Молекулярно-генетический анализ вакцинных и вирулентных штаммов пестивирусов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Южаков, Антон Геннадиевич

• Южаков, Антон Геннадиевич
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Южаков, Антон Геннадиевич

1. Список сокращений

2. Введение

3. Обзор литературы

3.1. Общая характеристика и систематическое положение представителей рода Ревйу^ив

3.2. Клинические признаки и патогенез классической чумы свиней

3.3. Клинические признаки и патогенез вирусной диареи крупного рогатого скота

3.4. Эпизоотологические данные заболеваний, вызываемых вирусами рода Ревйу^ив

3.4.1. Эпизоотологические данные по классической чуме свиней

3.4.2. Эпизоотологические данные по вирусной диарее крупного рогатого скота

3.5. Морфология и молекулярно-биологическая характеристика представителей рода Ревйу^ив

3.5.1. Строение вириона представителей рода Резйу1гиз

3.5.2. Структура генома представителей рода Реэйуииз

3.6. Генетическая вариабельность пестивирусов и филогенетический анализ

3.6.1. Филогенетический анализ геномов вирусов

3.6.2. Генетическая вариабельность вируса классической чумы свиней

3.6.3. Генетическая вариабельность вируса вирусной диареи крупного рогатого скота

3.7. Диагностика и специфическая профилактика заболеваний, вызываемых пестивирусами 33 3.7.1. Диагностика заболеваний, вызываемых пестивирусами

3.7.2. Специфическая профилактика классической чумы свиней

3.7.3. Специфическая профилактика вирусной диареи крупного рогатого скота 38 3.8. Заключение по обзору литературы

4. Собственные исследования

4.1. Материалы и методы

4.2. Материалы

4.2.1. Штаммы и изоляты вирусов классической чумы свиней и диареи крупного рогатого скота

4.2.1.1. Штаммы и изоляты вируса диареи крупного рогатого скота

4.2.1.2. Штаммы и изоляты вируса классической чумы свиней

4.2.1.3. Анализируемые штаммы из базы данных вепБапк

4.2.2. Химические реагенты

4.2.3. Реагенты и наборы для проведения ПНР и секвенирования

4.2.4. Оборудование

4.2.5. Расходные материалы и лабораторная посуда

4.3. Методы

4.3.1. Реакция иммунофлуоресценции

4.3.2. Выделение вирусной РНК

4.3.3. Проведение «гнездовой» ПЦР с обратной транскрипцией для выявления РНК вирусов классической чумы свиней и диареи крупного рогатого скота

4.3.3.1. Праймеры и режимы проведения ПЦР для наработки трёх фрагментов генома вируса диареи крупного рогатого скота

4.3.3.2. Праймеры и режимы проведения ПЦР для наработки трёх фрагментов генома вируса классической чумы свиней

4.3.4. Электрофорез ДНК в агарозном геле

4.3.5. Определение нуклеотидной последовательности фрагментов генома

4.3.6. Компьютерный анализ полученных первичных структур и построение филогенетических дендрограмм

5. Результаты собственных исследований

5.1. Разработка систем праймеров для анализа методом ПЦР и последующего секвенирования трёх участков генома вируса диареи крупного рогатого скота, используемых для филогенетического анализа

5.2. Филогенетическая характеристика полевых изолятов вируса диареи крупного рогатого скота, циркулирующих на территории России

5.3. Филогенетическая характеристика полевых изолятов вируса классической чумы свиней, циркулировавших на территории бывшего СССР и России

5.4. Анализ генома вакцинного штамма ЛК-К, вируса классической чумы свиней

6. Обсуяедение

7. Выводы

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Южаков, Антон Геннадиевич

7. ВЫВОДЫ

1. В результате проведения филогенетического анализа изолятов вируса КЧС за период с 1980 по 2007 годы и филогенетического анализа изолятов вируса диареи КРС, выделенных в 2006 и 2007 годах, на территории Российской Федерации установлена циркуляция вирусов КЧС, относящихся к генетическим группам 1 (подгруппы 1.1 и 1.2) и 2 (подгруппы 2.1, 2.2 и 2.3), и циркуляция вируса диареи КРС первого и второго генотипов.

2. Установлено, что в 80-е годы прошлого столетия доминировал вирус подгрупп 1.2, 2.3, 2.2 и единичные случаи - 1.1 и 2.1; в 90-е годы и до 2002 г. - подгрупп 1.1 и 2.3; в 2002-2007 гг. - подгруппы 2.3. Таким образом, показано постепенное замещение циркулирующих групп вируса КЧС в Российской Федерации.

3. Впервые на территории Российской Федерации выявлен факт циркуляции 2-го генотипа вируса диареи КРС.

4. Определена нуклеотидная последовательность вакцинного штамма ЛК-К вируса классической чумы свиней. Данный штамм принадлежит к генетической группе 1, подгруппе 1.1.

5. По данным проведенного филогенетического анализа не обнаружено ни одного полевого изолята, эволюционно близкого к вакцинным штаммам КС и ЛК-ВНИИВВиМ.

6. Разработан комплект реагентов для штаммовой дифференциации вируса классической чумы свиней с помощью ПЦР и секвенирования фрагментов генов Е2, И85В и 5'-нетранслируемой области, утверждены методические рекомендации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Южаков, Антон Геннадиевич, 2009 год

1. Безбородова C.B. Усовершенствование генетических методов лабораторной диагностики классической чумы свиней // Автореф. Канд. Дис., Владимир, 2000. -С.21.

2. Вишняков И. Ф., Мищенко Н. К., Куринов В. В. и др. Классическая чума свиней // Ветеринария. 1998. -№11. — С. 16-22.

3. Глотов А. Г., Глотова Т.И., Рябчикова Е.И. и др. Выделение и характеристика изолятов вируса диареи крупного рогатого скота // Вопросы Вирусологии.-2006.-№1 .-С.42-45.

4. Жидков С.А., Лебедев А.И., Гоголев М.М. и др. Роль вирусной диареи в этиологии респираторных и желудочно-кишечных болезней телят// Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. -1995. №3. - С. 50-53.

5. Забережный А.Д. Получение рекомбинантных вирусов классической чумы свиней и респираторно — синцитиального вируса человека на основе инфекционных копий их геномов// Докт. Дис., Москва, 2004.- С. 254.

6. Куриннов В.В., Коломыцев A.A., Сергеев В.А. и др. Эпизоотология классической чумы свиней в Российской Федерации (1990-2007 гг.).-2008.

7. Прокофьев М.А. Экспериментальные методы исследования белков и нуклеиновых кислот // 1985. — Москва Изд-во МГУ

8. Салганник Р.И. Методы молекулярной генетики и генной инженерии. //Новосибирск: Наука. Сиб. отд-ние, 1990.

9. Семенихин В.И., Пузырев А.Т., Орешкова С.Ф., Донченко A.C., Чекишев В.М., Ильичев A.A. Выявление вируса классической чумы свиней с помощью полимеразной цепной реакции // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология-1999- 1-С.27-30.

10. Сергеев В.А., Непоклонов Е.А., Алипер Т.Н. Вирусы и вирусные вакцины//М.:Библионика, 2007.

11. Стариков A.M. Классическая чума свиней: территориальное распространение и анализ эпизоотического процесса в Волгоградской области // Автореф. канд. дис., Покров, 2005, -С. 26.

12. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьёв Б.В., Фомина Н.В. Вирусные болезни животных //1998, Москва, ВНИТИБП.

13. Херрингтон С., Макги Д. Молекулярная клиническая диагностика. Методы// 1999. Москва, Мир.

14. Шульпин М.И., Аянот П.К., Мищенко В.А. Индикация вируса диареи крупного рогатого скота, генотипирование и филогенетический анализ изолятов, выявленных на территории Российской Федерации // Вопросы Вирусологии.-2003.-№5.-С.41-46.

15. Шульпин М.И. Выявление возбудителя вирусной диареи КРС с помощью полимеразной цепной реакции и генотипирование изолятов, циркулирующих на территории Российской Федерации // Дис. канд. биол. наук: 03.00.06: Владимир, 2004.-С. 132.

16. Щербаков А.В., Кукушкин С.А., Тимина A.M. и др. Мониторинг инфекционных болезней среди кабанов // Вопросы Вирусологии.-2007. №3 -С. 29-33.

17. Agapov E.V., Murray С. L., Frolov I. et. al. Uncleaved NS2-3 is required for production of infectious bovine viral diarrhea virus // J. Virol. 2004. - Vol.78. - pp.2414-2425.

18. Balint A., Baule C., Palfi V., et al. Retrospective genome analysis of a live vaccine strain of bovine viral diarrhea virus // J. Vet. Res. 2005.-Vol.36-pp. 89-99.

19. Becher P., Orlich M., Shannon A., Phylogenetic analysis of pestivimses from domestic and wild ruminants // J. of General Virology.-1997.-Vol. 78.-pp. 1357-1366.

20. Becher P., Ramirez R.A., Orlich M., et al. Genetic and antigenetic characterization of novel pestivirus genotipes: implications for classification // Virology-2003 .-Vol.311-pp. 96-104.

21. Bezborodova S., Andreev V., Drygin V. et al. XI International congress of virology 9-13 august 1999 Sydney 1999.-p.329.

22. Booker C.W., Abutarbush S.M., Morley P.S., et all. The effect of bovine viral diarrhea virus infections on health and performance of feedlot cattle // Can. Vet. J.- 2008.-Vol. 49.- pp. 253-260.

23. Brock, K.V. The persistence of bovine viral diarrhea virus // Biologicals-2003.- Vol.31 .-pp. 131 -135.

24. Brock, K.V., Deng R., and Riblet S. M. Nucleotide sequencing of 5' and 3' termini of bovine viral diarrhea virus by RNA ligation and PCR II Virol. Methods.- 1992.-pp. 38, 39-46.

25. Bruschke C. J., Hulst M. M., Moormann R. J. et. al. Glycoprotein of pestiviruses induces apoptosis in lymphocytes of several species // J. Virol. 1997. - Vol.71. - pp.6692-6696.

26. Collett M. S., Moennig V., Horzinek M. C. Recent Advances in Pestivirus Research // J. Jen. Virol. 1989. - Vol.70, part 2. - pp.253-266.

27. Dong X. N., Chen Y. H. Marker vaccine statagies and candidate CSFV marker vaccines // Vaccine. — 2007. Vol.25. — pp.205-230.

28. Edwards S., Moenning V., Wensvoort G. The development of an international referens panel of monoclonal antibodies for the differentiation of hog cholera virus from pestiviruses // Vet. Microbiol. — 1991. Vol.29. -pp.101-108.

29. Elbers K., Tautz N., Becher P. et. al. Processing in the pestivirus E2-NS2 region: identification of proteins p7 and E2p7 // J. Virol. 1996.1. Vol.70.-pp.4131-4135.

30. Ericson G.A. Hog Cholera (Swine fever)// In: Vet. Diagn. Virology. Mosby year book. USA, Ed. A.E. Castro, W.P.Heushele, 1992.-pp. 228230.

31. Fauquet C.M., Mayo M.A., Maniloff J. Eighth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses // Elsevier. 2005.

32. Felsenstein, J. Phylip phylogeny inference package (version 3.5c) // Cladistics.- 1989.- Vol.5, -pp. 164-166.

33. Fletcher S. P., Jackson R. J. Pestivirus internal ribosome entry site (IRES) structure and function: elements in the 5' nontranslated region important for IRES function // J. Virol. 2002. - Vol.76. - pp.5024-5033.

34. Franki R.I. B., Faquet C.M., Knudson D.L., Brown F. ( editors), 1991 . Fifth Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses. Archives of Virology // Supplementum 2,-pp. 223-233.

35. Frolov I, McBride M.S, Rice C.M. cis-acting RNA elements required for replication of bovine viral diarrhea virus-hepatitis C virus 5' nontranslated region chimeras RNA // 1998.-Vol.4-pp. 1418-1435.

36. Gil L. H., Ansari I. H., Vassilev V. et. al. The amino-terminal domain of bovine viral diarrhea virus Npro protein is necessary for alpha/beta interferon antagonism // J. Virol. 2006. - Vol.80. - pp.900-911.

37. Grassmann C. W., Isken O., Tautz N., Behrens S. E. Genetic analysis of the pestivirus nonstructural coding region: defects in the NS5A unit can be complemented in trans // J. Virol. 2001. - Vol.75. - pp.7791-7802.

38. Grebennikova T.V., Zaberezhny A.D., Paton D.J., McGoldrick A., Aliper T.I., Nepoklonov E.A. Sequencing analysis of the Classical Swine

39. Fever Virus. O.I.E. Symposium on Classical Swine Fever (Hog Cholera)// Birmingham (United Kindom), 1998.-9-10 July, -p.53.

40. Greiser-Wilke I., Grummer B., Moenning V. Bovine viral diarrhoea eradication and control programmes in Europe // Biologicals-2003.-Vol.31-pp. 113-118.

41. Goens D. S. The evolution of bovine viral diarrhea: a review//Can. Vet. J.- 2002,-Vol. 43.- pp. 946-954.

42. Gu B., Liu C., Lin-Goerke J. et. al. The RNA helicase and nucleotide triphosphatase activities of the bovine viral diarrhea virus NS3 protein are essential for viral replication // J. Virol. 2001. - Vol.74. - pp. 1794-1800.

43. Harada T., Tautz N., Thiel H. J. E2-p7 region of the bovine viral diarrhea virus polyprotein: processing and functional studies // J. Virol. -2000. Vol.74. - pp.9498-9506.

44. Heinz F.X., Collett M.S., Purcell R.H., et al. Virus Taxonomy. Seventh Report of the International Committee on Taxonomy Viruses // 2000. -Academic Press San Diego.- pp. 859-878.

45. Hilton L., Moganeradj K., Zhang G. et. al. The Npro product of bovine viral diarrhea virus inhibits DNA binding by interferon regulatory factor 3 and targets it for proteasomal degradation // J. Virol. 2006. - Vol.80. -pp.11723-11732.

46. Hoff H.S, Donis R.O. Induction of apoptosis and cleavage of poly(ADP-ribose) polymerase by cytopathic bovine viral diarrhea virus infection // Virus Res.- 1997.-Vol.49-pp. 101-113.

47. Hofmann M.A., Brechtbuchl K., Stauber N. Rapid characterization of new Pestivirus strain by direct sequencing of PCR-amplified cDNA from5' noncoding region // Arch. Virol., 1994- Vol. 139-pp.217-229.

48. Houe H. Epidemiological features and economical importance of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection // Vet. Microbiol.- 1999.-Vol 64-pp. 89-107.

49. Houe H., Lindberg A., Moennig V. Test strategies in bovine viral diarrhea virus control and eradication campaigns in Europe // J. Vet. Diagn. Invest.-2006.-Vol. 18.-pp. 427-436.

50. Isken O., Grassman C. W., Yu H., Behrens S.-E. Complex signals in the genomic 3' nontranslated region of bovine viral diarrhea virus coordinate translation and replication of the viral RNA // RNA. — 2004. — Vol.10.-pp. 1637-1652.

51. Kim I., Hyun B., Shin J., et al. Identification of Bovine Viral Diarrhea Virus type 2 in Korean native goat (Capra hircus) // J.Virus Research-2006.-Vol.l21-pp. 103-106.

52. Lackner T., Muller A., Pankraz A. et. al. Temporal modulation of an autoprotease is crucial for replication and pathogenicity of an RNA virus // J. Virol. -2004. Vol.78, - pp. 10765-10775.

53. Lackner T., Thiel H. J., Tautz N. Dissection of a viral autoprotease elucidates a function of a cellular chaperone in proteolysis // Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 2006. - Vol. 103. - pp. 1510-1515.

54. Langedijk J. P. Translocation activity of C-terminal domain of Pestivirus Erns and ribotoxin L3 loop // J. Biol. Chem. 2002. - Vol.277, -pp.5308-5314.

55. Leforban J., Edwards S., Ibata G., Vannier P. A blocking ELISA to differentiate hog cholera virus antibodies in pig sera from those due to other pestiviruses // Ann. Rech. Vet.-1990.-Vol. 21-pp.119-129.

56. Lindenbach B. D., Rice C.M. Flaviviridae: the viruses and their replication. // In: Knipe D.M., Howley P.M., Griffin D.E. et. al. (Eds.), Fields Virology. Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia 2001.pp.991-1041.

57. Liang R., Babiuk A.L. and Van Drunen Littel-van den Hurk S. Compatibility of plasmids encoding bovine viral diarrhea virus type 1 and type 2 E2 in a single DNA vaccine formulation // 2007.- Vaccine- Vol. 25-pp. 5994-6006.

58. Lowings J.P., Ibata G., Needham J., Paton D.J. Classical swine fever virus diversity and evolution//J. Gen. Virol.-1996.-Vol.77.-pp. 1311-1321

59. Lowings J.P., Paton D.J., Sands J.J., De Mia G.M., Rutili D. Classical swine fever: genetic detection and analysis of differences between virus isolates//J. Gen. Virol.-1994.-Vol.75.-pp.3461-3468.

60. Mengeling W. L., Packer R. A. Pathogenesis of chronic hog cholera: host response // American Journal of Veterinary Research. 1966. -Vol.30.-pp.409-417.

61. Meyers G., Saalmuller A., Buttner M. Mutation abrogating the RNase activity in glycoprotein Erns of the pestivirus classical swine fever virus lead to virus attenuation // J. Virol. 1999. - Vol.73. - pp. 10224-10234.

62. Meyers G., Thiel H.-J. Molecular characterization of pestiviruses // Adv. Virus Res. 1996. - Vol.47. - pp.53-118.

63. Moening V. Introduction to classical swine fever: virus, disease and control policy // J. Veterinary Microbiology.- 2000.-Vol.73.- pp. 93-102.

64. Moening V., Liess B. Pathogenesis of intrauterine infections with bovine viral diarrhea virus // Vet Clin N Am Food Anim Pract 1995. -Vol. 11-pp. 477-487.

65. Moennig V., Plagemann P. G. W. The pestiviruses // Advances in Virus Research. 1992. - Vol.41. - pp.53-98.

66. Moening V., Schageman G., Dahle J. et al. A new approach for the diagnosis of hog cholera//Dtsch. Tierdtztl.,Wsch.-1990.-Vol. 97-pp.91-93.

67. Moormann R. J. M., Van Gennip H. G. P., Miedema G. K. W., Hulst M. M., Van Rijn P. A. (1996): Infection RNA transcribed from anengineered full-length cDNA template of the genome of a pestivirus // J. Virol.-1996.-Vol.70.-pp. 763-770.

68. Murray C.L., Marcotrigiano J., Rice C.M. Bovine Viral Diarrhea Virus Core Is an Intrinsically Disordered Protein That Binds RNA // J. Virol.-2007.- Vol.82.-pp. 1294-1304.

69. Nagai M, Hayashi M., Sugita S., et al. Phylogenetic analysis of bovine viral different viruses using five different genetic regions // Virus Research.-2004.-Vol.99- pp. 103-113.79.

70. Nagai M., Sakoda Y., Mori M., et al. Insertion of cellular sequence and RNA recombination in the structural protein coding region of cytopathogenic bovine viral diarrhoea virus // J. Gen. Virol.- 2003.-Vol.84(Pt 2).-pp. 447-452.

71. Pankraz A., Thiel H.-J., Becher P. Essential and nonessential elements in the 3' nontranslated region of bovine viral diarrhea virus // J. Virol. — 2005. Vol.79. - pp.9119-9127.

72. Paton D.J., Carlsson U., Lowings J.P., Sands J.J., Vilcek S., Alenius S. Identification of herd-specific bovine viral diarrhoea virus isolates from infected cattle and sheep // Veterinary microbiology.- 1995.-Vol. 43.-pp.283-294.

73. Paton D. J., McGoldrick A., Greiser-Wilke I., et al. Genetic typing of classical swine fever virus // J. Veterinary Microbiology.-2000.-Vol.73.-pp. 137-157.

74. Pellerin C., van de Hurk J., Lecomete J. et al. Identification of a newgroupe of bovine viral diarrhea virus strains associated with severe outbreaks and high mortalities // Virology- 1994.-Vol.203.-pp.260-268.

75. Qu L., McMullan L. K., Rice C. M. Isolation and characterization of noncytopathic pestivirus mutants reveals a role for nonstructural protein NS4B in viral cytopathogenicity // J. Virol. 2001. - Vol.75. - pp. 10651-10662.

76. Reimann I., Depner K., Trapp S., Beer M. An avirulent chimeric Pestivirus with altered cell tropism protects pigs against lethal infection with classical swine fever virus // Virology. 2004. - Vol.322. - pp. 143157.

77. Ridpath J., Bolin S.R., Dubovi EJ. Segregation of bovine viral diarrhea virus into genotypes // Virology.-1994.-Vol.205.-pp.66-74.

78. Risatti G.R., Callahan J.D., Nelson W.M., Borca M.V. Rapid detection of classical swine fever virus by a portable real-time reverse transcriptase PCR assay // Journal of clinical microbiology.-2003-Vol. 41-pp.500-505.

79. Rumenapf T., Stark R., Meyers G., Thiel H.-J. Structural proteins of hog cholera virus expressed by vaccinia virus: futher characterization and induction of protective immunity// Journal of Virology.- 1991.-Vol. 65.-pp.589-597.

80. Schirrmeier H., Strebelow G., Depner K., et al. Genetic and antigenic characterization of an atypical pestivirus isolate, a putative member of a novel pestivirus species // J. of General Virology.-2004.-Vol. 85.- pp. 3647-3652.

81. Schweizer M, Peterhans E. Oxidative stress in cells infected with bovine viral diarrhoea virus: A crucial step in the induction of apoptosis // J Gen Virol-1999.-Vol.80.-pp.l 147-1155.

82. Seki Y., Seimiya Y.M., Motokava M. et al. Application of Restriction Fragment Length Polymorphism Analysis to Simple and Rapid Genotiptng of Bovine Viral Diarrhea Virus Strains Isolated in Japan // J. Vet. Med.

83. Sci.-2008.-Vol.70(4)-pp. 393-395.

84. Stadejek T, Warg J, Ridpath JF. Comparative sequence analysis of the 5' noncoding region of classical swine fever virus strains from Europe, Asia, and America // Arch Virol.-1996.-Vol. 141.-pp.771-776.

85. Stark R., Rumenapf T., Meyers G., Thiel H.-J. 1990 Cenomic localization of hog cholera virus glycoproteins // Virology.-1990.- Vol. 174.-pp. 286-289.

86. Steffens S., Thiel H.-J., Behrens S. E. The RNA-dependent RNA polymerases of different members of the family Flaviviridae exhibit similar properties in vitro // J. Gen. Virol. — 1999. Vol.80. - pp.25832590.

87. Susa M., Konig M., Saalmuller A. et. al. Pathogenesis of classical swine fever: B-lymphocyte deficiency caused by hog cholera virus // Journal of Virology. 1992. - Vol.66, -pp.1171-1175.

88. Terpstra C. Hog cholera: an update of present knowledge // Br. Vet. J.-1991 .-Vol. 147.-pp.397-406.

89. Thiel H.J., Plagemann P.G.W., Moenning V. Pestiviruses // Fields Virology, Third Edition.- 1996-pp. 1059-1071.

90. Thiel H.J., Stark R., Weiland E., Rumenapf T., Meyer G. Hog Cholera Virus: Molecular Composition of virions from a pestivirus //J. Of Virology.- 1991.- Vol.65- pp.4705-4712.

91. Trautwein G. Pathology and pathogenesis of the disease // In: Liess B. (Ed.), Classical Swine Fever and Related Infections. Martinus Nijhoff Publishing, Boston. 1988. -pp.24-27.

92. Van Oirschot J.T., Terpstra C. Hog cholera virus // Virus infections of porcines. Amsterdam, 1989. -pp.113-130.

93. Van Oirschot J. T., Terpstra C. A. Congenital persistent swine fever infection. I. Clinical and virological observations// Veterinary Micribiology. 1977. - Vol.2, - pp.121 - 132.

94. Vilcek S., Durcovic B., Kolesarova M., et al. Genetic diversity of international bovine viral diarrhoea virus (BVDV) isolates: identification of a new BVDV-1 genetic group // Vet Res.-2004.-Vol. 35- pp. 609-615.

95. Vilcek S., Nettleton P.F. Pestiviruses in wild animals // Veterinary Microbiology-2006.-Vol.l 16-pp. 1-12.

96. Vilcek S., Stadejek T., Ballagi-Pordany A. et al. Genetic variability of classical swine fever virus // Virus Res.-1996.-Vol.43.-pp. 137-147.

97. Vlasova A., Grebennikova T., Zaberezhny A., Greiser-Wilke I., Floegel-Niesmann G., Kurinnov V., Aliper T., Nepoklonov E. Molecular epidemiology of classical swine fever in the Russian Federation // J. Vet. Med.- 2003.-Vol.50-pp.363-367.

98. Wakeley P.R., Turner J.L., Ibata G et al. Characterisation of a type 2 bovine viral diarrhoea virus isolated from cattle in the UK // Vet.Microbiol.-2004.-Vol. 102.-pp. 19-24.

99. Warrener P., Collett M. S. Pestivirus NS3 (p80) protein possesses RNA helicase activity // J. Virol. 1995. - Vol.69. - pp.1720-1726.

100. Weiland F., Weiland E., Unger G. et. al. Localization of pestiviral envelope proteins Erns and E2 at the cell surface and on isolated particles //J. Gen. Virol. 1999. - Vol.80, - pp. 1157-1165.

101. Wengler G. Flaviviridae // Arch, of Virology.- 1991.- (Suppl. 2).pp.223-233.

102. Wensvoort G., Terpstra C., deKluijver E.P., Kragten C., Warnaar J.C. Antigenic differentiation of pestivirus strains with monoclonal antibodies against hog cholera virus // Vet. Microbiol.- 1989.- Vol.21- pp. 9-20.

103. Wiskerchen M., Beizer S. K., Collett M. S. Pestivirus gene expression: the first protein product of the bovine viral diarrhea virus large open reading frame, p20, possesses proteolytic activity // J. Virol. 1991. -Vol.65.-pp.4508-4514.

104. Wofmeyer A., Wolf G., Beer M et al. Genomic (5'-UTR) and serological differences among German BVDV field isolates // Arch.Virol.-1997.-Vol.l42.-pp.2049-2057.

105. Xia H., Liu L., Wahlberg N., et al. Molecular phylogenetic analysis of bovine viral diarrhea virus: A Bayesian approach // Virus Res.- 2007-Vol.45-pp. 2143-2152.

106. Xiao M., Gao J., Wang W. et. al. Specific interaction between the classical swine fever virus NS5B protein and viral genome // Eur. J. Biochem. -2004. Vol.271-pp.3888-3896.

107. Xu X., Zhang Q., Yu X., et al. Sequencing and comparative analysis of a pig bovine viral diarrhea virus genome // J. Virus Research-2006.-Vol.-122.-pp. 164-170.

108. Yu H., Grassman C. W., Behrens S.-E. Sequence and structural elements at the 3' terminus of bovine viral diarrhea virus genomic RNA: functional role during RNA replication // J. Virol. 1999. - Vol.73. -pp.3638-3648.

109. Zaberezny A.D., Grebennikova T.V., Kurinnov V.V., Tsybanov S.G.,