Молекулярно-генетическая природа наследственной метгемоглобинемии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат медицинских наук Галеева, Наиля Мансуровна

• Галеева, Наиля Мансуровна
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Галеева, Наиля Мансуровна

Оглавление.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Общая характеристика метгемоглобинемии.

2.1.1. Образование метгемоглобина.

2.1.2. Классификация метгемоглобинемии.

2.2. Молекулярно-генетическая характеристика системы восстановления метгемоглобина.

2.2.1. Восстановление л1етгемоглобина.

2.2.2. NADH-цumoxpoм Ь5 редуктаза.

2.2.3. Ген СУВ5ЯЗ.

2.3. Характеристика наследственной энзимопенической метгемоглобинемии.

2.3.1. Классификация.

2.3.2. Клиническая картина.

2.3.3. Лабораторная диагностика.

2.3.4. Лечение наследственной метгемоглобинемии.

2.3.5. Молекулярно-генетические причины развития НЭМ.

2.4. Эпидемиология наследственной метгемоглобинемии.

2.4.1. Наследственная метгемоглобинемии первого типа в Якутии.

2.5. Происхождение и расселение якутов.

2.6. Неравновесие по сцеплению.

2.6.1. Дрейф генов и эффект основателя.

2.6.2. Анализ неравновесия по сцеплению.

2.6.3. Коэффш1иент неравновесия по сцеплению.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярно-генетическая природа наследственной метгемоглобинемии»

Наследственная энзимопеническая метгемоглобинемия (НЭМ) -редкое аутосомно-рецессивное заболевание, обусловленное дефицитом системы восстановления метгемоглобина. Наиболее частой причиной НЭМ является нарушение работы фермента ЫАЭН-цитохром Ь5 редуктазы (метгемоглобинредуктазы). Выделяют первый тип заболевания, обусловленный нарушением работы растворимой формы фермента, и второй тип, обусловленный нарушением работы как растворимой, так и мембраносвязанной форм фермента. Наследственная метгемоглобинемия I типа имеет мягкое клиническое течение. Наследственная метгемоглобинемия II типа имеет более тяжелую клиническую картину и помимо цианоза, характеризуется микроцефалией, нарушением развития когнитивных и двигательных функций.

Клинически метгемоглобинемия I типа проявляется периодическими головными болями, головокружением, одышкой, тахикардией, быстрой утомляемостью, сонливостью, возможно, отставание в физическом и психическом развитии в результате постоянной гипоксии мозга.

Повышение метгемоглобина (шеШЬ) до 10% чаще всего не дает клинически выраженных проявлений. При повышении те1:НЬ в пределах

10-20% появляется цианоз слизистых и кожных покровов, возникают общая слабость, недомогание, ослабление памяти, раздражительность, головные боли. Лечение НЭМ I типа заключается в приеме аскорбиновой кислоты, при этом происходит снижение концентрации метгемоглобина, цианоз почти исчезает, улучшается самочувствие больных. Раннее начало лечения позволяет удержать уровень метгемоглобина сравнительно низким и, по возможности, избежать гипоксии мозга при его развитии.

Лечение НЭМ II типа на сегодняшний день направлено только на поддержание нормального уровня метгемоглобина и купирование цианоза

3, 15]. У гетерозиготных носителей признаки заболевания отсутствуют, 5 однако после приема метгемоглобинобразующих лекарственных препаратов (анальгетики, нитроглицерин, нитрофурагин, анестетики и т.д.) и при соприкосновении с некоторыми химическими веществами повышен риск развития токсической метгемоглобинемии экзогенного и эндогенного характера [15].

На сегодняшний день постановка диагноза НЭМ в РФ чаще всего проводится на основании данных анамнеза, осмотра, повышенного уровня метгемоглобина в крови, а также на основании биохимического анализа определения активности КМ)Н-цитохром-Ь5-редуктазы в эритроцитах [15]. Определение уровня активности метгемоглобинредуктазы в клинических лабораториях, являющееся важным биохимическим показателем в дифференциальной диагностике наследственной энзимопенической метгемоглобинемии, в настоящий момент затруднено в связи с отсутствием готовых наборов для данного исследования. Кроме того существование у биохимического метода "слепой зоны", часто не позволяет отличать здоровых людей от гетерозиготных носителей заболевания [3].

Ранее наследственная метгемоглобинемия с заметным с раннего возраста цианозом очень часто давала повод к ошибочной диагностике у больных врожденного "синего" порока сердца [10]. Сегодня, в связи с наличием современного оборудования, нарушения со стороны сердечнососудистой системы исключаются достаточно успешно, однако подтверждение диагноза "наследственная метгемоглобинемия" у таких больных затруднено. Наиболее актуальной на сегодняшний день проблемой является гипердиагностика НЭМ у новорожденных детей. Это связано с тем, что становление активности фермента метгемоглобинредуктазы завершается только к первому году жизни ребенка. Таким образом, до года по результатам биохимических исследований невозможно поставить точный диагноз у таких больных [20].

В России высокое распространение метгемоглобинемии I типа зарегистрировано у коренных жителей Республики Саха (Якутия) [3, 12, 25]. Оценена распространенность НЭМ I типа среди якутов, которая составила 1: 5677 человек [24]. Учитывая наличие накопления многих наследственных заболеваний у якутов, а также историческую информацию об их миграции и расселении, вероятной причиной распространения НЭМ I типа в Якутии является действие в данной популяции эффекта основателя [3, 22]. Наибольшее количество обследованных больных наследственной метгемоглобинемией проживает в центральной части Якутии, преимущественно в сельской местности, при этом самая высокая частота зарегистрирована в Вилюйской группе районов. В условиях Якутии гипоксия усугубляется дефицитом поступления витамина С с пищей [3].

В Якутии диагностика НЭМ I типа осуществляется при помощи биохимического исследования. Однако, учитывая наличие у данного метода недостатков часто не позволяющих установить точный диагноз, необходима разработка дешевого и быстрого молекулярно-генетического метода выявления мутации в том числе, в гетерозиготном состоянии, приводящей к НЭМ I типа в республике. ДНК-диагностика будет быстро и точно выявлять больных и гетерозиготных носителей заболевания, что позволит, в связи с наличием дешевого и доступного лечения, избегать нежелательных осложнений.

Цель исследования

Установить молекулярно-генетическую природу наследственной метгемоглобинемии у больных, проживающих в различных регионах Российской Федерации.

Задачи исследования:

1. В выборке якутских больных провести анализ неравновесия по сцеплению НЭМ I типа с локусом гена СУВ5КЗ.

2. Установить молекулярно-генетическую причину наследственной метгемоглобинемии I типа в Республике Саха (Якутия) и разработать простые и доступные методы прямой ДНК-диагностики НЭМ I типа, пригодные для проведения популяционных исследований и ДНК-диагностики среди коренного населения республики Саха (Якутия).

3. Определить частоту гетерозиготного носительства и расчетную частоту НЭМ I типа среди якутов.

4. Подтвердить наличие эффекта основателя для НЭМ I типа среди якутов и выявить предковый гаплотип хромосом, несущих мутацию. Оценить «возраст» распространения мутации в якутской популяции.

5. Установить молекулярно-генетическую причину наследственной метгемоглобинемии I и II типов у больных, проживающих в других регионах РФ.

Научная новизна

Впервые в России проведена полномасштабная работа, целью которой явилось выяснение молекулярно-генетических причин возникновения наследственной метгемоглобинемии у больных, проживающих в различных регионах РФ. Выявлены три новые мутации в гене СУВ5ЯЗ, одной из которых оказалась крупная делеция - первая и единственная на сегодняшний день, обнаруженная в гене СУВ5ЯЗ.

У народа саха впервые установлена молекулярно-генетическая причина НЭМ I типа. На основе разработанной системы, выявляющей обнаруженную мутацию, определена частота гетерозиготного носительства этой мутации (55:1000 или 1:18 человек) и расчетная частота заболевания (1:1250) в республике. Впервые на основании анализа гаплотипов подтверждено давнее предположение о существовании эффекта основателя для НЭМ I типа в Якутии и проведена оценка возраста распространения обнаруженной мутации (285+135 лет). Полученный возраст не противоречит историческим данным и хорошо соотносится с результатами других работ, посвященных оценке возраста распространения других мутаций среди якутов.

Предложена и успешно применена на примере гена СУВ5ЯЗ стратегия поиска границ крупных делеций. Оценена доля крупных делеций в гене СУВ5ЯЗ.

Практическая значимость

Определение молекулярно-генетической причины НЭМ I типа и последующая разработка методов ранней диагностики, позволяющей выявлять носителей заболевания, даст возможность, при правильном лечении, контроле приема препаратов и соблюдении диеты, избежать нежелательных осложнений. Учитывая очень высокую частоту носительства заболевания у народа саха, данная методика будет служить быстрым и удобным методом диагностики наследственной метгемоглобинемии I типа в Якутии.

Оценка «возраста» мутации, обнаруженной у якутов, внесет дополнительную ясность в понимание процесса этногенеза народа саха.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Причиной наследственной метгемоглобинемии I типа в Якутии является единственная мутация с.806С>Т в гене СУВ5ЯЗ.

2. Популяционная частота мутации с.806С>Т в гене СУВЗЯЗ среди якутов составляет - 55:1000, а расчетная частота заболевания 1:1250.

3. Распространение мутации среди якутов связано с дрейфом генов, возраст мутации для данной популяции составляет 285± 135 лет.

4. У трех больных НЭМ обнаружены две новые мутации с.22-?633+?ёе1 (делеция экзонов 2-7) и с.339ёирС (р.РЬе114ЬеиГзХ28) и одна ранее описанная мутация с.757 в>А (р.Уа1253Ме1).

5. Предложен универсальный подход для поиска границ делеции, с помощью которого определены границы делеции с.22-1320 633+1224del в гене CYB5R3.

6. Доля крупных делеций в гене CYB5R3 при НЭМ не превышает 20%.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на I Международной Пироговской конференции в 2006 году (г. Москва), на конференции European Human Genetics Conference 2006 (г. Амстердам, Голландия), на конференции "Генетика человека и патология" в 2007 году (г. Томск), на конференции European Human Genetics Conference 2008 (г. Барселона, Испания), на конференции European Human Genetics Conference 2009 (г. Вена, Австрия), на конференции European Human Genetics Conference 2012 (г. Нюрнберг, Германия).

Личный вклад автора в проведение исследования

Автором проанализированы данные отечественной и зарубежной литературы по теме диссертации. Автор принимал участие в планировании. и осуществил экспериментальную часть работы. Все этапы молекулярно-генетического исследования (выделение ДНК, генотипирование по полиморфным маркерам, поиск мутаций и создание систем их регистрации, анализ популяционных выборок) автором выполнены лично. Автором проведен анализ полученных результатов: статистическая обработка данных, вычисление возраста мутации, определение частоты гетерозиготного носительства и расчетной частоты заболевания, сформулированы выводы.

Публикации

По материалам исследования опубликованы 10 научных работ, среди них 4 статьи опубликованы в журналах, удовлетворяющих требованиям ВАК МОН РФ для соискателей ученой степени кандидата медицинских наук.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Галеева, Наиля Мансуровна

6. ВЫВОДЫ:

1. В выборке якутских больных наследственной метгемоглобинемией I типа выявлено статистически достоверное неравновесие по сцеплению с аллелями 4 полиморфных маркеров, фланкирующих ген CYB5R3 на расстоянии 0,88 сМ. Эти данные подтверждают влияние эффекта основателя на накопление НЭМ I типа в Якутии и позволяют картировать локус заболевания в области гена CYB5R3.

2. Установлена причина наследственной метгемоглобинемии I типа в Республике Саха (Якутия) - ранее не описанная однонуклеотидная замена с.806С>Т в гене CYB5R3, приводящая к замене аминокислоты пролин на лейцин в 269 положении белка (p.Pro269Leu). Мутация с.806С>Т выявлена у всех больных в гомозиготном состоянии, у их родителей - в гетерозиготном состоянии.

3. На основе RFLP, MLPA и МСА анализов разработаны высоко эффективные методы регистрации мутации с.806С>Т в гене CYB5R3, пригодные для проведения популяционных исследований и ДНК-диагностики метгемоглобинемии среди коренного населения республики Саха (Якутия) в лабораториях любого уровня оснащения. Определена частота гетерозиготного носительства заболевания среди якутов - 55:1000, расчетная частота заболевания составила 1:1250.

4. Проведена оценка «возраста» мутации в якутской популяции на основе анализа гаплотипов хромосом, несущих мутантный аллель, которая составила 285 ± 135 лет. Полученные данные совпадают с результатами оценки «возраста» распространения мутации, вызывающей ЗМ-синдром (ген CUL7) в якутской популяции, и со временем присоединения Якутии к России в XVII в.

5. Для двух больных с НЭМ II типа и для одной семьи с НЭМ I типа молекулярно-генетическими методами подтвержден диагноз наследственная метгемоглобинемия и обнаружены две новые мутации: c.22-?633+?del делеция экзонов 2-7) и с.339с1ирС (р.РИе114Ьеи£зХ28) и ранее описанная мутация с.757 О А (р.Уа1253Ме1).

6. Предложен и апробирован универсальный подход для поиска границ крупных делеций, определены границы делеции с.22-1320633+1224с1е1 и создана система для выявления ее в гетеро- и гомозиготном состоянии. На основе анализа мировой литературы установлено, что доля крупных делеций в гене СУВ5ЯЗ при НЭМ не превышает 20%.

5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В России проблема наследственной метгемоглобинемии I типа наиболее остро стоит в Республике Саха (Якутия). Наиболее вероятным кандидатом для поиска мутации был выбран ген СУВ5ЯЗ, кодирующий фермент метгемоглобинредуктазу. В связи с существованием предположения о влиянии эффекта основателя на накопление НЭМ I типа в Якутии для подтверждения участия гена СУВ5ЯЗ в развитии заболевания у больных народа саха были использованы принципы тонкого генетического картирования. Такая стратегия поиска доказывала наследственный характер метгемоглобинемии у больных в исследуемой выборке и наглядно подтвердила единство молекулярно-генетической причины заболевания в республике.

Для анализа неравновесия по сцеплению локуса кандидатного гена с заболеванием использовали четыре полиморфных маркера, представляющих собой высокоинформативные динуклеотидные СА-повторы. Два дальних маркера фланкировали область гена на расстоянии 1581 т.п.н., а два ближних - на расстоянии 1028 т.п.н. В результате анализа было обнаружено статистически достоверное неравновесие по сцеплению заболевания со всеми исследованными маркерами. Эти данные доказали заинтересованность гена СУВ5ЯЗ в возникновении наследственной метгемоглобинемии I типа у больных народа саха, а так же подтвердили наличие эффекта основателя для данного заболевания в Якутии.

На следующем этапе методом прямого автоматического секвенирования был проведен поиск мутации в 9 экзонах гена СУВ5ЯЗ, который выявил не описанную ранее однонуклеотидную замену с.806 С>Т (р.Рго269Ьеи).

Для выявления мутации с.806С>Т была разработана система на основе ПДРФ-анализа, позволившая выявить данную мутацию у всех 16 больных в гомозиготном, а у всех их родственников в гетерозиготном состоянии.

Помимо системы ПДРФ-анализа мутации с.806С>Т, очень удобной в диагностических целях с небольшим количеством исследуемых образцов, был разработан еще более простой и быстрый способ выявления данной мутации на основе МЬРА анализа с последующей регистрацией продуктов реакции с помощью анализа кривой плавления либо ПДАФ-анализа.

Популяционное исследование на выборках ДНК центральных, вилюйских и северных якутов позволило определить частоту носительства метгемоглобинемии первого типа среди якутов, она оказалась равной 1:1250. При исследовании выборок ДНК канадских эскимосов, коряков и чукчей мутация с.806С>Т обнаружена не была.

Для определения аллельного состава гаплотипа основателя был проведен анализ еще для девяти дополнительных микросателлитных маркеров, 4 из которых расположены в сторону центромеры от гена и 5 - в сторону теломеры, в семьях с НЭМ и в популяционной выборке. Таким образом был получен наиболее вероятный гаплотип хромосомы основателя 4-7-6-5-9-4-4-1-5-6-6 по маркерам 0228692-0228117702281156-0228272-0228284-0228276-02281178-0228418-0228117902281140-0228274.

Для оценки возраста мутации с.806С>Т в гене СУВ5КЗ в Якутии была использована формула, впервые примененная для расчета возраста мутации при исследовании идиопатической торзионной дистонии у евреев Ашкенази. Время, за которое произошло накопление мутации в Якутии, составило 285 ± 135 лет, период начала распространения мутации соответствует концу XVII - началу XVIII века (1715 год ± 136 лет). Эти данные хорошо относятся с историческими данными о расселении и миграциях якутов.

Помимо больных из Якутии для двух больных, страдающих НЭМ второго типа, молекулярно-генетическими методами подтвержден диагноз наследственная метгемоглобинемия и обнаружены две новые мутации: с.22-?633+?с!е1 (делеция экзонов 2-7) и с.339с!ирС (р.РЬе114ЬеиГзХ28). В одной семье у двух больных с НЭМ первого типа обнаружена одна ранее описанная мутация с.757 в>А (р.Уа1253Ме1:).

Анализ гаплотипов по тесно сцепленным с геном СУВ5ЯЗ полиморфным маркерам подтвердил гомозиготность по мутации у пациентов с НЭМ второго типа. У пациента с делецией с.22-?633+?с1е1 и в семье с одной мутацией с.757 в>А был выявлен один общий гаплотип, из чего было сделано предположение о наличие этой делеции в данной семье в гетерозиготном состоянии. Для подтверждения данного предположения был предложен и опробирован универсальный подход для поиска границ делеции, основанный на разбиении областей возможной локализации границ делеции на несколько приблизительно равных по длине фрагментов, оценки наличия этих участков в генотипе больного гомозиготного по делеции и, таким образом, сужения вероятной области расположения границ делеции. Данный подход может быть с успехом использован для определения границ делеций в любых генах, даже в тех случаях, когда область вероятной локализации границ составляет не тысячи, а сотни тысяч и даже миллионы нуклеотидных пар.

Таким образом, в данной работе был разработан универсальный метод определения границ крупных делеций, с помощью которого были определены границы делеции с.22-1320633+1224с!е1; создана система для выявления ее в гетеро- и гомозиготном состоянии и таким образом подтвержден диагноз в семье с НЭМ первого типа.

В работе проведен анализ возможного наличия крупных делеций в гене СУВ5ЯЗ во всех описанных и молекулярно-генетически подтвержденных случаях НЭМ. Исследование выявило 13 (из 65)

91 пациентов (20%), у которых можно подозревать наличие какой-либо крупной делеции в гене СУВЗЯЗ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Галеева, Наиля Мансуровна, 2012 год

1. Алексеев А.Н. История и культура востока Азии//Новосибирск: Изд-во института археологии и этнографии СО РАН.- 1996.- с.49.

2. Аульченко Ю.С., Аксенович Т.И. Методологические подходы и стратегии картирования генов, контролирующих комплексные признаки человека//Вестник ВОГиС.-2006-Т.10, №1-С. 189-201.

3. Банщикова Е.С. Особенности клинического течения и морфофункциональное состояние эритроцитов у детей с наследственной энзимопенической метгемоглобинемией: дисс. на соискание ученой степени к.м.н.- Томск, 2002.

4. Близнец Е.А. Молекулярно-генетическая причина остеопетроза в Чувашии: Автореф. дисс. на соискание ученой степени к.м.н. М., 2007.

5. Вассерман H.H. Молекулярно-генетическая причина остеопетроза в Чувашии: Автореф. дисс. на соискание ученой степени к.м.н. М., 2007.

6. Галеева Н.М., Назаренко Л.П., Назаренко С.А. и др. Молекулярно-генетическая причина наследственной метгемоглобниемии первого типа в республике Саха (Якутия)// Медицинская генетика. -2006. -Т.5. -№9 (51). -с. 15-20.

7. Галеева Н.М., Ненашева С.А., Клейменова И. С., Поляков А. В. Новая крупная делеция c.22-1320633+1224del в гене CYB5R3 у больныхнаследственной метгемоглобинемией//Генетика. 2012.-том.48., №11.-С.1336-1346.

8. Галеева Н.М., Клейменова И.С., Ненашева С.А., Котлукова Н.П., Поляков A.B. Наследственная метгемоглобинемия I и II типов: описание трех случаев с молекулярно-генетической верификацией// Медицинская генетика -2012 Том 11-№6 (120)- с.39-45.

9. Ю.Дервиз Г.В. Наследственная энзимопеническая метгемоглобинемия// Клиническая медицина. -1977.-№5-с.58-15.11 .Животовский JI.A., Популяционная биометрия//М.:Наука- 1991.

10. Захарова Ф.А. Клинико-биохимические особенности эритропоэза и наследственной энзимопенической метгемоглобинемии в Якутии: дис. на соискание ученой степени к.м.н., 1982.

11. Иванов В.И. Барышникова Н.В, Билева Д.С., Дадали E.JI., Константинова J1.M., Кузнецова О.В., Поляков А.В: Генетика. Учебник для ВУЗов-М.: ИКЦ Академкнига, 2006.

12. Ильинская И.И., Дервиз Г.В., Лаврова О.П., Токарев Ю.Н. Энзимные метгемоглобинемии// Проблемы гематологии и переливания крови.-1973.- 11.-С.44-49.

13. Казанец Е.Г. Метгемоглобинемии// Детская больница.-2009.- №1- с. 38-42.

14. П.Максимова Н.Р. Клинико-генеалогическая и молекулярно-генетическая характеристика этноспецифических форм наследственной патологии у якутов: автореферат диссертации насоискание ученой степени д.м.н.- Томск, 2009.- с.29-30.96

15. Махмудов М.М., Анваров МА, Зуфаров М.М. Наследственная эритроэнзимопеническая метгемоглобинемия и врожденные пороки сердца "синего" типа (клиника и дифференциальная диагностика)// Педиатрия.-1978.-№10.-с. 1073-76.

16. Мошинская О.В. О роли дериватов гемоглобина в активации процессов перекисного окисления липидов и развитии анемии у новорожденных различного гестационного возраста// Украинский медицинский журнал.- 1999.- № 3.- с.115-120.

17. Парникова A.C. О расселении якутов в XVII-XVIII вв. Сибирь XVII-XVIII вв Новосибирск: СО АН СССР, 1962.

18. Серошевский В.Л. Якуты. Опыт этнографического исследования// Москва. РОССПЭНД993.

19. Тарская Л.А., Гоголев А.И., Ельчинова Г.И. и др. Этническая геномика якутов (народа Саха) Генетические особенности и популяционная история.- Москва: Наука, 2009.

20. Тарская ЛА., Зинченко P.A., Ельчинова Г.И. и др. Структура и разнообразие наследственной патологии в Республике Саха (Якутия)//Генетика.-2004.-Т. 40.-№ 11.-С. 1530-1539.

21. Токарев Ю.Н., Халлан С.Р., Корраля Альмонте Х.Ф. Наследственные анемии и гемоглобинопатии - М.:Медицина, 1983.-с.ЗЗЗ.

22. Тучков А.Г. Народы Сибири: История и традиционная культура-Томск: Ветер, 2008.-c.150.

23. Федорова С.А. Генетические портреты народов Республики Саха (Якутия): анализ линий митохондриальной ДНК и Y-хромосомы// Якутск. ЯНЦ СЩ РАН.- 2008.-е. 72-73.

24. Харьков В.Н., Степанов В.А., Медведева О.Ф., Спиридонова М.Г., Максимова Н.Р., Ноговицына А.Н., Пузырев В.П. Происхождение якутов: анализ гаплотипов Y-хромосомы// Молекулярная биология-2008-Т. 42- № 2. С. 226-237.

25. Aalfs С. М., Salieb-Beugelaar G.B., Ronald J.A. et al. A Case of Methemoglobinemia Type II Due toNADH-Cytochrome b5 Reductase Deficiency: Determination of the Molecular Basis// Hum Mutat.- 2000. -№ 16.-P.18- 22.

26. Arikoglu Т., Yarali N., Kara A. et al. A novel L218P mutation in NADH-cytochrome b5 reductase associated with type I recessive congenital methemoglobinemia// Pediatric Hematology and Oncology. -2009. -№ 26. -P. 381-385.

27. Bengtsson B.O., Thomson G. Measuring the strength of associations between HLA antigens and diseases// Tissue antigens-1981- №18-p.356-363.

28. Bloom G.E., Zarkowsky H.S. Heterogeneity of the enzyme defect in congenital methemoglobinemia// New Eng. J. Med. -1970.- № 281.- P. 919-922.

29. Bulbarelli A., Valentini A., DeSilvestris M., Cappellin, M.D. and Borgese N.: An erythroid-specific transcript generates the soluble form of NADH-cytochrome b5 reductase in humans// Blood.- 1998- №92-p. 310-319.

30. Choury D., Leroux A. and Kaplan J.C. Membrane-bound cytochrome b5 reductase (methemoglobin reductase) in human erythrocytes. Study in normal and methemoglobinemic subjects// J Clin Invest -1981.-V.67-P.149-55.

31. Dork T., Macek M., Mekus F. et al. Characterization of a novel 21-kb deletion, CFTRdele2,3(21 kb), in the CFTR gene: a cystic fibrosis mutation of Slavic origin common in Central and East Europe// Hum Genet.- 2000.- № 106,- P. 259-260.

32. Fermo E., Bianchi P., Vercellati C. et al. Recessive hereditary methemoglobinemia: Two novel mutations in the NADH-cytochrome b5 reductase gene// Blood Cells Molecules and Diseases.- 2008,- № 41. -P. 50-55.

33. Fisher R.A., Povey S., Bobrow M., Solomon E., Boyd Y. and Carritt B.: Assignment of the DIA1 locus to chromosome 22// Ann Hum Genet -1977.- №41.- P.151-155.

34. Gibson Q. Introduction: congenital methemoglobinemia revisited// Blood. 2002,- V.100, №10,- P. 3445-3446.

35. Hegesh E., Hegesh J., Kaftory A. Congenital methemoglobinemia with a deficiency of cytochrome b5// New Eng. J. Med. -1986. -№ 314. -P. 757761.

36. Higasa K., Manabe J.I., Yubisui T. Molecular basis of hereditary methaemoglobinaemia, types I and II: two novel mutations in the NADH-cytochrome b5 reductase gene// Br J Haematol.- 1998.- № 103.- P. 922930.

37. Hudspeth M.P., Joseph S., Holden K.R. A Novel Mutation in Type II Methemoglobinemia// Journal of Child Neurology. -2010. -V.25. -P.91-93.

38. Hultquist D.E., Passon P.G.Catalysis of methaemoglobin reduction by erythrocyte cytochrome B5 and cytochrome B5 reductase// Nat New Biol -1971.-№229. P.252-254.

39. Jaffe E.R. Enzymopenic hereditary methemoglobinemia: a clinical/biochemical classification// Blood Cells- 1986.- V.12. -p.81-90.

40. Jenkins M.M., Prchal J.T. A novel mutation found in the 3' domain of NADH-cytochrome B5 reductase in an African-American family with type I congenital methemoglobinemia// Blood. -1996.- № 87. -P. 29932999.

41. Junien C., Vibert M., Weil D., Van-Cong N. and Kaplan J.C.: Assignment of NADH-cytochrome b5 reductase (DIA1 locus) to human chromosome 22// Hum Genet -1978-№42-P. 233-239.

42. Keyes S.R. and Cinti D.L. Biochemical properties of cytochrome b5-dependent microsomal fatty acid elongation and identification of products// J Biol Chem -1980.-V.255,- P. 11357-11364.

43. Kobayashi Y., Fukumaki Y., Yubisui T. et al. Serine-proline replacementat residue 127 of NADH-cytochrome b5 reductase causes hereditary100methemoglobinemia, generalized type// Blood.- 1990.- № 75.-P. 14081413.

44. Labuda D., Zietkiewicz E.Labuda M. The genetic clock and the age of the founder effect in growing populations: a lesson from French Canadians and Ashkenazim// Am J Hum Genet. -1997.- V. 61. p. 768-71.

45. Lorenzo F.V., Phillips J. D. et al. Molecular basis of two novel mutations found in type I methemoglobinemia// Blood Cells, Molecules, and Diseases. -2011.- № 46.- P. 277-281.

46. Lunenfeld. E. and Kane G.C. Methemoglobinemia: sudden dyspnea and oxyhemoglobin desaturation after esophagoduodenoscopy// Respir Care. -2004.-V.49. -p. 940-942.

47. Manabe J., Arya R., Sumimoto H. et al. Two Novel Mutations in the Reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide (NADH)-Cytochrome b5 Reductase Gene of a Patient With Generalized Type, Hereditary Methemoglobinemia// Blood.- 1996.- V. 88, № 8.- P.3208-3215.

48. Maran J., Guan Y., Ou C., Prchal J.T. Heterogeneity of the molecular biology of methemoglobinemia: a study of eight consecutive patients// Haematologica.- 2005,- № 90.- P. -687-688.

49. Nagai T., Shirabe K., Yubisui T., Takeshita M. Analysis of mutant

50. NADH-cytochrome b5 reductase: apparent "type III" methemoglobinemia101can be explained as type I with an unstable reductase// Blood. -1993.- № 81. -P. 808-814.

51. Nazarenko L.P., Sazhenova E.A., Nazarenko S.A. and Banshchikova E.S.A search for mutations in the DIA1 gene in case of hereditary methemoglobinemia type I in the iakut population// Genetika. -2003.-№39. -P.858-862.

52. Nussenzveig R.H., Lingam H.B., Gaikwad A. et al. A novel mutation of the cytochrome-b5 reductase gene in an Indian patient: the molecular basis of type I methemoglobinemia// Haematologica.- 2006.-№ 91. -P.1542-1545

53. Oshino N., Imai Y. and Sato R. A function of cytochrome b5 in fatty acid desaturation by rat liver microsomes// J Biochem (Tokyo) -1971.-V.69-P.155-167.63.0tt J. Analysis of Human Genetic Linkage// Johns Hopkins University Press.Baltimore. 1999.

54. Owen E.P., Berens J., Marinaki A.M. et al. Recessive congenital methaemoglobinaemia type II a new mutation which causes incorrect splicing in the NADH-cytochrome b5 reductase gene// J Inherit Metab Dis. -1997. -№20(4). -P. 610.

55. Percy M.J, Lappin T.R. Recessive congenital methaemoglobinaemia: cytochrome b5 reductase deficiency// British Journal of Haematology.-2008. -№141.-P. 298-308.

56. Percy M.J., Asian D. NADH-cytochrome b5 reductase in aTurkish family with recessive congenital methaemoglobinaemia type I// J Clin Pathol.-2008.-№61. -P.l 122-1123.

57. Percy M.J., Crowley L.J., Davis C.A. Recessive congenital methaemoglobinaemia: functional characterization of the novel D239G mutation in the NADH-binding lobe of cytochrome b5 reductase// Br J Haematol. -2005.- № 129. -P. 847-853.

58. Percy M.J., Gillespie M.J., Savage G. Familial idiopathic methemoglobinemia revisited: original cases reveal 2 novel mutations in NADH-cytochrome b5 reductase// Blood. -2002. -№ 100. -P. 3447-3449.

59. Percy M.J., Oren H., Savage G., Irken G. Congenital methaemoglobinaemia Type I in a Turkish infant due to a novel mutation, Prol44Ser, in NADH-cytochrome b5 reductase// Hematol J. -2004.- № 5.-P. 367-370.

60. Risch N., de Leon D., Ozelius L., et al. Genetic analysis of idiopathic torsion dystonia in Ashkenazi Jews and their recent descent from a small founder population// Nat Genet. -1995- Vol. 9 p. 152-159.

61. Sass M. D., Caruso C. J., Farhangi, M. TPNH-methemoglobin reductase deficiency: a new red-cell enzyme defect// J. Lab. Clin. Med.- 1967.- № 70,- P.760-767.

62. Schwartz J. M., Paress P. S, Ross J.M., Dipillo F, Rizek R. Unstable Variant of NADH Methemoglobin Reductase in Puerto Ricans with Hereditary Methemoglobinemia// The Journal of Clinical Investigation.-1972- V.51-P.1594-1601.

63. Scott E.M. and Griffith I.V. The enzymic defect of hereditary methemoglobinemia: diaphorase// Biochim Biophys Acta -1959-V.34 -p.584-586.

64. Scott E.M., Hoskins D.D.: Hereditary methemoglobinemia in Alaskan Eskimos and Indians// Blood -1958-V.13- P.795-801.

65. Shirabe K., Yubisui T., Borgese N., Tang C.Y., Hultquist D.E. and Takeshita M.: Enzymatic instability of NADH-cytochrome b5 reductase as a cause of hereditary methemoglobinemia type I (red cell type)// J Biol Chem -1992. -V.267- P. 20416-20421.

66. Shonola S. Da-Silva, Sajan I.S. and J. P. Underwood. Congenital Methemoglobinemia: A Rare Cause of Cyanosis in the Newborn—A Case Report// PEDIATRICS- 2005-V. 112-p. 158-161.

67. Steggles A. W., Kaftory, A., Giordano, S. J. The analysis of type IV methemoglobinemia: identification of a patient lacking cytochrome b5// Am. J. Hum. Genet. 1992.

68. Toelle S.P., Boltshayser E., Mossner E. et al. Severe neurological impairment in hereditary methemoglobinemia type 2// Eur J Pediatr. -2004 -№ 163.-P. 207-209.

69. Tomatsu S., Kobayashi Y., Fukumaki Y., Yubisui T., Orii T. and Sakaki Y. The organization and the complete nucleotide sequence of the human NADH-cytochrome b5 reductase gene// Gene.- 1989.-№80.-P.353-361.

70. Tomoda A.,Tsuji A. Changes in Intermediate Haemoglobins during Methaemoglobin Reduction by NADPH-Flavin Reductase// Biochem. J. -1979-179-p.227-231.

71. Vieira L.M., Kaplan J.C., Kahn A., Leroux A. Four New Mutations in the NADH-Cytochrome b5 Reductase Gene From Patients With Recessive Congenital Methemoglobinemia Type I// Blood.- 1995.- V. 85. № 8.- P. 2254-2262.

72. Wu Y., Huang C., Zhu Z. Leu 72 Pro mutation in the NADH-cytochrome b5 reductase gene found in a Chinese hereditary methemoglobinemia patient// Zhonghua Xue Ye Xue Za Zhi.- 1998.- № 19.- P.195-197.

73. Wu Y.S., Wang Y., Huang C.H. A compound heterozygote in the NADH-cytochrome b5 reductase gene from a Chinese patient with hereditary methemoglobinemia type I// Int J Hematol.- 2000.- № 72. -P. 34-36.

74. Yilmaz D., Cogulu O., Ozkinay F., Kavakli K. A Novel Mutation in the DIA1 Gene in a Patient With Methemoglobinemia Type II// American Journal of Medical Genetics -2005.- № 133A. -P. 101-102.

75. Yubisui T. and Takeshita M. Characterization of the purified NADH-cytochrome b5 reductase of human erythrocytes as a FAD-containing enzyme//J Biol Chem -1980. -№.255. -P.2454-2456.

76. Yubisui T., Shirabe K., Takeshita M. Structural role of serine 127 in the NADH-binding site of human NADH-cytochrome b5 reductase// J Biol Chem. -1991,- № 266.- P. 66-70.

77. Yubisui T., Y. Naitoh, S.Zenno, M.Tamura, M. Takeshita and Y. Sakaki. Molecular cloning of cDNAs of human liver and placenta NADH-cytochrome b5 reductase// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -№84,- P.3609-3613.1. C/