Молекулярно-генетический анализ полиморфизма ДНК у потомков мышей, подвергшихся острому и хроническому γ-облучению тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Мязин, Андрей Евгеньевич

• Мязин, Андрей Евгеньевич
• кандидат биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мязин, Андрей Евгеньевич

Список сокращений.

Введение.

I. Обзор литературы.

1.1. Геномная нестабильность как эффект облучения.

1.2. Полиморфизм - понятие, причины, значение.

1.2.1. Маркеры полиморфизма ДНК.

1.2.1.1. Мини- и микросателлиты.

1.2.1.2. ИАРБ и АРЬР-маркеры.

1.2.2. Некоторые методы изучения маркеров полиморфизма ДНК.

1.2.2.1. Рестрикционные ферменты.

1.2.2.2. Полимеразная цепная реакция.

1.2.4. Увеличение степени вариабельности ДНК как генетический эффект облучения.

1.3. Половые клетки - мишень для действия ионизирующего излучения.

1.3.1. Некоторые методы изучения генетических эффектов радиации в половых клетках.

1.3.1.1 Доминантные летальные мутации.

1.3.1.2. Реципрокные транслокации.

1.3.1.3 Аномальные головки спермиев.

1.3.2. Стадии сперматогенеза.

1.3.3. Различие стадий сперматогенеза по чувствительности к радиационному воздействию.

1.3.4. Летальное действие радиации.

1.3.5. Различия чувствительности половых клеток к генетическому действию

II. Материалы и методы.

II. 1. Однократное облучение животных.

П.2. Хроническое облучение животных.

11.3. Реактивы и оборудование.

11.4. Выделение ДНК.

11.5. Постановка полимеразной цепной реакции.

11.6. Электрофоретический анализ в агарозном геле.

11.7. Документирование результатов электрофореза.

11.8. Анализ паттернов амплифицированной со случайными праймерами ДНК (RAPD-профилей).

11.9. Выделение и обработка пероксидом водорода лимфоцитов селезенки.

НЛО. Метод электрофореза единичных клеток.

II.il. Статистическая обработка результатов.

III. Результаты и обсуждение.

III. 1. Плодовитость, соотношение полов в потомстве однократно- и хронически облученных мышей.

III.2. Вариабельность продуктов амплификации со случайными праймерами у потомков облученных мышей.

111.2.1. Спонтанная вариабельность продуктов RAPD потомства контрольных групп мышей двух различных линий.

111.2.2. Повышение частоты новых полос у потомков мышей-самцов линии BALB/c, однократно облученных в дозах 1-3 Гр.

111.2.2.1. Повышение частоты новых полос у потомков мышей-самцов линии BALB/c , однократно облученных в дозе 1 Гр.

111.2.2.2. Повышение частоты новых полос у потомков мышей-самцов линии BALB/c, однократно облученных в дозе 2 Гр.

111.2.2.3. Повышение частоты новых полос у потомков мышей-самцов линии BALB/c, однократно облученных в дозе 3 Гр.

111.2.3. Зависимость эффекта от дозы для различных стадий сперматогенеза при облучении в диапазоне доз 1 -3 Гр.

III.2.3.1. Средний уровень полиморфизма при облучении 1-3 Гр.

III.2.3.2. Статистический анализ результатов изучения вариабельности RAPDмаркеров по частотам появления новых полос.

III.2.4. Частота исчезновения родительских полос в паттернах потомков.

111.3. Выход мутаций в расчете на 0,01 Гр при остром облучении на стадиях сперматид и сперматогониев.

111.4. Влияние низкоинтенсивного хронического облучения на уровень полиморфизма ДНК потомков мышей линии CBA/lac.

111.5. Определение частоты реципрокных транслокаций в сперматоцитах мышей.

111.6. Чувствительность спленоцитов мышей линий BALB/c и CBA/lac к пероксиду водорода после облучения в различных дозах.

III.6.1 Изменение количества спленоцитов мышей линии BALB/c в отдаленные сроки после облучения в дозах 1-6 Гр.

II 1.6.2. Зависимость среднего индекса комет спленоцитов мышей линии BALB/c от концентрации пероксида водорода.

111.6.3. Чувствительность спленоцитов мышей линии BALB/c к пероксиду водорода после облучения в дозах 1-6 Гр.

111.6.4. Динамика изменения чувствительности спленоцитов мышей линии CBA/lac к пероксиду водорода при хроническом облучении.

111.7. Обсуждение.

IV. Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетический анализ полиморфизма ДНК у потомков мышей, подвергшихся острому и хроническому γ-облучению»

Актуальность темы.

Развитие методов биохимии, молекулярной биологии и генетической инженерии позволяет подходить к оценке таких явлений как пострадиационный мутационный процесс и радиационно-индуцированная нестабильность генома с точки зрения оценки изменения молекулярно-генетических показателей. В последние годы постоянно увеличивается количество работ, посвященных оценке изменения вариабельности маркеров полиморфизма ДНК у потомства облученных родителей. Маркеры полиморфизма ДНК, такие как микро- (МКС) и минисателлитные локусы (МНС), ДНК Y-хромосомы, митохондриальная ДНК имеют ряд характеристик, которые делают их более удобными для изучения радиационно-генетических эффектов [Алтухов, Салменкова, Курбатова и др., 2004]. Наибольший интерес исследователей в области изучения генетических эффектов радиации привлекают мини- и микросателлитные локусы. Помимо радиационного фактора, была показана индукция мутационного процесса в МКС и МНС при воздействии химических мутагенов, а так же вследствие оксидативного стресса, вызываемого действием перекиси водорода [Yauk, Quinn, 1996; Jackson, Loeb, 2000]. Появление относительно простых и быстрых методов работы с ДНК позволило выявить в начале 90-х годов взаимосвязь повышенной вариабельности микросателлитных локусов и онкологических заболеваний. Следствием изучения корреляции онкологических заболеваний и индуцированной изменчивости микросателлитных локусов стало введение в научную практику нового термина - микросателлитная нестабильность [Peltomaki, Lothe et al., 1993; Loeb, 1994; Безлепкин, Газиев, 2001].

Использование МКС и МНС для изучения генетических последствий облучения дает целый ряд преимуществ перед традиционными методами. К примеру, за счет повышенной частоты спонтанных мутаций, для исследований не требуется значительного числа животных в экспериментальных группах. Большая часть исследований в этой области посвящена изучению генетических последствий малых доз облучения, то есть до 0,2 Гр [UNSCEAR, 1999]. Целый ряд работ Dubrova и соавторов показывает передающееся по наследству увеличение вариабельности минисателлитных локусов в результате воздействия ионизирующих излучений в различных дозах, как на модельные объекты, так и на человека [Dubrova et al., 1996, 1998, 2000, 2002].

Диапазон доз от 0,5 до 1 Гр и выше охвачен молекулярно-генетическими исследованиями в значительно меньшей степени. Вопрос о закономерностях радиационной индукции полиморфизма ДНК при воздействиях средних и больших доз ИИ и связи такой индукции с нестабильностью генома остается открытым. Boyd и соавторы, изучая зависимость «доза-эффект» для частоты мутаций в мини- и микросателлитных локусах в клетках линии UVW, показали, что при воздействии у - радиации в дозах 1 - 3 Гр наблюдается достоверное увеличение частоты мутаций с увеличением дозы облучения [Boyd, Livingstone, Wilson et al., 2000].

Помимо анализа вариабельности сателлитных локусов, довольно широкое распространение получил метод оценки генетической вариабельности с помощью полиморфной ДНК, амплифицированной с серией случайных праймеров (random amplified polymorphic DNA, RAPD, или arbitrary primed DNA, AP-PCR). Данный метод дает возможность быстрого сканирования генома за счет получения фингерпринтов («отпечатков пальцев») ДНК и может быть использован для оценки изменений, произошедших в нем под воздействием каких-либо факторов. Набор фрагментов ДНК, получаемых при амплификации со случайными праймерами, обладает генотип-специфичностью и может служить критерием при изучении генетических различий между близкородственными видами, линиями, сортами, породами и штаммами.

Анализ RAPD или AP-PCR является модификацией полимеразной цепной реакции (ПЦР), в которой вместо пары праймеров (прямой и обратный), фланкирующих определенную последовательность, используется серия одиночных случайных праймеров, не имеющих специфичности к данному геному. Также, иногда, используется смесь из 2 - 4 таких праймеров, такая модификация носит название semi-RAPD [Матвеева и др., 2005].

Анализ вариабельности полиморфной ДНК применяется в радиационно-генетических исследованиях, как на модельных объектах, так и для мониторинга популяций человека. Безлепкин с соавторами [Безлепкин и др., 2000] показали увеличение генетической вариабельности у потомков мышей линии BALB/c, хронически облученных гамма-излучением в дозах 0,1 - 0,5 Гр с помощью AP-PCR. Примером использования данной технологии в радиционно-генетическом мониторинге может служить работа Weinberg с соавторами, которые показали увеличение частоты мутаций с помощью RAPD у детей ликвидаторов последствий аварии на ЧАЭС [Weinberg et al., 2001]. Существует множество других примеров удачного использования полиморфной ДНК для оценки генетической вариабельности, возникающей у потомков облученных родителей. Но значительная часть таких исследований посвящена эффектам малых доз, тогда как информации о генетической вариабельности, возникающей при воздействии доз ИИ от 0,5 Гр и выше, явно недостаточно. Изучение молекулярно-генетических эффектов средних и больших доз радиации дало бы более полное представление о механизмах воздействия ионизирующего излучения на геном.

Цель и задачи исследования.

Цель данной работы заключалась в изучении молекулярно-генетических эффектов радиационного воздействия у мышей линий BALB/c и CBA/lac и их потомков в условиях однократного и хронического облучения в различных дозах.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Изучить индукцию генетической вариабельности на пре - и постмейотической стадиях сперматогенеза при облучении в дозах от 1 до 3 Гр с помощью полиморфной ДНК, амплифицированной со случайными праймерами.

2. Дать сравнительную оценку чувствительности стадий сперматогенеза на основании анализа уровней вариабельности продуктов ИАРЭ потомков мышей, облученных в диапазоне доз 1-3 Гр.

3. Изучить с помощью метода ДНК -комет изменение устойчивости клеток селезенки мышей линий ВАЬВ/с и СВАЛас к воздействию однократного облучения в диапазоне доз 1-6 Гр и пролонгированного облучения в суммарной дозе 0,36 Гр.

4. Изучить молекулярно-генетические эффекты хронического низкоинтенсивного □-излучения у мышей и их потомков с помощью методов ИАРЭ и электрофореза индивидуальных клеток (комет- тест).

Научная новизна полученных результатов. Впервые проведен сравнительный анализ радиационно-генетической чувствительности пре - и постмейотических стадий сперматогенеза в области доз от 1 до 3 Гр с помощью анализа полиморфизма ДНК, амплифицированной с серией случайных праймеров. Для анализа полиморфизма ДНК была использована серия случайных праймеров, в которую входили как одиночные, так и смеси праймеров. Получены достоверные различия между опытной и контрольной группами для всех использованных доз облучения. Исследованы генетические эффекты пролонгированного облучения в суммарной дозе 0,36 Гр, лишь в несколько раз превышающей годовую дозу от естественного радиационного фона (0,086 - 0,173 Гр/год).

Практическая значимость работы. Результаты работы могут быть использованы для экстраполяции данных на человека с целью оценки рисков как острого, так и хронического облучения. Кроме того, полученные результаты позволяют рассматривать использование метода амплификации ДНК со случайными праймерами при проведения радиоционно-генетического мониторинга. При этом, воспроизводимость метода увеличивается при использовании модификации, описанной в настоящей работе, а так же при использовании серии праймеров.

I. Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Генетика», Мязин, Андрей Евгеньевич

1. При изучении генетической вариабельности, индуцированной у облучением мышей линии BALB/c, показано, что в потомстве облученных

родителей частота появления новых полос в RAPD-паттернах достоверно

превышает контрольный уровень примерно в 3 раза (в зависимости от

используемого праймера и стадии сперматогенеза). Обнаруженный эффект

достоверно не зависел от дозы облучения в интервале К З Гр. 2. Степень вариабельности RAPD-паттернов у потомков не зависела

от стадии сперматогенеза, на которой находились половые клетки родителей в

момент облучения. 3. Частоты исчезновения родительских полос в RAPD-паттернах

потомства (нуль-мутации) при всех использованных дозах облучения и

стадиях сперматогенеза в момент облучения достоверно превышали

контрольный уровень. 4. При изучении однонитевых разрывов ДЬЖ спленоцитов мышей

линии BALB/c методом электрофореза индивидуальных клеток (метод ДЬЖ комет) спустя И месяцев после облучения в интервале доз К б Гр показано,

что индекс ACI (средний индекс комет) достоверно превышал контрольный

уровень. При дополнительном воздействии пероксида водорода на клетки

облученных мышей было показано, что устойчивость спленоцитов к

пероксиду водорода снижается по сравнению с контролем, начиная с дозы

облучения 3 Гр. 5. Обнаружено значительное снижение устойчивости спленоцитов

хронически облученных мышей-самцов линии СВА/1ас к пероксиду водорода

в концентрациях 50 и 500 мкМ уже на 40 сутки с начала облучения. 6. При изучении воздействия хронического облучения (суммарная

доза 0,36 Гр) на мышей-самцов линии СВА/1ас показано достоверное

увеличение частоты появления новых полос в RAPD-папернах потомства для

смеси праймеров Ml. 7. Метод амплификации ДНК со случайными праймерами (RAPD)

пригоден для изучения генетической вариабельности, возникающей в

потомстве гамма-облученных мышей. При этом, для наиболее полной оценки

генетических последствий облучения, представляется полезным применение

анализа RAPD (как и других молекулярно-генетических методов) в

комплексе с традиционными цитогенетическими методами.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мязин, Андрей Евгеньевич, 2005 год

1. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. М.: Мир, 1978. 452 с.

2. Безлепкин В.Г., Газиев А.И. Индуцированная геномная нестабильность генома половых клеток животных по мини и микросателлитным последовательностям. Радиобиология 2001. том 41.№5.с. 475-488

3. Бочков Н.П., Шрам Р.Я., Кулешов Н.П., Журков B.C. Система оценки химических веществ на мутагенность для человека; общие принципы, практические рекомендации и дальнейшие разработки. Генетика, 1975, т. 11, №10, с. 156-159

4. Воробцова И.Е. Влияние облучения родителей на физиологическую полноценность и риск канцерогенеза у потомства первого поколения организмов разных видов. Автореф. дис . докт. биол. JL: ЦНИРРИ МЗ РФ. 1988.

5. Воробцова И.Е. Генетические и соматические эффекты ионизирующей радиации у человека и животных (сравнительный аспект). Радиац. биология. Радиоэкология. 2002. Т. 42. № 6. С. 639-643.

6. Генетика человека.// Учебник для ВУЗов под редакцией В.А.Шевченко, Н.А Топорниной, Н.С. Стволинской. М.: Владос 2002г.

7. Гришанкина Т. И., Шаповалова A.M. Изучение стабильности хромосом у потомков облученных животных. Тез. докл. Междунар. конф. Проблемы радиационной генетики на рубеже веков. М. РУДН. 2000. С. 94.

8. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации. М.: Наука. 1978.246 с.

9. Засухина Г.Д., Васильева И.М., Семячкина А.Н. Радиоадаптивный ответ: факты, механизмы, загадки. Тез. докл. Междунар. конф. Проблемы радиационной генетики на рубеже веков. М. РУДН. 2000. С. 110.

10. Ильинских H.H., Юркин А.Ю., Ильинских И.Н., Ильинских E.H. Поломки хромосом в местах расположения онкогенов у лиц, подвергнутых радиационному воздействию. Тез. докл. Междунар. конф. Проблемы радиационной генетики на рубеже веков. М. РУДН. 2000. С. 279.

11. Комар В.Е. Хансон К.П. Информационные макромолекулы при лучевом поражении клеток. М. Атомиздат,1972, 160 с.

12. Кузьмина Н.С., Сусков И.И., Шевченко В.А. Дисгеномные эффекты в организме детей, подвергающихся низкоинтенсивному воздействию радиации в малых дозах.// Сборник «Актуальные проблемы биологии, медицины и экологии», Томск, 2004, т. 4 , № 1, стр. 9-15.

13. Ли Д.Е. Действие радиации на живые клетки. М.:Атомиздат, 1963. 287 с.

14. Мазурик В.К., Михайлов В.Ф. Радиационно-индуцируемая нестабильность генома: феномен, молекулярные механизмы, патогенетическое значение. Радиац. биология. Радиоэкология. 2001. Т.41.№3. С.272-289.

15. Малашенко A.M., Суркова Н.И., Семенов Х.Х. Определение мутагенности химических соединений (генетический принцип) на лабораторных мышах (методические указания). М.: АМН СССР, 1977. 16 с.

16. Маурер Г. Диск- электрофорез. М.: Мир, 1971. 247 с.

17. Медик В.А., Токмачев М.С., Фишман Б.Б. Статистика в медицине и биологии. М. Медицина. 2000.

18. Моссэ И.Б. Радиация и наследственность: генетические аспекты противорадиационной защиты. Минск, 1990. 208 с.

19. Никитина Т.В., Назаренко С.А. Микросателлитные последовательности ДНК человека: мутационный процесс и эволюция.// Генетика, 2004, Т.40, №10, с. 1301-1318.

20. Омельченко В.Т. Электрофоретическое исследование гемоглобинов рыб Дальнего Востока // Генетика. 1974. Т. 10 № 9 С. 35 43.

21. Пелевина И.И., Алещенко A.B., Антощина М.М., Готлиб В.Я., Кудряшова О.В., Семенова Л.П., Серебряный A.M. Реакция популяции клеток на облучение в малых дозах. Радиац. биология. Радиоэкология. 2003. Т. 43. №2. С. 161-166.

22. Померанцева М. Д, Вилкина Г. А. Влияние цистамина на выход доминантных летальных мутаций и реципрокных транслокаций в половыхклетках мышей, подвергшихся гамма-облучению в разных дозах.- Генетика, 1974, т. 10, №7, с. 128-134.

23. Померанцева М. Д, Рамайя JI. К. Мутагенный эффект излучений разных видов на половые клетки самцов мыши. Со общ. I. Сравнительная генетическая радиочувствительность сперматогониев и других стадий сперматогенеза. Генетика, 1969, т. 5, .№ 5, с. 103-112.

24. Померанцева М. Д. Оценка генетического риска радиации для человека. -В кн.: Мутагенез при действии физических факторов. М.: Наука, 1980, с. 45-64.

25. Померанцева М. Д. Сравнительное изучение частоты реципрокных транслокаций в сперматоцитах при облучении новорожденных и взрослых мышей. Генетика, 1978, т. 4, № 3, с. 548-550.

26. Померанцева М. Д., Рамайя JI. К. Об изменении радиочувствительности семенников мышей, подвергшихся рентгеновскому облучению. Радиобиология, 1964, 4, вып. 1, с. 129-135.

27. Померанцева М. Д., Рамайя JI. К. Предварительное облучение как фактор, изменяющий эффективность лучевого воздействия на организм. В кн.: Действие ионизирующих излучений на организм. М.: Изд-во АН СССР, 1962, с. 91-106.

28. Радиобиология.// Учебник для с.х. вузов. Под редакцией А.Д. Белова. М.: Колос 1999г.

29. Рябченко Н.И. Радиация и ДНК. // М.: Атомиздат- 1979, 192 с.

30. Севанькаев А.В. Радиочувствительность хромосом лимфоцитов человека в митотическом цикле. М.: Энергоатомиздат, 1987. С. 79-86.

31. Справочник по радиационной обстановке и дозам облучения в 1991 г. вследствие аварии на Чернобыльской АЭС. Под ред. Балонова М.И. Институт радиационной гигиены ГКСЭН РФ. СПб. Ариадна-Аркадия. 1993. С. 4-7.

32. Сусков И.И, Кузьмина Н.С. Проблема индуцированной геномной нестабильности в детском организме в условиях длительного действия малых доз радиации.//Радиобиология. 2001, т 41. N5. С. 606-613

33. Шевченко В. А. Радиационная генетика одноклеточных водорослей. М.: Наука, 1979.236 с.

34. Шевченко В.А. Последствия Чернобыльской катастрофы: Здоровье человека// под ред. Е.Б.Бурлаковой. М.: ЦЭПР, 1996 С. 50-60.

35. Шевченко В.А. Радиационная генетика природных популяций // Генетические механизмы селекции и эволюции. М.: Наука, 1986. С. 131-141.

36. Шевченко В.А., Померанцева М.Д. Генетические последствия действия ионизирующих излучений. М.: Наука, 1985. 279 с.

37. Aaltonen L.A., Peltomaki P., Leach F.S. et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer// Science. 1993. V. 260. P. 812- 816.

38. Armour J.A.L., Alegre S.A., Miles S. et al. Minisatellites and mutation processes in tandemly repetive DNA // Microsatellites: Evolution and applications / Ed. D.R. Goldstein, C. Schlotter. N.Y.: Oxford Univ. press, 1999. P. 24-33.

39. Atak C., Alikamanoglu S., Acik L., Canbolat Y. Induced of plastid mutations in soybean plant (Glycine max L. Merrill) with gamma radiation and determination with RAPD. // Mutat Res. 2004 Nov 22;556(1-2):35-44.(найти, добавить в обсуждение.)

40. Atienzar F.A., Venier P., Jha A.N., Depledge M.N. Evaluation of the random amplified polymorphic DNA (RAPD) assay for the detection of DNA damage and mutations // Mut. Res. Vol. 521, 2002, P. 151 -163.

41. Bapat B.V., Madlensky L., Temple L.K.F. et. al. Family history characteristics, tumor microsatellite instability and germline MSH2 and MLH1 mutations in hereditary colorectal cancer. // Hum. Genet. 1999. V. 104. P. 167 176.

42. Betnzen P., Wright J.M., Bryden L.T. et al. Tandem repeat polymorphism in mitochondrial control region of redfishes (Sebastes): Scorpaenidae // J. Heredity. 1998. Vol. 89. P. 1-7.

43. Billen D. Spontaneous DNA damage and its significance for the "negligible dose" controversy in radiation protection. Radiat. Res. 1990. V. 124. P. 242-245. .(найти, добавить в обсуждение.)

44. Biological dosimetry: chromosomal aberration analysis for dose assessment/ Technical reports series № 260. Vienna: Int. Atomic Energy Agency. 1986. 69 c. .(найти, добавить в обсуждение.)

45. Bowden R.D., Buckwalter M.R., McBride J.F., Johnson D.A., Murray B.K., O'Neill K.L. Tail profile: a more accurate system for analyzing DNA damage using the Comet assay.// Mutation Research, 2003, vol. 537, P. 1 9.

46. Brewen J.G., Preston R.J., Gengozian N. Analisys of X-ray induced chromosomal translocation in human and marmoset spermatogenial stem cells. -Nature, 1975. Vol. 253, N 5491. P. 468 470.

47. Brinkmann B., Klintschar M., Neuhunder F. Et al. Mutation rate in human microsatellites: influences of the tandem repeat // Am. J. Hum. Genet. 1998. V. 62. P. 1408- 1415.

48. Brinkmann B., Meyer E., Jungle A. Complex mutational events at the HumD21Sl 1 locus // Hum. Genet. 1996. V. 98. P. 60 64.

49. Brown W.M., George M., Wilson A.C. Rapid evolution of animal mitochondrial DMA //Proc. Nat. Sci. US. 1979. Vol. 76. P. 1967-1971.

50. Bruce W.R., Furrer R., Wyrobec A.J. Abnormalites in the shape of murine sperm after acute testicular X-irradiation. Mutat. Res., 1973. Vol. 23, N 3. P. 381 -386.

51. Cattanach B.M. Spermatogonial stem-cell killing in the mouse following single fractionated X-ray doses as assessed by length of sterile period. Mutat. Res., 1974. Vol.25. P. 53-62.

52. Cavali-Sforza L.L., Bordmer W.F. The genetics of human populations. San Francisco: Freeman, 1971. 962 p.

53. Chanq W.P., Little J.B. Delayed reproductive death in X-irradiated Chinese hamster ovary cells. Int. J. Radiat. Biol. 1991. V. 60. P. 483-496.

54. Churikov D., Matsuoka M., Luan X. et al. Assessment of concordance among genealogical reconstructions from various mtDNA segments in three species of Pacific salmon (genus Oncorhynchus) II Ibid. 2001. Vol. 10. P. 2329 2339.

55. Collins A.R, Ma A.G, Duthie S.J. The kinetics of repair of oxidative DNA damage (strand breaks and oxidised pyrimidines) in human cells. // Mutat Res. 1995 Jan; №336, vol. 1, p. 69-77.

56. Crompton N.E. Telomeres, senescens and cellular radiation response // Cell. Mol. Life Sci. 1997. V. 53. N7. P. 568-575.

57. Das С.С., Kaufmann В.Р. Histono-protein transition in Drosophila melanogaster. I. Changes during spermatogenesis. Exp. Cell Res., 1964. Vol. 35, N 3,P. 507-514.

58. Datta U., Datta P., Mandai R.K. Cloning and characterization of highly repetitive fish nucleotide sequence//Gene. 1998. Vol. 62. P. 331 -336.

59. Dietmaier W., Wallinger S., Bocker T. Diagnostic microsatellite instability: definition and correlation with mistmatch repair expression.// Cancer Res. 1997. V. 57. P. 4749-4756.

60. Djian P. Evolution of simple repeats in DNA and their relation to human disease. Cell. 1998. Jul 24 Vol. 94(2) P. 155-60.

61. Dubrova Y. E. Radiation-induced mutation at tandem repeat DNA Loci in the mouse germline: spectra and doubling doses //Radiat. Res. 2005 Feb; Vol. 163(2) P. 200-207. Найти и посмотреть!

62. Dubrova Y. Plumb M. Ionizing radiation and mutation induction at mouse minisatellite loci. The story of the two generations. // Mutation research 2002 № 499, P. 134-150

63. Dubrova Y.E., Plumb M., Brown J., Boulton E., Goodhead D., Jeffreys A. J. Induction of minisatellite mutations in the mouse germ line by low-dose chronic exposure to y-radiation and fission neutrons. Mutat. Res. 2000. V.453. P.17-24.

64. Dubrova Y.E., Plumb M., Brown J., Jeffreys A.J. Radiation-induced germline instability at minisatellite loci. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. C. 689-696.

65. Dubrova Yu., Nesterov V., Krouchinsky N., Ostapenko V.A., Neumann R., Neil D.L., Jeffreys A.J. Human minisatellite mutation rate after the Chernobyl accident//Nature, vol. 380, April 1996.78. Dubrova 1997 НАЙТИ

66. Evans E.P., Brecon G., Ford C.C. An air drying method for meiotic preparations from mammalian tests. Cytogenetics, 1964, Vol. 2. P. 289 - 294.

67. Eyre-Walker A. Do mitochondria recombine in humans? // Philos. Trans. R. Soc. Lond. B. Biol. Sci. 2000. Nov. Vol 29; 355(1403) P. 1573-80.

68. Ferreis S.D., Sage R.D., Prager E.M. et al. Mitochondrial DNA evolution in mice // Genetics (US). 1983. Vol. 105. P. 681 721.

69. Ferris S.D., Berg W.I. The utility of mitochondrial DNA in fish genetics and management // Population genetics and fishery management / Ed. N. Ryman, F. Utter. Seattle; L.; Wash. Press. 1987. P. 277 301.

70. Ford MJ, Thornton PJ, Park LK. Natural selection promotes divergence of transferrin among salmonid species//Mol Ecol. 1999 Jun;8(6): 1055-61.

71. Genetic Instability and Tumorogenesis / Ed. M.B. Kastan. B.: 1997. 210 p.

72. Harms-Ringdahl M. Some aspects on radiation induced transmissible genomic instability//Mut. Res. 1998. V. 404. P.27-33.

73. Hedrick P.W. Perspective: Highly variable loci and their interpretation in evolution and conservation // Evolution. 1999. Vol. 53, N 2. P. 313 318

74. Heyer E., Puymirat J., Dieltiers P.et al. Estimating Y-chromosome specific microsatellite mutation frequencies using deep rooting pedigrees // Hum. Mol. Genet. 1997. V. 6. P.

75. Hill C.K., William-Hill D. Neutron carcinogenesis: past, present, and future // J. Radiat. Res., v. 40, 1999, p. 117-127.

76. Hodgins H. Serological and biochemical studies in racial identification of fishes // Stock concept in pacific salmon / Ed. R. Simon, P. Larkin. Vancouver: UBC press, 1972. P. 199-208.

77. Huang Q.Y., Xu F.H., Shen H., Deng H.Y., Liu Y.J., Liu Y.Z., Li J.L., Recker R.R., Deng H.W. Mutation patterns at dinucleotide microsatellite loci in humans.// Am. J. Hum. Genet 2002 Mar; № 70 vol. 3, p. 625-34. Epub. 2002 Jan.

78. Ingram V.M. Gene evolution and the haemoglobins // Nature. 1961. Vol. 189. P. 704-708

79. Ingram V.M. Haemoglobin and its abnormalities. Oxford: Pergamon press, 1960. 240 p.

80. Ingram V.M. The haemoglobins in genetics and evolution. N.Y.: Columbia Univ. press, 1963. 166 p.

81. Ionov Y., Peinado M.A., Malkhosyan S., Shibata D., Perucho M. Ubiquitous somatic mutations in simple repeated sequences reveal a new mechanism for colonic carcinogenesis //Nature. 1993 Jun 10; Vol. 363(6429) P. 558-61.

82. Jeffreys A.I., Wilson V., Thein S.L. Hypervariable "minisatellite" regions in human DNA //Ibid. 1985a. Vol. 316. P. 67-73.

83. Jeffreys A.I., Wilson V., Thein S.L. Individual "fingerprints" of human DNA //Ibid. 1985a. Vol. 316.P. 76-79.

84. Jeffreys A.J., Tamaki K., MacLeod A., Monckton D.G., Neill D.L. and Armour J. A. L. Complex gene conversion events in germline mutation at human minisatellites. // Nature Genetics, 1994 Feb, vol. 6, p. 136 145.

85. Kadhim M.A, Marsden S.J., Wright E.G. Radiation-induced chromosomal instability in human fibroblasts: temporal effects and the influence of radiation quality.//Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 73. P. 143-148.

86. Kaiser M., Roewer L., Hedman M. et al. Characteristic and frequency of germline mutations at microsatellite loci from the human Y-chromosome, as revealed by direct observation in father/son pairs. // Am. J. Hum Genet. 2000. V. 66. P. 1580 -1588.

87. Kan Y.W., Dozy K. Polymorphism of DNA sequence adjacent to the P-globin structural gene: Its relation to the sickle mutation // Proc. Nat. Acad. Sci. US. 1078. Vol. 75. P. 5631 5635

88. Kaplan M.I., Morgan W.F. The nucleus is the target for radiation-induced chromosomal instability. Radiat. Res. 1998. V. 150. P. 382-390.

89. Karp A., Edwards K. DNA markers: global overview / DNA markers: Protoclos, application and overview / Ed. G. Caentano-Anolles, P.M. Gressnoff. N.Y.: Wiley, 1997. P. 1- 13.

90. Keshava N, Zhou G, Spruill M, Ensell M, Ong TM. Carcinogenic potential and genomic instability of beryllium sulphate in BALB/c-3T3 cells // Mol. And Cel. Biochem, vol. 222, 2001, p. 69-76.

91. Kriehuber R., Simko M., Schiffmann D., Trott K.R. Delayed cytotoxic and genotoxic effects in a human cell line following X-irradiation. Int. J. Radiat. Biol. 1999. V. 75. P. 1021-1027.

92. Krutovskii K.V., Vollmer S.S., Sorensen F.C. et al. RAPD genome map of Douglasfir // J. Hered. 1998. Vol. 89. N. 3 P. 197 205.

93. Lambert B., Holmberg K, Hackman P, Yennborg A. Radiation induced chromosomal instability in human T-lymphocytes. Mutat. Res. 1998. V. 405. P. 161-170.

94. Landi S., Frenzilli G., Milillo P.C., Cocchi L., Sbrana I., Scapoli C., Barale R. Spontaneous sister chromatid exchange and chromosome aberration frequency in humans: the familial effect. Mutat. Res. 1999. V.444. P.337-345.

95. Leonard A., Decat R. Relation between cell-cycle and yield of aberrations observed in irradiated human-lymphocytes. Can. J. Genet. 1979. V. 21(4). P.473-478.

96. Levinson G., Gutman G.A. Slipped-strand mispairing: A major mechanism for DNA sequence evolution // Mol. Biol. Evol. 1987. Vol. 4. P. 203 221.

97. Levinson G., Gutman G.A. Slipped-strand mispairing: a major mechanism for DNA sequence evolution.// Mol. Biol. Evol., 1987, May; № 4 vol. 3, p. 203-21.

98. Limoli C.L., Kaplan M.I., Corcoran J., Meyers M., Boothman D.A., Morgan W.F. Chromosomal instability and its relationship to other end points of genomic instability// Cancer Res. 1997. V.57. N24. P.5557-5563.

99. Limoli C.L., Kaplan M.I., Phillips J.W., Adair G.M., Morgan W.F. Differential induction of chromosomal instability by DNA strand-breaking agents // Cancer Res. 1997. V.57. N18. P.4048-4056.

100. Little J.B. Radiation-induced genomic instability. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. P. 663-671.

101. Loeb L.A. Microsatellite instability: marker of a mutator phenotype in cancer // Cancer Res. 1994 Oct 1; Vol. 54(19) P. 5059-63.

102. Lyon M.F., Phillips R.J., Glenister P.H. Mutagenic effects of repetated small radiated doses to mouse spermatogonia. II. Translocation yield at various dose intervals. Mutat. Res., 1973. Vol 15, N 1. P. 191 - 195.

103. Marder B.A., Morgan W.F. Delayed chromosomal instability induced by DNA damage. Mol. and Cell. Biol. 1993. V. 13. P. 6667-6677.

104. Martins M. B., Sabatier L., Ricoul M., Pinton A., Dutrillaux B. Specific chromosome instability induced by heavy ions: a step towards transformation of human fibroblasts // Mutat. Res. 1993. V 285. P. 229- 237.

105. Mei M., Qiu Y., Sun Y., Huang R., Yao J., Zhang Q., Hong M, Ye. J. Morphological and molecular changes of maize plants after seeds been flown on recoverable satellite. //Adv Space Res. 1998;22 (12):1691-7.

106. Mondello C., Riboni R., Casati A. et al. Chromosomal instability and telomere length variations during the life span of human fibroblast clones // Exp. Cell. Res. 1997. V. 236. N2. P. 385-396.

107. Monesi V. Synthetic activities during spermatogenesis in the mouse RNA and protein. -Exp. Cell Res., 1965. Vol. 39, N1. P. 197 224.

108. Moran P, Dightman DA, Park LK. Nonelectrophoretic genotyping using allele-specific PCR and a dsDNA-specific dye. // Biotechniques. 1998 Feb;24(2):206-208, 210,212.

109. Morgan W.F., Day J.P., Kaplan M.I., McGee E.M., Limoli C.L. Genomic instability induced by ionizing radiation. Radiat. Res. 1996. V. 146. P. 247-258.

110. Muller U.G., Wolfenbarger L.L. AFLP genotyping and fingerprinting // Trends Ecol. Evol. 1999. Volume 14. P. 380- 394

111. Mullis K., Faloona F., Scharf S. et al. specific enzymatic amplification of DNA in vitro: The polymerase chain reaction // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1986. Vol. 51. P. 263-273

112. Murnane JP. Role of induced genetic instability in the mutagenic effects of chemicals and radiation // Mutat Res. 1996 Jan; 367(1):11-23.

113. Naish KA, Park LK. Linkage relationships for 35 new microsatellite loci in chinook salmon Oncorhynchus tshawytscha.Anim Genet. 2002 Aug;33(4):316-8.

114. Neel J.V. The inheritance of sickle cell anemia // Science. 1949. Vol. 110. P. 64-66.

115. Nikitin A.G., Shmookler Reis R.J. Role of transposable elements in age-related genomic instability // Genet. Res. 1997. V. 69. №3. P. 183-195.

116. Oakberg E. F. A new concept of spermatogonial stem-cell renewal in the mouse and its relationship to genetic effects.- Mutat. Res., 1971a. Vol. 11. N 1. P. 1 -7.

117. Oakberg E. F. Spermatogonial stem-cell renewal in the mouse.- Anat. Fee., 1971b. Vol. 169. N 3. P. 515 532.

118. Ono T., Okada S. Radiation-induced DNA single-strand scission and its rejoining in spermatogonia and spermatozoa of mouse. Mutat. Res., 1977. Vol. 43. N1, P. 25-36.

119. Ota H., Settheetham-Ishida W., Tiwawech D. et al. Human mtDNA and Y-chromosome variation is correlated with matrilocal versus patrlilocal residence// Nature. Genet. 2001. Vol. 29. P.20-21.

120. Paglia G., Morgante M. PCR-based multiplex DNA fingerprinting techniques for the analisys of conifer genomes//Mol. Breed. 1998. Vol. 4. P. 173-177

121. Palcic B., Sharsgard L.D. Absence of ultrafast processes of repair of singlestrand breaks in mammalian DNA. Int. J. Radiat. Biol. 1975. V. 27. P. 121-133.

122. Pallavicini M.G., Grewal L. Genomic instability in mice with varying genetic susceptibility to radiation-induced leukemia. Blood. 1997. V. 90. P. 1425-1426.

123. Pampfer S., Streffer G. Increased chromosome aberration levels in cells from mouse fetuses after zygote X-irradiation. Int. J. Radiat. Biol. 1989. V. 55. P. 85-92.

124. Paquette B., Little J. In vivo enhancement of genomic Instability in minisatellite sequences of mouse C3H/10T1/2 cells transformed in vitro by X-Rays // Cancer Res. 1994. V.54. P. 3173-3178.

125. Park LK, Brainard MA, Dightman DA, Winans GA. Low levels of intraspecific variation in the mitochondrial DNA of chum salmon (Oncorhynchus keta) //Mol. Mar. Biol. Biotechnol. 1993 Dec; 2 (6): 362-70.

126. Park LK, Moran P, Dightman DA. A chinook salmon PCR-RFLP marker in the p53 locus //Anim Genet. 1996 Apr; 27(2): 127-8.

127. Park LK, Moran P, Dightman DA. A polymorphism in intron D of the chinook salmon growth hormone 2 gene //Anim. Genet. 1995 Aug;26(4):285.

128. Park LK., Nephrol Guidelines on disposing of medical waste in the dialysis clinic //News Issues. 2002 Feb; 16(3): 16-7.

129. Park LK.Nephrol New inspection procedures for bloodborne pathogens take effect //News Issues. 2002 May;16(6):73-5, 79-81.

130. Pauling L., Itano H.H., Singer S.J., et al., Sickle cell anemia molecular disease // Science. 1949. Vol. 110. P. 543-548.

131. Piperakis S.M., Petrakou E., Tsilimigaki S., Sagnou M., Monogiudis E., Haniotakis G., Karkaseli H. and Sarikaki E. Biomonitoring with the comet assay of Greek greenhouse workers exposed to pesticides.// Environ. Mol. Mutagen. 2003, vol. 41, p. 104-110

132. Raymond S. Acrilamid gel electrophorezis // Ann. N.Y. Acad Sci. 1964. Vol. 121. P. 350-365.

133. Rejoining of X-rays induced breaks in humans progeroid cells. Nature, 1967. V. 214. N 5090, P. 790 - 792. Auth.: J.T. Left, I. Calowell, C.J. dean, P. Alexander.

134. Sabatier L., Dutrillaux B. Chromosomal instability. Nature. 1992. V.357. P.548.

135. Saiki R.K., Gelfand D.H., Stoffel S. et al. Premier -directed enzymatic amplification of DNA with termostable DNA polymerase // Science. 1988. Vol. 239. P. 487-491.

136. Salomaa S., Holmberg K., Lindholm C., Mustonen R., Tekkel M., Veidebaum T., Lambert. B. Chromosomal instability in in vivo radiation exposed subjects. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. P.771-779.

137. Sandhu S.S., Bastos C.R., Azini L.E., Tulmann Neto A., RAPD analysis of herbicide-resistant Brasilian rice lines produced via mutagenesis. //Colombo C.Genet Mol Res. 2002 Dec 31; 1 (4):359-70.

138. Santos F., Tyler-Smith C. Reading the human Y-chromosome: Emerging DNA markers and human genetic history // Brazil. J. Genet/ 1996. Vol. 18. P. 669 -672.

139. Schierwater B., Ender A., Schroth W., et al. Arbitrarilly ampliefied DNA in ecology and evolution // DNA markers: Protoclos, application and overview / Ed. G. Caentano-Anolles, P.M. Gressnoff. N.Y.: Wiley, 1997. P. 313 -330.

140. Sega G.A., Sotomayor R.E., Owens J. G. A study of unscheduled DNA synthesis induced by X-ray in the germ cells of male mice. Mutat. Res., 1978. Vol. 49, N2. P. 239-257.

141. Shapiro M.J. Radionuclide scanning and lung lesions. JAMA. 1980. Jule Vol. 4; N 244(1) P. 28.

142. Singer M., Berg P. Genes and genomes. Mill Valley (Calif.): Univ. sci. books, 1991. 929 p.

143. Singh N.P., McCoy M.T., Tice R.R., Schneider E.L. A simple technique for quantitation of low levels of DNA damage in individual cells. Exp Cell Res. 1988 Mar; №175 vol. l,p. 184-91.

144. Smithies O. Zone electrophoresis in starch gels: Group variations in the serum proteins of normal human adult // Biochem. J. 1955. Vol. 61. P. 629 641.

145. Soares E.R., Sheridan W., Haseman J.K., Segall M. Increased frequencies of aberrant sperm as indicator of mutagenic damage in mice. Mutat. Res., 1979. Vol. 64,N l.P. 27-35.

146. Sotomayor R.E., Sega G.A., Cumming R.B. An autoradiographic study of unscheduled DNA synthesis in the germ cells of male mice treated by X-rays and methyl methannesulfonate. -Mutat. Res., 1979. Vol. 62. P. 293-309.

147. Spandidos D.A, Koumantakis E., Sifakis S., Sourvinos G. Microsatellites mutations in spontaneously aborted embryos. // Fertill. Steril. 1998. V. 5 P. 829 -895.

148. Tautz D. Hypervariability of simple sequences as a general source for polymorphic DNA markers // Nucl. Acids Res. 1989. Vol. 17. P. 6463 6471.

149. Thibodeau S.N., Bren G., Schaid D. Microsatellite instability in cancer of the proximal colon// Science. 1993. May 7 Vol. 260(5109) P. 816 9.

150. Transposable elements are stable strurtural components of Drosophila melanogaster heterochromatin / S. Pimpinelli, L. Berloco, L. Fanti et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1995. Vol. 92, № 9. P. 3804-3808.

151. Trott K.R., Teibe A. Lack of specificity of chromosome breaks resulting from radiation-induced genomic instability in Chinese hamster cells // Radiat. Environ. Biophys. 1998. V. 37. P. 173-176.

152. Trott K.R., Jamali M., Manti L., Teibe A. Manifestations and mechanisms of radiation-induced genomic instability in V-79 Chinese hamster cells // Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. P. 787-791.

153. Ullrich R.L., Davis C.M. Radiation-induced Cytogenetic instability in vivo // Radiat. Res. 1999. V. 152. P. 170-173.

154. Ullrich R.L., Ponnaiya B. Radiation-induced instability and its relation to radiation carcinogenesis. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. P. 747-754.

155. Urquhart A., Kimpton C.P., Downes T.J., Gill P. Variation in short tandem repeat sequences — a survey of twelve microsatellite in loci for use as forensic indefication markers. // Int. J. Med. 1994. V. 107. P. 13- 20.

156. Utter F.M. Biochemical genetics and fishery management: An historical perspective // J. Fish. Biol. 1991. Vol. 39, suppl. A. P. 1-20.

157. Van Hooft W.F., Groen A. F., Prints H.H.T. Phylogeography of the African buffalo based on mitochohdrial and Y-chromosomal loci: Pleistocene origin and population expansion of the Cape buffalo subspecies // Mol. Ecol. 2002. Vol. 11. P. 267-279.

158. Vilarino-Guell C., Smith A., Dubrova Yu. Germline mutation induction at mouse repeat DNA loci by chemical mutagens"// Mut. Res., vol. 526, 2003, p. 63-73.

159. Voiculetz N., Shenghe M., Sandulescu T., Unscheduled DNA synthesis in human lymphocytes g-irradiated in vitro.- Stud. Biophys, 1975. Bd. 50, N 2. S. 97 -105.

160. Wallis G.P. Do animal mitochondrial genomes recombine? // Trends Ecol. Evol. 1999. Vol. 14. P. 209- 210.

161. Watson G.E., Lorimore S.A., Clutton S.M., Kadhim M.A., Wright E.G. Genetic factors influencing alpha-particle-induced chromosomal instability. Int. J. Radiat. Biol. 1997. V.71. P. 497-503.

162. Watson G.E., Lorimore S.A.,Wright E.G. Long-term in vivo transmission of alpha-particle-induced chromosomal instability in murine hemopoietic cells. Int. J. of Radiat. Biol. 1996. V. 69. P.175-181.

163. Weber J.L., Wong C. Mutation of human short tandem repeats // Hum. Mol. Genet. 1993. Vol. 2. P. 1123 1128

164. Weinberg H.-Sh., Nevo E., Korol A., Fahima T., Renert G., Shapiro S. Molecular changes in offspring of liquidators who emigrated to Israel from the Chernobyl disaster area. Environmental Health Perspectives. 1997. V. 105. P. 1479.

165. Welsh J., Petersen Ch. and McClelland M. Polymorphism generated by arbitrary primed PCR in the mouse: application to strain identification and genetic mapping.// Nucleic Acids Research, 1991, Vol. 19, № 2, p. 303 306.

166. Welsh S.J., Phillips C.N., Farhi D.C. Detection of BCRabl in acute leukemia by molecular and cytogenetic methods // Mol. Diagn. 1996 Dec; Vol. 1(4): 305 313.

167. Welsh, J. and McClelland. M. Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers//Nucl. Acids Res. 1990, 18, p. 7213-7218.

168. Williams J.G.K., Hanafey M.K., Rafalsky J.A., Tingey S.V. Genetic analisys using random amplified polymorphic DNA markers // Recombinant DNA. San Diego: Acad. Press, Meth. Enzymol.; Vol. 218, 1993. P.704 740.

169. Williams, J. G. K., A. R. Kubelik, K. J. Livak, J. A. Rafalski, and S. V. Tingey. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers. // Nucl. Acids Res. 1990 18:6531.

170. Wojewodzka M., Buraczewska I., Kruszewski M. A modified neutral comet assay: elimination of lysis at high temperature and validation of the assay with anti-single-stranded DNA antibody.//Mutation Research, 2002, vol. 358, P. 9-20.

171. Wright E.G. Inherited and inducible chromosomal instability-a fragile bridge between genome integrity mechanisms and tumorigenesis. J. of Pathol. 1999. V. 187. P. 19-27.

172. Wright E.G. Radiation-induced genomic instability in hemopoietic cells. Int. J. Radiat. Biol. 1998. V. 74. P.681-687.

173. Wright J. M. Mutation at VNTRs: Are minisatellites the evolutionary progeny of microsatellites? // Genome. 1994. Vol. 37. P. 345 347.