Молекулярно-генетические основы предрасположенности к варикозному расширению вен и тромботическим осложнениям тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Шейдина, Анна Михайловна

• Шейдина, Анна Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шейдина, Анна Михайловна

Список сокращений

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Факторы, способствующие развитию варикозного расширения

1.2. Осложнения варикозной болезни.

1.3. Наследственные тромбофилии

1.4. Роль эндотелия в развитии варикозной болезни и тромбообразовании

1.5. Гомоцистеин, как фактор риска повреждения эндотелия.

1.6. Факторы влияющие на метаболизм гомоцистеина

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Характеристика обследуемых групп

2.2. Выделение ДНК из клеток крови человека

2.3. Энзиматическая амплификация и рестрикционный анализ

2.4. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Результаты исследования

3.1. Контрольная группа.

3.2. Группа больных с варикозным расширением вен, без тромботических осложнений

3.3. Группа больных с варикозным расширением вен, имеющих тромботические осложнения.

3.4. Группа больных с тромбозами глубоких вен и тромбофлебитами без варикозного расширения вен в анамнезе.

3.5. Ген-генные взаимодействия

3.6. Определение корреляции исследуемых генотипов с биохимическими показателями гемостаза у пациентов с венозными тромбозами

Обсуждение результатов

Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетические основы предрасположенности к варикозному расширению вен и тромботическим осложнениям»

Достижения молекулярной биологии по созданию технологий выделения индивидуальных генов из различных биологических объектов позволили за последние 15 лет кардинально изменить лицо современной медицины. Появился новый ее раздел, получивший название молекулярной медицины. Уже на настоящем этапе молекулярная медицина пронизывает все разделы клинических областей, не говоря о медико-биологических науках. Именно с помощью методов молекулярной медицины была расшифрована этиология многих моногенных заболеваний человека, что является основой их современной профилактики и, возможно, в недалеком будущем эффективной коррекции с помощью генотерапии. Определенные успехи достигнуты также и в познании патофизиологических механизмов, так называемых, полигенных заболеваний, когда в основе патологического процесса лежит взаимодействие ряда генетических детерминант с факторами внешней среды. Идеологически для анализа природы патологического процесса при полигенных заболеваниях молекулярными генетиками используется информация, накопленная в патохимии и патофизиологии конкретного заболевания. Для анализа выбираются те гены, чьи продукты оперируют в метаболических циклах и нарушения которых, предположительно лежат в основе развития патологического процесса.

Одним из важных разделов медицинской науки является выяснение молекулярных механизмов развития варикозного расширения вен (ВРВ). Следует отметить крайне скупую информацию, существующую до настоящего времени, по генетическим аспектам этой патологии. За исключением единичных популяционных исследований, в которых подчеркивается существенная роль семейного фактора в ее развитии, нам не встретилось публикаций, посвященных данному вопросу (Соrnu-Thenard A. et al.,1994; Matousek V. et al.,1974; Ivankovic M. et al., 1991). До настоящего времени нет единого мнения о возможном влиянии ВРВ на формирование предрасположенности к тромбозам.

Следует отметить, что благодаря достижениям молекулярной медицины, за последние пять лет были расшифрованы многие этиологические факторы, так называемых, наследственных тромбофилий. Наследственные тромбофилии - широко распространенные патологические состояния. К настоящему времени известно около 10 генетических детерминант, оперирующих как в системе свертывания крови, так и в антикоагулянтном звене гемостаза, дефекты которых определяют тромбофилию (Rosendall F.R., 1997, Rosendall F.R., 1999). Кроме этого, как выяснилось, в генезе тромбофилий существенную роль занимают наследственные дефекты белков рецепторов тромбоцитов, в том числе тромбоцитарного гликопротеина Ша (Newman P.J. et al., 1989). Исключительно важную роль в поддержании нормального гемостаза имеет эндотелий сосудов. Одним из факторов, приводящим к его повреждению и, соответственно, к повышенному тромбообразованию, является увеличение концентрации гомоцистеина. В большинстве случаев в основе повышения концентрации гомоцистеина лежат наследственные дефекты ферментативных систем реметилирования в метионин (Finkelstein J.D., 1998; Hankey G.J., Eikelboom J.W., 1999).

Выяснение механизмов тромбофилических состояний позволяет с принципиально новых позиций подойти к вопросу о возможном влиянии варикозного расширения вен на тромбообразование. Если ВРВ само по себе не является этиологическим фактором в генезе развития тромбообразования, то оно не будет обладать аддитивным эффектом на этот процесс у лиц, имеющих одновременно как ВРВ, так и дефект одного из генов, обуславливающих тромбофилию и наоборот, если оно обладает тромбофилическим потенциалом, то произойдет суммация с несомненным развитием тромботического процесса. Все вышесказанное и явилось основой проведения настоящей работы.

Цель исследования:

Целью данного исследования явился анализ молекулярно-генетических факторов риска, предрасполагающих к развитию варикозного расширения вен и тромботическим осложнениям при варикозном расширении вен.

Задачи исследования включали:

1.Определить частоты встречаемости аллельных вариантов генов MTHFR, GPIIIa, FV, FVII в популяции г. Санкт-Петербурга. 2.Определить частоты встречаемости аллельных вариантов вышеперечисленных генов среди больных варикозным расширением вен, не имевших тромботических осложнений.

3.Определить частоты встречаемости аллельных вариантов вышеперечисленных генов среди больных варикозным расширением вен, имевших тромботические осложнения.

4.0пределеть частоты встречаемости аллельных вариантов вышеперечисленных генов у больных с венозными тромбозами.

Научная новизна полученных результатов:

1.Впервые дана оценка распределения аллельных вариантов генов С677Т MTHFR, С1565Т GPIIIa, G169XA (R506Q) FV,-323ins FVII в популяции г. Санкт-Петербурга.

2.Впервые в мировой практике проведен анализ частоты встречаемости аллелей генов MTHFR, GPIIIa, FV, FVII у больных варикозным расширением вен и показано увеличение частоты встречаемости мутации С677Т гена MTHFR среди больных с семейной формой варикозного расширения вен, что позволяет сделать предположение о значимости дисфункции эндотелия в патогенезе ВРВ.

3.Впервые показано, что наличие замены в 677 положении гена MTHFR или С1565Т гена GPIIIa у пациентов с варикозным расширением вен увеличивает риск развития тромботических осложнений.

4.Впервые в российской популяции проведен анализ частот встречаемости вышеуказанных генетических детерминант в группе больных венозными тромбозами. Был показан значимый вклад Лейденской мутации в развитие этого заболевания.

Практическая значимость работы:

На основании полученных результатов показана целесообразность определения у пациентов с варикозным расширением вен мутаций в 677 позиции гена MTHFR, в 1565 положении гена

GPIIIa, в 506 кодоне гена FV, для прогнозирования возможных тромботических осложнений.

Для определения группы высокого риска развития варикозного расширения вен, у лиц имеющих семейную отягощенность по этому заболеванию рекомендовано определение мутации С677Т гена MTHFR.

С целью профилактики венозных тромбозов, полезно раннее выявление лиц, являющихся носителями Лейденской мутации в сочетании с Т аллелем гена MTHFR. Это имеет большое практическое значение, так как носителям Т аллеля гена MTHFR можно рекомендовать повышенные дозы фолиевой кислоты.

Основные положения, выносимые на защиту:

1.Миссенс мутация С677Т гена MTHFR среди пациентов с семейной формой варикозного расширения вен встречается достоверно чаще по сравнению с контрольной группой. Данная мутация увеличивает риск развития тромботических осложнений при варикозном расширении вен.

2.Лейденская мутация фактора V свертывания крови является фактором риска развития венозных тромбозов. При носительстве Лейденской мутации и Т аллеля гена MTHFR риск развития венозных тромбозов значительно увеличивается.

3.Мутация в 1565 положении гена GPIIIa является фактором риска развития тромботических осложнений при варикозном расширении вен.

4.Инсерция десяти нуклеотидов в промоторной области гена фактора VII свертывания крови не является антитромботическим фактором для популяции г.Санкт-Петербурга.

10

Апробация работы:

Результаты работы были доложены на XXX Европейской конференции по генетике человека (Лиссабон, Португалия, 1998), на XVII Международном конгрессе по проблемам тромбозов и гемостаза (Вашингтон, США, 1999), на Всероссийской конференции 4Достижения молекулярной генетики и кардиологии" (Санкт-Петербург, Россия, 1999), на V Всероссийской конференции "'Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы. Лечение" (Москва, Россия,2000). По теме диссертации опубликовано 1 статья, и 4 тезисов.

Структура и объём диссертации

Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследования, обсуждения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 114 страницах машинописного текста, иллюстрирована 22 таблицами и 5 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Шейдина, Анна Михайловна

ВЫВОДЫ:

1. Частоты встречаемости Т аллеля (С677Т) гена метелентетрагидрофолат редуктазы, R506Q мутации гена фактора V свертывания крови (Лейденская мутация) в гетерозиготном состоянии, Т аллеля гена субъединицы Ilia рецептора тромбоцитов GPIIb/IIIa и инсерционно аллеля гена фактора VII в популяции г. Санкт-Петербурга составили величины 0.25, 0.035, 0.12, 0.14 соответственно.

2. Установлено, что у пациентов с варикозным расширением вен, имеющих семейную предрасположенность к этому заболеванию, частота встречаемости Т аллеля гена MTHFR достоверно выше, чем в контрольной группе (0.4 и 0.25 соответственно, р<0.005)

3. Показано увеличение частоты встречаемости аллелей С677Т гена MTHFR и С1565Т гена GPIIIa у пациентов с варикозным расширением вен, имевших тромботические осложнения, по сравнению с контрольной группой (0.38 и 0.25, р<0.01; 0.2 и 0.12, р<0.05 соответственно).

4. Показано, что Лейденская мутация фактора V свертывания крови является фактором риска развития венозных тромбозов (р<0.0001).

5. Установлено, что сочетание мутантного аллеля гена MTHFR и Лейденской мутации резко увеличивает вероятность развития тромбозов, степень относительного риска равна 27.3.

6. Инсерционцая вставка в промоторной области гена FVII не снижает вероятности разв^#Мя венозных тромбозов для российской попщМЩ^ ij>>0.05).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шейдина, Анна Михайловна, 2000 год

1. Веденский А.Н. Варикозная болезнь.-JI. : Медицина, 1983.-с.281.

2. Гмурман В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика.-5-е изд. стереот.- М.-.Высшая школа, 1999-408с.

3. Костенко И.Г., Константинова Г.Д., Шакуро А.Г. Роль мышечно-венозной "помпы" в депонировании подкожных вен у больных варикозной болезнью нижних конечностей//Вестник хирургии.1981.-№10-С.83-89.

4. Папаян Л.П., Кобилянская В. А., Папаян К.А. Патогенез и проблемы диагностики тромбофилии. //Лабораторные аспекты диагностики нарушений гемостаза. /Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П.Папаян.-СПб.: Изд-во СПбГМУ,1998.-С.3-12.

5. Гемостаз. Физиологические механизмы, принципы диагностики основных форм геморрагических заболеваний./Под ред. Н.Н. Петрищева, Л.П.Папаян.-СПб.: Изд-во СПбГМУ, 1999.-с.117.

6. Alhenc Gelas M., Arnaud E., Nicaud V., Aubry M.L., Fiessinger J.N., Aiach M., Emmerich J. Venous thromboembolic disease and the prothrombin, methylene tetrahydrofolate reductase and factor V genes. //Thromb. Haemost.-1999.-Vol. 81.-P. 506-510.

7. Antoniadi Т., Hatzis Т., Kroupis С., Petersen E., Petersen M.B. Prevalence of factor V Leiden, prothrombin G20210A, and MTHFR C677T mutations in a Greek population of blood donors. //Am. J. Hematol.-1999.-Vol. 61.-P. 265-267.

8. Appleby R.D., Olds R.J. The inherited basis of venous thrombosis. //Pathology.-1997.-Vol.29.-P. 341-347.

9. Badenhop R.F., Wang X.L., Wilcken D.E. Association between an angiotensinogen microsatellite marker in children and coronary events in their grandparents. //Circulation.-1996.-Vol.93.-P.2092-2096.

10. Badenhop R.F., Wang X.L., Wilcken D.E. Angiotensin-converting enzyme genotype in children and coronary events in their grandparents. //Circulation.-1995.-Vol.91.-P.1655-1658.

11. Bakker R.C., Brandjes D.P. Hyperhomocysteinaemia and associated disease. //Pharm. World. Sci.-1997.-Vol.19.-P.126-132 .

12. Ballad R.J., Jacobsen D.W., Robinson K. Homocysteine:update on a new risk factor.Clev. //Clinic. J. Medicine.-1997.-Vol.64.-P. 102-106.

13. Berg K., Malinow M.R., Kierulf P., Upson B. Population variation and genetics of plasma homocyst(e)ine level. //Clin. Genet.-1992.-Vol.41.-P.315-321.

14. Berman R.S, Martin W. Arterial endothelial barrier dysfuncion: actions of homocysteine and the hypoxanthineoxidase free radical renerationg system. //Br. J. Pharmacol.-1993.-Vol.108.-P. 920-927.

15. Bertina R.M., Koeleman B.C., Koster Т., Rosendaal F. R., Dirven R.J., de Ronde H., van der Velden P. A., Reitsma P.H. Mutation in blood coagulation factor V associated with resistance to activated protein C. //Nature.-1994.-Vol.369.-P.64-67.

16. Biagi G., Lapilli A., Zeneron R. Prostanoid production in varicose veins: Evidence for decreased prostacyclin with increased tromboxane A2 and prostacyclin E2 formation. //Angiology.-1988.-Vol.39.-P.1036-1042.

17. Blundell G., Goodman J., Rose F.A., Tudball N. Homocyseine mediated endothelial cell toxicity and its amelioration. //Atherosclerosis.-1996.-Vol.122.-P.163-172.

18. Bougelet C., Roland I.H., Ninane N., Arnould Т., Remacle J., Michiels C. Effect of aescine on hypoxia-induced neutrophil adherence to umbilical vein endothelium. // Eur. J. Pharmacol.-1998.-Vol.345.-P.-89-95.

19. Brattstrum L., Wilcken D.E., Ohrvik J., Brudin L. Common methylenetetrahydrofolate reductase gene mutation leads to hyperhomocysteinemia but not to vascular disease: the result of a meta-analysis. //Circulation.-1998.-Vol. 98.-P.2520-2526.

20. Cadroy Y., Sie P., Boneu B. Frequency of a defective response to activated protein С in patients with a history of venous thrombosis. //Blood.-1994.-Vol.83.-P.2008-2009.

21. Campbell W.B., Ridler B.M. Varicose vein surgery and deep vein thrombosis. //Br. J. Surg.-1995.-Vol.82.-P.1494-1497.

22. Ciuffetti G., Mannarino E., Paltriccia R., Malagigi V., Sergi F., Paulisch P., Pasqualini L., Lupattelli G. Leucocyte activity in chronic venous insufficiency. //Int. Angiol.-1994.-Vol.13.-P.312-316.

23. Clarke H. G., Vaskeis S.N., Hobbs J.Т., Nicolaides A.N. Venous wall function in the pathogenesis of varicose veins. //Surgery.-1992.-Vol.111.-P.402-406.

24. Cooke G.E., Bray P.F., Hamlington J.D., Pham D.M., Goldschmidt-Clermont P.J. PLA2 polymorphism and efficacy of aspirin. //Lanset.-1998.-Vol.351.-P.1253-1254.

25. Cornu-Thenard A., Boivin P., Baud J.M., de Vincenzi I., Carpentier P.H. Importance of the familial factor in varicose disease. Clinical study of 134 families. //J. Dermatol. Surg. Oncol.-1994.-Vol.20.-P.318-326.

26. Dahlback B. Inherited resistance to activated protein С, a major basis of venous thrombosis, is caused by deficient anticoagulant cofactor function of factor V. //Haematologica.-1995.-Vol.80.-P.102-113.

27. Egeberg 0. Inherited antithromin deficiency causing thrombophilia. //Thromb. Diath. Haemorrh.-1965.-Vol.13.-P.516-530.

28. Engbersen A.M., Franken D.G., BoersG.H., Stevens E.M., Trijbels F. J., Blom h. J. Thermo labile 5,10-methelenetetrahydrofolate reductase as a cause of mild hyperhomocysteinemia. //Am. J. Hum. Genet.-1995.-Vol.46.-P. 142150.

29. Faioni E.M., Franchi F., Asti D., Mannucci P.M. Resistance to activated protein С mimicking dysfunctional protein C. //Blood Coagul. Fibrinolysis.-1996.-Vol.7.-P.349-352.

30. Farbiszewski R., .Glowinski J., Makarewicz-Plonska M., Chwiecko M., Ostapowicz R., Glowinski S. Oxygen-derived free radicals as mediators of varicose vein wall damage. //Vase. Surgery.-1996.-Vol.30.-P.47-52.

31. Finkelstein J.D. The metabolism of homocysteine: pathways and regulation. // Eur. J. Pediatr.-1998.-Vol.157.-p.40-44.

32. Gallagher P.M., Meleady R., Shieldy D.C., Tan K.S., McMaster D., Rozen R., Graham Im., Whitehead A.S. Homocysteine and risk of premature coronary heart disease. //Circulation.-1996.-Vol.94.-P.2154-2158.

33. Gandhi R.H., Irizarry E., Nackman G.B., Halpern V.J., Mulcare R.J., Tilson M.D. Analysis of the connective tissue matrix and proteolytic activity of primary varicose veins. //J. Vase. Surg.-1993.-Vol.18.-P.814-820.

34. Goyette P., Sumner J.S., Milos R., Duncan A.M., Rosenblatt D.S., Matthews R.G., Rozen R. Human methylenetetrahydrofolate reductase: isolation of cDNA, mapping and mutation identification. //Nat. Genet.-1994.-Vol.7.-P.195-200.

35. Griffin J.H., Evatt В., Widenman C., Fernandez J.A. Anticoagulant protein С pathway defective in majority of thrombophilic patients. //Blood.-1993.-Vol.82.-P.1989-1992 .

36. Griffin J.H., Evatt В., Zimmerman T.S., Kleiss A.J., Wideman C. Deficiency of protein С in congenital thrombotic disease. //J. Clin. Invest.-1981.-Vol. 68.-P.1370-1373.

37. Guex JJ. Thrombotic complications of varicose veins. A literature review of the role of superficial venous thrombosis. //Dermatol. Surg.-1996.-Vol.22.-P.378-382.

38. Guo Q., Guo C. Genetic analysis of varicose vein of lower extremities. //Hsueh. Tsa. Chih.-1998.-Vol.15.-P.221-223.

39. Hankey G.J., Eikelboom J.W. Homocysteine and vascular disease. //Lancet.-1999.-Vol.354.-P.407-413.

40. Hanson J.N., Ascher E., DePippo P., Lorensen E., Scheinman M., Yorkovich W., Hingorani A. Saphenous vein thrombophlebitis (SVT): a deceptively benign disease. //J. Vase. Surg.-1998.-Vol.27.-P.677-680.

41. Haverkate F., Samama M. Familial dysfibrinogenemia and thrombophilia. Report on a study of the SSC Subcommittee on Fibrinogen. //Thromb. Haemost.-1995.-Vol.73.-P.151-161.

42. Hirai M., Naiki K., Nakayama R. Prevalence and risk factors of varicose veins in Japanese women. //Angiology.-1990.-Vol.41.-P.228-232.

43. Huzard N., Cornillet Lefebvre P., Gillot L., Potron G., Nguyen P . Multiplex ASA PCR for a simultaneous determination of factor V Leiden gene, G—>A 20210 prothrombin gene and С—>T 677

44. MTHFR gene mutations. //Thromb. Haemost.-1998.-Vol.79.-P.1054-1055.

45. Hyslop P.A., Hinshaw D.B., Sklar LA., Spragg R.G., Cochrane C.G. Intracellular calcium homeostasis during hydrogen peroxide injury to cultured cells. //J. Cell. Physiol.-1986.-Vol.129.-P.356-358.

46. Ikeda M., Kambayashi J., Iwamoto S., Shinoki N., Nakamura Т., Okahara K., Fujitani K., Shibuya Т., Kawasaki Т., Monden M. Hemostasis activation during sclerotherapy of lower extremity varices. //Thromb. Res.-1996.-Vol.82.-P.87-95.

47. Izumi M., Iwai N., Ohmichi N., Nakamura Y., Shimoike H., Kinoshita M. Molecular variant of 5,10-methylenetetrahydrofolat reductase is a risk factor of ischemic heart disease in Japanese population. //Atherosclerosis.-1996.-Vol.21.-P.293-2 94.

48. Jacobson D.W., Savon S.R., Stewart R.W. Limited capacity for homocysteine catabolism in vascular cells and tissues. //Circulation.-1995.-Vol.92.-P.104-109.

49. Johnson M.T. Treatment and prevention of varicose veins. //J. Vase. Nurs.-1997.-Vol.15.-P.97-103.

50. Kang S.S., Wong P.W.K., Susmano A., Sora J., Norusis N., Ruggie N. Thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase: an inherited risk factor for coronary disease. //Am. J. Hum. Genet.-1991.-Vol.4 8.-P.536-545.

51. Kang S.S., Zhou J., Wong P.W.K., Kowalisyn J., Strokosh G. Intermediate homocysteinemia: a thermolabile variant ofmethylenetetrahydrofolate reductase. //Am. J. Hum. Genet.-1988.-Vol.43.-P.414-421.

52. Kirkalnd J.B. Lipid peroxidation, protein thiol oxidation and DNA damage in hydrogen peroxide induced injury to endothelial cells: role of activation of poly(ADP-ribosse ) polymerase. //Biochim. Biophys. Acta.-1991.-Vol.1092.-P.319-328. ^

53. Kluijtmans L.A., Wendel U., Stevens E.M., van den Heuvel L.P., Trijbels F.J., Blom H.J Identification of four novelmutations in severe methylenetetrahydrofolate reductase deficiency. //Eur. J. Hum. Genet.-1998.- Vol.6.-P.257-265.

54. Kockx M.M., Knaapen M.W., Bortier H.E., Cromheeke K.M., Boutherin F.O., Finet M. Vascular remodeling in varicose veins. //Angiology.-1998.-Vol.49.-P.871-877.

55. Lane D.A., Olds R.J, Thein S.L. AntithrombinI II: Summary of first database update. //Nucleic. Acids. Res.-1994.-Vol.22.-P.3556-3559.

56. Larsen T.B., Ravn H.B., Lassen J.F., Lund E.D., Brandslund I. Resistance to activated protein C. The most common cause of familial thrombophilia. //Ugeskr. Laeger.-1996.-Vol.158.-P.6584-6588.

57. Lengyel I., Acsbdy G. Histomorphological and pathobiochemical changes of varicose veins. A possible explanation of the development of varicosis. //Acta. Morphol. Hung.-1990.-Vol.38.-P.259-267.

58. Leroyer C., Mercier В., Escoffre M., Ffirec C., Mottier D. Factor V Leiden prevalence in venous thromboembolism patients. //Chest.-1997.-Vol.111.-P.1603-1606.

59. Lodin A., Lindvall N.,Gentele H. Congential absence of venous valves as a cause of leg unclers. //Acta. Chir. Scand.-1959.~ Vol.116.-P.256-261.

60. Marchetti G., Patracchini P., Papacchini M., Ferrati M., Bernardi F. A polymorphism in the 5' region of coagulation factor VII gene (F7) caused by an inserted decanucleotide. //Hum. Genet.-1993.-Vol.90.-P.575-576.

61. Marian A.J., Brugada R., Kleiman N.S. Platelet glycoprotein Ilia P1A polymorphism and myocardial infarction. //N. Engl. J. Med.-1996.-Vol.335.-P.1071-1072.

62. Markus H.S., Ali N., Swaminathan R., Sankaralingam A., Molloy J., Powell J. A common polymorphism in the methylenetetrahydrofolate reductase gene, homocysteine, and ischemic cerebrovascular disease. //Stroke.-1997.-Vol.28.-P.1739-1743.

63. Matousek V., Prevovsky I. A contribution to the problem of the inheritance of primary varicose veins. //Hum. Hered.-1974.-Vol.24.-P.225-235.

64. McCully К. С. Vascular pathology of homocysteinemia: implications for the pathogenesis of arteriosclerosis. //Am.J.Pathol.-1969.-Vol.56.-P.111-128.

65. Michiels C., Arnould Т., Thibaut Vercruyssen R., Bouaziz N., Janssens D., Remacle J. Perfused human saphenous veins for the study of the origin of varicose veins: role of the endothelium and of hypoxia. //Int. Angiol.-1997.-Vol.16-P.134-141.

66. Moland L., Sandset P.M. Activated protein С resistance-a recently discovered hereditary thrombophilia. //Tidsskr. Nor. Laegeforen.-1998.-Vol.118.-P.3590-3595.

67. Nishinaga M., Ozawa Т., Shimada K. Homosystein, a thrombogenic agent, suppresses anticoagulant heparan sulfate expression in cultured porsine aortic endothelial cells. //J. Clin. Invest.-1993.-Vol.92-P.1381/1385.

68. Ogier de Baulny H., Gurard M., Saudubray JM., Zittoun J. Remethylation defects: guidelines for clinical diagnosis and treatment. //Eur. J. Pediatr.-1998.-Vol.157.-P.77-83.

69. Osborn S.M., Hampton K.K., Smillie D., Channer K.S., Daly M.E. Platelet glycoprotein Ilia polymorphism and myocardial infarction. //Lanset.-1996-Vol.348-P.1309-1310.

70. Peng F., Triplett D., Barna L., Morrical D. Pulmonary embolism and premature labor in a patient with both factor V Leiden mutation and methylenetetrahydrofolate reductase gene C677T mutation. //Thromb. Res.-1996.-Vol.83.-P.243-251.

71. Pepe G., Rickards 0., Vanegas O.C., Brunelli Т., Gori A.M., Giusti В., Attanasio M., Prisco D., Gensini G.F., Abbate R. Prevalence of factor V Leiden mutation in non-European populations. //Thromb. Haemost.-1997.-Vol.7.-P.329-331.

72. Perrot A.M, Cohen S.K, Milgom E, Finer M. Progesterone receptor expression in human sahenous vein. //Circulation.-1995.-Vol.92.-P.2975-2983.

73. Ploos van Amstel J.K, Huisman M.V, Reitsma P.H. Partial protein S gene deletion in a family with hereditary thrombophilia. //Blood.-1989.-Vol.73.-P.479-483.

74. Poort S.R., Michiels J.J., Reitsma P.H., Bertina R.M. Homozygosity for a novel missense mutation in the prothrombin gene causing a severe bleeding disorder. //Thromb. Haemost.-1994.-Vol.72.-P.819-824.

75. Rees D.C., Cox M., Clegg J.B. World distribution of factor V Leiden. //Lancet.-1995.-Vol.346.-P.1133-1134.

76. Refsum H., Guttormsen А.В., Fiskerstrand Т., Ueland P.M. Hyperhomocysteinemia in terms of steady-state kinetics. //Eur. J. Pediatr.-1998.-Vol.157.-P.45-49.

77. Remacle J., Arnould Т., Michiels C. The relation between venous stasis and the occurrence of pain. //Phlebologie.-1992.-Vol.45.-P.33-37.

78. Ridker P.M., Hennekens C.H., Schmits C., Stampfer M.J., Lindpaintner К. P1A1/A2 polymorphism of platelet glycoprotein Ilia and risk of myocardial infarction, stroke, and venous thrombosis. //Lanset.-1997.-Vol.349.-P.385-388.

79. Ridker P.M., Miletich J.P., Hennekens C.H., Buring J.E. Ethnic distribution of factor V Leiden in 4047 men and women. Implications for venous thromboembolism screening. //JAMA.-1997.-Vol.277.-P.1305-1307.

80. Rodgers G.M., Kane W.H. Activation of endogenous factor V by a homocysteine-induced vascular endothelial cell activator. //J. Clin. Invest.-1986.-Vol.77.-P.1909-1916.

81. Rose S.S., Ahmed A. Some thoughts on the aetiology of varicose veins. //J.Cardiovasc.-1986.-Vol.27.-P.534-539.

82. Rosendaal F.R. Risk factors for venous thrombosis: prevalence, risk, and interaction. //Seminars in Hematology.-1997.-Vol.34.-P.171-187.

83. Rosendaal F.R. Venous thrombosis: a multicausal disease. //Lancet.-1999.-Vol.353.-P.1167-1173.

84. Rosendaal F.R., Koster Т., Vandenbroucke J.P., Reitsma P.H. High risk of thrombosis in patients himizygous for factor V. //Blood.-1995.-Vol.85.-P.1504-1508.

85. Rozen R. Genetic Predisposition to Hyperhomocysteinemia:deficiency of MTHFR. //Thromb. Haemost.-1997.-Vol.78.-P.523-526.

86. Rozen R. Molecular genetics of methylenetetrahydrofolat reductase deficiency. //J. Inher. Metabol. Disease.-1996.-Vol.19.-P.589-594.

87. Samani N.J., Lodwick D. Glycoprotein Ilia polymorphism and risk of myocardial infarction. //Cardiovasc. Res.-1997.-Vol.33.-P.693-697.

88. Schmidel D.K, Nelson R.M, Broxson E.H.J. A 5,3kb deletion including exon XIII of the protein S alpha gene occurs in two protein S-deficient families. //Blood.-1991.-Vol.77.-P.551-559.

89. Schmitz C., Lindpaintner K., Verhoef P., Gaziano J.M., Buring J. Genetic polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase and myocardial infarction. A case-control study. //Circulation.-1996.-Vol.94.-P.1812-1824.

90. Schwartz H.P, Fischer M., Hopmeier P. Plasma protein S deficincy in familial thrombotic diesise. //Blood.-1984.-Vol.64.-P.1297-1300.

91. Scott Т.Е., La Morte W.W., Gorin D.R., Menzoian J.O. Risk factors for chronic venous insufficiency: a dual case-control study. //J. Vase. Surg.-1995.-Vol.22.-P.622-628.

92. Still R.A., McDowell I.F. Clinical implications of plasma homocysteine measurement in cardiovascular disease. //J. Clin. Pathol.-1998.-Vol.51.-P.183-188.

93. Svensson P.J., Dahlback B. Resistance to activated protein С as a basis for venous thrombosis. //N. Engl. J. Med.-1994.-Vol.330.-P.517-522.

94. Svensson P.J., Zuller В., Mattiasson I., Dahlback B. The factor VR506Q mutation causing APC resistance is highly prevalent amongst unselected outpatients with clinically suspected deep venous thrombosis. //J. Intern. Med.-1997.-Vol.241.-P.379-385 .

95. Tsai J.C, Perella M.A., Yoshizumi M. Promotor of vascular smooth muscle growth by homocysteine: a link to atherosclerosis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1994.-Vol.91.-P.6369-6373.

96. Tsuda S., Reitsma P.H., Miletich J. Molecular defects causing heterozygous protein С deficiency in three asymptomatic kindred. //Thromb.Haemost.-1991.-Vol.65.-P.647.

97. Ueland PM.Homocysteine speciies as components of plasma redox thiol status. //Clin.Chem.-1995.-Vol.41.-P.340-342.

98. Vanhoutte P.M., Corcaud S., de Montrion C. Venous disease: from pathophysiology to quality of life. //Angiology.-1997.-Vol.48.-P.559-567.

99. Venturi M., Bonavina L., Annoni F., Colombo L., Butera C., Peracchia A., Mussini E. Biochemical assay of collagen andelastin in the normal and varicose vein wall. //J. Surg. Res.-1996.-Vol.60.-P.245-248.

100. Walter D., Schachinger V., Eisner M., Dimmeler S., Zeiher A. Platelet glycoprotein II la polymorphisms and risk of coronary stent thrombosis. //Lanset.-1997.-Vol.350.-P.1217-1219.

101. Welch G.N., Upchurch G.R., Keaney J.F., Loscalzo J. Homocysteine decreases cell redox potential in vascular smooth muscle cell. //J. Am. Coll. Cardiol.-1996.-Vol.27.-P.163-167.

102. Welch G.N., Upchuruch G., Loscalzo J. Hyperhomocysteinemia and atherothrombosis. //Ann. NY Acad. Sci.-1997.-Vol.811.-P.48-58.

103. Wienert V. The epidemiology and socio-economics of venous diseases in Germany. //Phlebologie.-1993.-Vol.46.-P.225-233.