Cheng, S. Liu, J. Wu, L. Fang, S. Sun, B. Liu, P. Li, W. Hua, X. Wang // BMC Plant Biol. - 2011. - Vol. 11. - 6p.

43. Chiang, B.Y. Transfer of resistance to race 2 of Plasmodiophora brassicae from Brassica napus to cabbage (B. oleracea spp. capitata). IV. A resistant 18-chromosome B1 plant and its B2 progenies / B.Y. Chiang, M.S. Chiang, W.F. Grant, R. Crête // Euphytica. - 1980. - Vol. 29. - P. 47-55.

44. Chiang, M. Inheritance of clubroot resistance in cabbage (B.oleracea var. capitata) / M. Chiang, R. Crete // Can. J. Genet. Cytol. - 1970. - P. 253-256.

45. Chiang, M.S. Diallel analysis of the inheritance of resistance to 6 of Plasmodiophora brassicae in cabbage / M.S. Chiang, R. Crête // Can J Plant Sci. -1976. - Vol. 56. - P. 865-868.

46. Chiang, M.S. Transfer of resistance to race 2 of Plasmodiophora brassicae from Brassica napus to cabbage (B. oleracea var. capitata). I. Interspecific hybridization between B. napus and B. oleracea var. capitata / M.S. Chiang, B.Y. Chiang, W.F. Grant // Euphytica. - 1977. - Vol. 26. - P. 319-336.

47. Chiang, M. S. Transfer of resistance to race 2 of Plasmodiophora brassicae from Brassica napus to cabbage (B. oleracea spp.capitata). V. The inheritance of resistance / M. S. Chiang, R. Crête // Euphytica. - 1983. - Vol. 32. - P. 479-483.

48. Chiang, M.S. Richelain: a clubroot resistant cabbage cultivar / M.S. Chiang, R. Crête // Can J Plant Sci. - 1989. - Vol. 69. - P. 337-340.

49. Cho, K.S. Pathogenic differentiation of Plasmodiophora brassicae and selection of Chinese cabbage cultivars resistant to clubroot disease in highland / K.S. Cho, Y.H. Han, J.T. Lee, E.J. Hur, T.J. Yang, J.G. Woo // Korean J Breed. - 2002. -

Vol. 34. - №. 3. - P. 168-173.

50. Colhoun, J. Clubroot disease of crucifers caused by Plasmodiophora brassicae Woron. / J. Colhoun // Phytopathology Paper. - 1958. - Vol. 3. 108p.

51. Collard, B.C. Marker-assisted selection: an approach for precision plant breeding in the twenty-first century / B.C. Collard, D.J. Mackill // Phil. Trans. R. Soc. -2008. - Vol. 363. - №. 1491. - P. 557-572.

52. Crisp, P. The exploitation of genetic resources of Brassica oleracea in breeding for resistance to clubfoot (Plasmodiophora brassicae) / P. Crisp, I. R. Crute, R. A. Sutherland , S. M. Angell, K. Bloor, H. Burgess, P. L. Gordon // Euphytica. -1989. - Vol. 42. - P. 215-226.

53. Crute, I.R. Variation in Plasmodiophora brassicae and resistance to clubroot disease in Brassicas and allied crops / I.R. Crute, P.C. Gray, S.T. Buczacki // Plant Breed Abstr. - 1980. - Vol. 50. - P. 91-104.

54. Crute, I.R. The relationship between genotypes of three Brassica species and collections of Plasmodiophora brassicae / I.R. Crute, K. Phelps, A. Barnes, S.T. Buczacki, P. Crisp // Plant Pathol. - 1983. - Vol. 32. - P. 405-420.

55. Crute, I.R. The relationship between Plasmodiophora brassicae and its hosts. The application of concepts relating to variation in interorganismal associations / I.R. Crute //Adv. Plant Pathol. - 1986. - Vol. 5. - P. 1-52

56. Diederichsen, E. The use of ovule culture in reciprocal hybridization between B. campestris L. and B. oleracea L. / E. Diederichsen, M.D. Sacristan // Plant Breed. -1994. - Vol. 113. - P. 79-82.

57. Diederichsen, E. Characterization of clubroot resistance in recent winter oilseed rape material / E. Diederichsen, U. Deppe, M.D. Sacristán // Proceedings of the 11th International Rapeseed Congress. - 2003. - Vol. 1. - P. 68-70.

58. Diederichsen, E. Genetics of clubroot resistance in Brassica napus 'Mendel' / E. Diederichsen, J. Beckmann, J. Schondelmeier, F. Dreyer // Acta Hort. - 2006. - Vol. 706. - P. 307 - 312.

59. Diederichsen, E. Status and Perspectives of Clubroot Resistance Breeding in Crucifer Crops / E. Diederichsen, M. Frauen, Enrico G. A. Linders, K. Hatakeyama,

60. Dixon, G.R. Studies of resistance in swede seed stocks to clubroot (Plasmodiophora brassicae) / G.R. Dixon, J.K. Doodson, B.W. Beeney, H. Davies, R. H. Moxon // Plant Varieties Seeds. - 1972. - Vol. 12. - P. 456-463.

61. Dixon, G.R. Methods used in Western Europe and the U.S.A. for testing Brassica seedling resistance to club root (Plasmodiophora brassicae) / G.R. Dixon // Plant Pathology. - 1976. - Vol. 25. - P 129-134.

62. Dixon, G. The susceptibility of Brassica oleracea cultivars to clubroot / G. Dixon, D. Robinson // Plant Pathol. - 1986. - Vol. 35 - P. 101-107.

63. Dixon, G.R. The biology of Plasmodiophora brassicae Wor. — A review of recent advances / G.R. Dixon // Acta Horticulturae. - 2006. Vol. 706. - P. 271-282.

64. Dixon, G. The Occurrence and Economic Impact of Plasmodiophora brassicae and Clubroot Disease / G. Dixon // Journal of Plant Growth Regulation. -2009. - Vol. 28. - P. 194-202.

65. Dixon, G.R. Calcium cyanamide - a synoptic review of an environmentally benign fertiliser which enhances soil health / G.R. Dixon // Acta Horticulturae. - 2012. - Vol. 938. - P. 211-218.

66. Dodds, P.N. Plant immunity: towards an integrated view of plant pathogen interactions / P.N. Dodds, J.P. Rathjen // Nat. Rev. Genet. - 2010. - Vol. 11. - P. 539548.

67. Donald, E.C. Pathotypes of Plasmodiophora brassicae, the cause of clubroot, in Australia / E.C. Donald, S.J. Cross, J.M. Lawrence, I.J Porter // Ann Appl Biol. -2006. - Vol. 148. - P. 239-244.

68. Donald, E.C. Integrated control of clubroot / E.C. Donald, I.J. Porter // Journal of Plant Growth Regulation. - 2009. - Vol. 28. - P. 289-303.

69. Encyclopedia of life. Species 2000 & IT IS Catalogue of Life: April 2013. URL: http://eol.org/pages/187887/names (Дата обращения: 15.01.2014).

70. Encyclopedia of life. Taxonomic Hierarchy of COL-China 2012. URL: http: //eol .org/pages/583918/overview (Дата обращения: 15.01.2014).

71. Eathington, S.R. Usefulness of marker - QTL associations in early generation selection / S.R. Eathington, J.W. Dudley, G.K. Rufener // Crop Sci. - 1997. - Vol. 37. -P. 1686-1693.

72. FAO. The State of Food and Agriculture 2003-2004. Chapter 2: What is agricultural biotechnology? URL: http://www.fao.org/docrep/006/Y5160E/y5160e07.htm#P0_0 (Дата обращения: 15.01.2014).

73. Figdore, S.S. Association of RFLP markers with trait loci affecting clubroot resistance and morphological characters in Brassica oleracea L. / S.S. Figdore, M.E. Ferreira, M.K. Slocum, P.H. Williams // Euphytica. - 1993. - Vol. 69. - P. 33-44.

74. Friberg, H. Germination of Plasmodiophora brassicae resting spores stimulated by a non-host plant / H. Friberg, J. Lagerlo, B.R. Mert // Eur. J. Plant Pathol.

- 2005. - Vol. 113. - P. 275-281.

75. Friberg, H. Effect of earthworms and incorporation of grass on Plasmodiophora brassicae / H. Friberg, J. Lagerlöf, K. Hedlund, B. Rämert // Pedobiologia. - 2008. - Vol. 52. - P. 29-39.

76. Frisch, M. Comparison of Selection Strategies for Marker-Assisted Backcrossing of a Gene / M. Frisch, M. Bohn, A.E. Melchinger // Crop Science. - 1999.

- Vol. 39. - P. 1295-1301.

77. Galbraith, D.W. Analysis of nuclear DNA content and ploidy in higher plants / D.W. Galbraith, G.M. Lambert, J. Macas, J. Dolezel // Current Protocols in Cytometry.

- 2001. - Chapter 7. - Unit. 7.6.

78. Gustafsson, M. Genetic studies on resistance to clubroot in Brassica napus / M. Gustafsson, A.S. Falt // Ann Appl Biol. - 1986. - Vol. 108. - P. 409-415.

79. Harberd, D.J. A contribution to the cyto-taxonomy Brassica (Cruciferae) ancl its allies. / D.J. Harberd // Botanical Journal of Linnean Society. - 1972. - Vol. 65. - P. 1-23.

80. Hamaoka, Y. Number of Chloroplasts in Haploids and Diploids Produced via Anther Culture in Brassica campestris / Y. Hamaoka, Y. Fujita, S. Iwai // Plant tissue culture letters. - 1991. - Vol. 8. - № 2. - P. 67 - 72.

81. Hasan, M.J. Screening of Brassica germplasm for resistance to Plasmodiophora brassicae pathotypes prevalent in Canada for broadening diversity in clubroot resistance / M.J. Hasan, S.E. Strelkov, R.J. Howard, H. Rahman // Can. J. Plant Sci. - 2012. - Vol. 92 - № 3. - P. 501-515.

82. Hata, S. Dry powder and extract of Posidonia australis Hook. F., a species of seagrass, stimulate the germination of the pathogen Plasmodiophora brassicae and control clubroot of Chinese cabbage / S. Hata, Y. Sumi, M. Ohi // J. Japan. Soc. Hort. Sci. - 2002. - Vol. 71. - P. 197- 202.

83. Hatakeyama, K. New classification of pathogenicity of Plasmodiophora brassicae field isolates in Japan based on resistance of F1 cultivars of Chinese cabbage (Brassica rapa L.) to clubroot / K. Hatakeyama, M. Fujimura, M. Ishida, T. Suzuki, T. Sato // Breeding Science. - 2004. - № 54. - P. 197-201.

84. Hatakeyama, K. Identification and Characterization of Crr1a, a Gene for Resistance to Clubroot Disease (Plasmodiophora brassicae Woronin) in Brassica rapa L. / K. Hatakeyama, K. Suwabe, R.N. Tomita, T. Kato, T. Nunome, H. Fukuoka, S. Matsumoto // PLoS ONE. - 2013. - Vol. 8. - Issue 1. - 10 p.

85. Hayashida, N. Construction of a Practical SCAR Marker Linked to Clubroot Resistance in Chinese Cabbage, with Intensive Analysis of HC352b Genes / N. Hayashida, Y. Takabatake, N. Nakazawa // J. Japan. Soc. Hort. Sci. - 2008. - Vol. 77. -P. 150 - 154.

86. Hcini, K. Estimation of Nuclear DNA Content and Determination of Ploidy Level in Tunisian Populations of Atriplex halimus L. by Flow Cytometry / K. Hcini, D.J. Walker, E. González, N. Frayssinet, E. Correal, S. Bouzid / Flow Cytometry z Recent Perspectives. - 2012. - P. 103 - 118.

87. Hirai, M. A novel locus for clubroot resistance in Brassica rapa and its linkage markers / M. Hirai, T. Harada, N. Kubo, M. Tsukada, K. Suwabe, S. Matsumoto // Theoretical Application Genetic. - 2004. - № 108. - P. 639 - 643.

88. Hirai, M. Genetic analysis of clubroot resistance in Brassica rapa / M. Hirai // Breed Sci. - 2006. - Vol. 56. - P. 223-229.

89. Hirai, M. Brassica rapa. In: Kole C (ed) Genome mapping and molecular

90. Horikoshi, N. Occurrence of clubroot in Japanese radish caused by Plasmodiophora brassicae Woronin in Fukushima / N. Horikoshi, K. Tairako // Annu Rep Soc Plant Prot North Jpn. - 2002. - Vol. 53. - P. 58-60.

91. Horiuchi, S. A simple greenhouse technique for obtaining high levels of clubroot incidence / S. Horiuchi, M. Hori // Bull. Chugoku Natl. Agric. Exp. Stn. E. -1980. - Vol. 17. - P. 33-55.

92. Hospital, F. Marker-assisted introgression of quantitative trait loci / F. Hospital, A. Charcosset // Genetics. - 1997. - Vol. 147. - P. 1469-1485.

93. Hospital, F. Selection in backcross programmes / F. Hospital // Phil. Trans. R. Soc. B. - 2005. - Vol. 360. - P. 1503 - 1511.

94. Ikegami, H. Growth of Plasmodiophora brassicae in the root and callus of Chinese cabbage / H. Ikegami, T. Ito, Y. Imuro, T. Naiki . Tainan: AVRDC, 1981. - P. 81-90.

95. Information export support web-site. Vegetable market in Japan, 2009 - 1st half of 2010. URL: http://export.by/en/?act=s_docs&mode=view&id=16118&doc=64 (Дата обращения 24.12.2013)

96. James, R.V. Inheritance and linkage studies related to resistance in Brassica campestris L. to Plasmodiophora brassicae race 6 / R.V. James, P.H. Williams, D.P. Maxwell // Eucarpia Cruciferae Newslett. - 1978. - Vol. 3. - P. 27.

97. Johnston, T.D. A new factor for resistance to club root in Brassica napus L. / T. D. Johnston // Plant Pathol. - 1970. - Vol. 59. - № 4. - P. 156-158.

98. Kageyama, K. Life cycle of Plasmodiophora brassicae / K. Kageyama, T. Asano // J. Plant Growth Regul. - 2009. - Vol. 28. - P. 203-211.

99. Kaneko, Y. Radish. In: Kole C (ed) / Y. Kaneko, C. Kimizuka-Takagi, S. W. Bang, Y. Matsuzawa // Genome mapping and molecular breeding in plants. - 2007. -Vol. 5. - P. 141-160

100. Kamei, A. QTL analysis of clubroot resistance in radish (Raphanus sativus L.) / A. Kamei, M. Tsuro, N. Kubo, M. Hirai // Proceedings of the 111th meeting of the

Japanese Society of Breeding. Breed Res. - 2007. - Vol. 9. - P. 83.

101. Kamei, A. QTL mapping of clubroot resistance in radish (Raphanus sativus L.) / A. Kamei, M. Tsuro, N. Kubo, T. Hayashi , N. Wang , T. Fujimura , M. Hirai // Theor Appl Genet. - 2010. - Vol. 120. № 5. - P. 1021 - 1027.

102. Karling, J.S. The Plasmodiophorales / J.S. Karling. - New York: Hafner, 1968a. - 144 p.

103. Karling, J.S. The Plasmodiophorales: including a complete host index, bibliography, and a description of diseases caused by species of this order / J.S. Karling. - New York: Hafner, 1968b. - 2nd edn.

104. Kasinathan, H. Influence of pH, temperature, and biofungicides on clubroot of canola / thesis, University of Guelph, H. Kasinathan. - Guelph, Ontario M.Sc., 2012.

105. Kato, T. Fine mapping of the clubroot resistance gene CRb and development of a useful selectable marker in Brassica rapa / T. Kato, K. Hatakeyama, N. Fukino, S. Matsumoto // Breeding Science. - 2013. - Vol. 63. - P. 116-124.

106. Khlestkina, E.K. SNP markers: Methods of analysis, ways of development, and comparison on an example of common wheat / E.K. Khlestkina, E.A. Salina // Russian Journal of Genetics. - 2006. - Vol. 42, - Issue 6. - P. 585-594

107. Kikuchi, M. Conversion of RAPD Markers for a Clubroot Resistance Gene of Brassica rapa into Sequence - Tagged Site (STSs) / M. Kikuchi, H. Ajisaka, Y. Kuginuki, H. Masashi // Breeding Science. - 1999. - № 49. - P. 83-88.

108. Klasse, H.J. Calcium cyanamide - an effective tool to control clubroot - a review / H.J. Klasse // Acta Horticulturae. - 1996. - Vol. 407. - P. 403-409.

109. Koressaar, T. Enhancements and modifications of primer design program Primer3 / T. Koressaar, M. Remm // Bioinformatics. - 2007. - Vol. 23. - № 10. - P. 1289-1291.

110. Kuginuki, Y. Breeding of Chinese cabbage with clubroot resistance in Japan / Y. Kuginuki, H. Yoshikawa, K. Hida // In: ISHS Symposium on Brassicas, Abstracts of 9th Crucifers genetics workshop, Lisbon. - 1994. - P. 15.

111. Kuginuki, Y. RAPD markers linked to a clubroot-resistance locus in Brassica rapa L. / Y. Kuginuki, H. Ajisaka, M. Yui // Euphytica. - 1997. - P. 149-154.

112. Kuginuki, Y. Variation in virulence of Plasmodiophora brassicae in Japan tested with clubroot-resistant cultivars of Chinese cabbage (Brassica rapa L. ssp pekinensis) / Y. Kuginuki, H. Yoshikawa, M. Hirai // European Journal of Plant Pathology. - 1999. Vol. 105. - P. 327-332.

113. Kumar, P. Potential of Molecular Markers in Plant Biotechnology / P. Kumar, V.K. Gupta, A K. Misra, D.R. Modi , B.K. Pandey // Plant Omics Journal. -2009. - Vol. 2. - № 4. - P. 141 - 162.

114. Labate, J.A. Inflorescence Identity Gene Alleles Are Poor Predictors of Inflorescence Type in Broccoli and Cauliflower / J.A. Labate, L.D. Robertson, A.M. Baldo // J. Amer. Soc. Hort. Sci. - 2006. - Vol. 131. - № 5. - P.667-673.

115. Lammerink, J. The inheritance of clubroot resistance in Brassica napus L. / J. Lammerink // N Z J Agric Res. - 1967. - Vol. 10. - P. 109-115.

116. Landry, B.S. A genetic map for Brassica oleracea based on RFLP markers detected with expressed DNA sequences and mapping of resistance gene to race 2 of Plasmodiophora brassicae / B.S. Landry, N. Hubert, R. Crete, M.S. Chiang, S.E. Lincoln, T. Etoh // Genome. - 1992. - Vol. 35. - P. 409 - 420.

117. Lorieux, M. MapDisto: fast and efficient computation of genetic linkage maps / M. Lorieux // Molecular Breeding. - 2012. - Vol. 30. - P. 1231-1235.

118. Macfarlane, I. 1952. Factors affecting the survival of Plasmodiophora brassicae Wor. in the soil and its assessment by a host test / I. Macfarlane // Annals of Applied Biology. - 1952. - Vol. 39. - P. 239-256.

119. Manzanares-Dauleux, M.J. Development of a pathotype specific SCAR marker in Plasmodiophora brassicae / M.J. Manzanares-Dauleux, P. Barret, G. Thomas // European Journal of Plant Pathology. - 2000a. Vol. 106. P. 781-787.

120. Manzanares-Dauleux, M.J. Mapping of one major gene and of QTL involved in resistance to clubroot in Brassica napus / M.J. Manzanares-Dauleux, R. Deloureme, F. Baron, G. Thomas // Theor Appl Genet. - 2000b. - Vol. 101. - P. 885 -891.

121. Matsumoto, E. Linkage analysis of RFLP markers for clubroot resistance and pigmentation in Chinese cabbage (Brassica rapa ssp. pekinensis) / E. Matsumoto,

C. Yasui, M. Ohi, M. Tsukada // Euphytica. - 1998. - Vol. 104. - P. 79-86.

122. Matsumoto, E. Behavior of DNA markers linked to a clubroot resistance gene in segregating populations of Chinese cabbage (Brassica rapa ssp. pekinensis) / E. Matsumoto, N. Hayashida, K. Sakamoto, M. Ohi // J. Japan. Soc. Hort. Sci. - 2005. -Vol. 74. - P. 367 - 373.

123. Michelmore, R.W. Identification of markers linked to disease-resistance genes by bulked segregant analysis: A rapid method to detect markers in specific genomic regions by using segregating populations / R.W. Michelmore, I. Paran, R.V. Kesseli // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1991. - Vol. 88. - P. 9828-9832.

124. Mitani, S. Effects of cyazofamid against Plasmodiophora brassicae Woronin on Chinese cabbage / S. Mitani, K. Sugimoto, H. Hayashi, Y. Takii, T. Ohshima, N. Matsuo // Pest Manag. Sci. - 2003. - Vol. 59. - P. 287-293.

125. Moriguchi, K.A. genetic map based on RAPD, RFLP, isozyme, morphological markers and QTL analysis for clubroot resistance in Brassica oleracea / K.A. Moriguchi, C. Kimizuka-Takagi, K. Ishii, K. Nomura // - Breed Sci. - 1999. -Vol. 49. - P. 257 - 265.

126. Murakami, H. Reduction of spore density of Plasmodiophora brassicae in soil by decoy plants / H. Murakami, S. Tsushima, T. Akimoto, Y. Shishido // Journal of General Plant Pathology. - 2001. - Vol. 67. - P. 85-88.

127. Murakami, H. Reduction of resting spore density of Plasmodiophora brassicae and clubroot disease severity by liming / H. Murakami, S. Tsushima, Y. Kuroyanagi, Y. Shishido // Soil Science and Plant Nutrition. - 2002. Vol. 48. - P. 685691.

128. Murray, M.G. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA / M.G. Murray, W.F. Thompson // Nucl. Acid. Res. - 1980. - Vol. 8. - P. 4321-4325.

129. Naiki, T. The effects of chemicals on developmental stages of Plasmodiophora brassicae (clubroot) / T. Naiki, G.R. Dixon / Plant Pathol. - 1987. -Vol. 36. - P. 316-327.

130. NAPS Unit list of standard primers. URL: http://download.bioon.com.cn/upload/month 0812/20081213 3e0a387c764331d0978d

RPKoJqSzhDvl. attach. pdf (Дата обращения: 15.01.2012).

131. Narasimhulu, R. Marker assisted selection in disease resistance breeding / R. Narasimhulu, N.V. Naidu, P.M. Shanthi, G. Govardhan, K.R. Rupesh, R.K. Hariprasad // J. Plant Breed. Genet. - 2013. - Vol. 1. - № 2. - P. 90-109.

132. Nguyen, T.X. Haploid plant production through anther culture in day-neutral strawberry (Fragaria x ananassa Duch) cv. Albion / T.X. Nguyen, Y. Song, S. M. Park // J. ISSAAS. - 2012. - Vol. 18. - № 1. - P. 173 - 184.

133. Nomura, K. Evaluation of F2 and F3 plants introgressed with QTL for clubroot resistance in cabbage developed by using SCAR markers / K. Nomura, Y. Minegishi, C. Kimizuka-Takagi, T. Fujioka, K. Moriguchi , R. Shishido, H. Ikehashi // Plant Breed. - 2005. - Vol. 124. - P. 371 - 375.

134. Osaki, K. Pathogenicity of Plasmodiophora brassicae populations from small, spheroid, resistant-type clubroot galls on roots of clubroot-resistant cultivars of Chinese cabbage (Brassica rapa L. subsp. pekinensis) / K. Osaki, S. Tanaka, S. Ito // J Gen Plant Pathol. - 2008. - Vol. 74. - P. 242-245.

135. Patent WO 2004/013334 A1 International application published under the patent cooperation treatry (PCT), C12N 15/82, A01H 1/100, C12N 15/11. Clubroot resistant brassica oleracea plants / Linders E. G. A. et al.; Syngenta Participations Ag; 12.02.2004.

136. Piao, Z. SCAR and CAPS mapping of CRb, a gene conferring resistance to Plasmodiophora brassicae in Chinese cabbage (Brassica rapa ssp. pekinensis) / Z. Piao, Y. Deng, S. Choi, Y. Park, Y. Lim // Theor Appl Genet. - 2004. - Vol. 108. - P. 1458-1465.

137. Piao, Z. Genetics of Clubroot Resistance in Brassica Species / Z. Piao, N. Ramchiary, Y.P. Lim // Plant Growth Regul. - 2009. - Vol. 28. - P. 252-264.

138. Proudfoot, K. Breeding crucifers for clubroot resistance / K. Proudfoot // Proc. Can. Phytopath. Soc. - 1976. - Vol. 43. - P. 37-38.

139. Qin, X. Chloroplast number in guard cells as ploidy indicator of in vitro-grown androgenic pepper plantlets / X. Qin, G.L. Rotino // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. - 1995. - Vol. 41. - Issue 2. - P. 145 149.

140. Ribaut, J.M. Marker-assisted selection: new tools and strategies / J.M. Ribaut, D. Hoisington // Trends Plant Sci. - 1998. - Vol. 3. - P. 236-239.

141. Rocherieus, J. Isolate-specific and broadspectrum QTL are involved in the control of clubroot in Brassica oleracea / J. Rocherieus, P. Glory, A. Giboulot, S. Boury, G. Barbeyron, G. Thomas, M.J. Manzanares-Dauleux // Theor Appl Genet. -2004. - Vol. 108. - P. 1555 - 1563

142. Rowe, R.C. Evaluation of radish cultivars for resistance to clubroot (Plasmodiophora brassicae) race 6 for midwestern / R.C. Rowe // US. Plant Dis. -1980. - Vol. 64. - P. 462-464.

143. Saito, M. Fine mapping of the clubroot resistance gene, Crr3, in Brassica rapa / M. Saito, N. Kubo, S. Matsumoto, K. Suwabe, M. Tsukada, et al. Theor Appl Genet. - 2006. - Vol. 114. - P. 81-91.

144. Sakamoto, K. Mapping of Isolate-Specific QTLs for Clubroot Resistance in Chinese Cabbage (Brassica rapa L. ssp. pekinensis) / K. Sakamoto, A. Saito, G. Taguchi, N. Hayashida, E. Matsumoto // Theor. Appl. Genet. - 2008. - Vol. 117. - P. 759-767.

145. Salina, E. Microsatellite monitoring of recombination around the Vrn-B1 locus of wheat during early backcross breeding / E. Salina, O. Dobrovolskaya, T. Efremova, I. Leonova, M.S. Roder // Plant Breed. - 2003. - Vol. 122. - P. 116-119.

146. Sari, N. Comparison of ploidy level screening methods in watermelon: Citrullus lanatus Thunb. Matsum. and Nakai / N. Sari, K. Abak, M. Pitrat // Scientia Horticulturae. - 1999. - Vol. 82. - P. 265 - 277.

147. Savitsky, H. Effectiveness of selection for tetraploid plants in Co-generation on the basis of the number of chloroplasts in stomata / H. Savitsky // Journal of the A. S. S. B. T. - 1966. - Vol.13. - № 8. - P. 655-661.

148. Seaman, W. A new race of Plasmodiophora brassicae affecting "Badger Shipper" / W. Seaman, J. Walker, R. Larson // Phytopathology. - 1963. - Vol. 53. - P. 1426-1429.

149. Singsit, C. Chloroplast density in guard cells of leaves of anther-derived potato plants grown in vitro and in vivo / C. Singsit, R.E. Veilleux // HortSci. - 1991. -

Vol. 26. № 5. - P. 291 - 294.

150. Singsit, C. Rapid estimation of ploidy levels in in vitro-regenerated interspecific Arachis hybrids and fertile triploids / C. Singsit, P. Ozias-Akins // Euphytica. - 1992. - Vol. 64. - P. 183 - 188.

151. Smith, J.E. Host - parasite physiology in relation to clubroot disease of crucifers/ J.E. Smith / PhD. Thesis, Perdue Univ. Michigon. 1955.

152. Soroka, A.I. Differentiation of haploid and dihaploid rape plants at the cytological and morphological levels / A.I. Soroka // Cytology and Genetics. - 2013. -Vol. 47. Issue 2. - P. 88-92.

153. Strelkov, S.E. Characterization of Plasmodiophora brassicae populations from Alberta, Canada / S.E. Strelkov, J.P. Tewari, E. Smith-Degenhardt // Can. J. Plant Pathol. - 2006. - Vol. 28, - P. 467-474.

154. Sun, R. The Vegetable Seed Industry in China / R. Sun // APSA country report. - 2003. - № 29. - 10p.

155. Suwabe, K. Identification of two loci for resistance to clubroot (Plasmodiophora brassicae Woronin) in Brassica rapa L / K. Suwabe, H. Tsukazaki, H. Iketani, K. Hatakeyama, M. Fujimura, T. Nunome, H. Fukuoka, S. Matsumoto, M. Hirai // Theoretical Application Genetic. - 2003. - № 107. - P. 997 - 1002.

156. Suwabe, K. Simple sequence repeat-based comparative genomics between Brassica rapa and Arabidopsis thaliana: the genetic origin of clubroot resistance / K. Suwabe, H. Tsukazaki, H. Iketani and others// Genetics. - 2006. - Vol. 173. - P. 309319.

157. Suwabe, K. Microstructure of the Brassica rapa genome segment that are homeologous to resistance gene cluster in Arabidopsis chromosome 4 / K. Suwabe, G. Suzuki, M. Kondo, R. N. Tomita, Y. Mukai, et al. // Breeding Science. - 2012. - Vol. 62. - P. 170 - 177.

158. Suzuki, K. Biological mode of action of fluazinam, a new fungicide for Chinese cabbage clubroot / K. Suzuki, K. Sugimoto, H. Hayashi, T. Komyoji // Phytopathol. Soc. Jpn. - 1995. - Vol. 61. - P. 395-398.

159. Takahashi, Y. Improvement of microspore culture method for multiple

samples in Brassica / Y. Takahashi, S. Yokoi, Y. Takahata // Breeding Science. - 2011. - Vol. 61. - P. 96-98.

160. Tanaka, S. Biological mode of action of the fungicide, flusulfamide, against Plasmodiophora brassicae (clubroot) / S. Tanaka, S.I. Kochi, H. Kunita, S.I. Ito, M. Kameya-Iwaki // Eur. J. Plant Pathol. - 1999. - Vol. 105. - P. 577-584.

161. Tjallingii, F. Testing clubroot resistance in turnips in Netherlands and the physiologic specialization of Plasmodiophora brassicae / F. Tjallingii // Euphytica. -1965. - Vol. 14. - P. 1-22.

162. Tommerup, I.C. The lifecycle of Plasmodiophora brassicae Woron / I.C. Tommerup, D.S. Ingram // In. Brassica tissue cultures and in intact roots. New Phytol. -1971. - Vol 70. - P. 327-332.

163. Toxopeus, H. Clubroot resistance in turnip II. The slurry screening method and clubroot races in the Netherlands / H. Toxopeus, A.M.P. Janssen // Euphytica. -1975. - Vol. 24. - P. 751-755.

164. Toxopeus, H. Cultivar group classification of Brassica rapa L. Update 1988 / H. Toxopeus, E. H. Oost, H. Yamagishi, R. Prescott-Alen. - 1988 // Cruciferae newsletter. - 1988. - №. 13. - P. 9-11.

165. USDA. Korea - Republic of - Cabbage Market Trands, 2010. URL: http://gain.fas.usda.gov/Recent%20GAIN%20Publications/Cabbage%20Market%20Tre nds Seoul Korea%20-%20Republic%20of 11-5-2010.pdf (Дата обращения 24.12.2013).

166. Voorrips, R. Clubroot in the cole crops: the interaction between Plasmodiophora brassicae and Brassica oleracea / R. Voorrips // Ph.D Thesis Wageningen. - 1996. - P. 118.

167. Voorrips, R.E. Genetic analysis of resistance to clubroot (Plasmodiophora brassicae) in Brassica oleracea / R.E. Voorrips, H.J. Kanne / Euphytica. - 1997. - Vol. 93. - P. 31 - 39, 41-48.

168. Wallenhammar, A.C. Prevalence of Plasmodiophora brassicae in a spring oilseed rape growing area in central Sweden and factors influencing soil infestation levels / A.C. Wallenhammar // Plant Pathol. - 1996. - Vol. 45. - P. 710-719.

169. Wallenhammar, A.C. Agronomic performance of partly clubroot-resistant spring oilseed turnip rape lines / A.C. Wallenhammar, L. Johnsson, B. Gerhardson // J Phytopathol. - 2000. - Vol. 148. - P. 495-499.

170. Wang, X. The genome of the mesopolyploid crop species Brassica rapa / X. Wang // Nature Genetics. - 2011. - Vol 43. - P. 1035-1039. (http://www.nature.com/nchina/2011/111005/full/nchina.2011.77.html) (Дата обращения: 15.01.2013).

171. Wang, Y. A sequence-based genetic linkage map as a reference for Brassica rapa pseudochromosome assembly / Y. Wang, S. Sun, B. Liu, H. Wang, J. Deng, Y. Liao, Q. Wang, F. Cheng, X. Wang, J. Wu // BMC Genomics. - 2011. - Vol. 12. - 9p.

172. Webb, P.C. Zoosporic believed to those of Plasmodiophora brassicae in the root hairs of non-cruciferous plants / P.C. Webb // Nature. - 1949. - Vol. 163. - P. 608.

173. Webster, M.A. Calcium, pH and inoculum concentration influencing colonisation by Plasmodiophora brassicae / M.A. Webster, G.R. Dixon // Mycological Research. - 1991. - Vol. 95. - P. 64-73.

174. Weisaeth, G. Hodelkalsortene 'Respla' og 'Resista' foredlinger med klumprotresistens / G. Weisaeth // Gartneryrket. - 1977. - Vol. 67. - P. 937-939.

175. Werner, S. Genetic mapping of clubroot resistance genes in oilseed rape / S. Werner, E. Diederichsen, M. Frauen, J. Schondelmaier, C. Jung // Theor Appl Genet. -2008. - Vol. 116. - P. 363 - 372.

176. Williams, P.H. A system for the determination of races of Plasmodiophora brassicae that infect cabbage and rutabaga / P.H. Williams // Phytopathology. - 1966. -Vol. 56. - P. 624-626.

177. Winarto, B. Comparison of Ploidy Level Screening Methods in Regenerants Derived from Anther Culture of Anthurium / B. Winarto, N.A. Mattjik, A. Purwito, B. Marwoto. - 2009. - URL: http://repository.ipb.ac.id/handle/123456789/33065 (Дата обращения: 20.01.2013).

178. Wit, F. Clubroot resistance in turnips (Brassica campestris L.). I. Physiological races of the parasite and their identification in mixtures / F. Wit, M. Van de Weg // Euphytica. -1964. - Vol. 13. - P. 9 - 18.

179. Woo, J.G. Estimation of the ploidy of anther derived chinese cabbage brassica campestris ssp. pekinensis by the number of chloroplasts in the guard cells / J.G. Woo, H.D. Kim, B.S. Oh // Research Reports Of The Rural Development Administration. - 1991. - Vol. 33. - P. 35 - 39.

180. Yoshikawa, H. Breeding for clubroot resistance in Chinese cabbage / H. Yoshikawa // In: Talekar NS, Griggs TD (eds), Chinese cabbage. In: Proceedings of the 1st international symposium, Tsukuba, Japan. - 1981. - P. 405-413.

181. Yoshikawa, H. Studies on breeding of clubroot resistance in cole crops / H. Yoshikawa // Bull Natl Res Inst Veg Ornam Plants Tea Jpn. - 1993. - Ser A 7:1-165

182. Yuan, S. Study on the Relationship Between the Ploidy Level of Microspore-Derived Plants and the Number of Chloroplast in Stomatal Guard Cells in Brassica oleracea / S. Yuan, Y. Liu, Z. Fang, L. Yang, M. Zhuang, Y. Zhang, P. Sun // Agricultural Sciences in China. - 2009. - Vol. 8. - P. 939 - 946.

183. Zhang, Y. Improved production of doubled haploids in Brassica rapa through microspore culture / Zhang, A. Wang, Y. Liu, Y. Wang, H. Feng // Plant Breeding. - 2012. - Vol. 131. - P. 164-169.

Приложение 1. Список ББЯ маркеров, использованных для поиска молекулярных маркеров и генетического

картирования гена устойчивости к киле

П.п. Наименование маркера Последовательности Группа сцепления Продукты ПЦР, п.н.

1 БКМБ-206 лттлалстстттслллллсасллла Я3 251

алталсллсллстсттсстстаттл

2 БКМБ-218 сслллтлтаттттсатлллаллаал Я3 301

стсслттлстлллслатттссслтс

3 БКМБ-125 аттстслллааалллссалллллсл Я6, Я4 109 / 156

алаттаасслалалтттлслтасат

4 БКМБ-261 слсстатслтатсттсттстаа Я6 210

ттатстттаттттсттстслттса

5 БКМБ-166 ллатслстлсттсслтталшллсс Я5 180

алталттаатаатттаоаттт

6 БКМБ-007 лллттатттстсттсссслт Я5 151

ататтлаааластаалаллт

7 БЯМ8-129 талааттлалслтаасастасттас Я7 207 / 274

ттталтслттатаатсасалаттса

8 БКМБ-036 аатсслттсстттттаслтста Я7 134

слтаасллаоаатллслллслт

9 БКМБ-154 лтатлалссаллаллллсллллтсл Я9 219

ааллстттсслалсттатлстсстс

тслсслсслатлтсттсллсллтсл

П.п. Наименование маркера Последовательности 5' - 3' Группа сцепления Продукты ПЦР, п.н.

10 БЯМБ-ОбО АассАСАаАссшААтаттттшса Я9 256 / 269 / 277

ТТСССТСОАТСАвСТТСТаСААСТС

11 БКМБ-175 атаАТАстаАААаааАОАаАатаАа Я1 233

ААТССТСАТОАОСАААТСААСТААС

12 БКМБ-070 АООССОАОООТТАОАСААААОАОАТ Я8 252

саттааоАаасттстттАатсАстт

13 БЯМБ-Ш АТСАААССАОСАОТТСТАТАССААТ Я8 202 / 234

ТСТСТТТСТОАСССОААОААОАС

14 БКМБ-215 ТАТСОТССАСАТОААСААТТСАТАС Я2 232

ОААааттттсстААТАтатсааАтт

15 БКМБ-026 ССТАТССТСООАСТААТСАО Я2 123

СТТОАТОАОТТТСАСАТТаС

16 БКМБ-021 АССАААААОАССААААСАААОААОА Я10

ААОАСАСТОССТСТТСТСССТСАСО

17 БКМБ-244 атАаАатАстттасаАшсААааАт Я10 252

АаОАТТСТТТАСТСТСТОСАОСТТТ

18 БКМБ-195 ААТАСТТТСТОААОТТОТССаСТАА Я4 264

ААССТАСОСААОАТОСТТСТАСТТ

19 БКМБ-276 ОАССаТТТТаСАТТТТААОАаСАТТ Я4 217

ТСАССАССАОТАТСТТСААСААТСА

Приложение 2: RAPD праймеры, использованные для картирования гена устойчивости (NAPS unit standard primers)

П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3')

1 116. TAC GAT GAC G 19 248. GAG TAA GCG G 37 337. TCC CGA ACC G 55 507. AGA CGT ACT C

2 119. ATT GGG CGA T 20 254. CGC CCC CAT T 38 348. CAC GGC TGC G 56 509. ACA GAG ACT G

3 123. GTC TTT CAG G 21 256. TGC AGT CGA A 39 352. CAC AAC GGG T 57 517. GGT CGC AGC T

4 146. ATG TGT TGC G 22 258. CAG GAT ACC A 40 362. CCG CCT TAC A 58 519. ACC GGA CAC T

5 153. GAG TCA CGA G 23 266. CCA CTC ACC G 41 370. TCA GCC AGC G 59 530. AAT AAC CGC C

6 159. GAG CCC GTA G 24 268. AGG CCG CTT A 42 372. CCC ACT GAC G 60 531. GCT CAC TGT T

7 167. CCA ATT CAC G 25 269. CCA GTT CGC C 43 381. ATG AGT CCT G 61 533. GCA TCT ACG C

8 168. CTA GAT GTG C 26 270. TGC GCG CGG G 44 402. CCC GCC GTT G 62 536. CAC CCC CTG C

9 169. ACG ACG TAG G 27 295. CGC GTT CCT G 45 408. CCG TCT CTT T 63 550. GTC GCC TGA G

10 181. ATG ACG ACG G 28 297. GCG CAT TAG A 46 424. ACG GAG GTT C 64 554. TCA TCC AGG G

11 184. CAA ACG GCA C 29 299. TGT CAG CGG T 47 427. GTA ATC GAC G 65 561. CAT AAC GAC C

12 186. GTG CGT CGC T 30 320. CCG GCA TAG A 48 429. AAA CCT GGA C 66 564. CGG CGT TAC G

13 190. AGA ATC CGC C 31 322. GCC GCT ACT A 49 460. ACT GAC CGG C 67 570. GGC CGC TAA T

14 193. TGC TGG CTT T 32 324. ACA GGG AAC G 50 479. CTC ATA CGC G 68 579. TGG AAT CGT G

15 195. GAT CTC AGC G 33 327. ATA CGG CGT C 51 485. AGA ATA GGG C 69 580. GCG ATA GTC C

16 203. CAC GGC GAG T 34 330. GGT GGT TTC C 52 493. CCG AAT CAC T 70 586. CCG GTT CCA G

17 213. CAG CGA ACT A 35 333. GAA TGC GAC G 53 499. GGC CGA TGA T 71 587. GCT ACT AAC C

18 225. CGA CTC AC A G 36 336. GCC ACG GAG A 54 504. ACC GTG CGT C 72 589. GAC GGA GGT C

П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3')

73 590. CCG GCA TGT T 91 E-17. CTA CTG CCG T 109 309. ACA TCC TGC G 127 332. AAC GCG TAG A

74 600. GAA GAA CCG C 92 F-07. CCG ATA TCC C 110 310. GAG CCA GAA G 128 334. ATG GCA AAG C

75 631. GGC TTA ACC G 93 G-09. CTG ACG TCA C 111 311. GGT AAC CGT A 129 335. TGG ACC ACC C

76 667. CGC AGA AAT C 94 G-10. AGG GCC GTC T 112 312. ACG GCG TCA C 130 338. CTG TGG CGG T

77 677. TCT CAG GAC A 95 G-12. CAG CTC ACG A 113 313. ACG GCA GTG G 131 339. CTC ACT TGG G

78 A-06. GGT CCC TGA C 96 J-01. CCC GGC ATA A 114 314. ACT TCC TCC A 132 340. GAG AGG CAC C

79 A-08. GTG ACG TAG G 97 J-08. CAT ACC GTG G 115 315. GGT CTC CTA G 133 341. CTG GGG CCG T

80 A-09. GGG TAA CGC C 98 X-04. CCG CTA CCG A 116 316. CCT CAC CTG T 134 342. GAG ATC CCT C

81 A-11. CAA TCG CCG T 99 Y-09. AGC AGC GCA C 117 317. CTA GGG GCT G 135 343. TGT TAG GCT C

82 A-16. AGC CAG CGA A 100 Y-17. GAC GTG GTG A 118 318. CGG AGA GCG A 136 344. TGT TAG GCA C

83 B-05. TGC GCC CTT C 101 301. CGG TGG CGA A 119 319. GTG GCC GCG C 137 345. GCG TGA CCC G

84 B-08. GTC CAC ACG G 102 302. CGG CCC ACG T 120 321. ATC TAG GGA C 138 346. TAG GCG AAC G

84 B-13. TTC CCC CGC T 103 303. GCG GGA GAC C 121 323. GAC ATC TCG C 139 347. TTG CTT GGC G

86 C-04. CCG CAT CTA C 104 304. AGT CCT CGC C 122 325. TCT AAG CTC G 140 349. GGA GCC CCC T

87 D-12. CAC CGT ATC C 105 305. GCT GGT ACC C 123 326. CGG ATC TCT A 141 350. TGA CGC GCT C

88 E-08. TCA CCA CGG T 106 306. GTC CTC GTA G 124 328. ATG GCC TTA C 142 351. CTC CCG GTG G

89 E-09. CTT CAC CCG A 107 307. CGC ATT TGC A 125 329. GCG AAC CTC C 143 353. TGG GCT CGC T

90 E-12. TTA TCG CCC C 108 308. AGC GGC TAG G 126 331. GCC TAG TCA C 144 354. CTA GAG GCC G

П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3')

145 355. GTA TGG GGC T 163 376. CAG GAC ATC G 181 395. TCA CTT GAG G 199 415. GTT CCA GCA G

146 356. GCG GCC CTC T 164 377. GAC GGA AGA G 182 396. GAA TGC GAG G 200 416. GTG TTT CCG G

147 357. AGG CCA AAT G 165 378. GAC AAC AGG A 183 397. GGG CTG TGC C 201 417. GAC AGG CCA A

148 358. GGT CAG GCC C 166 379. GGG CTA GGG T 184 398. CAG TGC TCT T 202 418. GAG GAA GCT T

149 359. AGG CAG ACC T 167 380. AGG AGT GAG A 185 399. TTG CTG GGC G 203 419. TAC GTG CCC G

150 360. CTC TCC AGG C 168 382. ATA CAC CAG C 186 400. GCC CTG ATA T 204 420. GCA GGG TTC G

151 361. GCG AGG TGC T 169 383. GAG GCG CTG C 187 401. TAG GAC AGT C 205 421. ACG GCC CAC C

152 363. ATG ACG TTG A 170 384. TGC GCC GCT A 188 403. GGA AGG CTG T 206 422. CAC CTG CGG G

153 364. GGC TCT CGC G 171 385. ACC GGG AAC G 189 404. TCT CTA CGA C 207 423. GGG TCT CGA A

154 365. TAG ACA GAG G 172 386. TGT AAG CTC G 190 405. CTC TCG TGC G 208 425. CGT CGG GCC T

155 366. CCT GAT TGC C 173 387. CGC TGT CGC C 191 406. GCC ACC TCC T 209 426. TCT CCC GGT G

156 367. ACC TTT GGC T 174 388. CGG TCG CGT C 192 407. TGG TCC TGG C 210 428. GGC TGC GGT A

157 368. ACT TGT GCG G 175 389. CGC CCG CAG T 193 409. TAG GCG GCG G 211 430. AGT CGG CAC C

158 369. GCG CAT AGC A 176 390. TCA CTC AGA G 194 410. CGT CAC AGA G 212 431. CTG CGG GTC A

159 371. TCT CGA TTG C 177 391. GCG AAC CTC G 195 411. GAG GCC CGT T 213 432. AGC GTC GAC T

160 373. CTG AGG AGT G 178 392. CCT GGT GGT T 196 412. TGC GCC GGT G 214 433. TCA CGT GCC T

161 374. GGT CAA CCC T 179 393. TTC CAT GCC T 197 413. GAG GCG GCG A 215 434. TCG CTA GTC C

162 375. CCG GAC ACG A 180 394. TCA CGC AGT T 198 414. AAG GCA CCA G 216 435. CTA GTA GGG G

П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (S' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (5' - 3') П.п. Наименование и Последовательности маркера (S' - 3')

217 436. GAG GGG GCC A 235 454. GCT TAC GGC A 253 473. ATC CCC AAG A 271 494. TGA TGC TGT C

218 437. AGT CCG CTG C 236 455. AGC AAG CCG G 254 474. AGG CGG GAA C 272 495. CTT TCC TTC C

219 438. AGA CGG CCG G 237 456. GCG GAG GTC C 255 475. CCA GCG TAT T 273 496. CCT TTC AAG G

220 439. GCC CCT TGA C 238 457. CGA CGC CCT G 256 476. TTG AGG CCC T 274 497. GCA TAG TGC G

221 440. CTG TCG AAC C 239 458. CTC ACA TGC C 257 477. TGT TGT GCC C 275 498. GAC AGT CCT G

222 441. CTG CGT TCT T 240 459. GCG TCG AGG G 258 478. CGA GCT GGT C 276 500. TTG CGT CAT G

223 442. CTA CTC GGT T 241 461. CCC GTA TGT C 259 480. GGA GGG GGG A 277 501. CGG ATA TAC C

224 443. TGA TTG CTC G 242 462. CAT AGC GGC A 260 481. GTA ATT GCG C 278 502. GCA TGG TAG C

225 444. GCA GCC CCA T 243 463. AGG CGG AAG C 261 482. CTA TAG GCC G 279 503. ATC GTC CAA C

226 445. TAG CAG CTT G 244 464. CAC AAG CCT G 262 483. GCA CTA AGA C 280 505. CCC TTT ACA C

227 446. GCC AGC GTT C 245 465. GGT CAG GGC T 263 484. CTG GCA AGG A 281 506. CCT TTC CCG A

228 447. CAG GCT CTA G 246 466. TTC TTA GCG G 264 486. CCA GCA TCA G 282 508. CGG GGC GGA A

229 448. GTT GTG CCT G 247 467. AGC ACG GGC A 265 487. GTG GCT AGG T 283 510. CGC ATC TCT T

230 449. GAG GTT CAA C 248 468. ACG GAA GCG C 266 488. TTC GCT TCT C 284 511. GAA TGG TGA G

231 450. CGG AGA GCC C 249 469. CTC CAG CAA A 267 489. CGC ACG CAC A 285 512. GGG TGG ACA T

232 451. CTA ATC TCG C 250 470. AGG AGC TGG G 268 490. AGT CGA CCT T 286 513. TAT ACG ACC C

233 452. CTA ATC ACG G 251 471. CCG ACC GGA A 269 491. TCC TGT CAA G

234 453. AGT ACA AGG G 252 472. AGG CGT GCA A 270 492. GTG ACT GCT C

устойчивости к киле

П.н. Наименование маркера Последовательность 5'-3' Продукт ПЦР, п.н. Хромосома

1 БгШ101201 лсл еле лло ллл лтс еле отс 140 А01

лее тсл лло тсс ллс лтт тс

2 БгШ101235 сел сел тлл олл слл лтт сс 98

тлл слс оот ото слт слл

3 БгГО10277 лол лло ооо ттт лее отт тл 93

лст ооо стт слт стл тлл со

4 БгГО10279 сол лол лол лтс отт лсл сл 81

лто осс слл слл ссл тлт лс

5 БгГО10297 олс лсс ттт оот ттт олс лт 96

тот ттс лтт ссо тсл слт ло

6 БгГО101169 ллл ссс тло сол ттл сло то 134 л02

ттс сол тст ост лтт ттс тс

7 БгШ101179 оло лол ооо лст олл сто о 93

ост тсс ллл слт слс сот

8 БгШ101197 лсл сот лсс лст тоо ттл тло т 123

тлс оол ттс тст стс тсл сс

9 БгГО10199 сто отт ооо ттт тот отт лт 147

осс лто слл ллт лст лсс лс

10 БгГО10201 оот тот лсл ост ттт стт оо 159

отс ллл ттс лсл лоо олс лл

11 БгГО10031 сот тст ото олл тол ттт ло 168 л03

лтс ллт ссс слт слт лсл тс

12 БгГО10037 тлл ллс лтс ото лот сот сл 168

олс лсл тсс ллс лсс ттс тт

13 БгГО10041 лоо ссл тот тло ссл ттл с 164

осл сст олт тлс ттс ллл ос

14 БгГО10047 стс лсл тоо осл лст ттл тт 144

оло тол тст оло тсо ллл оо

15 БгГО10645 осл оло олл ллс ллт сло лс 87 л04

лло сот сол стт олл лтс т

16 БгГО10689 ттт ооо тсс лтт оот лол тл 88

тоо тлл лто сло ллт ото ло

17 БгГО10723 ост ттс стс ото тсл ттл ол 100

стт тсс оло ттт ссл тло то

18 БгГО10747 тсл ллс лот олс ллл стс сл 98

отс олт ттл стт тст тос от

19 БгГО10757 ттт ттс лсс слс тлл лсс с 86

сст слт сол тоо отл лол л

20 БгГО10123 лос тлл лол олл лоо олл оо 166 л05

лол ллл олл лтт оло лоо оо

П.п. Наименован ие маркера Последовательность 5'-3' Продукт ПЦР, п.н. Хромосома

21 БгГО10131 АвС АТС СТв ТТТ САв АвТ вТ 167 А05

ТТС ССС АвТ ААА ТАА ССТ СА

22 БгГО10133 СТА АТТ ТСТ ввС АТА ССТ вв 147

вАв вСТ вАТ вАТ вТС ТТв АТ

23 БгГО10141 вАА АТТ ТАС АвА вАв АвС ТТС в 163

ССА ААв АвА ТТТ ТСв ввА ТА

24 БгГО10383 СвТ АТС ТТТ вТТ ТвА ААв вв 90

АСС АТС ТСА вТв вТС ТТТ Тв

25 БгШ10511 САС ААв СТА ААв САТ АТв вА 100

САТ ТАС АСТ Твв вТС АТС АА

26 БгГО10515 САС Авв ТТТ вТв вАА ввА ТА 99

АСв ТСТ ТСС ТАА ТТв ССТ ТТ

27 БгГО90253 СТТ АСА ввА ТвА АвС ТСв вС 166

ввТ ССС ААТ ввА АТС АТС АА

28 БгГО10971 ТСА вТТ ТТв ТАА Овв ввТ ТА 133

вАТ ТТС ТТв ААв ТвС САТ вТ

29 БгГО90494 ААТ СвТ ТвС АТТ вТА АвС СТв 192

АСв ССТ САС САА ААв СТА АА

30 БгШ101163 САА СТС АТС АТв Твв ТТС АС 100 А06

ввС Твв АСА АвТ ААв АТА САА

31 БгГО10251 Твв ТТТ ввТ САв вТТ ТАТ ТС 100

вТС ТСА САТ ввТ ТвС ТАА СТТ

32 БгГО10253 ввв ТТТ ТвА Авв СТТ АСТ СТ 94

ТТС АСС ТСТ СТТ СТв СТТ ТС

33 БгГО10259 ввА АТА ААС АТв САв Авв АА 88

ввА ввА АТв АТв ТвА вТв ТТ

34 БгГО10371 СТв АТв СвА вАА вАТ ААТ вС 92

СТв ААС САС АТТ вАв АТТ АвТ в

35 БгШ101077 вТТ вАТ вСА АСС ААТ ААС Тв 140 А07

ТвА вАв Твв СТА ТАС АвС ТТ

36 БгШ101105 ССА АТА АСА СТС ТТв вАС СТ 116

АвА вАА ТАТ Твв ТСС ввА ТТ

37 БгГО10113 вТТ вАТ ТТС тсв втт втв ТТ 155

ТСТ ТвТ ААв ТвТ ТСА вАТ ввТ в

38 БгШ101185 АТА Авв ввА ССС ТвТ ААА АА 121

ТТС ТвТ САА СТА АСА ТСС СА

39 БгГО10119 СТв АТА вАС Твв ТТТ ввв ТТ 159

САв АвА ТТС АвТ АТв ТвС вА

40 БгГО10267 ААТ СТв ТТС ТТТ СТв ввА вА 91 А08

САА вАА СТТ ТСА АвА СвТ вв

41 БгГО10269 втт ТвТ Твв ТТв вТТ ТТА вс 91

ААв АТв ТСА ТвС ААА вСА вТ

42 БгГО10275 АвА ССА ССв СТА вТТ ААА АА 95

АТС ТТС САА Авв вАв АвА Ав