Молекулярно-генетический анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат медицинских наук Логинова, Анна Николаевна

• Логинова, Анна Николаевна
• кандидат медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Логинова, Анна Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Ген BRCA1 - супрессор опухолевого роста.

2. Структура и функции гена BRCA 1.

2.1. Структура гена BRCA 1.

2.2. Функции гена BRCA1.

2.2.1. Роль BRCA 1 в репарации ДНК.

2.2.2. PcmbBRCAl в регуляции транскрипции.

2.2.3. Участие BRCA1 в контроле клеточного цикла.

3. Механизмы злокачественной трансформации клетки при дефектах гена BRCA 1.

4. Мутации в гене BRCА1.

4.1. Общие характеристики мутаций.

4.2. Номенклатура вариаций.

4.3. Спектр мутаций в гене BRCA 1.

4.4. Частоты встречаемости мутаций в генах BRCA 1/2.

5. Полиморфизмы в гене BRCA1.

5.1. Критерии полиморфизмов.

5.2. Исследование полиморфизмов в гене BRCA1.

6. Методы идентификации мутаций.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

1. Пациенты.

2. Анализ первичной структуры гена BRCA1.

2.1. Выделение ДНК.

2.2. ПЦР (полимеразная цепная реакция).

2.3. Электрофорез.

2.4. Окраска геля.

2.5. Секвенирование.

2.6. Статистическая обработка результатов.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

1. Выявление особенностей первичной структуры ДНК в гене BRCА1.

2. Спектр мутаций в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы.

3. Спектр мутаций в гене BRCA1 при семейном раке яичников.

4. Гетерогенность семей с раком молочной железы и яичников по встречаемости мутаций в гене BRCA1.

5. Характеристика однонуклеотидных полиморфизмов в rEHEBRCAl.

6. ДНК-диагностика наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетический анализ наследственной формы рака молочной железы и/или яичников»

Рак молочной железы (РМЖ) относится к наиболее распространенным онкологическим заболеваниям. В структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями среди женщин в России рак этой локализации занимает 1-е место (рис.1), а в структуре смертности — 2-е [Аксель и др., 2002].

Ежегодно в мире выявляют около 1 миллиона новых случаев, прогнозируя рост числа заболевших к 2010 году до 1,45 миллиона. Вероятность заболеть раком молочной железы в России на протяжении предстоящей жизни для новорожденной девочки составляет 3,5%, умереть от него - 1,8%. В структуре онкологической заболеваемости женщин доля этой локализации варьирует в экономически развитых странах Европы от 25,7% в Испании до 34,3% во Франции, которая занимает первое ранговое место. В России доля этой формы рака составила в 2000 году 19,3% (рис.1).

Доля заболеваний вследствие высокого генетически обусловленного риска оценивается в 5 -10% всех случаев рака молочной железы на протяжении жизни людей и составляет более трети случаев рака молочной железы в возрасте до 30 лет [Claus et al., 1991]. Наследственная предрасположенность к раку молочной железы проявляется в накоплении случаев указанного заболевания в семьях. Наряду с раком молочной железы в таких семьях нередко наблюдается также рак яичников. Коренные сдвиги в понимании этого явления произошли в последнее десятилетие. Аутосомно-доминантное наследование рака молочной железы было показано в семьях с высоким риском этого заболевания [Newman et al., 1988]. Вскоре в области хромосомы 17q21 был картирован ген BRCA1 [Hall et al., 1990; Claus et al., 1991], выделенный в 1994 г. [Miki et al., 1994], который ответственен за наследственную предрасположенность к раку молочной железы и яичников. Спустя 2 года был клонирован второй ген, обусловливающий наследование повышенного риска рака молочной железы -BRCA2, локализованный в районе хромосомы 13ql2 [Tavtigian et al., 1996]. Результаты клонирования были подтверждены при анализе мутаций в выделенных генах у больных с семейной историей рака молочной железы [Castilla et al., 1994; Tavtigian et al., 1996]. Наибольшая доля наследуемых форм рака молочной железы и/или яичников связана с мутациями в гене BRCA1 [Ford et а1.,1998]. Мутации данного гена являются высокопенетрантными и приводят к 50-90% риску возникновения заболевания [Antoniou et al., 2002].

За прошедший после выделения генов период накоплена значительная информация о наследуемых мутациях в гене BRCAL Известно, в частности, что мутации распределены по всему гену. В то же время, наблюдается популяционная зависимость в распределении мутаций. В этой связи, определение спектра мутаций в различных популяциях важно как с фундаментальной точки зрения, так и для решения практических задач медицинской генетики. Изучение характеристик мутаций на выборках из разных популяций позволит получить фундаментальную информацию по возникновению и распространению мутаций, их связи с клиническими проявлениями в составе разных генотипов. Семьи с наследственной предрасположенностью гетерогенны как по отягощенности раком яичников наряду с раком молочной железы, так и по числу пораженных заболеванием членов семьи. Эти характеристики семей могут быть связаны с вероятностью обнаружения мутации в гене BRCA1. Учитывая различия спектров мутаций в гене BRCA1 в разных популяциях, изучение наследуемых мутаций в связи с указанными характеристиками семей представляет существенный интерес. Такая информация важна, например, для выяснения возможной зависимости риска возникновения рака различной локализации молочная железа кожа желудок ободочная кишка тело матки шейка метки яичник прямая кишка легкое гемобластозы поджелудочная железа 1

J 9,3

Bi-V: 6,6

S,5

5,3 5

4,8 ft A t I

4,2

2/i

-+

10

12.?

15

Женщины

20

25

30

Рис. 1. Структура заболеваемости населения России злокачественными новообразованиями в 2000 году (%) приводится в соответствии с работой Аксель и др., 2002).

1985 1990 1999

Рис. 2. Доля IV стадии в структуре РМЖ по данным работы Трапезников и др., 2001). молочной железы или яичников) от положения мутации в гене [Thompson et al., 2002], а также выяснения взаимосвязи мутаций в данном гене с другими особенностями их клинического проявления. Помимо мутаций в гене BRCA1 обнаруживают ряд полиморфизмов. В ряде работ представлена информация по полиморфизмам в этом гене, но их анализ при семейном раке молочной железы и яичников пока нельзя признать достаточным. В частности, не ясна связь однонуклеотидных полиморфизмов гена BRCA1 с мутациями данного гена.

Определение спектра мутаций в гене BRCA1 и решение других указанных вопросов важно не только с фундаментальной точки зрения, но и для решения практических медико-генетических задач. Актуальность для практики обусловлена в частности тем, что смертность от РМЖ, являющаяся высокой, постоянно растет. Основной причиной высокой смертности больных раком молочной железы и яичников является позднее выявление болезни. Доля больных с IV стадией заболевания в структуре заболеваемости раком молочной железы неуклонно растет (рис.2) [Трапезников и др., 2001]. Следовательно, вопросы своевременной диагностики и профилактики рака молочной железы и яичников весьма актуальны, так как запоздалая клиническая диагностика во многих случаях этого онкологического заболевания обусловливает существенное сокращение продолжительности жизни, несмотря на лечение.

Изучение генов BRCA1 и BRCA2, ответственных за наследственную предрасположенность к раку молочной железы и яичников, создает принципиально новые возможности медико-генетического консультирования и профилактики при этом заболевании. Выявление мутаций в гене BRCA1 обеспечивает объективный критерий для формирования групп риска рака молочной железы с целью его профилактики и своевременной диагностики в случае возникновения заболевания. Более ранний возраст рака молочной железы и его высокая доля вследствие высоко пенетрантных наследуемых мутаций дополнительно акцентирует важность изучения соответствующих генов и практического использования полученных результатов. Создание ДНК-диагностики наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников весьма важно и создает базу для формирования групп риска и развития профилактики на принципиально новой основе.

В связи со сказанным, целью настоящей работы было исследование мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в гене BRCA1 при наследственных формах рака молочной железы и яичников.

Были поставлены следующие задачи:

• изучить спектр мутаций в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы и яичников;

• изучить однонуклеотидные полиморфизмы в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы и яичников и в контрольной выборке;

• изучить связь мутаций в гене BRCA1 с клиническими характеристиками семей, а также провести сравнительный анализ выявленных частот и характеристик мутаций с наблюдаемыми в выборках из других популяций.

Научно-практическая значимость работы.

Научно-практическая значимость результатов настоящей работы обусловлена выявлением спектра мутаций в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы и яичников. Выявленное преобладание одной мутации в спектре имеет существенное значение для практической ДНК-диагностики наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников. Указанный феномен обеспечивает возможность проведения скрининговых исследований на предрасположенность к указанному заболеванию. Разработан оптимизированный способ обнаружения наиболее частых мутаций в гене BRCA1. Способ был применен для выявления мутаций в семьях с повышенным риском к раку молочной железы и яичников.

Новизна полученных результатов.

Впервые изучен спектр мутаций в гене BRCA1 на выборке семейного рака молочной железы и яичников в России. Показано, что частота мутации 5382insC является наибольшей по сравнению с выборками из других популяций. На основании результатов по частотам гаплотипов, охарактеризованных по ОНП, при мутации 5382insC и анализа частот встречаемости данной мутации в европейских странах выдвинута концепция о происхождении мутации 5382insC в европейской части России. Выявленное преобладание мутации 5382insC как при семейном раке молочной железы, так и яичников, а также результаты анализа соотношения семей с РМЖ, включающих и не включающих РЯ, свидетельствует об отсутствии определяющего влияния положения мутации в гене BRCA1 на локализацию рака. Анализ ОНП в гене BRCA1 при мутациях и без мутаций в данном гене среди пробандов с РМЖ или РЯ позволил сформулировать гипотезу об ассоциации гена BRCA1 с другим геном, предположительно, с геном BRCA2.

Положения, выносимые на защиту.

Изучены спектры мутаций и ОНП в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы и яичников. Найденные частоты мутаций при семейном раке молочной железы и яичников составили 32%, при семейном раке только яичников - 86%. В спектре мутаций в гене BRCA1 преобладает мутация 5382insC. Частота данной мутации является наибольшей из выявленных на выборках из других популяций. Мутация 5382insC преобладает как при семейном РМЖ, так и при семейном РЯ. Семьи с раком молочной железы и яичников гетерогенны по частотам встречаемости мутаций в гене BRCA1. Частота мутаций в гене BRCA1 в семьях, включающих четыре и более случаев рака только молочной железы, достоверно понижена по отношению к остальным семьям в выборке. Показано преобладание встречаемости мутаций среди семей с РМЖЯ - мутации найдены у 61% таких семей. Среди семей с РМЖ мутации найдены у 16% семей. Показано различие частот генотипов по однонуклеотидным полиморфизмам между группами пробандов с мутациями и без мутаций в гене BRCA1. Показано, что частоты генотипов в группе пробандов с раком молочной железы или яичников, но без мутаций в гене BRCA1, отличаются от соответствующих популяционных частот.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Логинова, Анна Николаевна

выводы

1. Частота мутаций в гене BRCA1 в семьях, отягощенных раком молочной железы и яичников составила 32% и в семьях с раком только яичников - 86%.

2. В выявленном спектре мутаций в гене BRCA1 при семейном раке молочной железы и яичников преобладает мутация 5382insC с частотой 94%.

3. Гаплотипы гена BRCA1, изученные по однонуклеотидным полиморфизмам, при мутации 5382insC в России совпадают с таковыми среди европейцев. Аналитически выявлено снижение частоты этой мутации по мере удаления от европейской части России. Эти данные могут указывать на происхождение мутации 5382insC в европейской части России.

4. Мутация 5382insC в гене BRCA1 преобладает также при семейном раке только яичников с частотой в спектре, составляющей 50%. Следовательно, одна и та же мутация приводит к семейному раку как молочной железы, так и яичников, что свидетельствует об отсутствии связи типа рака с положением мутации в гене.

5. Соотношение семей с раком молочной железы и раком яичников (РМЖЯ) и с раком только молочной железы (РМЖ) при мутациях в гене BRCA1, найденное в настоящей работе, не отличается достоверно от аналогичного соотношения для выборок из ряда других популяций. Так как указанное соотношение наблюдается при различных спектрах мутаций в гене BRCA1, этот результат дополнительно показывает, что положение мутации в гене BRCA1 не является фактором, определяющим локализацию рака.

6. Семьи с раком молочной железы и яичников гетерогенны по встречаемости мутаций в гене BRCA1. Частота мутаций в семьях, включающих четыре и более случаев рака только молочной железы, достоверно понижена по отношению к остальным семьям в выборке. Частота мутаций среди семей с РМЖЯ (61%) достоверно выше, чем среди семей с РМЖ (16%).

7. Частоты генотипов по однонуклеотидным полиморфизмам между группами пробандов с мутациями и без мутаций в гене BRCA1 различны и отличаются в этих группах от соответствующих популяционных частот. Найденные различия частот могут отражать ассоциацию вариантов гена BRCA1 с вариантами другого гена.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В настоящей работе исследована первичная структура гена BRCA1 в семьях с наследственной предрасположенностью к раку молочной железы и/или яичников, изучена взаимосвязь выявленных мутаций и однонуклеотидных полиморфизмов в гене BRCA1, а также взаимосвязь мутаций с клиническими характеристиками семей. Было найдено, что мутации в гене BRCA1 присутствуют у 32% семей с предрасположенностью к раку молочной железы и яичников и у 59% семей с раком только яичников. В спектре мутаций в гене BRCA1 среди таких семей мы обнаружили существенное преимущество одной мутации в 20 экзоне - 5382insC. При семейном раке молочной железы и яичников доля этой мутации составила 94%, при раке только яичников — 60%. Рассматривая столь высокий процент одной мутации в спектре, следует отметить, что для анализа особенностей первичной структуры гена BRCA1 была использована высокочувствительная методика, позволившая выявить большое количество полиморфизмов. Ряд этих полиморфизмов связан с различными заменами одного нуклеотида, полиморфизмы рассеяны по всему гену и расположены в разных участках анализируемых фрагментов ДНК. Суммарная доля мутаций в гене BRCA1, обнаруженная в нашей выборке, значительно выше, чем суммарная доля мутаций, выявленная в других выборках, при аналогичных критериях их формирования. Например, в странах западной Европы частота мутаций в гене BRCA1 при семейном РМЖ и РЯ, как правило, составляет 20-25%. В то время как при семейном РМЖ и РЯ доля иных, помимо 5382insC, мутаций составляет менее 10%, при раке только яичников доля иных мутаций составляет около 40%.

Столь высокая частота одной мутации не является уникальной особенностью выборки только из нашей популяции. Так, мутация 185deLAG составляет около 80% спектра мутаций в гене BRCA1 среди евреев ашкенази [Brody, Biesecker, 1998]. Мутация 999del5 в гене BRCA2 является доминирующей в Исландии [Barkardottir, et.al., 2001] и составляет 33% всех мутаций в этом гене в Финляндии [Sarantaus, Huusko, 2000].

Мутация 5382insC обнаружена во многих европейских странах (табл.1), причем в некоторых из них является наиболее распространенной. Наиболее резко, по отношению к частоте мутации 5382insC в европейской части России, встречаемость этой мутации убывает в северном и западном направлениях Европы - в Финляндии, Дании, Голландии, Англии представленность мутации 5382insC находится в пределах 3 - 5%. В Швеции мутация 5382insC уже не встречается. Частоты, наиболее близкие к наблюдаемым в России, найдены в Латвии, Польше, Чехословакии, Венгрии и Югославии - 40 - 60%. В Греции и Турции частота мутации 5382insC близка к 30%. В более западных по отношению к России странах - Германии, Франции, Италии встречаемость мутации 5382insC составляет 10 -20%, убывая в указанных пределах к югу от Германии. В Испании мутация 5382insC не найдена. Следовательно, наибольшая распространенность мутации 5382insC наблюдается в юго-западном и южном направлении по отношению к европейской части России, причем отчетливо прослеживается градиент убывания частоты этой мутации, с наиболее плавным убыванием в направлении на Балканы. В странах Азии и Южной Америки мутацию 5382insC не находят.

Найденная нами максимальная из известных частота мутации 5382insC и характеристики ее распространенности в Европе указывают на происхождение этой мутации в европейской части России. В пользу этого говорит также показанная в настоящей работе одинаковость частот гаплотипов по однонуклеотидным полиморфизмам гена BRCA1 при мутации 5382insC в России и среди европейцев. Кроме того, гаплотипирование по микросателлитным маркерам свидетельствует об эффекте основателя в происхождении этой мутации [Neuhausen et al., 1996; Szabo et al., 2003].

В последние годы в мировой литературе активно обсуждается вопрос о возможной связи локализации наследственно обусловленного рака (молочной железы или яичников) с положением мутации в гене BRCA1. В частности, были утверждения о том, что возникновение РМЖ или РЯ зависит от близости мутации к какому-либо из концов гена BRCA1 [Gayther et al., 1995]. В другой работе находили наибольшую вероятность РЯ при положении мутации в средней части гена BRCA1 [Thompson, Easton,2002]. Некоторые авторы не обнаруживали достоверной зависимости обсуждаемого параметра от положения мутации в гене BRCA1 [Stoppa-Lyonnet et al., 1997]. В нашем исследовании оказалось, что одна и та же мутация - 5382insC -является преобладающей и при наследственной форме рака молочной железы или яичников, и при раке только яичников. Более того, проведенный сравнительный анализ клинических характеристик семей с раком молочной железы или яичников и с мутациями в гене BRCA1 в нашей выборке с характеристиками семей ряда выборок из других популяций, показал устойчивость соотношения семей с РМЖЯ и с РМЖ. Указанные соотношения для выборок из других популяций не отличались достоверно от найденного нами соотношения, несмотря на различия спектров мутаций в гене BRCA1 во всех проанализированных выборках. В целом, наши данные показывают, что положение мутации в гене BRCA1 не является определяющим локализацию рака фактором. По-видимому, другие генотипические особенности определяют тип заболевания.

Значение факта обнаружения при семейном раке только яичников двух мутаций, которые не были найдены при семейном раке молочной железы или яичников - 2080delA и 4154delA - в настоящее время не ясно и требует дальнейших исследований.

Выборка семей с раком молочной железы и яичников включает в себя семьи как с РМЖЯ, так и с РМЖ только. Анализ таких семей показал, что частота встречаемости мутаций в гене BRCA1 среди семей с только РМЖ составила - 16%, среди семей с раком молочной железы, где встречается еще и рак яичников - 61%. Следовательно, наличие в семье рака яичников, независимо от присутствия рака молочной железы, с большей вероятностью указывает на наличие мутации в гене BRCA1.

Далее связь характеристик мутаций с клинико-генетическими параметрами семей изучали, исследуя частоты мутаций в семьях определенного типа. В выборке семейного рака молочной железы и яичников 36% составили семьи, отягощенные РМЖЯ. Соответственно, 64% семей были отягощены только РМЖ.

Интересной особенностью распределения мутаций в гене BRCA1 среди семей в нашей выборке оказалась достоверно пониженная их частота в семьях с РМЖ с не менее чем четырьмя случаями данного заболевания. Более низкая частота мутаций в семьях этого типа наблюдается как по отношению к остальной части выборки, так и по отношению к семьям с РМЖЯ с таким же числом случаев заболевания. Проведенная нами статистическая оценка на основе представленных в опубликованных работах данных показала, что, например, во Франции [Stoppa-Lyonnet et al., 1997] частота мутаций в гене BRCA1 в семьях с не менее чем четырьмя случаями только рака молочной железы достоверно ниже, чем частота мутаций в остальной части выборки. В то же время, в Финляндии [Vehmanen et.al., 1997] сопоставление аналогичных характеристик не выявило достоверных отличий в рассматриваемых частотах мутаций в гене BRCA1. Следовательно, феномен пониженной частоты мутаций в гене BRCA1 среди семей с РМЖ с 4 и более случаями характерен для ряда популяций, но не является всеобщим. По-видимому, генотипические особенности некоторых популяций оказывают определенное влияние на проявление мутаций в гене BRCA1.

Указанный факт низкой частоты мутаций в гене BRCA1 среди семей с РМЖ с 4 и более случаями резко контрастирует с тем, что наибольшее число мутаций в гене BRCA1 было найдено в семьях, включающих четыре и более случаев заболевания РМЖЯ - 62% от всех мутаций, в то время как доля таких семей в выборке составила 28%. Выявленное различие в частотах мутаций среди семей с четырьмя и более случаями данных раковых заболеваний, включающих либо не включающих рак яичников, статистически значимо (Р < 0,002, точный критерий Фишера).

Достоверной зависимости частоты мутаций в гене BRCA1 от числа заболевших членов семьи нами не было обнаружено, хотя среди пробандов из семей с РМЖЯ и РМЖ с четырьмя и более случаями заболеваний частота мутаций в гене BRCA1 была примерно в два раза выше, чем в семьях с двумя-тремя случаями. Эти данные соответствуют результатам, полученным на некоторых других выборках [Stoppa-Lyonnet D et al.,1997, Vehmanen et al., 1997]. Видимо, иные характеристики [German Consortium for Hereditary Breast and Ovarian Cancer, 2002], помимо количества пораженных родственников в семье (или дополнительно к данному клиническому параметру), могут достоверно указывать на повышенную вероятность наличия мутации в гене BRCA1.

Как уже отмечалось, в выборке семейного рака молочной железы и яичников частота мутаций в гене BRCA1 составила 32%, при только раке яичников - 86%. В то же время, при анализе частоты мутаций в гене BRCA1 среди семей с РМЖЯ и РМЖ независимо от числа случаев рака в семье показано преобладание встречаемости мутаций среди семей с РМЖЯ - мутации найдены у 61%. Среди семей с РМЖ мутации найдены у 16% семей. Без учета семей с РМЖ с четырьмя и более случаями рака данная доля равна 21%. Следовательно, частота мутаций при РМЖЯ близка частоте мутаций при только РЯ. То есть, особенностью отягощенной раком семьи, определяющей вероятность присутствия мутации в гене BRCA1, является не отсутствие в семье рака молочной железы, как при семейном раке яичников, а возникновение в семье рака яичников, независимо от наличия рака молочной железы.

Вероятность предрасположенности к раку молочной железы и яичников вследствие наследования мутации в гене BRCA1 не связана достоверно с числом заболевших родственников в семье. Значимой характеристикой в этом плане является наличие в семье заболевших раком яичников. Если в семье есть заболевшие раком яичников, то вероятность присутствия мутации в гене BRCA1 существенно выше по сравнению с семьей, в которой у всех заболевших рак локализован только в молочной железе. Как следует из результатов сравнительного анализа, такое соотношение характерно для ряда популяций. Величина этого соотношения сохраняется, несмотря на различие спектров и частот мутаций в гене BRCA1 в выборках из разных популяций. В то же время, в соответствии с нашими данными, вероятность мутаций в гене BRCA1 существенно понижена среди семей, наследующих только рак молочной железы при четырех и более случаях заболевания в семье. Данная закономерность присуща также некоторым другим, но не всем популяциям в Европе.

Помимо мутаций, в гене BRCA1 был найден широкий набор полиморфизмов. Всего было обнаружено 14 вариантов. Экзонных вариантов найдено 8, из них 5 (P871L, E1038G, S1040N, К1183R и S1613G) приводят к замене аминокислоты. Наиболее частыми вариантами структуры гена BRCA1 оказались два варианта, обозначенные как гаплотип А и гаплотип В. Гаплотип А представляет собой последовательность нуклеотидов, относительно которой определяются полиморфные варианты. Этот вариант именуют консенсусным. Гаплотип В содержит 11 вариантов ОНП, находящихся в строгом неравновесии по сцеплению.

Частота гаплотипа В в контрольной выборке составила 32%, что не отличается достоверно от соответствующей частоты среди больных с семейным раком молочной железы и яичников. Наряду с этим, показана статистически достоверная преимущественная ассоциация мутации 5382insC с гаплотипом А.

Сравнение встречаемости генотипов, включающих гаплотип В, среди пробандов с мутациями в гене BRCA1 и без таковых выявило значимые различия. Частота генотипа АА оказалась почти в 6 раз ниже среди пробандов без мутаций (RR = 5,75; Р < 0,008). Частоты гаплотипов в этих группах пробандов также значимо различались. Обнаружено достоверное снижение частоты генотипа АА среди пробандов без мутаций в гене BRCA1 по сравнению с контролем (RR = 3,25; Р = 0,03;).

Следовательно, наблюдаются различия в частотах генотипов как между группами пробандов с мутациями и без мутаций в гене BRCA1, так и в группе пробандов с раком молочной железы или яичников, но без мутаций в гене BRCA1, по сравнению с популяционными частотами.

Причиной сдвига частот генотипов по гену BRCA1 в группе пробандов без мутаций может являться ассоциация его вариантов с вариантами другого гена. Наиболее вероятным кандидатом на роль ассоциирующего гена представляется BRCA2.

Рак молочной железы является одной из главных причин женской смертности от онкологических заболеваний во всём мире. На сегодняшний день не существует достаточно эффективных методов лечения уже сформированного рака молочной железы. Многие опухоли выявляются слишком поздно, поэтому ранняя диагностика рака молочной железы необходима для эффективного лечения, что позволит снизить смертность от этого заболевания.

Одним из эффективных подходов для ранней диагностики и профилактики является ДНК-диагностика наследственных заболеваний, то есть выявление мутаций в генах, ответственных за развитие данного заболевания. Наследственная форма рака молочной железы и яичников в значительном числе случаев является результатом мутаций в гене BRCA1. При обнаружении мутаций в этом гене человек должен находиться под диспансерным наблюдением, что, как минимум, позволит обнаружить заболевание на ранней стадии развития и, тем самым, позволит избежать тяжких последствий.

При исследовании гена BRCA1 у пациентов с семейным накоплением рака молочной железы и яичников в настоящей работе получены результаты, имеющие существенное значение для целей практической ДНК-диагностики наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников. Прежде всего, при изучении спектра мутаций в гене BRCA1 было показано преобладание одной мутации - 5382insC. Этот факт позволяет не только принципиально упростить и удешевить

ДНК-диагностику, с помощью, например, разработанного в данной работе способа, но и проводить скрининговые исследования для формирования группы повышенного риска. Полученные данные по связи клинических и генетических характеристик семей с вероятностью наличия мутации в гене BRCA1, позволяют повысить эффективность ДНК-диагностики и медико-генетического консультирования при семейном раке молочной железы и яичников.

Разработанные подходы были применены при ДНК-диагностике наследственной предрасположенности к раку молочной железы и яичников. Наряду с определением мутаций в гене BRCA1 у больных РМЖ или РЯ, наличие предрасположенности к указанным заболеваниям выявляли у здоровых членов семей с наследственным отягощением. Последнее позволяет формировать группу повышенного риска для проведения профилактических мероприятий.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Логинова, Анна Николаевна, 2004 год

1. Аксель Е.М., Давыдов М.И. Статистика заболеваемости и смертности от злокачественных новообразований в 2000 году// сборник "Злокачественные новообразования в России и странах СНГ в 2000" г. Москва, РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. 2002. - С.85-106.

2. Горбунова В.Н., Баранов B.C.: Введение в молекулярную диагностику и генотерапию наследственных заболеваний. СПб. 1997.

3. Комарова Л.Е. Скрининг рака молочной железы// Современная онкология. -2002. Т.4, №2.

4. Трапезников Н.Н., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ// М. 2001.

5. Шайн А.А. Опухоли грудной клетки. Тюмень: Поиск. - 2001. - Т.2. - С. 5-87.

6. Antoniou А.С., Gayther S.A., Stratton J.F., Ponder B.A.J., Easton D.F. Risk models for familial ovarian and breast cancer// Genet. Epidemiol. 2000. - V.18. - P.173-190.

7. Antoniou A.C., Pharoah P.D.P., McMullan G., et al. A comprehensive model for familial breast cancer incorporating BRCA1, BRCA2 and other genes// British Journal of Cancer. 2002. - V.86. - P.76-83.

8. Balci A., Huusko P., Paakkonen K. Mutation analysis of BRCAI and BRCA2 in Turkish cancer families: a novel mutation BRCA2 3414del4 found in male breast cancer// Eur. J. Can. 1999. - V.35, № 5. - P.707-710.

9. Barkardottir R. В., Sarantaus L., Arason A., et al. Haplotype analysis in Icelandic and Finnish BRCA2 999del5 breast cancer families// Europ. J. Hum. Genet. 2001. -V.9. - P.773-779.

10. Beaudet A.L., Tsui L.C. A suggested nomenclature for designating mutations// Hum. Mutat. 1993. - V.2. - P.245-248.

11. Bell D.W., Erban J., Sgroi D.C., Haber D.A. Selective loss of heterozygosity in multiple breast cancers from a carrier of mutations in both BRCAI and BRCA2// Cancer Res. 2002. - V.62, № 10. - P. 2741-2743.

12. Bergthorsson J.T., Ejlertsen В., Olsen J.H., et al. BRCAI and BRCA2 mutation status and cancer family history of Danish women affected with multifocal or bilateral breast cancer at a young age// J. Med. Genet. 2001. - V.38. - P.361-368.

13. Blesa J.R., Hernandez-Yago J. Adaptation of conformation-sensitive gel•rwelectrophoresis to an ALFexpress DNA sequencer to screen BRCAI mutations// Bio Techniques. -2000. -V.28. P. 1019-1025.

14. Brody L.C., Biesecker B.B. Breast cancer susceptibility genes BRCAI and BRCA2// Rev. in Molec. Medicine. 1998. - V.77, № 3. - P.208-226.

15. Castilla L. H., Couch F. J., Erdos M. R., et al. Mutations in the BRCAI gene in families with early-onset breast and ovarian cancer// Nature Genet. 1994. - V.8. -P.387-391.

16. Chapman M.S., Verma I.M. Transcriptional activation by BRCAI// Nature 1996. -V.382. - P.678-679.

17. Chen C.F., et al. The nuclear localization sequences of the BRCA1 protein interact with the importin-alpha subunit of the nuclear transport signal receptor// J. Biol. Chem. 1996. - V.271. - P.32863-32868.

18. Chen J., et al. Stable interaction between the products of the BRCA1 and BRCA2 tumor suppressor genes in mitotic and meiotic cells// Mol. Cell. 1998. - V.2. -P.317-328.

19. Claus E. В., Risch N., Thompson W. D., et al. Genetic analysis of breast cancer in the cancer and steroid hormone study// Am. J. Hum. Genet. 1991 - V.48. - P. 232-242.

20. Cortez D., et al. Requirement of ATM-dependent phosphorylation of Brcal in the DNA damage response to double-strand breaks// Science. 1999. - V.286. - P.l 162— 1166.

21. Csokay В., Tihomirova L., Stengrevics A., Sinicka O., Olah E. Strong founder effects in BRCA1 mutation carrier breast cancer patients from Latvia// Hum. Mut. Mutation in Brief. Online. 1999. - V.258. - P. 1-6.

22. Curci A., Capasso I., Romano A., et al. Characterization of 2 novel and 2 recurring BRCA1 germline mutations in breast and/or ovarian carcinoma patients from the area of Naples// Int. J. One. 2002. - V.20, № 5. - P.963-970.

23. De Jong M.M., Nolte I.M., te Meerman G. J. et al. Genes other than BRCA1 and BRCA2 involved in breast cancer susceptibility// J. Med. Genet. 2002. - V.39. -P.225-242.

24. Deffenbaugh A. M., Frank T.S., Hoffman M., Cannon-Albright L., Neuhausen S.L. Characterization of common BRCA1 and BRCA2 variants// Gen. Test. 2002. - V.6, №2.-P.l 19-121.

25. Deng C.X. Roles of BRCA1 in centrosome duplication// Oncogene. 2002. - V.21. -P.6222-6227.

26. Deng C.X., Brodie S.G. Roles of BRCA1 and its interacting proteins// Bioessays. -2000. V.22. - P.728-737.

27. Deng C.X., Wang R.-H. Roles of BRCA 1 in DNA damage repair: a link between development and cancer// Hum. Mol. Genet. 2003. - V.12. - P.l 13-123.

28. Diez O., Cortes J., Domenech M. BRCA1 mutation analysis in 83 Spanish breast and breast/ovarian cancer families// Int. J. Can. 1999. - V.83. - P.465-469.

29. Dunning A.M., Chiano M., Smith N. R., et. al. Common BRCA1 variants and susceptibility to breast and ovarian cancer in the general population// Hum. Mol. Gen. 1997. - V.6, №2. - P.285-289.

30. Durocher F., Shattuck-Eidens D., McClure M., et. al. Comparison of BRCA 1 polymorphisms, rare sequence variants and/or missense mutations in unaffected and breast/ovarian cancer populations// Hum. Mol. Genet. 1996. - V.5, №6. - P.835-842.

31. Elledge S.J., Amon A. The BRCA1 suppressor hypothesis: An explanation for the tissue-specific tumor development in BRCA1 patients// Can. Cell. 2002. - V.l. -P.129-132.

32. Ellis D., Greenman J., Hodgson S., et. al. Low prevalence of BRCA1 mutations in early onset breast cancer without family history// J.Med.Genet. 2000. - V.7. -P.792-794.

33. Fan S., Ma Y.X., Wang C., et. al. Role of direct interaction in BRCA1 inhibition of estrogen receptor activity// Oncogene. 2001. - V.20. - P.77-87.

34. Fan S., Wang J., Yuan R., et. al. BRCA1 inhibition of estrogen receptor signaling in transfected cells// Scien. 1999. - V.284. -P.1354-1356.

35. Fleming M.A., Potter J.D., Ramirez C. J., Ostrander G.K., Ostrander E.A. Understanding missense mutations in the BRCA1 gene: an evolutionary approach// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - V.l00, № 3. - P. 1151-1156.

36. Ford D., Easton D. F., Stratton M., et al. Genetic heterogeneity and penetrance analysis of the BRCA1 and BRCA2 genes in breast cancer families// Am. J. Hum. Genet. 1998. - V.62. - P.676-689.

37. Ganguly A., Williams C. Detection of mutations in multi-exon genes: comparision of conformation sensitive gel electrophoresis and sequencing strategies with respect to cost and time for finding mutations// Hum. Mutat. 1997. - V.9. - P.339-343.

38. Gao Q., Adebamowo C.A., Fackenthal J. Protein truncating BRCA1 and BRCA2 mutations in African women with pre-menopausal breast cancer// Hum. Genet. -2000. V. 107. - P. 192-194.

39. Gayther S. A., Harrington P., Russell P., Kharkevich G., Garkavtseva R. F., Ponder B. A. J. Frequently occurring germ-line mutations of the BRCA1 gene in ovarian cancer families from Russia// Am. J. Hum. Genet. 1997. - V.60. - P.1239-1242.

40. Gayther S. A., Warren W., Mazoyer S., et al. Germline mutations of the BRCA1 gene in breast and ovarian cancer families provide evidence for a genotype-phenotype correlation// Nature Genet. 1995. - V.l 1. - P.428-433.

41. Ginolhac S.M., Gad S., Corbex M., et. al. BRCA1 wild-type allele modifies risk of ovarian cancer in carriers of BRCA1 germ-line mutations// Can. Epidem., Biom.& Prev. 2003. - V.12. - P.90-95.

42. Goelen G., Teugels E., Bonduelle M., et. al. High frequency of BRCA1/2 germline mutations in 42 Belgian families with a small number of symptomatic subjects// J. Med. Gen. 1999. - V.36. - P.304-308.

43. Gorski В., Byrski Т., Huzarski Т., Jakubowska. Founder mutations in the BRCA1 gene in Polish families with breast-ovarian cancer// Am. J. Hum. Genet. 2000. -V.66. - P.1963-1968.

44. Hall J. M., Lee M. K., Newman В., et al. Linkage of early-onset familial breast cancer to chromosome 17q21// Science 1990. - V.250. - P.1684-1689.

45. Hamann U., Brauch H., Garvin A. M., Bastert G., Scott R.J. German family study on hereditary breast and/or ovarian cancer: germline mutation analysis of the BRCA1 gene// Genes, Chromos.& Cancer. 1997. - V.18. - P. 126-132.

46. Harkin D.P., Bean J.M., Miklos D., et al. Induction of GADD45 and JNK/SAPK-dependent apoptosis following inducible expression of BRCA1// Cell. 1999. -V.97. -P.575-586.

47. Hartman A.R., Ford J.M BRCA1 induces DNA damage recognition factors and enhances nucleotide excision repair// Nat.Genet. 2002. - V.32. - P. 180-184.

48. Healey С. S., Dunning A. M., Teare M. D., et al. A common variant in BRCA2 is associated with both breast cancer risk and prenatal viability// Nature Genet. 2000. - V.26. - P.362-364.

49. Hoffman J. D., Hallam S.E., Venne V.L., Lyon E., Ward K. Implications of a novel cryptic splice site in the BRCA1 gene// Am. J. Med. Genet. 1998. - V.80. - P. 140144.

50. Hollander M.C., Sheikh M.S., Bulavin D.V., et al. Genomic instability in Gadd45a-deficient mice//Nat. Genet. 1999. - V.23. - P.176-184.

51. Hsu L.C., White R.L. BRCA1 is associated with the centrosome during mitosis// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V.95. - P. 1283-12988.

52. Hu Z., Wu J., Liu C.H., et. al. The analysis of BRCA1 mutations in eastern Chinese patients with early onset breast cancer and affected relatives// Hum. Mut. 2003. -V.22, № 1.-P.104.

53. Huber L.J., Yang T.W., Sarkisian C.J., Master S.R., Deng C.X., Chodosh L.A. Impaired DNA damage response in cells expressing an exon 11-deleted murine Brcal variant that localizes to nuclear foci// Mol. Cell Biol. 2001. - V.21. - P.4005-4015.

54. Huttley G. A., Easteal S., Southey M. C., et al. Adaptive evolution of the tumour suppressor BRCA1 in humans and chimpanzees// Nature Genet. 2000. - V.25. -P.410-413.

55. Janezic S.A., Ziogas A., Krumroy L. M., et. al. Germline BRCA1 alterations in a population-based series of ovarian cancer cases// Hum. Mol. Genet. 1999. - V.8, №5.-P.889-897.

56. Jara L., Ampuero S., Seccia L., Bustamante M., Blanco R., Ojeda J.M. Analysis of 5382insC (BRCA1) and 6174delT (BRCA2) mutations in 382 healthy Chilean women with a family history of breast cancer// Biol. Res. 2002. - V.35, № 1. -P.85-93.

57. Jasin M. Homologous repair of DNA damage and tumorigenesis: the BRCA connection// Oncogene. 2002. - V.21. - P.8981-8993.

58. Jensen R, Thompson M., Jetton Т., et al. BRCA1 protein products—antibody specificity. functional motifs . and secreted tumor suppressors—reply// Nat. Genet. 1996. - V.13. - P.269-272.

59. Jin Y., Xu X. L., Yang M.C.W., et. al. Cell cycle-dependent colocalization of BARD1 and BRCA1 proteins in discrete nuclear domains// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997.- V.94.- P. 12075-12080.

60. Johannsson O., Loman N., МбИег Т. Incidence of malignant tumours in relatives of BRCA1 and BRCA2 germline mutation carriers// Eur. J. Of Can. 1999. -V.35, №8. -P.1248-1257.

61. Kinzler K.V. and Vogelstein B. Cancer susceptibility genes. Gatekeepers and caretakers. //Nature. 1997. V. 386. P. 761-763.

62. Konstantopoulou I., Kroupis C., Ladopoulou A., Pantazidis A., Boumba D., Lianidou E.S. BRCA1 mutation analysis in breast/ovarian cancer families from Greece// Hum. Mut. 2000. - V. 16, №3. P.272-273.

63. Kozlowski P., Sobczak K., Jasinska A., Krzyzosiak W.J. Allelic imbalance of BRCAI transcript in the IVS20 12-bp insertion carrier// Hum. Mut. 2000. - №.366. -P. 1-6. Online.

64. Ladopoulou A., Kroupis C., Konstantopoulou I., Ioannidou-Mouzaka L., Schofield A.C. Germline BRCA1/BRCA2 mutations in Greek breast/ovarian cancer families: 5382insC is the most frequent mutation observed// Can. Lett. 2002. - V.185, №1. -P.61-70.

65. Li S., Tseng H.-M., Yang T.-P. Molecular characterization of germline mutations in the BRCAI and BRCA2 genes from breast cancer families in Taiwan// Hum. Genet. 1999. -V. 104. -P.201-204.

66. Liede A., Malik I.A., Aziz Z., et. al. Contribution of BRCAI and BRCA2 mutations to breast and ovarian cancer in Pakistan// Am. J. Hum. Genet. 2002a. - V.71, №3. -P.595-606.

67. Liede A., Narod S. A., et. al. Hereditary breast and ovarian cancer in Asia: genetic epidemiology of BRCAI and BRCA2// Hum. Mut. 2002b. - V.20. - P.413-424.

68. Lorick K.L., et al. RING fingers mediate ubiquitinconjugating enzyme (E2)-dependent ubiquitination// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V.96. - P.l 136411369.

69. Machackova E., Foretova L., Navratilova M., Valik D., Claes K., Messiaen L. A high occurrence of BRCA1 and BRCA2 mutations among Czech hereditary breast and breast-ovarian cancer families// Cas. Lek. Cesk. 2000. - V.139, №20. - P.635-637.

70. Manguoglu A.E., Luleci G., Ozcelik Т., et al. Germline mutations in the BRCA1 and BRCA2 genes in Turkish breast/ovarian cancer patients// Hum. Mutat. 2003. -V.21, №4. -P.444-445.

71. Maquat L.E. The power of point mutations// Nature Genet. 2001. - V.21. - P.5-6.

72. Miki Y., et al. A strong candidate for the breast and ovarian cancer susceptibility gene BRCA1// Science. 1994. - V.266. - P.66-71.

73. Moller P., Heimdal K., Apold J., et.al. Genetic epidemiology of BRCA1 mutations in Norway// Eur. J. Cancer. 2001. - V.37, №18. - P. 2428-2434.

74. Monteiro A.N., August A., Hanatusa H. Evidence for a transcriptional activation function of BRCA1 C-terminal region// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996. - V.93. -P.13595-13599.

75. Monteiro A.N. A. BRCA1: the enigma of tissue-specific tumor development// TRENDS in Gen. 2003. - V. 19, №.6. - P.312-315.

76. Monteiro A.N.A., August A., Hanafusa H. Common BRCA1 variants and transcriptional activation// Am. J. Hum. Genet. 1997. - V.61. - P.761-762.

77. Nadeau G., Boufaied N., Moisan A., et al. BRCA1 can stimulate gene transcription by a unique mechanism// EMBO Reports. 2000. - V.l, № 3. - P.260-265.

78. Neuhausen S., Gilewski Т., Norton L., et al. Recurrent BRCA2 6174delT mutations in Ashkenazi Jewish women affected by breast cancer// Nature Genet. 1996. - V.13. -P. 126-128.

79. Newman В., Austin M.A., Lee M., King M.C. Inheritance of human breast cancer: Evidence for autosomal dominant transmission in high-risk families// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988. - V.85. - P.3044-3048.

80. Ouchi Т., Monteiro A.N., August A., Aaronson S.A., Hanafusa H. BRCA1 regulates p53-dependent gene expression// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. - V.95. -P.2302-2306.

81. Papp J., Raicevic L., Milasin J., Dimitrijevic В., Radulovic S., Olah E. Germline mutation analysis of BRCA1 and BRCA2 genes in Yugoslav breast/ovarian cancer families// One. Rep. 1999. -V.6, № 6. -P.1435-1438.

82. Perkowska M, BroZek I, Wysocka B, et al. BRCA1 and BRCA2 mutation analysis in breast-ovarian cancer families from northeastern Poland// Hum Mutat. 2003. -V.21, №5. -P.553-554.

83. Phelan C.M., Rebbeck T.R., Weber B.L., et al. Ovarian cancer risk in BRCA1 carriers is modified by the HRAS1 variable number of tandem repeats (VNTR) locus// Nat. Genet. 1996. - V.12. - P.309-311.

84. Pohlreich P., Stribrna J., Kleibl Z., et al. Mutations of the BRCA1 gene in hereditary breast and ovarian cancer in the Czech Republic// Med. Princ. Pract. 2003. - V. 12, №1. -P.23-29.

85. Presneau N., Laplace-Marieze V., Sylvain V., et al. New mechanism of BRCA1 mutation by deletion/insertion at the same nucleotide position in three unrelated French breast/ovarian cancer families// Hum. Genet. 1998. - V. 103. - P.334-339.

86. Pyne M.T., Pruss D., Ward B.E., Scholl T. A characterization of genetic variants in BRCA1 intron 8 identifies a mutation and a polymorphism// Mut. Res. Genom. -1999. V.406. - P.101-107.

87. Rebbeck T.R., Kantoff P.W., Krithivas K., et al. Modification of breast cancer risk in BRCA1 variant carriers by the androgen receptor CAG repeat polymorphism// Am. J. Hum. Genet. 1999a. -V.64. - P. 1371-1377.

88. Rebbeck T.R., Kantoff P. W., Krithivas K., et al. Modification of breast cancer risk in BRCA1 mutation carriers by the AIB1 gene// Proc. Amer. Assoc. Cancer Res. -1999b.-V.40.-P.1293.

89. Rhei E., Bogomolniy F., Federici M.G., et. al. Molecular genetic characterization of BRCA1- and BRCA2-linked hereditary ovarian cancers// Can. Res. 1998. - V.58, №15.-P.3193-3196.

90. Rostagno P., Gioanni J., Garino E. et. al. A mutation analysis of the BRCA1 gene in 140 families from southeast France with a history of breast and/or ovarian cancer// J. Hum. Gen. 2003. - V.48. - P.362-366.

91. Ruiz-Flores P., Sinilnikova O.M., Badzioch M. BRCA1 and BRCA2 mutation analysis of early-onset and familial breast cancer cases in Mexico// Hum. Mut. -2002. V.20, №6. - P.474-475.

92. Sambrook, Fritsch, Maniatis. Molecular cloning. // Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1989.

93. Santarosa M., Dolcetti R, Magri M.D., Crivellari D., Tibiletti M.G., Gallo A. BRCA1 and BRCA2 genes: role in hereditary breast and ovarian cancer in Italy// Int. J. Can.-1999.-V.83,№ 1.-P.5-9.

94. Sarantaus L., Huusko P., Eerola H., et. al. Multiple founder effects and geographical clustering of BRCA1 and BRCA2 families in Finland// Eur. J. Of Hum. Gen. 2000.- V.8. — P.757-763.

95. Sasano H., Harada N. Intratumoral aromatase in human breast, endometrial and ovarian malignancies// Endocr.Rev. 1997. - V.19. - P.593 607.

96. Saxena S., Szabo C.I., Chopin S. BRCA1 and BRCA2 in Indian breast cancer patients// Hum. Mutat. 2002. - V.20, № 6. - P.473-474.

97. Scholl Т., Pyne M.T., Ward В., Pruss D. Biochemical and genetic characterization shows that the BRCA1IVS20 insertion is a polymorphism// J. Med. Genet. 1999. -V.36. -P.571-572.

98. Scully R. et al. Dynamic changes of BRCA1 subnuclear location and phosphorylation state are initiated by DNA damage// Cell. 1997a. - V.90. - P.425^35.

99. Scully R., Anderson S. F., Chao D. M., et al. BRCA1 is a component of the RNA polymerase II holoenzyme// Proc. Nat. Acad. Sci. 1997b. - V.94. - P.5605-5610.

100. Scully R., et al. Association of BRCA 1 with Rad51 in mitotic and meiotic cells// Cell.- 1997c. V.88. - P.265-275.

101. Shattuck-Eidens D., Oliphant A., McClure M., et al. BRCA1 sequence analysis in women at high risk for susceptibility mutations// JAMA. 1997. - V.278, №15 -P. 1242-1250.

102. Shin H.A., Nathanson K.L., Seal S., et.al. BRCAI and BRCA2 mutations in breast cancer families with multiple primary cancers// Clin. Cane. Res. 2000. - V.6. -P.4259-4264.

103. Shinohara A., Ogawa H., Matsuda Y., Ushio N., Ikeo K.,Ogawa T. Cloning of human, mouse and fission yeast recombination genes homologous to RAD51 and recA// Nat. Genet. 1993. - V.4. -P.239-243.

104. Shinohara A., Ogawa H.,Ogawa T. Rad51 protein involved in repair and recombination in S. cerevisiae is a RecA-like protein// Cell. 1992. - V.69. - P.457-470.

105. Slatkin M. Allele age and a test for selection on rare alleles// Phil. Trans. R. Soc. Lond. 2000. - V.355. - P.1663-1668.

106. Smith, M.L., Ford, J.M., Hollander, M.C., et al. P53-mediated DNA repair responses to UV radiation: studies of mouse cells lacking p53, p21, and/or gadd45 genes// Mol. Cell Biol. 2000. - V.20. - P.3705-3714.

107. Somasundaram K., et al. Arrest of the cell cycle by the tumor suppressor BRCAI requires the CDK-inhibitor p21WAF/Cipl// Nature. 1997. - V.389. - P. 187-190.

108. Stoppa-Lyonnet D., Laurent-Puig P., Laurent E. et al. BRCAI sequence variations in 160 individuals referred to a breast/ovarian family cancer clinic// Am. J. Hum. Genet. 1997.-V.60.-P.1021-1030.

109. Szabo C., Neuhausen S., Deville P., et. al. BRCAI founder mutations: population genetics and genome evolution// Materials of the Breast Cancer Linkage Consortium (BCLC), Madrid, 2003, P.25.

110. Takimoto R., MacLachlan Т.К., Dicker D.T., Niitsu Y., Mori Т., el-Deiry W.S. BRCAI transcriptionally regulates damaged DNA binding protein (DDB2) in the

111. DNA repair response following UV-irradiation// Cancer Biol. Ther. 2002. - V. 1. -P. 177-186.

112. Tavtigian S.V., Simard J., Rommens J., et al. The complete BRCA2 gene and mutations in chromosome 13q-linked kindreds// Nature Genet. 1996. - V.l2. -P.333-337.

113. Thompson D., Easton D., Breast Cancer Linkage Consortium. Variation in BRCA1 cancer risks by mutation position// Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2002. -V.ll, № 4. - P. 329-336.

114. Thorlacius S., Sigurdsson S., Bjarnadottir H., et al. Study of a single BRCA2 mutation with high carrier frequency in a small population// Am. J. Hum. Genet. -1997. V.60. - P.1079-1084.

115. Van der Looij M., Szabo C., Besznyak I. et al. Prevalence of founder BRCA1 and BRCA2 mutations among breast and ovarian cancer patients in Hungary// Int. J. Cancer. 2000. - V.86. - P.737 - 740.

116. Vehmanen P., Friedman L.S., Eerola H. Low proportion of BRCA1 and BRCA2 mutations in Finnish breast cancer families: evidence for additional susceptibility genes// Hum. Mol. Gen. 1997. - V.6, №13. - P.2309-2315.

117. Venkitaraman A.R. Cancer susceptibility and the functions of RCA1 and BRCA2// Cell. 2002. - V. 108. - P. 171-182.

118. Verhoog L.C., Van den Ouweland A.M.W., Berns E., et. al. Large regional differences in the frequency of distinct BRCA1/BRCA2 mutations in 517 Dutch breast and/or ovarian cancer families// Eur. J. of Can. 2001. - V.37. - P.2082-2090.

119. Wagner T.M., Moslinger R.A., Muhr D., et al. BRCA1-related breast cancer in Austrian breast and ovarian cancer families: specific BRCA1 mutations and pathological characteristics// Int. J. Cancer. 1998. - V.77, №3:354-60.

120. Wang Q., Zhang H., Kajino K., Greene M.I. BRCA1 binds cMyc and inhibits its transcriptional and transforming activity in cell// Oncogene. 1998. - V.17. -P. 1939-1948.

121. Wang Y., Cortez D., Yazdi P., Neff N., Elledge S.J., Qin J. BASC, a super complex of BRCA1-associated proteins involved in the recognition and repair of aberrant DNA structures// Genes Dev. 2000. - V. 14. - P.927-939.

122. Weinberg RA. Tumor suppressor genes// Science. 1991. - V.254. - P. 1138-1146.

123. Welcsh P. L., Owens K. N., King M.-C. Insights into the functions of BRCA1 and BRCA2// TIG. 2000. - V.16, №2. - P.69-74.

124. Wu L.J.C., Wang Z.W., Tsan J.T., et al. Identification of a RING protein that can interact in vivo with the BRCA1 gene product// Nat. Genet. 1996. - V. 14. - P.430-440.

125. Xu X. et. al. Centrosome amplification and a defective G2-M cell cycle checkpoint induce genetic instability in BRCA1 exon 11 isoform-deficient cells// Mol. Cell. -1999. V.3. - P.389-395.

126. Yazici H, Bitisik O, Akisik E, et al. BRCA1 and BRCA2 mutations in Turkish breast/ovarian families and young breast cancer patients// Br. J. Can. 2000. - V.83, №6. - P.737-742.

127. Zheng L., Annab L.A., Afshari C.A., Lee W.H., Boyer T.G. BRCA1 mediates ligand-independent transcriptional repression of the estrogen receptor// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. - V.98. - P.9587-9592.

128. Zhi X., Szabo С., Chopin S. BRCA1 BRCA2 sequence variants in Chinese breast cancer families// Hum. Mutat. 2002. - V.20, №6. - P.474.

129. Zhong Q., Chen C.F., Li S., et al. Association of BRCA1 with the hRad50-hMrel 1-p95 complex and the DNA damage response// Science. 1999. - V.285. - P.747-750.